技术领域
[0001] 本
发明涉及一种检测菜籽粕中是否掺杂抗生素滤渣的方法，属于
饲料质量安全检 测领域。
背景技术
[0002] 菜籽粕是以
油菜籽为原料经过取油后的副产物，其
蛋白质含量在34％～38％之间，
氨基酸组成中蛋氨酸和赖氨酸比例较高。
[0003] 抗生素滤渣是
生物发酵法生产抗生素过程中形成的一类高浓度、含多种难降解有 机物的工业废料，主要成分是
微生物菌丝体，培养基残渣和其他一些未完全代谢利用 的有机物，其
粗蛋白含量较高。由于滤渣中含有未被完全提取的抗生素残药和未经安 全性评价的
次级代谢产物，养殖过程使用含有抗生素滤渣的饲料原料具有危害养殖动 物健康、影响
食品安全和诱导产生细菌耐药性等潜在
风险隐患。因此，农业行政主管 部
门在开展菜籽粕中抗生素滤渣监管工作中存在
鉴别技术需求。
发明内容
[0004] 本发明的目的是提供一种检测菜籽粕中是否掺杂抗生素滤渣的方法，本发明兼具 气相色谱的高分离能
力和离子迁移谱的高灵敏度，同时它采用静态顶空进样方式，能 对于痕量挥发性成分准确、
无损检测，本发明能检测
链霉素滤渣、头孢菌素滤渣和硫 酸黏菌素滤渣的特征标志物，从而鉴别菜籽粕中是否掺假。
[0005] 本发明提供的一种检测菜籽粕中是否掺杂抗生素滤渣的方法，包括如下步骤：检 测菜籽粕中是否含有抗生素滤渣的特征标志物，检测到所述特征标志物，即为所述菜 籽粕中掺杂抗生素滤渣。
[0006] 上述的方法中，所述方法具体包括如下步骤：1)样品的预处理：菜籽粕样品进行
粉碎；
[0007] 2)挥发成分采集：将步骤1)中粉碎后的菜籽粕样品进行热孵育，然后采集挥发 成分；
[0008] 3)气相色谱分离：将所述挥发成分采用气相色谱分离；
[0009] 4)离子迁移谱检测：经步骤3)分离后的所述挥发成分采用离子迁移谱检测，如 检测到所述抗生素滤渣的特征标志物，则为所述菜籽粕中掺杂抗生素滤渣。
[0010] 本发明中，所述样品的预处理具体包括如下步骤：采用旋风磨或其他
研磨装置将 菜籽粕样品进行粉碎，粉碎后的样品粒度达到18目；称取0.5g粉碎后的样品至洁净 的玻璃顶空瓶中，
橡胶塞密封，
铝盖压盖密封，保证顶空瓶密封不漏气。
[0011] 上述的方法中，所述抗生素滤渣为链霉素滤渣、头孢菌素滤渣和
硫酸黏菌素滤渣 中的一种或多种。
[0012] 上述的方法中，当所述抗生素滤渣为所述链霉素滤渣时，所述特征标志物为庚醇、 己酸乙酯和丙酸乙酯；
[0013] 当所述抗生素滤渣为所述头孢菌素滤渣时，所述特征标志物为3-甲基丁
醛、苯乙 醛、甲硫基丙醛和3-甲基丁醇；
[0014] 当所述抗生素滤渣为所述硫酸黏菌素滤渣时，所述特征标志物为二甲三硫和2,6- 壬二烯醛。
[0015] 上述的方法中，所述粉碎的粒径为大于等于18目，具体可为18目或18～40目。
[0016] 上述的方法中，所述热孵育的
温度为90℃，时间为10min，振动速度为500rpm；
[0017] 采用静态顶空挥发成分采集装置采集所述挥发成分。
[0018] 本发明中，所述热孵育采用热孵育器进行；所述静态顶空挥发成分采集装置包括 顶空瓶；
[0019] 将填装样品的顶空瓶置于热孵育器上进行加热孵育以促进样品中挥发性物质释放 到顶空，便于收集。
[0020] 上述的方法中，所述气相色谱的分离条件如下：色谱柱为SE54色谱柱；柱温40℃； 载气为氮气，进样口温度为80℃；气相分离条件为：0～2min，载气流速为2mL/min； 2～20min，载气流速为100mL/min；20～30min，载气流速为150mL/min。
[0021] 上述的方法中，所述离子迁移谱检测的条如下：采用氚源β射线电离源；迁移管 的温度为45℃，漂移气为氮气，流量为150mL/min。
[0022] 上述的方法中，所述气相色谱分离的进样条件如下：进样针温度为95℃，进样体 积为500μL，进样速度为100μL/s。
[0023] 本发明中，所述气相色谱分离和离子迁移谱检测的结果，通过谱图判断。在气相 色谱-离子迁移谱的谱图中，纵坐标为气相保留时间，横坐标为离子迁移时间，
颜色代 表检出物质的浓度，红色表示浓度较高，红色越深表示浓度越高。根据气相保留时间 和离子迁移时间对检出物质进行定性，如果检出抗生素滤渣特征标志物则判定菜籽粕 中掺假了抗生素滤渣。
[0024] 本发明具有以下优点：
[0025] 1、本发明前处理简单，检测时间短、判别准确，能够满足菜籽粕中抗生素滤渣掺 假鉴别的检测目的。
[0026] 2、本发明兼具气相色谱的高分离能力和离子迁移谱的高灵敏度，同时它采用静态 顶空进样方式，能对于痕量挥发性成分准确、无损检测。
[0027] 3、本发明基于气相色谱-离子迁移谱检测链霉素滤渣、头孢菌素滤渣和硫酸黏菌 素滤渣特征标志物的菜籽粕掺假鉴别方法。
附图说明
[0028] 图1为链霉素滤渣样品的气相色谱-离子迁移谱图。
[0029] 图2为菜籽粕中掺加链霉素滤渣样品的气相色谱-离子迁移谱图。
[0030] 图3为菜籽粕样品的气相色谱-离子迁移谱图。
[0031] 图4为头孢菌素滤渣样品的气相色谱-离子迁移谱图。
[0032] 图5为菜籽粕中掺加头孢菌素滤渣样品的气相色谱-离子迁移谱图。
[0033] 图6为硫酸黏菌素滤渣样品的气相色谱-离子迁移谱图。
[0034] 图7为菜籽粕中掺加硫酸黏菌素滤渣样品的气相色谱-离子迁移谱图。
具体实施方式
[0035] 下述
实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0036] 下述实施例中所用的材料、
试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0037] 实施例1、
[0038] (1)样品预处理
[0039] 将菜籽粕、链霉素滤渣、掺加链霉素滤渣(10％，m/m)的菜籽粕分别采用旋风 磨进行粉碎，粉碎后的粒度达到18目。分别称取0.5g粉碎后的样品至洁净的玻璃顶 空瓶中，橡胶塞密封，铝盖压盖密封，保证顶空瓶密封不漏气。
[0040] (2)静态顶空挥发成分采集
[0041] 将填装样品的顶空瓶至于热孵育器上进行加热孵育以促进样品中挥发性物质释放 到顶空，热孵育温度为90℃，孵育时间为10min，孵育器振动速度500rpm。热孵育结 束后采用进样针吸取静态顶空挥发性成分，体积为500μL，进样速度为100μL/s。
[0042] (3)气相色谱分离
[0043] ①色谱柱：SE54色谱柱(5％苯基-95％二甲基聚
硅氧烷，非极性固定相)；
[0044] ②载气：氮气；
[0045] ③柱温：40℃；
[0046] ④进样口温度：80℃；
[0047] ⑤进样体积：500μL；
[0048] ⑥进样速度：100μL/s；
[0049] ⑦气相分离条件为：0-2min，载气流速为2mL/min，2-20min，载气流速为 100mL/min，20-30min，载气流速为150mL/min。
[0050] (4)离子迁移谱检测
[0051] ①电离源：氚源(β射线)；
[0052] ②迁移管温度：45℃；
[0053] ③漂移气：氮气；
[0054] ④流量：150mL/min。
[0055] (5)结果判定：
[0056] 在气相色谱-离子迁移谱图中，通过比对气相保留时间和离子迁移时间，确定是否 检出链霉素滤渣特征标志物，从而判定样品中是否掺加链霉素滤渣。抗生素滤渣特征 标志物名称、气相保留时间和离子迁移时间如表1所示。
[0057] 表1抗生素滤渣特征标志物名称、气相保留时间和离子迁移时间
[0058]
[0059] 结果表明，在链霉素滤渣中检出庚醇、己酸乙酯、丙酸乙酯，如图1所示；在掺 加链霉素滤渣的菜籽粕中检出庚醇、己酸乙酯、丙酸乙酯，如图2所示；在纯菜籽粕 中未检出庚醇、己酸乙酯、丙酸乙酯，如图3所示。由上述结果可知，采用本方法能 够准确判定菜籽粕中是否掺加链霉素滤渣。
[0060] 实施例2、
[0061] (1)样品预处理
[0062] 将菜籽粕、头孢菌素滤渣、掺加头孢菌素滤渣(10％，m/m)的菜籽粕分别采用 旋风磨进行粉碎，粉碎后的粒度达到18目。分别称取0.5g粉碎后的样品至洁净的玻 璃顶空瓶中，橡胶塞密封，铝盖压盖密封，保证顶空瓶密封不漏气。
[0063] (2)静态顶空挥发成分采集
[0064] 将填装样品的顶空瓶至于热孵育器上进行加热孵育以促进样品中挥发性物质释放 到顶空，热孵育温度为90℃，孵育时间为10min，孵育器振动速度500rpm。热孵育结 束后采用进样针吸取静态顶空挥发性成分，体积为500μL，进样速度为100μL/s。
[0065] (3)气相色谱分离
[0066] ①色谱柱：SE54色谱柱(5％苯基-95％二甲基聚硅氧烷，非极性固定相)；
[0067] ②载气：氮气；
[0068] ③柱温：40℃；
[0069] ④进样口温度：80℃；
[0070] ⑤进样体积：500μL；
[0071] ⑥进样速度：100μL/s；
[0072] ⑦气相分离条件为：0-2min，载气流速为2ml/min，2-20min，载气流速为 100mL/min，20-30min，载气流速为150mL/min。
[0073] (4)离子迁移谱检测
[0074] ①电离源：氚源(β射线)；
[0075] ②迁移管温度：45℃；
[0076] ③漂移气：氮气；
[0077] ④流量：150mL/min。
[0078] (5)结果判定：
[0079] 在气相色谱-离子迁移谱图中，通过比对气相保留时间和离子迁移时间，确定是否 检出头孢菌素滤渣特征标志物，从而判定样品中是否掺加头孢菌素滤渣。抗生素滤渣 特征标志物名称、气相保留时间和离子迁移时间如表1所示。
[0080] 结果表明，在头孢菌素滤渣中检出3-甲基丁醛、苯乙醛、甲硫基丙醛、3-甲基丁 醇，如图4所示；在掺加头孢菌素滤渣的菜籽粕中检出3-甲基丁醛、苯乙醛、甲硫基 丙醛、3-甲基丁醇，如图5所示；在纯菜籽粕中未检出3-甲基丁醛、苯乙醛、甲硫基 丙醛、3-甲基丁醇，如图3所示。由上述结果可知，采用本方法能够准确判定菜籽粕 中是否掺加头孢菌素滤渣。
[0081] 实施例3、
[0082] (1)样品预处理
[0083] 将菜籽粕、硫酸黏菌素滤渣、掺加硫酸黏菌素滤渣(10％，m/m)的菜籽粕分别 采用旋风磨进行粉碎，粉碎后的粒度达到18目。分别称取0.5g粉碎后的样品至洁净 的玻璃顶空瓶中，橡胶塞密封，铝盖压盖密封，保证顶空瓶密封不漏气。
[0084] (2)静态顶空挥发成分采集
[0085] 将填装样品的顶空瓶至于热孵育器上进行加热孵育以促进样品中挥发性物质释放 到顶空，热孵育温度为90℃，孵育时间为10min，孵育器振动速度500rpm。热孵育结 束后采用进样针吸取静态顶空挥发性成分，体积为500μL，进样速度为100μL/s。
[0086] (3)气相色谱分离
[0087] ①色谱柱：SE54色谱柱(5％苯基-95％二甲基聚硅氧烷，非极性固定相)；
[0088] ②载气：氮气；
[0089] ③柱温：40℃；
[0090] ④进样口温度：80℃；
[0091] ⑤进样体积：500μL；
[0092] ⑥进样速度：100μl/s；
[0093] ⑦气相分离条件为：0-2min，载气流速为2mL/min，2-20min，载气流速为 100mL/min，20-30min，载气流速为150mL/min。
[0094] (4)离子迁移谱检测
[0095] ①电离源：氚源(β射线)；
[0096] ②迁移管温度：45℃；
[0097] ③漂移气：氮气；
[0098] ④流量：150mL/min。
[0099] (5)结果判定：
[0100] 在气相色谱-离子迁移谱图中，通过比对气相保留时间和离子迁移时间，确定是否 检出硫酸黏菌素滤渣特征标志物，从而判定样品中是否掺加硫酸黏菌素滤渣。抗生素 滤渣特征标志物名称、气相保留时间和离子迁移时间如表1所示。
[0101] 结果表明，在硫酸黏菌素滤渣中检出二甲三硫、2,6-壬二烯醛，如图6所示；在 掺加硫酸黏菌素滤渣的菜籽粕中检出二甲三硫、2,6-壬二烯醛，如图7所示；在纯菜 籽粕中未检出二甲三硫、2,6-壬二烯醛，如图3所示。由上述结果可知，采用本方法 能够准确判定菜籽粕中是否掺加硫酸黏菌素滤渣。
