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抗NGF组合物及其用途

阅读:433发布:2021-11-20

专利汇可以提供抗NGF组合物及其用途专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及对NGF具有结合特异性的 抗体 和其 片段 ,尤其是抑制NGF与TrkA和/或p75或p75和/或TrkA相互作用的那些抗体和其片段。本发明的另一个实施方案涉及本文所描述的包含本文所描述的VH、VL和CDR多肽序列的抗体和其结合片段,以及编码它们的多核苷酸。本发明还涵盖了抗NGF抗体和其结合片段与一个或多个功能性或可检测的部分缀合所形成的缀合物。本发明还涵盖了制备所述抗NGF抗体和其结合片段的方法。本发明的实施方案还涉及抗NGF抗体和其结合片段用于诊断、评估以及 治疗 与NGF相关的 疾病 和病症的用途。,下面是抗NGF组合物及其用途专利的具体信息内容。

1.一种抗人NGF抗体或抗体片段,所述抗人NGF抗体或抗体片段与选自以下的抗人
NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上一个或多个相同或重叠的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上一个或多个相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
2.如权利要求1所述的抗人NGF抗体或片段,所述抗人NGF抗体或片段与Ab3、Ab4、Ab15或Ab16特异性地结合完整人NGF多肽或其片段上一个或多个相同或重叠的表位和/或竞争结合完整人NGF多肽或其片段上一个或多个相同或重叠的表位。
3.如权利要求1所述的抗人NGF抗体或片段,所述抗人NGF抗体或片段与选自以下
的抗人NGF抗体特异性地结合完整人NGF多肽或其片段上一个或多个相同或重叠的表位:
Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
4.如权利要求1所述的抗体片段,其中所述片段选自Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
5.如权利要求4所述的抗体片段,其中所述片段是Fab片段。
6.根据权利要求1或2所述的抗人NGF抗体或片段,其中所述片段是Fab片段,所述
Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列具有至少90%同一性:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列具有至少90%同一性:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
7.根据权利要求6所述的抗人NGF抗体或片段,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列具有至少95%同一性:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列具有至少95%同一性:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
8.根据权利要求6所述的抗人NGF抗体或片段,其中所述片段是Fab片段,所述Fab
片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列一致:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列相同:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
9.如权利要求5所述的Fab片段,所述Fab片段包含可变轻链,所述可变轻链包含CDR1序列SEQ ID NO:55、CDR2序列SEQ ID NO:56以及CDR3序列SEQ ID NO:57;和/或可变重链,所述可变重链包含CDR1序列SEQ ID NO:58、CDR2序列SEQ ID NO:59以及CDR3序列SEQ ID NO:60。
10.如权利要求1所述的抗人NGF抗体,所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与选自以下的抗人NGF抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
11.如权利要求2所述的抗人NGF抗体,所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与Ab3、Ab4、Ab15或Ab16中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR)。
12.如权利要求1或2所述的抗人NGF抗体,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个基酸残基不同。
13.根据权利要求1或2所述的抗人NGF抗体或抗体片段,所述抗人NGF抗体或抗
体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
14.如权利要求1或2所述的抗人NGF抗体或片段,所述抗人NGF抗体或片段是非糖基化的。
15.如权利要求1或2所述的抗人NGF抗体,所述抗人NGF抗体含有Fc区,所述Fc区
已经过修饰以改变效应功能、半衰期蛋白质解作用和/或糖基化作用。
16.如权利要求1或2所述的抗人NGF抗体或片段,所述抗人NGF抗体或片段是人抗
体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体
17.如权利要求1或2所述的抗人NGF抗体或片段,所述抗人NGF抗体或片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
18.如权利要求17所述的抗人NGF抗体或片段,所述抗人NGF抗体或片段特异性地结合NGF,所述NGF表达在患有与结合NGF的细胞相关的疾病的患者体内的人细胞上或由所述人细胞表达。
19.如权利要求18所述的抗人NGF抗体或片段,其中所述疾病是炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
20.如权利要求19所述的抗人NGF抗体或片段,其中所述疾病选自癌症疼痛或神经痛。
21.如权利要求19所述的抗人NGF抗体或片段,其中所述疾病是癌症疼痛。
22.如权利要求1或2所述的抗人NGF抗体或片段,所述抗人NGF抗体或片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接
23.一种核酸序列,所述核酸序列引起根据权利要求1或2所述的抗人NGF抗体或抗体片段表达。
24.如权利要求23所述的核酸序列,所述核酸序列包含酵母或人优选的密码子。
25.一种载体,所述载体包含根据权利要求23或24所述的核酸序列。
26.如权利要求25所述的载体,所述载体是质粒或重组病毒载体。
27.一种重组细胞,所述重组细胞表达根据权利要求1或2所述的抗体或抗体片段。
28.如权利要求27所述的细胞,所述细胞选自哺乳动物细胞、酵母细胞、细菌细胞、真菌细胞、植物细胞或昆虫细胞。
29.如权利要求28所述的细胞,所述细胞是酵母细胞。
30.如权利要求29所述的细胞,所述细胞是二倍体酵母细胞。
31.如权利要求30所述的酵母细胞,所述酵母细胞是毕赤酵母(Pichia)。
32.一种治疗方法,所述方法包括对患有与表达NGF的细胞相关的疾病或病状的患者施用治疗有效量的根据权利要求1或2所述的至少一种抗人NGF抗体或片段。
33.如权利要求32所述的方法,其中所述疾病选自炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
34.如权利要求33所述的方法,其中所述疾病或病状是癌症疼痛或神经痛。
35.如权利要求33所述的方法,其中所述治疗进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
36.一种检测表达NGF的细胞的存在的体内成像方法,所述方法包括施用诊断有效量的根据权利要求1所述的至少一种抗人NGF抗体。
37.如权利要求36所述的方法,其中所述施用进一步包括施用有助于检测表达NGF的疾病部位处的所述抗体的放射性核素或荧光团。
38.如权利要求36所述的方法,其中使用所述结果来促成适当治疗方案的设计。
39.一种分离的抗NGF抗体,所述抗NGF抗体包含VH多肽序列,所述VH多肽序列选自:
SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402中的全长重链多肽或其变体;
并且进一步包含VL多肽序列,所述VL多肽序列选自:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401中的全长轻链多肽或其变体,其中所述VH或VL或所述全长重链多肽或轻链多肽中的框架残基或CDR残基(FR残基)中的一个或多个已被另一个氨基酸残基取代,从而产生特异性地结合NGF的抗NGF抗体。
40.根据权利要求39所述的分离的抗体,其中所述FR残基中的一个或多个被亲本兔抗NGF抗体中的相应位点上所存在的氨基酸取代或通过保守性氨基酸取代而被取代,所述分离的抗体中所含的所述VH和/或VL多肽中所含的互补决定区(CDR)源自于所述亲本兔抗NGF抗体。
41.根据权利要求39所述的分离的抗体,其中所述分离的抗体中所含的所述VH和/或VL多肽是人源化的。
42.根据权利要求39所述的分离的抗体,所述抗体含有所述VH和/或VL多肽或其变
体之一,其中所述抗体是嵌合的。
43.根据权利要求39所述的分离的抗体,所述抗体含有所述VH和/或VL多肽或其变
体之一,所述分离的抗体包括单链抗体。
44.根据权利要求42所述的分离的嵌合抗体,其中所述嵌合抗体包含人Fc。
45.根据权利要求44所述的分离的嵌合抗体,其中所述分离的嵌合抗体中所含的所述人Fc源自于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19。
46.根据权利要求39至45中任一项所述的分离的抗体,其中所述抗体抑制NGF与p75和/或TrkA和/或其多聚体缔合。
47.一种分离的抗NGF抗体,所述抗NGF抗体包含与如权利要求39所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大同源性的多肽序列。
48.一种分离的抗NGF抗体,所述抗NGF抗体包含与如权利要求39所述的多肽序列中的任一个具有至少95%或更大同源性的多肽序列。
-4 -1
49.根据权利要求45所述的分离的抗体,其中所述抗体以小于或等于10 S 、
-5 -1 -5 -1 -6 -1 -6 -1 -7 -1 -7 -1
5×10 S 、10 S 、5×10 S 、10 S 、5×10 S 或10 S 的解离速率(Koff)结合至NGF。
50.根据权利要求39至45中任一项所述的分离的抗体,其中所述抗体抑制NGF与TrkA和/或其多聚体缔合。
51.一种根据权利要求39至50中任一项所述的抗体的片段,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
52.根据权利要求39至51中任一项所述的分离的抗体,其中所述抗体进一步包含效应部分。
53.根据权利要求52所述的分离的抗体,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
54.根据权利要求53所述的分离的抗体,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
55.根据权利要求53所述的分离的抗体,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
56.一种改善或减少与NGF相关的疾病或病症的症状的方法,所述方法包括对展现出与NGF相关的疾病或病症的症状的患者施用治疗有效量的如权利要求39至45中任一项所述的抗体。
57.如权利要求56所述的方法,其中所述与NGF相关的疾病或病症选自炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
58.一种制备根据权利要求39至55中任一项所述的抗体的方法,在含有编码所述抗体的一种或多种异源多核苷酸的重组宿主细胞或非人转基因动物或植物中制备所述抗体。
59.如权利要求58所述的方法,其中所述宿主细胞是细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、类细胞或昆虫细胞。
60.如权利要求58所述的方法,其中所述宿主细胞是多倍体酵母培养物,所述多倍体酵母培养物稳定地表达并且向培养基中分泌至少10毫克/升至25毫克/升的所述抗体,并且所述方法包括:
(i)将至少一种表达载体引入至单倍体酵母细胞中,所述表达载体含有与启动子和信号序列可操作地连接的编码所述抗体的一种或多种异源多核苷酸;
(ii)通过交配或原生质球融合由所述第一单倍体酵母细胞和/或第二单倍体酵母细胞产生多倍体酵母;
(iii)对稳定表达所述抗体的多倍体酵母细胞进行选择;以及
(iv)由所述多倍体酵母细胞产生稳定的多倍体酵母培养物,所述多倍体酵母细胞向所述培养基中稳定地表达至少10毫克/升至25毫克/升的所述抗体。
61.如权利要求60所述的方法,其中所述酵母选自下列属:阿斯眉酵母属、埃克波眉酵母属、固囊酵母属、德巴利酵母属、德克酵母属、假囊酵母属、伊萨酵母属、哈萨克斯坦酵母属、克鲁维酵母属、柯达酵母属、路德酵母属、管囊酵母属、毕赤酵母属、酵母属、土星形酵母属、特派斯波罗酵母属、有孢圆酵母属、拟威尔酵母属或接合酵母属。
62.如权利要求61所述的方法,其中所述酵母属是毕赤酵母属。
63.如权利要求62所述的方法,其中毕赤酵母属的菌种选自巴斯德毕赤酵母、甲醇毕赤酵母或多形汉逊酵母(安格斯毕赤酵母)。
64.一种分离的多核苷酸,所述多核苷酸包含编码选自以下的抗NGFVH抗体氨基酸序列或编码其变体的多核苷酸:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402中所含的完整重链,其中至少一个框架残基(FR残基)已被兔抗NGF抗体VH多肽中的相应位置上存在的氨基酸取代或通过保守性氨基酸取代而被取代。
65.一种载体,所述载体包含根据权利要求64所述的分离的多核苷酸序列。
66.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含根据权利要求65所述的载体。
67.如权利要求66所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞是属于毕赤酵母属的酵母细胞。
68.如权利要求58所述的方法,其中所述异源多核苷酸包含编码选自以下的抗NGF VL氨基酸序列或编码任何以下所述序列的变体的多核苷酸序列:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:191或编码SEQ ID NO:401中的完整轻链或编码任何前述序列的变体的多核苷酸序列,其中至少一个框架残基(FR残基)已被兔抗NGF抗体VL多肽中的相应位置上存在的氨基酸取代或通过保守性氨基酸取代而被取代。
69.一种分离的多核苷酸,所述多核苷酸包含编码选自以下的抗NGF VL抗体氨基酸序列或编码其变体的多核苷酸序列:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401中所含的完整轻链多肽,其中至少一个框架残基(FR残基)已被兔抗NGF抗体VL多肽中的相应位置上存在的氨基酸取代或通过保守性氨基酸取代而被取代。
70.一种载体,所述载体包含根据权利要求60所述的多核苷酸序列。
71.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含根据权利要求70所述的载体。
72.如权利要求71所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞是属于毕赤酵母属的酵母细胞。
73.如权利要求58所述的方法,其中所述异源多核苷酸包含编码以下序列中所含的多肽的序列:SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:63;SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73;
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:113;SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:143;SEQ ID NO:151和SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和SEQ ID NO:193;或SEQ ID NO:401和SEQ ID NO:402。
74.一种抗NGF抗体,所述抗NGF抗体与由权利要求73中所述的多核苷酸序列之一编码的抗体或抗体片段结合相同或重叠的NGF表位和/或与抗NGF抗体竞争结合NGF。
75.根据权利要求70所述的抗NGF抗体,所述抗NGF抗体与选自以下的抗NGF抗体结
合相同或重叠的NGF表位:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
76.一种分离的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402中的完整重链;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401中的完整轻链。
77.根据权利要求74、75或76所述的分离的抗体,其中所述抗体是人源化抗体。
78.根据权利要求74、75或76所述的分离的抗体,其中所述抗体是嵌合的。
79.根据权利要求78所述的分离的抗体,其中所述嵌合抗体包含人Fc。
80.根据权利要求74、75或76所述的分离的抗体,所述分离的抗体包括单链抗体。
81.根据权利要求79所述的分离的抗体,其中所述人Fc源自于人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19。
82.根据权利要求74至81中任一项所述的分离的抗体,其中所述抗体与线性或构象NGF表位结合。
83.一种分离的抗NGF抗体,所述抗NGF抗体包含与权利要求76中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大同源性的VL或VH多肽或完整轻链或重链序列或完整重链或轻链。
-4 -1 -5 -
84.根据权利要求83所述的抗体,其中所述抗体以小于或等于10 S 、5×10 S1、
-5 -1 -6 -1 -6 -1 -7 -1 -7 -1
10 S 、5×10 S 、10 S 、5×10 S 或10 S 的解离速率(koff)结合至NGF。
85.如权利要求74至83中任一项所述的抗体,其中所述抗体抑制NGF与TrkA和/或
其多聚体缔合。
86.一种根据权利要求74至83中任一项所述的抗体的片段,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
87.根据权利要求74至86中任一项所述的抗体或片段,其中所述抗体进一步包含效应部分。
88.根据权利要求87所述的抗体,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
89.如权利要求88所述的抗体,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
90.如权利要求89所述的抗体,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
91.一种改善或减少与NGF相关的疾病或病症的症状的方法,所述方法包括对展现出与NGF相关的疾病或病症的症状的患者施用治疗有效量的根据权利要求74至90中任一项所述的抗体。
92.如权利要求91所述的方法,其中所述与NGF相关的疾病或病症选自炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
93.一种在多倍体酵母培养物中制备如权利要求74至90中任一项所述的抗体的方法,所述多倍体酵母培养物稳定地表达并且向培养基中分泌至少10毫克/升至25毫克/升的所述抗体,所述方法包括:
(i)将至少一种表达载体引入至单倍体酵母细胞中,所述表达载体含有与启动子和信号序列可操作地连接的编码所述抗体的一种或多种异源多核苷酸;
(ii)通过交配或原生质球融合由所述第一单倍体酵母细胞和/或第二单倍体酵母细胞产生多倍体酵母;
(iii)选择稳定表达所述抗体的多倍体酵母细胞;以及
(iv)由所述多倍体酵母细胞产生稳定的多倍体酵母培养物,所述多倍体酵母细胞向所述培养基中稳定地表达至少10毫克/升至25毫克/升的所述抗体。
94.如权利要求93所述的方法,其中所述酵母选自下列属:阿斯眉酵母属、埃克波眉酵母属、固囊酵母属、德巴利酵母属、德克酵母属、假囊酵母属、伊萨酵母属、哈萨克斯坦酵母属、克鲁维酵母属、柯达酵母属、路德酵母属、管囊酵母属、毕赤酵母属、酵母属、土星形酵母属、特派斯波罗酵母属、有孢圆酵母属、拟威尔酵母属或接合酵母属。
95.如权利要求94所述的方法,其中所述酵母属是毕赤酵母属。
96.如权利要求95所述的方法,其中毕赤酵母属的菌种选自巴斯德毕赤酵母、甲醇毕赤酵母或多形汉逊酵母(安格斯毕赤酵母)。
97.一种分离的多核苷酸,所述多核苷酸表达多肽,所述多肽含有源自于抗NGF抗体的至少一个CDR多肽,其中所述经过表达的多肽单独特异性地结合NGF或在与另一个多核苷酸序列联合表达时特异性地结合NGF,所述另一个多核苷酸序列表达含有源自于抗NGF抗体的至少一个CDR多肽的多肽,其中所述至少一个CDR选自以下VL或VH多肽中所含的CDR:
SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402或SEQ ID NO:401中的完整重链多肽和完整轻链多肽中所含的CDR。
98.一种载体,所述载体包含如权利要求97所述的多核苷酸序列中的至少一个。
99.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含根据权利要求98所述的载体。
100.如权利要求99所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞是属于毕赤酵母属的酵母细胞。
101.如权利要求93所述的方法,其中所述异源多核苷酸包含编码选自以下的VL或VH多肽中所含的至少一个CDR的多核苷酸序列中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402和SEQ ID NO:401中的完整重链多肽和完整轻链多肽。
102.一种药物或诊断组合物,所述组合物含有根据权利要求1、2或74至90之一所述的至少一种NGF抗体或片段,和药学上可接受的载体。
103.根据权利要求102所述的药物或诊断组合物,所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
104.如权利要求103所述的药物或诊断组合物,所述药物或诊断组合物是冻干的。
105.如权利要求102所述的药物或诊断组合物,所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或嵌合或人源化抗体或由其衍生的片段。
106.一种治疗NGF相关疾病的方法,所述方法包括施用治疗有效量的根据权利要求
102至105之一所述的药物组合物。
107.如权利要求106所述的方法,其中所述疾病选自炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
108.如权利要求107所述的方法,其中所述疾病是癌症疼痛或神经痛。
109.一种检测表达NGF的细胞的存在的体内成像方法,所述方法包括施用诊断有效量的根据权利要求102至105中任一项所述的诊断组合物。
110.如权利要求109所述的方法,所述方法被用作用于以下疾病的有效治疗方案设计的计划性方案的一部分:炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
111.如权利要求110所述的方法,其中所述治疗方案包括以下各项中的一种或多种:
抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
112.如权利要求111所述的方法,其中所述抗体包含根据权利要求1、2或72至80之一所述的抗NGF抗体或片段。
113.如权利要求80所述的抗体,其中所述单链抗体选自scFv、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、SMIP、MetMab样单价剂或其组合、截短形式或修饰。
114.一种抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段对NGF具有结合特异性并且包含选自以下的可变轻链CDR1、CDR2、以及CDR3多肽序列和可变重链CDR1、CDR2、以及CDR3多肽序列:
VLCDR1 VLCDR2 VLCDR3 VHCDR1 VHCDR2 VHCDR3
A SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:7 SEQ ID NO:8 SEQ ID NO:9 SEQ ID NO:10B SEQ ID NO:15 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:18 SEQ ID NO:19 SEQ ID NO:20C SEQ ID NO:25 SEQ ID NO:26 SEQ ID NO:27 SEQ ID NO:28 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:30D SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:36 SEQ ID NO:37 SEQ ID NO:38 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:40E SEQ ID NO:45 SEQ ID NO:46 SEQ ID NO:47 SEQ ID NO:48 SEQ ID NO:49 SEQ ID NO:50F SEQ ID NO:55 SEQ ID NO:56 SEQ ID NO:57 SEQ ID NO:58 SEQ ID NO:59 SEQ ID NO:60G SEQ ID NO:65 SEQ ID NO:66 SEQ ID NO:67 SEQ ID NO:68 SEQ ID NO:69 SEQ ID NO:70H SEQ ID NO:75 SEQ ID NO:76 SEQ ID NO:77 SEQ ID NO:78 SEQ ID NO:79 SEQ ID NO:80I SEQ ID NO:85 SEQ ID NO:86 SEQ ID NO:87 SEQ ID NO:88 SEQ ID NO:89 SEQ ID NO:90J SEQ ID NO:95 SEQ ID NO:96 SEQ ID NO:97 SEQ ID NO:98 SEQ ID NO:99 SEQ ID NO:100K SEQ ID NO:105SEQ ID NO:106SEQ ID NO:107SEQ ID NO:108SEQ ID NO:109 SEQ ID NO:110L SEQ ID NO:115SEQ ID NO:116SEQ ID NO:117SEQ ID NO:118SEQ ID NO:119 SEQ ID NO:120M SEQ ID NO:125SEQ ID NO:126SEQ ID NO:127SEQ ID NO:128SEQ ID NO:129 SEQ ID NO:130N SEQ ID NO:135SEQ ID NO:136SEQ ID NO:137SEQ ID NO:138SEQ ID NO:139 SEQ ID NO:140O SEQ ID NO:145SEQ ID NO:146SEQ ID NO:147SEQ ID NO:148SEQ ID NO:149 SEQ ID NO:150P SEQ ID NO:155SEQ ID NO:156SEQ ID NO:157SEQ ID NO:158SEQ ID NO:159 SEQ ID NO:160Q SEQ ID NO:165SEQ ID NO:166SEQ ID NO:167SEQ ID NO:168SEQ ID NO:169 SEQ ID NO:170R SEQ ID NO:175SEQ ID NO:176SEQ ID NO:177SEQ ID NO:178SEQ ID NO:179 SEQ ID NO:180S SEQ ID NO:185SEQ ID NO:186SEQ ID NO:187SEQ ID NO:188SEQ ID NO:189 SEQ ID NO:190T SEQ ID NO:195SEQ ID NO:196SEQ ID NO:197SEQ ID NO:198SEQ ID NO:199 SEQ ID NO:200。
115.如权利要求114所述的抗NGF抗体片段,其中所述抗体片段是scFv、骆驼抗体、纳米抗体、MetMab样单价剂、IgNAR(源自于鲨鱼的单链抗体)、Fab、Fab'或F(ab')2片段。
116.如权利要求114所述的抗NGF抗体片段,其中所述抗体片段是Fab片段。
117.根据权利要求116所述的Fab抗体片段,所述Fab抗体片段选自Fab1或Fab2。
118.根据权利要求114所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段包含选自以下的可变轻链多肽序列和可变重链多肽序列:
可变轻链 可变重链
A SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:3
B SEQ ID NO:11 SEQ ID NO:13
C SEQ ID NO:21 SEQ ID NO:23
D SEQ ID NO:31 SEQ ID NO:33
E SEQ ID NO:41 SEQ ID NO:43
F SEQ ID NO:51 SEQ ID NO:53
G SEQ ID NO:61 SEQ ID NO:63
H SEQ ID NO:71 SEQ ID NO:73
I SEQ ID NO:81 SEQ ID NO:83
J SEQ ID NO:91 SEQ ID NO:93
K SEQ ID NO:101 SEQ ID NO:103
L SEQ ID NO:111 SEQ ID NO:113
M SEQ ID NO:121 SEQ ID NO:123
N SEQ ID NO:131 SEQ ID NO:133
O SEQ ID NO:141 SEQ ID NO:143
P SEQ ID NO:151 SEQ ID NO:153
Q SEQ ID NO:161 SEQ ID NO:163
R SEQ ID NO:171 SEQ ID NO:173
S SEQ ID NO:181 SEQ ID NO:183
T SEQ ID NO:191 SEQ ID NO:193。
119.根据权利要求114所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段包含选自以下的轻链多肽序列和重链多肽序列:
轻链 重链
Ab1 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:4
Ab2 SEQ ID NO:12 SEQ ID NO:14
Ab3 SEQ ID NO:22 SEQ ID NO:24
Ab4 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:34
Ab5 SEQ ID NO:42 SEQ ID NO:44
Ab6 SEQ ID NO:52 SEQ ID NO:54
Ab7 SEQ ID NO:62 SEQ ID NO:64
Ab8 SEQ ID NO:72 SEQ ID NO:74
Ab9 SEQ ID NO:82 SEQ ID NO:84
Ab10 SEQ ID NO:92 SEQ ID NO:94
Ab11 SEQ ID NO:102 SEQ ID NO:104
Ab12 SEQ ID NO:112 SEQ ID NO:114
Ab13 SEQ ID NO:122 SEQ ID NO:124
Ab14 SEQ ID NO:132 SEQ ID NO:134
Ab15 SEQ ID NO:142 SEQ ID NO:144
Ab16 SEQ ID NO:152 SEQ ID NO:154
Ab17 SEQ ID NO:162 SEQ ID NO:164
Ab18 SEQ ID NO:172 SEQ ID NO:174
Ab19 SEQ ID NO:182 SEQ ID NO:184
Ab20 SEQ ID NO:192 SEQ ID NO:194
Ab21 SEQ ID NO:401 SEQ ID NO:402。
120.根据权利要求110所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述可变轻链和可变重链多肽序列各自分别与所述可变轻链多肽序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181以及SEQ ID NO:191之一和所述可变重链多肽序列SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183以及SEQ ID NO:193之一具有至少90%同一性。
121.根据权利要求114至119中任一项所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗
体或抗体片段是嵌合、人源化或人抗体或抗体片段。
122.根据权利要求110至115中任一项所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗
体或抗体片段是非糖基化的。
123.根据权利要求114至119中任一项所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗
体或抗体片段包含人恒定域。
124.根据权利要求123所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
125.根据权利要求114至119中任一项所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗人NGF
抗体或抗体片段含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用中的至少一种。
126.根据权利要求125所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述Fc区含有改变或消除糖基化作用的突变。
127.根据权利要求114至119中任一项所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗
体或抗体片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
128.根据权利要求114至119中任一项所述的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗
体或抗体片段进一步包含效应部分。
129.根据权利要求128所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
130.根据权利要求129所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
131.根据权利要求129所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
132.根据权利要求114或118所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述可变轻链和可变重链多肽序列各自分别与所述可变轻链多肽序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:191之一和所述可变重链多肽序列SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:193之一具有至少95%同一性。
133.根据权利要求114或118所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述可变轻链和可变重链多肽序列各自分别与所述可变轻链多肽序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:191之一和所述可变重链多肽序列SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:193之一具有至少98%同一性。
134.根据权利要求118所述的抗NGF抗体或抗体片段,其中所述可变轻链和可变重链多肽序列各自分别与所述可变轻链多肽序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:191之一和所述可变重链多肽序列SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:193之一具有至少
99%同一性。
135.一种组合物,所述组合物含有根据权利要求114至134中任一项所述的抗NGF抗体或抗体片段。
136.根据权利要求135所述的组合物,所述组合物适用于治疗性或诊断性用途。
137.根据权利要求135所述的组合物,所述组合物进一步包含至少一种稳定剂。
138.根据权利要求131所述的组合物,所述组合物是冻干的。
139.如权利要求135、136、137或138所述的组合物,所述组合物适合于静脉内或皮下施用。
140.一种治疗患者疼痛的方法,所述方法包括施用有效量的抗NGF Fab抗体片段。
141.如权利要求140所述的方法,其中所述Fab抗体片段衍生自以下抗体中的任一
种:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
142.如权利要求141所述的方法,其中所述Fab抗体片段是通过对以下抗体中的任一种进行木瓜蛋白酶消化而获得的:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
143.如权利要求58所述的方法,其中所述异源多核苷酸包含编码选自以下的抗NGF VH氨基酸序列的多核苷酸或编码其变体的多核苷酸:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:193,其中至少一个框架残基(FR残基)已被兔抗NGF抗体VL多肽中的相应位置上存在的氨基酸取代或通过保守性氨基酸取代而被取代。
144.如权利要求140至142中任一项所述的方法,其中皮下或静脉内施用所述抗体或片段。
145.一种治疗个体的疼痛或引起镇痛作用的方法,所述方法包括施用有效量的NGF拮抗剂,所述NGF拮抗剂抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。
146.如权利要求145所述的方法,其中所述NGF拮抗剂是多肽;NGF、TrkA的片段;反义RNA或siRNA;或抗NGF或抗TrkA抗体或抗体片段。
147.如权利要求145所述的方法,其中所述NGF拮抗剂是抗人NGF抗体或其片段,所述抗人NGF抗体或其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75的缔合。
148.如权利要求147所述的方法,其中所述抗体片段是选自以下的单价抗体片段:
Fab、Fab'、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
149.如权利要求145所述的方法,其中所述疼痛是外科手术前或外科手术后相关,或与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛,或预防或治疗慢性内脏疼痛。
150.如权利要求145所述的方法,其中所述慢性内脏疼痛是因选自以下的生理学病症所引起:痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、内脏痛以及肠易激综合征。
151.如权利要求149所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼和机械诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼和机械诱发性疼痛。
152.如权利要求149所述的方法,其中所述手术后疼痛包括热诱发性疼痛,并且其中改善所述热诱发性疼痛。
153.如权利要求149所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼、机械诱发性疼痛和/或热诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼、机械诱发性疼痛和/或热诱发性疼痛。
154.如权利要求149所述的方法,其中不显著抑制伤口愈合
155.如权利要求145所述的方法,其中所述疼痛选自与癌症相关的疼痛、神经痛以及神经源性疼痛。
156.如权利要求145所述的方法,其中所述治疗包括治疗急性疼痛或慢性疼痛。
157.如权利要求145所述的方法,其中所述疼痛是颅面疼痛或头痛。
158.如权利要求157所述的方法,其中所述颅面疼痛或所述头痛由颞下颌关节紊乱症(TMJ)、偏头痛或三叉神经痛引起。
159.如权利要求145所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是急性疼痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
160.如权利要求145所述的方法,其中所述施用经由颅面粘膜施用来实现,所述颅面粘膜施用包括鼻内施用、经颊施用、舌下施用或结膜施用。
161.如权利要求145所述的方法,所述方法进一步包括施用至少一种NSAID。
162.如权利要求161所述的方法,其中所述NSAID选自由以下组成的组:布洛芬、普生、甲基甲基萘乙酸、双氯芬酸、洛芬、托美丁、舒林酸、甲灭酸、甲氯灭酸、二氟尼柳、氟苯柳、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、塞来昔布、福费昔布、DUP-697、氟舒胺、美洛昔康、
6-甲氧基-2-萘乙酸、MK-966、萘丁美酮、尼美舒利、NS-398、SC-5766、SC-58215以及T-614。
163.如权利要求145所述的方法,所述方法被用于治疗骨癌疼痛。
164.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由原发于骨中的癌症所致。
165.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由骨肉瘤所致。
166.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的癌症所致。
167.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的前列腺癌所致。
168.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的乳癌所致。
169.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的癌所致。
170.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肉瘤所致。
171.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肾癌所致。
172.如权利要求163所述的方法,其中所述骨癌疼痛由从不确定的组织转移至骨的癌症所致。
173.如权利要求145所述的方法,所述方法被用于治疗伴有或不伴有神经根病的背部或颈部疼痛,所述方法包括将有效量的所述抗体或片段提供至包含椎间盘的椎间盘部位,其中所述椎间盘是已发生退变的椎间盘。
174.如权利要求145所述的方法,所述方法被用来治疗或预防受试者的与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。
175.如权利要求174所述的方法,其中与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛选自包括以下的组:下腹部(骨盆)疼痛;胃下部疼痛;膀胱疼痛;耻骨弓上疼痛;
阴茎、睾丸、阴囊以及会阴疼痛;尿道疼痛;性交疼痛;可能随着膀胱充盈而增加的疼痛、压或不适;排尿困难以及射精疼痛。
176.如权利要求147所述的方法,其中所述抗体是Ab3、Ab4、Ab15或Ab16或其片段。
177.如权利要求147所述的方法,其中所述抗体与选自Ab3、Ab4、Ab15或Ab16的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位和/或与选自Ab3、Ab4、Ab15或Ab16的抗人NGF抗体竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位。
178.如权利要求147所述的方法,其中所述抗体片段选自Fab片段、Fab'片段或
F(ab')2片段。
179.如权利要求178所述的方法,其中所述片段是Fab片段。
180.如权利要求147所述的方法,其中所述抗人NGF抗体包含Ab3、Ab4、Ab15或Ab16中所含的可变轻链区之一中的至少2个互补决定区(CDR),并且包含Ab3、Ab4、Ab15或Ab16中所含的可变重链区之一中的至少2个互补决定区(CDR),其中所述可变重链多肽选自从以下序列中选出的序列:SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:153,并且所述可变轻链多肽选自:SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:151。
181.如权利要求180所述的方法,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab3、Ab4、Ab15或Ab16,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
182.如权利要求147所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:153;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:151。
183.如权利要求180至182中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的。
184.如权利要求180至182中任一项所述的方法,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
185.如权利要求178至183中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
186.如权利要求182所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含VL或VH多肽
序列,所述VL或VH多肽序列与所述方法中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
187.如权利要求147所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
188.如权利要求147所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接或与延长半衰期的部分连接。
189.如权利要求147所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分或水溶性聚合物
190.如权利要求189所述的方法,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
191.如权利要求190所述的方法,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
192.如权利要求190所述的方法,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
193.如权利要求145或147所述的方法,所述方法进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
194.如权利要求145至193中任一项所述的方法,其中所述NGF拮抗剂或抗人NGF抗体或其片段包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
195.如权利要求194所述的方法,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
196.如权利要求195所述的方法,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
197.如权利要求194所述的方法,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab3、Ab4、Ab15或Ab16。
198.如权利要求194所述的方法,其中所述药物或诊断组合物是可皮下或静脉内施用的。
199.如权利要求147所述的方法,所述方法进一步包括施用另一种抗人NGF抗体或其片段,其中所述另一种抗体抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合,其中所述抗体是Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
200.如权利要求194或199所述的方法,其中所述抗体是片段:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
201.如权利要求199所述的方法,所述方法被用来治疗或预防与外科手术前或外科手术后相关的疼痛或与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛、预防或治疗慢性内脏疼痛。
202.如权利要求201所述的方法,其中所述慢性内脏疼痛是因选自以下的生理学病症引起的:痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、内脏痛以及肠易激综合征。
203.如权利要求201所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼和机械诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼和机械诱发性疼痛。
204.如权利要求201所述的方法,其中所述手术后疼痛包括热诱发性疼痛,并且其中改善所述热诱发性疼痛。
205.如权利要求201所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛。
206.如权利要求201所述的方法,其中不显著抑制伤口愈合。
207.如权利要求194或199所述的方法,所述方法治疗选自以下的疼痛:与癌症相关的疼痛、神经痛、以及神经源性疼痛。
208.如权利要求194或199所述的方法,其中所述治疗包括治疗急性疼痛或慢性疼痛。
209.如权利要求194或199所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是颅面疼痛或头痛。
210.如权利要求209所述的方法,其中所述颅面疼痛或所述头痛由颞下颌关节紊乱症(TMJ)、偏头痛或三叉神经痛引起。
211.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是急性疼痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
212.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述施用经由颅面粘膜施用或经由皮下或静脉内施用来实现,所述颅面粘膜施用包括鼻内施用、经颊施用、舌下施用或结膜施用。
213.如前述权利要求中任一项所述的方法,所述方法进一步包括施用至少一种
NSAID。
214.如权利要求213所述的方法,其中所述NSAID选自由以下组成的组:布洛芬、萘普生、甲氧基甲基萘乙酸、双氯芬酸、酮洛芬、托美丁、舒林酸、甲灭酸、甲氯灭酸、二氟尼柳、氟苯柳、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、塞来昔布、福费昔布、DUP-697、氟舒胺、美洛昔康、
6-甲氧基-2-萘乙酸、MK-966、萘丁美酮、尼美舒利、NS-398、SC-5766、SC-58215以及T-614。
215.如权利要求213所述的方法,所述方法被用于治疗骨癌疼痛。
216.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由原发于骨中的癌症所致。
217.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由骨肉瘤所致。
218.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的癌症所致。
219.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的前列腺癌所致。
220.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的乳癌所致。
221.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肺癌所致。
222.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肉瘤或已从未知起源转移至骨的癌症所致。
223.如权利要求215所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肾癌所致。
224.如前述权利要求145至223中任一项所述的方法,所述方法被用于治疗伴有或不伴有神经根病的背部或颈部疼痛,所述方法包括将有效量的所述抗体或片段提供至包含椎间盘的椎间盘部位,其中所述椎间盘是已发生退变的椎间盘。
225.如前述权利要求145至224中任一项所述的方法,其中经由鼻内、静脉内或皮下施用来施用所述抗体。
226.如前述权利要求145至224中任一项所述的方法,所述方法被用来治疗或预防受试者的与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。
227.如权利要求226所述的方法,其中与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛选自包括以下的组:下腹部(骨盆)疼痛;胃下部疼痛;膀胱疼痛;耻骨弓上疼痛;
阴茎、睾丸、阴囊以及会阴疼痛;尿道疼痛;性交疼痛;可能随着膀胱充盈而增加的疼痛、压力或不适;排尿困难以及射精疼痛。
228.如前述权利要求145至224中任一项所述的方法,其中所述抗体与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同的线性或构象表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同的线性或构象表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
229.如权利要求228所述的方法,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
230.如权利要求229所述的方法,其中所述片段是Fab片段。
231.如权利要求54所述的方法,其中所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
232.如权利要求231所述的方法,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
233.如权利要求231所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
234.如权利要求230至233中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的。
235.如权利要求230至234中任一项所述的方法,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
236.如权利要求230至235中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
237.如权利要求230至236中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含VL或VH多肽序列,所述VL或VH多肽序列与所述方法中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
238.如权利要求230至236中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
239.如权利要求230至238中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
240.如权利要求230至239中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分。
241.如权利要求240所述的方法,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
242.如权利要求241所述的方法,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
243.如权利要求241所述的方法,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
244.如权利要求145至243中任一项所述的方法,所述方法进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:镇痛剂、抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
245.如权利要求199至244中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
246.如权利要求245所述的方法,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
247.如权利要求246所述的方法,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
248.如权利要求246或247所述的方法,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
249.治疗有效量的NGF拮抗剂的用途,所述治疗有效量的NGF拮抗剂用于制备治疗疼痛的药剂,其中所述NGF拮抗剂抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。
250.如权利要求249所述的用途,其中所述NGF拮抗剂是多肽;小分子;NGF、TrkA的片段;反义RNA或siRNA;或抗NGF或抗TrkA的抗体或抗体片段。
251.如权利要求249所述的用途,其中所述NGF拮抗剂是抗人NGF抗体或其片段,所述抗人NGF抗体或其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。
252.如权利要求251所述的用途,其中所述抗体是Ab3、Ab4、Ab15或Ab16。
253.如权利要求152所述的用途,其中所述抗体与选自Ab3、Ab4、Ab15或Ab16的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位。
254.如权利要求253所述的用途,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
255.如权利要求254所述的用途,其中所述片段是Fab片段或MetMab样单价抗体。
256.如权利要求253所述的用途,其中所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链(VH)区中的每一个中包含至少2个与Ab3、Ab4、Ab15或Ab16中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR),其中所述抗人NGF抗体中所含的所述VH多肽序列选自:SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:153,并且所述抗人NGF抗体中所含的所述VL多肽序列选自:SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:151。
257.如权利要求256所述的用途,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab3、Ab4、Ab15或Ab16,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
258.如权利要求256所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:153;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:151。
259.如权利要求249至258中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的。
260.如权利要求249至259中任一项所述的用途,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
261.如权利要求249至260中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
262.如权利要求249至260中任一项所述的用途,其中所述NGF拮抗剂是抗人NGF抗
体或其片段,所述抗人NGF抗体或其片段包含与权利要求258中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大同源性的VL或VH多肽序列。
263.如权利要求249至262中任一项所述的用途,其中所述NGF拮抗剂或抗人NGF抗
体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
264.如权利要求263所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
265.如权利要求263所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分。
266.如权利要求265所述的用途,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
267.如权利要求266所述的用途,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
268.如权利要求266所述的用途,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
269.如权利要求249至268中任一项所述的用途,所述用途进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
270.如权利要求249至269中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
271.如权利要求270所述的用途,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
272.如权利要求270所述的用途,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
273.如权利要求270所述的用途,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab3、Ab4、Ab15或Ab16。
274.治疗有效量的除NGF抗体或片段以外的NGF拮抗剂的用途,所述NGF拮抗剂用于制备通过抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与p75缔合来治疗疼痛的药剂。
275.治疗有效量的抗人NGF抗体或其片段的用途,所述抗人NGF抗体或其片段用于制备通过抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合来治疗疼痛的药剂。
276.如权利要求275所述的用途,其中所述抗体是Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
277.如权利要求276所述的用途,其中所述抗体与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同的线性或构象表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同的线性或构象表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
278.如权利要求277所述的用途,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
279.如权利要求278所述的用途,其中所述片段是Fab片段或MetMab样单价抗体。
280.如权利要求277所述的用途,其中所述抗人NGF抗体在可变轻链区和可变重链
区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):
Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
281.如权利要求277所述的用途,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
282.如权利要求280所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
283.如权利要求249至283中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的。
284.如权利要求249至283中任一项所述的用途,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
285.如权利要求249至284中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
286.如权利要求282所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含VL或VH多肽
序列,所述VL或VH多肽序列与所述用途中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
287.如权利要求286所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
288.如权利要求286所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
289.如权利要求286所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分。
290.如权利要求289所述的用途,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
291.如权利要求289所述的用途,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
292.如权利要求145所述的用途,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
293.如权利要求274所述的用途,所述用途进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:镇痛剂、抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
294.如权利要求249至294中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
295.如权利要求294所述的用途,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
296.如权利要求294所述的用途,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
297.如权利要求294所述的用途,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
298.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途,其中所述NGF拮抗剂以小于或
-7 -7 -8 -8 -9 -9 -10 -10 -11 -11
等 于 5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、-12 -12 -13 -13
5×10 M、10 M、5×10 M或10 M的解离常数(KD)结合至NGF。
299.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途,其中所述NGF拮抗剂以小于或等于-10
5×10 M的解离常数结合至NGF。
300.如权利要求299所述的方法,其中所述NGF拮抗剂是抗NGF抗体或片段。
301.一种治疗个体疼痛的方法,所述方法包括施用治疗有效量的对NGF具有结合特异性的抗人NGF单价剂,在施用所述单价剂之后,所述抗人NGF单价剂大致上不增加患者的炎症反应。
302.如权利要求301所述的方法,其中所述单价剂是Fab、Fab'、Fv、scFv片段、
SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
303.如权利要求301所述的方法,其中所述单价剂是Fab抗体片段,所述Fab抗体片段包含可变轻链,所述可变轻链包含CDR1序列SEQ ID NO:55、CDR2序列SEQ ID NO:56以及CDR3序列SEQ ID NO:57;和/或可变重链,所述可变重链包含CDR1序列SEQ ID NO:58、CDR2序列SEQ ID NO:59以及CDR3序列SEQ ID NO:60。
304.如权利要求301所述的方法,其中所述单价剂是Fab抗体片段或Fab'、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR或类似于MetMab的单价抗体分子,所述单价剂衍生自和/或含有以下抗体中的任一种中所含的CDR中的一个、两个、三个、四个、五个或所有六个:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
305.如权利要求304所述的方法,其中所述Fab抗体片段是通过对以下抗体中的任一种进行木瓜蛋白酶消化而获得的:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
306.如权利要求301所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
307.如权利要求301所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
308.如权利要求307所述的方法,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
309.如权利要求301所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂包含选自以下的VH多肽
序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
310.如权利要求306至309中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂是非糖基化的。
311.如权利要求309所述的方法,其中所述抗人NGF抗体包含VL或VH多肽序列,所述VL或VH多肽序列与权利要求8中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
312.如权利要求301所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
313.如权利要求301所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
314.如权利要求301所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂进一步包含效应部分。
315.如权利要求314所述的方法,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
316.如权利要求315所述的方法,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
317.如权利要求315所述的方法,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
318.如权利要求301所述的方法,所述方法进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:镇痛剂、抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
319.如权利要求301至309中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF单价剂包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
320.如权利要求319所述的方法,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
321.如权利要求319所述的方法,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
322.如权利要求301至321中任一项所述的方法,其中所述疼痛选自炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
323.如权利要求301至321中任一项所述的方法,其中所述疼痛与外科手术前或外科手术后相关,或与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛,或预防或治疗慢性内脏疼痛。
324.如权利要求323所述的方法,其中所述慢性内脏疼痛是因选自以下的生理学病症引起的:痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、内脏痛以及肠易激综合征。
325.如权利要求323所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼和机械诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼和机械诱发性疼痛。
326.如权利要求323所述的方法,其中所述手术后疼痛包括热诱发性疼痛,并且其中改善所述热诱发性疼痛。
327.如权利要求323所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛。
328.如权利要求327所述的方法,其中不显著抑制伤口愈合。
329.如权利要求301至321中任一项所述的方法,其中所述疼痛选自与癌症相关的疼痛、神经痛以及神经源性疼痛。
330.如权利要求301至321中任一项所述的方法,其中所述治疗包括治疗急性疼痛或慢性疼痛。
331.如权利要求301至321中任一项所述的方法,其中所述疼痛是颅面疼痛或头痛。
332.如权利要求331所述的方法,其中所述颅面疼痛或所述头痛由颞下颌关节紊乱症(TMJ)、偏头痛或三叉神经痛引起。
333.如权利要求301所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是急性疼痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
334.如权利要求1所述的方法,其中所述施用经由颅面粘膜施用、鼻内施用、经颊施用、舌下施用或结膜施用来实现。
335.如权利要求301至334中任一项所述的方法,其中所述单价剂经过修饰以延长体内半衰期。
336.如权利要求335所述的方法,其中所述修饰包括添加至少一种水溶性聚合物或改变糖基化作用。
337.如权利要求335所述的方法,其中所述修饰包括将至少一个聚乙二醇添加至所述单价剂。
338.治疗有效量的对NGF具有结合特异性的抗人NGF单价剂的用途,所述抗人NGF单价剂用于制备治疗个体疼痛的药剂,在施用之后,所述药剂大致上不增加所述个体的炎症反应。
339.如权利要求338所述的用途,其中所述单价剂是Fab、Fab'、Fv、scFv片段、
SMIP(小分子免疫药物)、MetMab样单价剂、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR或其一种或多种组合。
340.如权利要求338所述的用途,其中所述单价剂是Fab抗体片段,所述Fab抗体片段包含可变轻链,所述可变轻链包含CDR1序列SEQ ID NO:55、CDR2序列SEQ ID NO:56以及CDR3序列SEQ ID NO:57;和/或可变重链,所述可变重链包含CDR1序列SEQ ID NO:58、CDR2序列SEQ ID NO:59以及CDR3序列SEQ ID NO:60。
341.如权利要求338所述的用途,其中所述单价剂是Fab抗体片段或Fab'、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR或类似于MetMab的单价抗体分子,所述单价剂衍生自和/或含有以下抗体中的任一种中所含的CDR中的一个、两个、三个、四个、五个或所有六个:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
342.如权利要求341所述的用途,其中所述Fab抗体片段是通过对以下抗体中的任一种进行木瓜蛋白酶消化而获得的:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
343.如权利要求338所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同的线性或构象表位:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
344.如权利要求343所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
345.如权利要求344所述的用途,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
346.如权利要求338所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂包含选自以下的VH多肽
序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
347.如权利要求338至346中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂是非糖基化的。
348.如权利要求338所述的用途,其中所述抗人NGF抗体包含VL或VH多肽序列,所述VL或VH多肽序列与权利要求8中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
349.如权利要求338所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
350.如权利要求338所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
351.如权利要求338所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂进一步包含效应部分。
352.如权利要求351所述的用途,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
353.如权利要求352所述的用途,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
354.如权利要求352所述的用途,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
355.如权利要求338所述的用途,所述用途进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
356.如权利要求338至355中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF单价剂包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
357.如权利要求356所述的用途,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
358.如权利要求356所述的用途,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
359.如权利要求338至358中任一项所述的用途,其中所述单价剂经过修饰以延长体内半衰期。
360.如权利要求359所述的用途,其中所述修饰包括添加至少一种水溶性聚合物或改变糖基化作用。
361.如权利要求60所述的用途,其中所述修饰包括将至少一个聚乙二醇添加至所述单价剂。
362.如权利要求356所述的用途,其中所述药物或诊断组合物适合于静脉内或皮下或鼻内或经皮施用。
363.如权利要求301所述的方法,其中对NGF具有结合特异性的所述抗人NGF单价剂阻断或抑制NGF与TrkA和/或p75相互作用。
364.如权利要求301所述的方法,其中对NGF具有结合特异性的所述抗人NGF单价剂不明显阻断或抑制NGF与TrkA和/或p75相互作用。
365.如权利要求338所述的用途,其中对NGF具有结合特异性的所述抗人NGF单价剂阻断或抑制NGF与TrkA和/或p75相互作用。
366.如权利要求338所述的用途,其中对NGF具有结合特异性的所述抗人NGF单价剂不明显阻断或抑制NGF与TrkA和/或p75相互作用。
367.一种治疗个体的疼痛或引起镇痛作用的方法,所述方法包括施用有效量的至少一种抗人NGF抗体或其片段,其中所述抗NGF抗体选自Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或与以上所述抗体中的任一种竞争的抗体或抗体片段和/或与以上所述抗体中的任一种结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段。
368.如权利要求367所述的治疗疼痛或引起镇痛作用的方法,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合。
369.如权利要求368所述的治疗疼痛或引起镇痛作用的方法,其中所述所施用的抗体或抗体片段是抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合,并且进一步结合NGF/TrkA复合体和/或NGF/p75复合体。
370.如权利要求367所述的方法,其中所述抗体片段是二价或单价的抗体片段或药剂。
371.如权利要求370所述的方法,其中所述单价剂选自Fab、Fab'、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
372.如权利要求367至371所述的方法,其中所述抗体、片段或单价剂经过修饰以影响循环时间。
373.如权利要求372所述的方法,其中所述修饰包括添加水溶性聚合物,如聚乙二醇。
374.如权利要求367所述的方法,其中所述疼痛与外科手术前或外科手术后相关,或与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛,或预防或治疗慢性内脏疼痛。
375.如权利要求374所述的方法,其中所述慢性内脏疼痛是因选自以下的生理学病症引起的:痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、内脏痛以及肠易激综合征。
376.如权利要求374所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼和机械诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼和机械诱发性疼痛。
377.如权利要求374所述的方法,其中所述手术后疼痛包括热诱发性疼痛,并且其中改善所述热诱发性疼痛。
378.如权利要求374所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛。
379.如权利要求374所述的方法,其中不显著抑制伤口愈合。
380.如权利要求367所述的方法,其中所述疼痛选自与癌症相关的疼痛、神经痛以及神经源性疼痛。
381.如权利要求367至380中任一项所述的方法,其中所述治疗包括治疗急性疼痛或慢性疼痛。
381.如权利要求367至380中任一项所述的方法,其中所述疼痛是颅面疼痛或头痛。
382.如权利要求381所述的方法,其中所述颅面疼痛或所述头痛由颞下颌关节紊乱症(TMJ)、偏头痛或三叉神经痛引起。
383.如权利要求367至380中任一项所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是急性疼
痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
384.如权利要求367至383中任一项所述的方法,其中所述施用经由以下方式实现:
颅面粘膜施用、鼻内施用、经颊施用、舌下施用、结膜施用、静脉内施用、经皮或真皮施用或皮下施用。
385.如权利要求367至384中任一项所述的方法,所述方法进一步包括施用至少一种NSAID。
386.如权利要求385所述的方法,其中所述NSAID选自由以下组成的组:布洛芬、萘普生、甲氧基甲基萘乙酸、双氯芬酸、酮洛芬、托美丁、舒林酸、甲灭酸、甲氯灭酸、二氟尼柳、氟苯柳、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、塞来昔布、福费昔布、DUP-697、氟舒胺、美洛昔康、
6-甲氧基-2-萘乙酸、MK-966、萘丁美酮、尼美舒利、NS-398、SC-5766、SC-58215以及T-614。
387.如权利要求367至386中任一项所述的方法,所述方法被用于治疗骨癌疼痛。
388.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由原发于骨中的癌症所致或所述骨癌疼痛由从不确定的组织转移至骨的癌症所致。
389.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由骨肉瘤所致。
390.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的癌症所致。
391.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的前列腺癌所致。
392.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的乳癌所致。
393.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肺癌所致。
394.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肉瘤所致。
395.如权利要求387所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肾癌所致。
396.如权利要求367至395中任一项所述的方法,所述方法被用于治疗伴有或不伴有神经根病的背部或颈部疼痛,所述方法包括将有效量的所述抗体或片段提供至包含椎间盘的椎间盘部位,其中所述椎间盘是已发生退变的椎间盘。
397.如权利要求367至395中任一项所述的方法,其中所述抗体经由静脉内、皮下或鼻内施用来施用。
398.如权利要求367至395中任一项所述的方法,所述方法被用来治疗或预防受试者的与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。
399.如权利要求398所述的方法,其中与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛选自包括以下的组:下腹部(骨盆)疼痛;胃下部疼痛;膀胱疼痛;耻骨弓上疼痛;
阴茎、睾丸、阴囊以及会阴疼痛;尿道疼痛;性交疼痛;可能随着膀胱充盈而增加的疼痛、压力或不适;排尿困难以及射精疼痛。
400.如权利要求367至399中任一项所述的方法,其中所述抗体与选自以下的抗人
NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
401.如权利要求367至400中任一项所述的方法,其中所述抗体片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
402.如权利要求401所述的方法,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列具有至少90%同一性:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列具有至少90%同一性:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
403.如权利要求401所述的方法,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列具有至少95%同一性:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列具有至少95%同一性:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
404.如权利要求401所述的方法,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列相同:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列相同:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
405.如权利要求367至404中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
406.如权利要求400或405所述的方法,其中所述片段的所有CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
407.如权利要求400或405所述的方法,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
408.如权利要求400或405所述的方法,所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
409.如权利要求367至408中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的。
410.如权利要求367至409中任一项所述的方法,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
411.如权利要求367至410中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
412.如权利要求367至410中任一项所述的方法,其中所述抗NGF抗体是选自以下的单价剂:Fab、Fab'、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
413.如权利要求367至412中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含VL或VH多肽序列,所述VL或VH多肽序列与所述方法中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
414.如权利要求367所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
415.如权利要求367所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段是Fab,所述Fab包含以下序列:SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73;SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113;SEQ ID NO:121和/或SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和/或SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和/或SEQ ID NO:143;SEQ ID NO:151和/或SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和/或SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和/或SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和/或SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和/或SEQ ID NO:193;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;
SEQ ID NO:405和/或SEQ ID NO:406;以及SEQ ID NO:407和/或SEQ ID NO:408。
416.如权利要求367所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
417.如权利要求367所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分。
418.如权利要求417所述的方法,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
419.如权利要求418所述的方法,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
420.如权利要求417所述的方法,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
421.如权利要求367所述的方法,所述方法进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
422.如权利要求367至421中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
423.如权利要求422所述的方法,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
424.如权利要求422所述的方法,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
425.如权利要求422所述的方法,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或其人源化或嵌合变体或片段。
426.如权利要求367所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段由抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合的抗体或片段组成。
427.如权利要求425所述的方法,其中所述抗体是以下抗体的片段:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
428.如权利要求425、426或427所述的方法,其中所述疼痛是与外科手术前或外科手术后相关的疼痛相关,或与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛,或预防或治疗慢性内脏疼痛。
429.如权利要求428所述的方法,其中所述慢性内脏疼痛是因选自以下的生理学病症引起的:痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、内脏痛以及肠易激综合征。
430.如权利要求428所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼和机械诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼和机械诱发性疼痛。
431.如权利要求428所述的方法,其中所述手术后疼痛包括热诱发性疼痛,并且其中改善所述热诱发性疼痛。
432.如权利要求428所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛。
433.如权利要求428所述的方法,其中不显著抑制伤口愈合。
434.如权利要求428所述的方法,其中所述疼痛选自与癌症相关的疼痛、神经痛以及神经源性疼痛。
435.如权利要求428所述的方法,其中所述治疗包括治疗急性疼痛或慢性疼痛。
436.如权利要求434或435所述的方法,其中所述疼痛是颅面疼痛或头痛。
437.如权利要求436所述的方法,其中所述颅面疼痛或所述头痛由颞下颌关节紊乱症(TMJ)、偏头痛或三叉神经痛引起。
438.如权利要求367至437中任一项所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是急性疼
痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
439.如权利要求438所述的方法,其中所述施用经由以下方式实现:颅面粘膜施用、鼻内施用、经颊施用、舌下施用、结膜施用、静脉内施用、皮下施用或经皮施用。
440.如权利要求438所述的方法,所述方法进一步包括施用至少一种NSAID。
441.如权利要求440所述的方法,其中所述NSAID选自由以下组成的组:布洛芬、萘普生、甲氧基甲基萘乙酸、双氯芬酸、酮洛芬、托美丁、舒林酸、甲灭酸、甲氯灭酸、二氟尼柳、氟苯柳、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、塞来昔布、福费昔布、DUP-697、氟舒胺、美洛昔康、
6-甲氧基-2-萘乙酸、MK-966、萘丁美酮、尼美舒利、NS-398、SC-5766、SC-58215以及T-614。
442.如权利要求435所述的方法,所述方法被用于治疗骨癌疼痛。
443.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由原发于骨中的癌症所致。
444.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由骨肉瘤所致。
445.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的癌症所致。
446.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的前列腺癌所致。
447.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的乳癌所致。
448.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肺癌所致。
449.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肉瘤所致。
450.如权利要求442所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肾癌所致。
451.如权利要求425至428中任一项所述的方法,所述方法被用于治疗伴有或不伴有神经根病的背部或颈部疼痛,所述方法包括将有效量的所述抗体或片段提供至包含椎间盘的椎间盘部位,其中所述椎间盘是已发生退变的椎间盘。
452.如权利要求425至428中任一项所述的方法,其中经由鼻内施用来施用所述抗体。
453.如权利要求425至428中任一项所述的方法,所述方法被用来治疗或预防受试者的与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。
454.如权利要求453所述的方法,其中与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛选自包括以下的组:下腹部(骨盆)疼痛;胃下部疼痛;膀胱疼痛;耻骨弓上疼痛;
阴茎、睾丸、阴囊以及会阴疼痛;尿道疼痛;性交疼痛;可能随着膀胱充盈而增加的疼痛、压力或不适;排尿困难以及射精疼痛。
455.如权利要求367至454中任一项所述的方法,其中所述抗体与选自以下的抗人
NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
456.如权利要求455所述的方法,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
457.如权利要求456所述的方法,其中所述片段是Fab片段。
458.如权利要求457所述的方法,其中所述Fab是包含以下序列的Fab:SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63;SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73;SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113;SEQ ID NO:121和/或SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和/或SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和/或SEQ ID NO:143;SEQ ID NO:151和/或SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和/或SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和/或SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和/或SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和/或SEQ ID NO:193;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:405和/或SEQ ID NO:406;以及SEQ ID NO:407和/或SEQ ID NO:408,或含有以上所述的可变多肽中的任一个的CDR的Fab。
459.如权利要求367至458中任一项所述的方法,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
460.如权利要求367至458中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
461.治疗有效量的至少一种抗人NGF抗体或其片段用于制备治疗疼痛的药剂的用途或诊断有效量的至少一种抗人NGF抗体或其片段用于制备在体外或体内检测NGF的诊断组合物的用途,其中所述至少一种抗体包含至少一种抗人NGF抗体或其片段,所述抗人NGF抗体或其片段选自Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或与以上所述抗体中的任一种竞争和/或与以上所述抗体中的任一种结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段。
462.如权利要求461所述的用途,其中所述抗体是Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或其嵌合或人源化变体或片段。
463.如权利要求461所述的用途,其中所述抗体与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
464.如权利要求461所述的用途,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
465.如权利要求464所述的用途,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含以下序列:SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63;SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73;SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113;
SEQ ID NO:121和/或SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和/或SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和/或SEQ ID NO:143;SEQ ID NO:151和/或SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和/或SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和/或SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和/或SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和/或SEQ ID NO:193;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:405和/或SEQ ID NO:406;以及SEQ ID NO:407和/或SEQ ID NO:408。
466.如权利要求461所述的用途,其中所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
467.如权利要求461所述的用途,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
468.如权利要求461所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
469.如权利要求461468中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的,和/或所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
4701.如权利要求461至468中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
471.如权利要求468所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含VL或VH多肽
序列,所述VL或VH多肽序列与所述用途中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
472.如权利要求468所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
473.如权利要求475所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
474.如权利要求467所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分。
475.如权利要求474所述的用途,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
476.如权利要求475所述的用途,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
477.如权利要求475所述的用途,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
478.如权利要求461至477中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含在药物组合物中,所述药物组合物包含药学上可接受的载体。
479.如权利要求461至478所述的用途,其中所述抗体或片段处于药物组合物中,所述药物组合物进一步包含至少一种稳定剂。
480.如权利要求479所述的用途,其中所述药物组合物是冻干的。
481.如权利要求478所述的用途,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
473.如权利要求452所述的用途,其中所述组合物适合于静脉内或皮下施用。
482.一种治疗个体的疼痛或引起镇痛作用的方法,所述方法包括施用有效量的至少一种抗人NGF抗体或其片段,其中所述抗NGF抗体选自Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或与以上所述抗体中的任一种竞争的抗体或抗体片段和/或与以上所述抗体中的任一种结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段。
483.如权利要求482所述的治疗疼痛或引起镇痛作用的方法,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合。
484.如权利要求482所述的治疗疼痛或引起镇痛作用的方法,其中所述所施用的抗体或抗体片段是抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合,并且进一步结合NGF/TrkA复合体和/或NGF/p75复合体。
485.如权利要求482所述的方法,其中所述抗体片段是二价或单价的抗体片段。
486.如权利要求485所述的方法,其中所述单价剂选自Fab、Fab'、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
487.如权利要求484至486所述的方法,其中所述抗体、片段或单价剂经过修饰以影响循环时间。
488.如权利要求487所述的方法,其中所述修饰包括添加水溶性聚合物,如聚乙二醇。
489.如权利要求484所述的方法,其中所述疼痛与外科手术前或外科手术后相关,或与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛,预防或治疗慢性内脏疼痛。
490.如权利要求489所述的方法,其中所述慢性内脏疼痛是因选自以下的生理学病症引起的:痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、内脏痛以及肠易激综合征。
491.如权利要求489所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼和机械诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼和机械诱发性疼痛。
492.如权利要求489所述的方法,其中所述手术后疼痛包括热诱发性疼痛,并且其中改善所述热诱发性疼痛。
493.如权利要求489所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛。
494.如权利要求489所述的方法,其中不显著抑制伤口愈合。
495.如权利要求492所述的方法,其中所述疼痛选自与癌症相关的疼痛、神经痛以及神经源性疼痛。
496.如权利要求492所述的方法,其中所述治疗包括治疗急性疼痛或慢性疼痛。
497.如权利要求492所述的方法,其中所述疼痛是颅面疼痛或头痛。
498.如权利要求497所述的方法,其中所述颅面疼痛或所述头痛由颞下颌关节紊乱症(TMJ)、偏头痛或三叉神经痛引起。
499.如权利要求492所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是急性疼痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
500.如权利要求492所述的方法,其中所述施用经由颅面粘膜施用来实现,所述颅面粘膜施用包括鼻内施用、经颊施用、舌下施用或结膜施用。
501.如权利要求492所述的方法,所述方法进一步包括施用至少一种NSAID。
502.如权利要求501所述的方法,其中所述NSAID选自由以下组成的组:布洛芬、萘普生、甲氧基甲基萘乙酸、双氯芬酸、酮洛芬、托美丁、舒林酸、甲灭酸、甲氯灭酸、二氟尼柳、氟苯柳、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、塞来昔布、福费昔布、DUP-697、氟舒胺、美洛昔康、
6-甲氧基-2-萘乙酸、MK-966、萘丁美酮、尼美舒利、NS-398、SC-5766、SC-58215以及T-614。
503.如权利要求482所述的方法,所述方法被用于治疗骨癌疼痛。
504.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由原发于骨中的癌症所致或所述骨癌疼痛由从不确定的组织转移至骨的癌症所致。
505.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由骨肉瘤所致。
506.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的癌症所致。
507.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的前列腺癌所致。
508.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的乳癌所致。
509.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肺癌所致。
510.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肉瘤所致。
511.如权利要求503所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肾癌所致。
512.如权利要求482所述的方法,所述方法被用于治疗伴有或不伴有神经根病的背部或颈部疼痛,所述方法包括将有效量的所述抗体或片段提供至包含椎间盘的椎间盘部位,其中所述椎间盘是已发生退变的椎间盘。
513.如权利要求482所述的方法,其中经由静脉内、皮下或鼻内施用来施用所述抗体。
514.如权利要求482所述的方法,所述方法被用来治疗或预防受试者的与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。
515.如权利要求514所述的方法,其中与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛选自包括以下的组:下腹部(骨盆)疼痛;胃下部疼痛;膀胱疼痛;耻骨弓上疼痛;
阴茎、睾丸、阴囊以及会阴疼痛;尿道疼痛;性交疼痛;可能随着膀胱充盈而增加的疼痛、压力或不适;排尿困难以及射精疼痛。
516.如权利要求482所述的方法,其中所述抗体与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
517.如权利要求482所述的方法,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
518.如权利要求517所述的方法,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列具有至少90%同一性:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列具有至少90%同一性:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
519.如权利要求517所述的方法,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列具有至少95%同一性:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列具有至少95%同一性:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
520.如权利要求517所述的方法,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含VH多肽,所述VH多肽与选自以下序列的序列相同:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或VL多肽序列,所述VL多肽序列与选自以下的序列相同:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
521.如权利要求482所述的方法,其中所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
522.如权利要求521所述的方法,其中所述片段的所有CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
523.如权利要求521所述的方法,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
524.如权利要求521所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
525.如权利要求482至524中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的。
526.如权利要求482至525中任一项所述的方法,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
527.如权利要求4824至525中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
528.如权利要求527所述的方法,其中所述抗NGF抗体是选自以下的单价剂:Fab、Fab'、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
529.如权利要求524所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含VL或VH多肽
序列,所述VL或VH多肽序列与所述方法中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
530.如权利要求482所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
531.如权利要求482所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段是包含以下序
列的Fab:SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73;SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113;SEQ ID NO:121和/或SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和/或SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和/或SEQ ID NO:143;SEQ ID NO:151和/或SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和/或SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和/或SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和/或SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和/或SEQ ID NO:193;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;
SEQ ID NO:405和/或SEQ ID NO:406;以及SEQ ID NO:407和/或SEQ ID NO:408。
532.如权利要求482所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
533.如权利要求482所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分。
534.如权利要求533所述的方法,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
535.如权利要求534所述的方法,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
536.如权利要求534所述的方法,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
537.如权利要求482所述的方法,所述方法进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:抗组胺剂、抗炎剂或抗生素。
538.如权利要求482至537中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含在药物或诊断组合物中,所述药物或诊断组合物包含药学上可接受的载体。
539.如权利要求538所述的方法,其中所述药物或诊断组合物进一步包含至少一种稳定剂。
540.如权利要求539所述的方法,其中所述药物或诊断组合物是冻干的。
541.如权利要求539所述的方法,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或其人源化或嵌合变体或片段。
542.如权利要求482所述的方法,其中所述抗人NGF抗体或其片段由抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合的抗体或片段组成。
543.如权利要求542所述的方法,其中所述抗体是以下抗体的片段:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
544.如权利要求542所述的方法,其中所述疼痛与外科手术前或外科手术后相关,或与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛,预防或治疗慢性内脏疼痛。
545.如权利要求544所述的方法,其中所述慢性内脏疼痛是因选自以下的生理学病症引起的:痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、内脏痛以及肠易激综合征。
546.如权利要求544所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼和机械诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼和机械诱发性疼痛。
547.如权利要求544所述的方法,其中所述手术后疼痛包括热诱发性疼痛,并且其中改善所述热诱发性疼痛。
548.如权利要求542所述的方法,其中所述手术后疼痛包括静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛,并且其中改善所述静息疼、机械诱发性疼痛以及热诱发性疼痛。
549.如权利要求544所述的方法,其中不显著抑制伤口愈合。
550.如权利要求482所述的方法,其中所述疼痛选自与癌症相关的疼痛、神经痛以及神经源性疼痛。
551.如权利要求544所述的方法,其中所述治疗包括治疗急性疼痛或慢性疼痛。
552.如权利要求544所述的方法,其中所述疼痛是颅面疼痛或头痛。
553.如权利要求552所述的方法,其中所述颅面疼痛或所述头痛由颞下颌关节紊乱症(TMJ)、偏头痛或三叉神经痛引起。
554.如权利要求482所述的方法,其中所述所治疗的疼痛是急性疼痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
555.如权利要求482所述的方法,其中所述施用经由以下方式来实现:颅面粘膜施用、鼻内施用、经颊施用、舌下施用、皮下、静脉内或结膜施用。
556.如前述权利要求中任一项所述的方法,所述方法进一步包括施用至少一种
NSAID。
557.如权利要求556所述的方法,其中所述NSAID选自由以下组成的组:布洛芬、萘普生、甲氧基甲基萘乙酸、双氯芬酸、酮洛芬、托美丁、舒林酸、甲灭酸、甲氯灭酸、二氟尼柳、氟苯柳、吡罗昔康、舒多昔康、伊索昔康、塞来昔布、福费昔布、DUP-697、氟舒胺、美洛昔康、
6-甲氧基-2-萘乙酸、MK-966、萘丁美酮、尼美舒利、NS-398、SC-5766、SC-58215以及T-614。
558.如前述权利要求中任一项所述的方法,所述方法被用于治疗骨癌疼痛。
559.如权利要求558所述的方法,其中所述骨癌疼痛由原发于骨中的癌症所致。
560.如权利要求559所述的方法,其中所述骨癌疼痛由骨肉瘤所致。
561.如权利要求558所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的癌症所致。
562.如权利要求558所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的前列腺癌所致。
563.如权利要求558所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的乳癌所致。
564.如权利要求558所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肺癌所致。
565.如权利要求558所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肉瘤所致。
566.如权利要求558所述的方法,其中所述骨癌疼痛由转移至骨的肾癌所致。
567.如前述权利要求中任一项所述的方法,所述方法被用于治疗伴有或不伴有神经根病的背部或颈部疼痛,所述方法包括将有效量的所述抗体或片段提供至包含椎间盘的椎间盘部位,其中所述椎间盘是已发生退变的椎间盘。
568.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中经由鼻内施用来施用所述抗体。
569.如前述权利要求中任一项所述的方法,所述方法被用来治疗或预防受试者的与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。
570.如权利要求569所述的方法,其中与慢性前列腺炎和/或慢性骨盆疼痛综合征相关的疼痛选自包括以下的组:下腹部(骨盆)疼痛;胃下部疼痛;膀胱疼痛;耻骨弓上疼痛;
阴茎、睾丸、阴囊以及会阴疼痛;尿道疼痛;性交疼痛;可能随着膀胱充盈而增加的疼痛、压力或不适;排尿困难以及射精疼痛。
571.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗体与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
572.如权利要求571所述的方法,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
573.如权利要求572所述的方法,其中所述片段是Fab片段。
574.如权利要求573所述的方法,其中所述Fab是包含以下序列的Fab:SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63;SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73;SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113;SEQ ID NO:121和/或SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和/或SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和/或SEQ ID NO:143;SEQ ID NO:151和/或SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和/或SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和/或SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和/或SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和/或SEQ ID NO:193;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:405和/或SEQ ID NO:406;以及SEQ ID NO:407和/或SEQ ID NO:408。
575.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
576.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
577.治疗有效量的至少一种抗人NGF抗体或其片段的用途,所述治疗有效量的至少一种抗人NGF抗体或其片段用于制备治疗疼痛的药剂,其中所述至少一种抗体包含至少一种抗人NGF抗体或其片段,所述抗人NGF抗体或其片段选自Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或与以上所述抗体中的任一种竞争和/或与以上所述抗体中的任一种结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段。
578.如权利要求577所述的用途,其中所述抗体是Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21或其嵌合或人源化变体或片段。
579.如权利要求577所述的用途,其中所述抗体与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位和/或竞争结合完整NGF多肽或其片段上相同或重叠的表位:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
580.如权利要求577所述的用途,其中所述片段选自Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
581.如权利要求5802所述的用途,其中所述片段是Fab片段,所述Fab片段包含以
下序列:SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63;
SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73;SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113;SEQ ID NO:121和/或SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和/或SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和/或SEQ ID NO:143;SEQ ID NO:151和/或SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和/或SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和/或SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和/或SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和/或SEQ ID NO:193;SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53;
SEQ ID NO:405和/或SEQ ID NO:406;以及SEQ ID NO:407和/或SEQ ID NO:408。
582.如权利要求577所述的用途,其中所述抗人NGF抗体在所述可变轻链区和所述可变重链区中的每一个中包含至少2个与以下抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
583.如权利要求582所述的用途,其中所有的所述CDR均与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21,或如果不相同,那么所述CDR中的一个或多个与所述抗体中的对应CDR有至多一个或两个氨基酸残基不同。
584.如权利要求582所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的CDR中的一个或多个:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401。
585.如权利要求582至584中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段是非糖基化的,和/或所述抗体含有Fc区,所述Fc区已经过修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用。
586.如权利要求582至595中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体。
587.如权利要求586所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含VL或VH多肽
序列,所述VL或VH多肽序列与所述用途中所述的多肽序列中的任一个具有至少90%或更大的同源性。
588.如权利要求586所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子。
589.如权利要求588所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段与可检测的标记或治疗剂直接或间接地连接。
590.如权利要求577所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段进一步包含效应部分。
591.如权利要求590所述的用途,其中所述效应部分是可检测的部分或功能性部分。
592.如权利要求591所述的用途,其中所述可检测的部分是荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质或化学发光物质。
593.如权利要求591所述的用途,其中所述功能性部分是链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性物质。
594.如权利要求577至593中任一项所述的用途,其中所述抗人NGF抗体或其片段包含在药物组合物中,所述药物组合物包含药学上可接受的载体。
595.如权利要求594所述的用途,其中所述药物组合物进一步包含至少一种稳定剂。
596.如权利要求594所述的用途,其中所述药物组合物是冻干的。
597.如权利要求577所述的用途,其中所述药物或诊断组合物包含选自以下的一种或多种抗人NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
598.如权利要求597所述的用途,其中所述组合物适合于静脉内或皮下施用。
599.如权利要求482至598中任一项所述的方法或用途,其中皮下或静脉内施用所述NGF抗体或片段。

说明书全文

抗NGF组合物及其用途

[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求2010年12月1日提交的美国临时专利申请号61/418,832的优先权益,所述临时专利申请的内容以引用的方式整体并入本文。另外,本申请涉及代理人案号67858-740003(序列号待分配),名称为“METHODS OF PREVENTING OR TREATING PAIN USING ANTI-NGF ANTIBODIES THAT SELECTIVELY INHIBIT THE ASSOCIATION OF NGF WITH TRKA,WITHOUT AFFECTING THE ASSOCIATION OF NGF WITH P75”;案号67858-740004(序列号待分配),名称为“METHODS OF PREVENTING INFLAMMATION AND TREATING PAIN USING ANTI-NGF COMPOSITIONS”;案号67858-740005(序列号待分配),名称为“METHODS OF PREVENTING OR TREATING PAIN USING ANTI-NGF ANTIBODIES”;以及案号67858-740006(序列号待分配),名称为“NGF ANTIBODIES AND USE THEREOF”,所述所有案件均被转让给Alder Biopharmaceuticals公司,并且所有案件均于2011年12月1日提交,所述所有案件的内容均以引用的方式整体并入本文。
[0003] 发明背景发明领域
[0004] 本发明涉及对人神经生长因子(在下文中为“NGF”)具有结合特异性的抗体和其片段(包括Fab片段)。本发明还涉及筛选与NGF相关的疾病和病症的方法,以及通过施用所述抗体或其片段来预防治疗与NGF相关的疾病和病症的方法。
[0005] 本发明还涉及对人神经生长因子(在下文中为“NGF”)具有结合特异性的单价剂(包括Fab片段和以下所鉴定的其它单价NGF结合剂),以及在治疗个体疼痛的方法中使用所述单价剂中的一种或多种的方法,其中在施用一种或多种单价剂之后,个体的炎症反应大致上没有增加。任选地可以如通过添加聚乙二醇(PEG)或其它溶性聚合物等)对这些单价剂进行修饰以延长它们的循环半衰期
[0006] 本发明涉及抗疼痛药剂,所述药剂包含至少一种NGF拮抗剂化合物,所述化合物选择性地抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合,优选的是,这些NGF拮抗剂化合物将包含对人神经生长因子(在下文中为“NGF”)具有结合特异性的抗体或其片段(包括Fab片段和以下所鉴定的其它单价剂);以及使用所述NGF拮抗剂化合物(例如抗体和其片段)中的一种或多种治疗个体疼痛的方法。当对抗体和片段进行示例时,预期可以使用适当的结合和/或功能测定来选择具有类似拮抗剂特性的其它NGF拮抗剂,例如选择性抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合的NGF或TrkA多肽片段、小分子、反义RNA以及沉默RNA等。当单独或与另一种活性剂(例如,NSAID或阿片类镇痛剂)联合施用时,这些化合物(例如抗体和抗体片段)可以作为单一疗法用来治疗或预防有需要的受试者的不同类型的疼痛。更确切地说,本发明涉及抗人NGF抗体或其片段,所述抗人NGF抗体或其片段包括抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合的单价剂。可以如经由连接PEG或其它聚合物或通过连接其它部分(如可检测的试剂或功能性试剂)对这些抗体和片段(例如,单价剂)进行修饰以影响循环半衰期。这些单价剂包括例如Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体(camelbody)、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
[0007] 另外并且与之相关,本发明涉及治疗个体的疼痛或引起镇痛作用的新型方法,所述方法包括施用有效量的选择性抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合的任何NGF拮抗剂化合物。优选的是,这些拮抗剂化合物将包含抗人NGF抗体或其片段,所述抗人NGF抗体或其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。本发明进一步任选地包括治疗疼痛的方法,所述方法进一步包括施用第二抗NGF抗体或片段,所述第二抗NGF抗体或片段抑制NGF与p75缔合并且另外可能抑制NGF与TrkA缔合。
[0008] 相关技术的描述
[0009] 神经生长因子(NGF)(又称为β神经生长因子(β-NGF))在具有18个基酸的信号肽裂解之后以长度为222个氨基酸的成熟蛋白质形式产生。编码NGF的基因位于染色体1p13.1上。NGF的生物活性形式是一种发生同二聚并且被并入到更大的复合体中的分泌性蛋白。NGF是神经营养素(NT)中的一员,所述神经营养素是一组进一步包括脑源性神经营养因子(BDNF)、NT-3、以及NT-4/5的结构相关蛋白。(Wyman等,Gene Therapy(1999),6:1648-1660)。NT维持了特定类型的神经元和神经递质系统的存活,由支配神经元所靶向的细胞产生。同上。基底前脑、黑质、脑干、皮质、以及脊髓是已证实对NGF具有反应性的神经系统区域。同上。
[0010] 所有NT均与被鉴定为p75的低亲和受体结合。(Sarchielli等,Expert Rev.Neurotherapeutics(2004),4(1):115-127)。NGF选择性地与高亲和力神经营养素受体TrkA结合并且对高亲和力神经营养素受体TrkA展现出高亲和力。同上。最近据证实,NGF经由它的低亲和力受体p75在体内成肌分化和肌肉修复所必需的发育调节信号转导通路中起作用。(Deponti等,Mol.Biol.Cell(2009),20:3620-3627)。
[0011] 还已经证实了NGF与成年动物体内的疼痛信号转导系统相互作用,并且在对许多物种进行局部或全身施用时会造成痛觉过敏。(Sarchielli等,Expert Rev.Neurotherapeutics(2004),4(1):115-127)。已经显示,在将NGF输注到大鼠CSF中时,NGF会诱发疼痛样反应,并且已经证实,NGF维持慢性疼痛。此外,已经证实,NGF会导致在8-12小时后出现机械性痛觉异常(mechanical allodynia)的产生并且会导致继发性疼痛反应。同上。
[0012] 常常可以通过施用某些麻醉剂或非类固醇抗炎药(NSAID)来解决疼痛。然而,施用这些治疗可能会以某些负面后果为代价。NSAID有可能会引起肾衰竭、肠道出血、以及肝功能异常。麻醉剂有可能会引起恶心、呕吐、心理功能受损、以及成瘾。因此,希望鉴定出用于疼痛的替代治疗以便避免这些负面后果中的某些。
[0013] NGF被认为在众多疾病和病症中起作用,所述疾病和病症包括但不限于与广泛疾病和病症相关的疼痛,如与癌症相关的疼痛、神经痛、以及神经源性疼痛。由于认识到NGF牵涉到广泛的疼痛相关疾病和病症中,所以在本领域中仍需要可用于预防或治疗与NGF相关的疾病和病症,并且尤其可用于预防或治疗与疼痛相关的那些疾病和病症的组合物和方法。特别优选的抗NGF组合物是在对患者施用时具有最小的有害反应(如炎症)或使有害反应降至最低的那些组合物。减少或抑制与NGF相关的疾病或病症(如疼痛)的组合物或方法对有需要的患者是有益的。
[0014] 发明简述
[0015] 本发明涉及对NGF具有结合特异性的特异性抗体和其片段,特别是具有所需的表位特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的抗体。本发明的另一个实施方案涉及本文所述的抗体,所述抗体包含本文所述的VH、VL和CDR多肽序列;以及编码所述抗体的多核苷酸。
[0016] 本发明的一个优选实施方案涉及嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段),所述抗体和其片段能够与NGF结合和/或抑制由NGF与p75受体和TrkA受体结合而介导的生物活性。本发明的另一个优选实施方案涉及嵌合或人源化抗体和其片段,所述抗体和其片段能够与NGF结合并且选择性地抑制由NGF与TrkA受体结合而介导的生物活性,而不明显抑制由NGF与p75受体结合而介导的生物活性。
[0017] 在本发明的另一个优选实施方案中,如由步态分析(如在本文实施例中所述)所测量,全长抗体和其Fab片段能够显著减少鼠科动物模型的体内疼痛。本发明的一个特别优选的实施方案涉及Fab抗体片段在减轻或治疗疼痛的方法中的用途。在本发明的另一个优选实施方案中,如步态分析之后在鼠科动物模型体内所证实,对NGF具有结合特异性的单价剂(如本文所述的全长抗体的Fab片段)可用于减轻或治疗个体的疼痛,而与在相同浓度下给药的全长抗体相比大致上不增加炎症。
[0018] 在本发明的另一个实施方案中,能够与NGF结合的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)抑制TF1细胞增殖。在本发明的另一个实施方案中,能够与NGF结合的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)抑制PC-12神经突生长。
[0019] 在本发明的另一个实施方案中,这些抗体和人源化型式可以源自于兔免疫细胞(B淋巴细胞),并且可以基于它们与人生殖系序列的同源性(序列同一性)来加以选择。这些抗体可能需要最小限度的序列修饰或不需要序列修饰,从而有助于在人源化后保留功能特性。本发明的另一个实施方案涉及来自抗NGF抗体的片段,所述抗NGF抗体包含例如源自于兔免疫细胞的VH、VL和CDR多肽;以及编码所述片段的多核苷酸;以及这些抗体片段和编码它们的多核苷酸在产生能够与NGF和/或NGF/p75和NGF/TrkA复合体结合的新型抗体和多肽组合物中的用途。
[0020] 本发明还涵盖了抗NGF抗体和其结合片段与一个或多个功能性或可检测的部分缀合所形成的缀合物。本发明还涵盖了制备所述嵌合或人源化抗NGF、抗NGF/p75复合体或抗NGF/TrkA复合体的抗体和其结合片段的方法。在一个实施方案中,结合片段包括但不限于Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、以及IgNAR。
[0021] 本发明的实施方案涉及抗NGF抗体和其结合片段用于诊断、评估以及治疗与NGF或其异常表达相关的疾病和病症的用途。本发明还涵盖了抗NGF抗体的片段用于诊断、评估以及治疗与NGF或其异常表达相关的疾病和病症的用途。本发明的其它实施方案涉及在重组宿主细胞中产生抗NGF抗体或其片段,所述宿主细胞例如哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;植物酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母(Pichia))以及其它酵母菌株。
[0022] 本发明还涉及治疗个体的疼痛而大致上不增加炎症反应的方法。本发明的另一个实施方案涵盖了衍生自特异性抗体和其片段并且对NGF具有结合特异性的抗人NGF单价剂,特别是具有所需的表位特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的单价剂。本发明的另一个实施方案涉及抗人NGF单价剂,所述抗人NGF单价剂衍生自本文所述的抗体并且对NGF具有结合特异性,包含本文所述的VH、VL和CDR多肽序列;以及编码所述单价剂的多核苷酸。此类单价剂包括例如结合NGF的Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
[0023] 在一些实施方案中,这些单价剂将阻断或抑制NGF与TrkA和/或p75相互作用。在其它实施方案中,可以如通过聚乙二醇化或通过连接于其它水溶性聚合物上来对这些单价剂进行化学修饰以改变循环半衰期。
[0024] 在本发明的一个优选实施方案中,如由步态分析(如在本文实施例中所述)所测量,抗人NGF单价剂(如本文所述的抗体的Fab片段)能够显著减少鼠科动物模型的体内疼痛。本发明的一个特别优选的实施方案涉及抗人NGF的单价Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合在减轻或治疗疼痛的方法中的用途。在本发明的另一个优选实施方案中,如步态分析之后在鼠科动物模型体内所证实,对NGF具有结合特异性的单价剂(如本文所述的全长抗体的Fab片段或者Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合,以上各物对NGF具有结合特异性)可用于减轻或治疗个体的疼痛,而与在相同浓度下给药的全长抗体相比大致上不增加炎症。
[0025] 在本发明的另一个实施方案中,这些单价剂可以衍生自亲本抗体和人源化型式,所述亲本抗体和人源化型式本身源自于兔免疫细胞(B淋巴细胞)并且任选地基于它们与人生殖系序列的同源性(序列同一性)来加以选择。这些亲本抗体可能需要最小限度的序列修饰或不需要序列修饰,从而有助于在人源化之后,在将它们用作单价剂的来源之前保留功能特性。本发明的另一个实施方案涉及衍生自抗人NGF抗体的抗人NGF单价剂,所述抗人NGF抗体包含例如源自于兔免疫细胞的VH、VL和CDR多肽;以及编码它们的多核苷酸;以及这些抗体和其片段以及编码它们的多核苷酸在产生新型单价剂和包含所述单价剂的组合物中的用途,所述新型单价剂和包含所述单价剂的组合物能够与NGF结合并且减少个体的疼痛,而大致上不增加所述个体的炎症反应。如所指出,在一些实施方案中,这些单价剂将阻断或抑制NGF与TrkA和/或p75相互作用。这些单价剂包括例如对NGF具有结合特异性的Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合,优选地是含有本文所示例的抗体的CDR和/或具有相同的表位特异性的单价剂。
[0026] 本发明还涵盖了单价剂与一个或多个功能性或可检测的部分缀合所形成的缀合物,所述部分例如影响半衰期的部分或影响单价剂的其它治疗特性的试剂。本发明还涵盖了制备所述嵌合或人源化抗NGF单价剂的方法。在一个实施方案中,单价剂包括但不限于Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、MetMab样抗体分子、骆驼抗体、纳米抗体、以及IgNAR。本发明的实施方案涉及抗NGF单价剂用于诊断、评估以及治疗与NGF或其异常表达相关的疾病和病症的用途。如所指出,在一些实施方案中,这些单价剂将阻断或抑制NGF与TrkA和/或p75相互作用。
[0027] 本发明还涵盖了单价剂用于诊断、评估以及治疗与NGF或其异常表达相关的疾病和病症的用途。
[0028] 本发明还涉及治疗疼痛的方法和用于其中的组合物,所述组合物包括对NGF具有结合特异性的抗体和其片段,特别是在治疗疼痛时具有所需的表位特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的抗体。更确切地说,本发明涉及抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合的NGF拮抗剂,例如小分子、多肽、核酸,并且优选地是抗人NGF抗体或其片段,包括单价抗体片段和二价抗体片段。可以如经由连接PEG或其它聚合物或通过连接其它部分(如可检测的试剂或功能性试剂)对这些抗体和片段(例如,单价剂)进行修饰以影响循环半衰期。这些单价剂包括例如Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
[0029] 本发明还涉及治疗疼痛的方法和用于其中的组合物,所述组合物包括对NGF具有结合特异性的抗体和其片段,特别是在治疗疼痛时具有所需的表位特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的抗体。更确切地说,本发明涉及抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合的NGF拮抗剂,例如小分子、多肽、核酸,并且优选地是抗人NGF抗体或其片段,包括单价抗体片段和二价抗体片段。另外,本发明涉及治疗疼痛的方法和用于其中的组合物,所述组合物包含抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合的抗人NGF抗体或其片段,包括单价抗体片段和二价抗体片段。可以如经由连接PEG或其它聚合物或通过连接其它部分(如可检测的试剂或功能性试剂)对这些抗体和片段(例如,单价剂)进行修饰以影响循环半衰期。这些单价剂包括例如Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
[0030] 本发明具体来说包括了结合NGF的单价抗体分子,所述单价抗体分子类似于MetMab分子。MetMab是对Met具有特异性的单价抗体。(Met是由Park等,Proc.Natl.Acad.Sci.84,7479--(1987)中所阐述的核苷酸序列编码的蛋白质或其片段、以及相关多肽,包括但不限于等位基因变体、剪接变体、衍生性变体、取代型变体、缺失型变体和/或插入型变体、融合多肽、以及种间同源物)。MetMab抗体是被称为包括OA-5d5(基因泰克公司(Genentech))在内的不同名称的单价抗体,并且还被称为单臂5d5、5d5、MetMab、PRO143966以及其它名称。抗体OA-5d5(包括它的结构和特性)以及其制备和使用的方法描述在美国公布号2007/0092520中。在一个实施方案中,根据本发明的抗NGF抗体可以包含与Fc区连接的单个Fab区。在这个实施方案中,本发明的抗体可以包含本文所述的轻链可变域和重链可变域。在这样一个实施方案中,抗体是单价的并且可以包含完整的Fc区。在另一个这样的实施方案中,例如在WO2005/063816中所述,Fc区可以包含至少一个突出结构(杵状结构)和至少一个空腔结构(臼状结构),其中突出结构和空腔结构的存在增强了包含突出结构的Fc多肽与包含空腔结构的Fc多肽之间的复合体的形成。在一个实施方案中,本发明的抗体的Fc区可以包含第一Fc多肽和第二Fc多肽,其中相对于野生型人Fc,第一多肽和第二多肽各自包含一个或多个突变。在一个实施方案中,空腔结构突变是T366S、L368A和/或Y407V。在另一个实施方案中,突出结构突变是T366W。在一个具体的实施方案中,根据本发明的单价抗体可以包含依照WO2005/063816中所述而合成的单臂抗体。在这个实施方案中,单臂抗体可以包含Fc突变,所述Fc突变构成了WO2005/063816中所述的“杵状结构”和“臼状结构”。举例来说,臼状结构突变可以是Fc多肽中T366A、L368A和/或Y407V中的一个或多个,并且空腔结构突变可以是T366W。
[0031] 本发明还涉及抗人NGF单价剂,所述抗人NGF单价剂与本文所公开的抗体或抗体片段结合于相同的NGF表位和/或与抗NGF抗体竞争结合于NGF,所述抗体包括但不限于选自以下的抗NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
[0032] 另外并且与之相关,本发明涉及治疗个体的疼痛或引起镇痛作用的新型方法,所述方法包括施用有效量的抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合的NGF拮抗剂,例如抗人NGF抗体或其片段。本发明提供了多种新型抗人NGF抗体和其片段,所述抗人NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。这些抗体和片段可以被用作单一疗法或可以联合其它活性剂一起使用,所述其它活性剂包括其它镇痛剂以及其它抗NGF抗体和抗体片段(包括抑制NGF与p75相互作用的抗体和抗体片段)。
[0033] 另外,本发明提供了用于产生、鉴定以及分离其它抗人NGF抗体或其片段的方法,所述其它抗人NGF抗体或其片段包括二价和单价片段,如Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、以及IgNAR,所述其它抗人NGF抗体或其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。本发明的另一个实施方案涉及使用本文所述的包含本文所述的VH、VL和CDR多肽序列的抗体以及编码它们的多核苷酸通过选择性地抑制NGF与TrkA缔合而不抑制NGF与p75缔合来治疗或预防疼痛的方法。本发明提供了在治疗上适用于处理疼痛的新型人单克隆抗体以及其片段和缀合物。
[0034] 本发明具体来说提供了以下两种类型的新型抗体和抗体片段:第一种类型,与神经生长因子(NGF)结合,并且抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;和第二种类型,与神经生长因子(NGF)结合,并且抑制NGF与TrkA缔合而且进一步抑制NGF与p75缔合。这两种类型的抗体和抗体片段均可用于治疗或预防疼痛,例如与癌症相关的疼痛、偏头痛、手术前或手术后相关疼痛以及其它疼痛相关病状。优选的是,单克隆抗体或片段是人类或人源化单克隆抗体或其片段或缀合物,它们中和NGF的生物活性并且可用于改善NGF介导的疼痛反应(即,牵涉到TrkA通路的疼痛反应)的影响。
[0035] 一方面,本发明的特征为一种用于预防或治疗手术后疼痛(可互换地称为“切口后疼痛”或“创伤后疼痛”)的方法,所述方法是通过施用根据本发明的对NGF具有特异性的抗体或抗体片段或其它NGF拮抗剂来实现的,所述抗体或抗体片段或其它NGF拮抗剂与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合,并且另一方面,本发明提供了类似的方法,所述方法使用与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合的NGF拮抗剂(根据本发明的抗NGF抗体或片段)。这包括了抑制或阻止由手术后疼痛引起的疼痛,包括由手术或切口性或创伤性伤口所致的疼痛。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同的途径和给药方案来施用的。
[0036] 另一方面,本发明提供了用于降低个体的手术后疼痛的发生率、改善手术后疼痛、缓和手术后疼痛和/或延缓手术后疼痛的产生或进展的方法,所述方法包括施用有效量的根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明的对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或所述药物组合物含有根据本发明的对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。可以如经由连接PEG或其它聚合物或通过连接其它部分(如可检测的试剂或功能性试剂)对这些抗体和片段(例如,单价剂)进行修饰以影响循环半衰期。这些单价剂包括例如Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0037] 另一方面,本发明提供了用于提高个体的痛阈的方法,所述方法包括施用有效量的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明的对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的,优选地通过皮下或静脉内或鼻内或经皮途径施用。
[0038] 另一方面,本发明提供了用于增强个体因手术和/或损伤所诱发的创伤性伤口恢复的方法,所述方法包括施用有效量的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。在一些实施方案中,抑制、改善和/或预防静息疼(resting pain),在一些实施方案中,抑制、改善和/或预防机械诱发性疼痛(包括由运动引起的疼痛),并且在一些实施方案中,抑制、改善和/或预防热诱发性疼痛。在一些实施方案中,通过施用以下物质来抑制、改善和/或预防机械诱发性疼痛:根据本发明的抗NGF抗体或片段,所述抗NGF抗体或片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。在一些实施方案中,通过施用以下物质来抑制、改善和/或预防静息疼:根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或片段,所述抗NGF抗体或片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。在一些实施方案中,通过施用以下物质来抑制、改善和/或预防热诱发性疼痛:根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或片段,所述抗NGF抗体或片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。在一些实施方案中,抑制、改善和/或预防痛觉异常(即,对通常无害刺激的反应增加(即,有害感觉增加)),和/或抑制、改善和/或预防痛觉过敏(即,对通常有害或使人不愉快的刺激的反应增加)。在再另外的实施方案中,痛觉异常和/或痛觉过敏在性质上是热性疼痛或机械性疼痛(触觉性)或静息疼。在一些实施方案中,疼痛是慢性疼痛。在其它实施方案中,疼痛与切口、伤口或创伤的部位相关,和/或邻近于、处于或接近于切口、伤口和/或创伤的部位。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明的至少一种NGF拮抗剂,例如根据本发明对NGF具有特异性的抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0039] 本发明的另一个方面在于使用选择性地抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合的根据本发明的NGF拮抗剂(例如与神经生长因子(NGF)结合的根据本发明的抗体或抗体片段,或另一种如NGF或TrkA片段的多肽或核酸)能够使患有慢性内脏疼痛的患者的痛苦得到缓解的能力或通过使用根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。在慢性疼痛的情况下,根据本发明的主题NGF拮抗剂(例如,抗体或抗体片段)能够抑制或阻止内脏功能失调的病理生理学中所存在的内脏高敏感性。在本文中,措辞慢性内脏功能失调被理解为包括例如神经源性内脏敏感性失调,又被称为内脏痛。所述内脏包括消化器官、呼吸器官和泌尿生殖器官以及内分泌系统,以及脾脏、心脏和大血管。从医学观点来看,慢性内脏痛特征在于对回应于外部机械刺激的疼痛的敏感性阈值与正常阈值相比有所降低。另外,慢性内脏疼痛特征在于功能失调不伴有炎症情况。更确切地说,慢性内脏疼痛包括以下慢性病症:慢性消化不良,一种功能性消化功能失调,在不存在可检测出的器质性病变的情况下发生并且可以是其它疾病或其它病症的症状;慢性痛经,特征在于与月经相关的疼痛;慢性胰腺炎,特征在于体重快速下降、虚弱、胰腺点处疼痛、伴有胆胀的黄疸以及由胰腺功能不全而引起的消化功能失调,包括遗传性慢性胰腺炎,遗传性慢性胰腺炎是一种常染色体显性遗传性疾病,从儿童期开始表现为腹部和复发性疼痛发作并且在成年人中特征在于胰腺功能不全的体征以及胰腺化;慢性胃食管反流,特征在于酸性胃内容物返回进入食道中并且通常在进餐后引起胸骨后烧灼感上升,有时伴有反酸;IBS(肠易激综合征),这是一种非炎症性慢性疾病,特征在于腹痛以及腹泻和/或便秘,而没有可检测出的生物化学和组织学改变。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或含有根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0040] 慢性内脏疼痛(特别是胃肠疼痛)特征在于患者或动物对各种外部刺激的感受异常。这种对外部刺激的感受异常可以被定义为与对照受试者相比,患者或动物对这些外部刺激的敏感性阈值降低。这种生理病理学病状被称为痛觉异常,其中在正常情况下不会引起疼痛的刺激被感受为会引起疼痛,并且所述病状对应于敏感性阈值降低。对患有慢性内脏疼痛的受试者施用根据本发明的抗体或抗体片段会使得有可能避免这个受试者对外部刺激的敏感性阈值降低,而回到与在对照健康受试者中所观察到的敏感性阈值类似的敏感性阈值。根据本发明的主题抗体或片段可以被用于制造旨在预防或治疗慢性内脏疼痛的药剂。
[0041] 在另一个实施方案中,本发明提供了用于增强阿片类镇痛剂疼痛治疗的方法,所述方法包括施用有效量的阿片类镇痛剂联合有效量的根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或联合有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。本文所用的联合施用包括同时施用和/或在不同时间施用。联合施用还涵盖了以共同制剂形式施用(即,根据本发明的NGF抗体或片段与阿片类镇痛剂存在(组合)于同一组合物中)和/或以单独的组合物形式施用。
[0042] 本文所用的“联合施用”意指涵盖如下任何情况,其中向个体施用有效量的以下药剂:根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的NGF抗体或片段,所述NGF抗体或片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合;以及另一种活性剂,例如另一种镇痛剂或生物制剂。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0043] 在本发明的另一个实施方案中,提供了嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段),所述抗体和其片段能够与NGF结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合,并且进一步抑制TF1细胞增殖。
[0044] 在本发明的另一个实施方案中,嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)能够与NGF结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合并且抑制PC12神经突生长。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的所提供的所述嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段),所述抗体和其片段能够与NGF结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合,并且进一步抑制TF1细胞增殖。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0045] 在本发明的另一个实施方案中,这些抗体和人源化型式可以源自于兔免疫细胞(B淋巴细胞),并且可以基于它们与人生殖系序列的同源性(序列同一性)来加以选择。这些抗体可能需要最小限度的序列修饰或不需要序列修饰,从而有助于在人源化之后保留功能特性。本发明的另一个实施方案涉及来自抗NGF抗体的片段,所述抗NGF抗体包含例如源自于兔免疫细胞的VH、VL和CDR多肽;以及编码所述片段的多核苷酸;以及将这些抗体片段和编码它们的多核苷酸用于产生能够与NGF和/或NGF/p75和NGF/TrkA复合体结合的新型抗体和多肽组合物的方法。
[0046] 本发明还涵盖了根据本发明的NGF拮抗剂,例如抗NGF抗体和其结合片段与一个或多个功能性或可检测的部分缀合所形成的缀合物,所述抗NGF抗体和其结合片段与神经生长因子结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。另外,可以使这些化合物与影响(增强或抑制)体内半衰期或促进对所需细胞的靶向作用的部分连接。本发明还涵盖了制备所述嵌合或人源化抗NGF、抗NGF/p75复合体或抗NGF/TrkA复合体的抗体和其结合片段的方法。在一个实施方案中,结合片段包括但不限于Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、MetMab样单价抗体片段、以及IgNAR。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的以下物质与一个或多个功能性或可检测的部分缀合所形成的所述缀合物:抗NGF抗体和其结合片段,所述抗NGF抗体和其结合片段与神经生长因子结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。
[0047] 本发明的实施方案涉及根据本发明的NGF拮抗剂,例如抗NGF抗体和其结合片段用于诊断、评估以及治疗与NGF或其异常表达相关的疾病和病症(尤其是疼痛相关病症)的用途,所述抗NGF抗体和其结合片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。本发明还涵盖了抗NGF抗体的片段用于诊断、评估以及治疗与NGF或其异常表达相关的疾病和病症的用途,所述抗NGF抗体的片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。本发明的其它实施方案涉及抗NGF抗体或其片段的产生以及编码所述抗体或片段的核酸,所述抗体或片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合,它们是通过在重组宿主细胞中表达这些核酸而产生的,所述宿主细胞例如哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。另外,本发明提供了用于所述方法中的药学上可接受的组合物。
[0048] 如本文所进一步论述,应了解,可以在不同的给药频率和/或时间间隔下施用根据本发明的NGF拮抗剂(例如,抗NGF抗体或片段)与其它活性剂(例如,阿片类镇痛剂)。举例来说,可以每周一次施用根据本发明的抗NGF抗体或片段,而可以更频繁地施用阿片类镇痛剂。应了解,可以使用相同的施用途径或不同的施用途径来施用NGF抗体或片段与阿片类镇痛剂,并且不同的给药方案可以在一次或多次施用的过程中发生变化。可以在疼痛发作之前进行施用。
[0049] 另一方面,本发明提供了用于降低个体疼痛的发生率、改善疼痛、缓和疼痛和/或延缓疼痛产生或进展的方法,所述方法包括施用有效量的阿片类镇痛剂联合有效量的根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的NGF抗体或片段,所述NGF抗体或片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。本发明的方法适用于治疗或预防具有任何病因学的任何疼痛,所述疼痛包括通常规定使用阿片类镇痛剂的疼痛,例如胰腺炎、肾结石、头痛、痛经、肌肉骨骼疼痛(例如,下背疼痛)、扭伤、内脏疼痛、卵巢囊肿、前列腺炎、膀胱炎、化学性灼伤或热灼伤或癌症(如转移到骨的前列腺癌、已经转移到骨的乳癌、已经转移到骨的癌、胰腺癌)。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0050] 另一方面,本发明特征为一种用于治疗(或在其它实施方案中,预防)疼痛的方法,所述方法包括施用一定量的根据本发明的NGF拮抗剂(例如,根据本发明的抗NGF抗体或片段)联合另一种活性剂(例如,NSAID)以便提供有效的疼痛缓解作用。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0051] 另一方面,本发明提供了用于增强NSAID疼痛治疗的方法,所述方法包括施用有效量的NSAID联合有效量的根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。本文所用的联合施用包括同时施用和/或在不同时间施用。联合施用还涵盖了以共同制剂形式施用(即,NGF抗体与NSAID存在(组合)于同一组合物中)和/或以单独的组合物形式施用。本文所用的“联合施用”意指涵盖如下任何情况,其中向个体施用有效量的NSAID和抗NGF抗体。如本文所进一步论述,应了解,可以在不同的给药频率和/或时间间隔下施用NGF抗体或片段与NSAID。举例来说,可以每周一次施用根据本发明的NGF拮抗剂(例如,抗NGF抗体),而可以更频繁地施用NSAID。应了解,可以使用相同的施用途径或不同的施用途径来施用NGF抗体与NSAID,并且不同的给药方案可以在一次或多次施用的过程中发生变化。可以在疼痛发作之前进行施用。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明的至少一种NGF拮抗剂,例如根据本发明对NGF具有特异性的抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0052] 另一方面,本发明提供了用于降低个体疼痛的发生率、改善疼痛、缓和疼痛和/或延缓疼痛产生或进展的方法,所述方法包括施用有效量的根据本发明的NGF拮抗剂联合有效量的NSAID,根据本发明的NGF拮抗剂例如根据本发明的NGF抗体或抗体片段,所述NGF抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。本发明的方法适用于治疗或预防具有任何病因学的任何疼痛,所述疼痛包括通常规定使用NSAID的疼痛。在一些实施方案中,疼痛是手术后疼痛。在一些实施方案中,疼痛是与灼伤相关的疼痛。在其它实施方案中,疼痛是与类湿性关节炎相关的疼痛。在其它实施方案中,疼痛是与骨关节炎相关的疼痛。
[0053] 另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明的至少一种NGF拮抗剂,例如根据本发明对NGF具有特异性的抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0054] 另一方面,本发明特征为一种用于预防或治疗骨癌疼痛的方法,所述骨癌疼痛包括与骨转移相关的癌症疼痛(又称为“骨转移疼痛”),所述方法是通过施用以下物质来实现的:根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。在一些实施方案中,将根据本发明的NGF拮抗剂(例如,NGF抗体或片段)与阿片类镇痛剂共同施用。在一些实施方案中,将根据本发明的NGF抗体或抗体片段与NSAID共同施用。在一些实施方案中,将NGF拮抗剂与阿片类镇痛剂和NSAID共同施用。在一些实施方案中,未将NGF拮抗剂与阿片类镇痛剂共同施用。在一些实施方案中,未将NGF拮抗剂与NSAID共同施用。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。
如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0055] 另一方面,本发明提供了用于降低个体的骨癌疼痛(包括与骨转移相关的癌症疼痛)的发生率、改善骨癌疼痛(包括与骨转移相关的癌症疼痛)、缓和骨癌疼痛(包括与骨转移相关的癌症疼痛)和/或延缓骨癌疼痛(包括与骨转移相关的癌症疼痛)产生或进展的方法,所述方法包括施用有效量的根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的NGF抗体或片段,所述NGF抗体或片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合。在一些实施方案中,将根据本发明的NGF拮抗剂(例如,NGF抗体或片段)与阿片类镇痛剂共同施用。在一些实施方案中,将NGF抗体或片段与NSAID共同施用。在一些实施方案中,将根据本发明的NGF拮抗剂(例如,NGF抗体或片段)与阿片类镇痛剂和NSAID共同施用。在一些实施方案中,未将根据本发明的NGF拮抗剂(例如,NGF抗体或片段)与阿片类镇痛剂共同施用。在一些实施方案中,未将根据本发明的NGF拮抗剂(例如,NGF抗体或片段)与NSAID共同施用。另外,本发明提供了适用于治疗或预防所述疼痛适应症,优选地适用于人类疗法的药物组合物,所述药物组合物包含有效量的根据本发明对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合。如以下所论述,这些组合物可能是可以通过不同途径和给药方案来施用的。
[0056] 本发明还提供了:载体,含有编码此类NGF抗体和片段的核酸;和细胞,包括如细菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞或类细胞,所述细胞表达这些核酸,并且最优选地将本发明的单克隆抗体和片段分泌到细胞培养基中。本发明的抗体和抗体片段以及其它NGF拮抗剂除了用于治疗和处理疼痛的用途之外,还可用于治疗神经痛和炎症性疼痛相关反应,所述治疗包括使用NGF拮抗剂,例如与神经生长因子(NGF)结合的抗体或抗体片段或其它化合物,所述抗体或抗体片段或其它化合物抑制NGF与TrkA缔合而不明显抑制NGF与p75缔合;或与神经生长因子(NGF)结合的抗体,所述抗体抑制NGF与TrkA缔合并且进一步抑制NGF与p75缔合。
[0057] 与之相关,本申请描述了单克隆抗体和片段,所述单克隆抗体和片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合以及NGF与p75缔合;和/或对NGF具有特异性的抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合,所述抗体和片段还可用于治疗或预防疼痛病症以及其它病症(如炎症)。可以如经由连接PEG或其它聚合物或通过连接其它部分(如可检测的试剂或功能性试剂)对这些抗体和片段(例如,单价或二价剂)进行修饰以影响循环半衰期。这些单价剂包括例如Fab、Fab′、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、类似于MetMab的单价抗体分子或其一种或多种组合。
[0058] 附图中各视图的简述
[0059] 图1提供了对应于全长抗体Ab1的多核苷酸序列和多肽序列。
[0060] 图2提供了对应于全长抗体Ab2的多核苷酸序列和多肽序列。
[0061] 图3提供了对应于全长抗体Ab3的多核苷酸序列和多肽序列。
[0062] 图4提供了对应于全长抗体Ab4的多核苷酸序列和多肽序列。
[0063] 图5提供了对应于全长抗体Ab5的多核苷酸序列和多肽序列。
[0064] 图6提供了对应于全长抗体Ab6的多核苷酸序列和多肽序列。
[0065] 图7提供了对应于全长抗体Ab7的多核苷酸序列和多肽序列。
[0066] 图8提供了对应于全长抗体Ab8的多核苷酸序列和多肽序列。
[0067] 图9提供了对应于全长抗体Ab9的多核苷酸序列和多肽序列。
[0068] 图10提供了对应于全长抗体Ab10的多核苷酸序列和多肽序列。
[0069] 图11提供了对应于全长抗体Ab11的多核苷酸序列和多肽序列。
[0070] 图12提供了对应于全长抗体Ab12的多核苷酸序列和多肽序列。
[0071] 图13提供了对应于全长抗体Ab13的多核苷酸序列和多肽序列。
[0072] 图14提供了对应于全长抗体Ab14的多核苷酸序列和多肽序列。
[0073] 图15提供了对应于全长抗体Ab15的多核苷酸序列和多肽序列。
[0074] 图16提供了对应于全长抗体Ab16的多核苷酸序列和多肽序列。
[0075] 图17提供了对应于全长抗体Ab17的多核苷酸序列和多肽序列。
[0076] 图18提供了对应于全长抗体Ab18的多核苷酸序列和多肽序列。
[0077] 图19提供了对应于全长抗体Ab19的多核苷酸序列和多肽序列。
[0078] 图20提供了对应于全长抗体Ab20的多核苷酸序列和多肽序列。
[0079] 图21提供了对应于通过在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达而产生的全长抗体Ab21的多核苷酸序列和多肽序列。
[0080] 图22提供了Fab1的重链多肽序列和轻链多肽序列。
[0081] 图23提供了Fab2的重链多肽序列和轻链多肽序列。
[0082] 图24提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab1和Ab2所获得的NGFELISA结合数据。
[0083] 图25提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab3所获得的NGF ELISA结合数据。
[0084] 图26提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab4所获得的NGF ELISA结合数据。
[0085] 图27提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab5和Ab6所获得的NGFELISA结合数据。
[0086] 图28提供了遵循以下所述的方案针对Fab1所获得的NGF ELISA结合数据。
[0087] 图29提供了遵循以下所述的方案针对Fab2所获得的NGF ELISA结合数据。
[0088] 图30提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab7和Ab8所获得的NGFELISA结合数据。
[0089] 图31提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab9和Ab10所获得的NGFELISA结合数据。
[0090] 图32提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab11所获得的NGF ELISA结合数据。
[0091] 图33提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab12所获得的NGF ELISA结合数据。
[0092] 图34提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab13所获得的NGF ELISA结合数据。
[0093] 图35提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab14所获得的NGF ELISA结合数据。
[0094] 图36提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab15所获得的NGF ELISA结合数据。
[0095] 图37提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab16所获得的NGF ELISA结合数据。
[0096] 图38提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab17和Ab18所获得的NGF ELISA结合数据。
[0097] 图39提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab19所获得的NGF ELISA结合数据。
[0098] 图40提供了遵循以下所述的方案针对抗体Ab20所获得的NGF ELISA结合数据。
[0099] 图41提供了遵循实施例1针对抗体Ab1和Ab2所获得的TF1细胞增殖数据。
[0100] 图42提供了遵循实施例1针对抗体Ab3和Ab4所获得的TF1细胞增殖数据。
[0101] 图43提供了遵循实施例1针对抗体Ab5和Ab6所获得的TF1细胞增殖数据。
[0102] 图44提供了遵循实施例1针对Fab1抗体片段和Fab2抗体片段所获得的TF1细胞增殖数据。
[0103] 图45提供了遵循实施例1针对抗体Ab7和Ab8所获得的TF1细胞增殖数据。
[0104] 图46提供了遵循实施例1针对抗体Ab9和Ab10所获得的TF1细胞增殖数据。
[0105] 图47提供了遵循实施例1针对抗体Ab11和Ab12所获得的TF1细胞增殖数据。
[0106] 图48提供了遵循实施例1针对抗体Ab13和Ab14所获得的TF1细胞增殖数据。
[0107] 图49提供了遵循实施例1针对抗体Ab15所获得的TF1细胞增殖数据。
[0108] 图50提供了遵循实施例1针对抗体Ab16所获得的TF1细胞增殖数据。
[0109] 图51提供了遵循实施例1针对抗体Ab17和Ab18所获得的TF1细胞增殖数据。
[0110] 图52提供了遵循实施例1针对抗体Ab19和Ab20所获得的TF1细胞增殖数据。
[0111] 图53提供了遵循实施例5针对抗体Ab3和Ab4所获得的对NGF-p75相互作用的抑制作用数据。抗体Ab3和Ab4未展示出能够抑制NGF与p75相互作用的能力。
[0112] 图54提供了遵循实施例5针对抗体Ab15和Ab16所获得的对NGF-p75相互作用的抑制作用数据。抗体Ab15和Ab16未展示出能够抑制NGF与p75相互作用的能力。
[0113] 图55提供了遵循实施例5针对抗体Ab5所获得的对NGF-p75相互作用的抑制作用数据。抗体Ab5展示出能够抑制NGF与p75相互作用的能力。
[0114] 图56示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab1存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0115] 图57示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab2存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0116] 图58示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab3存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。结果还证实了在相同抗体浓度下对PC-12神经突生长的抑制作用小于针对于展现不同的NGF结合选择性的抗NGF抗体(即,抑制NGF与TrkA和p75两者相互作用的抗体)所观测到的抑制作用。
[0117] 图59示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab5存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0118] 图60示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab6存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0119] 图61示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab7存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0120] 图62示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab8存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0121] 图63示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab9存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0122] 图64示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab10存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0123] 图65示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab11存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0124] 图66示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab13存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0125] 图67示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab17存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0126] 图68示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab18存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0127] 图69示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab19存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。
[0128] 图70示出了遵循实施例7在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab2、Ab6、以及Ab8之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0129] 图71示出了遵循实施例7在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab6和Fab1之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0130] 图72示出了遵循实施例7在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab3之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0131] 图73示出了遵循实施例7在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab6和抗体Ab21之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0132] 图74示出了遵循实施例8在与对照的炎症结果相比时,在施用抗体Ab2、Ab6、以及Ab8中的每一个之后炎症增加。
[0133] 图75示出了在与对照的炎症结果相比时,在施用Fab1抗体片段之后炎症没有显著增加。相比之下,遵循实施例8在与对照的炎症结果相比时,施用抗体Ab6导致炎症增加。
[0134] 图76示出了遵循实施例8在与对照的炎症结果相比时,在施用抗体Ab3之后炎症增加。
[0135] 图77同样示出了遵循实施例8在与对照的炎症结果相比时,在施用抗体Ab6和抗体Ab21之后炎症增加。
[0136] 图78示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab16存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。结果还证实了在相同的抗体浓度下对PC-12神经突生长的抑制作用小于针对于展现不同的NGF结合选择性的抗NGF抗体(即,抑制NGF与TrkA和p75两者相互作用的抗体)所观测到的抑制作用。
[0137] 图79示出了遵循实施例6所获得的在递增浓度的抗体Ab15存在下对PC-12神经突生长的抑制作用。结果还证实了在相同的抗体浓度下对PC-12神经突生长的抑制作用小于针对于展现不同的NGF结合选择性的抗NGF抗体(即,抑制NGF与TrkA和p75两者相互作用的抗体)所观测到的抑制作用。
[0138] 优选实施方案的详述
[0139] 定义
[0140] 应了解,本发明不限于所述的具体方法、方案、细胞系、动物种或属、以及试剂,因为所述这些可以发生改变。还应了解,本文所用的术语仅出于描述具体实施方案的目的而不意图限制本发明的范围,本发明的范围将仅受所附权利要求书限制。除非上下文另外明确地指出,否则本文所用的单数形式“一个(种)(a/an)”和“所述(the)”包括复数对象。因此,例如,提及“一个细胞”包括了多个此类细胞并且提及“所述蛋白”包括了提及一种或多种蛋白以及其为本领域技术人员所知的等效物,诸如此类。除非另外明确地指出,否则本文所用的所有技术性和科学性术语所具有的含义与本发明所属领域中的普通技术人员通常所了解的含义相同。
[0141] 神经生长因子(NGF):本文所用的NGF(又称为β-NGF;HSAN5;以及NGFB)不仅涵盖了可从安迪生物科技有限公司(R&D Systems)(Minneapolis,MN)获得的下列成熟氨基酸序列作为智人β-神经生长因子(β-NGF):
[0142] SSSHPIFHRGEFSVCDSVSVWVGDKTTATDIKGKEVMVLGEVNINNSVFKQYFFETKCRDPNPVDSGCRGIDSKHWNSYCTTTHTFVKALTMDGKQAAWRFIRIDTACVCVLSRKAVRRA(SEQ ID NO:411),而且还涵盖了这个NGF氨基酸序列的任何前体形式、成熟形式、可溶性形式和/或膜结合形式,以及这个序列的突变体(突变蛋白(mutien))、剪接变体、亚型、直系同源物、同源物以及变体。
[0143] “神经生长因子拮抗剂”是拮抗或抑制由NGF所诱导的至少一种生物活性,优选地牵涉到NGF与TrkA和/或p75相互作用的活性的分子。这些拮抗剂可以包括多肽(如TrkA、p75或NGF的片段)、核酸或结合NGF、TrkA或p75的抗体。在所示例的实施方案中,NGF拮抗剂或者是对NGF具有特异性的至少一种抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段与神经生长因子(NGF)结合,抑制NGF与TrkA缔合和/或抑制NGF与p75缔合。
[0144] 本文中的“重组宿主”或“宿主细胞”典型地是指细胞或非人生物体,所述细胞或非人生物体经过基因工程改造以便产生根据本发明的NGF拮抗剂,例如根据本发明的NGF抗体、NGF抗体片段或其它NGF拮抗剂。这些宿主和宿主细胞包括哺乳动物细胞、细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、植物细胞,以及转基因植物或动物,如啮齿动物、植物以及科动物。典型地,抗体或抗体片段在哺乳动物细胞、细菌细胞以及酵母细胞中表达。在一个优选实施方案中,主题抗体或抗体片段在专有的分泌表达系统中表达,所述分泌表达系统使用了二倍体毕赤酵母培养物来表达抗体。这种表达系统公开于2011年4月19日颁布的Cregg的美国专利号7,927,863中,所述专利的内容以引用的方式并入本文。在一个示例性实施方案中,NGF拮抗剂(例如,抗人NGF抗体和抗体片段)在酵母,优选地在有交配能力的酵母中表达。
[0145] 有交配能力的酵母菌种:在本发明中,所述酵母菌种意图宽泛地涵盖可以在培养物中生长的任何二倍体或四倍体酵母。此类酵母菌种可以呈单倍体、二倍体或其它多倍体形式存在。具有给定倍数性的细胞可以在适当的条件下以那种形式增殖无限的代数。二倍体细胞还可以形成孢子以形成单倍体细胞。连续交配可以通过二倍体菌株的进一步交配或融合而产生四倍体菌株。本发明涵盖了使用单倍体酵母,以及例如通过交配或原生质球融合而产生的二倍体或其它多倍体酵母细胞。此类酵母包括酵母科(Saccharomycetaceae)的成员,所述酵母科包括阿斯眉酵母属(Arxiozyma);埃克波眉酵母属(Ascobotryozyma);固囊酵母属(Citeromyces);德巴利酵母属(Debaryomyces);德克酵母属(Dekkera);假囊酵母属(Eremothecium);伊萨酵母属(Issatchenkia);哈萨克斯坦酵母属(Kazachstania);克鲁维酵母属(Kluyveromyces);柯达酵母属(Kodamaea);路德酵母属(Lodderomyces);
管囊酵母属(Pachysolen);毕赤酵母属;酵母属(Saccharomyces);土星形酵母属(Saturnispora);特派斯波罗酵母属(Tetrapisispora);有孢圆酵母属(Torulaspora);
拟威尔酵母属(Williopsis);以及接合酵母属(Zygosaccharomyces)。可能可用于本发明中的其它类型的酵母包括耶氏酵母属(Yarrowia);红冬孢酵母属(Rhodosporidium);假丝酵母属(Candida);汉逊酵母属(Hansenula);线黑粉酵母属(Filobasium);掷酵母属(Sporidiobolus);布勒掷孢酵母属(Bullera);白冬孢酵母属(Leucosporidium)以及线状黑粉菌属(Filobasidella)。
[0146] 在本发明的一个优选实施方案中,有交配能力的酵母是毕赤酵母属中的一员。在本发明的另一个优选实施方案中,毕赤酵母属中有交配能力的酵母是以下菌种之一:
巴斯德毕赤酵母、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、以及多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)(安格斯毕赤酵母(Pichia angusta))。在本发明的一个特别优选的实施方案中,毕赤酵母属中有交配能力的酵母是巴斯德毕赤酵母菌种。
[0147] 选择标记:选择标记是如下的基因或基因片段,所述基因或基因片段赋予例如通过转化事件而接受所述基因的细胞以生长表型(物理生长特征)。选择标记允许所述细胞在选择性生长培养基中在未接受所述选择标记基因的细胞不能生长的条件下存活并且生长。选择标记基因通常分为以下几种类型,包括阳性选择标记基因,如在使两个ts突变体杂交或使ts突变体进行转化时赋予细胞对抗生素或其它药物、温度的抗性的基因;阴性选择标记基因,如生物合成基因,所述生物合成基因赋予细胞以在不含为不具有所述生物合成基因的所有细胞所需的特定营养物的培养基中生长的能力,或经过诱变的生物合成基因,所述经过诱变的生物合成基因使得细胞不能通过不具有野生型基因的细胞生长;以及类似选择标记。适合的标记包括但不限于:ZEO;G418;LYS3;MET1;MET3a;ADE1;ADE3;URA3;以及类似标记。
[0148] 表达载体:这些DNA载体含有有助于对外源蛋白在目标宿主细胞内的表达进行操纵的元件。常常,首先在细菌宿主(例如,大肠杆菌(E.coli))中对序列进行操纵并且产生用于转化的DNA,并且通常,载体将包括促成此类操纵的序列,所述序列包括细菌复制起点和适当的细菌选择标记。选择标记编码为在选择性培养基中生长的经过转化的宿主细胞存活或生长所必需的蛋白。未被含有选择基因的载体转化的宿主细胞将不能在所述培养基中存活。典型的选择基因编码如下蛋白,所述蛋白(a)赋予对抗生素或其它毒素的抗性,(b)弥补营养缺陷型缺陷,或(c)供给不可从复合培养基中获得的关键营养物。用于转化酵母的示例性载体和方法描述在例如Burke,D.,Dawson,D.和Stearns,T.(2000).Methods in yeast genetics:a Cold Spring Harbor Laboratory course manual.Plainview,N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory Press中。
[0149] 用于本发明的方法中的表达载体将进一步包括宿主细胞特异性序列,所述序列包括用于鉴定经过转化的宿主细胞或宿主菌株的选择营养缺陷型标记或药物标记。药物标记可以进一步被用来扩增宿主细胞或转基因动物中载体的拷贝数。
[0150] 目标多肽编码序列与转录和翻译调节序列可操作地连接,所述调节序列使多肽能够在宿主细胞或转基因动物中表达。这些载体部件可以包括但不限于以下各项中的一种或多种:增强子元件、启动子、以及转录终止序列。还可以包括用于分泌多肽的序列,例如信号序列等。宿主细胞复制起点是任选的,这是因为常常将表达载体整合至宿主细胞基因组中。在本发明的一个实施方案中,目标多肽与使得多肽从宿主细胞(例如,酵母二倍体细胞)中的分泌得到优化的序列可操作地连接或融合。
[0151] 当使核酸与另一个核酸序列处于某种功能关系时,所述核酸是“可操作地连接”的。举例来说,如果信号序列的DNA被表达为参与多肽分泌的前蛋白,那么所述信号序列的DNA与多肽的DNA可操作地连接;如果启动子或增强子影响了编码序列的转录,那么所述启动子或增强子与所述编码序列可操作地连接。总体而言,“可操作地连接”意指所连接的DNA序列是邻接的,并且在分泌前导序列的情况下,是邻接的并且处于阅读框架中。然而,增强子未必是邻接的。通过在适宜的限制性酶切位点上进行接合或者作为替代方案经由本R领域技术人员熟悉的PCR/重组方法(Gateway 技术;加利福利亚州卡尔斯巴德市的英杰公司(Invitrogen,Carlsbad California))来实现连接。如果不存在所述位点,那么根据常规惯例使用合成的寡核苷酸接头或连接子。
[0152] 启动子是位于结构基因起始密码子上游(5′端)的非翻译序列(一般在约100bp至1000bp范围内),所述非翻译序列控制与它们可操作地连接的特定核酸序列转录和翻译。所述启动子分成以下几个类别:诱导型启动子、组成型启动子、以及阻抑型启动子(所述启动子能够回应于不存在阻抑物的情况而使转录水平提高)。诱导型启动子可以回应于培养条件的某种改变(例如,存在或不存在营养物或温度的改变)促使在它们的控制下进行的DNA转录的水平有所提高。
[0153] 启动子片段还可以充当同源重组和使表达载体整合至酵母基因组中的相同位点中的位点;或者,使用选择标记作为同源重组的位点。毕赤酵母转化描述于Cregg等(1985)Mol.Cell.Biol.5:3376-3385中。
[0154] 来自毕赤酵母的适合启动子的实例包括AOX1和启动子(Cregg等(1989)Mol.Cell.Biol.9:1316-1323);ICL1启动子(Menendez等(2003)Yeast20(13):1097-108);甘油-3-磷酸脱氢酶启动子(GAP)(Waterham等(1997)Gene186(1):37-44);以及FLD1启动子(Shen等(1998)Gene216(1):93-102)。GAP启动子是强组成型启动子,并且AOX和FLD1启动子是诱导型启动子。
[0155] 其它酵母启动子包括ADH1、醇脱氢酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk、以及源自于它们的嵌合启动子。另外,可以在本发明中使用非酵母启动子,如哺乳动物启动子、昆虫启动子、植物启动子、爬行动物启动子、植物启动子、两栖动物启动子、病毒启动子、以及鸟类启动子。最典型的是,所述启动子将包含哺乳动物启动子(可能是所表达基因的内源性启动子)或将包含在酵母系统中提供高效转录的酵母启动子或病毒启动子。
[0156] 目标多肽不仅可以通过重组方式直接产生,而且还可以通过重组方式与异源多肽以融合多肽形式产生,所述异源多肽例如在成熟蛋白或多肽的N端上具有特异性裂解位点的信号序列或其它多肽。总体而言,信号序列可以是载体的部件,或所述信号序列可以是插入至载体中的多肽编码序列的一部分。所选择的异源信号序列优选地是可以经由宿主细胞内可获得的标准通路之一进行识别和加工的异源信号序列。酿酒酵母(S.cerevisiae)α因子前原信号已经过证实可以有效地使多种重组蛋白从巴斯德毕赤酵母中分泌出来。其它酵母信号序列包括α交配因子信号序列、转化酶信号序列、以及源自于其它分泌性酵母多肽的信号序列。另外,可以对这些信号肽序列进行工程改造以便在所选的表达系统中提供增强的分泌作用。其它目标分泌信号还包括哺乳动物信号序列,所述信号序列可以与所分泌的蛋白质异源,或可以是所分泌的蛋白质的天然序列。信号序列包括前肽序列,并且在一些情况下可以包括原肽序列。许多此类信号序列是本领域中已知的,包括存在于免疫球蛋白链上的信号序列,例如K28前原毒素序列、PHA-E、FACE、人MCP-1、人血清白蛋白信号序列、人Ig重链、人Ig轻链等。例如,参见Hashimoto等,Protein Eng11(2)75(1998);和Kobayashi等,Therapeutic Apheresis2(4)257(1998)。
[0157] 可以通过将转录激活序列插入至载体中来增加转录。这些激活序列是DNA的顺式作用元件(通常为约10bp至300bp),所述顺式作用元件对启动子起作用以便增加它的转录。转录增强子在内含子内以及在编码序列本身内的定向和位置是相对独立的,存在于转录单位的5′端和3′端。可以将增强子剪接至表达载体中编码序列的5′位或3′位上,但所述增强子优选地位于启动子的5′位点上。
[0158] 用于真核宿主细胞中的表达载体还可以含有终止转录和使mRNA稳定所必需的序列。此类序列通常可在真核生物或病毒DNA或cDNA的非翻译区中从翻译终止密码子的3′端获得。这些区含有在mRNA的非翻译部分中被转录为多聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。
[0159] 建构含有以上所列出的一个或多个部件的适合载体采用了标准接合技术或PCR/重组方法。将分离的质粒或DNA片段裂解、定制、并且重新接合成为产生所需的质粒所希望的形式或经由重组方法产生所需的质粒。为了分析以确认所建构的质粒中的正确序列,使用接合混合物来转化宿主细胞,并且在适当时通过抗生素抗性(例如,氨比西林(ampicillin)或博来霉素(Zeocin))来选择成功的转化体。对来自所述转化体的质粒进行制备,通过限制性核酸内切酶消化进行分析和/或测序。
[0160] 作为对片段进行限制和接合的一个替代方案,可以使用基于att位点的重组方法和重组酶来将DNA序列插入至载体中。此类方法例如由Landy(1989)Ann.Rev.Biochem.58:913-949描述;并且所述方法为本领域技术人员已知。此类方法利用了由λ噬菌体和大肠杆菌(E.coli)编码的重组蛋白的混合物介导的分子间DNA重组。重组在相互作用的DNA分子上的特异性连接(att)位点之间发生。关于对att位点的描述,参见Weisberg和Landy(1983)Site-Specific Recombination in Phage Lambda,in Lambda II,Weisberg编著(Cold Spring Harbor,NY:Cold Spring Harbor Press),第211-250页。对侧接于重组位点的DNA区段进行转换,从而使得在重组之后,att位点是包含由每个亲本载体所贡献的序列的杂合序列。重组可以在具有任何拓扑的DNA之间发生。
[0161] 可以通过以下手段将att位点引入到目标序列中:将目标序列接合至适当的载体中;通过使用特异性引物而产生含有att B位点的PCR产物;产生已被克隆至含有att位点的适当载体中的cDNA文库;等。
[0162] 本文所用的折叠是指多肽和蛋白质的三维结构,其中氨基酸残基之间发生相互作用以使结构稳定。虽然非共价相互作用在决定结构方面至关重要,但通常,目标蛋白质将具有由两个半胱氨酸残基形成的分子内和/或分子间共价二硫键。对于天然存在的蛋白质和多肽或其衍生物和变体,正确的折叠典型地是产生最佳生物活性的排列,并且可以方便地通过活性(例如配体结合、酶活性等)的测定来监测。
[0163] 在一些情况下,例如在所需的产物是合成源性产物时,基于生物活性的测定将较没有意义。可以基于物理特性、能量考虑、建模研究等来确定此类分子的正确折叠。
[0164] 可以通过引入编码一种或多种酶的序列来进一步修饰表达宿主,所述一种或多种酶会增强折叠和二硫键形成,即折叠酶、伴侣蛋白等。可以使用如本领域中已知的载体、标记等在酵母宿主细胞中组成性地或诱导性地表达此类序列。优选的是,通过靶向方法,将包括足以实现所希望的表达型态的转录调节元件在内的序列稳定地整合至宿主细胞基因组中。
[0165] 举例来说,真核生物PDI不仅是蛋白半胱氨酸化和二硫键异构化的有效催化剂,而且还展现出伴侣蛋白活性。PDI的共表达可以促成具有多个二硫键的活性蛋白产生。同样,相关的是BIP(免疫球蛋白重链结合蛋白)、亲环蛋白等的表达。在本发明的一个实施方案中,单倍体亲本菌株中的每一种均表达相异的折叠酶,例如一种菌株可能表达BIP,而另一种菌株可能表达PDI或其组合。
[0166] 术语“所需的蛋白”或“所需的抗体”是可互换使用的,并且通常是指如本文所描述的对靶标(即,NGF)具有特异性的亲本抗体或源自于它们的嵌合或人源化抗体或其结合部分。术语“抗体”意图包括具有特定形状的任何含有多肽链的分子结构,所述分子结构与表位相配合并且识别表位,其中一种或多种非共价结合相互作用使分子结构与表位之间的复合体稳定。原型抗体分子是免疫球蛋白,并且来自所有来源(例如人、啮齿动物、兔、母牛、绵羊、猪、狗、其它哺乳动物、鸡、其它鸟类等)的所有类型的免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等均被认为是“抗体”。用于产生可用作根据本发明的起始物质的抗体的一个优选来源是兔。已经描述了许多的抗体编码序列;并且可以通过本领域中熟知的方法来产生其它的抗体编码序列。其实例包括嵌合抗体、人抗体和其它非人哺乳动物抗体、人源化抗体、单链抗体(如scFv)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR(源自于鲨鱼的单链抗体)、小分子免疫药物(SMIP)、以及抗体片段,如Fab、Fab′、F(ab′)2等。参见Streltsov VA等,Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype,Protein Sci.2005年11月;14(11):2901-9.2005年9月30日电子出版;Greenberg AS等,A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks,Nature.1995年 3 月 9 日 ;374(6518):168-73;Nuttall SD 等 ,Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks,and use as a scaffold for the display of protein loop libraries,Mol Immunol.2001年8月;38(4):313-26;Hamers-Casterman C等,Naturally occurring antibodies devoid of light chains,Nature.1993年6月
3日;363(6428):446-8;Gill DS等,Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds,Curr Opin Biotechnol.2006年12月;17(6):653-8.2006年10月19日电子出版。
[0167] 举例来说,可以通过基因工程改造产生抗体或抗原结合片段。在这种技术中,如同其它方法一样,使抗体产生细胞对所需的抗原或免疫原敏感。使用PCR扩增,将从抗体产生细胞中分离出的信使RNA用作模板来制备cDNA。通过将扩增了的免疫球蛋白cDNA的适当区段插入到表达载体中来产生载体的文库,所述载体各自含有保留了初始抗原特异性的一个重链基因和一个轻链基因。通过将重链基因文库与轻链基因文库组合来建构组合性文库。这会产生共表达重链和轻链的克隆(类似于抗体分子的Fab片段或抗原结合片段)的文库。将携带这些基因的载体共转染至宿主细胞中。当在经过转染的宿主中诱导抗体基因合成时,重链蛋白和轻链蛋白自行组装而产生活性抗体,可以通过用抗原或免疫原进行筛选来检测所述活性抗体。
[0168] 目标抗体编码序列包括由天然序列编码的那些序列,以及由于遗传密码的简并而与所公开的核酸在序列上不相同的核酸及其变体。变体多肽可以包括氨基酸(aa)取代、添加或缺失。氨基酸取代可以是保守性氨基酸取代或消除非必需氨基酸的取代,如改变糖基化位点的取代,或通过并非为功能所必需的一个或多个半胱氨酸残基的取代或缺失使错误折叠减至最少的取代。变体可以经过设计以便保留蛋白质的特定区(例如,功能性结构域、催化性氨基酸残基等)的生物活性或具有增强的生物活性。变体还包括了本文所公开的多肽的片段,特别是生物活性片段和/或对应于功能性结构域的片段。用于对克隆的基因进行体外诱变的技术是已知的。在本发明中还包括了如下的多肽,已使用普通分子生物学技术对所述多肽进行修饰,以便改良它们对蛋白质水解降解的抗性或优化可溶性特性或使得它们更适合作为治疗剂。
[0169] 本文的嵌合抗体包括通过对至少2种不同抗体的一个或多个部分进行组合而获得的任何抗体,所述至少2种不同抗体可以来自相同或不同的物种。通常,嵌合抗体含有源自于人抗体和非人抗体的部分。在本文中,嵌合抗体包括人源化抗体,因为人源化抗体含有源自于人抗体和非人抗体的部分,即它们典型地包含人框架残基和非人抗体CDR。因此,在本申请中,嵌合抗体与人源化抗体有时可互换引用。
[0170] 可以通过重组手段,通过将从一种物种的抗体产生细胞中获得的可变轻链区和可变重链区(VL和VH)与来自另一种物种的恒定轻链区和恒定重链区进行组合来制备嵌合抗体。然而,本文所指出的“嵌合抗体或嵌合抗体片段”意图宽泛地涵盖任何抗体或抗体片段,所述抗体或抗体片段包含起源于或源自于至少2种不同抗体的氨基酸残基,所述至少2种不同抗体可以来自相同或不同的物种。典型地在本文中,嵌合抗体组合了啮齿动物或兔的可变区与人恒定区,以便产生主要具有人结构域的抗体。此类嵌合抗体的产生在本领域中是熟知的,并且可以通过标准手段(如例如在美国专利号5,624,659中所述,所述专利以引用的方式整体并入本文)来实现。进一步涵盖的是,本发明的嵌合抗体的人恒定区可以选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恒定区。
[0171] 根据本发明的人源化抗体典型地经过工程改造以含有甚至更类似于人的免疫球蛋白结构域,并且可以仅并有动物源性抗体的(所有或大部分)互补决定区,然而,还可以存在来自动物源性抗体的一个或多个框架残基。优选的是,将这种情况减至最少以避免免疫原性。这可以通过仔细检查单克隆抗体的可变区的高变环的序列,并且使它们与人抗体链的结构相配合来实现。虽然所述方法在表面上是复杂的,但所述方法实际上却是简单的。参见,例如美国专利号6,187,287,所述专利以引用的方式完全并入本文。在一些情况下,可以在人源化抗体中改变动物源性抗体的一个或多个CDR残基,例如,条件是取代的残基在人抗体中的这个位置上是极为常见的和/或这种改变不会不利地影响抗原结合。
[0172] 除了整个免疫球蛋白(或它们的重组对应物)之外,还可以合成包含表位结合位点的免疫球蛋白片段(例如,Fab’、F(ab’)2或其它片段)。可以利用重组免疫球蛋白技术设计“片段”或最小的免疫球蛋白。举例来说,可以通过合成融合的可变轻链区和可变重链区来产生用于本发明中的“Fv”免疫球蛋白。抗体的组合也是相关的,例如双功能抗体(diabody),所述双功能抗体包含两种相异的Fv特异性。在本发明的另一个实施方案中,免疫球蛋白片段涵盖了SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、以及IgNAR。
[0173] 可以对免疫球蛋白和其片段进行翻译后修饰,例如以便添加效应部分,如化学连接子、可检测的部分(如荧光染料、酶、毒素、底物、生物发光物质、放射性物质、化学发光部分等)或特异性结合部分(如链霉亲和素、抗生物素蛋白或生物素),并且类似的效应部分可以被用在本发明的方法和组合物中。以下提供了另外的效应分子的实例。
[0174] 如果根据遗传密码翻译多核苷酸序列会产生多肽序列(即,多核苷酸序列“编码”多肽序列),那么所述多核苷酸序列“对应”于所述多肽序列,如果两个多核苷酸序列编码相同的多肽序列,那么这两个多核苷酸序列中的一个多核苷酸序列“对应”于另一个多核苷酸序列。
[0175] DNA构建体的“异源”区域或结构域是更大的DNA分子内可鉴定的DNA区段,所述区段在自然界中不与所述更大的分子结合存在。因此,当异源区域编码哺乳动物基因时,所述基因通常将由原始生物体的基因组中不侧接于哺乳动物基因组DNA的DNA所侧接。异源区域的另一个实例是编码序列本身不存在于自然界中的构建体(例如,基因组编码序列含有内含子的cDNA或具有不同于天然基因的密码子的合成序列)。等位基因变异或天然存在的突变事件不会产生本文所定义的DNA的异源区域。
[0176] “编码序列”是密码子的框内序列,所述序列(从遗传密码的观点来看)对应于或编码蛋白质或肽序列。如果两个编码序列或它们的互补序列编码相同的氨基酸序列,那么这两个编码序列彼此对应。与适当的调节序列缔合的编码序列可以被转录并且翻译成多肽。多聚腺苷酸化信号和转录终止序列通常将位于编码序列的3′端。“启动子序列”是能够结合细胞中的RNA聚合酶并且引发下游(3′方向)编码序列转录的DNA调节区。启动子序列典型地含有用于结合调节分子(例如,转录因子)的另外位点,所述调节分子影响编码序列的转录。当在细胞中RNA聚合酶结合启动子序列并且将编码序列转录成mRNA,然后所述mRNA继而被翻译成由编码序列编码的蛋白质时,所述编码序列在启动子序列的“控制之下”或与启动子“可操作地连接”。
[0177] 载体被用来将外来物质(如DNA、RNA或蛋白质)引入至生物体或宿主细胞中。典型的载体包括重组病毒(用于多核苷酸)和脂质体(用于多肽)。“DNA载体”是复制子,如质粒、噬菌体或粘粒,所述复制子可以与另一个多核苷酸区段连接以便使得所连接的区段进行复制。“表达载体”是DNA载体,所述DNA载体含有将引导由适当的宿主细胞进行多肽合成的调节序列。这通常意指结合RNA聚合酶并且引发mRNA转录的启动子、以及引导所述mRNA翻译成一种或多种多肽的核糖体结合位点和起始信号。在适当的位点上并且在正确的阅读框架中将多核苷酸序列并入表达载体中,接着通过载体转化适当的宿主细胞,能够使由所述多核苷酸序列编码的多肽产生。
[0178] 多核苷酸序列的“扩增”是在体外产生特定核酸序列的多个拷贝。经过扩增的序列通常呈DNA的形式。用于进行这种扩增的多种技术描述在Van Brunt的综述文章(1990,Bio/Technol.,8(4):291-294)中。聚合酶链反应或PCR是核酸扩增的典型,并且PCR在本文中的用途应当被认为示例了其它适合的扩增技术。
[0179] 如今完全了解了脊椎动物中的抗体的一般结构(Edelman,G.M.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,190:5(1971))。抗体由两条相同的分子量为约23,000道尔顿的轻多肽链(“轻链”)和两条相同的分子量为53,000-70,000的重链(“重链”)组成。这四条链由二硫键连接成“Y”构型,其中轻链承托起始于“Y”构型的开口处的重链。“Y”构型的“分支”部分被指定为Fab区;“Y”构型的主干部分被指定为FC区。氨基酸序列定向是从“Y”构型顶部处的N端到每条链底部处的C端。N端具有可变区,所述可变区对诱出它的抗原具有特异性,并且所述N端的长度是约100个氨基酸,在轻链与重链之间以及在抗体之间存在略微不同。
[0180] 在每条链中可变区与恒定区连接,所述恒定区延伸链的剩余长度并且在抗体的特定类别内不会随着抗体的特异性(即,诱出它的抗原)而变化。存在五个已知的主要恒定区类别,所述恒定区类别决定了免疫球蛋白分子的类别(对应于γ、μ、α、δ、以及ε(γ(gamma)、μ(mu)、α(alpha)、δ(delta)或ε(epsilon))重链恒定区的IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE)。恒定区或类别决定了后续的抗体效应功能,所述功能包括补体活化(Kabat,E.A.,Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry,第二版,第413-436页,Holt,Rinehart,Winston(1976)),和其它细胞反应(Andrews,D.W. 等 ,Clinical Immunobiology, 第 1-18 页 ,W.B.Sanders(1980);Kohl,S.等,Immunology,48:187(1983));而可变区决定了将与它反应的抗原。轻链被分类为κ(kappa)或λ(lambda)。每种重链类别可以与κ或λ轻链一起制备。当通过杂交瘤或通过B细胞来产生免疫球蛋白时,轻链与重链彼此共价键合,并且两条重链的“尾”部分由共价二硫键彼此键合。
[0181] 措辞“可变区”或“VR”是指抗体中每对轻链与重链内直接参与抗体与抗原结合的结构域。每条重链在一端上具有可变域(VH),接着是多个恒定域。每条轻链在一端上具有可变域(VL),并且在它的另一端上具有恒定域;轻链的恒定域与重链的第一恒定域对准,并且轻链可变域与重链的可变域对准。
[0182] 措辞“互补决定区”、“高变区”或“CDR”是指存在于抗体的轻链或重链的可变区中的一个或多个高变区或互补决定区(CDR)(参见Kabat,E.A.等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,(1987))。这些措辞包括由Kabat等(“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”Kabat E.等,US Dept.of Health and Human Services,1983)所定义的高变区或在抗体三维结构中的高变环(Chothia和Lesk,J Mol.Biol.196901-917(1987))。每条链中的CDR由框架区而保持紧密靠近,并且与其它链中的CDR一起促成抗原结合位点的形成。在CDR内存在被描述为选择性决定区(SDR)的选择氨基酸,所述选择性决定区表示在抗体-抗原相互作用中由CDR使用的关键接触残基(Kashmiri,S.,Methods,36:25-34(2005))。
[0183] 措辞“框架区”或“FR”是指抗体轻链和重链的可变区内的一个或多个框架区(参见Kabat,E.A.等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,(1987))。这些措辞包括穿插在抗体轻链和重链可变区内的CDR之间的那些氨基酸序列区。
[0184] 抗NGF抗体和其对NGF具有结合活性的结合片段
[0185] 抗体Ab1
[0186] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab1或其片段或与Ab1结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:ALVMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQNIYSNLAWYQQRPGQRPKLLIYGASNLDAGVPSRFRGSGSGTEYTLTISDLECDDVGTYYCQSAFDSDSTENTFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:1)。
[0187] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:ALVMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQNIYSNLAWYQQRPGQRPKLLIYGASNLDAGVPSRFRGSGSGTEYTLTISDLECDDVGTYYCQSAFDSDSTENTFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:2)。
[0188] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGVITSIGSTVYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGYDDYDEMTYFNIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)。
[0189] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGLEWIGVITSIGSTVYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGYDDYDEMTYFNIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:4)。
[0190] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、以及SEQ ID NO:7中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:1或轻链序列SEQ ID NO:2的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、以及SEQ ID NO:10中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:3或重链序列SEQ ID NO:4的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0191] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
[0192] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、以及SEQ ID NO:7中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:1或轻链序列SEQ ID NO:2的互补决定区(CDR或高变区)。
[0193] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、以及SEQ ID NO:10中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:3或重链序列SEQ ID NO:4的互补决定区(CDR或高变区)。
[0194] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:1的可变轻链区、SEQ ID NO:3的可变重链区、SEQ ID NO:1的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、以及SEQ ID NO:7)、以及SEQ ID NO:3的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、以及SEQ ID NO:10)。
[0195] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab1,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0196] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab1,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:1和可变重链序列SEQ ID NO:3。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0197] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab1进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab1或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0198] 抗体Ab2
[0199] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab2或其片段或与Ab2结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且还抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYGASNLDAGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQSAFDSDSTENTFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:11)。
[0200] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYGASNLDAGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQSAFDSDSTENTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:12)。
[0201] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGVITSIGSTVYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYDDYDEMTYFNIWGQGTLVTVSS(SE Q ID NO:13)。
[0202] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSYAMSWVRQAPGKGLEWVGVITSIGSTVYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYDDYDEMTYFNIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:14)。
[0203] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、以及SEQ ID NO:17中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:11或轻链序列SEQ ID NO:12的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、以及SEQ ID NO:20中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:13或重链序列SEQ ID NO:14的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0204] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14。
[0205] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、以及SEQ ID NO:17中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:11或轻链序列SEQ ID NO:12的互补决定区(CDR或高变区)。
[0206] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、以及SEQ ID NO:20中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:13或重链序列SEQ ID NO:14的互补决定区(CDR或高变区)。
[0207] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:11的可变轻链区、SEQ ID NO:13的可变重链区、SEQ ID NO:11的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、以及SEQ ID NO:17)、以及SEQ ID NO:13的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、以及SEQ ID NO:20)。
[0208] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,人源化抗NGF抗体是Ab2,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0209] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab2,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:11和可变重链序列SEQ ID NO:13。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:11和/或SEQ ID NO:13的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0210] 在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab2或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0211] 抗体Ab3
[0212] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab3或其片段或与Ab3结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AVLTQTPSPVSAAMGDTVTIKCQSSQSVYKNNYLSWYQQKPGQPPRLLIYDASNLPSGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGDYDDDADNAFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:21)。
[0213] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AVLTQTPSPVSAAMGDTVTIKCQSSQSVYKNNYLSWYQQKPGQPPRLLIYDASNLPSGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGDYDDDADNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:22)。
[0214] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYVMIWVRQAPGKGLEYIGITWSAGTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCAGGGGSIYDIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:23)。
[0215] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYVMIWVRQAPGKGLEYIGITWSAGTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCAGGGGSIYDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:24)。
[0216] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、以及SEQ ID NO:27中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:21或轻链序列SEQ ID NO:22的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、以及SEQ ID NO:30中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:23或重链序列SEQ ID NO:24的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0217] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24。
[0218] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、以及SEQ ID NO:27中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:21或轻链序列SEQ ID NO:22的互补决定区(CDR或高变区)。
[0219] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、以及SEQ ID NO:30中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:23或重链序列SEQ ID NO:24的互补决定区(CDR或高变区)。
[0220] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:21的可变轻链区、SEQ ID NO:23的可变重链区、SEQ ID NO:21的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、以及SEQ ID NO:27)、以及SEQ ID NO:23的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、以及SEQ ID NO:30)。
[0221] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab3,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0222] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab3,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:21和可变重链序列SEQ ID NO:23。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:21和/或SEQ ID NO:23的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0223] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab3进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab3或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0224] 抗体Ab4
[0225] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab4或其片段或与Ab4结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSQSVYKNNYLSWYQQKPGKAPKLLIYDASNLPSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCLGDYDDDADNAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:31)。
[0226] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSQSVYKNNYLSWYQQKPGKAPKLLIYDASNLPSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCLGDYDDDADNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:32)。
[0227] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSYVMIWVRQAPGKGLEYIGITWSAGTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGGGSIYDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:33)。
[0228] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSYVMIWVRQAPGKGLEYIGITWSAGTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGGGSIYDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:34)。
[0229] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、以及SEQ ID NO:37中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:31或轻链序列SEQ ID NO:32的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、以及SEQ ID NO:40中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:33或重链序列SEQ ID NO:34的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0230] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34。
[0231] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、以及SEQ ID NO:37中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:31或轻链序列SEQ ID NO:32的互补决定区(CDR或高变区)。
[0232] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、以及SEQ ID NO:40中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:33或重链序列SEQ ID NO:34的互补决定区(CDR或高变区)。
[0233] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:31的可变轻链区、SEQ ID NO:33的可变重链区、SEQ ID NO:31的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、以及SEQ ID NO:37)、以及SEQ ID NO:33的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、以及SEQ ID NO:40)。
[0234] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab4,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:34,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0235] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab4,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:31和可变重链序列SEQ ID NO:33。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:31和/或SEQ ID NO:33的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0236] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab4进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab4或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0237] 抗体Ab5
[0238] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab5或其片段或与Ab5结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSIYSNLAWYQQRPGQPPKLLIYDASTLESGVPSRFKGSGSGTEYTLTISGVECADAASYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:41)。
[0239] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSIYSNLAWYQQRPGQPPKLLIYDASTLESGVPSRFKGSGSGTEYTLTISGVECADAASYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:42)。
[0240] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSNYAVGWVRQAPGKGLEWIGIIGRNGNTWYASWARGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:43)。
[0241] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSNYAVGWVRQAPGKGLEWIGIIGRNGNTWYASWARGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:44)。
[0242] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、以及SEQ ID NO:47中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:41或轻链序列SEQ ID NO:42的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、以及SEQ ID NO:50中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:43或重链序列SEQ ID NO:44的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0243] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:42。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44。
[0244] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、以及SEQ ID NO:47中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:41或轻链序列SEQ ID NO:42的互补决定区(CDR或高变区)。
[0245] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、以及SEQ ID NO:50中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:43或重链序列SEQ ID NO:44的互补决定区(CDR或高变区)。
[0246] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:41的可变轻链区、SEQ ID NO:43的可变重链区、SEQ ID NO:41的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、以及SEQ ID NO:47)、以及SEQ ID NO:43的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、以及SEQ ID NO:50)。
[0247] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab5,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0248] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab5,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:41和可变重链序列SEQ ID NO:43。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:43的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0249] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab5进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab5或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0250] 抗体Ab6
[0251] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab6或其片段或与Ab6结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:51)。
[0252] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:52)。
[0253] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSNYAVGWVRQAPGKGLEWVGIIGRNGNTWYASSARGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSS(SE Q ID NO:53)。
[0254] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSNYAVGWVRQAPGKGLEWVGIIGRNGNTWYASSARGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:54)。
[0255] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:52的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:54的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0256] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:52。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54。
[0257] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:52的互补决定区(CDR或高变区)。
[0258] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:54的互补决定区(CDR或高变区)。
[0259] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:51的可变轻链区、SEQ ID NO:53的可变重链区、SEQ ID NO:51的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57)、以及SEQ ID NO:53的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60)。
[0260] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab6,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:54,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0261] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab6,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:51和可变重链序列SEQ ID NO:53。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0262] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab6进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab6或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0263] 抗体Ab7
[0264] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab7或其片段或与Ab7结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:ADVVMTQTPASVSQPVGGTVTIKCQASEDIYNLLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISGLECADAATYYCQNNYLVTTYGVAFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:61)。
[0265] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:ADVVMTQTPASVSQPVGGTVTIKCQASEDIYNLLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISGLECADAATYYCQNNYLVTTYGVAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:62)。
[0266] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMIWVRQAPGKGLEYIGYIDTDTSAYYASWVKGRFTISRTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSYAAYGGYPATFDPWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:63)。
[0267] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMIWVRQAPGKGLEYIGYIDTDTSAYYASWVKGRFTISRTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSYAAYGGYPATFDPWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:64)。
[0268] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、以及SEQ ID NO:67中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:61或轻链序列SEQ ID NO:62的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、以及SEQ ID NO:70中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:63或重链序列SEQ ID NO:64的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0269] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:62。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64。
[0270] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、以及SEQ ID NO:67中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:61或轻链序列SEQ ID NO:62的互补决定区(CDR或高变区)。
[0271] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、以及SEQ ID NO:70中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:63或重链序列SEQ ID NO:64的互补决定区(CDR或高变区)。
[0272] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:61的可变轻链区、SEQ ID NO:63的可变重链区、SEQ ID NO:61的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、以及SEQ ID NO:67)、以及SEQ ID NO:63的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、以及SEQ ID NO:70)。
[0273] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab7,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0274] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab7,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:61和可变重链序列SEQ ID NO:63。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:63的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0275] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab7进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab7或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0276] 抗体Ab8
[0277] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab8或其片段或与Ab8结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASEDIYNLLAWYQQKPGKVPKLLIYSASTLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQNNYLVTTYGVAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:71)。
[0278] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASEDIYNLLAWYQQKPGKVPKLLIYSASTLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQNNYLVTTYGVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:72)。
[0279] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMIWVRQAPGKGLEYIGYIDTDTSAYYASSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARSYAAYGGYPATFDPWGQGTLVTVSS(S EQ ID NO:73)。
[0280] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMIWVRQAPGKGLEYIGYIDTDTSAYYASSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARSYAAYGGYPATFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:74)。
[0281] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、以及SEQ ID NO:77中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:71或轻链序列SEQ ID NO:72的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、以及SEQ ID NO:80中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:73或重链序列SEQ ID NO:74的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0282] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:72。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:73或SEQ ID NO:74。
[0283] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、以及SEQ ID NO:77中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:71或轻链序列SEQ ID NO:72的互补决定区(CDR或高变区)。
[0284] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、以及SEQ ID NO:80中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:73或重链序列SEQ ID NO:74的互补决定区(CDR或高变区)。
[0285] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:71的可变轻链区、SEQ ID NO:73的可变重链区、SEQ ID NO:71的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、以及SEQ ID NO:77)、以及SEQ ID NO:73的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、以及SEQ ID NO:80)。
[0286] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab8,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:74,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0287] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab8,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:71和可变重链序列SEQ ID NO:73。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:71和/或SEQ ID NO:73的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0288] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab8进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab8或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0289] 抗体Ab9
[0290] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab9或其片段或与Ab9结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASENIGSYLAWYQQKPGQPPELLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECADAATYYCQQGYNSENLDNAFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:81)。
[0291] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASENIGSYLAWYQQKPGQPPELLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECADAATYYCQQGYNSENLDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:82)。
[0292] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSMYSMGWVRQAPGKGLEYIGWISYGGTAYYASWAKGRFTISKTSTTVELKITSPTIEDTATYFCARETPVNYYLDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:83)。
[0293] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSMYSMGWVRQAPGKGLEYIGWISYGGTAYYASWAKGRFTISKTSTTVELKITSPTIEDTATYFCARETPVNYYLDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:84)。
[0294] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、以及SEQ ID NO:87中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:81或轻链序列SEQ ID NO:82的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、以及SEQ ID NO:90中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:83或重链序列SEQ ID NO:84的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0295] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:82。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:83或SEQ ID NO:84。
[0296] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、以及SEQ ID NO:87中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:81或轻链序列SEQ ID NO:82的互补决定区(CDR或高变区)。
[0297] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、以及SEQ ID NO:90中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:83或重链序列SEQ ID NO:84的互补决定区(CDR或高变区)。
[0298] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:81的可变轻链区、SEQ ID NO:83的可变重链区、SEQ ID NO:81的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、以及SEQ ID NO:87)、以及SEQ ID NO:83的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、以及SEQ ID NO:90)。
[0299] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab9,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:84,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0300] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab9,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:81和可变重链序列SEQ ID NO:83。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:81和/或SEQ ID NO:83的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0301] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab9进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab9或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0302] 抗体Ab10
[0303] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab10或其片段或与Ab10结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AYDMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASENIGSYLAWYQQKPGKVPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYNSENLDNAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:91)。
[0304] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AYDMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASENIGSYLAWYQQKPGKVPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYNSENLDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:92)。
[0305] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSMYSMGWVRQAPGKGLEYIGWISYGGTAYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARETPVNYYLDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:93)。
[0306] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSMYSMGWVRQAPGKGLEYIGWISYGGTAYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARETPVNYYLDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:94)。
[0307] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、以及SEQ ID NO:97中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:91或轻链序列SEQ ID NO:92的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、以及SEQ ID NO:100中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:93或重链序列SEQ ID NO:94的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0308] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:94。
[0309] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、以及SEQ ID NO:97中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:91或轻链序列SEQ ID NO:92的互补决定区(CDR或高变区)。
[0310] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、以及SEQ ID NO:100中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:93或重链序列SEQ ID NO:94的互补决定区(CDR或高变区)。
[0311] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:91的可变轻链区、SEQ ID NO:93的可变重链区、SEQ ID NO:91的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、以及SEQ ID NO:97)、以及SEQ ID NO:93的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、以及SEQ ID NO:100)。
[0312] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab10,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:94,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0313] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab10,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:91和可变重链序列SEQ ID NO:93。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:91和/或SEQ ID NO:93的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0314] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab10进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab10或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0315] 抗体Ab11
[0316] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab11或其片段或与Ab11结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AFELTQTPSSVEAAVGGTVTIKCQASQNIVTNLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYFCQSYDGFNSAGFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:101)。
[0317] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AFELTQTPSSVEAAVGGTVTIKCQASQNIVTNLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYFCQSYDGFNSAGFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:102)。
[0318] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSGYDMSWVRQAPGKGLEYIGLISYDGNTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSLYAGPNAGIGPFNIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:103)。
[0319] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSGYDMSWVRQAPGKGLEYIGLISYDGNTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSLYAGPNAGIGPFNIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:104)。
[0320] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、以及SEQ ID NO:107中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:101或轻链序列SEQ ID NO:102的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、以及SEQ ID NO:110中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:103或重链序列SEQ ID NO:104的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0321] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:101或SEQ ID NO:102。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:103或SEQ ID NO:104。
[0322] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、以及SEQ ID NO:107中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:101或轻链序列SEQ ID NO:102的互补决定区(CDR或高变区)。
[0323] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、以及SEQ ID NO:110中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:103或重链序列SEQ ID NO:104的互补决定区(CDR或高变区)。
[0324] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:101的可变轻链区、SEQ ID NO:103的可变重链区、SEQ ID NO:101的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、以及SEQ ID NO:107)、以及SEQ ID NO:103的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、以及SEQ ID NO:110)。
[0325] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab11,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:104,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0326] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab11,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:101和可变重链序列SEQ ID NO:103。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:101和/或SEQ ID NO:103的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0327] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab11进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab11或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0328] 抗体Ab12
[0329] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab12或其片段或与Ab12结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AFQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQNIVTNLAWYQQKPGKVPKLLIYGASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYDGFNSAGFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:111)。
[0330] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AFQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQNIVTNLAWYQQKPGKVPKLLIYGASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQSYDGFNSAGFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:112)。
[0331] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLSGYDMSWVRQAPGKGLEWVGLISYDGNTYYATSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARSLYAGPNAGIGPFNIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:113)。
[0332] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLSGYDMSWVRQAPGKGLEWVGLISYDGNTYYATSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARSLYAGPNAGIGPFNIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:114)。
[0333] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、以及SEQ ID NO:117中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:111或轻链序列SEQ ID NO:112的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、以及SEQ ID NO:120中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:113或重链序列SEQ ID NO:114的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0334] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:111或SEQ ID NO:112。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:113或SEQ ID NO:114。
[0335] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、以及SEQ ID NO:117中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:111或轻链序列SEQ ID NO:112的互补决定区(CDR或高变区)。
[0336] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、以及SEQ ID NO:120中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:113或重链序列SEQ ID NO:114的互补决定区(CDR或高变区)。
[0337] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:111的可变轻链区、SEQ ID NO:113的可变重链区、SEQ ID NO:111的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、以及SEQ ID NO:117)、以及SEQ ID NO:113的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、以及SEQ ID NO:120)。
[0338] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab12,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:112和SEQ ID NO:114,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0339] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab12,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:111和可变重链序列SEQ ID NO:113。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:111和/或SEQ ID NO:113的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0340] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab12进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab12或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0341] 抗体Ab13
[0342] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab13或其片段或与Ab13结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFKGGGSGTDFTLTISDVQCDAAATYYCAGGYTSSSDNAFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:121)。
[0343] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFKGGGSGTDFTLTISDVQCDAAATYYCAGGYTSSSDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:122)。
[0344] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSVEASGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSTYWMSWVRQAPGKGLEWIGDIYFSNEETNYASWAKGRFTISKTSTTVDLNVISPTTEDTATYFCARGSPDVDIGIDMWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:123)。
[0345] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSVEASGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSTYWMSWVRQAPGKGLEWIGDIYFSNEETNYASWAKGRFTISKTSTTVDLNVISPTTEDTATYFCARGSPDVDIGIDMWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:124)。
[0346] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、以及SEQ ID NO:127中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:121或轻链序列SEQ ID NO:122的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、以及SEQ ID NO:130中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:123或重链序列SEQ ID NO:124的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0347] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:121或SEQ ID NO:122。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:123或SEQ ID NO:124。
[0348] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、以及SEQ ID NO:127中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:121或轻链序列SEQ ID NO:122的互补决定区(CDR或高变区)。
[0349] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、以及SEQ ID NO:130中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:123或重链序列SEQ ID NO:124的互补决定区(CDR或高变区)。
[0350] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:121的可变轻链区、SEQ ID NO:123的可变重链区、SEQ ID NO:121的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、以及SEQ ID NO:127)、以及SEQ ID NO:123的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、以及SEQ ID NO:130)。
[0351] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab13,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:124,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0352] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab13,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:121和可变重链序列SEQ ID NO:123。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:121和/或SEQ ID NO:123的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0353] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab13进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab13或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0354] 抗体Ab14
[0355] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab14或其片段或与Ab14结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGKVPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCAGGYTSSSDNAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:131)。
[0356] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGKVPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCAGGYTSSSDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:132)。
[0357] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSTYWMSWVRQAPGKGLEWVGDIYFSNEETNYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSPDVDIGIDMWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:133)。
[0358] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSTYWMSWVRQAPGKGLEWVGDIYFSNEETNYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSPDVDIGIDMWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:134)。
[0359] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136、以及SEQ ID NO:137中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:131或轻链序列SEQ ID NO:132的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、以及SEQ ID NO:140中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:133或重链序列SEQ ID NO:134的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0360] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:131或SEQ ID NO:132。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:133或SEQ ID NO:134。
[0361] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136、以及SEQ ID NO:137中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:131或轻链序列SEQ ID NO:132的互补决定区(CDR或高变区)。
[0362] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、以及SEQ ID NO:140中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:133或重链序列SEQ ID NO:134的互补决定区(CDR或高变区)。
[0363] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:131的可变轻链区、SEQ ID NO:133的可变重链区、SEQ ID NO:131的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136、以及SEQ ID NO:137)、以及SEQ ID NO:133的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、以及SEQ ID NO:140)。
[0364] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab14,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:134,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0365] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab14,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:131和可变重链序列SEQ ID NO:133。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:131和/或SEQ ID NO:133的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0366] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab14进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab14或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0367] 抗体Ab15
[0368] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab15或其片段或与Ab15结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AAVLTQTPSPVSAAVGDTVTIKCQSSQSVYKNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASNLPSGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGDYDDDTDNGFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:141)。
[0369] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AAVLTQTPSPVSAAVGDTVTIKCQSSQSVYKNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYDASNLPSGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGDYDDDTDNGFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:142)。
[0370] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMIWVRQAPGKGLEYIGIIWSGGTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLQITSPTTEDAATYFCAAGGGSIYDVWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:143)。
[0371] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMIWVRQAPGKGLEYIGIIWSGGTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLQITSPTTEDAATYFCAAGGGSIYDVWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:144)。
[0372] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、以及SEQ ID NO:147中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:141或轻链序列SEQ ID NO:142的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、以及SEQ ID NO:150中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:143或重链序列SEQ ID NO:144的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0373] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:141或SEQ ID NO:142。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144。
[0374] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、以及SEQ ID NO:147中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:141或轻链序列SEQ ID NO:142的互补决定区(CDR或高变区)。
[0375] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、以及SEQ ID NO:150中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:143或重链序列SEQ ID NO:144的互补决定区(CDR或高变区)。
[0376] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:141的可变轻链区、SEQ ID NO:143的可变重链区、SEQ ID NO:141的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、以及SEQ ID NO:147)、以及SEQ ID NO:143的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、以及SEQ ID NO:150)。
[0377] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab15,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:142和SEQ ID NO:144,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0378] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab15,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:141和可变重链序列SEQ ID NO:143。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:141和/或SEQ ID NO:143的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0379] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab15进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab15或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0380] 抗体Ab16
[0381] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab16或其片段或与Ab16结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:ALVMTQTPSSTSEPVGGTVTINCQASQNIGNDLSWYQQKPGQPPELLIYSTSKLATGVPKRFSGSRSGTQFTLTISDLECDDAATYYCLGVYSYISDDGNAFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:151)。
[0382] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:ALVMTQTPSSTSEPVGGTVTINCQASQNIGNDLSWYQQKPGQPPELLIYSTSKLATGVPKRFSGSRSGTQFTLTISDLECDDAATYYCLGVYSYISDDGNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:152)。
[0383] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSVEEFGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNNYAMTWVRQAPGKGLEWIGIIGSIGTTYYASWAKGRFFISKTSTTVDLKIISPTTEDTATYFCARDAGVTVDGYGYYFNIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:153)。
[0384] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSVEEFGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNNYAMTWVRQAPGKGLEWIGIIGSIGTTYYASWAKGRFFISKTSTTVDLKIISPTTEDTATYFCARDAGVTVDGYGYYFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:154)。
[0385] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156、以及SEQ ID NO:157中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:151或轻链序列SEQ ID NO:152的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、以及SEQ ID NO:160中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:153或重链序列SEQ ID NO:154的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0386] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:151或SEQ ID NO:152。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:153或SEQ ID NO:154。
[0387] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156、以及SEQ ID NO:157中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:151或轻链序列SEQ ID NO:152的互补决定区(CDR或高变区)。
[0388] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、以及SEQ ID NO:160中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:153或重链序列SEQ ID NO:154的互补决定区(CDR或高变区)。
[0389] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:151的可变轻链区、SEQ ID NO:153的可变重链区、SEQ ID NO:151的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156、以及SEQ ID NO:157)、以及SEQ ID NO:153的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、以及SEQ ID NO:160)。
[0390] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab16,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:152和SEQ ID NO:154,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0391] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab16,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:151和可变重链序列SEQ ID NO:153。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:151和/或SEQ ID NO:153的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0392] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab16进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab16或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0393] 抗体Ab17
[0394] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab17或其片段或与Ab17结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AIEMTQTPFSVSAAVGGTVTIKCQASQTISNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGYTISNVDNNVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:161)。
[0395] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AIEMTQTPFSVSAAVGGTVTIKCQASQTISNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGYTISNVDNNVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:162)。
[0396] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCAASGFSLTGYNLVWVRQAPGKGLEWIGFISYGDTTYYASWAKGRFTISKTSTTVTLTITDLQPSDTGTYFCARETANTYDYGIWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:163)。
[0397] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCAASGFSLTGYNLVWVRQAPGKGLEWIGFISYGDTTYYASWAKGRFTISKTSTTVTLTITDLQPSDTGTYFCARETANTYDYGIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:164)。
[0398] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、以及SEQ ID NO:167中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:161或轻链序列SEQ ID NO:162的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169、以及SEQ ID NO:170中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:163或重链序列SEQ ID NO:164的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0399] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:161或SEQ ID NO:162。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:163或SEQ ID NO:164。
[0400] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、以及SEQ ID NO:167中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:161或轻链序列SEQ ID NO:162的互补决定区(CDR或高变区)。
[0401] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169、以及SEQ ID NO:170中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:163或重链序列SEQ ID NO:164的互补决定区(CDR或高变区)。
[0402] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:161的可变轻链区、SEQ ID NO:163的可变重链区、SEQ ID NO:161的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、以及SEQ ID NO:167)、以及SEQ ID NO:163的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169、以及SEQ ID NO:170)。
[0403] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab17,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:162和SEQ ID NO:164,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0404] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab17,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:161和可变重链序列SEQ ID NO:163。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:161和/或SEQ ID NO:163的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0405] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab17进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab17或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0406] 抗体Ab18
[0407] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab18或其片段或与Ab18结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQTISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYGASNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYTISNVDNNVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:171)。
[0408] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQTISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYGASNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYTISNVDNNVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:172)。
[0409] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSGYNLVWVRQAPGKGLEWVGFISYGDTTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARETANTYDYGIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:173)。
[0410] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSGYNLVWVRQAPGKGLEWVGFISYGDTTYYASSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARETANTYDYGIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:174)。
[0411] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176、以及SEQ ID NO:177中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:171或轻链序列SEQ ID NO:172的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:179、以及SEQ ID NO:180中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:173或重链序列SEQ ID NO:174的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0412] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:171或SEQ ID NO:172。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:173或SEQ ID NO:174。
[0413] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176、以及SEQ ID NO:177中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:171或轻链序列SEQ ID NO:172的互补决定区(CDR或高变区)。
[0414] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:179、以及SEQ ID NO:180中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:173或重链序列SEQ ID NO:174的互补决定区(CDR或高变区)。
[0415] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:171的可变轻链区、SEQ ID NO:173的可变重链区、SEQ ID NO:171的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176、以及SEQ ID NO:177)、以及SEQ ID NO:173的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:179、以及SEQ ID NO:180)。
[0416] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab18,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:172和SEQ ID NO:174,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0417] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab18,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:171和可变重链序列SEQ ID NO:173。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:171和/或SEQ ID NO:173的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0418] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab18进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab18或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0419] 抗体Ab19
[0420] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab19或其片段或与Ab19结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDVQCDAAATYYCAGGYSSSSDNAFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:181)。
[0421] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDVQCDAAATYYCAGGYSSSSDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:182)。
[0422] 本发明进一步包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:QSVEASGGRLVMPGGSLTLTCTASGFSLSTYWMSWVRQAPGKGLEWIGDIYFSNEETNYATWAKGRFTISKTSTTVDLNVISPTTEDTATYFCARGSPDVEIAIDMWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:183)。
[0423] 本发明还包括嵌合抗体,所述嵌合抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:QSVEASGGRLVMPGGSLTLTCTASGFSLSTYWMSWVRQAPGKGLEWIGDIYFSNEETNYATWAKGRFTISKTSTTVDLNVISPTTEDTATYFCARGSPDVEIAIDMWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:184)。
[0424] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186、以及SEQ ID NO:187中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:181或轻链序列SEQ ID NO:182的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189、以及SEQ ID NO:190中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:183或重链序列SEQ ID NO:184的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0425] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:182。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:184。
[0426] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186、以及SEQ ID NO:187中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:181或轻链序列SEQ ID NO:182的互补决定区(CDR或高变区)。
[0427] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189、以及SEQ ID NO:190中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:183或重链序列SEQ ID NO:184的互补决定区(CDR或高变区)。
[0428] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:181的可变轻链区、SEQ ID NO:183的可变重链区、SEQ ID NO:181的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186、以及SEQ ID NO:187)、以及SEQ ID NO:183的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189、以及SEQ ID NO:190)。
[0429] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合抗NGF抗体是Ab19,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:184,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0430] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab19,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:181和可变重链序列SEQ ID NO:183。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:181和/或SEQ ID NO:183的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0431] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab19进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab19或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0432] 抗体Ab20
[0433] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab20或其片段或与Ab20结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGKVPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCAGGYTSSSDNAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:191)。
[0434] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQSSQNVYKNNYLSWYQQKPGKVPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCAGGYTSSSDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:192)。
[0435] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSTYWMSWVRQAPGKGLEWVGDIYFSNEETNYATSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSPDVEIAIDMWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:193)。
[0436] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSTYWMSWVRQAPGKGLEWVGDIYFSNEETNYATSAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSPDVEIAIDMWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:194)。
[0437] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:196、以及SEQ ID NO:197中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:191或轻链序列SEQ ID NO:192的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:199、以及SEQ ID NO:200中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:193或重链序列SEQ ID NO:194的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0438] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:192。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:194。
[0439] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:196、以及SEQ ID NO:197中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:191或轻链序列SEQ ID NO:192的互补决定区(CDR或高变区)。
[0440] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:199、以及SEQ ID NO:200中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:193或重链序列SEQ ID NO:194的互补决定区(CDR或高变区)。
[0441] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:191的可变轻链区、SEQ ID NO:193的可变重链区、SEQ ID NO:191的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:196、以及SEQ ID NO:197)、以及SEQ ID NO:193的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:199、以及SEQ ID NO:200)。
[0442] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab20,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:192和SEQ ID NO:194,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0443] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为本文所描述的对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段或MetMab样单价剂。对于抗体Ab20,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:191和可变重链序列SEQ ID NO:193。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:191和/或SEQ ID NO:193的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0444] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab20进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab20或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0445] 抗体Ab21
[0446] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了抗体Ab21或其片段或与Ab21结合相同或重叠的表位的抗体或抗体片段、以及其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:51)。
[0447] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:401)。
[0448] 本发明进一步包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的可变重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSNYAVGWVRQAPGKGLEWVGIIGRNGNTWYASSARGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSS(SE Q ID NO:53)。
[0449] 本发明还包括嵌合或人源化抗体,所述嵌合或人源化抗体对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSNYAVGWVRQAPGKGLEWVGIIGRNGNTWYASSARGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:402)。
[0450] 本发明进一步涵盖了如下的抗体,所述抗体包含:多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:401的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:402的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体或其片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0451] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:401。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:402。
[0452] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:401的互补决定区(CDR或高变区)。
[0453] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:402的互补决定区(CDR或高变区)。
[0454] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:51的可变轻链区、SEQ ID NO:53的可变重链区、SEQ ID NO:51的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57)、以及SEQ ID NO:53的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60)。
[0455] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体是Ab21,所述抗体包含或者其组成为SEQ ID NO:401和SEQ ID NO:402,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0456] 在本发明的另一个特别优选的实施方案中,抗体片段包含或者其组成为对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段。对于抗体Ab21,所述Fab片段包括可变轻链序列SEQ ID NO:51和可变重链序列SEQ ID NO:53。本发明的这个实施方案进一步涵盖了所述Fab中SEQ ID NO:51和/或SEQ ID NO:53的添加、缺失以及变体,同时保留对NGF的结合特异性。
[0457] 在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过对Ab21进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab21或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0458] 抗体片段Fab1
[0459] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了与Fab1结合相同或重叠的表位的Fab片段和其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述Fab片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括Fab抗体片段,所述Fab抗体片段对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:405)。
[0460] 本发明进一步包括Fab抗体片段,所述Fab抗体片段对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSNYAVGWVRQAPGKGLEWVGIIGRNGNTWYASSARGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTH(SEQ ID NO:406)。
[0461] 本发明进一步涵盖了如下的抗体片段,所述抗体片段包含:多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:405的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:406的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0462] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:405。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:406。
[0463] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:405的互补决定区(CDR或高变区)。
[0464] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:406的互补决定区(CDR或高变区)。
[0465] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:51的可变轻链区、SEQ ID NO:53的可变重链区、SEQ ID NO:51的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57)、以及SEQ ID NO:53的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60)。
[0466] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,抗NGF抗体片段是Fab1,所述抗体片段包含SEQ ID NO:405和SEQ ID NO:406,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。在本发明的一个实施方案中,抗体片段Fab1可以通过对Ab21进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。
[0467] 抗体片段Fab2
[0468] 在一个示例性实施方案中,本发明提供了与Fab2结合相同或重叠的表位的Fab片段和其单独或与另一种活性剂(例如NSAID或阿片类镇痛剂或另一种生物制剂)联合用于治疗或预防疼痛或痛觉缺失的用途,其中所述抗体或抗体片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与p75缔合和/或抑制或预防疼痛。在一个实施方案中,本发明包括Fab抗体片段,所述Fab抗体片段对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的轻链序列:DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSIYSNLAWYQQKPGKAPKLLIYDASTLESGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPDDFATYYCQQGFTVSDIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:407)。
[0469] 本发明进一步包括Fab抗体片段,所述Fab抗体片段对NGF具有结合特异性并且具有包含以下所阐述的序列的重链序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSNYAVGWVRQAPGKGLEWVGIIGRNGNTWYASSARGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGRSVAYYVFNIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTH(SEQ ID NO:408)。
[0470] 本发明进一步涵盖了如下的抗体片段,所述抗体片段包含:多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:407的互补决定区(CDR或高变区);和/或多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:408的互补决定区(CDR或高变区);或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为以上所阐述的CDR、可变重链序列和可变轻链序列、以及重链序列和轻链序列中的一个或多个的组合,包括它们所有在内。
[0471] 本发明还涵盖了对NGF具有结合特异性的抗体片段。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:407。在本发明的另一个实施方案中,本发明的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:408。
[0472] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变轻链序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:407的互补决定区(CDR或高变区)。
[0473] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为多肽序列SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60中的一个或多个,所述多肽序列对应于可变重链序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:408的互补决定区(CDR或高变区)。
[0474] 本发明还涵盖了抗体片段,所述抗体片段包括本文所描述的抗体片段中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的抗体片段包含或者其组成为下列抗体片段中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):SEQ ID NO:51的可变轻链区、SEQ ID NO:53的可变重链区、SEQ ID NO:51的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、以及SEQ ID NO:57)、以及SEQ ID NO:53的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、以及SEQ ID NO:60)。
[0475] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,抗NGF抗体片段是Fab1,所述抗体片段包含SEQ ID NO:407和SEQ ID NO:408,并且具有本文所阐述的生物活性中的至少一种。
[0476] 在本文(以下)所描述的本发明的另一个实施方案中,Fab片段可以经由在以下各项中表达而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本发明的一个实施方案中,可以通过使用本文在实施例中所阐述的方案在巴斯德毕赤酵母中表达来产生抗体片段Fab2。
[0477] 在另一个实施方案中,抗体片段可能以下列非限制性形式中的一种或多种存在:Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv以及单链Fv抗体形式。在一个优选实施方案中,本文所描述的抗NGF抗体进一步包含κ恒定轻链序列,所述κ恒定轻链序列包含以下所阐述的序列:
[0478] VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:412)。
[0479] 在另一个优选实施方案中,本文所描述的抗NGF抗体进一步包含γ-1恒定重链多肽序列,所述γ-1恒定重链多肽序列包含以下所阐述的序列:
[0480] ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:413)。
[0481] 在另一个实施方案中,本发明涵盖了一种分离的抗NGF抗体,所述分离的抗NGF抗体包含选自以下的VH多肽序列:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402或其变体;并且进一步包含选自以下的VL多肽序列:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401或其变体,其中所述VH或VL多肽中的一个或多个框架残基(FR残基)已被另一个氨基酸残基取代,从而产生特异性结合NGF的抗NGF抗体。这些变体将优选地与上述可变多肽具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性并且产生结合NGF的抗体或抗体片段。本发明涵盖了这些抗体的人源化和嵌合形式。嵌合抗体可以包括源自于以下恒定区的Fc:IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恒定区。
[0482] 在本发明的一个实施方案中,在本文所提及的人源化过程开始之前,抗体或VH多肽或VL多肽起源于或选自一个或多个兔B细胞群体。
[0483] 在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体和其片段对p75或TrkA不具有结合特异性。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体和其片段抑制NGF与p75和/或TrkA缔合。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA和/或其多聚体缔合和/或拮抗其生物效应。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体和其片段抑制NGF与p75和/或其多聚体缔合并且抑制NGF与TrkA和/或其多聚体缔合,并且拮抗p75和TrkA的生物效应。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA和/或其多聚体缔合,而不明显抑制NGF与p75相互作用。本发明的抗体和抗体片段优选地拮抗p75和TrkA的生物效应中的一种或多种,取决于它们的结合选择性。
[0484] 如本文所述,可以对抗体和其片段进行翻译后修饰以便添加效应部分,如化学连接子、可检测的部分(例如像荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质、以及化学发光部分)或功能性部分(例如像链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂、以及放射性物质)。另外,可以如通过直接或间接连接水溶性聚合物(如聚乙二醇(PEG))来对主题抗体和抗体片段进行修饰以影响循环时间或半衰期。
[0485] 关于可检测的部分,另外的示例性酶包括但不限于辣根过氧化物酶、乙酰胆酯酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶以及萤光素酶。另外的示例性荧光物质包括但不限于若丹明(rhodamine)、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞形、二氯三嗪基胺、藻红蛋白以及丹磺酰氯。另外的示例性化学发光部分包括但不限于鲁米诺(luminol)。另外的示例性生物发光物质包括但不限于萤光素和水母发光蛋白。另外的示例性放射性物质包括但不限于:碘125 14 35 3 32
125( I)、14( C)、硫35( S)、氚(H)以及磷32( P)。
[0486] 关于功能性部分,示例性细胞毒性剂包括但不限于甲氨蝶呤(methotrexate)、氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺(decarbazine);烷化剂,如氮芥、噻替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、丝裂霉素C(mitomycin C)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、1-甲基亚硝脲、环磷酰胺(cyclothosphamide)、氮芥、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链脲霉素(streptozotocin)、丝裂霉素C、顺-二氯二胺合铂(II)(DDP)顺铂(cisplatin)以及卡铂(carboplatin)(伯尔定(paraplatin));蒽环类包括柔红霉素(daunorubicin)(以前的道诺霉素(daunomycin))、阿霉素(doxorubicin)(亚德里亚霉素(adriamycin))、地托比星(detorubicin)、洋红霉素(carminomycin)、伊达比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)以及比生群(bisantrene);抗生素包括更生霉素(dactinomycin)(放线菌素D(actinomycin D))、博来霉素(bleomycin)、刺孢霉素(calicheamicin)、光神霉素(mithramycin)、以及安曲霉素(anthramycin)(AMC);以及抗有丝分裂剂,如长春花生物碱、长春新碱(vincristine)以及长春碱(vinblastine)。其它细胞毒性剂包括紫杉醇(paclitaxel)(紫杉酚(taxol))、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、吉西他滨(gemcitabine)、细胞松弛素B、短杆菌肽D(gramicidin D)、溴化乙锭、吐根碱、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙碱、二羟基炭疽菌素二酮、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普洛尔(propranolol)、嘌呤霉素(puromycin)、丙卡巴肼(procarbazine)、羟基脲、天冬酰胺酶、皮质类甾醇、米托坦(mytotane)(O,P′-(DDD))、干扰素、以及这些细胞毒性剂的混合物。
[0487] 另外的细胞毒性剂包括但不限于化学治疗剂,如卡铂、顺铂、紫杉醇、吉西他滨、刺孢霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱以及博来霉素。来自植物和细菌的毒性酶,如蓖麻毒素、白喉毒素以及假单胞菌毒素可以与人源化或嵌合抗体或其结合片段缀合,以便产生细胞类型特异性杀死试剂(Youle等,Proc.Nat′l Acad.Sci.USA77:5483(1980);Gilliland等,Proc.Nat′l Acad.Sci.USA77:4539(1980);Krolick等,Proc.Nat′l Acad.Sci.USA77:5419(1980))。
[0488] 其它细胞毒性剂包括由Goldenberg在美国专利号6,653,104中所描述的细胞毒性核糖核酸酶。本发明的实施方案还涉及放射性免疫缀合物,其中在使用或不使用复合体形成剂的情况下使发射α或β粒子的放射性核素稳定地偶合至抗体或其结合片段。32 47 67 67
此类放射性核素包括β发射体,如磷-32( P)、钪-47( Sc)、-67( Cu)、镓-67( Ga)、
88 90 125 131 153 177
钇-88( Y)、钇-90( Y)、碘-125( I)、碘-131( I)、钐 -153( Sm)、镥-177( Lu)、
186 188 211 212
铼-186( Re)或 铼 -188( Re);和α 发 射 体,如 砹-211( At)、铅-212( Pb)、
212 213 225
铋-212( Bi)或铋-213( Bi)或锕-225( Ac)。
[0489] 用于将抗体或其结合片段缀合至可检测的部分等的方法在本领域中是已知的,例如像Hunter等,Nature144:945(1962);David等,Biochemistry13:1014(1974);Pain 等 ,J.Immunol.Meth.40:219(1981); 以 及 Nygren,J.,Histochem.and Cytochem.30:407(1982)所描述的那些方法。
[0490] 同样,可以如通过聚乙二醇化对抗体或抗体片段进行修饰以影响半衰期或循环时间。还可以对抗体或其片段进行化学修饰以提供另外的优点,如多肽的可溶性、稳定性以及循环时间(体内半衰期)增加或免疫原性减小(参见美国专利号4,179,337)。用于衍生化的化学部分可以选自水溶性聚合物,如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羟甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇等。可以在分子内的任意位置上或在分子内的预定位置上修饰抗体和其片段,并且所述抗体和其片段可以包括一个、两个、三个或更多个连接的化学部分。
[0491] 聚合物可以具有任何分子量,并且可以是分支或未分支的。针对聚乙二醇,优选的分子量是在约1kDa与约100kDa之间(术语“约”指示在聚乙二醇的制备物中,一些分子将比所述分子量重,一些分子将比所述分子量轻)以易于处理和制造。可以取决于所需的治疗型态(例如,所需的持续释放的持续时间、对生物活性可能存在的作用、处理的容易性、抗原性的程度或缺乏抗原性以及聚乙二醇对治疗性蛋白或类似物的其它已知的影响)来使用其它大小。举例来说,聚乙二醇可以具有以下平均分子量:约 200kDa、500kDa、1000kDa、1500kDa、2000kDa、2500kDa、3000kDa、3500kDa、4000kDa、
4500kDa、5000kDa、5500kDa、6000kDa、6500kDa、7000kDa、7500kDa、8000kDa、8500kDa、
9000kDa、9500kDa、10,000kDa、10,500kDa、11,000kDa、11,500kDa、12,000kDa、12,500kDa、
13,000kDa、13,500kDa、14,000kDa、14,500kDa、15,000kDa、15,500kDa、16,000kDa、
16,500kDa、17,000kDa、17,500kDa、18,000kDa、18,500kDa、19,000kDa、19,500kDa、
20,000kDa、25,000kDa、30,000kDa、35,000kDa、40,000kDa、50,000kDa、55,000kDa、
60,000kDa、65,000kDa、70,000kDa、75,000kDa、80,000kDa、85,000kDa、90,000kDa、
95,000kDa或100,000kDa。分支的聚乙二醇描述在例如美国专利号5,643,575;
Morpurgo 等 ,Appl.Biochem.Biotechnol.56:59-72(1996);Vorobjev 等 ,Nucleosides Nucleotides18:2745-2750(1999);以及Caliceti等,Bioconjug.Chem.10:638-646(1999)中,所述专利和参考文献各自的公开内容以引用的方式并入本文。
[0492] 存在许多可供本领域技术人员使用的连接方法,参见例如以引用的方式并入本文的EP0401384(将PEG偶合至G-CSF),还参见Malik等,Exp.Hematol.20:1028-1035(1992)(报道了使用三氟乙烷磺酰氯来对GM-CSF进行聚乙二醇化)。举例来说,可以通过氨基酸残基经由反应性基团(如游离的氨基或羧基)来共价结合聚乙二醇。反应性基团是可以与活化的聚乙二醇分子结合的基团。具有游离氨基的氨基酸残基可以包括赖氨酸残基和N端氨基酸残基,具有游离羧基的氨基酸残基可以包括天冬氨酸残基、谷氨酸残基以及C端氨基酸残基。硫氢基也可以被用作连接聚乙二醇分子的反应性基团。出于治疗性目的优选的是连接在氨基上,如连接在N端或赖氨酸基团上。
[0493] 如上所表明,聚乙二醇可以经由连接至多个氨基酸残基中的任一个而连接至蛋白质。举例来说,聚乙二醇可以经由与赖氨酸残基、组氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基或半胱氨酸残基形成共价键而连接至多肽。可以采用一种或多种反应化学方法将聚乙二醇连接至特定的氨基酸残基(例如,赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或多于一种类型的氨基酸残基(例如,赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸以及其组合)。
[0494] 或者,抗体或其片段可以经由与白蛋白(包括但不限于重组的人血清白蛋白或其片段或变体(参见例如1999年3月2日颁布的美国专利号5,876,969、EP专利0413622、以及1998年6月16日颁布的美国专利号5,766,883,所述专利以引用的方式整体并入本文))或其它循环血蛋白(如转蛋白或铁蛋白)融合而具有延长的体内半衰期。在一个优选实施方案中,将本发明的多肽和/或抗体(包括其片段或变体)与人血清白蛋白的成熟形式(即,如在EP专利0322094的图1和图2中所示的人血清白蛋白的氨基酸1-585)融合,所述专利以引用的方式整体并入本文。本发明还涵盖了编码本发明的融合蛋白的多核苷酸。
[0495] 本文所描述的实施方案进一步包括变体和等效物,所述变体和等效物与本文所阐述的抗体、抗体片段、双功能抗体、SMIP、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、多肽、可变区以及CDR大致上同源。这些可以含有例如保守性取代型突变(即,一个或多个氨基酸被类似的氨基酸取代)。举例来说,保守性取代是指一个氨基酸被属于相同一般类别的另一个氨基酸取代,例如,一个酸性氨基酸被另一个酸性氨基酸取代,一个碱性氨基酸被另一个碱性氨基酸取代,或一个中性氨基酸被另一个中性氨基酸取代。保守性氨基酸取代所指的意思在本领域中是熟知的。
[0496] 在另一个实施方案中,本发明涵盖了多肽序列,所述多肽序列与本文所阐述的抗体片段、可变区以及CDR的多肽序列中的任何一个或多个具有至少90%或更大的序列同源性。更优选的是,本发明涵盖了多肽序列,所述多肽序列与本文所阐述的抗体片段、可变区以及CDR的多肽序列中的任何一个或多个具有至少95%或更大的序列同源性,甚至更优选地具有至少96%、97%或98%或更大的序列同源性,并且还更优选地具有至少99%或更大的序列同源性。用于测定核酸和氨基酸序列之间的同源性的方法为本领域技术人员所熟知。
[0497] 在另一个实施方案中,本发明进一步涵盖了本文所阐述的抗体片段、可变区以及CDR的上述多肽同源物,所述多肽同源物进一步具有抗NGF活性。本文阐述了抗NGF活性的非限制性实例。
[0498] 在另一个实施方案中,本发明进一步涵盖了结合任何上述序列的抗独特型抗体的产生和用途。在一个示例性实施方案中,可以对已接受抗NGF抗体的受试者施用此类抗独特型抗体以调节、降低或中和抗NGF抗体的作用。此类抗独特型抗体还可以用于治疗特征在于存在抗NGF抗体的自身免疫性疾病。此类抗独特型抗体的另一种示例性用途是用于检测本发明的抗NGF抗体,例如用来监测存在于受试者血液或其它体液中的抗NGF抗体的水平。
[0499] 本发明还涵盖了包含本文所描述的任何多肽序列或多核苷酸序列的抗NGF抗体,所述多肽序列或多核苷酸序列取代本文所描述的任何其它多核苷酸序列。举例来说,但不限于此,本发明涵盖了包含本文所描述的任何可变轻链序列和可变重链序列的组合的抗体,并且进一步涵盖了由用本文所描述的任何CDR序列取代本文所描述的任何其它CDR序列而产生的抗体。
[0500] 本发明另外的示例性实施方案
[0501] 在另一个实施方案中,本发明涵盖了一种或多种抗人NGF抗体或其抗体片段,所述抗人NGF抗体或其抗体片段与选自以下的抗人NGF抗体特异性地结合完整人NGF多肽或其片段上一个或多个相同或重叠的线性或构象表位和/或竞争结合完整人NGF多肽或其片段上一个或多个相同或重叠的线性或构象表位:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。在一个优选实施方案中,抗人NGF抗体或其片段与Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab15或Ab16特异性地结合完整人NGF多肽或其片段上一个或多个相同的线性或构象表位和/或竞争结合完整人NGF多肽或其片段上一个或多个相同的线性或构象表位。
[0502] 本发明的一个优选实施方案涉及嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段),所述抗体和其片段对NGF具有结合特异性并且抑制由NGF与p75和TrkA受体结合所介导的生物活性。在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体选自Ab1、Ab2、Ab5至Ab14或Ab17至Ab21。
[0503] 本发明的另一个优选实施方案涉及嵌合或人源化抗体和其片段,所述抗体和其片段能够与NGF结合并且选择性地抑制由NGF与TrkA受体结合所介导的生物活性,而不明显抑制由NGF与p75受体结合所介导的生物活性。在本发明的一个特别优选的实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体选自Ab3、Ab4、Ab15或Ab16或与任何上述抗体竞争或结合相同或重叠的表位的抗体和抗体片段。在本发明的另一个实施方案中,涵盖了一种治疗与NGF相关的疾病或病症的方法,所述方法是通过仅影响经由TrkA所介导的生物活性,从而避开经由NGF与p75结合所介导的生物活性来实现的。在一个实施方案中,与NGF相关的疾病或病症是疼痛。本文提供了与NGF相关的疾病和病症的另一个清单。
[0504] 在本发明的另一个实施方案中,嵌合或人源化抗NGF抗体Ab3、Ab4、Ab15或Ab16或其片段(包括Fab片段)中的一种或多种被用于治疗与外科手术前和外科手术后相关的疼痛以及与肌肉骨骼系统的创伤或损伤相关的疼痛的方法中。因为不认为嵌合或人源化抗NGF抗体Ab3、Ab4、Ab15或Ab16会干扰NGF/p75信号转导通路,所以这些抗体(和其片段)特别可用于解决需要成肌分化和肌肉修复的个体的疼痛。
[0505] 在本发明的另一个优选实施方案中,如通过使用步态分析(如在本文实施例7中所述)所评估,与针对于对照所获得的结果相比,全长抗体和其Fab片段能够显著减少鼠科动物模型的体内疼痛。
[0506] 本发明的一个特别优选的实施方案涵盖了本文所公开的Fab多肽序列和其它单价剂用于治疗患者疼痛的用途。在本公开内容的其它地方提供了可以使用Fab多肽序列治疗的非限制性疼痛类型。
[0507] 在另一个优选实施方案中,本发明涵盖了本文所描述的全长抗体的Fab片段,所述Fab片段与全长抗体相比大致上不增加患者的炎症。本发明还涵盖了一种治疗患有疼痛的患者的方法,所述方法是通过施用本文所描述的全长抗体的Fab片段来实现的,所述Fab片段与在相同浓度下给药的全长抗体相比大致上不增加患者的炎症。在本发明的一个特别优选的实施方案中,一个或多个Fab片段包含轻链多肽序列SEQ ID NO:405或SEQ ID NO:407和重链多肽序列SEQ ID NO:406或SEQ ID NO:408。
[0508] 在本发明的一个特别优选的实施方案中,单价剂被用于治疗患者疼痛而大致上不增加所述患者的炎症的方法中。示例性的单价剂包括但不限于Fab、Fab′、Fv、scFv片段、MetMab样单价剂、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR或其一种或多种组合。
[0509] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的嵌合或人源化抗NGF抗体和其片段(包括Fab片段)抑制TF1细胞增殖。在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的嵌合或人源化抗NGF抗体和其片段(包括Fab片段)抑制PC-12神经突生长。
[0510] 在本发明的另一个实施方案中,抗人NGF抗体是与完整NGF多肽或其片段上如使用跨越天然人NGF多肽全长的重叠线性肽片段进行表位定位所确定由Ab3、Ab4、Ab15或Ab16特异性地结合的相同或重叠线性或构象表位特异性地结合的抗体。
[0511] 本发明还涉及如下的抗NGF抗体,所述抗NGF抗体与本文所公开的抗体或抗体片段结合相同或重叠的NGF表位和/或与抗NGF抗体竞争结合NGF,本文所公开的抗体或抗体片段包括但不限于选自以下的抗NGF抗体:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
[0512] 在另一个实施方案中,本发明还涉及一种分离的抗NGF抗体或抗体片段,所述抗NGF抗体或抗体片段包含选自以下的VH多肽序列中所含的一个或多个CDR:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402或其变体;和/或选自以下的VL多肽序列中所含的一个或多个CDR:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401或其变体。
[0513] 在本发明的一个实施方案中,以上所论述的抗人NGF抗体在可变轻链区和可变重链区中的每一个中包含至少2个与选自由以下组成的组的抗人NGF抗体中所含的互补决定区相同的互补决定区(CDR):Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。
[0514] 在一个优选实施方案中,以上所论述的抗人NGF抗体在可变轻链区和可变重链区中的每一个中包含至少2个互补决定区(CDR),所述互补决定区与Ab3、Ab4、Ab5或Ab6中所含的互补决定区相同。在另一个实施方案中,以上所论述的抗人NGF抗体的所有CDR与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14、Ab15、Ab16、Ab17、Ab18、Ab19、Ab20或Ab21。在本发明的一个优选的实施方案中,以上所论述的抗人NGF抗体的所有CDR与选自以下的抗人NGF抗体中所含的CDR相同:Ab3、Ab4、Ab5或Ab6。
[0515] 本发明进一步涵盖了以上所论述的一种或多种抗人NGF抗体是非糖基化抗体;含有Fc区,所述Fc区已经过修饰而改变效应功能、半衰期、蛋白质水解作用和/或糖基化作用;是人抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体;并且是衍生自兔(亲本)抗人NGF抗体的人源化抗体。
[0516] 本发明进一步涵盖了一种或多种抗人NGF抗体,其中在所述抗体的可变轻链区和可变重链区中的框架区(FR)分别是人FR,所述FR未经过修饰或所述FR通过用亲本兔抗体的相应FR残基取代可变轻链区或可变重链区中的至多2个或3个人FR残基而经过修饰,并且其中所述人FR衍生自人可变重链和轻链抗体序列,所述人可变重链和轻链抗体序列基于它们相对于文库中所含的其它人生殖系抗体序列与相应的兔可变重链区或可变轻链区的高度同源性而选自人生殖系抗体序列的文库。
[0517] 在本发明的一个实施方案中,抗人NGF抗体或片段特异性地结合表达NGF的人细胞和/或体内循环的可溶性NGF分子(包括在患有与表达NGF的细胞相关的疾病的患者体内人细胞上所表达或由人细胞表达的NGF)。
[0518] 在另一个实施方案中,疾病选自炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经痛、伤害感受性疼痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛或偏头痛。
[0519] 本发明进一步涵盖了与可检测的标记或治疗剂直接或间接连接的抗人NGF抗体或片段。
[0520] 本发明还涵盖了引起以上所阐述的抗人NGF抗体或抗体片段表达的一个或多个核酸序列,所述核酸序列包括那些包含或者其组成为酵母或人优选密码子的核酸序列。本发明还涵盖了载体(包括质粒或重组病毒载体),所述载体包含一个或多个所述核酸序列。本发明还涵盖了对以上所阐述的抗体中的至少一种进行表达的宿主细胞或重组宿主细胞,所述宿主细胞或重组宿主细胞包括哺乳动物细胞、酵母细胞、细菌细胞、植物细胞、以及昆虫细胞。在一个优选实施方案中,宿主细胞是酵母细胞。在另一个优选的实施方案中,酵母细胞是二倍体酵母细胞。在一个更优选的实施方案中,酵母细胞是毕赤酵母。
[0521] 本发明还涵盖了一种治疗方法,所述方法包括对患有与表达NGF的细胞相关的疾病或病状的患者施用治疗有效量的本文所描述的至少一种抗人NGF抗体或片段。本发明还涵盖了治疗方法可以包括施用本文所公开的两种或更多种抗NGF抗体或其片段。如果对患者施用多于一种抗体,那么可以同时或并行地施用多种抗体,或它们的施用可以交错进行。在以上所阐述的非限制性清单中和本文的其它地方提出了可以治疗的疾病。在一个优选实施方案中,疾病选自癌症疼痛或神经痛。在一个特别优选的实施方案中,疾病是癌症疼痛。
在另一个实施方案中,治疗进一步包括施用选自以下的另一种治疗剂或治疗方案:化学疗法、放射疗法、细胞因子施用或基因疗法。
[0522] 在本发明的一个非限制性实施方案中,另一种治疗剂或治疗方案包括紫杉酚(紫杉醇)或它的衍生物;铂化合物,如卡铂或顺铂;蒽环类,如阿霉素;烷化剂,如环磷酰胺;抗代谢物,如5-氟尿嘧啶;或依托泊苷。
[0523] 本发明进一步涵盖了一种检测表达NGF的细胞的存在的体内成像的方法,所述方法包括施用诊断有效量的至少一种抗人NGF抗体。在一个实施方案中,所述施用进一步包括施用有助于检测表达NGF的疾病部位处的抗体的放射性核素或荧光团。在本发明的另一个实施方案中,体内成像的方法被用来检测表达NGF的肿瘤或转移或表达能够与NGF结合的TrkA和/或p75的肿瘤或转移。在另一个实施方案中,所述体内成像方法的结果被用来促成适当治疗方案的设计,所述适当治疗方案包括包括放射疗法、化学疗法或其组合在内的治疗方案。
[0524] 编码抗NGF抗体多肽的多核苷酸
[0525] 抗体Ab1
[0526] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:1的多核苷酸序列:
[0527] GCCCTTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAACATTTACAGCAATTTAGCCTGGTATCAACAGAGACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGATGCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGTTGGCACTTACTACTGTCAAAGTGCTTTTGATAGTGATAGTACTGAAAATACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:201)。
[0528] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:2的多核苷酸序列:
[0529] GCCCTTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAACATTTACAGCAATTTAGCCTGGTATCAACAGAGACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGATGCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGTTGGCACTTACTACTGTCAAAGTGCTTTTGATAGTGATAGTACTGAAAATACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:202)。
[0530] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:3的多核苷酸序列:
[0531] CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGCTTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTACTAGTATTGGTAGCACAGTCTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCTACGATGACTATGATGAGATGACCTACTTTAACATCTGGGGCCAGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:203)。
[0532] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:4的多核苷酸序列:
[0533] CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGCTTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTACTAGTATTGGTAGCACAGTCTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCTACGATGACTATGATGAGATGACCTACTTTAACATCTGGGGCCAGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:204)。
[0534] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、以及SEQ ID NO:207中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:1或轻链序列SEQ ID NO:2的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0535] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、以及SEQ ID NO:210中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:3或重链序列SEQ ID NO:4的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0536] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:1的多核苷酸SEQ ID NO:201;编码轻链序列SEQ ID NO:2的多核苷酸SEQ ID NO:202;编码重链可变序列SEQ ID NO:3的多核苷酸SEQ ID NO:203;编码重链序列SEQ ID NO:4的多核苷酸SEQ ID NO:204;编码轻链可变序列SEQ ID NO:1或轻链序列SEQ ID NO:2的互补决定区(SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、以及SEQ ID NO:207)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:3或重链序列SEQ ID NO:4的互补决定区(SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、以及SEQ ID NO:210)的多核苷酸。
[0537] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab1,编码全长Ab1抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:2的多核苷酸SEQ ID NO:202和编码重链序列SEQ ID NO:4的多核苷酸SEQ ID NO:204。
[0538] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后对Ab1进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab1或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab1多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0539] 抗体Ab2
[0540] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:11的多核苷酸序列:
[0541] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAACATTTACAGCAACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGATGCTGGAGTCCCATCAAGGTTCTCTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGCCAAAGTGCTTTTGATAGTGATAGTACTGAAAACACTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:211)。
[0542] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:12的多核苷酸序列:
[0543] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAACATTTACAGCAACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGATGCTGGAGTCCCATCAAGGTTCTCTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGCCAAAGTGCTTTTGATAGTGATAGTACTGAAAACACTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:212)。
[0544] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:13的多核苷酸序列:
[0545] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTACTAGTATTGGTAGCACAGTCTACGCGAGCAGCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGCTACGATGACTATGATGAGATGACCTACTTTAACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:213)。
[0546] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:14的多核苷酸序列:
[0547] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTACTAGTATTGGTAGCACAGTCTACGCGAGCAGCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGCTACGATGACTATGATGAGATGACCTACTTTAACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:214)。
[0548] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、以及SEQ ID NO:217中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:11或轻链序列SEQ ID NO:12的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0549] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、以及SEQ ID NO:220中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:13或重链序列SEQ ID NO:14的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0550] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:11的多核苷酸SEQ ID NO:211;编码轻链序列SEQ ID NO:12的多核苷酸SEQ ID NO:212;编码重链可变序列SEQ ID NO:13的多核苷酸SEQ ID NO:213;编码重链序列SEQ ID NO:14的多核苷酸SEQ ID NO:214;编码轻链可变序列SEQ ID NO:11或轻链序列SEQ ID NO:12的互补决定区(SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216、以及SEQ ID NO:217)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:13或重链序列SEQ ID NO:14的互补决定区(SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、以及SEQ ID NO:220)的多核苷酸。
[0551] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab2,编码全长Ab2抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:12的多核苷酸SEQ ID NO:212和编码重链序列SEQ ID NO:14的多核苷酸SEQ ID NO:214。
[0552] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab2进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab2或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab2多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0553] 抗体Ab3
[0554] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:21的多核苷酸序列:
[0555] GCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGCAGCTATGGGAGACACAGTCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAGGCTCCTGATCTATGATGCATCCAATCTGCCATCTGGGGTCCCATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:221)。
[0556] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:22的多核苷酸序列:
[0557] GCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGCAGCTATGGGAGACACAGTCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAGGCTCCTGATCTATGATGCATCCAATCTGCCATCTGGGGTCCCATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:222)。
[0558] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:23的多核苷酸序列:
[0559] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTATGTAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCACTTGGAGTGCTGGTACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCGGAGGTGGTGGTAGTATTTATGATATTTGGGGCCCGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:223)。
[0560] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:24的多核苷酸序列:
[0561] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTATGTAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCACTTGGAGTGCTGGTACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCGGAGGTGGTGGTAGTATTTATGATATTTGGGGCCCGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:224)。
[0562] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226、以及SEQ ID NO:227中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:21或轻链序列SEQ ID NO:22的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0563] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、以及SEQ ID NO:230中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:23或重链序列SEQ ID NO:24的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0564] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:21的多核苷酸SEQ ID NO:221;编码轻链序列SEQ ID NO:22的多核苷酸SEQ ID NO:222;编码重链可变序列SEQ ID NO:23的多核苷酸SEQ ID NO:223;编码重链序列SEQ ID NO:24的多核苷酸SEQ ID NO:224;编码轻链可变序列SEQ ID NO:21或轻链序列SEQ ID NO:22的互补决定区(SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226、以及SEQ ID NO:227)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:23或重链序列SEQ ID NO:24的互补决定区(SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、以及SEQ ID NO:230)的多核苷酸。
[0565] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab3,编码全长Ab3抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:22的多核苷酸SEQ ID NO:222和编码重链序列SEQ ID NO:24的多核苷酸SEQ ID NO:224。
[0566] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab3进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab3或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab3多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0567] 抗体Ab4
[0568] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:31的多核苷酸序列:
[0569] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTCTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCAATCTGCCATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGAACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCTAGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:231)。
[0570] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:32的多核苷酸序列:
[0571] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTCTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCAATCTGCCATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGAACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCTAGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:232)。
[0572] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:33的多核苷酸序列:
[0573] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAGCTATGTAATGATCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTACATCGGAATCACTTGGAGTGCTGGTACATACTACGCGAGCAGTGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTGGAGGTGGTGGTAGTATCTATGATATTTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:233)。
[0574] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:34的多核苷酸序列:
[0575] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAGCTATGTAATGATCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTACATCGGAATCACTTGGAGTGCTGGTACATACTACGCGAGCAGTGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTGGAGGTGGTGGTAGTATCTATGATATTTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:234)。
[0576] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236、以及SEQ ID NO:237中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:31或轻链序列SEQ ID NO:32的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0577] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:239、以及SEQ ID NO:240中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:33或重链序列SEQ ID NO:34的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0578] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:31的多核苷酸SEQ ID NO:231;编码轻链序列SEQ ID NO:32的多核苷酸SEQ ID NO:232;编码重链可变序列SEQ ID NO:33的多核苷酸SEQ ID NO:233;编码重链序列SEQ ID NO:34的多核苷酸SEQ ID NO:234;编码轻链可变序列SEQ ID NO:31或轻链序列SEQ ID NO:32的互补决定区(SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236、以及SEQ ID NO:237)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:33或重链序列SEQ ID NO:34的互补决定区(SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:239、以及SEQ ID NO:240)的多核苷酸。
[0579] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab4,编码全长Ab4抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:32的多核苷酸SEQ ID NO:232和编码重链序列SEQ ID NO:34的多核苷酸SEQ ID NO:234。
[0580] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab4进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab4或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab4多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0581] 抗体Ab5
[0582] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:41的多核苷酸序列:
[0583] GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTTACAGCAATTTAGCCTGGTATCAGCAGAGACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCACTCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGCCGATGCTGCCTCTTACTACTGTCAACAGGGTTTTACTGTTAGTGATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:241)。
[0584] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:42的多核苷酸序列:
[0585] GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTTACAGCAATTTAGCCTGGTATCAGCAGAGACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCACTCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGCCGATGCTGCCTCTTACTACTGTCAACAGGGTTTTACTGTTAGTGATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:242)。
[0586] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:43的多核苷酸序列:
[0587] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTATGCAGTGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTGGTCGTAATGGTAACACATGGTACGCGAGCTGGGCAAGAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAAGCGAGGACACGGCCACATATTTCTGTGCCAGAGGATATGGCCGTAGTGTTGCTTATTACGTCTTTAACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:243)。
[0588] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:44的多核苷酸序列:
[0589] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTATGCAGTGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTGGTCGTAATGGTAACACATGGTACGCGAGCTGGGCAAGAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAAGCGAGGACACGGCCACATATTTCTGTGCCAGAGGATATGGCCGTAGTGTTGCTTATTACGTCTTTAACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:244)。
[0590] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:246、以及SEQ ID NO:247中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:41或轻链序列SEQ ID NO:42的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0591] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、以及SEQ ID NO:250中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:43或重链序列SEQ ID NO:44的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0592] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:41的多核苷酸SEQ ID NO:241;编码轻链序列SEQ ID NO:42的多核苷酸SEQ ID NO:242;编码重链可变序列SEQ ID NO:43的多核苷酸SEQ ID NO:243;编码重链序列SEQ ID NO:44的多核苷酸SEQ ID NO:244;编码轻链可变序列SEQ ID NO:41或轻链序列SEQ ID NO:42的互补决定区(SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:246、以及SEQ ID NO:247)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:43或重链序列SEQ ID NO:44的互补决定区(SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、以及SEQ ID NO:250)的多核苷酸。
[0593] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab5,编码全长Ab5抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:42的多核苷酸SEQ ID NO:242和编码重链序列SEQ ID NO:44的多核苷酸SEQ ID NO:244。
[0594] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab5进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab5或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab5多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0595] 抗体Ab6
[0596] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:51的多核苷酸序列:
[0597] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTTACAGCAATCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCACTCTGGAATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGGGTTTTACTGTTAGTGATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:251)。
[0598] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:52的多核苷酸序列:
[0599] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTTACAGCAATCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCACTCTGGAATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGGGTTTTACTGTTAGTGATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:252)。
[0600] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:53的多核苷酸序列:
[0601] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAACTATGCAGTGGGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAATCATTGGTCGTAATGGTAACACATGGTACGCGAGCTCTGCAAGAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGATATGGCCGTAGTGTTGCTTATTACGTCTTTAACATCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQID NO:253)。
[0602] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:54的多核苷酸序列:
[0603] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAACTATGCAGTGGGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAATCATTGGTCGTAATGGTAACACATGGTACGCGAGCTCTGCAAGAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGATATGGCCGTAGTGTTGCTTATTACGTCTTTAACATCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:254)。
[0604] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、以及SEQ ID NO:257中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:52的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0605] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、以及SEQ ID NO:260中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:54的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0606] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:51的多核苷酸SEQ ID NO:251;编码轻链序列SEQ ID NO:52的多核苷酸SEQ ID NO:252;编码重链可变序列SEQ ID NO:53的多核苷酸SEQ ID NO:253;编码重链序列SEQ ID NO:54的多核苷酸SEQ ID NO:254;编码轻链可变序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:52的互补决定区(SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、以及SEQ ID NO:257)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:54的互补决定区(SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、以及SEQ ID NO:260)的多核苷酸。
[0607] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab6,编码全长Ab6抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:52的多核苷酸SEQ ID NO:252和编码重链序列SEQ ID NO:54的多核苷酸SEQ ID NO:254。
[0608] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab6进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab6或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab6多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0609] 抗体Ab7
[0610] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:61的多核苷酸序列:
[0611] GCCGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTCAACCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTTATAACTTATTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAACAATTATCTTGTTACTACTTATGGTGTTGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:261)。
[0612] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:62的多核苷酸序列:
[0613] GCCGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTCAACCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTTATAACTTATTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAACAATTATCTTGTTACTACTTATGGTGTTGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:262)。
[0614] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:63的多核苷酸序列:
[0615] CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATACATTGATACTGATACTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGTGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTCAAAATCACTAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGATCTTATGCTGCTTATGGTGGTTATCCTGCTACTTTTGATCCCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:263)。
[0616] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:64的多核苷酸序列:
[0617] CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATACATTGATACTGATACTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGTGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTCAAAATCACTAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGATCTTATGCTGCTTATGGTGGTTATCCTGCTACTTTTGATCCCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:264)。
[0618] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:266、以及SEQ ID NO:267中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:61或轻链序列SEQ ID NO:62的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0619] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269、以及SEQ ID NO:270中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:63或重链序列SEQ ID NO:64的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0620] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:61的多核苷酸SEQ ID NO:261;编码轻链序列SEQ ID NO:62的多核苷酸SEQ ID NO:262;编码重链可变序列SEQ ID NO:63的多核苷酸SEQ ID NO:263;编码重链序列SEQ ID NO:64的多核苷酸SEQ ID NO:264;编码轻链可变序列SEQ ID NO:61或轻链序列SEQ ID NO:62的互补决定区(SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:266、以及SEQ ID NO:267)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:63或重链序列SEQ ID NO:64的互补决定区(SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269、以及SEQ ID NO:270)的多核苷酸。
[0621] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab7,编码全长Ab7抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:62的多核苷酸SEQ ID NO:262和编码重链序列SEQ ID NO:64的多核苷酸SEQ ID NO:264。
[0622] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab7进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab7或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab7多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0623] 抗体Ab8
[0624] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:71的多核苷酸序列:
[0625] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTGAGGACATTTACAACTTATTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAACAACTATCTTGTTACTACTTATGGTGTTGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:271)。
[0626] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:72的多核苷酸序列:
[0627] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTGAGGACATTTACAACTTATTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAACAACTATCTTGTTACTACTTATGGTGTTGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:272)。
[0628] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:73的多核苷酸序列:
[0629] CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGTGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCTTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATACATTGATACTGATACTAGCGCATACTACGCAAGCAGTGTGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTACCTGCAAATGTCTAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTAGATCTTATGCTGCTTATGGTGGTTATCCTGCTACTTTTGATCCCTGGGGCCAAGGTACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(S EQ ID NO:273)。
[0630] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:74的多核苷酸序列:
[0631] CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGTGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCTTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATACATTGATACTGATACTAGCGCATACTACGCAAGCAGTGTGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTACCTGCAAATGTCTAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTAGATCTTATGCTGCTTATGGTGGTTATCCTGCTACTTTTGATCCCTGGGGCCAAGGTACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SE Q ID NO:274)。
[0632] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276、以及SEQ ID NO:277中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:71或轻链序列SEQ ID NO:72的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0633] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:279、以及SEQ ID NO:280中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:73或重链序列SEQ ID NO:74的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0634] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:71的多核苷酸SEQ ID NO:271;编码轻链序列SEQ ID NO:72的多核苷酸SEQ ID NO:272;编码重链可变序列SEQ ID NO:73的多核苷酸SEQ ID NO:273;编码重链序列SEQ ID NO:74的多核苷酸SEQ ID NO:274;编码轻链可变序列SEQ ID NO:71或轻链序列SEQ ID NO:72的互补决定区(SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:276、以及SEQ ID NO:277)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:73或重链序列SEQ ID NO:74的互补决定区(SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:279、以及SEQ ID NO:280)的多核苷酸。
[0635] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab8,编码全长Ab8抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:72的多核苷酸SEQ ID NO:272和编码重链序列SEQ ID NO:74的多核苷酸SEQ ID NO:274。
[0636] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab8进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab8或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab8多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0637] 抗体Ab9
[0638] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:81的多核苷酸序列:
[0639] GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGAACATTGGTAGCTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCGAACTCCTGATCTACAGGGCGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAATAGTGAGAATCTTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:281)。
[0640] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:82的多核苷酸序列:
[0641] GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGAACATTGGTAGCTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCGAACTCCTGATCTACAGGGCGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAATAGTGAGAATCTTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:282)。
[0642] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:83的多核苷酸序列:
[0643] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTATGTATTCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATGGATTAGTTATGGTGGTACTGCATATTACGCGAGCTGGGCGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGAGCTGAAGATCACCAGTCCGACAATCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGACTCCTGTTAATTATTATTTGGACATTTGGGGCCAGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:283)。
[0644] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:84的多核苷酸序列:
[0645] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTATGTATTCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATGGATTAGTTATGGTGGTACTGCATATTACGCGAGCTGGGCGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGAGCTGAAGATCACCAGTCCGACAATCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGACTCCTGTTAATTATTATTTGGACATTTGGGGCCAGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:284)。
[0646] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:285、SEQ ID NO:286、以及SEQ ID NO:287中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:81或轻链序列SEQ ID NO:82的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0647] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:288、SEQ ID NO:289、以及SEQ ID NO:290中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:83或重链序列SEQ ID NO:84的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0648] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:81的多核苷酸SEQ ID NO:281;编码轻链序列SEQ ID NO:82的多核苷酸SEQ ID NO:282;编码重链可变序列SEQ ID NO:83的多核苷酸SEQ ID NO:283;编码重链序列SEQ ID NO:84的多核苷酸SEQ ID NO:284;编码轻链可变序列SEQ ID NO:81或轻链序列SEQ ID NO:82的互补决定区(SEQ ID NO:285、SEQ ID NO:286、以及SEQ ID NO:287)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:83或重链序列SEQ ID NO:84的互补决定区(SEQ ID NO:288、SEQ ID NO:289、以及SEQ ID NO:290)的多核苷酸。
[0649] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab9,编码全长Ab9抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:82的多核苷酸SEQ ID NO:282和编码重链序列SEQ ID NO:84的多核苷酸SEQ ID NO:284。
[0650] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab9进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab9或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab9多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0651] 抗体Ab10
[0652] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:91的多核苷酸序列:
[0653] GCCTATGATATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTGAGAACATTGGTAGCTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAACAGGGTTACAATAGTGAGAATCTTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:291)。
[0654] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:92的多核苷酸序列:
[0655] GCCTATGATATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTGAGAACATTGGTAGCTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAACAGGGTTACAATAGTGAGAATCTTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:292)。
[0656] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:93的多核苷酸序列:
[0657] CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGTGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCTTCTGGATTCACCTTCAGTATGTATTCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATGGATTAGTTATGGTGGTACTGCATACTACGCTAGCAGCGCTAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTACCTGCAAATGTCTAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGAGACTCCTGTTAATTACTACTTGGACATTTGGGGCCAAGGTACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:293)。
[0658] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:94的多核苷酸序列:
[0659] CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGTGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCTTCTGGATTCACCTTCAGTATGTATTCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATGGATTAGTTATGGTGGTACTGCATACTACGCTAGCAGCGCTAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTACCTGCAAATGTCTAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGAGACTCCTGTTAATTACTACTTGGACATTTGGGGCCAAGGTACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:294)。
[0660] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:295、SEQ ID NO:296、以及SEQ ID NO:297中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:91或轻链序列SEQ ID NO:92的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0661] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:298、SEQ ID NO:299、以及SEQ ID NO:300中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:93或重链序列SEQ ID NO:94的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0662] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:91的多核苷酸SEQ ID NO:291;编码轻链序列SEQ ID NO:92的多核苷酸SEQ ID NO:292;编码重链可变序列SEQ ID NO:93的多核苷酸SEQ ID NO:293;编码重链序列SEQ ID NO:94的多核苷酸SEQ ID NO:294;编码轻链可变序列SEQ ID NO:91或轻链序列SEQ ID NO:92的互补决定区(SEQ ID NO:295、SEQ ID NO:296、以及SEQ ID NO:297)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:93或重链序列SEQ ID NO:94的互补决定区(SEQ ID NO:298、SEQ ID NO:299、以及SEQ ID NO:300)的多核苷酸。
[0663] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab10,编码全长Ab10抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:92的多核苷酸SEQ ID NO:292和编码重链序列SEQ ID NO:94的多核苷酸SEQ ID NO:294。
[0664] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab10进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab10或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab10多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0665] 抗体Ab11
[0666] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:101的多核苷酸序列:
[0667] GCATTCGAATTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAACATTGTTACCAATTTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTATTTCTGTCAGAGCTATGATGGTTTTAATAGTGCTGGGTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:301)。
[0668] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:102的多核苷酸序列:
[0669] GCATTCGAATTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAACATTGTTACCAATTTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTATTTCTGTCAGAGCTATGATGGTTTTAATAGTGCTGGGTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:302)。
[0670] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:103的多核苷酸序列:
[0671] CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTGGCTACGACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAATACATCGGACTCATTAGTTATGATGGTAACACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAAGTCTTTATGCTGGTCCTAATGCTGGTATCGGACCGTTTAACATCTGGGGCCAGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:303)。
[0672] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:104的多核苷酸序列:
[0673] CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTGGCTACGACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCTGGAATACATCGGACTCATTAGTTATGATGGTAACACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAAGTCTTTATGCTGGTCCTAATGCTGGTATCGGACCGTTTAACATCTGGGGCCAGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:304)。
[0674] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:305、SEQ ID NO:306、以及SEQ ID NO:307中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:101或轻链序列SEQ ID NO:102的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0675] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:308、SEQ ID NO:309、以及SEQ ID NO:310中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:103或重链序列SEQ ID NO:104的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0676] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:101的多核苷酸SEQ ID NO:301;编码轻链序列SEQ ID NO:102的多核苷酸SEQ ID NO:302;编码重链可变序列SEQ ID NO:103的多核苷酸SEQ ID NO:303;编码重链序列SEQ ID NO:104的多核苷酸SEQ ID NO:304;编码轻链可变序列SEQ ID NO:101或轻链序列SEQ ID NO:102的互补决定区(SEQ ID NO:305、SEQ ID NO:306、以及SEQ ID NO:307)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:103或重链序列SEQ ID NO:104的互补决定区(SEQ ID NO:308、SEQ ID NO:309、以及SEQ ID NO:310)的多核苷酸。
[0677] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab11,编码全长Ab11抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:102的多核苷酸SEQ ID NO:302和编码重链序列SEQ ID NO:104的多核苷酸SEQ ID NO:304。
[0678] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab11进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab11或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab11多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0679] 抗体Ab12
[0680] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:111的多核苷酸序列:
[0681] GCATTCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAACATTGTTACCAACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAGAGCTATGATGGTTTCAATAGTGCTGGTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:311)。
[0682] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:112的多核苷酸序列:
[0683] GCATTCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAACATTGTTACCAACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAGAGCTATGATGGTTTCAATAGTGCTGGTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:312)。
[0684] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:113的多核苷酸序列:
[0685] CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGTGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCTTCTGGATTCTCCCTCAGTGGCTACGACATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGGACTCATTAGTTATGATGGTAACACATACTACGCGACCTCCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTACCTGCAAATGTCTAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTAGAAGTCTTTATGCTGGTCCTAATGCTGGTATCGGACCGTTTAACATCTGGGGCCAAGGTACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:313)。
[0686] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:114的多核苷酸序列:
[0687] CAGGTACAGCTGGTGGAGTCTGGTGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCTTCTGGATTCTCCCTCAGTGGCTACGACATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGGACTCATTAGTTATGATGGTAACACATACTACGCGACCTCCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTACCTGCAAATGTCTAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCTAGAAGTCTTTATGCTGGTCCTAATGCTGGTATCGGACCGTTTAACATCTGGGGCCAAGGTACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:314)。
[0688] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:315、SEQ ID NO:316、以及SEQ ID NO:317中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:111或轻链序列SEQ ID NO:112的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0689] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:318、SEQ ID NO:319、以及SEQ ID NO:320中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:113或重链序列SEQ ID NO:114的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0690] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:111的多核苷酸SEQ ID NO:311;编码轻链序列SEQ ID NO:112的多核苷酸SEQ ID NO:312;编码重链可变序列SEQ ID NO:113的多核苷酸SEQ ID NO:313;编码重链序列SEQ ID NO:114的多核苷酸SEQ ID NO:314;编码轻链可变序列SEQ ID NO:111或轻链序列SEQ ID NO:112的互补决定区(SEQ ID NO:315、SEQ ID NO:316、以及SEQ ID NO:317)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:113或重链序列SEQ ID NO:114的互补决定区(SEQ ID NO:318、SEQ ID NO:319、以及SEQ ID NO:320)的多核苷酸。
[0691] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab12,编码全长Ab12抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:112的多核苷酸SEQ ID NO:312和编码重链序列SEQ ID NO:114的多核苷酸SEQ ID NO:314。
[0692] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab12进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab12或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab12多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如酵母细胞或细菌细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0693] 抗体Ab13
[0694] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:121的多核苷酸序列:
[0695] GCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCGGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGCTGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTATACCAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:321)。
[0696] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:122的多核苷酸序列:
[0697] GCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCGGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGCTGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTATACCAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTA(SEQ ID NO:322)。
[0698] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:123的多核苷酸序列:
[0699] CAGTCGGTGGAGGCGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGACATTTATTTTAGTAATGAAGAAACAAACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTTACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAATGTCATCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTTCTCCTGATGTTGATATTGGTATAGATATGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:323)。
[0700] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:124的多核苷酸序列:
[0701] CAGTCGGTGGAGGCGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGACATTTATTTTAGTAATGAAGAAACAAACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTTACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAATGTCATCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTTCTCCTGATGTTGATATTGGTATAGATATGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:324)。
[0702] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:325、SEQ ID NO:326、以及SEQ ID NO:327中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:121或轻链序列SEQ ID NO:122的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0703] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:329、以及SEQ ID NO:330中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:123或重链序列SEQ ID NO:124的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0704] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:121的多核苷酸SEQ ID NO:321;编码轻链序列SEQ ID NO:122的多核苷酸SEQ ID NO:322;编码重链可变序列SEQ ID NO:123的多核苷酸SEQ ID NO:323;编码重链序列SEQ ID NO:124的多核苷酸SEQ ID NO:324;编码轻链可变序列SEQ ID NO:121或轻链序列SEQ ID NO:122的互补决定区(SEQ ID NO:325、SEQ ID NO:326、以及SEQ ID NO:327)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:123或重链序列SEQ ID NO:124的互补决定区(SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:329、以及SEQ ID NO:330)的多核苷酸。
[0705] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab13,编码全长Ab13抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:122的多核苷酸SEQ ID NO:322和编码重链序列SEQ ID NO:124的多核苷酸SEQ ID NO:324。
[0706] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab13进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab13或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab13多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0707] 抗体Ab14
[0708] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:131的多核苷酸序列:
[0709] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTGCAGGCGGTTATACCAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:331)。
[0710] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:132的多核苷酸序列:
[0711] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTGCAGGCGGTTATACCAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:332)。
[0712] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:133的多核苷酸序列:
[0713] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGACATTTACTTTAGTAATGAAGAAACAAACTACGCGAGCAGCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGTTCTCCTGATGTTGATATTGGTATAGATATGTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:333)。
[0714] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:134的多核苷酸序列:
[0715] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGACATTTACTTTAGTAATGAAGAAACAAACTACGCGAGCAGCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGTTCTCCTGATGTTGATATTGGTATAGATATGTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:334)。
[0716] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:335、SEQ ID NO:336、以及SEQ ID NO:337中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:131或轻链序列SEQ ID NO:132的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0717] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:338、SEQ ID NO:339、以及SEQ ID NO:340中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:133或重链序列SEQ ID NO:134的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0718] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:131的多核苷酸SEQ ID NO:331;编码轻链序列SEQ ID NO:132的多核苷酸SEQ ID NO:332;编码重链可变序列SEQ ID NO:133的多核苷酸SEQ ID NO:333;编码重链序列SEQ ID NO:134的多核苷酸SEQ ID NO:334;编码轻链可变序列SEQ ID NO:131或轻链序列SEQ ID NO:132的互补决定区(SEQ ID NO:335、SEQ ID NO:336、以及SEQ ID NO:337)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:133或重链序列SEQ ID NO:134的互补决定区(SEQ ID NO:338、SEQ ID NO:339、以及SEQ ID NO:340)的多核苷酸。
[0719] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab14,编码全长Ab14抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:132的多核苷酸SEQ ID NO:332和编码重链序列SEQ ID NO:134的多核苷酸SEQ ID NO:334。
[0720] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab14进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab14或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab14多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0721] 抗体Ab15
[0722] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:141的多核苷酸序列:
[0723] GCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCAATCTGCCATCTGGGGTCCCATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGATTATGATGATGATACTGATAATGGTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:341)。
[0724] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:142的多核苷酸序列:
[0725] GCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCAATCTGCCATCTGGGGTCCCATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGATTATGATGATGATACTGATAATGGTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:342)。
[0726] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:143的多核苷酸序列:
[0727] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATTTGGAGTGGTGGCACCTACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGCAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACGCGGCCACCTATTTCTGTGCCGCAGGTGGTGGTAGTATTTATGATGTTTGGGGCCCGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:343)。
[0728] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:144的多核苷酸序列:
[0729] CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATTTGGAGTGGTGGCACCTACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGCAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACGCGGCCACCTATTTCTGTGCCGCAGGTGGTGGTAGTATTTATGATGTTTGGGGCCCGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:344)。
[0730] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:345、SEQ ID NO:346、以及SEQ ID NO:347中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:141或轻链序列SEQ ID NO:142的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0731] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:348、SEQ ID NO:349、以及SEQ ID NO:350中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:143或重链序列SEQ ID NO:144的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0732] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:141的多核苷酸SEQ ID NO:341;编码轻链序列SEQ ID NO:142的多核苷酸SEQ ID NO:342;编码重链可变序列SEQ ID NO:143的多核苷酸SEQ ID NO:343;编码重链序列SEQ ID NO:144的多核苷酸SEQ ID NO:344;编码轻链可变序列SEQ ID NO:141或轻链序列SEQ ID NO:142的互补决定区(SEQ ID NO:345、SEQ ID NO:346、以及SEQ ID NO:347)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:143或重链序列SEQ ID NO:144的互补决定区(SEQ ID NO:348、SEQ ID NO:349、以及SEQ ID NO:350)的多核苷酸。
[0733] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab15,编码全长Ab15抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:142的多核苷酸SEQ ID NO:342和编码重链序列SEQ ID NO:144的多核苷酸SEQ ID NO:344。
[0734] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab15进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab15或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab15多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0735] 抗体Ab16
[0736] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合而不明显影响NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:151的多核苷酸序列:
[0737] GCCCTGGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCACGTCTGAACCAGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCTAGTCAGAATATTGGTAACGACCTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCGAGCTCCTAATCTATTCTACATCCAAACTGGCAACTGGGGTCCCAAAGCGGTTCAGTGGCAGCAGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGTGTTTATAGTTATATTAGTGATGATGGTAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:351)。
[0738] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:152的多核苷酸序列:
[0739] GCCCTGGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCACGTCTGAACCAGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCTAGTCAGAATATTGGTAACGACCTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCGAGCTCCTAATCTATTCTACATCCAAACTGGCAACTGGGGTCCCAAAGCGGTTCAGTGGCAGCAGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGTGTTTATAGTTATATTAGTGATGATGGTAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:352)。
[0740] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:153的多核苷酸序列:
[0741] CAGTCGGTGGAGGAGTTCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGATTCTCCCTCAATAACTATGCAATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGGATCATTGGTAGTATTGGTACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCTTCATCTCCAAAACCTCGACCACTGTGGATCTGAAAATCATTAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCTGGCGTTACTGTTGATGGTTATGGCTACTACTTTAACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:353)。
[0742] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:154的多核苷酸序列:
[0743] CAGTCGGTGGAGGAGTTCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGATTCTCCCTCAATAACTATGCAATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGGATCATTGGTAGTATTGGTACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCTTCATCTCCAAAACCTCGACCACTGTGGATCTGAAAATCATTAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCTGGCGTTACTGTTGATGGTTATGGCTACTACTTTAACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:354)。
[0744] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:355、SEQ ID NO:356、以及SEQ ID NO:357中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:151或轻链序列SEQ ID NO:152的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0745] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:358、SEQ ID NO:359、以及SEQ ID NO:360中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:153或重链序列SEQ ID NO:154的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0746] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:151的多核苷酸SEQ ID NO:351;编码轻链序列SEQ ID NO:152的多核苷酸SEQ ID NO:352;编码重链可变序列SEQ ID NO:153的多核苷酸SEQ ID NO:353;编码重链序列SEQ ID NO:154的多核苷酸SEQ ID NO:354;编码轻链可变序列SEQ ID NO:151或轻链序列SEQ ID NO:152的互补决定区(SEQ ID NO:355、SEQ ID NO:356、以及SEQ ID NO:357)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:153或重链序列SEQ ID NO:154的互补决定区(SEQ ID NO:358、SEQ ID NO:359、以及SEQ ID NO:360)的多核苷酸。
[0747] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab16,编码全长Ab16抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:152的多核苷酸SEQ ID NO:352和编码重链序列SEQ ID NO:154的多核苷酸SEQ ID NO:354。
[0748] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab16进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab16或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab16多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0749] 抗体Ab17
[0750] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:161的多核苷酸序列:
[0751] GCCATCGAAATGACCCAGACTCCATTCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGACCATTAGCAACTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATACTATCAGTAATGTTGATAACAATGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:361)。
[0752] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:162的多核苷酸序列:
[0753] GCCATCGAAATGACCCAGACTCCATTCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGACCATTAGCAACTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATACTATCAGTAATGTTGATAACAATGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:362)。
[0754] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:163的多核苷酸序列:
[0755] CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGGGATCCCTGACACTCACCTGCGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCACTGGCTACAACTTGGTCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATTCATTAGTTATGGTGATACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGACTCTGACGATCACCGATCTGCAACCTTCAGACACGGGCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGACTGCTAATACTTATGATTATGGCATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:363)。
[0756] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:164的多核苷酸序列:
[0757] CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGGGATCCCTGACACTCACCTGCGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCACTGGCTACAACTTGGTCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATTCATTAGTTATGGTGATACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGACTCTGACGATCACCGATCTGCAACCTTCAGACACGGGCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGACTGCTAATACTTATGATTATGGCATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:364)。
[0758] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:365、SEQ ID NO:366、以及SEQ ID NO:367中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:161或轻链序列SEQ ID NO:162的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0759] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:368、SEQ ID NO:369、以及SEQ ID NO:370中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:163或重链序列SEQ ID NO:164的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0760] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:161的多核苷酸SEQ ID NO:361;编码轻链序列SEQ ID NO:162的多核苷酸SEQ ID NO:362;编码重链可变序列SEQ ID NO:163的多核苷酸SEQ ID NO:363;编码重链序列SEQ ID NO:164的多核苷酸SEQ ID NO:364;编码轻链可变序列SEQ ID NO:161或轻链序列SEQ ID NO:162的互补决定区(SEQ ID NO:365、SEQ ID NO:366、以及SEQ ID NO:367)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:163或重链序列SEQ ID NO:164的互补决定区(SEQ ID NO:368、SEQ ID NO:369、以及SEQ ID NO:370)的多核苷酸。
[0761] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab17,编码全长Ab17抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:162的多核苷酸SEQ ID NO:362和编码重链序列SEQ ID NO:164的多核苷酸SEQ ID NO:364。
[0762] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab17进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab17或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab17多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0763] 抗体Ab18
[0764] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:171的多核苷酸序列:
[0765] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCAGGCTAGTCAGACCATTAGCAACTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGAACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGGGTTATACTATCAGTAATGTTGATAACAATGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:371)。
[0766] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:172的多核苷酸序列:
[0767] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCAGGCTAGTCAGACCATTAGCAACTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGAACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGGGTTATACTATCAGTAATGTTGATAACAATGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:372)。
[0768] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:173的多核苷酸序列:
[0769] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTGGCTACAACTTGGTCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGATTCATTAGTTATGGTGATACCACATACTACGCTAGCTCTGCTAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGAGACTGCTAATACTTATGATTATGGCATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:373)。
[0770] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:174的多核苷酸序列:
[0771] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTGGCTACAACTTGGTCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGATTCATTAGTTATGGTGATACCACATACTACGCTAGCTCTGCTAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGAGACTGCTAATACTTATGATTATGGCATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:374)。
[0772] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:375、SEQ ID NO:376、以及SEQ ID NO:377中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:171或轻链序列SEQ ID NO:172的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0773] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:378、SEQ ID NO:379、以及SEQ ID NO:380中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:173或重链序列SEQ ID NO:174的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0774] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:171的多核苷酸SEQ ID NO:371;编码轻链序列SEQ ID NO:172的多核苷酸SEQ ID NO:372;编码重链可变序列SEQ ID NO:173的多核苷酸SEQ ID NO:373;编码重链序列SEQ ID NO:174的多核苷酸SEQ ID NO:374;编码轻链可变序列SEQ ID NO:171或轻链序列SEQ ID NO:172的互补决定区(SEQ ID NO:375、SEQ ID NO:376、以及SEQ ID NO:377)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:173或重链序列SEQ ID NO:174的互补决定区(SEQ ID NO:378、SEQ ID NO:379、以及SEQ ID NO:380)的多核苷酸。
[0775] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab18,编码全长Ab18抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:172的多核苷酸SEQ ID NO:372和编码重链序列SEQ ID NO:174的多核苷酸SEQ ID NO:374。
[0776] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab18进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab18或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab18多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0777] 抗体Ab19
[0778] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:181的多核苷酸序列:
[0779] GCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTATTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGCTGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTATAGTAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:381)。
[0780] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:182的多核苷酸序列:
[0781] GCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTATTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGCTGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTATAGTAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:382)。
[0782] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:183的多核苷酸序列:
[0783] CAGTCGGTGGAGGCGTCCGGGGGTCGTCTGGTCATGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTACTGGATGTCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGACATTTATTTTAGTAATGAGGAAACAAACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTTACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAATGTCATCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCAAGAGGTTCTCCTGATGTTGAGATTGCTATAGATATGTGGGGCCAGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:383)。
[0784] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:184的多核苷酸序列:
[0785] CAGTCGGTGGAGGCGTCCGGGGGTCGTCTGGTCATGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTACTGGATGTCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGACATTTATTTTAGTAATGAGGAAACAAACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTTACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAATGTCATCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCAAGAGGTTCTCCTGATGTTGAGATTGCTATAGATATGTGGGGCCAGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:384)。
[0786] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:385、SEQ ID NO:386、以及SEQ ID NO:387中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:181或轻链序列SEQ ID NO:182的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0787] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:388、SEQ ID NO:389、以及SEQ ID NO:390中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:183或重链序列SEQ ID NO:184的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0788] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:181的多核苷酸SEQ ID NO:381;编码轻链序列SEQ ID NO:182的多核苷酸SEQ ID NO:382;编码重链可变序列SEQ ID NO:183的多核苷酸SEQ ID NO:383;编码重链序列SEQ ID NO:184的多核苷酸SEQ ID NO:384;编码轻链可变序列SEQ ID NO:181或轻链序列SEQ ID NO:182的互补决定区(SEQ ID NO:385、SEQ ID NO:386、以及SEQ ID NO:387)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:183或重链序列SEQ ID NO:184的互补决定区(SEQ ID NO:388、SEQ ID NO:389、以及SEQ ID NO:390)的多核苷酸。
[0789] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab19,编码全长Ab19抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:182的多核苷酸SEQ ID NO:382和编码重链序列SEQ ID NO:184的多核苷酸SEQ ID NO:384。
[0790] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab19进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab19或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab19多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0791] 抗体Ab20
[0792] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:191的多核苷酸序列:
[0793] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTGCAGGCGGTTATACCAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:391)。
[0794] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:192的多核苷酸序列:
[0795] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGTCCAGTCAGAATGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTGCAGGCGGTTATACCAGTAGTAGTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:392)。
[0796] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:193的多核苷酸序列:
[0797] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGACATTTACTTTAGTAATGAAGAAACAAACTACGCGACCAGCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGTTCTCCTGATGTTGAGATTGCTATAGATATGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:393)。
[0798] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:194的多核苷酸序列:
[0799] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTACCTACTGGATGAGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGACATTTACTTTAGTAATGAAGAAACAAACTACGCGACCAGCGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGTTCTCCTGATGTTGAGATTGCTATAGATATGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:394)。
[0800] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:395、SEQ ID NO:396、以及SEQ ID NO:397中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:191或轻链序列SEQ ID NO:192的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0801] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:398、SEQ ID NO:399、以及SEQ ID NO:400中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:193或重链序列SEQ ID NO:194的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0802] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:191的多核苷酸SEQ ID NO:391;编码轻链序列SEQ ID NO:192的多核苷酸SEQ ID NO:392;编码重链可变序列SEQ ID NO:193的多核苷酸SEQ ID NO:393;编码重链序列SEQ ID NO:194的多核苷酸SEQ ID NO:394;编码轻链可变序列SEQ ID NO:191或轻链序列SEQ ID NO:192的互补决定区(SEQ ID NO:395、SEQ ID NO:396、以及SEQ ID NO:397)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:193或重链序列SEQ ID NO:194的互补决定区(SEQ ID NO:398、SEQ ID NO:399、以及SEQ ID NO:400)的多核苷酸。
[0803] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab20,编码全长Ab20抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:192的多核苷酸SEQ ID NO:392和编码重链序列SEQ ID NO:194的多核苷酸SEQ ID NO:394。
[0804] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab20进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab20或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab20多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0805] 抗体Ab21
[0806] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF抗体和其片段的多核苷酸,所述抗NGF抗体和其片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变轻链多肽序列SEQ ID NO:51的多核苷酸序列:
[0807] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTTACAGCAATCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCACTCTGGAATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGGGTTTTACTGTTAGTGATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(SEQ ID NO:251)。
[0808] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:401的多核苷酸序列:
[0809] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTTACAGCAATCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCACTCTGGAATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGGGTTTTACTGTTAGTGATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:403)。
[0810] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码可变重链多肽序列SEQ ID NO:53的多核苷酸序列:
[0811] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAACTATGCAGTGGGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAATCATTGGTCGTAATGGTAACACATGGTACGCGAGCTCTGCAAGAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGATATGGCCGTAGTGTTGCTTATTACGTCTTTAACATCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:253)。
[0812] 在本发明的一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:402的多核苷酸序列:
[0813] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAACTATGCAGTGGGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAATCATTGGTCGTAATGGTAACACATGGTACGCGAGCTCTGCAAGAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGATATGGCCGTAGTGTTGCTTACTACGTCTTTAACATCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(SEQ ID NO:404)。
[0814] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、以及SEQ ID NO:257中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:401的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0815] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为多核苷酸序列SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、以及SEQ ID NO:260中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:402的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0816] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:51的多核苷酸SEQ ID NO:251;编码轻链序列SEQ ID NO:401的多核苷酸SEQ ID NO:403;编码重链可变序列SEQ ID NO:53的多核苷酸SEQ ID NO:253;编码重链序列SEQ ID NO:402的多核苷酸SEQ ID NO:404;编码轻链可变序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:401的互补决定区(SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、以及SEQ ID NO:257)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:402的互补决定区(SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、以及SEQ ID NO:260)的多核苷酸。
[0817] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体Ab21,编码全长Ab21抗体的多核苷酸包含或者其组成为编码轻链序列SEQ ID NO:401的多核苷酸SEQ ID NO:403和编码重链序列SEQ ID NO:402的多核苷酸SEQ ID NO:404。
[0818] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以通过在适合的宿主中表达全长多核苷酸之后,对Ab21进行酶消化(例如,木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中,抗NGF抗体(如Ab21或其Fab片段)可以经由在以下各项中表达Ab21多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0819] 抗体片段Fab2
[0820] 在另一个实施方案中,本发明进一步涉及编码抗NGF Fab片段的多核苷酸,所述抗NGF Fab片段抑制NGF与TrkA缔合并且抑制NGF与TrkA缔合。本发明进一步涉及编码对NGF具有结合特异性的Fab抗体片段多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中,本发明的Fab多核苷酸包含或者其组成为下列编码轻链多肽序列SEQ ID NO:407的多核苷酸序列:
[0821] GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTTACAGCAATCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGAAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCACTCTGGAATCTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGGGTTTTACTGTTAGTGATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:409)。
[0822] 在本发明的另一个实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为下列编码重链多肽序列SEQ ID NO:408的多核苷酸序列:
[0823] GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAACTATGCAGTGGGCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAATCATTGGTCGTAATGGTAACACATGGTACGCGAGCTCTGCAAGAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGGATATGGCCGTAGTGTTGCTTACTACGTCTTTAACATCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACTAG(SEQ ID NO:410)。
[0824] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的Fab抗体片段的多核苷酸包含多核苷酸序列SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、以及SEQ ID NO:257中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码轻链可变序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:409的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0825] 在本发明的另一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的Fab抗体片段的多核苷酸包含多核苷酸序列SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、以及SEQ ID NO:260中的一个或多个,所述多核苷酸序列对应于编码重链可变序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:410的互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸。
[0826] 本发明还涵盖了多核苷酸序列,所述多核苷酸序列包括编码本文所描述的抗体片段的多核苷酸序列中的一个或多个。在本发明的一个实施方案中,编码对NGF具有结合特异性的抗体片段的多核苷酸包含或者其组成为下列编码抗体片段的多核苷酸中的一个、两个、三个或更多个(包括所有在内):编码轻链可变序列SEQ ID NO:51的多核苷酸SEQ ID NO:251;编码轻链序列SEQ ID NO:407的多核苷酸SEQ ID NO:409;编码重链可变序列SEQ ID NO:53的多核苷酸SEQ ID NO:253;编码重链序列SEQ ID NO:408的多核苷酸SEQ ID NO:410;编码轻链可变序列SEQ ID NO:51或轻链序列SEQ ID NO:407的互补决定区(SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、以及SEQ ID NO:257)的多核苷酸;以及编码重链可变序列SEQ ID NO:53或重链序列SEQ ID NO:408的互补决定区(SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、以及SEQ ID NO:260)的多核苷酸。
[0827] 在本发明的一个优选实施方案中,本发明的多核苷酸包含或者其组成为编码对NGF具有结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段的多核苷酸。对于抗体片段Fab2,编码Fab片段的多核苷酸包括编码轻链序列SEQ ID NO:407的多核苷酸SEQ ID NO:409和编码重链序列SEQ ID NO:408的多核苷酸SEQ ID NO:410。
[0828] 本发明的另一个实施方案涵盖了被并入到表达载体中以在以下各项中表达的这些多核苷酸:哺乳动物细胞,如CHO、NSO、HEK-293;或真菌系统、昆虫系统、植物系统、植物系统、动物系统或微生物系统,如细菌细胞或酵母细胞,如酵母毕赤酵母。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。在本文(以下)所描述的本发明的一个实施方案中,Fab片段可以经由在以下各项中表达Fab2多核苷酸而产生:哺乳动物细胞,如CHO、NSO或HEK293细胞;真菌系统、昆虫系统、植物系统或微生物系统,如酵母细胞(例如二倍体酵母,如二倍体毕赤酵母)以及其它酵母菌株。适合的毕赤酵母菌种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0829] 在一个实施方案中,本发明涉及一种分离的多核苷酸,所述分离的多核苷酸包含编码选自以下的抗NGF VH抗体氨基酸序列或编码其变体的多核苷酸:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:193或SEQ ID NO:402,其中至少一个框架残基(FR残基)已被存在于兔抗NGF抗体VH多肽中的相应位置上的氨基酸取代或通过保守性氨基酸取代而被取代。
[0830] 在另一个实施方案中,本发明涉及一种分离的多核苷酸,所述分离的多核苷酸包含编码以下抗NGF VL抗体氨基酸序列或编码其变体的多核苷酸序列:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:191或SEQ ID NO:401,其中至少一个框架残基(FR残基)已被存在于兔抗NGF抗体VL多肽中的相应位置上的氨基酸取代或通过保守性氨基酸取代而被取代。
[0831] 在又另一个实施方案中,本发明涉及一种或多种异源多核苷酸,所述异源多核苷酸包含编码以下序列中所含的多肽的序列:SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3;SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:23;SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:33;SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:43;SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:53;SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:63;SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73;SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:83;SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:93;SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:103;SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:113;SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:123;SEQ ID NO:131和SEQ ID NO:133;SEQ ID NO:141和SEQ ID NO:143;
SEQ ID NO:151和SEQ ID NO:153;SEQ ID NO:161和SEQ ID NO:163;SEQ ID NO:171和SEQ ID NO:173;SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:183;SEQ ID NO:191和SEQ ID NO:193;或SEQ ID NO:401和SEQ ID NO:403。
[0832] 在另一个实施方案中,本发明涉及一种表达多肽的分离的多核苷酸,所述多肽含有源自于抗NGF抗体的至少一个CDR多肽,其中所述经过表达的多肽单独特异性地结合NGF或在与另一个多核苷酸序列联合表达时特异性地结合NGF,所述另一个多核苷酸序列表达含有源自于抗NGF抗体的至少一个CDR多肽的多肽,其中所述至少一个CDR选自以下VL或VH多肽中所含的CDR:SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:401或SEQ ID NO:403。
[0833] 还涵盖了包含所述多核苷酸的宿主细胞和载体。
[0834] 本发明进一步涵盖了:载体,包含编码本文所阐述的可变重链和轻链多肽序列以及单个互补决定区(CDR或高变区)的多核苷酸序列;以及宿主细胞,包含所述载体序列。在本发明的一个实施方案中,宿主细胞是酵母细胞。在本发明的另一个实施方案中,酵母宿主细胞属于毕赤酵母属。
[0835] 抗NGF活性
[0836] 对NGF具有结合特异性的本发明抗NGF抗体和其片段的抗NGF活性还可以通过它们对NGF的结合强度或亲和力来加以描述。在本发明的一个实施方案中,对NGF具有结-7 -7 -8 -8合特异性的本发明的抗NGF抗体和其片段以小于或等于5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、-9 -9 -10 -10 -11 -11 -12 -12 -13 -13
5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、5×10 M、10 M、5×10 M或10 M的解-10
离常数(KD)结合至NGF。优选的是,抗NGF抗体和其片段以小于或等于5×10 M的解离常数结合NGF。在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的本发明的抗NGF抗体和其片段与线性或构象NGF表位结合。
[0837] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的本发明的抗NGF抗体和-4 -1 -5 -1 -5 -1 -6 -1 -6 -1 -7 -1其片段的抗NGF活性以小于或等于10 S 、5×10 S 、10 S 、5×10 S 、10 S 、5×10 S-7 -1
或10 S 的解离速率结合至NGF。
[0838] 在本发明的另一个实施方案中,对NGF具有结合特异性的本发明的抗NGF抗体和其片段的抗NGF活性通过预防、改善或减少与NGF相关的疾病和病症的症状或者治疗与NGF相关的疾病和病症而展现出抗NGF活性。以下阐述了与NGF相关的疾病和病症的非限制性实例。
[0839] B细胞筛选和分离
[0840] 在一个实施方案中,本发明涵盖了抗原特异性B细胞的克隆群体的制备和分离,所述抗原特异性B细胞的克隆群体可以被用于分离至少一种NGF抗原特异性细胞,所述NGF抗原特异性细胞可以被用来产生对所希望的NGF抗原具有特异性的NGF单克隆抗体或对应于此种抗体的核酸序列。在例如Carvalho-Jensen等的美国专利公布号US2007/0269868中教导了制备和分离所述抗原特异性B细胞的克隆群体的方法,所述专利公布的公开内容以引用的方式整体并入本文。在本文实施例中也教导了制备和分离所述抗原特异性B细胞的克隆群体的方法。通过大小或密度来“富集”细胞群体的方法在本领域中是已知的。参见,例如美国专利5,627,052。除了通过抗原特异性来富集细胞群体之外,也可以使用这些步骤。
[0841] 对抗体进行人源化的方法
[0842] 在另一个实施方案中,本发明涵盖了用于对抗体重链和轻链进行人源化的方法。在例如Olson等的美国专利申请公布号US2009/0022659和Garcia-Martinez等的美国专利申请公布号US2009/0028784中教导了可以应用于抗NGF抗体的用于对抗体重链和轻链进行人源化的方法,所述专利申请公布中每一个的公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0843] 产生抗体和其片段的方法
[0844] 在另一个实施方案中,本发明涵盖了用于产生抗NGF抗体和其片段的方法。在例如Olson等的美国专利申请公布号US2009/0022659和Garcia-Martinez等的美国专利申请公布号US2009/0028784中教导了用于产生由有交配能力的酵母的多倍体,优选地二倍体或四倍体菌株分泌的抗NGF抗体和其片段的方法,所述专利申请公布中每一个的公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0845] 产生抗体的其它方法为本领域技术人员所熟知。举例来说,产生嵌合抗体的方法如今在本领域中是熟知的(参见,例如Cabilly等的美国专利号4,816,567;Morrison等 ,P.N.A.S.USA,81:8651-55(1984);Neuberger,M.S. 等 ,Nature,314:268-270(1985);Boulianne,G.L.等,Nature,312:643-46(1984),所述专利和参考文献中每一个的公开内容以引用的方式整体并入本文)。
[0846] 同样,产生人源化抗体的其它方法如今在本领域中是熟知的(参见,例如Queen 等 的 美 国 专 利 号 5,530,101、5,585,089、5,693,762、以 及 6,180,370;Winter 的 美 国 专 利 号 5,225,539 和 6,548,640;Carter 等 的 美 国 专 利 号
6,054,297、6,407,213以 及 6,639,055;Adair 的 美 国 专 利 号6,632,927;Jones,P.T. 等 ,Nature,321:522-525(1986);Reichmann,L. 等 ,Nature,332:323-327(1988);
Verhoeyen,M等,Science,239:1534-36(1988),所述专利和参考文献中每一个的公开内容以引用的方式整体并入本文)。
[0847] 对NGF具有结合特异性的本发明的抗体多肽还可以通过使用本领域技术人员所熟知的常规技术建构含有操纵子和编码抗体重链的DNA序列的表达载体而产生,在所述表达载体中,编码为抗体特异性所需的CDR的DNA序列源自于非人细胞来源,优选地源自于兔B细胞来源,而编码抗体链的其余部分的DNA序列源自于人细胞来源。
[0848] 使用本领域技术人员所熟知的相同常规手段产生第二表达载体,所述表达载体含有操纵子和编码抗体轻链的DNA序列,在所述表达载体中,编码为抗体特异性所需的CDR的DNA序列源自于非人细胞来源,优选地源自于兔B细胞来源,而编码抗体链的其余部分的DNA序列源自于人细胞来源。
[0849] 通过本领域技术人员所熟知的常规技术将表达载体转染至宿主细胞中以便产生经过转染的宿主细胞,通过本领域技术人员所熟知的常规技术来培养所述经过转染的宿主细胞以便产生所述抗体多肽。
[0850] 可以用以上所描述的两种表达载体共转染宿主细胞:第一表达载体,含有编码操纵子和轻链衍生的多肽的DNA;和第二载体,含有编码操纵子和重链衍生的多肽的DNA。这两种载体含有不同的选择标记,但优选地使得重链多肽与轻链多肽的表达大致上相等。可替代地,可以使用单个载体,所述载体包括编码重链多肽和轻链多肽两者的DNA。重链和轻链的编码序列可以包含cDNA、基因组DNA或两者。
[0851] 用来表达抗体多肽的宿主细胞可以是细菌细胞(如大肠杆菌)或真核细胞。在本发明的一个特别优选的实施方案中,可以使用明确类型的哺乳动物细胞来实现这个目的,如骨髓瘤细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系、NSO细胞系或HEK293细胞系。
[0852] 可以建构载体的一般方法、产生宿主细胞所需的转染方法以及从所述宿主细胞中产生抗体多肽所需的培养方法都包括常规技术。虽然优选的是,用来产生抗体的细胞系是哺乳动物细胞系,但可以可替代地使用任何其它适合的细胞系,如细菌细胞系(如大肠杆菌衍生的细菌菌株)或酵母细胞系。
[0853] 类似地,抗体多肽在产生后可以根据本领域中的标准工序来加以纯化,所述标准工序例如像错流过滤、硫酸铵沉淀、亲和柱色谱等。
[0854] 本文所描述的抗体多肽还可以被用于设计和合成肽或非肽模拟物,所述肽或非肽模拟物将可用于与本发明的抗体多肽的治疗应用相同的治疗应用。参见,例如Saragobi等,Science,253:792-795(1991),所述参考文献的内容以引用的方式整体并入本文。
[0855] 筛选测定
[0856] 本发明还包括经过设计以有助于鉴定展现出NGF相关疾病或病症的症状的患者的与NGF相关的疾病和病症的筛选测定。
[0857] 在本发明的一个实施方案中,本发明的抗NGF抗体或其NGF结合片段被用来检测从展现出与NGF相关的疾病或病症的症状的患者获得的生物样本中NGF的存在。NGF的存在或其水平在与类似生物样本中的NGF的病前水平相比时有所升高可以有利于诊断与NGF相关的疾病或病症。
[0858] 本发明的另一个实施方案提供了诊断性或筛选测定,以便有助于诊断展现出本文所鉴定的NGF相关疾病或病症症状的患者的与NGF相关的疾病或病症,所述测定包括使用经过翻译后修饰的抗NGF抗体或其结合片段对来自所述患者的生物样本中的NGF表达水平进行测定。抗NGF抗体或其结合片段可以经过翻译后修饰而包括可检测的部分,如先前在本公开内容中所阐述的可检测的部分。
[0859] 使用如本文所阐述的经过修饰的抗NGF抗体或其结合片段测定生物样本中的NGF水平,并且比较生物样本中的NGF水平与标准NGF水平(例如,在正常生物样本中的水平)。熟练的临床医生将了解在正常生物样本之间可能存在某种变异性,并且当评价结果时将会考虑到所述变异性。在本发明的一个实施方案中,本发明的抗NGF抗体可以被用来使NGF表达水平与癌症发展的特定阶段相关联。本领域技术人员将能够测量多名受试者的NGF,以便确立对应于癌症发展的临床上定义的阶段的NGF表达范围。这些范围将允许熟练的专业人员测量被诊断患有癌症的受试者的NGF并且使每个受试者的水平与对应于所述癌症的阶段的范围相关联。本领域技术人员将了解通过以不同的时间间隔测量患者的NGF,可以确定癌症的进展。
[0860] 上述测定还可以用于监测疾病或病症,其中比较在来自被认为患有NGF相关疾病或病症的患者的生物样本中所获得的NGF水平与来自同一名患者的先前生物样本中的NGF水平,以便确定所述患者的NGF水平是否因例如治疗方案而发生变化。
[0861] 本发明还涉及一种检测表达NGF的细胞的存在的体内成像的方法,所述方法包括施用诊断有效量的诊断性组合物。所述体内成像可用于对例如表达NGF的肿瘤或转移进行检测或成像,并且可以用作设计有效癌症治疗方案的计划性方案的一部分。治疗方案可以包括例如以下治疗方案中的一种或多种:放射疗法、化学疗法、细胞因子疗法、基因疗法和抗体疗法、以及抗NGF抗体或其片段。
[0862] 本发明进一步提供了一种用于检测本发明的抗NGF抗体与NGF的结合的试剂盒。具体地说,所述试剂盒可以被用来检测与本发明的抗NGF抗体或其免疫反应性片段具有特异性反应性的NGF的存在。所述试剂盒还可以包括与底物结合的抗体、与抗原具有反应性的二抗以及用于检测二抗与抗原的反应的试剂。此种试剂盒可以是ELISA试剂盒,并且可以包含底物、一抗和二抗(当适当时)、以及任何其它必要的试剂(例如像本文所描述的可检测的部分、酶底物、以及显色试剂)。诊断性试剂盒还可以呈免疫印迹试剂盒的形式。
[0863] 熟练的临床医生将了解生物样本包括但不限于血清、血浆、尿、唾液、黏液、胸膜液、滑液以及脊髓液。
[0864] 改善或减少与NGF相关的疾病和病症的症状或治疗或预防与NGF相关的疾病和病症的方法
[0865] 在本发明的另一个实施方案中,本文所描述的抗NGF抗体或其片段可用于改善或减少与NGF相关的疾病和病症的症状或治疗或预防与NGF相关的疾病和病症。还可以向需要治疗与NGF相关的疾病和病症的患者施用治疗有效量的呈以下更详细描述的药物组合物形式的本文所描述的抗NGF抗体或其片段以及组合。
[0866] 在本发明的一个优选实施方案中,利用Fab片段来治疗患者的疼痛。
[0867] 在本发明的另一个实施方案中,一种或多种抗NGF单价剂可用于改善或减少个体的疼痛的症状或治疗或预防个体的疼痛而大致上不增加所述个体的炎症的方法中。示例性的疼痛阐述于下文中。
[0868] 在本发明的一个实施方案中,本文所描述的抗NGF抗体或其片段和/或连同第二药剂可用于改善或减少下列非限制性清单中的疾病和病症的症状或治疗或预防下列非限制性清单中的疾病和病症:炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛(特别是原发性或转移性骨癌疼痛)、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛、以及其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化。
[0869] 在本发明的另一个实施方案中,本文所描述的抗NGF抗体或其片段和/或连同第二药剂可用于改善或减少下列非限制性清单中的疾病和病症的症状或治疗或预防下列非限制性清单中的疾病和病症:神经源性疼痛、神经痛或伤害感受性疼痛。神经痛可以包括但不限于三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良以及神经源性疼痛。在其它的优选实施方案中,骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛、偏头痛、以及其它神经痛。
[0870] 在本发明的另一个实施方案中,主题NGF拮抗剂(包括抗体和片段,尤其是单价片段,包括不会引起炎症的抗体和片段)可用于改善或减少个体疼痛的症状或治疗或预防个体疼痛的方法中。示例性的可治疗的疼痛病状阐述于下文中。
[0871] 在本发明的一个实施方案中,主题NGF拮抗剂(包括所公开的NGF抗体和片段,尤其是二价和单价片段,包括不会引起炎症的NGF抗体和片段)可单独和/或连同第二药剂一起用于改善或减少下列非限制性清单中的疾病和病症的症状或治疗或预防下列非限制性清单中的疾病和病症:炎症疼痛、手术后切口疼痛、复杂性局部疼痛综合征、癌症疼痛(特别是原发性或转移性骨癌疼痛)、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤引起的疼痛、骨质疏松症、痛风关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛、以及其它伤害感受性疼痛、以及肝细胞癌、乳癌、肝硬化。
[0872] 在本发明的另一个实施方案中,主题NGF拮抗剂(包括所公开的NGF抗体和片段,尤其是二价和单价片段,包括不会引起炎症的NGF抗体和片段)单独或连同其它活性剂一起可用于改善或减少下列非限制性清单中的疾病和病症的症状或治疗或预防下列非限制性清单中的疾病和病症:神经源性疼痛、神经痛或伤害感受性疼痛。神经痛可以包括但不限于三叉神经痛、疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、痛经、卵巢痛、反射性交感神经营养不良以及神经源性疼痛。在其它的优选实施方案中,骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神经病、坐骨神经痛、偏头痛、以及其它神经痛。
[0873] 总体而言,主题NGF拮抗剂(包括所公开的NGF抗体和片段,尤其是二价和单价片段,包括不会引起炎症的NGF抗体和片段)单独和/或连同第二药剂一起可用于改善或减少下列非限制性清单中的NGF相关疾病和病症的症状或治疗或预防下列非限制性清单中的NGF相关疾病和病症,其中病状是急性疼痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素、化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管或非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、纤维肌痛、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏或痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎或内脏痛。
[0874] 可单独和/或连同第二药剂一起使用主题NGF拮抗剂(包括所公开的NGF抗体和片段,尤其是二价和单价片段,包括不会引起炎症的NGF抗体和片段)治疗或预防的术语“NGF介导的疾病”和“NGF介导的病状”宽泛地涵盖与NGF水平增加或对NGF的敏感性增加相关的任何医学病状或病症,所述医学病状或病症包括但不限于急性疼痛、牙痛、由创伤所致的疼痛、手术疼痛、由截肢或脓肿引起的疼痛、灼痛、脱髓鞘疾病、三叉神经痛、癌症、慢性酒精中毒、中风、丘脑性疼痛综合征、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征(“AIDS”)、毒素和化学疗法、一般性头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管和非血管综合征、紧张性头痛、一般性炎症、关节炎、风湿性疾病、狼疮、骨关节炎、炎症性肠病、肠易激综合征、炎症性眼部病症、炎症性或不稳定膀胱病症、牛皮癣、带有炎症成分的皮肤疾患、晒伤、心脏炎、皮炎、肌炎、神经炎、胶原血管疾病、慢性炎症病状、炎症疼痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、神经痛和相关痛觉过敏和痛觉异常、糖尿病性神经痛、灼痛、交感神经维持性疼痛、传入神经阻滞综合征、哮喘、上皮组织损伤或功能异常、单纯性疱疹、呼吸、泌尿生殖器、胃肠或血管区域的内脏活动紊乱、伤口、灼伤、过敏性皮肤反应、瘙痒、白癜风、一般性胃肠病症、结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、血管舒缩性或过敏性鼻炎或支气管病症、痛经、消化不良、胃食管反流、胰腺炎、以及内脏痛。
[0875] 施用
[0876] 在本发明的一个实施方案中,以每公斤接受受试者体重约0.1mg与100.0mg之间的浓度对受试者施用本文所描述的抗NGF抗体或其NGF结合片段、以及所述抗体或抗体片段的组合。在本发明的一个优选实施方案中,以每公斤接受受试者体重约0.4mg的浓度对受试者施用本文所描述的抗NGF抗体或其NGF结合片段、以及所述抗体或抗体片段的组合。在本发明的一个优选实施方案中,以每26周或更短时间一次,如每16周或更短时间一次、每8周或更短时间一次、每4周或更短时间一次、每2周或更短时间一次、每周或更短时间一次或每日或更短时间一次的频率对接受受试者施用本文所描述的抗NGF抗体或其NGF结合片段、以及所述抗体或抗体片段的组合。
[0877] 可以每2周或更短时间一次、每周或更短时间一次、每天或更短时间一次、每天多次和/或每几小时一次施用Fab片段。在本发明的一个实施方案中,患者每天接受0.01mg/kg至40mg/kg的Fab片段,以每天1至6次分次给药形式或以持续释放形式给予,从而有效获得所需结果。
[0878] 应当理解,对给定患者施用的抗体或Fab的浓度可以大于或低于以上所阐述的示例性施用浓度。
[0879] 本领域技术人员将能够通过例如由本文公开内容和以下参考文献中的教义所指导的常规实验来确定有效剂量和施用频率:Goodman,L.S.,Gilman,A.,Brunton,L.L.,Lazo,J.S. 以 及 Parker,K.L.(2006).Goodman&Gilman ′ s the pharmacological basis of therapeutics.New York:McGraw-Hill;Howland,R.D.,Mycek,M.J.,Harvey,R.A.,Champe,P.C.以 及 Mycek,M.J.(2006).Pharmacology.Lippincott ′ s illustrated reviews.Philadelphia:Lippincott Williams&Wilkins;以 及 Golan,D.E.(2008).Principles of pharmacology:the pathophysiologic basis of drug therapy.Philadelphia,Pa.,[等]:Lippincott Williams&Wilkins。
[0880] 在本发明的另一个实施方案中,以药物制剂的形式对受试者施用本文所描述的抗NGF抗体或其NGF结合片段、以及所述抗体或抗体片段的组合。
[0881] “药物组合物”是指适合于对哺乳动物施用的化学或生物组合物。此类组合物可以经过特定配制以经由许多途径中的一种或多种来施用,所述途径包括但不限于经颊、表皮内(epicutaneous)、硬膜外、吸入、动脉内、心内、脑室内、皮内、肌肉内、鼻内、眼内、腹膜内、脊柱内、鞘内、静脉内、口服、胃肠外、经由灌肠剂或栓剂而经直肠施用、皮下、真皮下、舌下、经皮、以及经粘膜施用。另外,施用可以借助于注射剂、散剂、液体、凝胶剂、滴剂或其它施用方式来进行。
[0882] 在本发明的一个实施方案中,本文所描述的抗NGF抗体或其NGF结合片段、以及所述抗体或抗体片段的组合可以任选地与一种或多种活性剂组合施用。所述活性剂包括镇痛剂、抗组胺剂、退热剂、抗炎剂、抗生素、抗病毒剂、以及抗细胞因子剂。活性剂包括激动剂;拮抗剂;以及TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝细胞生长因子(HGF)、铁调素的调节剂,包括对上述任一种具有反应性的抗体和对它们的受体中的任一种具有反应性的抗体。活性剂还包括但不限于2-芳基丙酸、醋氯芬酸(Aceclofenac)、阿西美辛(Acemetacin)、乙酰水杨酸(阿司匹林(Aspirin))、阿氯芬酸(Alclofenac)、阿明洛芬(Alminoprofen)、阿洛普令(Amoxiprin)、氨基安替比林(Ampyrone)、芳基烷酸、阿扎丙宗(Azapropazone)、扑炎痛(Benorylate)/贝诺酯(Benorilate)、苯噁洛芬(Benoxaprofen)、溴芬酸(Bromfenac)、卡洛芬(Carprofen)、塞来昔布(Celecoxib)、胆碱水杨酸镁、氯非宗(Clofezone)、COX-2抑制剂、右布洛芬(Dexibuprofen)、右酮洛芬(Dexketoprofen)、双氯芬酸(Diclofenac)、二氟尼柳(Diflunisal)、屈恶昔康(Droxicam)、乙柳酰胺(Ethenzamide)、依托度酸(Etodolac)、依托昔布(Etoricoxib)、费索沙胺(Faislamine)、灭酸(fenamic acid)、芬布芬(Fenbufen)、非诺洛芬(Fenoprofen)、氟灭酸(Flufenamic acid)、氟诺洛芬(Flunoxaprofen)、氟比洛芬(Flurbiprofen)、布洛芬(Ibuprofen)、异丁普生(Ibuproxam)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚洛芬(Indoprofen)、凯布宗(Kebuzone)、酮洛芬(Ketoprofen)、酮咯酸(Ketorolac)、氯诺昔康(Lornoxicam)、洛索洛芬(Loxoprofen)、罗美昔布(Lumiracoxib)、水杨酸镁、甲氯灭酸(Meclofenamic acid)、甲灭酸(Mefenamic acid)、美洛昔康(Meloxicam)、安乃近(Metamizole)、水杨酸甲酯、莫非布宗(Mofebutazone)、萘丁美酮(Nabumetone)、萘普生(Naproxen)、N-芳基邻氨基苯甲酸、神经生长因子(NGF)、奥沙美辛(Oxametacin)、奥沙普秦(Oxaprozin)、昔康类药物(Oxicam)、羟基保泰松(Oxyphenbutazone)、帕瑞昔布(Parecoxib)、非那宗(Phenazone)、苯基丁氮酮(Phenylbutazone)、苯基丁氮酮、吡罗昔康(Piroxicam)、吡洛芬(Pirprofen)、洛芬类药物(profen)、丙谷美辛(Proglumetacin)、吡唑烷衍生物、罗非昔布(Rofecoxib)、双水杨酸、水杨酰胺、水杨酸盐、磺吡酮(Sulfinpyrazone)、舒林酸(Sulindac)、舒洛芬(Suprofen)、替诺昔康(Tenoxicam)、噻洛芬酸(Tiaprofenic acid)、托灭酸(Tolfenamic acid)、托美丁(Tolmetin)、以及伐地昔布(Valdecoxib)。
[0883] 抗组胺剂可以是对抗组胺作用或它从细胞(例如,肥大细胞)中的释放的任何化合物。抗组胺剂包括但不限于阿伐斯汀(acrivastine)、阿司咪唑(astemizole)、阿扎他啶(azatadine)、氮卓斯汀(azelastine)、贝他斯汀(betatastine)、溴苯那敏(brompheniramine)、布 克 力嗪(buclizine)、西 替利 嗪(cetirizine)、西 替 利嗪类似物、氯苯那敏(chlorpheniramine)、氯斯汀(clemastine)、CS560、赛庚啶(cyproheptadine)、地氯雷他定(desloratadine)、右氯苯那敏(dexchlorpheniramine)、依巴斯汀(ebastine)、依匹斯汀(epinastine)、非索非那定(fexofenadine)、HSR609、羟嗪(hydroxyzine)、左卡巴斯汀(levocabastine)、氯雷他定(loratidine)、甲东莨菪碱(methscopolamine)、咪唑斯汀(mizolastine)、诺阿司咪唑(norastemizole)、苯茚胺(phenindamine)、异丙嗪(promethazine)、美吡拉敏(pyrilamine)、特非那定(terfenadine)、以及曲尼司特(tranilast)。
[0884] 抗生素包括但不限于阿米卡星(Amikacin)、氨基糖苷类(Aminoglycoside)、阿莫西林(Amoxicillin)、氨比西林(Ampicillin)、安莎霉素类(Ansamycin)、胂凡纳明(Arsphenamine)、阿奇霉素(Azithromycin)、阿洛西林(Azlocillin)、氨曲南(Aztreonam)、杆菌肽(Bacitracin)、碳头孢烯(Carbacephem)、碳青霉烯类(Carbapenem)、羧苄西林(Carbenicillin)、头孢克洛(Cefaclor)、头孢羟氨苄(Cefadroxil)、头孢氨苄(Cefalexin)、先锋霉素(Cefalothin)、头孢噻吩(Cefalotin)、头孢孟多(Cefamandole)、头孢唑啉(Cefazolin)、头孢地尼(Cefdinir)、头孢托仑(Cefditoren)、头孢吡肟(Cefepime)、头孢克肟(Cefixime)、头孢哌酮(Cefoperazone)、头孢噻肟(Cefotaxime)、头孢西丁(Cefoxitin)、头孢泊肟(Cefpodoxime)、头孢丙烯(Cefprozil)、头孢他啶(Ceftazidime)、头孢布烯(Ceftibuten)、头孢唑肟(Ceftizoxime)、头孢吡普(Ceftobiprole)、头孢曲松(Ceftriaxone)、头孢呋辛(Cefuroxime)、头孢菌素类(Cephalosporin)、氯霉素(Chloramphenicol)、西司他丁(Cilastatin)、环丙沙星(Ciprofloxacin)、克拉霉素(Clarithromycin)、克林霉素(Clindamycin)、氯唑西林(Cloxacillin)、柯利霉素(Colistin)、复方新诺明(Co-trimoxazole)、达福普汀(Dalfopristin)、地美环素(Demeclocycline)、双氯西林(Dicloxacillin)、地红霉素(Dirithromycin)、多利培南(Doripenem)、多西环素(Doxycycline)、依诺沙星(Enoxacin)、厄他培南(Ertapenem)、红霉素(Erythromycin)、乙胺丁醇(Ethambutol)、氟氯西林(Flucloxacillin)、磷霉素(Fosfomycin)、呋喃唑酮(Furazolidone)、夫西地酸(Fusidic acid)、加替沙星(Gatifloxacin)、格尔德霉素(Geldanamycin)、庆大霉素(Gentamicin)、糖肽类(Glycopeptide)、除莠霉素(Herbimycin)、亚胺培南(Imipenem)、异烟肼(Isoniazid)、卡那霉素(Kanamycin)、左氧氟沙星(Levofloxacin)、林可霉素(Lincomycin)、利奈唑胺(Linezolid)、洛美沙星(Lomefloxacin)、氯碳头孢(Loracarbef)、大环内酯类(Macrolide)、磺胺米隆(Mafenide)、美罗培南(Meropenem)、甲氧西林(Meticillin)、甲硝唑(Metronidazole)、美洛西林(Mezlocillin)、米诺环素(Minocycline)、单环β-内酰胺类(Monobactam)、莫西沙星(Moxifloxacin)、莫匹罗星(Mupirocin)、萘夫西林(Nafcillin)、新霉素(Neomycin)、奈替米星(Netilmicin)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)、诺氟沙星(Norfloxacin)、氧氟沙星(Ofloxacin)、苯唑西林(Oxacillin)、土霉素(Oxytetracycline)、巴龙霉 素(Paromomycin)、青霉素(Penicillin)、青霉 素类(Penicillin)、哌拉西 林(Piperacillin)、平板霉 素(Platensimycin)、多粘菌素B(Polymyxin B)、多肽类、百浪多息(Prontosil)、吡嗪酰胺(Pyrazinamide)、喹诺酮类、奎奴普丁(Quinupristin)、利福平(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、罗红霉素(Roxithromycin)、大观霉素(Spectinomycin)、链霉素(Streptomycin)、磺胺醋酰(Sulfacetamide)、磺胺甲二唑(Sulfamethizole)、对氨基苯磺酰胺(Sulfanilimide)、柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine)、磺胺异噁唑(Sulfisoxazole)、磺胺类(Sulfonamide)、替考拉宁(Teicoplanin)、泰利霉素(Telithromycin)、四环素(Tetracycline)、四环素类(Tetracycline)、替卡 西林(Ticarcillin)、替硝唑(Tinidazole)、妥布霉素(Tobramycin)、甲氧苄啶(Trimethoprim)、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(Trimethoprim-Sulfamethoxazole)、醋竹桃霉素(Troleandomycin)、曲氟沙星(Trovafloxacin)、以及万古霉素(Vancomycin)。
[0885] 活性剂还包括醛甾酮(Aldosterone)、倍氯米松(Beclometasone)、倍他米松(Betamethasone)、皮质类固醇(Corticosteroid)、皮质醇(Cortisol)、醋 酸可的 松 (Cortisone acetate)、醋 酸 脱 氧 皮 质 酮 (Deoxycorticosterone acetate)、地 塞 米 松(Dexamethasone)、醋 酸 氟 氢 可 的 松(Fludrocortisone acetate)、糖皮质激素类(Glucocorticoid)、氢化可的松(Hydrocortisone)、甲基强的 松龙(Methylprednisolone)、强的松龙(Prednisolone)、强的松(Prednisone)、类固醇、以及曲安西龙(Triamcinolone)。还涵盖了这些活性剂的任何适合的组合。
[0886] “药物赋形剂”或“药学上可接受的赋形剂”是载体,通常是液体,在所述载体中,对活性治疗剂进行配制。在本发明的一个实施方案中,活性治疗剂是本文所描述的人源化抗体或其一个或多个片段。赋形剂一般不会向制剂提供任何药理学活性,但是它可以提供化学和/或生物稳定性以及释放特征。示例性制剂可以见于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,第19版,Grennaro,A.编著,1995中,所述出版物以引用的方式并入本文。
[0887] 本文所用的“药学上可接受的载体”或“赋形剂”包括生理学上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包覆剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂以及吸收延迟剂。在一个实施方案中,载体适合于胃肠外施用。可替代地,载体可以适合于静脉内施用、腹膜内施用、肌肉内施用或舌下施用。药学上可接受的载体包括无菌水性溶液或分散液以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。针对药物活性物质使用此类介质和试剂在本领域中是熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容,否则应考虑将它们用于本发明的药物组合物中。还可以将补充的活性化合物并入组合物中。
[0888] 药物组合物典型地必须是无菌的并且在制造和储存的条件下保持稳定。本发明涵盖了药物组合物以冻干形式存在。组合物可以被配制成溶液、微乳液、脂质体或其它适于高药物浓度的有序结构。载体可以是溶剂或分散介质,所述溶剂或分散介质含有例如水、乙醇、多元醇(例如,甘油、丙二醇、以及液体聚乙二醇)、以及其适合的混合物。本发明进一步涵盖了在药物组合物中纳入稳定剂。可以例如通过使用包覆剂(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需的粒径以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。
[0889] 在许多情况下,将优选的是,在组合物中纳入等渗剂,例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨糖醇)或氯化钠。可以通过在组合物中纳入延缓吸收的试剂(例如单硬脂酸盐和明胶)来使可注射组合物的吸收延长。此外,可以将碱性多肽配制成定时释放制剂,例如包括缓释聚合物的组合物。可以将活性化合物与将保护化合物以免快速释放的载体一起制备成如控制释放制剂,包括植入物和微包囊递送系统。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物,如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、聚乳酸以及聚乳酸/聚乙醇酸共聚物(PLG)。用于制备此类制剂的许多方法是为本领域技术人员已知的。
[0890] 对于所述实施方案中的每一个,可以通过多种剂型来施用化合物。涵盖了本领域技术人员已知的任何生物学上可接受的剂型和其组合。此类剂型的实例包括但不限于可复水的粉末、酏剂、液体、溶液、混悬液、乳剂、散剂、颗粒剂、粒子、微粒、可分散的颗粒剂、扁胶剂、吸入剂、气溶胶吸入剂、贴剂、粒子吸入剂、植入物、储库植入物、注射剂(包括皮下、肌肉内、静脉内、以及皮内注射剂)、输注剂、以及其组合。
[0891] 以上对本发明的各个所示实施方案进行的描述不意图是详尽的或将本发明限于所公开的精确形式。如相关领域的技术人员将认识到,虽然本文出于说明性的目的描述了本发明的具体实施方案和实施例,但各种等效修改在本发明范围内是可能的。除了以上所描述的实施例之外,可以将本发明的在本文中所提供的教义应用于其它目的。
[0892] 可以根据以上详细的描述对本发明作出这些和其它变化。总体而言,在下列权利要求书中,所使用的术语不应该被解释为将本发明限于在本说明书和权利要求书中所公开的具体实施方案。因此,本发明并不受本公开内容限制,但实际上,本发明的范围完全由下列权利要求书确定。
[0893] 本发明可以按照除在以上描述和实施例中所具体描述的那些方法以外的方法来实践。根据以上教义,本发明的众多修改和变化是可能的,并且因此在所附权利要求书的范围内。
[0894] 某些与用于获得抗原特异性B细胞的克隆群体的方法相关的教义公开在2006年5月19日提交的美国临时专利申请号60/801,412中,所述临时专利申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0895] 某些与对兔源性单克隆抗体进行人源化和用以维持抗原结合亲和力的优选序列修饰相关的教义公开在2008年5月21日提交的名称为“Novel Rabbit Antibody Humanization Methods and Humanized Rabbit Antibodies”的对应于国际公布号WO/2008/144757的国际申请号PCT/US2008/064421中,所述国际申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0896] 某些与使用有交配能力的酵母和相应的方法产生抗体或其片段相关的教义公开在2006年5月8日提交的美国专利申请号11/429,053(美国专利申请公布号US2006/0270045)中,所述专利申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0897] 某些NGF抗体多核苷酸和多肽公开在伴随本专利申请提交的序列表中,并且所述序列表的公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0898] 在发明背景、发明详述、以及实施例中所引用的每个文献(包括专利、专利申请、期刊论文、摘要、手册、书籍或其它公开物)的全部公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0899] 提出下列实施例以便为本领域技术人员提供如何作出和使用本发明的完整的公开内容和描述,并且不意图限制被视为本发明者的范围。已经努力确保所使用的数字(例如量、温度、浓度等)的准确性,但是应允许存在一些实验性误差和偏差。除非另外指出,否则份数是重量份数,分子量是平均分子量,温度是以摄氏度为单位,并且压力等于或接近大气压。实施例
[0900] 实施例1:结合NGF的抗体的制备
[0901] 通过使用本文所描述的抗体选择方案,可以产生一组广泛的抗体。
[0902] 免疫接种策略
[0903] 用huNGF(明尼苏达州明尼阿波里斯市的安迪生物科技有限公司)对兔进行免疫接种。免疫接种由以下组成:首先皮下(sc)注射于完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)(西格玛公司(Sigma))中的100μg huNGF,接着进行两次追加免疫接种,相隔两周,每一次免疫接种于不完全弗氏佐剂(IFA)(西格玛公司)中的50μg huNGF。在第55天给动物放血,并且通过ELISA(抗原识别)和通过非放射性增殖测定(普洛麦格公司(Promega))使用T1165细胞系来测定血清效价。
[0904] 抗体选择效价评估
[0905] 为了对与人NGF结合的抗体进行鉴定和表征,通过ELISA来测试含有抗体的溶液。简言之,在室温下用ELISA缓冲液(0.1mg/mL BSA、1倍PBS pH7.4、0.002%吐温20(Tween20)以及0.005%叠氮化钠)将涂有中性抗生物素蛋白的培养板(赛默科技公司(Thermo Scientific))阻断1小时。然后,在室温下用1μg/mL生物素化B-NGF在ELISA缓冲液中的溶液涂布所述培养板1小时。在这之后进行洗涤步骤(使用PBS加上0.05%吐温20洗涤3次),并且用ELISA缓冲液进行第二次阻断。然后将重组抗体添加至所述培养板上并且在室温下孵育1小时,然后用PBS/吐温溶液洗涤3次。为了显影,将抗兔Fc-HRP(在ELISA缓冲液中1:5000稀释)添加至各孔上并且在室温下孵育45分钟。用PBS/吐温溶液进行3次洗涤步骤之后,使用TMB底物将所述培养板显影3分钟,使用0.5M HCl停止并且在450nm下读数。
[0906] 功能性效价评估
[0907] 为了测试NGF抗体阻断NGF依赖型细胞增殖的能力,我们使用了TF-1细胞(Chevalier等,Expression and functionality of the trkA proto-oncogene product/NGF receptor in undifferentiated hematopoietic cells.Blood(1994),第83卷(6)第1479-1485页)。简言之,将TF-1细胞维持在补充有rhuGM-CSF的10%FBS cRPMI培养基(“完全培养基”)中。在测定当天,在圆底96孔培养板中在完全培养基中连续稀释抗体。
伴随添加B-NGF(安迪生物科技有限公司),并且在37℃下将所得到的抗体/B-NGF混合物孵育1小时。在正在孵育Ab与B-NGF的混合物同时,用完全培养基将TF-1细胞洗涤3次,计数并且使用每孔25,000个细胞以50μL体积接种在平底96孔培养板中。在孵育1小时之后,将NGF-抗体混合物添加至细胞上,并且在37℃下、在加湿的5%CO2孵育箱中将培养板孵育48小时。使用“CellTiter”Aqueous单溶液细胞增殖测定(普洛麦格公司)根据制造商的说明书测量细胞增殖。分析信号对抗体浓度的依赖性,并且使用GraphPad Prism程序计算IC50值。
[0908] 组织采集
[0909] 在确立了可接受的效价之后,将一只或多只兔处死。采集脾脏、淋巴结、以及全血,并且如下进行处理:
[0910] 通过分离组织并且用20cc注射器柱塞将组织推过70μm的无菌金属丝网(飞世尔公司(Fisher))来将脾脏和淋巴结处理成单细胞悬浮液。将细胞收集在PBS中。通过离心将细胞洗涤两次。在最后一次洗涤之后,通过台盼蓝(trypan blue)确定细胞密度。在1500rpm下将细胞离心10分钟,弃去上清液。将细胞重悬在适当体积的含10%二甲亚砜(DMSO,西格玛公司)的FBS(海克隆公司(Hyclone))中,并且以1毫升/小瓶分配。在-70℃下、在缓慢冷冻室中将小瓶储存24小时并且储存在液氮中。
[0911] 通过将全血与不含FBS的以上所描述的等份低葡萄糖培养基混合来分离外周血单核细胞(PBMC)。将35ml全血混合物小心地平铺在8ml的兔淋巴细胞分离液(Lympholyte Rabbit)(桑达兰公司(Cedarlane))上放入45ml锥形管(康宁公司(Corning))中,并且在室温下以2500rpm在没有制动器的情况下离心30分钟。离心之后,使用玻璃巴斯德移液管(Pasteur pipette)(VWR公司)小心地移出PBMC层,合并并且放置到干净的50ml小瓶中。用以上所描述的改良型培养基,通过在室温下以1500rpm离心10分钟将细胞洗涤两次,并且通过台盼蓝染色法确定细胞密度。在最后一次洗涤之后,如上所述将细胞重悬在适当体积的10%DMSO/FBS培养基中并且冷冻。
[0912] B细胞培养
[0913] 在建立B细胞培养当天,将PBMC、脾细胞或淋巴结小瓶融解以供使用。将小瓶从LN2罐中移出并且放置在37℃水浴中直到融解为止。将小瓶的内容物转移至15ml锥形离心管(康宁公司)中,并且将10ml的以上所描述的改良型RPMI缓慢添加至所述管中。在1.5K rpm下将细胞离心5分钟,并且弃去上清液。将细胞重悬在10ml新鲜培养基中。通过台盼蓝来确定细胞密度和活力。再将细胞洗涤并且以1E07个细胞/80μL培养基重悬。将生物素化huNGF(B huNGF)添加至细胞悬浮液中以达到3ug/mL的最终浓度,并且在4℃下孵育30分钟。用10ml的以下磷酸盐缓冲液(PBF)洗涤两次来去除未结合的B huNGF:不含Ca/Mg的PBS(海克隆公司)、2mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5%牛血清白蛋白(BSA)(西格玛公司,不含生物素)。在第二次洗涤之后,将细胞以1E07个细胞/80μl PBF重悬。将20μl的 链霉亲和素珠(美天旎公司(Milteni))/10E7个细胞添加至细胞悬浮液中。在
4℃下将细胞孵育15分钟。用2ml PBF/10E7个细胞将细胞洗涤一次。洗涤之后,将细胞以
1E08个细胞/500μl PBF重悬并且搁置。在磁力座(美天旎公司)上,用500ml的PBF对MS柱(美天旎公司)进行预冲洗。通过预过滤器将细胞悬浮液施加至所述柱中,
并且收集未结合的组分。用1.5ml的PBF缓冲液洗涤所述柱。将所述柱从磁力座中移出并且放置在干净无菌的5ml聚丙烯Falcon管上。将1ml的PBF缓冲液添加至所述柱的顶部,并且收集阳性选择细胞。通过台盼蓝染色法来确定阳性和阴性细胞组分的产率和活力。阳性选择产生了平均1%的初始细胞浓度。
[0914] 确立初步细胞筛选以便提供关于用于培养的接种水平的信息。以每孔10个、25个、50个、100个或200个富集了的B细胞对培养板进行接种。另外,每个孔在高葡萄糖改良型RPMI培养基中含有50K个细胞/孔的经过辐射处理的EL-4.B5细胞(5,000拉德)和适当水平的活化兔T细胞上清液(参见美国专利申请公布号20070269868)(在1%至5%范围内,取决于制备),最终体积是250微升/孔。在37℃下、在4%CO2中将培养物孵育5至7天。
[0915] 选择性抗体分泌型B细胞的鉴定
[0916] 在第5天与第7天之间,测试培养物的抗原识别和功能活性。
[0917] 抗原识别筛选
[0918] 除了使用来自B细胞培养物(BCC)孔的50μl上清液作为抗体来源之外,所使用的ELISA形式如以上所描述。将条件培养基转移至涂有抗原的培养板上。在鉴定了阳性孔之后,将上清液移出并且转移至96孔母板(master plate)中。然后通过去除除了40微升/孔之外的所有上清液并且添加60微升/孔的含16%DMSO的FBS来冷冻原始培养板。用纸巾包裹培养板以便减缓冷冻并且在添加10%DMSO之后冷冻在-70℃下。
[0919] 功能活性筛选
[0920] 为了测试NGF抗体阻断NGF依赖型细胞增殖的能力,我们使用了TF-1细胞(Chevalier等,Expression and functionality of the trkA proto-oncogene product/NGF receptor in undifferentiated hematopoietic cells.Blood(1994)第83卷(6)第1479-1485页)。简言之,将TF-1细胞维持在补充有rhuGM-CSF的10%FBS cRPMI培养基(“完全培养基”)中。在测定当天,在圆底96孔培养板中在完全培养基中连续稀释抗体。
伴随添加B-NGF(安迪生物科技有限公司),并且在37℃下将所得到的抗体/B-NGF混合物孵育1小时。在正在孵育Ab与B-NGF的混合物同时,用完全培养基将TF-1细胞洗涤3次,计数并且使用每孔25,000个细胞以50μL体积接种在平底96孔培养板中。在孵育1小时之后,将NGF-抗体混合物添加至细胞上,并且在37℃下、在加湿的5%CO2孵育箱中将培养板孵育48小时。使用“CellTiter”Aqueous单溶液细胞增殖测定(普洛麦格公司)根据制造商的说明书测量细胞增殖。分析信号对抗体浓度的依赖性,并且使用GraphPad Prism程序计算IC50值。
[0921] B细胞回收
[0922] 将含有目标孔的培养板从-70℃下移出,并且用5μl至200μl培养基洗涤液/孔来回收每个孔中的细胞。将洗涤液汇集在1.5ml无菌离心管中,并且在1500rpm下使细胞沉淀2分钟。
[0923] 将所述管倒置,重复离心,并且小心地去除上清液。将细胞重悬在100微升/管的培养基中。将100μl涂有生物素化NGF的链霉亲和素M280磁珠(dynabead)(英杰公司)和16μl在培养基中1:100稀释的山羊抗兔H&L IgG-FITC添加至细胞悬浮液中。
[0924] 移出20μl的细胞/珠粒/FITC悬浮液,并且在先前用Sigmacote(西格玛公司)处理过的载玻片(康宁公司)上制备5μl液滴,每个载玻片35个至40个液滴。添加石蜡油(贝克公司(JT Baker))的不可渗透阻挡层以浸没液滴,并且在黑暗中、在37℃、4%CO2下将所述载玻片孵育90分钟。
[0925] 产生抗体的特异性B细胞可以通过因分泌抗体,识别与珠粒缔合的生物素化抗原并且随后由荧光IgG检测试剂检测到而在它们周围所产生的荧光环来鉴定。在鉴定了目标细胞之后,经由显微操纵器(本德公司(Eppendorf))回收荧光环中心的细胞。将合成并且输出抗体的单细胞转移至250μl微量离心管中并且放置在中。在回收所有目标细胞之后,将这些细胞转移至-70℃下以长期储存。
[0926] 从抗原特异性B细胞中分离抗体序列
[0927] 使用基于组合的RT-PCR的方法,从单个分离的B细胞或分离自克隆B细胞群体的抗原特异性B细胞中回收抗体序列。引物经过设计以在目标免疫球蛋白基因(如兔免疫球蛋白序列)的保守区和恒定区(重链和轻链)中退火,并且使用两步巢式PCR回收步骤来获得抗体序列。分析来自每个孔的扩增子的回收率和大小完整性。然后用AluI消化所得到的片段以便对序列克隆性进行指纹图谱分析。相同的序列在它们的电泳分析中显示出共同的片段化图案。然后用HindIII和XhoI或HindIII和BsiwI对原始的重链和轻链扩增子片段进行限制性内切酶消化,以便制备用于克隆的对应的DNA段。然后将所得到的消化物接合至表达载体中并且转化到用于质粒繁殖和产生的细菌中。选择菌落用于序列表征。
[0928] 重组产生具有所需的抗原特异性和/或功能特性的单克隆抗体
[0929] 针对含有单一单克隆抗体的每个孔确立正确的全长抗体序列,并且使用凯杰公司(Qiagen)固相方法制备少量制备的DNA。然后使用这种DNA来转染哺乳动物细胞以便产生重组全长抗体。测试含有抗体的上清液或经过蛋白质-A亲和纯化的抗体的抗原识别和功能特性,以便确认在重组抗体蛋白质中存在原始特征。
[0930] 抗原特异性ELISA
[0931] 为了对与人NGF结合的抗体和Fab片段进行鉴定和表征,通过ELISA来测试含有抗体和Fab的溶液。简言之,在室温下用ELISA缓冲液(0.1mg/mL BSA、1倍PBS(pH7.4)、0.002%吐温20以及0.005%叠氮化钠)将涂有中性抗生物素蛋白的培养板(赛默科技公司)阻断1小时。然后,在室温下用1μg/mL生物素化B-NGF在ELISA缓冲液中的溶液将所述培养板涂布1小时。在这之后进行洗涤步骤(使用PBS加上0.05%吐温20洗涤3次)并且用ELISA缓冲液进行第二次阻断。然后将重组抗体或Fab添加至所述培养板上并且在室温下孵育1小时,然后用PBS/吐温溶液洗涤3次。为了显影,将抗人Fc-HRP或抗人Fab片段HRP(在ELISA缓冲液中1:5000稀释)添加至各孔上并且在室温下孵育45分钟。用PBS/吐温溶液进行3次洗涤步骤之后,使用TMB底物将所述培养板显影3分钟,使用0.5M HCl停止,并且在450nm下读数。
[0932] 结果:图24至图40示出了抗NGF抗体Ab1-Ab21与NGF结合。此外,图28和图29示出了Fab抗体片段Fab1和Fab2与NGF结合。
[0933] 功能活性筛选
[0934] 为了测试NGF抗体阻断NGF依赖型和TrkA受体介导的细胞增殖活性的能力,我们使用了TF-1细胞(Chevalier等,Expression and functionality of the trkA proto-oncogene product/NGF receptor in undifferentiated hematopoietic cells.Blood(1994)第83卷(6)第1479-1485页)。简言之,将TF-1细胞维持在补充有rhuGM-CSF的10%FBS cRPMI培养基(“完全培养基”)中。在测定当天,在圆底96孔培养板中在完全培养基中连续稀释抗体。伴随添加B-NGF(安迪生物科技有限公司),并且在37℃下将所得到的抗体/B-NGF混合物孵育1小时。在正在孵育Ab与B-NGF的混合物同时,用完全培养基将TF-1细胞洗涤3次,计数并且使用每孔25,000个细胞以50μL体积接种在平底96孔培养板中。在孵育1小时之后,将NGF-抗体混合物添加至细胞上,并且在37℃下、在加湿的5%CO2孵育箱中将所述培养板孵育48小时。使用“CellTiter”Aqueous单溶液细胞增殖测定(普洛麦格公司)根据制造商的说明书测量细胞增殖。分析信号对抗体浓度的依赖性,并且使用GraphPad Prism程序计算IC50值。
[0935] 结果:图41至图52示出了抗NGF抗体Ab1-Ab20抑制TF-1细胞增殖。此外,图44示出了Fab抗体片段也抑制TF-1细胞增殖。这些Fab抗体片段通过以下而产生:1)巴斯德毕赤酵母表达Fab2;以及2)对在巴斯德毕赤酵母中产生的Ab21进行酶消化(Fab1)。
[0936] 实施例2:酶促产生Fab片段
[0937] 根据制造商的说明书,使用固定化的木瓜蛋白酶(赛默科技公司/皮尔斯公司(Pierce))进行木瓜蛋白酶消化。简言之,在37℃下,在平缓摇动下将经过纯化的抗体在含有固定化的木瓜蛋白酶的含半胱氨酸/HCl缓冲液中孵育。通过取出等分试样并且使用SDS-PAGE分析重链的裂解来监测消化。为了停止反应,将固定化的木瓜蛋白酶离心出并且使用50mM Tris pH7.5洗涤并且过滤。通过使用MabSelectSure(GE公司)柱去除未消化的全长抗体和Fc片段。
[0938] 实施例3:酵母细胞表达
[0939] 抗体基因:克隆并且建构引导嵌合人源化兔单克隆抗体合成的基因。
[0940] 方法
[0941] 建构用于重链和轻链抗体的巴斯德毕赤酵母表达载体。
[0942] 商业上合成了轻链和重链片段(嵌合体或人源化)并且将其亚克隆至pGAP表达载体中。pGAP表达载体使用GAP启动子来驱动免疫球蛋白链和用于输出的人血清白蛋白(HAS)前导序列表达。另外,这种载体含有常见的元件(如细菌复制起点)和Sh ble基因的TM TM拷贝,所述Sh ble基因赋予对抗生素Zeocin (腐草霉素(phleomycin))的抗性。Zeocin提供了对含有所需表达载体的菌株进行选择的手段,所述表达载体已整合到所述菌株的基因组中。
[0943] 将表达载体转化至巴斯德毕赤酵母的单倍体met1和lys3宿主菌株中
[0944] 如 在 Pichia Protocols(Methods in Molecular Biology Higgings,DR 和Cregg,JM编著,1998.Humana Press,Totowa,NJ)中所描述进行用于转化单倍体巴斯德毕赤酵母菌株和操纵巴斯德毕赤酵母性周期的所有方法。在转化之前,将每个载体在GAP启动子序列内线性化,以便引导所述载体整合到巴斯德毕赤酵母基因组的GAP启动子基因座中。使用电穿孔转染单倍体菌株并且在YPD Zeocin(TM)培养板上选择成功的转化体,然后在96孔培养板中培养两天。使单倍体菌株交配并且针对它们在不存在营养缺陷型标记(即,Lys和Met)的情况下生长的能力进行选择。然后,使用监测表达的装有蛋白质A生物传感器的ForteBio Octet系统,针对二倍体菌株表达全长抗体或Fab抗体片段的能力来对它们进行选择。
[0945] 实施例4:在巴斯德毕赤酵母中表达Ab21和Fab2
[0946] 制备用于表达全长Ab21或Fab2抗体片段的两种毕赤酵母菌株。对于这两种表达全长抗体或Fab的菌株,产生单倍体菌株并且随后交配。一种单倍体菌株表达Ab21的全长轻链序列,并且另一种单倍体菌株表达全长Ab21或表达重链的截短形式以表达Fab片段(例如,Fab2)。将每个二倍体菌株用来产生研究细胞库并且用于在生物反应器中表达。
[0947] 首先使用研究细胞库,利用包含下列营养物(%w/v)的培养基来扩增接种物:酵母提取物3%、无水右旋糖4%、YNB1.34%、含有100mM磷酸的0.004%生物素。在震荡孵育箱中在30℃和300rpm下使培养物扩增约24小时以便产生用于发酵器的接种物。然后将10%接种物添加至容纳无菌生长培养基的Labfors2.5L工作体积的容器中。用于全长Ab21的生长培养基包含下列营养物:硫酸钾18.2g/L、磷酸二氢铵36.4g/L、磷酸氢二钾12.8g/L、七水合硫酸镁3.72g/L、二水合柠檬酸钠10g/L、甘油40g/L、酵母提取物30g/L、PTM1痕量金属4.35mL/L、以及消泡剂2041.67mL/L。PTM1痕量金属溶液包含下列组分:五水合硫酸铜6g/L、碘化钠0.08g/L、水合硫酸锰3g/L、二水合钼酸钠0.2g/L、酸0.02g/L、氯化钴0.5g/L、氯化锌20g/L、七水合硫酸亚铁65g/L、生物素0.2g/L、以及硫酸5mL/L。
[0948] 用于Fab2片段的生长培养基包含下列营养物:硫酸钾10.92g/L、磷酸二氢铵21.84g/L、磷酸氢二钾7.68g/L、七水合硫酸镁3.72g/L、二水合柠檬酸钠10g/L、甘油40g/L、酵母提取物30g/L、PTM1痕量金属溶液2.61mL/L、以及消泡剂2041.67mL/L。PTM1痕量金属溶液包含下列组分:五水合硫酸铜6g/L、碘化钠0.08g/L、水合硫酸锰3g/L、二水合钼酸钠0.2g/L、硼酸0.02g/L、氯化钴0.5g/L、氯化锌20g/L、七水合硫酸亚铁65g/L、生物素
0.2g/L、以及硫酸5mL/L。两种蛋白质均在类似的条件下表达。简言之,将生物反应器过程控制参数如下设定:搅拌1000rpm、空气流量每分钟1.35标准升、温度28℃,并且使用氢氧化铵将pH值控制在6。不提供氧气补充。
[0949] 使发酵培养物生长约12至16小时,直到如由溶解氧峰值所指示初始甘油被耗尽为止。在溶解氧峰值之后,使培养物饥饿约三小时。在这个饥饿期之后,将推注式乙醇添加物添加至反应器中以达到1%的乙醇(w/v)。使发酵培养物平衡15至30分钟。在推注乙醇后30分钟开始添加进料并且设定在1毫升/分钟的恒定速率,持续40分钟,然后通过乙醇传感器控制进料,所述乙醇传感器在剩余运行时间内将乙醇的浓度保持在1%。进料包含下列组分:酵母提取物50g/L、右旋糖500g/L、七水合硫酸镁3g/L、以及PTM1痕量金属12mL/L。对于全长Ab21的发酵,还将二水合柠檬酸钠(0.5g/L)添加至进料中。总发酵时间是约90小时。
[0950] 实施例5:对NGF-p75相互作用的抑制
[0951] 据报道,NGF与细胞表面上的两种受体相互作用:TrkA和p75。使用经由“Octet”进行的生物层干涉技术(biolayer interferometry)测定来表征抗NGF抗体抑制NGF-p75相互作用的能力。简言之,在1倍动力学缓冲液(1倍PBS ph7.4、0.002%吐温20、0.005%叠氮化钠以及0.1mg/mL BSA)中对链霉亲和素(SA)传感器进行预润湿。再使用1倍动力学缓冲液获得基线,随后使正被测试的生物素化抗体结合并且在1倍动力学缓冲液中获得另一条短基线。接下来加载NGF(1μg/mL),然后将传感器转移至1倍动力学缓冲液上。在将NGF加载至抗体上之后,在一个传感器上,使用5μg/mL的生物素化抗体的未标记溶液来阻断NGF的所有可能的位点。作为对照,在这第二次阻断步骤期间,将平行传感器浸没至1倍动力学缓冲液中。然后使两个传感器均暴露于含有p75的溶液(1.2μg/mL)。然后通过监测在使由抗体固定化的NGF暴露于可溶性p75时信号的增加来表征抗体阻断NGF-p75相互作用的能力。
[0952] 结果:图53和图54示出了抗NGF抗体Ab3、Ab4、Ab15、以及Ab16不抑制NGF与p75结合,而图55示出了抗体Ab5抑制NGF与p75结合。
[0953] 实施例6:神经突PC12测定
[0954] 在体外使用大鼠肾上腺髓质细胞系PC12测量了抗NGF抗体阻断经由p75和TrkA受体介导的NGF信号转导的能力。PC12细胞在它们的细胞表面上表达p75和TrkA受体两者(Urdiales等,Cell cycle phase-specific surface expression of nerve growth factor receptors TrkA and p75(NTR).J Neurosci(1998)第18卷(17)第6767-6775页);(Greene和Tischler.Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor.Proc Natl Acad Sci USA(1976)第73卷(7)第2424-2428页)。简言之,在致敏之前使用15%FBS RPMI在培养物中维持PC12细胞,并且使其在涂有胶原I的烧瓶上生长48小时。然后通过使细胞暴露于分化培养基(1%马血清RPMI)中的100ng/mLNGF而使细胞‘致敏’72小时。在测定当天,用细胞刮棒收集细胞,用分化培养基(不含NGF)重悬、冲洗并且接种在涂有胶原I的24孔培养板上。在所述测定中NGF的最终浓度是100ng/mL。在分化培养基中将正被测试的抗体与NGF以不同的摩尔比(10倍至0.1倍)预孵育1小时,之后将它们添加至PC-12细胞上。
在第3天,轻轻地去除培养基,并且替换抗体-NGF混合物。在第10天,在显微镜下观察各孔,并且使用10×放大透镜对代表性视野进行数字化处理。
[0955] 结果:图56至图69以及图78和图79示出了抗NGF抗体Ab1至Ab3、Ab5至Ab11、Ab13、Ab15、Ab16、以及Ab17至Ab19在递增浓度下抑制PC-12神经突细胞生长。可以看出,当在与所测试的其它抗NGF抗体相同的抗体浓度下测定时,抗体Ab3、Ab15以及Ab16对PC-12神经突细胞生长所显示出的抑制作用显著较小。这种差异被认为归因于以下事实:Ab3、Ab15以及Ab16均抑制TrkA/NGF相互作用而不抑制NGF/p75相互作用,然而所测试的其余抗体抑制NGF与TrkA和p75两者相互作用。
[0956] 实施例7:由步态分析评估的疼痛的调节作用
[0957] 为了评估抗NGF剂(全长和Fab片段)在调节疼痛的能力方面的作用,使用了PGPS(肽聚糖多糖)诱发的关节炎模型。简言之,在第(-)17天将PGPS溶液注射到雄性路易斯大鼠(Lewis rat)的右踝关节中。一天后,评价踝关节对PGPS注射的炎症反应,并且排除无反应者。使反应者恢复十七天,之后用PGPS进行IV尾静脉再活化。
[0958] 在再活化前2小时或前一晚,进行全长抗体给药一次。每天施用Fab片段一次,其中第一剂量在再活化前两小时施用。通过将墨水涂覆于足腹表面并且在纸上记录移动期间的荷重(足迹)来进行步态分析。将大鼠的后足放在蓝色墨水中,并且将黑色墨水涂覆到疑似疼痛的腿上的足背面。将大鼠放在纸上并且使其行走。如下对步态进行评分:0分=正常,双足上的墨水染色相等;1分=轻微跛行,足尖染色明显并且存在一些足跟染色;2分=跛行,仅有足尖染色;3分=拖腿/抬腿,存在来自足背面的黑色拖拉痕迹;4分=抬腿,没有来自疼痛的腿的染色。
[0959] 结果:图70示出了在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab2、Ab6、以及Ab8之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0960] 图71示出了在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab6和Fab1之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0961] 图72示出了在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab3之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0962] 图73示出了在与针对于对照所获得的结果相比时,在施用抗体Ab6和抗体Ab21之后通过步态分析所评估的疼痛统计显著性减少。
[0963] 实施例8:在PGPS诱发的关节炎中的炎症
[0964] 被用来评估疼痛的PGPS(肽聚糖多糖)诱发的关节炎模型(实施例7)还具有相关的炎症反应。为了评估炎症,在第0天再活化之前,对所有动物的踝关节进行卡尺测量,然后在第1天、第2天、第3天以及第4天确定在所处理的大鼠中存在的任何抗炎性或促炎性作用。
[0965] 结果:图74示出了在与对照的炎症结果相比时,在施用抗体Ab2、Ab6、以及Ab8中的每一个之后炎症增加。
[0966] 图75示出了在与对照的炎症结果相比时,在施用Fab1抗体片段之后炎症没有显著增加。相比之下,在与对照的炎症结果相比时,施用抗体Ab6导致炎症增加。
[0967] 图76示出了在与对照的炎症结果相比时,在施用抗体Ab3之后炎症增加。
[0968] 图77同样示出了在与对照的炎症结果相比时,在施用抗体Ab6和抗体Ab21之后炎症增加。
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