一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
阅读：199发布：2020-05-08
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1.一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：
1)校准品；2)磁珠包被TOXO抗原；3)发光标记物标记的抗人IgG抗体；4)项目稀释液5)化学发光激发液A和B以及清洗液。
2.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，磁珠包被TOXO抗原中，磁珠的粒径是0.05～3.0μm，磁珠包被TOXO抗原浓度为0.5％～5％。
3.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG是鼠抗人IgG或羊抗人IgG。
4.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述的抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比例是1:3～20。
5.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯衍生物和三联吡啶钌。
6.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述的项目稀释液为pH6.0～8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。
7.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述化学发光激发液A为过氧化氢和硝酸溶液，B为氢氧化钠溶液；清洗液为PB缓冲液。
8.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述校准品是以TOXO IgG抗体配制而成。
9.根据权利要求1所述的一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
一、校准品的制备
用含有小牛血清的PBS缓冲液将TOXO IgG抗体稀释成校准品，分装成0U/mL、12U/mL、
25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL；
二、磁珠包被TOXO抗原溶液配制
使用涡旋混匀仪将磁珠充分混匀，加入混悬的液体于离心管中，将离心管置于磁力分离架上1～3min，移除上清液，加入封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上，移除上清液，重复封闭步骤共3次，再次加入封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，加入包被抗体，充分涡旋混匀，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育2～4h，将离心管置于磁力分离架上，移除上清液，加入清洗缓冲液，使用涡旋混匀仪充分混匀，将离心管置于磁力分离架上，移除上清液，重复清洗，使用储存缓冲液重悬磁珠，收集保存；
三、发光标记物标记的抗人IgG抗体溶液的制备
将抗体放入离心管中，加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后加入发光标记物溶液，用离心机室温条件下离心，将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，之后将暗盒放入气浴恒温振荡器，混匀2～4h，加入赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器，中速混匀，封闭时间为
0.5～2h，将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用PB缓冲液洗脱，分步收集，将收集好的抗体溶液放置于2～8℃保存；
四、项目稀释液
项目稀释液为pH6.0-8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。
一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其
制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
背景技术
[0002] 弓形虫病是一种由细胞内的原虫寄生虫(称为刚地弓形虫)所引起的广泛传播的感染性疾病。此种疾病可感染人类及其它温血动物。传播途径可为进食被卵囊污染的食物、与家禽的直接接触、或经胎盘感染、弓形虫可通过输血或者器官移植进行传播。在正常成年人群中，弓形虫病一般为良性病程，临床表现大多数为无症状或轻微症状(头痛，咽喉痛，无力)；极少数病例会伴随淋巴结炎。极罕见病例会出现严重机体紊乱，比如心肌炎，肝炎，肺炎，脑膜脑炎和视网膜脉络膜炎。
[0003] 阳性血清测试的流行率随年龄而逐渐升高，提示继往感染。由细胞介导的免疫应答一般参与防治寄生虫感染。因此对于免疫抑制治疗(以阻止器官排斥或作为抗肿瘤治疗)的患者来说，出现症状性病程更为常见。弓形虫脑炎已经证实是获得性免疫缺陷综合症患者的重要死因之一。
[0004] 如果孕妇发生弓形虫感染，则会危及胎儿，比如自然流产，早产或死胎等，因为此病原体可通过胎盘传播给胎儿。如果在妊娠前三个月感染弓形虫，则会引起胎儿中枢神经系统的严重损伤，最终导致胎儿死亡。如果在妊娠中三个月感染弓形虫，则会导致脑积水，智障和精神运动性阻抑，失明和大脑钙化。然而，在妊娠末三个月感染弓形虫是最为常见的，此时会导致视网膜脉络膜炎和其它眼睛损伤。对中枢神经系统的损伤和潜伏无症状感染可最终引发疾病发生。
[0006] 目前常用的检测弓形虫IgG抗体的方法有放射免疫技术(RIA)、酶联免疫分析技术(ELISA)，但这两种方法存在诸多不足，如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点； ELISA具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点。
发明内容
[0007] 本发明的目的是解决了现有技术中试剂的有效期短、操作繁琐、灵敏度低、检测成本高的缺点，而提供一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
[0008] 本发明首先提供一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，该试剂盒包括：
[0010] 优选的是，磁珠包被TOXO抗原中，磁珠的粒径是0.05～3.0μm，磁珠包被 TOXO抗原浓度为0.5％～5％。
[0011] 优选的是，所述化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG是鼠抗人IgG 或羊抗人IgG。
[0012] 优选的是，所述的抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比例是 1:3～20。
[0013] 优选的是，所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯衍生物和三联吡啶钌。
[0016] 优选的是，所述校准品是以TOXO IgG抗体配制而成。
[0017] 本发明还提供一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0018] 一、校准品的制备
[0019] 用含有小牛血清的PBS缓冲液将TOXO IgG抗体稀释成校准品，分装成0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL；
[0020] 二、磁珠包被TOXO抗原溶液配制
[0021] 使用涡旋混匀仪将磁珠充分混匀，加入混悬的液体于离心管中，将离心管置于磁力分离架上1～3min，移除上清液，加入封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上，移除上清液，重复封闭步骤共3次，再次加入封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，加入包被抗体，充分涡旋混匀，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育2～4h，将离心管置于磁力分离架上，移除上清液，加入清洗缓冲液，使用涡旋混匀仪充分混匀，将离心管置于磁力分离架上，移除上清液，重复清洗，使用储存缓冲液重悬磁珠，收集保存；
[0022] 三、发光标记物标记的抗人IgG抗体溶液的制备
[0023] 将抗体放入离心管中，加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后加入发光标记物溶液，用离心机室温条件下离心，将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，之后将暗盒放入气浴恒温振荡器，混匀2～4h，加入赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器，中速混匀，封闭时间为0.5～2h，将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶 G250柱纯化，用PB缓冲液洗脱，分步收集，将收集好的抗体溶液放置于2～8℃保存；
[0024] 四、项目稀释液
[0025] 项目稀释液为pH6.0-8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。
[0026] 本发明的有益效果
[0027] 1、选择吖啶酯等为化学发光标记材料，该材料有激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，不需要酶的参与，节约时间及成本，系统线性范围宽。
[0028] 2、本检测试剂盒为化学发光免疫分析法，该方法具有种操作简单，无放射性风险及其检测时间短，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测；另一方面，弓形虫IgG化学发光免疫测试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度。附图说明
[0029] 图1为采用本发明人TOXO IgG抗体化学发光定量试剂盒的测试校准品检测相对发光值的标准曲线，横坐标为浓度，单位为U/mL，纵坐标为发光值。
具体实施方式
[0030] 为了使本发明的优点、目的和方法更加详实易懂，下面结合附图和具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了诸多细节以便于理解，但本发明可以以不同于描述的其他方式来实施。
[0031] 本发明首先提供一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，该试剂盒包括：
[0032] 1)校准品；2)磁珠包被TOXO抗原；3)发光标记物标记的抗人IgG抗体； 4)项目稀释液5)化学发光激发液A和B以及清洗液。
[0033] 按照本发明，磁珠包被TOXO抗原中，磁珠的粒径是0.05～3.0μm，磁珠包被TOXO抗原浓度为0.5％～5％。
[0034] 按照本发明，所述化学发光标记物标记的抗人IgG中，抗人IgG是鼠抗人 IgG或羊抗人IgG，所述的抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比例优选是1:3～20。所述化学发光标记物优选为吖啶酯、吖啶酯衍生物和三联吡啶钌。
[0035] 按照本发明，所述的项目稀释液为pH6.0～8.0的含有表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液；其中缓冲盐可以为柠檬酸盐、Bistris丙烷或磷酸盐，更优选为磷酸盐。表面活性剂为0.02％～0.05％的吐温20或0.05％～0.1％氯化胆碱；防腐剂为 0.01～0.03％的迭氮钠或0.01～0.03％的PC300，蛋白为0.1％～3％牛血清蛋白或 0.01％～0.2％牛γ球蛋白。
[0036] 按照本发明，所述的化学发光底物液包括A液和B液，A液为过氧化氢和硝酸溶液，B液为氢氧化钠溶液。
[0037] 按照本发明，所述的校准品为弓形虫IgG校准品。
[0038] 弓形虫IgG抗体的校准品浓度为0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、 100U/mL、200U/mL的弓形虫IgG抗体溶液。
[0039] 本发明还提供一种检测弓形虫IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0040] 一、校准品的制备
[0041] 用含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液将TOXO IgG抗体稀释成校准品，分装成0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL；
[0042] 二、磁珠包被抗原R1溶液配制
[0043] 使用涡旋混匀仪将磁珠充分混匀，加入0.5～1.5mL混悬的液体(10mg/mL 磁珠)于离心管中。将离心管置于磁力分离架上1～3min，小心移除上清液，加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上 1～3min(或更久)，小心移除上清液，重复封闭步骤共3次，再次加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，加入50～150μg包被抗体(相当浓度为1mg/mL 的抗体加入100μL)，充分涡旋混匀，使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育 2～4h。将离心管置于磁力分离架上1～3min，小心移除上清液，加入1mL清洗缓冲液，使用涡旋混匀仪充分混匀，将离心管置于磁力分离架上1～3min，小心移除上清液。重复清洗3次，使用储存缓冲液重悬磁珠，收集保存于2～8℃用于后续实验。
[0044] 三、吖啶酯标记的抗人IgG单克隆抗体R2溶液的制备
[0045] 将500μg抗体放入离心管中，保证抗体位于离心管底部位置(离心机室温离心20～40s)后加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后加入0.75～5μL 2mg/mL吖啶酯的DMF溶液，用离心机室温条件下离心20～40s。将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，之后将暗盒放入气浴恒温振荡器(25℃)，混匀2～4h。加入1mL 20％赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器(25℃)，中速混匀，封闭时间为0.5～2h。将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用PB缓冲液洗脱，分步收集。将收集好的抗体溶液放置于2～8℃保存。使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用 50mM MES、0.05％吐温、0.05％Proclin300，pH6.0～7.0的缓冲液稀释至终浓度为0.1～1.0μg/mL，2～8℃保存。
[0046] 四、项目稀释液R3
[0047] R3溶液为pH6.0-8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。
[0048] 将以上三相试剂灌封于不同的试剂瓶中组成试剂盒。这种化学发光免疫分析试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成对弓形虫IgG的检测。这种化学发光免疫分析试剂盒与仪器配套，缩短了临床检测所需的时间。这种化学发光免疫分析试剂盒的检测精度较高。
[0049] 这种弓形虫IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒用于检测弓形虫IgG抗体时，利用迪瑞全自动化学发光免疫分析仪(CM180)对弓形虫IgG抗体校准品进行检测，绘制标准曲线，内置于电脑软件；然后根据需求测试临床样本，根据样本检测出的相对光单位(RLU)计算弓形虫IgG抗体的浓度；最后对弓形虫IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒进行性能的评价。
[0050] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明进一步详细介绍。
[0051] 实施例1
[0052] 1)校准品的制备
[0053] 用含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液将TOXO IgG抗体稀释成校准品，分装成0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL。
[0054] 2)磁珠包被抗原R1溶液的配制
[0055] 使用涡旋混匀仪将磁珠充分混匀，加入0.5mL混悬的液体(10mg/mL磁珠) 于离心管中。将离心管置于磁力分离架上1min，小心移除上清液。加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上1min(或更久)，小心移除上清液。重复封闭步骤共3次。再次加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀。加入50μg包被抗体，充分涡旋混匀。使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育2h。将离心管置于磁力分离架上1min，小心移除上清液。加入1mL清洗缓冲液，使用涡旋混匀仪充分混匀。将离心管置于磁力分离架上 1min，小心移除上清液。重复清洗步骤共3次。使用储存缓冲液重悬磁珠，收集保存于2～8℃用于后续实验。
[0056] 3)吖啶酯标记的抗人IgG单克隆抗体R2溶液的制备
[0057] 将500μg抗体放入离心管中，保证抗体位于离心管底部位置(离心机室温离心20s)后加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后加入0.75μL 2mg/mL吖啶酯的DMF溶液，用离心机室温条件下离心20S。将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，之后将暗盒放入气浴恒温振荡器(25℃)，混匀2h。加入1mL 20％赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器(25℃)，中速混匀，封闭时间为0.5h。将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用PB缓冲液洗脱，分步收集。将收集好的抗体溶液放置于2～8℃保存。使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用 50mM MES、0.05％吐温、0.05％Proclin300，pH6.0的缓冲液稀释至终浓度为 0.1μg/mL，2～8℃保存。
[0058] 4)项目稀释液R3溶液的配制
[0059] R3溶液为含有柠檬酸、0.02％的吐温20、0.01％的迭氮钠、0.01％的PC300、 0.1％牛血清蛋白和0.01％牛γ球蛋白的pH6.0的缓冲液。
[0060] 实施例2
[0061] 1)校准品的制备
[0062] 用含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液将TOXO IgG抗体稀释成校准品，分装成0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL。
[0063] 2)磁珠包被抗原R1溶液配制
[0064] 使用涡旋混匀仪将磁珠充分混匀，加入1mL混悬的液体(10mg/mL磁珠) 于离心管中。将离心管置于磁力分离架上2min，小心移除上清液。加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上2min(或更久)，小心移除上清液。重复封闭步骤共3次。再次加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀。加入100μg包被抗体，充分涡旋混匀。
使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育3h。将离心管置于磁力分离架上2min，小心移除上清液。加入1mL清洗缓冲液，使用涡旋混匀仪充分混匀。将离心管置于磁力分离架上 2min，小心移除上清液。重复清洗步骤3次。使用储存缓冲液重悬磁珠，收集保存于2～8℃用于后续实验。
使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育3h。将离心管置于磁力分离架上2min，小心移除上清液。加入1mL清洗缓冲液，使用涡旋混匀仪充分混匀。将离心管置于磁力分离架上 2min，小心移除上清液。重复清洗步骤3次。使用储存缓冲液重悬磁珠，收集保存于2～8℃用于后续实验。
[0065] 3)吖啶酯标记的抗人IgG单克隆抗体R2溶液的制备
[0066] 将500μg抗体放入离心管中，保证抗体位于离心管底部位置(离心机室温离心30s)后加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后加入2.5μL2mg/mL吖啶酯的DMF溶液，用离心机室温条件下离心30S。将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，之后将暗盒放入气浴恒温振荡器(25℃)，混匀3h。加入1mL 20％赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器(25℃)，中速混匀，封闭时间为1h。将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用PB缓冲液洗脱，分步收集。将收集好的抗体溶液放置于2～8℃保存。使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用50mM MES、0.05％吐温、0.05％Proclin300，pH6.5的缓冲液稀释至终浓度为0.5μg/mL， 2～8℃保存。
[0067] 4)项目稀释液R3溶液的配制
[0068] R3溶液为含有Bistris丙烷、0.05％氯化胆碱、0.02％的迭氮钠、0.02％的 PC300、1％牛血清蛋白和0.1％牛γ球蛋白的pH7.0的缓冲液。
[0069] 实施例3
[0070] 1)校准品的制备
[0071] 用含有20％小牛血清的100mM PBS缓冲液将TOXO IgG抗体稀释成校准品，分装成0U/mL、12U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL。
[0072] 2)磁珠包被抗原R1溶液配制
[0073] 使用涡旋混匀仪将磁珠充分混匀，加入1.5mL混悬的液体(10mg/mL磁珠) 于离心管中。将离心管置于磁力分离架上3min，小心移除上清液。加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上3min(或更久)，小心移除上清液。重复封闭步骤共3次。再次加入1mL封闭剂，使用涡旋混匀仪充分混匀。加入150μg包被抗体，充分涡旋混匀。使用360°旋转混匀仪室温旋转混匀孵育4h。将离心管置于磁力分离架上3min，小心移除上清液。加入1mL清洗缓冲液，使用涡旋混匀仪充分混匀。将离心管置于磁力分离架上 3min，小心移除上清液。重复清洗和步骤共3次。使用储存缓冲液重悬磁珠，收集保存于2～8℃用于后续实验。
[0074] 3)吖啶酯标记的抗人IgG单克隆抗体R2溶液的制备
[0075] 将500μg抗体放入离心管中，保证抗体位于离心管底部位置(离心机室温离心40s)后加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后加入5μL2mg/mL吖啶酯的DMF溶液，用离心机室温条件下离心40S。将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，之后将暗盒放入气浴恒温振荡器(25℃)，混匀4h。加入1mL 20％赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器(25℃)，中速混匀，封闭时间为2h。将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用PB缓冲液洗脱，分步收集。将收集好的抗体溶液放置于2～8℃保存。使用时将纯化后的抗人IgG抗体浓溶液用50mM MES、0.05％吐温、0.05％Proclin300，pH7.0的缓冲液稀释至终浓度为1.0μg/mL， 2～8℃保存。
[0076] 4)项目稀释液R3溶液的配制
[0077] R3溶液为含有磷酸盐、0.05％的吐温20、0.03％的迭氮钠、0.03％的PC300、 3％牛血清蛋白和0.2％牛γ球蛋白的pH8.0的缓冲液。
[0078] 实施例4弓形虫IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒的原理及检测方法[0079] 本发明的试剂盒测定原理是间接法，样本量20μL，磁珠包被的抗原试剂量 40μL，项目稀释液试剂量50μL，吖啶酯标记的抗人IgG抗体试剂量50μL。
[0080] 首先，加入样本10μL，加入90μL稀释液，稀释10倍，取稀释后的样本20μL，然后分别加入磁珠包被的抗原R1溶液和缓冲液R3共同孵育18min，洗涤，再加入吖啶酯标记抗体R2试剂孵育5min，形成磁微球-TOXO抗原-TOXO抗体- 抗人IgG抗体-吖啶酯复合物，通过磁分离器分离免疫复合物，洗掉游离的成分。通过酸碱激发液激发吖啶酯发光，记录相对光单位(RLU)，在线性范围内，样本中TOXO IgG抗体的含量与相对光单位成正比。
[0081] 实施例4：制备本发明的TOXO IgG抗体化学发光检测试剂盒的性能评估。
[0082] 1.试剂盒线性测定
[0083] 采用实施例1中制备的试剂盒其中1批，使用校准样本0U/mL、12U/mL、 25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL制作校准曲线，如图1所示，得出线性范围为0.1U/mL～200U/mL，线性相关系数r≥0.9986。
[0084] 表1试剂盒线性范围测定
[0085]
[0086]
[0087] 2.试剂盒灵敏度的测定
[0088] 采用实施例1中制备的试剂盒其中1批，测定20次零浓度样本，计算平均值(M)及标准差(SD)，得出M+2SD，根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度-RLU进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD的RLU带入方程，得出相应浓度值即为试剂盒灵敏度0.0141U/mL。
[0089] 表2试剂盒灵敏度的测定
[0090]
[0091]
[0092] 3.试剂盒精密度测试
[0093] (1)批内精密度
[0094] 采用实施例1中制备的试剂盒其中1批，对高值样品(150U/mL)和低值样品(12U/mL)分别重复测定10次，得出批内变异系数＜8％。
[0095] 表3批内精密度测定结果
[0096] 样本浓度(U/mL) 测定次数 变异系数CV％12 10 4.41
150 10 2.23
150 10 2.23
[0097] (2)批间精密度
[0098] 采用实施例1中制备的试剂盒其中3批，分别对高值样品(150U/mL)和低值样品(12U/mL)重复测定10次，计算30次测量结果的平均值和标准差，得出批间变异系数小于15％。
[0099] 表4批间精密度测定结果
[0100]样本浓度(U/mL) 测定总次数 变异系数CV％
12 30 7.12
150 30 3.47
12 30 7.12
150 30 3.47
[0101] 4.试剂盒准确度测定
[0102] 采用实施例1中制备的试剂盒其中1批，标注浓度为20IU/mL的标准物质，相对偏差＜10％，测试结果如下：
[0103] 表5准确度测定结果
[0104] 标准物质浓度(U/mL) 测定结果 相对偏差％20 20.57 2.85％
[0105] 5.试剂盒抗干扰、特异性实验
[0106] 对含有胆红素(40mg/dL)、血红蛋白(2g/dL)、甘油三酯(2000mg/dL) 的干扰样本进行回收实验，检测结果不受干扰(干扰率≤10％)；对于特异性样本 (BV抗体、HCV抗体、HIV抗体、CMV抗体、EBV抗体、HSV抗体、风疹毒抗体、梅毒螺旋体抗体临床检测阳性的样本)进行测试，检测结果不受影响，测试结果如下：
[0107] 表6抗干扰性实验结果
[0108]潜在干扰物质 理论浓度(mg/dL) 测试值(mg/dL) 平均回收率(％)
胆红素 40 41.27 103.18
血红蛋白 2000 1948.2 97.41
甘油三酯 2000 2042.6 102.13
胆红素 40 41.27 103.18
血红蛋白 2000 1948.2 97.41
甘油三酯 2000 2042.6 102.13
[0109] 表7特异性测定结果
[0110]特异性样本 临床测定该干扰物结果 弓形虫IgG抗体检测结果
BV抗体 阳性 阴性
HCV抗体 阳性 阴性
HIV抗体 阳性 阴性
CMV抗体 阳性 阴性
风疹毒抗体 阳性 阴性
EBV抗体 阳性 阴性
HSV抗体 阳性 阴性
梅毒螺旋体 阳性 阴性
BV抗体 阳性 阴性
HCV抗体 阳性 阴性
HIV抗体 阳性 阴性
CMV抗体 阳性 阴性
风疹毒抗体 阳性 阴性
EBV抗体 阳性 阴性
HSV抗体 阳性 阴性
梅毒螺旋体 阳性 阴性
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