核激素受体(NHR)构成一个依赖于配体且顺序特异的转录因子 的超大型家族。这个家族的成员既通过与启动子靶基因的特异性结合 直接影响转录(Evans，Science  240：889-895(1988))，也通过与 其它转录因子的蛋白质-蛋白质相互作用而间接影响转录(Jonat等， Cell 62：1189-1204(1990)，Schuele等，Cell 62：1217-1226(1990)， 和Yang-Yen等，Cell 62：1205-1215(1990))。这个核激素受体 超级家族(业内也称之为“类固醇/甲状腺激素受体超级家族”)包括 各种各样疏水配体包括皮质醇、醛甾酮、雌激素、黄体酮、睾丸素、 维生素D3、甲状腺激素和视黄酸的受体(Evans，1988，同上)。除 这些惯常核激素受体外，该超级家族还含有许多没有任何已知配体的 蛋白质，称之为孤生核激素受体(Mangelsdorf等，Cell 83：835-839 (1995)，O′Malley等，Mol.Endocrinol.10：1293(1996)，Enmark等， Mol.Endocrinol 10，1293-1307(1996)和Giguere，Endocrin.Rev.20， 689-725(1999))。这些惯常核激素受体在配体存在下一般是转录 活化剂(transactivator)，而在配体不存在时要么是有效阻遏物，要么 是转录惰性的。该孤生受体中有一些表现得好像在配体不存在时它们 是转录惰性的。然而，另一些要么表现为组成活化剂，要么表现为阻 遏物。这些孤生核激素受体要么受到尚未确认的随遇配体的控制，要 么不需要结合配体就会产生这些活性。
与其它转录因子共同的是，该核激素受体有一种调节结构，包含 三个各异的区域结构：一个含有转录活化功能AF-1、有可变尺寸的 N-端区域结构，一个高度守恒的DNA结合区域结构，和一个适度守 恒的配体结合区域结构。配体结合区域结构不仅负责结合特定配体， 而且也含有一个称为AF-2的转录活化功能和一个二聚化区域结构 (Wurtz等，Nature Struc.Biol.3，87-94(1996)，Parker等，Nature Struc. Biol.3，113-115(1996)和Kumar等，Steroids 64，310-319(1999))。 尽管这些受体的总体蛋白质顺序会有显著差异，但全都既具有表明趋 异于祖先原始型的共同结构排列，也在配体结合区域结构上具有实质 上同系性(特别是顺序同一性)。
结合类固醇的核激素受体(SB-NHR)包含一个核激素受体亚家 族。这些受体的关系在于它们彼此之间尤其在配体结合区域结构 (LBD)中的顺序同系性比起与该NHR超级家族的其余成员的顺序同 系性更强烈(Evans，1988，同上)，而且它们全都利用类固醇系配体。 这个NHR亚家族的一些实例是雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、 黄体酮受体(PR)、糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、 醛甾酮受体(ALDR)以及类固醇与宾主共栖受体(SXR)(Evans等， WO 99/35246)。根据在LBD中的强烈同系性，若干种孤生受体也可 以是SB-NHR亚家族的成员。
与在该SB-NHR亚家族的每一个成员的LBD中发现的高顺序同 系性相一致，每一个成员的天然配体都是从一种共同的类固醇核心衍 生的。该SB-NHR亚家族的成员所利用的类固醇系配体中有一些的 实例包括皮质醇、雄激素、雌激素、黄体酮、睾丸素和二氢化睾丸素。 一种特定类固醇系配体对一种SB-NHR相对于对另一种而言的专一 性是通过关于该类固醇核心的差别替代得到的。对一种特定SB-NHR 的高亲合力结合，加上对该特定SB-NHR的高水平专一性，可以用 只让该类固醇核心发生微小结构变化来实现(例如，Waller等，Toxicol， Appl.Pharmacol.137，219-227(1996)和Mekenyan et al.，Environ.Sci. Technol.31，3702-3711(1997)，黄体酮对雄激素受体与对睾丸素， 相比的结合亲合力)。
对于该SB-NHR家族的成员，已经有人描述了许多合成衍生的 类固醇和非类醇兴奋剂与拮抗剂。这些兴奋剂与拮抗剂配体中许多在 临床上用于男人治疗各种各样内科病症。RU 486是PR的一种合成兴 奋剂的一个实例，用来作为一种生殖控制剂(Vegeto等，Cell 69：703 -713(1992))，而氟他胺是AR的一种拮抗剂的一个实例，用于治 疗前列腺癌(Neri et al.，Endo.91，427-437(1972))。他莫昔芬 是ER功能的一种组织特异调剂，用于治疗乳腺癌(Smigel J.Natl.Cancer Inst.90，647-648(1998))。他莫昔芬可以在乳腺组织中作为ER 的一种拮抗剂起作用，同时在骨干作为ER的一种兴奋剂起作用(Grese 等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，14105-14110(1997))。由于对 他莫昔芬看到的组织选择性效果，因而，这种药剂和与其类似的药剂 称为“部分兴奋剂”或“部分拮抗剂”。除合成衍生的非内生配体外， NHR的非内生配体还可以从食物源得到(Regal等，Proc.Soc.Exp.Biol. Med.223，372-378(2000)和Hempstock et al，，J.Med.Food 2，267 -269(1999))。黄烷类植雌激素是一种容易从大豆等食物源得到的 SB-NHR非天然配体的一个实例(Quella等，J.Clin.Oncol.18，1068 -1074(2000)和Banz等，J.Med.Food 2，271-273(1999))。通 过添加一种小分子配体来调节个别NHR的转录活性的能力，使它们成 为各种各样疾病状态的医药剂开发的理想目标。
如以上提到的，非天然配体可以进行合成加工，以用来作为NHR 的功能的调节剂。在SB-NHR的情况下，非天然配体的加工可以包 括一种模拟该天然类固醇核心系统的核心结构的确认。这可以通过对 若干种SB-NHR的随机筛查或通过利用各种各样NHR配体结合区域 结构的可供利用晶体结构的指导性思路(Bourguet等，Nature 375，377 -382(1995)，Brzozowski，等，Nature 389，753-758(1997)，Shiau 等，Cell 95，927-937(1998)和Tanenbaum等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，5998-6003(1998))来实现。关于这样一种类固醇模拟核心的 差别替代可以提供有对一种受体优于对另一种受体的选择性的药剂。 此外，可以采用这样的改性来获得对一种特定SB-NHR有兴奋剂活 性或拮抗剂活性的药剂。关于该类固醇模拟核心的差别替代可以导致 形成一系列高亲合力兴奋剂和拮抗剂，使其有对例如ER优于PR优于 AR优于GR优于MR的特异性。例如，已经有人对类固醇NHR的喹 啉系调节剂报告了这样一种差别替代思路J.Med.Chem.41，623 (1999)；WO 9749709；US 5696133；US 5696130；US 5696127；US 5693647；US 5693646；US 5688810；US 5688808和WO 9619458，这 些全部列为本文参考文献。
本发明的化合物包含一个起类固醇模拟作用的核心，而且可用来 作为类固醇结合性核激素受体以及以下所述的其它NHR的功能的调节 剂。

本发明提供尤其可用作核激素受体功能调节剂的下式(I)的稠环化 合物及其盐；
如式I中和整个说明书中所使用的，除非另有指明，否则各符号 具有下述含义，而且，每次出现时都是独立地选择的：
G是芳基或杂环基(如杂芳基)，其中所述基团是单环或多环， 且任选地在一个或多个位置上优选被下列基团取代：氢、烷基或取代 的烷基、链烯基或取代的链烯基、炔基或取代的炔基、卤素、环烷基 或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、芳基或取代的芳基、杂环 基或取代的杂环基、芳烷基或取代的芳烷基、杂环烷基或取代的杂环 烷基、CN、R1OC＝O、R1C＝O、R1C＝S、R1HNC＝O、R1R2NC＝O，HOCR3R3′、 硝基、R1OCH2、R1O、NH2、NR4R5、SR1、S＝OR1、SO2R1、SO2OR1、 SO2NR1R1′、(R1O)(R1′O)P＝O、(R1)(R1′)P＝O或(R1′)(NHR1)P＝O；
E是C＝Z2、CR7R7′(如CHR7)、SO2、P＝OR2或P＝OOR2；
Z1是O、O、NH或NR6；
Z2是O、S、NH或NR6；
A1是CR7或N；
A2是CR7或N；
Y是J-J′-J″，其中J是(CR7R7′)n，n＝0-3，J′是一个键或O、S、 S＝O、SO2、NH、NR6、C＝O、OC＝O、NR1C＝O、CR7R7′、C＝CR8R8′、 R2P＝O、OPOOR2、OPO2、OSO2、C＝N、NHNH、NHNR6、NR6NH、N＝N、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂 环基，或芳基或取代的芳基，J″是(CR7R7′)n，n是0-3，其中Y不是一 个键；
W是CR7R7′-CR7R7′、CR8＝CR8′、CR7R7′-C＝O、NR9-CR7R7′， N＝CR8、N＝N、NR9-NR9′、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的 环烯基、杂环基或取代的杂环基，或芳基或取代的芳基；
Q是H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链烯基、环烷基或 取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环烷基或取代的杂环烷基、 芳烷基或取代的芳烷基、炔基或取代的炔基、芳基或取代的芳基、杂 环(如杂芳基)或取代的杂环(如取代的杂芳基)、卤素、CN、R1OC＝O、 R4C＝O、R5R6NC＝O、HOCR7R7′、硝基、R1OCH2、R1O、NH2、C＝OSR1、 SO2R1或NR4R5；
M是一个键、O、CR7R7′或NR10，M′是一个键或NR10，其条件是 M和M′中至少一个必须是一个键；
L是一个键、(CR7R7′)n、NH、NR5或N(CR7R7′)n，其中n＝0-3；
R1和R1′各自独立地是H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环 烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基 或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环烷基或 取代的杂环烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基；
R2是烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代 的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、 环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、芳基 或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基；
R3和R3′各自独立地是H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环 烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基 或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环烷基或 取代的杂环烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、卤素、 CN、羟基胺、羟基酰胺、烷氧基或取代的烷氧基、氨基、NR1R2、硫 醇、烷硫基或取代的烷硫基；
R4是H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或 取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基 烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、 芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R5是烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代 的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、 环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、芳基 或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2R1、 SO2OR1或SO2NR1R1′；
R6是烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代 的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、 环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、芳基 或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、 R1NHC＝O、SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R7和R7′各自独立地是H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链 烯基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取 代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的 环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、芳基或取代的芳基、芳烷 基或取代的芳烷基、卤素、CN、OR1、硝基、羟基胺、羟基酰胺、氨 基、NHR4、NR2R5、NOR1、硫醇、烷硫基或取代的烷硫基、R1C＝O、 R1OC＝O、R1NHC＝O、SO2R1、SOR1、PO3R1R1′、R1R1′NC＝O、C＝OSR1、 SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R8和R8′各自独立地是H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链 烯基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取 代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的 环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、芳基或取代的芳基、芳烷 基或取代的芳烷基、硝基、卤素、CN、OR1、氨基、NHR4、NR2R5、NOR1、 烷硫基或取代的烷硫基、C＝OSR1、R1OC=O、R1C=O、R1NHC＝O、 R1R1′NC＝O、SO2OR1、S＝OR1、SO2R1、PO3R1R1′或SO2NR1R1′；
R9和R9′各自独立地是H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链 烯基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取 代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的 环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、芳基或取代的芳基、芳烷 基或取代的芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、R1OC＝O、R1NHC＝O、 SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1′；和
R10是H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或 取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基 烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基、 芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、 R1OC＝O、R1R1′NC＝O、SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1′。
式I化合物及其盐包含一个可作为甾族化合物模拟物的芯(但它 们不要求存在甾族型(如环戊并全氢化蒽类似物)结构)，因而是新 化合物，但下列情况除外：
E是C＝O，M和M′均为一个键，Z1是O，Q是H，且A1和A2 是CH的情况：(i)当W是-CH＝CH-，且Y是-CH2-CH2-时G-L -不是苯基、4-氯苯基或苄基；(ii)当W是-CH＝CH-或-CH2-CH2-，且Y是-CH2-时，G-L-不是苯基；(iii)当W和Y均为 -CH2-CH2-时，G-L-不是苯基、4-甲氧基苯基、4-氯苯基或某些(任 选取代的芳基)-(C1-C3)-烷基基团(如苄基)；以及(iv)当W和 Y均为亚苯基时，G-L-不是4-氯苯基或苄基；
E是C＝O，M和M′均为一个键，Z1是O，且A1和A2是CH的情 况；(i)当Q是-CO2CH3，W是-CH＝CH-和Y是-CH2-或 -CH2-CH2-时，G-L-不是苄基；以及(ii)当Q是甲基，W是-CH＝CH-和Y是-CH2-时，G-L-不是苯基；
当E是C＝S，M和M′均为一个键，Z1是O，Q是H，A1和A2是 CH，W是-CH＝CH-，以及Y是-CH2-或-CH2-CH2-时，G- L-不是苯基；以及
在E是C＝O，M和M′均为一个键，Z1是O，Q是H，Y是 -CH2-CH2-，以及W是-CH＝CH-或-CH2-CH2-的情况下，(i)当A1 和A2均为C-CH3时以及(ii)当A1是C-异丙基及A2是C-CH3时，G -L-不是4-氯苯基。
发明的进一步描述
以下是本说明书中所用术语的定义。除非另有指明，否则本文中 对某个基团或术语的原始定义适用于整个说明书中该基团或术语本身 或作为另一基团的一部分。
术语“烷基”是指含1～12个碳原子、优选1～6个碳原子的直链 或支链的烷(烃)基。这种基团的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙 基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二 甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二 烷基等。“取代的烷基”是指被一个或多个取代基，优选1～4个取代 基在任何可能的连接点上取代的烷基。取代基的例子包括，但不限于 一个或多个下列基团：卤素(如一个卤素取代基或多个卤素取代基， 在后一种情况下形成例如全氟烷基或带有Cl3或CF3的烷基)、烷氧基、 烷硫基、羟基、羧基(即-COOH)、烷氧羰基、烷氧羰氧基、氨基 (即-NH2)、氨基甲酰基或取代的氨基甲酰基、氨基甲酸酯或取代的 氨基甲酸酯、脲或取代的脲、脒基或取代的脒基、硫醇(-SH)、芳 基、杂环基、环烷基、杂环烷基、-S-芳基、-S-杂环、-S(O)- 芳基、-S(O)-杂环、-S(O)2-芳基、-S(O)2-杂环、-NHS(O)2- 芳基、-NHS(O)2-杂环、-NHS(O)2NH-芳基、-NHS(O)2NH-杂 环、-P(O)2-芳基、-P(O)2-杂环、-NHP(O)2-芳基、-NHP(O)2 -杂环、-NHP(O)2NH-芳基、-NHP(O)2NH-杂环、-O-芳基、 -O-杂环、-NH-芳基、-NH-杂环、-NHC＝O-芳基、-NHC＝O -杂环、-OC＝O-芳基、-OC＝O-杂环、-NHC＝ONH-芳基、- NHC＝ONH-杂环、-OC＝OO-芳基、-OC＝OO-杂环，-OC＝ONH -芳基、-OC＝ONH-杂环、-NHC＝OO-芳基、-NHC＝OO-杂环、 -C＝ONH-芳基、-C＝ONH-杂环、-C＝OO-芳基、-C＝OO-杂 环、-N(烷基)S(O)2-芳基、-N(烷基)S(O)2-杂环、-N(烷基)S(O)2NH -芳基、N(烷基)S(O)2NH-杂环、-N(烷基)P(O)2-芳基、-N(烷 基)P(O)2-杂环、-N(烷基)P(O)2NH-芳基、N(烷基)P(O)2NH-杂环、 -N(烷基)-芳基、-N(烷基)-杂环、-N(烷基)C＝O-芳基、-N(烷 基)C＝O-杂环、-N(烷基)C＝ONH-芳基、-N(烷基)C＝ONH-杂环、 -OC＝ON(烷基)-芳基、-OC＝ON(烷基)-杂环、-N(烷基)C＝OO- 芳基、-N(烷基)C＝OO-杂环、-C＝ON(烷基)-芳基、-C＝ON(烷基) -杂环、-NHS(O)2N(烷基)-芳基、NHS(O)2N(烷基)-杂环、 NHP(O)2N(烷基)-芳基，NHP(O)2N(烷基)-杂环、-NHC＝ON(烷基) -芳基、-NHC＝ON(烷基)-杂环、-N(烷基)S(O)2N(烷基)-芳基、- N(烷基)S(O)2N(烷基)-杂环、-N(烷基)P(O)2N(烷基)-芳基、-N(烷 基)P(O)2N(烷基)-杂环、-N(烷基)C＝ON(烷基)-芳基，和-N(烷 基)C＝ON(烷基)-杂环，以及OR13，式中R13如下面方案XV所定义。 在上述例示性取代基中，如“芳基”和“杂环”之类的基团本身可任 选地被取代。
术语“链烯基”是指含有2～12个碳原子和至少一个碳-碳双键 的直链或支链烃基。这种基团的例子包括乙烯基或烯丙基。“取代的 链烯基”是指被一个或多个取代基，优选1～4个取代基在任何可能的 连接点上取代的链烯基。取代基的例子包括，但不限于烷基或取代的 烷基，以及上面作为例示性烷基取代基所列出的那些基团。
术语“炔基”是指含有2～12个碳原子和至少一个碳-碳三键的 直链或支链烃基。这种基团的例子包括乙炔基。“取代的炔基”是指 被一个或多个取代基，优选1～4个取代基在任何可能的连接点上取代 的炔基。取代基的例子包括，但不限于烷基或取代的烷基，以及上面 作为例示性烷基取代基所列出的那些基团。
术语“环烷基”是指含有1～4个环，且每个环含有3～8个碳原 子的完全饱和的环状烃基。这种基团的例子包括环丙基、环丁基、环 戊基、环己基等。“取代的环烷基”是指被一个或多个取代基，优选1～ 4个取代基在任何可能的连接点上取代的环烷基。取代基的例子包括， 但不限于硝基、氰基、烷基或取代的烷基，以及上面作为例示性烷基 取代基所列出的那些基团，和前面在G的定义中提到的作为优选的芳 基取代基的那些基团。例示性取代基还包括螺环连接的或稠合的环状 取代基，尤其环烯基或取代的环烯基。
术语“环烯基”是指含有1～4个环，且每个环含有3～8个碳原 子的部分不饱和环状烃基。这种基团的例子包括环丁烯基、环戊烯基、 环己烯基等。“取代的环烯基”是指被一个或多个取代基，优选1～4 个取代基在任何可能的连接点上取代的环烯基。取代基的例子包括， 但不限于硝基、氰基、烷基或取代的烷基，以及上面作为例示性烷基 取代基所列出的那些基团，和前面在G的定义中提到的作为优选的芳 基取代基的那些基团。例示性取代基还包括螺环连接的或稠合的环状 取代基，尤其环烷基或取代的环烷基。
术语“烷氧基”或“烷硫基”是指分别通过氧键(-O-)或硫键 (-S-)键合的上述烷基。术语“取代的烷氧基”或“取代的烷硫基” 是指分别通过氧键或硫键键合的上述取代的烷基。
术语“烷氧羰基”是指通过羰基键合的烷氧基。
术语“烷基羰基”是指通过羰基键合的烷基。术语“烷基羰氧基” 是指通过氧键键合的烷基羰基。
术语“芳烷基”、“取代的芳烷基”、“环烷基烷基”、“取代 的环烷基烷基”、“环烯基烷基”、“取代的环烯基烷基”、“杂环 烷基”和“取代的杂环烷基”是指通过烷基键合的芳基、环烷基、环 烯基和杂环基，在指明为“取代的”场合下，在芳基上、环烷基上、 环烯基上或杂环上和/或烷基上取代。
术语“芳基”是指含有1～5个环的环状、芳族烃基，尤其单环或 二环基团，例如苯基、联苯基或萘基。在含有2个或更多个芳环(二 环等)的情况下，该芳基的芳环可以在一个位置上连接(如联苯基)， 或稠合(如萘基、菲基等)。“取代的芳基”是指被一个或多个取代 基，优选1～3个取代基在任何连接位点上取代的芳基。取代基的例子 包括，但不限于硝基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯 基、氰基、烷基-S(O)m-(m＝0、1或2)、烷基或取代的烷基，以 及上面作为例示性烷基取代基所列出的那些基团，和前面在G的定义 中提到的作为优选的芳基取代基的那些基团。例示性取代基还包括稠 环取代基，例如杂环或环烯基，或取代的杂环或环烯基基团。
“氨基甲酰基”是指基团-CONH-，该基团一端键合到分子的 其余部分，另一端键合到氢原子上或有机部分(如烷基、取代的烷基、 芳基、取代的芳基、杂环基、烷基羰基、羟基和取代的氮)上。“氨 基甲酸酯”是指基团-O-CO-NH-，该基团一端键合到分子的其余 部分，另一端键合到氢原子上或有机部分(如上面所列的那些基团) 上。“脲”是指基团-NH-CO-NH，该基团一端键合分子的其余部 分，另一端键合到氢原子上或有机部分(如上面所列的那些基团)上。 “脒基”是指基团-C(＝NH)(CH2)。“取代的氨基甲酰基”、“取代的 氨基甲酸酯”、“取代的脲”和“取代的脒基”是指其中一个或更多 个氢原子被一个有机部分(如上所列的那些基团)取代了的氨基甲酰 基、氨基甲酸酯、脲或脒基基团。
术语“杂环”、“杂环的”和“杂环并”是指完全饱和的，或部 分或完全不饱和的，包括芳族(即“杂芳基”)杂环基团(例如，4～ 7元单环、7～11元二环或10～16元三环环系)，在至少一个含碳原 子的环中含有至少一个杂原子。含杂原子的杂环基团的每个环可以含 有1、2、3或4个选自氮原子、氧原子和/或硫原子的杂原子，其中氮 和硫杂原子可任选地被氧化，而且氮杂原子可以任选地季铵化(术语 “杂芳基”(heteroarylium)是指带有季氮原子的杂芳基基团，因而 带有一个正电荷)。杂环基团可以在该环或环系的任何杂原子或碳原 子上连接到分子的其余部分上。例示性单环杂环基团包括氮杂环丁烷 基、吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基(Oxetanyl)、吡唑啉 基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑啉基、 异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、 呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代 哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代丫庚因基、丫庚 庚因基、六氢二氮杂  基、4-哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、 哒嗪基、三嗪基、三唑基、四唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉 基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1，3-二氧戊环和四氢-1，1-二 氧代噻吩等。例示性二环杂环基包括吲哚基、异氮茚基、苯并噻唑基、 苯并噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻吩基、奎宁环基、喹啉基、四氢异 喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚基、苯并呋喃 基、苯并呋咱基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉 基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(如呋喃并[2，3-c]吡啶基、 呋喃并[3，2-b]吡啶基或呋喃并[2，3-b]吡啶基)、二氢异氮茚基、二 氢喹唑啉基(如3，4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、三嗪基丫庚因基、 四氢喹啉基等。例示性三环杂环基包括咔唑基、benzidolyl、菲咯啉基、 吖啶基、菲啶基、吨基等。
“取代的杂环”、“取代的杂环的”和“取代的杂环并”(如“取 代的杂芳基”)是指在任何可连接的位置上含有一个或多个取代基， 优选1～4个取代基的杂环、杂环基或杂环并基团。例示性的取代基包 括，但不限于环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、硝基、 氧代(即＝O)、氰基、烷基-S(O)m-(m＝0、1或2)、烷基或取 代的烷基，以及上面作为例示性烷基取代基所列出的那些基团，和前 面在G的定义中作为优选的杂环取代基所提到的那些基团。
术语“季氮”是指带正荷的四价氮原子，包括例如在四烷基铵基 团(如四甲铵、N-甲基吡啶)中带正荷的氮原子、在质子化铵化合 物(如三甲基氢铵，N-氢吡啶)中带正电荷的氮原子、在胺N-氧 化物(如N-甲基吗啉-N-氧化物、吡啶-N-氧化物)中带正荷的 氮原子，和在N-氨基-铵基(如N-氨基吡啶  )中带正电荷的氮 原子。
术语“卤素”或“卤”是指氯、溴、氟或碘。
术语“羟基胺”和“羟基酰胺”是分别指基团OH-NH-和 OH-NH-CO-。
当官能团称为“受保护的”时，这意味着该基团处于改良形式， 以便减少，尤其消除受保护部位的不希望的副反应。适用于本文所述 方法和化合物的保护基包括，但不限于标准教科书中所述的那些基团， 例如Greene，T.W.等，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，N. Y.(1991)。
当使用“(CRR)n”这样的术语时，该基团表示一个任选取代的烷 基链，存在于它所键合的2个片断之间，其链长由对术语n所规定的 范围确定。一个例子是n＝0～3，包含0～3个存在于2个片断之间的 (CRR)单元，所述片断连接在首末(CRR)单元上。在n设定为零 (n＝0)的情况下，连接在(CRR)上的2个片断之间存在一个键。
除非另有指明，否则价数不满的杂原子都假设含有足以满足化合 价的氢原子。
二价基团，如W定义中的基团(如NR9-CR7R7′)，可以以任一方向 键合到分子的其余部分(如对上述W定义中的基团 或，
羧酸阴离子是指带负电荷的基团-COO-。
式I化合物可形成盐，此种盐也属于本发明范围内。除非另有指 出，否则提到本发明的式I化合物应理解为包括提到其盐。如这里使 用的术语“盐”是指与无机和/或有机的酸和碱形成的酸和/或碱加成盐。 此外，当式I化合物既含有碱性部分，例如，但不限于吡啶或咪唑， 又含有酸性部分，例如，但不限于羧酸时，可以形成两性离子(“内 盐”)，这种盐也包括在这里所用的术语“盐”的范围内。优选的是 药学上可接受的(即无毒的、生理学上可接受的)盐，尽管其它的盐 在例如制备过程中可以采用的分离或精制步骤中也是有用的。式I化 合物的盐例如可以通过使式I化合物与某一数量，如等当量的酸或碱 在一种例如盐会在其中沉淀的介质中或在一种水介质中反应，随后进 行冷冻干燥来制备。
含有碱性部分，例如，但不限于一种胺或一种吡啶或咪唑环的式I 化合物可以与各种有机酸和无机酸形成盐。例示性的酸加成盐包括各 种乙酸盐(例如与乙酸或三卤乙酸如三氟乙酸形成的盐)、己二酸盐、 藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、 硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、 二聚葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、 半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、羟基乙 磺酸盐(如2-羟基乙磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺 酸盐(如2-萘磺酸盐)、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫 酸盐、苯丙酸盐(如3-苯基丙酸盐)、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、 丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫酸形成的盐)、磺酸 盐(如本文中提到的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐类如 甲苯磺酸盐、十一烷酸盐等。
含有酸性部分，例如，但不限于羧酸的式I化合物可以与各种有 机碱和无机碱形成盐。例示性的碱加成盐包括铵盐，碱金属盐如钠、 锂和钾的盐，碱土金属盐如钙盐和镁盐，与有机碱(如有机胺类化合 物)如benzathines、二环己基胺、hydrabamines(与N，N-二(脱氢枞 酸基)乙二胺)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-glycamides、 叔丁胺形成的盐，以及与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。碱性 含氮基团可以用诸如低级烷基卤化物(如甲基、乙基、丙基和丁基的 氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(如硫酸二甲酯、二乙酯、 二丁酯和二戊酯)、长链卤化物(如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂 基的卤化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(如苄基溴和苯乙基 溴)等试剂进行季铵化。
本发明化合物的前药和溶剂合物也包含在本发明中。如这里使用 的术语“前药”是指对治疗对象给药后通过代谢或化学过程经受化学 变化，产生式I的一种化合物或其盐和/或溶剂合物的一种化合物。式I 化合物的溶剂合物包括，例如水合物。
式I化合物及其盐可以以其互变异构体形式(例如呈酰胺或亚胺 基醚形式)存在。所有这些互变异构体均包含在本发明中作为其一部 分。
本发明化合物的所有立体异构体(例如由于各种取代基上有不对 称碳原子而可能存在的异构体)，包括对映体和非对映体均包含在本 发明的范围内。例如本发明化合物的各个立体异构体可以基本上不含 其它异构体(例如呈具有特定活性的纯的或基本上纯的旋光异构体形 式)，或者可以呈例如外消旋体的混合物形式，或与所有其它或选定 的立体异构体混合。本发明化合物的手性中心可以具有按IUPAC 1974 推荐定义的S或R构型。外消旋体可用物理方法，例如分级结晶、非 对映体衍生物的分离或结晶，或用手性柱进行色谱分离。采用任何适 当的方法，包括，但不限于惯常方法，例如用旋光性酸形成盐，随后 进行结晶，可从外消旋体得到各个旋光异构体。
本发明化合物的所有构型异构体，无论是以混合物型式或是以纯 形式或基本上纯形式，都包含在本发明中。本发明化合物的定义既包 含顺式(Z)也包含反式(E)链烯异构体，以及环状烃类或杂环的顺 式和反式异构体。
在整个说明书中，可以对基团及其取代基加以选择，以便得到稳 定的部分和化合物。
                       制备方法
本发明的化合物可以用诸如以下方案I～XV中说明的那些方法制 备。溶剂、温度、压力及其它反应条件可以容易地由业内有一般技能 的人士选择。起始原料是商业上可得的，或容易地由业内有一般技能 的人士制备，或用图1～3中说明的方法制备。诸如，在各中间体具有 适用于组合技术(combinatorial techniques)的基团的情况下，可以在 化合物制备中采用这些技术。关于本发明化合物的制备中可以采用的 替代方法，请参阅下列文献：Tetrahedron，27，3119(1971)；Tetrahedron， 30，2977(1974)；Tetrahedron.Let.31，2631(1969)；J.Org.Chem.， 35，3097(1970)；Bull.Chem.Soc.Jpn.，67，3082(1994)；Bull.Chem. Soc.Jpn.，65，61(1992)；欧洲专利(EP)No.406119；U.S.Patent.No. 4,397,857；Pons等，Eur.J.Org.Chem.，853-859(1998)；Kucharczyk 等，J.Med.Chem.1654-1661(1993)；和德国专利(DE)文件No. 3227055。
本说明书中引用的所有文件，例如本“制备方法”以及本文其它 各节中所引用的那些，均以其整体列为本文参考文献。这样的文件不 被视为先有技术。
                      方案I
如方案I中所说明的，式I化合物可以从式II的氮杂双环-3-乙 基羧化物中间体得到。式II的中间体可以，例如，由业内有一般技能 的人士从Bull.Chem.Soc.Jpn.，65，61(1992)，Tetrahedron Let.31， 2603(1990)，Chem，Commun.597(1999)，Tetrahedron Lett.38，4021， (1997)，Tetrahedron Lett.40，7929(1999)，Synlett.1，29(1991)， J.Chem.Soc.，Chem.Commun.1601(1988)，J.Org.Chem.31，1059 (1966)，Synthesis 10，925(1990)，Tetrahedron Lett.40，8447(1999)，； 美国专利No.4775668和EP No.266576和其中参考文献(以其整体列 为本文参考文献)中所述的合成思路来制备。除式II化合物的外消旋 混合物外，可以例如按照以上文件中提到的步骤来合成各种对映体。 在以下图1～3中进一步描述了式II化合物的制备方法实例。
II用式Z2＝C＝N-L-G中间体的处理产生一种式III中间体。式 Z2＝C＝N-L-G中间体可以，例如，从商业上可得的异氰酸酯、硫 异氰酸酯和硫化二亚胺得到，也可以容易地由业内人士制备。式III中 间体可以在一种碱例如DBU或三乙胺的存在下或不存在下加热，产生 式IV化合物，即其中M′和M均为一个键且E为C＝Z2的式I化合物。 式IV化合物的各种光学异构体(也称为对映体)可以，例如，通过使 用对应的式II化合物各对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来 获得。式IV化合物的各个α或β(内旋或外旋)异构体可以，例如，通 过以标准技术分离所得到的混合物来获得。
                        方案II
方案II描述了式I化合物的一种制备方法，其中，式II中间体在 一种碱例如NaHCO3的存在下用一种光气例如式Cl-E-Cl试剂处理， 产生一种式V中间体。像式Cl-E-Cl中间体这样的光气可以从商业 上可得来源得到，也可以容易地由业内人士制备。在本步骤中，和在 这些方案中别的地方，适当时可以替代地采用光气等效物例如羰基二 咪唑代表Cl-E-Cl。式V中间体可以在一种碱例如二异丙胺或三乙 胺以及有或无一种偶合试剂例如DMAP的存在下与式H2N-L-G的 胺反应，给出式VI中间体。式H2N-L-G的胺中间体可以从商业上 可得来源得到，也可以容易地由业内人士制备。式Ⅵ中间体可以通过 在有或无一种碱例如DBU或三乙胺的存在下加热而转化成式VII化合 物。式VII化合物是一种其中M和M′均为一个键且E为C＝Z2、SO2、 P＝OR2或P＝OOR2的式I化合物。式VII化合物的各种对映体可以， 例如，通过使用对应的式II化合物各对映体或通过以标准技术分离外 消旋混合物来获得。式VII化合物的各个α或β异构体可以，例如，通 过以标准技术分离所得到的混合物来得到。
                        方案III
方案III描述式I化合物的一种制备方法，其中，式II中间体通过 用一种碱例如氢氧化钠处理而皂化成式VIII的一种酸。然后，该酸可 以经由诸如The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，2nd Ed.，Bodanszy，Miklos，1993(以其整体列为本文参考文献)中所述的各 种偶合试剂偶合到式H2N-L-G的胺上，产生式IX的酰胺中间体。 式IX中间体可以在有或无一种碱例如三乙胺的存在下与一种光气例如 式Cl-E-Cl的试剂一起加热，产生一种式VII化合物，即一种其中 M和M′均为一个键且E为C＝Z2、SO2、P＝OR2或P＝OOR2的式I化 合物。式VII化合物的各个对映体可以，例如，通过使用对应的式II 化合物各种对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来获得。式VII 化合物的各个α或β异构体可以，例如，通过以标准技术分离所得到的 化合物来得到。
                        方案IV
如方案IV中所示，一种其中E为C＝Z2和Z2＝N-CN的式I化 合物的合成路线涉及式II中间体在一种水溶性偶合试剂(WSCD)例 如Tetrahedron.Let.30，7313(1989)(以其整体列为本文参考文献) 中所述的1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐的存在 下用式NC-NH-C(S)-NH-L-G的取代氰基硫脲处理，产生一种 式X中间体。式NC-NH-C(S)-NH-L-G的取代氰基硫脲可以从 商业上可得来源得到，也可以容易地由业内人士制备。式X中间体可 以在有或无一种碱例如DBU的存在下加热，产生一种式XI化合物， 即一种其中除E为C＝N-CN外M和M′均为一个键的式I化合物。 式XI化合物的各种对映体可以，例如，通过使用对应的式II化合物的 各对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来获得。式XI化合物的 各种α或β异构体可以，例如，通过以标准技术分离所得到的混合物来 得到。
                        方案V
如方案V中所说明的，式XII化合物，即一种其中Q＝H的式I 化合物，可以通过用一种碱例如LDA和一种烷基卤例如甲基碘、优选 在一种溶剂例如四氢呋喃中在低温(例如-78℃)处理而转化成一种 其中Q等于本文中所定义的除H外的取代基的式I化合物，产生一种 式IV化合物，即一种其中M′和M均为一个键且E为C＝Z2的式I化 合物。式IV化合物的各种对映体可以，例如，通过使用对应的式XII 化合物各种对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来得到。式IV 化合物的各种α或β异构体可以，例如，通过使用对应的式XII化合物 的各种内旋或外旋异构体或通过以标准技术分离所得到的混合物来得 到。式XII化合物可以，例如，通过采用其中Q＝H的方案I步骤来获 得。
                        方案VI
如方案VI中所示，式I化合物可以借助于一条固体支撑体 (support)路线合成。因此，以上合成路线使得能经由例如自动化固 相合成标准步骤来合成各组合系列的式I化合物。式II化合物用一种 保护剂例如碳酸二叔丁酯处理、随后通过用一种碱例如氢氧化钠处理 使该酯基水解，产生一种式XIII中间体。式XIII中间体可以通过在吡 啶和DMF的存在下用一种偶合试剂例如2，6-二氟苯甲酰氯处理而附 着到一种固体支撑体例如一种改性Merrifield树脂上，产生一种式XIV 固体支撑体中间体。该保护基团的脱除可以通过用一种酸例如三氟乙 酸在DMF中在超声波作用下处理来实现，产生式XV化合物，后者可 以与一种式Z2＝C＝N-L-G中间体反应，产生一种式XVI中间体。 最终产物IV可以通过使式XVI中间体在有或无一种碱例如DBU的存 在下加热而生成并从该固体支撑体上释放下来。式IV化合物是一种其 中M′和M均为一个键且E为C＝Z2的式I化合物。式IV化合物的各 种对映体可以，例如，通过使用对应的式II化合物各种对映体或通过 以标准技术分离外消旋混合物来获得。式IV化合物的各种α或β异构体 可以，例如，通过以标准技术分离所得到的混合物来获得。
                        方案VII
方案VII显示固体支撑体上式I化合物合成的一种替代思路。如 同对方案VI所述那样，可以容易地合成一种式XV中间体。式XV中 间体可以在有或无一种碱例如三乙胺或NaHCO3的存在下用一种光气 例如式Cl-E-Cl的试剂处理，产生一种式XVII中间体。式XVII中 间体可以在一种碱例如二异丙胺的存在下、在有或无一种偶合剂例如4 -二甲胺基吡啶的存在下，与一种式H2N-L-G的胺反应，给出一种 式XVIII中间体。最终产物VII可以通过在有或无一种碱例如DBU的 存在下加热式XVIII中间体来生成并从该固体支撑体上释放下来。式 VII化合物是一种其中M和M′均为一个键且E是C＝Z2、SO2、P＝OR2或P＝OOR2的式I化合物。式VII化合物的各种对映体可以，例如， 通过使用对应的式II化合物各种对映体或通过以标准技术分离外消旋 混合物来获得。式VII化合物的各种α或β异构体可以，例如，通过以 标准技术分离所得到的混合物来获得。
                        方案VIII
如方案II中所述，式VI中间体可以容易地合成。如方案VIII中 所示，式VI中间体像Synthesis，7，592(1982)和Tetrahedron Let.，29， 1777(1988)(两者均以其整体列为本文参考文献)中所述那样用式 Ph2POONH-R10的一种取代O-二苯基氧膦基羟胺和氢化钾处理，产 生一种式XXII中间体。式XXII中间体可以在有或无一种碱例如三乙 胺的存在下加热，产生一种式XXIII化合物，即一种其中M是一个键、 M′是NR10且E是C＝Z2、SO2、P＝OR2或P＝OOR2的式I化合物。式 XXIII化合物的各种对映体可以，例如，通过使用对应的式II化合物 各种对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来获得。式XXIII化 合物的各种α或β异构体可以，例如，通过以标准技术分离所得到的混 合物来获得。
                        方案IX
如方案VI中所述，可以容易地合成一种式XIII中间体。如方案IX 中所示，式XIII的酸中间体可以像方案III中所述那样通过使用各种各 样的偶合试剂偶合到式H2N-L-G的胺上，产生式XXIV的一种酰胺 中间体。式XXIV中间体像方案VIII中所述那样用氢化钾和式 Ph2POONH-R10的一种取代O-二苯基氧膦基羟胺处理、随后通过用 一种酸例如三氟乙酸处理来脱除BOC保护基，产生一种式XXV中间 体。式XXV中间体可以用一种光气例如Cl-E-Cl的试剂处理，产 生一种中间体，后者可以在一种碱例如三乙胺的存在或不存在下加热， 产生一种式XXVI化合物，即一种其中M′是一个键、M是NR10且E 是C＝Z2、SO2、P＝OR2或P＝OOR2的式I化合物。式XXVI化合物 的各种对映体可以，例如，通过使用对应的式XIII化合物各种对映体 或通过以标准技术分离外消旋混合物来获得。式XXVI化合物的各种α 或β异构体可以，例如，通过以标准技术分离所得到的混合物来获得。
                        方案X
如同方案IX中所述，可以容易地合成一种式XXIV中间体。如方 案X中所示，式XXIV中间体像J.Org.Chem.，54，5852(1989)和J.Org. Chem.，59，8065(1994)(两者均以其整体列为本文参考文献)中所 述那样用一种适合于生成羟基酰胺残基的试剂例如TMS-Cl处理、随 后用MoO5(DMF)2处理，然后用诸如以HCl气体饱和的乙醇进行BOC 基团脱保护，就导致式XXVII的一种羟基酰胺中间体的产生。式XXVII 中间体可以用一种光气例如式Cl-E-Cl的试剂处理，产生一种式 XXVIII化合物，即一种其中M是O、M′是一个键且E是C＝Z2、SO2、 P＝OR2或P＝OOR2的式I化合物。式XXVIII化合物的各种对映体可 以，例如，通过使用对应的式XIII化合物各种对映体或通过以标准技 术分离外消旋混合物来获得。式XXVIII化合物的各种α或β异构体可 以，例如，通过以标准技术分离所得到的混合物来获得。
                        方案XI
如方案XI中所示，式H2N-L-G中间体像Oppi.Briefs  17，235 (1985)中所述那样用一种光气例如式Cl-E-Cl的试剂处理，导致 式XXXII中间体。式XXXII中间体可以与式II中间体反应，产生一 种式VI中间体。如方案II中所述，式VI中间体可以容易地转化成式 VII中间体，即一种其中M和M′均为一个键且E为C＝Z2、SO2、 P＝OR2或P＝OOR2的式I化合物。式VII化合物的各种对映体可以，例 如，通过使用对应的式II化合物各种对映体或通过以标准技术分离外 消旋混合物来获得。式VII化合物的各种α或β异构体可以，例如，通 过以标准技术分离所得到的混合物来获得。
                        方案XII
如方案III中所述，式IX化合物可以容易地用所述工艺制备。如 方案XII中所说明的，式IX化合物用一种可以得自商业来源也可以由 业内人士容易地合成的式R7CHO醛试剂处理，产生一种式XXXIII亚 胺中间体。式XXXIII中间体用一种碱例如DBU处理，导致一种式 XXXIV化合物，即一种其中M和M′均为一个键且E为CHR7的式I 化合物。式XXXIV化合物的各种对映体可以，例如，通过使用对应的 式II化合物各种对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来获得。 式XXXIV化合物的各种α或β异构体可以，例如，通过以标准技术分 离所得到的混合物来获得。
                        方案XIII
如方案I中所述，一种其中Z2＝S的式IV化合物可以容易地用所 述工艺制备。如方案XIII中所说明的，一种其中Z2＝S的式IV化合物 用一种能还原性地消除硫的试剂例如阮内镍处理，产生一种式XXXV 化合物，即一种其中M和M′均为一个键且E为CH2的式I化合物。式 XXXV化合物的各种对映体可以，例如，通过使用对应的式II化合物 各种对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来获得。式XXXV化 合物的各种α或β异构体可以，例如，通过以标准技术分离所得到的混 合物来获得。
                        方案XIV
方案XIV描述一种式I化合物制备方法，其中，式II(式中Z1是 O)中间体通过用一种碱例如氢氧化钠处理而皂化成一种式VIII的酸。 然后，该酸可以，例如，像The Practice of Peptide Synthesis，Springer -Verlag，第二版，Bodanszy，Miklos，1993(以其整体列为本文参考文 献)中所述那样，经由各种各样的偶合试剂偶合到式H2N-L-G的胺 上，产生一种式IX酰胺中间体。该式IX中间体可以用一种式 R7R7′-C-X1X2试剂处理(式中，X1和X2独立地是F、Br、Cl或I，或者X1 和X2连同它们所连接的碳合在一起形成C＝O)，产生一种式XXXVI 化合物，即一种其中Z1为O、M和M′均为键、E为CR7R7′(例如，其 中，R7和R7′之一是H、C1-4烷基或C1-4卤烷基、另一个是R1OC＝O) 的式I化合物。
当式R7R7′-C-X1X2中间体是一种酮(X1和X2与所连接的碳合 在一起形成C＝O)时，式IX的胺可以，例如，在水中氢氧化钠的存 在下，在0℃～25℃之间的温度，使用D.A.Johnson et al.，J.Org.Chem. 31，897(1966)和Uozumi等，Tetrahedron Letters，42 407-410(2001) 所述的步骤，与这样中间体羰基化合物缩合。(关于当式R7R7′-C-X1X2中间体是一种醛时的情况，请参阅以上方案XII)。当式R7R7′-C-X1X2中间体是二卤化物(X1和X2是卤素)时，该缩合可以，例如，在一种 碱的存在下，通过在一种惰性溶剂中加热IX与R7R7′-C-X1X2的混合 物来进行。优选的式R7R7′-C-X1X2二卤化物是溴氟乙酸乙酯和溴二 氟乙酸乙酯。适用碱的实例包括碱金属例如钾、钠和锂碳酸盐，和氢 化物碱例如氢化钠。惰性溶剂的实例包括二乙醚、四氢呋喃和二噁烷 等醚类；乙酸乙酯等酯类；二甲基甲酰胺等酰胺类；和乙腈。尽管式IX 化合物和R7R7′-C-X1X2的环化可以在室温下进行，但该反应优选通 过在室温以上加热来进行。式R7R7′-C-X1X2的二卤化物、醛和酮可 以用已知方法制备，而且很多是商业上可得的。例如，请参阅March，J. Advanced Organic Chemistry；第三版，John Wiley：New York， 1985。可用于使式IX化合物转化成式XXXVI化合物的其它合成路线 类似于WO-9414817、US-5,643,855、WO-0107440、WO- 9910313、WO-9910312和JP-46016990和其中的参考文献。式XXXVI 化合物的各种光学异构体(也称为对映体)可以，例如，通过使用对 应的式II化合物各种对映体或通过以标准技术分离外消旋混合物来获 得。式XXXVI化合物的各种α或β异构体可以，例如，通过以标准技 术分离所得到的混合物来获得。
                        方案XV
如方案XV中所示，其中Z1为O、M和M′为键且E为CR7R7′的 式I化合物可以通过使式XXXVII的咪唑啉酮转化来制备。式XXXVII 的酯，例如，用氢氧化钠、在一种溶剂例如甲醇或乙醇中、在约0℃～ 50℃水解，以提供对应的羧酸。该羧酸可以通过用亚硫酰二氯或草酰 二氯处理生成酰氯、随后分别用适当的醇R1-OH或胺H-NR1R1′处理， 而转化成对应的式XXXVIII的酯(R7′＝COOR1)或酰胺( R7′＝CONR1R1′)。
该酰氯用氨处理产生无取代的酰胺(R7′＝CONH2)，后者可以诸 如用惯常方法脱水生成腈(R7′＝CN)。
替而代之，该羧酸的酯化可以通过使该酸与一种适当烷基卤在一 种碱例如碳酸钾的存在下、在一种惰性溶剂例如二甲基甲酰胺中、诸 如在约0℃～60℃反应，给出式XXXVIII的酯(R7′＝COOR1)。
式XXXVIII的酰胺(R7′＝CONR1R1′)也可以通过在该羧酸与适当 胺H-NR1R1′之间的1，3-二环己基碳化二亚胺(DCC)偶合来得到。 DCC偶合步骤是Bodanszky，M.和Bodanszky，A；在Practice of Peptide Synthesis，Vol.21；Springer-Verlag，New York；(1984)中描述的。
该羧酸或酯用一种还原剂例如氢化铝、在溶剂例如四氢呋喃中、 诸如在0℃～80℃的还原，产生对应的醇，即一种其中R7′＝CH2OH的 式XXXVIII化合物。
该醇用一种R13-卤化物〔其中R13是烷基(例如C1-C6烷基)或 取代烷基；链烯基(例如C1-C6链烯基)或取代链烯基；环烷基(例 如C3-C6环烷基)或取代环烷基；杂环烷基或取代杂环烷基；芳基或 取代烷基(例如，有烷基和另外一些取代基取代)；杂环或取代杂环 (例如，杂芳基或取代杂芳基，如有烷基或另外一些取代基取代的杂 芳基)〕在一种碱例如碳酸钾的存在下、在一种惰性溶剂例如乙腈中 处理，产生其中R7′＝CH2OR13的式XXXVIII化合物。
利用官能团转化，例如业内人士已知的那些，也可以从式XXXVII 化合物的CO2Et基团得到其它R7′取代。
                        方案XVI
方案XVI描述对式I化合物进行进一步取代的另一种思路。如方 案XVI中所说明的，一种可以按照以上方案制备的式XXXIX化合物 可以在一种适用酶或微生物的存在下培养，导致生成一种式XL的羟 基化类似物。这样一种工艺可以用来由一种专性微生物或由一系列不 同微生物把一个羟基基团区域专性地以及对映体专性地结合到式 XXXIX分子上。这样的微生物可以，例如，是细菌性的、酵母性或真 菌性的，而且可以从ATCC等配送者获得，或诸如用业内人士已知的 方法识别在本方法中的使用。化合物XL是一种其中Y如以上所述且 A1和A2优选是CR7的式I化合物。
                        方案XVII
方案XVII描述了对式I化合物进行进一步取代的另一种思路。如 方案XVII中所说明的，一种可以按照以上方案制备的式XLI化合物可 以在一种适用酶或微生物的存在下培养，导致生成一种式XLII的二醇 类似物。这样一种工艺可以用来由一种专性微生物或由一系列不同微 生物产生一种式XLI化合物向一种式XLII的1，2-二醇的区域专性以 及对映体专性转化。这样的微生物可以，例如，是细菌性的、酵母性 或真菌性的，而且可以从ATCC等配送者获得，或诸如用业内人士已 知的方法识别在本方法中的使用。化合物XLII是一种其中Y如以上所 述且A1和A2优选是CR7的式I化合物。
本发明也提供方案XVI和XVII的方法。
因此，在一种实施方案中，本发明提供以下式XL的化合物或其 盐的制备方法。 〔式中各符号同本文中定义〕 包含下列步骤：使以下式XXXIX的化合物或其盐 〔式中各符号同以上定义〕 与一种能催化所述化合物XXXIX的羟基化以生成所述化合物XL的酶 或微生物接触，和进行所述羟基化。
在另一种优选实施方案中，本发明提供一种以下式XLII的化合物 或其盐的制备方法 〔式中各符号同本文中定义〕 包含下列步骤：使以下式XLI的化合物或其盐 〔式中各符号同以上定义〕 与一种能催化化合物XLI的环氧环打开以生成所述化合物XLII的二醇 的酶或微生物接触，和进行所述开环和二醇生成。
式XXXIX、XL、XLI和XLII的化合物的未说明手性中心的所有 立体构型，无论单独(即，基本上没有其它立体异构体)还是与其它 立体异构体形式的掺混物，都是本发明方法中所期待的。当接触一种 异构体混合物时一种异构体选择性地转化(例如，外型异构体的羟基 化优先于内型异构体的羟基化)是本发明的一种优选实施方案。选择 性地转化成一种异构体(例如，外面“外型异构体”上的羟基化优先 于内面“内型异构体”，或者一种环氧化物的区域选择性开环只生成 一种反式二醇的两种可能区域异构体之一)是本发明的一种优选实施 方案。一种手性中间体的羟基化而生成该羟基化产物的一种单一光学 异构体也是本发明的一和优选实施方案。一种中间体的外消旋混合物 通过选择性羟基化、环氧化物开环和二醇生成的拆分以产生两种可能 光学异构体之一，也是本发明的一种优选实施方案。本文中使用的“拆 分”这一术语表示部分拆分以及优选完全拆分。
本文中使用的“酶促工艺”或“酶促方法”这些术语表示采用酶 或微生物的本发明工艺或方法。本发明中使用的“羟基化”这一术语 表示如以上所述的一个羟基基团对一个亚甲基基团的加成。羟基化可 以，例如，通过按照本发明的方法与分子氧接触来实现。二醇生成可 以，例如，通过按照本发明的方法与水接触来实现。本发明方法中“酶 或微生物”的使用包括两种或更多种以及单一种酶或微生物的使用。
本发明中采用的酶或微生物可以是任何一种能催化本文中所述酶 促转化的酶或微生物。该酶或微生物材料，无论来源或纯度如何，均 可以游离状态采用，或者通过物理吸附或截留法包埋在一种支撑体上。 适用于本发明的微生物或酶可以通过为所希望的活性而筛选，例如， 通过让一种候选微生物或酶与一种起始化合物XXXIX或XLI或其盐 接触并注意其向对应化合物XL或XLII或其盐的转化来选择。该酶可 以，例如，呈动物酶或植物酶或其混合物、微生物细胞、破碎细胞、 细胞提取物的形式，或呈合成源形式。
微生物的实例包括链霉菌属或Amycolatopsis这些属范围内的微生 物。特别优选的微生物是灰色链霉菌、尤其灰色链霉菌ATCC 10137， 以及Amycolatopsis orientalis例如ATCC 14930、ATCC 21425、ATCC 35165、ATCC 39444、ATCC 43333、ATCC 43490、ATCC 53550、ATCC 53630，尤其ATCC 43491等物种范围内的那些。本文中使用的“ATCC” 这一术语系指美国类型培养物收藏American Type Culture Collection， 10801 University BlVd.，Manassas Virginia 201102209即所指有机 体(生物)的保管机构的存取号。应当理解的是，这些有机体的突变 体，例如，通过使用化学手段、物理手段(例如X射线)或生物手段 (例如分子生物学技术)改性的那些，也是本发明为用于本文中所述 方法而期待的。
优选的酶包括从微生物、尤其以上所述那些微生物衍生的酶。酶 可以，例如，通过提取和精制方法例如业内有普通技能的人士所知道 的方法，进行分离。一种酶可以，例如，以其游离状态或以包埋形式 使用。本发明的一种实施方案是，其中，把一种酶吸附到一种适用载 体例如硅藻土(多孔性Celite Hyflo Supercel)、多微孔聚丙烯(Enka Accurel聚丙烯粉)或阴离子型聚合物吸附剂例如来自Rohm & Haas 公司的AmberliteXAD-2(聚苯乙烯)或XAD-7(聚丙烯酸酯)上。 当用来包埋一种酶时，载体可以控制酶粒度和防止当用于有机溶剂中 时酶微粒的凝聚。包埋可以，例如，通过在Celite Hyflo Supercel 的存在下用冷丙酮使该酶的水溶液沉淀随后真空干燥，或在非离子型 聚合物吸附剂的情况下使酶溶液与吸附剂一起在一台摇床上培养、脱 除过量溶液并在真空下使酶-吸附剂树脂干燥来实现。虽然理想的是 使用尽可能少量的酶，但所需要的酶量将因所使用酶的特定活性而异。
以上所述羟基化可以在活体内进行。例如，相对于内型异构体而 言，肝酶可以选择性地使本发明一种化合物的外型异构体羟基化。在 具体实施本发明的方法时，可以采用肝微粒体羟基酶作为催化用酶。
这些工艺也可以使用含有一种有催化该转化之能力的酶的微生物 细胞进行。当使用一种微生物执行该转化时，通过向所希望的反应介 质中添加该细胞和起始原料，就方便地进行这些步骤。
在采用微生物的情况下，这些细胞可以以完整湿细胞或干细胞例 如冷冻干燥、喷雾干燥或热干燥细胞的形式，或者以处理细胞材料例 如破裂细胞或细胞提取物的形式使用。也可以采用如前面所述在Celite 或Accurel聚丙烯上包埋的细胞提取物。遗传工程加工生物的使用也 是所期待的。宿主细胞可以是任何一种改性细胞，例如大肠埃希氏杆， 以含有一种或多种基因用来表达一种或多种能执行本文中所述催化的 酶。
在采用一种或多种微生物的情况下，本发明的酶促方法可以在该 微生物发酵之后进行(两阶段发酵和转化)，或与其同时进行，即在 后一种情况下通过原位发酵与转化(单一阶段发酵和转化)进行。
微生物的生长可以由业内有普通技能的人员通过使用一种适当培 养基来实现。微生物生长用适当培养基包括能为微生物细胞的生长提 供所需营养的培养基。一种典型的生长用培养基包括必要的碳源、氮 源和各种元素(例如呈痕量)。也可以添加诱导物。本文中使用的“诱 导物”这一术语包括任何一种能加强在该微生物细胞内形成所希望酶 活性的化合物。
碳源可以包括糖类，例如麦芽糖、乳糖、葡萄糖、果糖、甘油、 山梨糖醇、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、丙二醇等；有机酸，例如乙酸钠、 柠檬酸钠等；和醇类，例如乙醇、丙醇等。
氮源可以包括N-Z胺A、玉米浆、大豆粉、牛肉膏、酵母膏、 糖蜜、面包酵母、胰蛋白胨、nutrisoy、胨、yeastamin、氨基酸例如谷 氨酸钠等、硝酸钠、硫酸铵等。
痕量元素可以包括镁、锰、钙、钴、镍、铁、钠和钾盐。也可以 以痕量或优选大于痕量添加磷酸盐。
所采用的培养基可以包括不止一种碳源、氮源或其它营养物。
优选的生长用培养基包括水基培养基。
该反应混合物的搅拌和曝气会影响，例如，在微生物生长期间在 摇瓶培养或发酵罐中进行时，在该转化过程期间可供利用的氧气数量。
反应培养基的培养在约4～约60℃之间的温度。反应时间可以根 据酶的数量及其比活性适当改变。通过提高反应温度和/或增加向反应 溶液中添加的酶的数量，都可以减少反应时间。
也优选的是采用水基液体作为反应培养基，尽管也可以采用有机 液体或者混溶或不混溶(双相)有机/水基液体混合物。相对于起始原 料而言，所采用的酶或微生物的数量要选择得能进行本发明酶促转化 的催化。
双相溶剂体系的有机相用溶剂可以是任何一种不混溶于水中的有 机溶剂，例如甲苯、环己烷、二甲苯、三氯三氟乙烷等。水相方便地 是水、优选去离子水或适用水基缓冲溶液、尤其磷酸盐缓冲溶液。该 双相溶剂体系优选包含约10～90体积％有机相和约90～10体积％水 相，最优选含有正好或约20体积％有机相和正好或约80体积％水相。
此类工艺的实施方案的一个实例始于制备要使用的酶或微生物的 水溶液。例如，可以将优选的酶或微生物添加到适量的水基溶剂例如 磷酸盐缓冲剂等中。此混合物优选调节到并保持在所希望的pH。
用本发明工艺生产的化合物XL和XLII可以，例如，用萃取、蒸 馏、结晶和柱色谱等方法分离和精制。
式I的其它化合物，例如，其中M是CR7R7′的化合物或其中M或 M′之一不是一个键且E是CHR7的化合物，可以容易地由业内有普通 技能的人员例如用类似于本文中所述那些的方法制备。
制备式II化合物的例示性方法(上述方案中所使用的)图解说明 下面图1-3中。
                        图1
如图1中所示，乙醛酸乙酯衍生物可用饱和NH4Cl水溶液和适当 的式A的二烯进行处理，生成其中Q＝H的式II化合物。这种环化作 用可通过加入金属盐，例如，但不限于三氟甲磺酸镱(III)来增强， 如前面引用的文献中所述。其中Q≠H的式II中间体可按下述方法制备： 用保护基如BOC保护仲氮，接着在碱如LDA，或本领域技术人员熟 知的偶联剂的存在下用式Q-X所示的反应性中间体进行处理，式中 X代表离去基因，或X是一个能发生反应最终完善前述Q的定义的亲 电子中心，随后用酸如饱和的乙醇HCl脱除BOC保护基。
如图2所示(其中指出了优选条件)，市售的手性(纯D或L) 中间体N-叔丁氧羰基-L-4-羟基脯氨酸B可用一种还原剂如 BH3·THF进行处理，生成一种伯醇，这种伯醇在碱(如2，6-卢剔啶) 的存在下用诸如TBSOTf之类的试剂进行选择性保护，生成中间体醇 C。仲醇C可通过在碱(如吡啶)的存在下用诸如TsCl之类的试剂进 行不同的保护，然后使伯醇脱保护(这可通过用酸如对甲苯磺酸进行 处理来完成)，生成中间体醇D。得到的醇D可在例如标准的Swern 条件下氧化生成相应的醛中间体E。该醛中间体E可直接用苄胺和氰 基膦酸二乙酯进行处理，生成中间体F。中间体F在加热条件下用碱 如Hüning′s碱进行处理生成二环中间体G。用碱如醇钠处理G，可使 腈中间体G直接转化成酯中间体H。中间体H用试剂如披钯炭和氢气 进行处理，脱除苄基，可生成其中Q＝氢的式IIa中间体。或者，替代 地，式H中间体可在碱如LDA，或本领域技术人员熟知的偶联剂的存 在下用式Q-X所示的反应性中间体进行处理，式中X代表离去基因， 或X是一个能发生反应最终完善前述Q的定义的亲电子中心，再用诸 如披钯炭之类的试剂处理后生成其中，Q≠H的式IIa中间体。图2中 的各种中间体可通过例如硅胶精制进行提纯，或者也可例如照原样直 接用于下一步骤(如不分离E而直接将D转化成F)。
图2所示的方法是新方法，因为其中所制备的各种中间体是新的， 所有这些中间体均构成本发明的一部分。
因此，例如下面的方法是新方法，因为其中各步骤和所制备的中 间体(如E、F、G、H、J和IIa是新的：
下式IIa化合物的制备方法：
其中：
BOC是叔丁氧羰基；
Q是H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链烯基、环烷基或 取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环烷基或取代的杂环烷基、 芳烷基或取代的芳烷基、炔基或取代的炔基、芳基或取代的芳基、杂 环基或取代的杂环基、卤素、CN、R1OC＝O、R4C＝O、R5R6NC＝O、 HOCR7R7′、硝基、R1OCH2、R1O、NH2、C＝OSR1、SO2R1或NR4R5；
包含下列步骤：
(i)用一种还原剂处理下式B的化合物 将羧酸基还原为羟甲基，接着对所述羟基进行保护生成下式C的化合 物： 式中Pro 1是羟基保护基；
(ii)对式C化合物中未保护的羟基进行保护，接着脱除保护基Pro 1-O-形成羟基，得到下式D的化合物： 式中Pro 2是保护基；
(iii)使D中的羟甲基氧化，生成下式E的醛：
(iii)用苄胺和氰基膦酸二乙酯处理E，生成下式F的化合物：
(iv)在加热条件下用碱处理所述式F化合物，生成下式G的化 合物：
(v)用碱处理所述式G化合物使腈基转化为甲氧羰基，生成下式 H的化合物：
和(vi)脱除所述式H化合物中的苄基，生成式IIa的化合物，其 中任选地，在脱除苄基之前可使所述式H化合物与化合物Q-X接触， 生成其中Q不是氢的式IIa化合物，在式Q-X中，X是一个离去基团， 或X是一个能反应形成基团Q的亲电子中心。
图2所示的方法尤其可用于制备不饱和氨基酸IIa，而氨基酸IIa 则可用于制备本发明的式I化合物，其方法类似于采用式II化合物时 所用的方法。
                        图3
如图3所示(其中指出了优选条件)，通过使活化的异氰酸磺酰 基酯如异氰酸对甲苯磺酰基酯在加热条件下与乙醛酸乙酯反应可以制 得活化亚胺中间体M。亚胺M可以与适当的式A二烯中间体进行环 化反应，生成式II′的中间体。这种环化作用可通过加入金属盐，例如， 但不限于三氟甲磺酸镱(III)来增强，如前面引用的文献中所述。该 甲苯磺酰基保护基可用本领域技术人员熟知的多种试剂，例如在乙酸 中的溴化氢，从中间体II′中除去，生成式II中间体。式II′的中间体可 在碱如LDA，或本领域技术人员熟知的偶联剂的存在下用式Q-X所 示的反应性中间体进行处理，式中X代表离去基因，或X是一个能发 生反应最终完善前述Q的定义的亲电子中心，生成式T的中间体。该 甲苯磺酰基保护基可用本领域技术人员熟知的多种试剂，例如在乙酸 中的溴化氢，从中间体T中除去，生成其中Q不是H的式II中间体。
优选的化合物
本发明的优选的子类化合物包括这样的式I化合物或其盐，其中 一个或多个，优选全部下述的取代基按如下定义：
G是芳基(尤其苯基或萘基)或杂环基(如杂芳基)，其中所述 基团是单环或多环，且任选地在一个或多个位置上优选被下列基团取 代：氢、C1-6烷基、被一个或多个卤原子取代的烷基(如全氟烷基)、 杂环基、被羟基取代的烷基、烯丙基或取代的烯丙基、炔基、Cl、F、 Br、I、CN、R1OC＝O、R1C＝O、R1HNC＝O、R1R2NC＝O，HOCR3R3′、 硝基、R1OCH2、R1O、NH2、NR4R5、SR1、S＝OR1、SO2R1、SO2OR1、 SO2NR1R1′、(R1O)(R1′O)P＝O、(R1)(R1′)P＝O或(R1′)(NHR1)P＝O；
E是C＝Z2、CHR7、SO2、P＝OR2或P＝OOR2；
Z1是O、S或NR6；
Z2是O、S或NR6；
A1是CR7(尤其CH)；
A2是CR7(尤其CH)；
Y是J-J′-J″，其中J是(CR7R7′)n，n＝0-2，J′是一个键或NH、 NR6、C＝O、环烷基(尤其环丙基或环丁基)或环烯基(尤其环丁烯 基或环戊烯基)，J″是(CR7R7′)n，n＝1-2，其中Y不是一个键；
W是CR7R7′-CR7R7′、CR8＝CR8′、CR7R7′-C＝O、NR9-CR7R7′、 环烷基(尤其环丙基或环丁基)或环烯基(尤其环丁烯基或环戊烯基)；
Q是H、C1-6烷基、被一个或多个卤原子取代的烷基(如全氟烷 基)、被羟基取代的C1-6烷基、链烯基(如烯丙基)、炔基、Cl、F、 Br、I、芳烷基(如苄基)或取代的芳烷基、CN、R1OC＝O、R4C＝O、 R5R6NC＝O、HOCR7R7′、R1OCH2、R1O、NH2或NR4R5；
M是一个键或NR10，M′是一个键或NR10，其条件是M或M′中至 少有一个是一个键；
L是一个键、(CR7R7′)n、NH或NR5，其中n＝0-1；
R1和R1′各自独立地是H、烷基、全氟烷基、环烷基、杂环基、环 烷基烷基或杂环烷基；
R2是烷基、全氟烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基或杂环烷基；
R3和R3′各自独立地是H、烷基、全氟烷基、环烷基、杂环基、环 烷基烷基、杂环烷基、Cl、F、Br、I、CN、烷氧基、氨基、NR1R2、 硫醇或烷硫基；
R4是H、烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环烷基、 R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R5是烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环烷基、R1C＝O、 R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R6是烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、杂环烷基或取代的杂环 烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、OR1、 R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R7和R7′各自独立地是H、烷基、全氟烷基、环烷基、杂环基、环 烷基烷基、杂环烷基、芳基、芳烷基、Cl、F、Br、I、CN、OR1、硝 基、羟基胺、羟基酰胺、氨基、NHR4、NR2R5、NOR1、硫醇、烷硫基、 R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R8和R8′各自独立地是H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环 烷基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、杂 环烷基或取代的杂环烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷 基、卤素、CN、OR1、氨基、NHR4、NR2R5、NOR1、烷硫基或取代的 烷硫基、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R9和R9′各自独立地是H、烷基、链烯基、环烷基、杂环基、环烷 基烷基、杂环烷基、芳基、芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、 R1OC＝O、R1NHC＝O、SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1′；和
R10是H、烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基、 芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、R1OC＝O、R1R1′NC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′。
本发明更优选的子类化合物包括这样的式I化合物或其盐，其中 一个或多个，优选全部下述的取代基按如下定义：
G是芳基或杂芳基，其中所述基团是单环或多环，且任选地在一 个或多个位置上被下列基团取代：氢、C1-C3烷基、烯丙基或取代的 烯丙基、炔基、Cl、F、Br、I、CN、R1C＝O、R1HNC＝O、 R1R2NC＝O、卤烷基(尤其全氟烷基)、C1-C3羟烷基、HOCR3R3′、硝基、R1OCH2、 R1O、NR4R5或SR1；
E是C＝Z2、CHR7或SO2；
Z1是O、S或NCN；
Z2是O、S或NCN；
A1是CR7(尤其CH)；
A2是CR7(尤其CH)；
Y是J、环丙基或环丁基，其中J＝(CR7R7′)n、n＝1-3；
W是CR7R7′-CR7R7′、CR8＝CR8′、CR7R7′-C＝O、环丙基或环丁 基；
Q是H、C1-C4烷基、炔基、Cl、F、Br、I、CN、R1OC＝O、 R4C＝O、R5R6NC＝O、卤烷基(尤其全氟烷基)、C1-C6羟烷基、HOCR7R7′、 R1OCH2、R1O、NH2或NR4R5；
M是一个键，M′是一个键；
L是一个键、(CR7R7′)n、NH或NR5，其中n＝O-1；
R1和R1′各自独立地是H、烷基、环烷基、杂环烷基或全氟烷基；
R2是烷基、环烷基、杂环烷基或全氟烷基；
R3和R3′各自独立地是H、烷基、全氟烷基、Cl、F、Br、I、CN、 烷氧基、氨基、NR1R2、硫醇或烷硫基；
R4是H、烷基、环烷基、杂环烷基、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；
R5是烷基、环烷基、杂环烷基、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或 SO2NR1R1′；
R7和R7′各自独立地是H、烷基、芳烷基、杂芳基、全氟烷基、杂 芳基烷基、Cl、F、Br、I、CN、OR1、氨基、NHR4、NR2R5、NOR1、 硫醇、烷硫基、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′；和
R10是H、烷基、环烷基、杂环烷基(尤其杂芳基烷基)、芳基、 杂芳基(如杂芳基  离子)、芳烷基、CN、R1C＝O、R1R1′NC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1′。
本发明另一种更优选的子类化合物包括这样的式I化合物或其盐， 其中一个或多个，优选全部下述的取代基按如下定义：
G是芳基或杂芳基，其中所述基团是单环或多环，且任选地在一 个或多个位置上被下列基团取代：氢、C1-C3烷基、烯丙基或取代的 烯丙基、炔基、Cl、F、Br、I、CN、R1C＝O、R1HNC＝O、卤烷基(尤 其全氟烷基)、C1-C3羟烷基、HOCR3R3′、硝基、R1OCH2、R1O、NR4R5或SR1；
E是C＝Z2；
Z1是O；
Z2是O或NCN；
A1是CR7(尤其CH)；
A2是CR7(尤其CH)；
Y是J，其中J＝(CR7R7′)n，n＝1-3；
W是CR7R7′-CR7R7′、CR8＝CR8′或CR7R7′-C＝O；
Q是H、C1-C4烷基、炔基、Cl、F、Br、I、CN、R4C＝O、 R5R6NC＝O、卤烷基(尤其全氟烷基)、C1-C6羟烷基、HOCR7R7′、R1OCH2、 R1O、NH2或NR4R5；
M和M′均为一个键；
L是一个键；
R1和R1′各自独立地是H、烷基或全氟烷基；
R2是烷基或全氟烷基；
R3和R3′各自独立地是H、烷基、全氟烷基、Cl、F、Br、I、CN、 烷氧基、氨基、NR1R2、硫醇或烷硫基；
R4是H、烷基、R1C＝O、R1NHC＝O或SO2NR1R1′；
R5是烷基、R1C＝O、R1NHC＝O或SO2NR1R1′；
R7和R7′各自独立地是H、烷基、芳烷基、杂芳基、全氟烷基、杂 芳基烷基、Cl、F、Br、I、CN、OR1、氨基、NHR4、NR2R5、NOR1、 R1C＝O、R1NHC＝O或SO2NR1R1′；和
R10是H、烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳基烷基、CN、R1C＝O、R1R1′NC＝O或SO2NR1R1′。
本发明特别优选的子类化合物包括这样的式I化合物或其盐，其 中一个或多个，优选全部下述的取代基按如下定义：
G是芳基(尤其苯基或萘基)或杂环(尤其苯并稠合杂环基，如 吲哚、苯并噻吩、苯并噻唑、苯并噻二唑、苯并异噁唑、苯并噁二唑、 氧化苯并噻吩、苯并呋喃或苯并吡喃)基，其中所述基团是单环或多 环，且任选地在一个或多个位置，如1-5个位置(优选1-2个位置) 被选自下列的取代基取代：氢、NH2、烷基(尤其含1-4个碳原子) 或取代的烷基(尤其含1-4个碳原子且被卤素取代的烷基，如CF3)、 卤素(尤其F、Cl、Br或I)、杂环(四唑或噁唑)、CN、硝基、SR1或R1O(尤其其中R1是烷基)；
E是C＝Z2或CHR7(尤其其中R7是氢)；
Z1是O或S；
Z2是O、S或NR6(尤其其中R6是CN或苯基)；
A1是CR7(尤其其中R7是氢)；
A2是CR7(尤其其中R7是氢)；
Y是(CR7R7′)n，n＝1-2(尤其其中R7和R7′是氢)；
W是CR7R7′-CR7R7′、CR8＝CR8′或NR9-CR7R7′(尤其其中R7、 R7′、R8和R8′是氢，R9的定义如本优选子类中所定义的)；
Q是H、烷基(尤其含1-4个碳原子)、链烯基(尤其含1-4 个碳原子)、芳烷基(尤其苄基)或取代的芳烷基(尤其取代的苄基， 如卤素取代的苄基)；
M是一个键或NH(尤其是一个键)，M′是一个键；
L是一个键；
R1和R1′各自独立地是烷基(尤其含1-4个碳原子)或取代的烷 基(尤其含1-4个碳原子且被卤素取代的烷基)、杂环(如咪唑或异 噁唑)或取代的杂环(如被甲基取代的咪唑)、芳基(尤其苯基)或 取代的芳基(尤其被卤素、硝基、卤代烷基如CF3或含1-4个碳原子 的烷基中的一个或多个基团取代的苯基)、芳烷基(尤其苄基或苯乙 基)或取代的芳烷基(尤其取代的苄基如卤素和/或硝基取代的苄基)； 和
R9和R9′各自独立地是H、烷基(尤其含1-4个碳原子)、链烯 基(尤其含1-4个碳原子)、芳烷基(尤其苄基)、R1C＝O、R1OC＝O、R1NHC＝O或SO2R1(尤其其中R1独立地按本优选子类中所定 义)。
在本特别优选的子类中，G-L可以是例如任选取代的萘基或任选 取代的稠合二环式杂环基，如任选取代的苯并稠合杂环基(如通过苯 部分键合到分子的其余部分)，尤其这样的基团，其中键合到苯上的 杂环含有5个环原子，其例子是苯并噁唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、 苯并噁二唑或苯并噻吩，例如：
其中X是卤素(尤其Cl)、OH、CN、NO2或 (如， 或
U是O或S(其中S可任选地被氧化成例如SO)；
U1是CH3或CF3；
各个U2独立地是N、CH或CF；
U3是N、O或S；
U4和U5与它们所键合的原子一起形成一个任选取代的5元杂环， 该杂环可以是部分不饱和的或芳族的，且含有1-3个环杂原子；
各个U6独立地是CH或N；以及 代表由U3、U4和U5形成的环中任选的双键
尤其优选的是具有如下结构的式I化合物或其盐：
其中R9和U2的定义同上，例如任选取代的芳基羰基或任选取代 的芳氧羰基，Xa是芳基的取代基，如硝基。
也尤其优选的是具有如下结构的式I化合物或其盐： 其中： n是1或2； Q是H、甲基或乙基； G′是
各个Ga独立地是CN、NO2、CF3、Cl、Br、F、OCH3、SCH3、I、 CH3、C(O)-CH3或
Gb是CN、H、F、Br、NO2或 Gc是CH或N； Gd是S或O； Ge是H或F； A＝ 或CH2； R1a是
  
   或 R1b是 R1c是 或 ；和 R1d是-CH3，或
                         用途和效用
本发明化合物调节核激素受体(NHR)的功能，而且包括属于， 例如雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、黄体酮受体(PR)、 糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、类固醇和宾主共 栖受体(SXR)、其它类固醇结合性NHR、孤生受体或其它NHR的 兴奋剂、部分兴奋剂、拮抗剂或部分拮抗剂的化合物。相对于NHR家 族内的其它成员而言，优选选择性调节一种这样的NHR。“调节” (modulation)包括，例如，活化(例如，兴奋剂活性，如选择性雄激 素受体兴奋剂活性)或抑制(例如，拮抗剂活性)。
因此，本发明化合物可用于治疗NHR关联病症。本文中使用的 “NHR关联病症”系指可以通过调节某一对象中一种NHR的功能来 治疗的病症或失调，其中，治疗包含该病症或失调的预防(例如预防 性治疗)、部分减轻或治愈。调节可以，例如，在该对象的某些组织 内部局部地进行，也可以在因这样一种病症或失调而进行治疗的对象 全身更全面地进行。
本发明的化合物可用于治疗各种各样的病症和失调，包括但不限 于以下所述的那些：
式I化合物可以作为雌激素受体的兴奋剂、部分兴奋剂、拮抗剂 或部分拮抗剂施用，优选选择性地施用到该受体上，以治疗一系列涉 及雌激素受体路线调节的医学病症。所述化合物的应用包括但不限于： 骨质疏松症、潮热、阴道干燥、前列腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、能 表达雌激素受体的癌例如以上提到的癌及其它癌，避孕、妊娠终止、 绝经、闭经和痛经。
式I化合物可以作为黄体酮受体的兴奋剂、部分兴奋剂、拮抗剂 或部分拮抗剂施用，优选选择性地施用到该受体上，以治疗一系列涉 及黄体酮受体路线调节的医学病症。所述化合物的应用包括但不限于： 乳腺癌、含有黄体酮受体的其它癌、子宫内膜异位、恶病质、避孕、 绝经、周期同步(cyclesynchrony)、脑膜瘤(meniginoma)、痛经、 子宫肌瘤、妊娠终止、引产和骨质疏松症。
式I化合物可以作为糖皮质激素受体的兴奋剂、部分兴奋剂、拮 抗剂或部分拮抗剂施用，优选选择性地施用到该受体上，以治疗一系 列涉及糖皮质激素受体路线调节的医学病症。所述化合物的应用包括 但不限于：炎性疾病、自免疫疾病、前列腺癌、乳腺癌、阿尔茨海默 病、精神病、药物依赖、非胰岛素依赖型糖尿病，和作为多巴胺受体 阻断剂，要不然，作为多巴胺受体传递疾病的治疗剂。
式I化合物可以作为盐皮质激素受体的兴奋剂、部分兴奋剂、拮 抗剂或部分拮抗剂施用，优选选择性地施用到该受体上，以治疗一系 列涉及盐皮质激素受体路线调节的医学病症。所述化合物的应用包括 但不限于：药物戒除综合征和炎性疾病。
式I化合物可以作为醛甾酮受体的兴奋剂、部分兴奋剂、拮抗剂 或部分拮抗剂施用，优选选择性地施用到该受体上，以治疗一系列涉 及醛甾酮受体路线调节的医学病症。所述化合物的一种应用包括但不 限于：充血性心力衰竭。
式I化合物可以作为雄激素受体的兴奋剂、部分兴奋剂、拮抗剂 或部分拮抗剂施用，优选选择性地施用到该受体上，以治疗一系列涉 及雄激素受体路线调节的医学病症。所述化合物的应用包括但不限于： 多毛症、痤疮、皮脂溢、阿尔茨海默病、雄激素性脱发、性腺机能减 退、超多毛症(hyperpilosity)、良性前列腺肥大、前列腺的腺瘤和赘 生物(例如晚期转移性前列腺癌)，治疗含有雄激素受体的良性或恶 性肿瘤细胞，例如乳腺癌、脑癌、皮肤癌、卵巢癌、膀胱癌、淋巴癌、 肝癌和肾癌就是这样的情况，VCAM表达的胰腺癌调节及其中对心脏 病治疗的应用，炎症和免疫调节，VEGF表达的调节及其中作为抗血 管原剂使用的应用，骨质疏松症，抑制性精子发生，性欲、恶病质， 子宫内膜异位，多囊性卵巢综合征，厌食，男人中年龄相关的睾酮水 平下降的雄激素补充，男性绝经，男性激素替代，男性和女性性机能 障碍，和行走患者中肌萎缩的抑制。例如，泛AR调节是所期待的， 前列腺选择性AR调节(“SARM”)是特别优选的，例如可用于治疗 早期前列腺癌。
式I化合物可以作为很多肿瘤系中发现的突变雄激素受体的(优 选，选择性的)拮抗剂应用。此类突变体的实例是在代表性前列腺肿 瘤细胞系中找到的那些，例如LNCap(T877A突变，Biophys.Acta，187， 1052(1990))、PCa2b(L701H & T877A突变，J.Urol.，162，2192 (1999))和CWR22(H874Y突变，Mol.Endo.，11，450(1997))。 所述化合物的应用包括但不限于：前列腺的腺瘤和赘生物，乳腺癌和 子宫内膜癌。
式I化合物可以作为类固醇和宾主共栖受体的兴奋剂、部分兴奋 剂、拮抗剂或部分拮抗剂施用，优选选择性施用到该受体上，以治疗 一系列涉及类固醇和宾主共栖受体路线调节的医学病症。所述化合物 的应用包括但不限于：治疗胆固醇体内平衡失调，通过一种能调节SXR 的P450调节效果的药剂(本发明化合物)的共给药来减少各医药剂的 代谢。
连同以上提到的NHR一起，也存在着一批无法表征其活化配体或 失活配体的NHR。这些蛋白质由于与其它NHR的强烈顺序同系性而 分类为NHR，而且称之为孤生受体。由于孤生受体显示出与其它NHR 的强烈顺序同系性，因而式I化合物包括那些可用来作为孤生NHR的 功能的调节剂者。NHR调节剂例如式I范围内的化合物所调节的孤生 受体实例是但不限于表1中所列的那些。所述孤生受体的调节剂的治 疗应用实例也列于表1中，但不限于其中的实例。
表1  实例的孤生核激素受体、形式(M＝单体，D＝杂二聚体， H＝均二聚体)、组织表达和靶治疗应用(CNS＝中枢神经系统) 受体       形式     组织表达        靶治疗应用 NURR1        M/D   多巴胺能神经元       帕金森病 RZRβ                  M     脑(垂体)，肌肉       睡眠失调 RORα                  M     小脑，浦肯野细胞     关节炎，小脑运动失调 NOR-1        M     脑，肌肉，心脏，     CNS失调，癌症
               肾上腺，胸腺 NGFI-Bβ            M/D   脑                   CNS失调 COUP-Tfα          H     脑                   CNS失调 CCUP-TFβ          H     脑                   CNS失调 COUP-TFγχ        H     脑                   CNS失调 Nur77        H     脑，胸腺，肾上腺     CNS失调 Rev-ErbAα         H     肌肉，脑(同时普      肥胖
               遍存在) HNF4α                H     肝、肾、肠           糖尿病 SF-1         M     性腺，垂体           代谢失调 LXRα，β          D     肾(同时普遍存在)     代谢失调 GCNF         M/H   睾丸，卵巢           不育症 ERRα，β          M    胎盘，骨    不育症，骨质疏松症 FXR          D    肝，肾      代谢失调 CARα                  H    肝，肾      代谢失调 PXR          H    肝，肠      代谢失调
因此，本发明提供NHR关联病症的治疗方法，包含对需要该治疗 的对象给药治疗有效量的至少一种式I化合物的步骤。诸如以下所述 那些的其它治疗剂可以在本发明方法中与本发明化合物一起采用(例 如，分别给药，或配制在一起成为固定剂型)。在本发明的方法中， 这样的其它治疗剂可以在本发明化合物给药之前、同时或之后给药。
本发明也提供医药组合物，包含治疗有效量的至少一种能治疗NHR -关联病症的式I化合物，和医药上可接受载体(载体或稀释剂)。 本发明的组合物可以含有以下所述的其它治疗剂，而且可以例如通过 采用惯常的固体或液体载体或稀释剂以及适合于所希望给药方式的类 型的医药添加剂(例如赋形剂、粘结剂、防腐剂、稳定剂、香味剂等) 按照医药配方业内众所周知的那些技术配制。
应当注意的是，本发明的化合物，不限于其作用机理，可用于治 疗本文中所列出或所述的病症或失调中的任何一种，例如炎性疾病或 癌症或其它增生疾病，而且可用于此类病症或失调治疗用组合物。这 样的病症和失调包括但不限于以上所述那些以及以下所述那些中的任 何一种，例如：肌肉强度和功能的保持(例如在年长者中)；年长者 中虚弱或年龄相关功能下降(“ARFD”)(例如肌萎缩)的逆转或预 防；糖皮质激素的分解代谢副作用的治疗；骨质量、密度或生长下降 (例如骨质疏松和骨质减少)的预防和/或治疗；慢性疲劳综合征(CFS) 的治疗；慢性malagia；急性疲劳综合征和有选择手术后肌损失的治疗 (例如手术后康复)；伤口愈合加速；加速骨裂修复(例如加速髋裂 患者的恢复)；加速并发骨折例如内脱位骨生成的愈合；联合替代； 手术后粘连形成的预防；牙修复或生长的加速；感官功能(例如听力、 视力、olefaction和味觉)的保持；牙周疾病的治疗；骨折后继性消瘦 和与慢性障碍性肺部疾病(COPD)、慢性肝病、失重、癌性恶病质、 烧伤和创伤康复、慢性分解代谢状态(例如昏迷)、饮食失调(例如 厌食)和化疗有关的消瘦的治疗；心肌病的治疗；血小板减少症的治 疗；与节段性回肠炎有关的生长迟缓的治疗；短肠综合征的治疗；刺 激性肠综合征的治疗；炎性肠综合征的治疗；节段性回肠炎和溃疡性 结肠炎的治疗；与移植有关的并发症的治疗；生理性身材矮小包括生 长激素不足的儿童和与慢性病有关的身材矮小的治疗；肥胖和与肥胖 有关的生长迟缓的治疗；厌食(例如与恶病质或老化有关的厌食)的 治疗；皮质醇过多症和库欣综合征的治疗；佩吉特病；骨关节炎的治 疗；博动生长激素释放的诱导；骨软骨发育异常的治疗；抑郁、神经 质、易怒和紧张的治疗；精力下降和自尊低下(例如动机/断言)的治 疗；认识功能的改善(例如痴呆包括阿尔茨海默病和短期失忆的治疗)； 与肺功能障碍和通风器依赖有关的分解代谢的治疗；心脏机能障碍(例 如，与瓣膜病、心肌梗塞、心脏肥大或充血性心力衰竭有关的)的治 疗；血压降低；心室机能障碍防护和再灌注事件预防；慢性渗析成人 的治疗；老化分解代谢状态的逆转或减慢；创伤后蛋白质分解代谢反 应的减少或逆转(例如，与外科手术、充血性心力衰竭、心肌病、烧 伤、癌症、COPD等有关的分解代谢状态的逆转)；减少由于慢性病 例如癌症或艾滋病而发生的恶病质和蛋白损失；高胰岛素血包括胰岛 细胞增殖症的治疗；免疫抑制患者的治疗；与多发性硬化或其它神经 变性失调有关的消瘦的治疗；髓鞘质修复的促进；皮肤厚度的保持； 代谢体内平衡和肾体内平衡(例如在虚弱年长者中)的治疗；成骨细 胞、骨再塑造和软骨生长的刺激；食物摄入量调节；哺乳动物(例如 人类)中胰岛素抗性包括NIDDM的治疗；心脏中胰岛素抗性的治疗； 睡眠质量改善，和由于REM睡眠高度增加和REM潜伏期减少而引起 的衰老的相对低生长激素分泌的改正；低体温的治疗；充血性心力衰 竭的治疗；脂肪营养不良(例如，在采取HIV或AIDS治疗例如蛋白 酶抑制剂的患者中)的治疗；肌萎缩(例如，由于身体不活动、卧床 休息或减少承重状况而造成的肌萎缩)的治疗；肌-骨骼损伤(例如， 在年长者中)的治疗；总体肺功能的改善；睡眠失调的治疗；长期危 急疾病的分解代谢状态的治疗；多毛症、痤疮、皮脂溢、雄激素性脱 发、贫血、超多毛症、良性前列腺肥大、前列腺的腺瘤和赘生物(例 如晚期转移性前列腺癌)和含有雄激素受体的恶性肿瘤细胞，例如， 乳腺癌、脑癌、皮肤癌、卵巢癌、膀胱癌、淋巴癌、肝癌和肾癌的情 况就是如此；皮肤癌、胰腺癌、子宫内膜癌、肺癌和结肠癌；骨肉瘤； 恶性高钙血；转移性骨病；精子发生、子宫内膜异位和多囊性卵巢综 合征的治疗；抗衡子痫前期、妊娠惊厥和早产；经前期综合征的治疗； 阴道干燥的治疗；男人中年龄相关的睾酮水平下降、男性绝经、性腺 机能减退、雄性激素替代、男性和女性性机能障碍(例如，勃起机能 障碍、性推动力、性快感、性欲下降)、男性和女性避孕、脱发、Reaven′s 综合征、以及骨骼与肌肉表现/强度增强；和Johannsson J.Clin. Endocrinol.Metab.，82，727-34(1997)中详细说明的、统称为“综 合征X”或代谢综合征的病症、疾病和病。
本发明化合物在免疫细胞活化/增殖的调节中有诸如作为涉及CAM (细胞粘连分子)和白细胞整合素(leukointegrins)的细胞间配体/受 体结合反应的竞争性抑制剂的治疗效用。例如，本发明化合物能调节 LFA-ICAM1，尤其可用来作为LFA-ICAM1拮抗剂，而且可用来治 疗一切与LFA-ICAM1有关的病症，例如免疫失调。本发明化合物的 优选效用包括但不限于：炎性疾病，例如，哺乳动物中非特异性免疫 系统的反应所产生的那些(例如成人呼吸窘迫综合征、休克、氧中毒、 败血病继发性多器官受伤综合征、创伤继发性多器官受伤综合征、心 肺分流术引起的组织的再灌注伤害、心肌梗塞或与血栓溶解剂并用、 急性肾小球性肾炎、脉管炎、反应性关节炎、有急性炎性成分的皮肤 病、中风、热伤害、血液透析、白细胞提取法、溃疡性结肠炎、坏死 性小肠结肠炎、粒细胞转输关联综合征)和哺乳动物中特异性免疫系 统的反应所产生的病症(例如牛皮癣、器官/组织移植排异、移植物与 宿主间的反应、自体免疫疾病，包括雷诺综合征，自体免疫甲状腺炎， 皮炎，多发性硬化，胰岛素依赖型糖尿病，眼色素层炎，炎性肠疾病 包括节段性回肠炎和溃疡性结肠炎，和全身性红斑狼疮)。本发明化 合物也可以用于治疗哮喘，或作为一种辅助物以使癌症治疗中用 cytokine疗法时的毒性降到最低限度。本发明化合物可用于治疗目前可 经由类固醇疗法治疗的所有疾病。本发明化合物可以单独或与其它免 疫抑制剂或抗炎剂一起用于治疗这些及其它失调。按照本发明，式I 化合物可以在炎症发病之前(从而抑制预期的炎症)或在炎症启动之 后给药。当预防性地提供时，优选在任何炎性反应或症状之前(例如， 在器官或组织移植之前、之时或之后不久但在任何症状或器官排异之 前)提供免疫抑制化合物。式I化合物的预防性给药可以预防或减少 任何随后的炎性反应(例如，所移植器官或组织的排异等)。式I化 合物的给药减少任何实际的炎症(例如，所移植器官或组织的排异)。
式I化合物可以用任何适用手段为本文中所述用途中任何一种给 药，例如，以片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂的形式经口给药；经舌下 给药；经颊给药；非经肠，例如经皮下、经静脉内、经肌内或经胸骨 内注射或灌注技术(例如，作为无菌可注射水基或非水基溶液或悬浮 液)给药；经鼻给药，包括诸如用吸入喷雾法对鼻粘膜给药；局部给 药，例如以霜剂或软膏剂形式给药；或诸如以栓剂形式经直肠给药； 各剂量单元配方含有无毒、医药上可接受载体或稀释剂。本发明化合 物可以，例如，以适合于即时释放或延时释放的形式给药。即时释放 或延时释放可以通过使用包含本发明化合物的适用医药组合物，或者 尤其在延时释放的情况下通过使用诸如皮下植入物或渗透泵等器具来 实现。本发明化合物也可以以脂质体方式给药。
经口服药用组合物实例包括悬浮液剂，后者可以含有例如赋予主 体用微晶纤维素、作为悬浮剂的藻酸或藻酸钠、作为增粘剂的甲基纤 维素和增甜剂或矫味矫臭剂，例如业内已知的那些；和即时释放片剂， 后者可以含有例如微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖 和/或其它赋形剂、粘结剂、增量剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂，例如 业内已知的那些。式I化合物也可以通过经舌下和/或经颊给药而经由 口腔投递。模塑片剂、压缩片剂或冻干片剂是可以使用的实例剂型。 实例组合物包括用速溶稀释剂例如甘露糖醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精 配制本发明化合物的那些。这样的配方中也可以包括高分子量赋形剂， 例如纤维素(avicel)或聚乙二醇(PEG)。这样的配方也可以包括一 种有助于粘膜粘连的赋形剂，例如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲 基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、马来酐共聚物(例 如Gantrez)，和控制释放的药剂，例如聚丙烯酸共聚物(例如Carbopol 934)。为了易于制作和使用，也可以添加润滑剂、滑动剂、香味剂、 着色剂和稳定剂。
经鼻气雾剂或吸入给药用组合物的实例包括食盐水溶液，其中可 以含有例如苄醇或其它适用防腐剂、提高生物有效性的吸收促进剂和/ 或其它增溶剂或分散剂，例如业内已知的那些。
非经肠给药用组合物实例包括可注射溶液或悬浮液，其中可以含 有诸如适用、无毒、非经肠可接受的稀释剂或溶剂，例如甘露糖醇、1，3 -丁二醇、水、生理食盐水、等渗氯化钠溶液或者其它适用分散剂或 湿润剂或悬浮剂，包括合成的甘油一酯或甘油二酯和脂肪酸，包括油 酸或Cremaphor。
经直肠给药用组合物实例包括栓剂，其中可以含有例如适用无刺 激性赋形剂，例如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇，这些在常温下是 固体但在直肠腔内液化和/或溶解而释放该药物。
局部给药用组合物实例包括一种局部载体，例如Plastibase(用聚 乙烯凝胶化的矿物油)。
本发明化合物的有效量可以由业内有一般技能的人士确定，而且 包括成年人的剂量实例为约1～100(例如15)mg有效化合物/kg体重 /日，这可以以单一剂量给药，也可以以诸如每日1～4次的各分剂量形 式给药。要理解的是，任何一位特定对象的特定剂量水平和给药频率 都会是各异的，而且将取决于各种各样的因素，包括所采用特定化合 物的活性，该化合物的代谢稳定性和作用时间长度，该对象的物种、 年龄、体重、总体健康、性别和食谱，给药的方式和时间，排泄速度， 药物组合，和特定病症的严重性。优选的治疗对象包括动物，最优选 哺乳动物种例如人类以及家畜例如狗、猫等患有NHR关联病症者。
如以上提到的，本发明化合物可以单独采用，或彼此组合和/或与 其它可用于NHR关联病症治疗的适用治疗剂例如抗生素或其它治疗上 有效的材料组合采用。
例如，本发明化合物可以并用生长促进剂，例如但不限于TRH、 二乙基己烯雄酚、茶碱、脑啡肽、E系列前列腺素，美国专利No.3,239,345 中公开的化合物，例如玉米赤霉醇，和美国专利No.4,036,979中公开 的化合物，例如舒贝诺司，或美国专利No.4,411,890中公开的肽。
本发明化合物也可以并用生长激素促分泌素，例如GHRP-6、 GHRP-1(如美国专利No.4,411,890和WO 89/07110与WO 89/07111 公报中所述)、GHRP-2(如WO 93/04081中所述)、NN703(Novo Nordisk 公司)、LY444711(Lilly)、MK-677(Merck)、CP424391(Pfizer) 和B-HT920，或并用生长激素释放因子及其类似物或者生长激素及其 类似物或促生长因子包括IGF-1和IGF-2，或并用α-肾上腺素能兴 奋剂例如氯压定或血清素5HTD兴奋剂例如舒马普坦，或者能抑制生长 抑素或其释放的药剂例如毒扁豆碱和吡斯的明。本发明所公开化合物 的又进一步用途是与甲状旁腺激素、PTH(1-34)或双膦酸酯例如MK -217(阿仑膦酸酯)并用。
本发明化合物的又进一步用途是与雌激素、睾酮、选择性雌激素 受体调节剂例如他莫昔芬或雷洛昔芬或其它雄激素受体调节剂例如 Edwards，J.P.等，Bio.Med.Chem.Let.9，1003-1008(1999)和Hamann， L.G.等，J.Med.Chem.，42，210-212(1999)中公开的那些并用。
本发明化合物的进一步用途是与黄体酮受体兴奋剂(“PRA”) 例如左炔诺孕酮、乙酸甲羟孕酮(MPA)并用。
本发明化合物可以单独采用，或彼此并用，和/或并用其它核激素 受体调节剂或可用于治疗以上所提到病症的其它适用治疗剂，包括： 抗糖尿病剂；抗骨质疏松症剂；抗肥胖剂；抗炎剂；抗焦虑剂；抗抑 郁药；抗高血压药；抗血小板药；抗血栓剂和血栓溶解剂；强心甙； 胆固醇/脂质降低剂；盐皮质激素受体拮抗药；磷酸二酯酶抑制剂；蛋 白酪氨酸激酶抑制剂；甲状腺模拟剂(包括甲状腺受体兴奋剂)；合 成(anabolic)剂；HIV或AIDS治疗剂；可用于治疗阿尔茨海默病及 其它认识失调的治疗剂；可用于治疗睡眠失调的治疗剂；抗增殖剂； 和抗肿瘤剂。
与本发明化合物并用的适用抗糖尿病剂包括双缩胍类(例如二甲 双胍)、糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖)、胰岛素(包括胰岛素促分 泌素或胰岛素敏化剂)、meglitinides(例如瑞格列奈)、磺酰脲(例 如格列美脲、格列本脲和格列吡嗪)、双缩胍/格列本脲合剂(例如 Glucovance)、噻唑烷二酮类(例如曲格列酮、rosiglitazone、吡格列 酮)、PPAR-α兴奋剂、PPAR-γ兴奋剂、PPAR-α/γ双兴奋剂、SGLT2 抑制剂、糖原磷酰酶抑制剂、脂肪酸结合蛋白(aP2)的抑制剂例如2000 年3月6日提交的美国专利申请序号09/519,079中公开的那些、类高 血糖素肽-1(GLP-1)、二肽基肽酶IV(DP4)抑制剂。
与本发明化合物并用的适用抗骨质疏松症剂实例包括阿仑膦酸、 利塞膦酸、PTH、PTH片段、雷洛昔芬、降钙素、类固醇或非类固醇 黄体酮受体兴奋剂、RANK配体拮抗剂、感钙受体拮抗药、TRAP抑 制剂、选择性雌激素受体调节剂(SERM)、雌激素和AP-1抑制剂。
与本发明化合物并用的适用抗肥胖剂实例包括aP2抑制剂例如 2000年3月6日提交的美国专利申请序号09/519,079中公开的那些、 PPAR-γ拮抗药、PPAR-δ兴奋剂、β-3肾上腺素能兴奋剂，例如AJ9677 (Takeda/Dainippon)、L750355(Merck)或CP331648(Pfizer)或者 美国专利No.5,541,204、No.5,770,615、No.5,491,134、No.5,776,983 和No.5,488,064中公开的其它已知β-3兴奋剂，脂酶抑制剂例如奥利 司他或ATL-962(Alizyme)，血清素(和多巴胺)再摄取抑制剂例 如西布曲明、托吡酯(Johnson & Johnson)或axokine(Regeneron)， 甲状腺受体β药例如WO 97/21993(U.Cal SF)、WO 99/00353(KaroBio) 和GB 98/284425(KaroBio)中公开的甲状腺受体配体，和/或减食欲 剂例如右苯丙胺、芬特明、苯基丙醇胺或马吲哚。
与本发明化合物并用的适用抗炎剂实例包括泼尼松、地塞米松、 Enbrel、环氧酶抑制剂(即COX-1/COX-2抑制剂，例如NSAID、 阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、吡罗昔康、Naproxen、Celebrex、 Vioxx)、CTLA4-Ig兴奋剂/拮抗剂，CD40配体拮抗剂，IMPDH抑 制剂例如麦考酚酸(CellCept)整合素拮抗剂，α-4β-7整合素拮抗 剂，细胞粘连抑制剂，干扰素-γ拮抗剂，ICAM-1，肿瘤坏死因子 (TNF)拮抗剂(例如infliximab，OR 1384)，前列腺素合成抑制剂， 布地奈德，氯法齐明，CNI-l493，CD4拮抗剂(例如priliximab)，p38 分裂素活化蛋白激酶抑制剂，蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂，IKK 抑制剂，和刺激性肠综合征治疗用治疗剂(例如Zelmac和Maxi-K 开放剂，例如美国专利No.6,184,231 B1中公开的那些)。
与本发明化合物并用的适用抗焦虑剂实例包括地西泮、劳拉西泮、 丁螺环酮、奥沙西泮、羟嗪pamoate。
与本发明化合物并用的适用抗抑郁药实例包括西酞普兰、氟西汀、 奈法唑酮、舍曲林和帕罗西汀。
与本发明化合物并用的适用抗高血压药实例包括β-肾上腺素能阻 断剂、钙通道阻断剂(L型和T型；例如地尔硫、维拉帕米、硝苯 地平、氨氯地平和mybefradil)、利尿药(例如氯噻嗪、氢氯噻嗪、氟 甲噻嗪、氢氟噻嗪、苄氟噻嗪、甲基氯噻嗪、三氯噻嗪、泊利噻嗪、 苄噻嗪、依他尼酸tricrynafen、氯噻酮、呋塞米、莫唑胺、布美他尼、 triamtrenene、阿米洛利、螺内酯)、肾素抑制剂、ACE抑制剂(例如 卡托普利、佐芬普利、福辛普利、依那普利、ceranopril、西拉普利、 地拉普利、喷托普利、喹那普利、雷米普利、赖诺普利)、AT-1受 体拮抗药(例如氯沙坦、依贝沙坦、缬沙坦)、ET受体拮抗药(例如 sitaxsentan、atrsentan和美国专利No.5,612,359和No.6,043,265中公 开的化合物)、双ET/AII拮抗药(例如WO 00/01389中公开的化合物)、 中性内切肽酶(NEP)抑制剂、vasopepsidase抑制剂(双NEP-ACE 抑制剂)(例如omapatrilat和gemopatrilat)和硝酸盐。
与本发明化合物并用的适用抗血小板剂实例包括GPIIb/IIIa阻断剂 (例如阿昔单抗、eptifibatide、tirofiban)、P2Y12拮抗药(例如氯吡 格雷、噻氯匹定、CS-747)、血栓素受体拮抗药(例如ifetroban)、 阿司匹林和有或无阿司匹林的PDE-III抑制剂(例如双嘧达莫)。
与本发明化合物并用的适用强心甙实例包括洋地黄和毒毛花苷 G。
与本发明化合物并用的适用胆固醇/脂质降低剂实例包括HMG- CoA还原酶抑制剂(例如普伐他汀、洛伐他汀、atorvastatin、辛伐他 汀、NK-104(a.k.a.itavastatin，或nisvastatin或nisbastatin)和ZD -4522(a.k.a.rosuvastatin或atavastatin或visastatin))、角鲨烯合 成酶抑制剂、fibrates、胆汁酸螯合剂、ACAT抑制剂、MTP抑制剂、 脂氧酶抑制剂、胆固醇吸收抑制剂和胆固醇酯转化蛋白抑制剂(例如 CP-529414)。
与本发明化合物并用的适用盐皮质激素受体拮抗药实例包括螺内 酯和eplerinone。
与本发明化合物并用的适用磷酸二酯酶抑制剂实例包括PDEIII抑 制剂例如西洛他唑，和PDEV抑制剂例如sildenafil。
与本发明化合物并用的适用甲状腺模拟剂实例包括促甲状腺激 素、polythyroid、KB-130015和dronedarone。
与本发明化合物并用的适用合成剂实例包括睾酮、FRH二乙基己 烯雌酚、雌激素、β-兴奋剂、茶碱、合成类固醇、脱氢表雄酮、脑啡 肽、E-系列前列腺素、视黄酸和美国专利No.3,239,345中公开的化 合物例如Zeranol；美国专利No.4,036,979中公开的化合物例如 Sulbenox，或美国专利No.4,411,890中公开的肽。
与本发明化合物并用的适用HIV或AIDS治疗剂实例包括硫酸 indinavir、沙奎那韦、甲磺酸沙奎那韦、ritonavir、拉米夫定、齐多夫 定、拉米夫定/齐多夫定合剂、扎西他滨、去羟肌苷、stavudine和乙酸 甲地孕酮。
与本发明化合物并用的阿尔茨海默病和认识失调治疗用适用治疗 剂实例包括donepezil、他克林、revastigmine、5HT6、γ-分泌酶抑制 剂、β-分泌酶抑制剂、SK通道阻断剂、Maxi-K阻断剂和KCNQ阻 断剂。
与本发明化合物并用的睡眠失调治疗用适用治疗剂实例包括褪黑 激素类似物、褪黑激素受体拮抗药、ML1B兴奋剂和GABA/NMDA受 体拮抗药。
与本发明化合物并用的适用抗增殖剂实例包括环孢多肽A、 paclitaxel、FK506和阿霉素。
与本发明化合物并用的适用抗肿瘤剂实例包括paclitaxel、阿霉素、 epothilones、顺铂和卡铂。
本发明化合物还可以并用营养补品例如美国专利5,179,080中所述 的那些，尤其并用乳清蛋白或酪蛋白、氨基酸(例如亮氨酸、支化氨 基酸和丁酸羟甲酯)、甘油三酯、维生素(例如A、B6、B12、叶酸、 C、D和E)、矿物质(例如硒、镁、锌、铬、钙和钾)、肉毒碱、硫 辛酸、肌酸和辅酶Q-10。
此外，本发明化合物还可以并用性机能障碍治疗用治疗剂，包括 但不限于PDE5抑制剂，例如sildenafil或IC-351；并用抗吸收剂、 激素替代治疗剂、维生素D类似物、降钙素、元素钙和钙补剂、组织 蛋白酶K抑制剂、MMP抑制剂、vitronectin受体拮抗剂、Src SH2拮抗 药、vacular-H+-ATP酶抑制剂、黄体酮受体兴奋剂、ipriflavone、氟 化物、RANK拮抗药、PTH及其类似物和片段、替勃龙、HMG-CoA 还原酶抑制剂、SERM、p38抑制剂、prostanoids、17-β羟基类固醇脱 氢酶抑制剂和Src激酶抑制剂。
本发明化合物可以并用男性避孕药例如壬苯醇醚，或脱发治疗用 治疗剂例如米诺地尔和非那雄胺，或化学治疗剂例如LHRH兴奋剂。
为了其优选的抗癌或抗血管形成用途，本发明化合物可以要么单 独给药，要么与其它抗癌剂和细胞毒性剂以及可用于治疗癌症或其它 增殖性疾病的治疗剂组合给药，例如，在第二种药物具有与本发明式I 化合物相同或不同作用机理的情况下。可用于与本发明化合物组合的 抗癌剂和细胞毒性剂类别的实例包括但不限于：烷基化剂例如氮芥、 磺酸烷酯、亚硝基脲、氮丙啶和三氮烯；抗代谢物例如叶酸拮抗药、 嘌呤类似物和嘧啶类似物；抗生素例如anthracyclines、博莱霉素、丝 裂霉素、放线菌素D和普卡霉素；酶例如L-天冬氨酸酶；法呢基蛋 白转移酶抑制剂；5α还原酶抑制剂；17β-羟基类固醇脱氢酶类型3的 抑制剂；激素剂，例如糖皮质激素、雌激素/抗雌激素、雄激素/抗雄激 素、孕酮和促黄体激素释放激素拮抗剂、乙酸奥曲肽；微管破裂剂， 例如ecteinascidins或其类似物和衍生物；微管稳定剂，例如taxanes， 如paclitaxel(Taxol)、docetaxel(Taxotere)及其类似物，和epothilones 例如epothilone A～F及其类似物；植物衍生产品，例如长春花生物碱、 表鬼臼毒素、taxanes；和topiosomerase抑制剂；prenyl蛋白转移酶抑 制剂；和其它各种药剂例如羟基脲、丙卡巴肼、米托坦、六甲基蜜胺、 铂配位络合物例如顺铂和卡铂；以及作为抗癌和细胞毒性剂使用的其 它药剂，例如生物反应改性剂、生长因子；免疫调节剂和单克隆抗体。 本发明化合物也可以并用放射疗法。
这些抗癌和细胞毒性剂类别的代表性实例包括但不限于盐酸氮 芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法仑、异环磷酰胺、白消安、卡莫司 汀、洛莫司汀、司莫司汀、链佐星、塞替派、达卡巴嗪、甲氨嘌呤、 硫鸟嘌呤、巯基嘌呤、氟达拉滨、pentastatin、克拉屈滨、阿糖胞苷、 氟尿嘧啶、多柔比星盐酸盐、柔红霉素、伊达比星、硫酸博莱霉素、 丝裂霉素C、放线菌素D、safracins、saframycins、quinocarcins、 discodermolides、长春新碱、长春碱、长春瑞滨酒石酸盐、依托泊苷、 依托泊苷磷酸盐、替尼泊苷、paclitaxel、他莫昔芬、雌莫司汀、雌莫 司汀磷酸钠、氟他胺、布舍瑞林、亮丙瑞林、喋啶、diyneses、左旋咪 唑、aflacon、干扰素、白细胞间介素、阿地白介素、非格司亭、沙格 司亭、rituximab、BCG、维A酸、伊立替康盐酸盐、倍他米松、吉西 他滨盐酸盐、六甲蜜胺和topoteca及其任何类似物或汀生物。
这些类别的优选成员包括但不限于紫杉醇、顺铂、卡铂、多柔比 星、去甲柔红霉素、柔红霉素、氨蝶呤、甲氨蝶呤、甲基叶酸、丝裂 霉素C、ecteinascidin 743或泊非霉素、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、 吉西他滨、胞嘧啶阿拉伯糖苷、鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物例如依托 泊苷、依托泊苷磷酸盐或替尼泊苷、美法仑、长春碱、长春新碱、异 长春碱、长春地辛和环氧长春碱。
抗癌及其它细胞毒性剂实例包括下列：epothilone衍生物，见德国 专利No.4138042.8；WO 97/19086、WO 98/22461、WO 98/25929、WO 98/38192、WO 99/01124、WO 99/02224、WO 99/02514、WO 99/03848、 WO 99/07692、WO 99/27890、WO 99/28324、WO 99/43653、WO 99/54330、WO 99/54318、WO 99/54319、WO 99/65913、WO 99/67252、 WO 99/67253和WO 00/00485；环素依赖型激酶抑制剂，见WO 99/24416 (也见美国专利No.6,040,321)；和prenyl-蛋白转移酶抑制剂，见WO 97/30992和WO 98/54966；和诸如美国专利No.6,011,029中一般性和 具体地描述的那些的药剂(该美国专利的化合物可以并用任何一种NHR 调节剂(包括但不限于本发明的那些)例如AR调节剂、ER调节剂、 LHRH调节剂或手术去雄，尤其用于治疗癌症)。
本发明的组合物也可以与其它治疗剂一起配方或共同给药，该治 疗剂是为其具体用于给药与以上所提到病症关联的治疗剂而选择的。 例如，本发明化合物可以与预防恶心、过敏和胃刺激的药剂例如止吐 药、以及H1和H2抗组胺药一起配方。
当涉及癌症治疗时，本发明化合物最优选单独使用或并用抗癌治 疗例如放射疗法和/或细胞生长抑制剂和/或细胞毒性剂，例如但不限于 DNA相互作用剂如顺铂或多柔比星；法呢基蛋白转移酶抑制剂，例如 美国专利No.6,011,029中所述的那些；topoisomerase II抑制剂，例如 依托泊苷；topoisomerase I抑制剂，例如CPT-11或topotecan；微管 蛋白稳定剂，例如紫杉醇、docetaxel、其它taxanes或epothilones；激 素剂，例如他莫昔芬；胸苷酸合成酶抑制剂，例如5-氟尿嘧啶；抗代 谢剂，例如甲氨蝶呤；抗血管形成剂，例如angiostatin、ZD 6474、ZD 6126 和comberstatin A2；激酶抑制剂，例如her 2特异性抗体、Iressa和CDK 抑制剂；组蛋白脱乙酰酶抑制剂，例如CI-994和MS-27-275。这 样的化合物也可以并用能抑制循环性睾酮产生的药剂，例如LHRH兴 奋剂或拮抗剂或外科去雄。
例如，晚期转移性前列腺癌的已知疗法包括“完全雄激素切除疗 法”，其中，肿瘤生长是通过经由化学去雄(去雄用来抑制循环性睾 酮(T)和二氢睾酮(DHT)的产生)随后给药雄激素受体(AR)拮 抗药(这抑制了前列腺组织从循环性雄激素前体向T/DHT转化而衍生 T/DHT的功能)来控制雄激素向前列腺组织的供给而加以抑制的。本 发明的化合物可以作为AR拮抗药用于完全切除疗法，可单独使用或 并用其它AR拮抗药例如氟他胺、卡地索、尼鲁米特或环丙孕酮乙酸 盐。
本发明化合物的另一种应用是并用抗体疗法，例如但不限于抗 PSCA的抗体疗法。还有一种应用是配合疫苗/免疫调节剂用于治疗癌 症。
本发明的化合物可以按照美国临时专利申请序号60/284,438、题 为“选择性雄激素受体调节剂及其识别、设计和使用方法”(2001年 4月18日由Mark E.Salvati等人提交(Attorney Docket No.LD 0250 (PSP))中所述方法使用，该临时专利申请全文列为本文参考文献(包 括但不限于对本发明的式I内所有特定化合物的参照)以及按照Mark E. Salvati等人于2001年6月20日提交的题为“选择性雄激素受体调节 剂及其识别、设计和使用方法”的美国专利申请序号No.＿＿＿＿(未 指定)(代理律师档案号No.LD 0250(NP))中所述方法使用，该 专利申请全文列为本文参考文献(包括但不限于对本发明的式I内所 有特定化合物的参照)。
当上述其它治疗剂与本发明的化合物联合使用时，其用量例如可 以按照Physicians′Desk Reference(PDR)中所指出，或由本领域技术人 员确定。
可以采用以下测定方法确定一种化合物作为NHR调节剂的活性。 利用下面所述的反式激活测定和标准AR结合测定，确定了本发明的 各种化合物是否具有AR调节剂活性。在检验浓度下，某些式I化合物 在采用的测定中表现出体内活性很低或没有体内活性(如实施例97的 化合物)。 反式激活测定 AR特异性测定
在被转染的报道构建体的反式激活测定中检测本发明化合物，该 测定中采用宿主细胞的内源性雄激素受体。该反式激活测定提供了鉴 定模拟天然激素，在此处是二氢睾丸酮(DHT)的作用的功能性激动剂和 部分激动剂，或抑制其作用的拮抗剂的方法。由于在两个系列的数据 中有很好的相关性，该测定可以用于预测体内活性。见，例如，T.Berger 等，J.Steroid Biochem.Molec.Biol.773(1992)，其公开内容在此引入作 为参考。
为进行反式激活测定，通过转染(一种诱导细胞接受外来基因的 步骤)将报道质粒引入各自的细胞。该报道质粒包含报道蛋白，如被 分泌的碱性磷酸酶(SEAP)的cDNA，它是由含雄激素反应元件(AREs) 的前列腺特异性抗原(PSA)上游序列所控制的。该报道质粒的功能是报 道AR的转录调节活性。因此，该报道分子成为通常由在AR及其天然 激素控制下的基因表达的产物(mRNA，然后是蛋白)的替代物。为 了检测拮抗剂，在已知诱导确定报道信号的恒定浓度的天然AR激素 (DHT)存在下进行反式激活测定。增加所预测的拮抗剂的浓度将减 弱报道信号(如SEAP产量)。另一方面，将被转染细胞暴露于浓度 增加的预测激动剂，将增加报道信号的产量。
对于该测定，从美国典型培养物保藏中心(Rockville，MD)获得 LNCaP和MDA 453细胞，并在补加10％胎牛血清(FBS；Gibco)的RPMI 1640或DMEM培养基中维持。根据Heiser，130 Methods Mol.Biol.，117 (2000)描述的最优步骤，通过电穿孔，用pSEAP2/PSA540/增强子报道 质粒瞬时转染各个细胞。报道质粒的构建方法如下：采用商购的人胎 盘基因组DNA，通过聚合酶链式反应(PCR)产生含有BglII位点(5284 位)和583l位的Hind III位点的人前列腺特异性抗原启动子(编号# U37672)片段，Schuur，等J.Biol.Chem.，271(12)：7043-51(1996)。将该 片段亚克隆至预先用BglII和HindIII消化的pSEAP2/basic(Clontech) 中，以产生pSEAP2/PSA540构建体。然后通过PCR从人胎盘基因组 DNA中扩增一个片段，该片段具有-5322和-3873位之间的人PSA上 游序列片段。用引物引入一个XhoI和一个BglII位点。将得到的片段 亚克隆到分别用XhoI和BglII消化的pSEAP2/PSA540中，产生 pSEAP2/PSA540/增强子构建体。将LNCaP和MDA 453细胞收集到含 10％炭梳刷过的FBS的培养基中。每种细胞悬浮液分配到两个基因脉 冲发生器杯(Bio-Rad)中，然后接受8μg报道构建体，并用Bio-Rad基 因脉冲发生器以210伏和960微法拉第进行电穿孔。在转染之后，洗 涤细胞，并在无(空白)或有(对照)1nM二氢睾丸酮(DHT；Sigma Chemical)存在下，以及在浓度为10-10至1O-5M的标准抗雄激素药物 比卡鲁胺或本发明化合物(样品)存在或不存在下，用含炭处理的胎 牛血清的培养基孵育细胞。每个样品用双份。在Biomek 2000实验室 工作台上进行化合物稀释。48小时后，用Phospha光化学发光报道基 因测定系统(Tropix，Inc)进行一部分上清液的SEAP活性测定。剩余细 胞的存活力用CellTiter 96 Aqueous非放射性细胞增殖测定(MTS Assay， Promega)进行判断。简言之，将四唑翁化合物的混合物(3-(4，5-二甲基 噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-硫代苯基)-2H-四唑翁，内盐； MTS)和电子偶联剂(吩嗪硫酸二甲酯；PMS)加入细胞中。MTS(Owen′s 试剂)经细胞生物还原为可溶于组织培养基的甲潜，因此其在490nm的 吸光度可以直接从96孔测定板中测量，而不需要额外的处理。由490nm 的吸光度测定的甲潜产物的量与培养物中存活细胞的数量直接成比 例。对于每个双份测定，SEAP读数用来自于MTS测定的Abs490值 进行标准化。对于拮抗剂模式，％抑制的计算如下：
％抑制＝100×(1-平均对照-平均空白/平均样品-平均空白))
用数据作图，对抑制50％的标准化SEAP的化合物浓度(IC50)进行 定量。
对于激动剂模式，％对照称作与用天然激素(此处为DHT)观察 到的最大作用相比，待检测化合物的作用，计算为：
％对照＝100×平均样品-平均空白/平均对照-平均空白
用数据作图，对激活50％的标准化SEAP活性的化合物浓度(EC50) 进行定量。 GR特异性测定
如AR特异性反式激活测定所述，所使用的报道质粒由报道SEAP 蛋白的cDNA组成。报道SEAP蛋白的表达由含有三种激素反应元件 (HRE)的小鼠乳腺肿瘤病毒长末端重复(MMTV LTR)序列控制，所述激 素反应元件可以由GR和PR调节，见例如，G.Chalepakis等，Cell，53(3)， 371(1988)。将该质粒转染到表达内源性GR的A549细胞中，以获得 GR特异性反式激活测定。从美国典型培养物保藏中心(Rockville，MD) 获得A549细胞，并在补加10％胎牛血清(FBS；Gibco)的RPMI 1640中 维持。本发明化合物的GR特异性拮抗剂活性的测定与所描述的AR特 异性反式激活测定方法相同，除了用5nM的地塞米松(Sigma Chemicals)，即GR的一种特异性激动剂替代DHT。本发明化合物的GR 特异性激动剂活性的测定与所描述的AR特异性反式激活测定方法相 同，其中测量了在没有已知GR特异性激动剂配体存在下，加入待检 测化合物后GR特异性报道系统的激活。 PR特异性测定：
如AR特异性反式激活测定所述，所使用的报道质粒由报道SEAP 蛋白的cDNA组成。报道SEAP蛋白的表达由含有三种激素反应元件 (HREs)的小鼠乳腺肿瘤病毒长末端重复(MMTV LTR)序列控制，所述 激素反应元件可以由GR和PR调节。将该质粒转染到表达内源性PR 的T47D细胞中，以获得PR特异性反式激活测定。从美国典型培养物 保藏中心(Rockville，MD)获得T47D细胞，并在补加10％胎牛血清(FBS； Gibco)的DMEM培养基中维持。本发明化合物的PR特异性拮抗剂活 性的测定与所描述的AR特异性反式激活测定方法相同，除了用1nM 的普美孕酮(NEN)，即PR的一种特异性激动剂替代DHT。本发明化 合物的PR特异性激动剂活性的测定与所描述的AR特异性反式激活测 定方法相同，其中测量了在没有已知PR特异性激动剂配体存在下，加 入待检测化合物后PR特异性报道系统的激活。 AR结合测定：
为进行完整的细胞结合测定，将人LNCaP细胞(T877A突变的AR) 或MDA 453(野生型AR)分别铺于含补加有10％炭处理的CA-FBS (Cocaleco Biologicals)的RPMI 1640或DMEM的96孔微量滴定板中， 在37℃下孵育，以去除可能与细胞中受体复合的内源性配体。48小时 后，进行饱和分析以测定氚化的二氢睾丸酮[3H]-DHT的Kd值，或进行 竞争性结合测定以估计待检测化合物与[3H]-DHT的竞争能力。为进行 饱和分析，将无(总结合)或有(非特异性结合)500倍摩尔过量的未 标记DHT存在的含[3H]-DHT(浓度为0.1nM-16nM)的培养基(RPMI 1640或DMEM-0.2％ CA-FBS)加至细胞。37℃下4小时后，取出每种 浓度[3H]-DHT下的总结合培养基的等分物，用于估计游离[3H]-DHT的 量。取出剩余的培养基，用PBS洗涤细胞三次，并收获于UniFilter GF/B 板(Packard)上，加入Microscint(Packard)，在Top计数器(Packard)中 对板进行计数，以评估结合[3H]-DHT的量。
为进行饱和分析，将总结合和非特异性结合的差定义为特异性结 合。用Scatchard分析计算特异性结合，以确定[3H]-DHT的Kd值。见， 例如D.Rodbard，Mathematics and statistics of ligand assays：an illustrated guide：In：J.Langon and J.J.Clapp，eds.，Ligand Assay，Masson Publishing U.S.A.，Inc.，New York，pp.45-99，(1981)，其公开内容在此引入作为参 考。
为进行竞争研究，将含有1nM[3H]-DHT和浓度为10-10-10-5M的 本发明的化合物(″待检测化合物″)的培养基加至细胞。每个样品采用双 份。在37℃下4小时后，按前面所述洗涤、收获和计数细胞。将数据 作图为在给定化合物的剂量反应曲线范围中剩余[3H]-DHT的量(没有待 检测化合物存在时的％对照)。在进行对数转化后，对没有竞争性配体 存在下抑制50％的[3H]-DHT结合量的待检测化合物的浓度进行定量 (IC50)。通过将Cheng Prusoff等式应用于IC50值，测定KI值，其中：
在校正了非特异性结合后，测定IC50值。IC50定义为竞争性配体 使特异性结合减少50％需要的浓度。[3H]-DHT对MDA 453和LNCaP 的Kd分别为0.7和0.2nM。 人前列腺细胞增殖测定
检测本发明的化合物(“待检测化合物)对人前列腺细胞系增殖 的作用。为进行该检测，来自于未进行睾丸切除的患者的转移灶的MDA PCa2b细胞系Navone等，Clin.Cancer Res.，3，2493-500(1997)在有或无 待检测化合物的条件下孵育72小时，对掺入DNA的[3H]-胸苷进行定 量，以便估计增殖细胞的数目。在补加10％FBS的BRFF-HPCl培养基 (Biological Research Faculty & Facility Inc.，MD)中维持MDA PCa2b细 胞系。为进行该测定，将细胞铺于96孔微量滴定板并在10％FBS(炭 处理的)/BRFF-BMZERO(无雄激素)中37℃下孵育。24小时后，对细 胞不作处理(空白)或用1nM DHT(对照)或浓度为10-10至10-5的本 发明的待检测化合物(样品)处理。每个样品为双份。在Biomek 2000 实验室工作台上进行化合物稀释。72小时后，每孔加入0.44 uCi.的[3H]- 胸苷(Amersham)，并再孵育24小时，然后tripsinization，收获细胞于 GF/B滤器上。将Micro-scint PS加入滤器，然后在Beckman TopCount 上计数。
％抑制计算如下：
％抑制＝100×(1-[平均值对照-平均值空白/平均值样品-平均值空白])
用数据作图，对抑制50％[3H]-胸苷掺入的化合物浓度(IC50)进行 定量。 C2C12小鼠成肌细胞反式激活测定：
开发了双功能反式激活测定，从而用荧光素酶报道分子评估在肌 细胞背景中雄激素激动剂的效力。第一种测定(ARTA Stable 1)使用一 种细胞系，即Stable 1(72号克隆)，它稳定表达全长大鼠雄激素受体， 但要求增强子/报道分子的瞬时转染。该细胞系来源于C2C12小鼠成肌 细胞。第二种测定(ARTA Stable 2)使用一种细胞系，即Stable 2(133号 克隆)，它来源于Stable 1，稳定表达rAR和增强子/荧光素酶报道分子。
用于该系统的增强子/报道分子构建体为pGL3/2XDR-1/荧光素 酶。据报道2XDR-1是CV-1细胞中的AR特异性反应元件，Brown等， The Journal of Biological Chemisty 272，8227-8235，(1997)。它是通过 AR/GR共有增强子序列的随机诱变而开发的。 ARTA Stable 1：
1.将Stable 1细胞以6,000细胞/孔铺于96孔板，将其置于不含酚 红的高葡萄糖DMEM(Gibco BRL，Cat.No.：21063-029)中，其中含10％ 的炭和右旋糖苷处理的FBS(HyClone Cat.No.：SH30068.02)，50mM HEPES缓冲液(Gibco BRL，Cat.No.：15630-080)，1X MEM丙酮酸钠 (Gibco BRL，Cat.No.：11360-070)，0.5X抗生素-抗真菌剂，和800μg/ml Geneticin(Gibco BRL，Cat.No.：10131-035)。
2.48小时后，采用LipofectAMINE PlusTM试剂(Gibco BRL，Cat.No.： 10964-013)，用pGL3/2XDR-1/荧光素酶转染细胞。具体地说，用5μl/ 孔的Opti-MEMem培养基(Gibco BRL，Cat.No.：31985-070)稀释5ng/孔 的pGL3/2XDR-1/荧光素酶DNA和50ng/孔的鲑鱼精子DNA(作为载 体)。为进行该测定，加入0.5μl/孔的Plus试剂。该混合物在室温下 孵育15分钟。在一个另外的容器中，用5μl/孔的Opti-MEM稀释0.385μg/ 孔的LipofectAMINE试剂。然后将DNA混合物与LipofectAMINE混 合物联合，在室温下再孵育15分钟。此时，从细胞中去除培养基，代 之以60μl/孔的Opti-MEM。加入10μl/孔的DNA/LipofectAMINE转染 混合物。将细胞孵育4小时。
3.从细胞中去除转染混合物，并用90μl上述1中的培养基代替。
4.在每孔中加入10μl/孔的适当药物稀释液。
5.24小时后，根据制造商的说明(Promega，Cat.No.：E2520)用 Steady-GloTM荧光素酶系统检测活性。 ARTA stable 2
1.将Stable 2细胞以6,000细胞/孔铺于96孔板，使其置于不含酚 红的高葡萄糖DMEM(Gibco BRL，Cat.No.：21063-029)中，其中含10％ 的炭和右旋糖苷处理的FBS(HyClone Cat.No.：SH30068.02)，50mM HEPES缓冲液(Gibco BRL，Cat.No.：15630-080)，1X MEM丙酮酸钠 (Gibco BRL，Cat.No.：11360-070)，0.5X抗生素-抗真菌剂，和800μg/ml Geneticin(Gibco BRL，Cat.No.：10131-035)，以及800μg/ml潮霉素 β(Gibco BRL，Cat.No.：10687-010)。
2.48小时后，去除细胞上的培养基，代之以90μl新鲜培养基。在 每孔中加入10μl/孔的适当药物稀释液。
3.24小时后，根据制造商的说明(Promega，Cat.No.：E2520)用 Steady-GloTM荧光素酶系统检测活性。 见美国专利申请＿＿＿＿(未指定申请号)，其名称为“用于鉴定雄 激素受体调节剂的细胞系和基于细胞的测定”，由Jacek Ostrowski等 于2001年6月20日提交(代理号D0177)，在此引入该专利的完整 内容作为参考。 增殖测定 鼠乳腺细胞增殖测定
在一项采用来源于Shionogi肿瘤的雄激素反应性鼠乳腺细胞系进 行的增殖测定中检测本发明的化合物(“待检测化合物)，以判断其 调节AR功能的能力，Hiraoka等，Cancer Res.，47，6560-6564(1987)。通 过最初在Tetuo等，Cancer Research 25，1168-1175(1965)中描述的一般 步骤下传代肿瘤片段而建立原代Shionogi细胞系的稳定AR依赖性克 隆。从前面的步骤中，分离了一个稳定的细胞系SC114，对其进行鉴 定和利用，用于检测示例性化合物。在待检测化合物存在或不存在下 孵育SC114细胞72小时，对掺入DNA的[3H]胸苷进行定量，以作为 评估细胞数目，从而评估细胞增殖速度的替代终点，如Suzuki等，J： Steroid Biochem.Mol.Biol.37，559-567(1990)中的描述。将SC114细胞 系维持在含10-8M的睾丸酮和2％DCC处理的FCS的MEM中，将细 胞铺于维持培养基中的96孔微量滴定板，在37℃下孵育。第二天，将 培养基换为无血清培养基[Ham′s F-12：MEM(1；1，v/v)，含0.1％ BSA]，其中含(拮抗剂模式)或不含(激动剂模式)10-8M的睾丸酮 和浓度为10-10至10-5M的本发明的化合物。每个样品为双份。在Biomek 2000实验室工作台上进行化合物稀释。72小时后，每孔加入0.44uCi. 的[3H]-胸苷(Amersham)，并再孵育2小时，然后tripsinization，收获细 胞于GF/B滤器上。将Micro-scint PS加入滤器，然后在Beckman TopCount上计数。
％抑制计算如下：
％抑制＝100×(1-[平均值对照-平均值空白/平均值样品-平均值空白]) 用数据作图，对抑制50％的[3H]-胸苷掺入的化合物浓度进行定量(IC50)。
对于激动剂模式，％对照称作与用天然激素(此处为DHT)观察 到的最大作用相比，待检测化合物的作用，计算为：
％对照＝100×(平均值样品-平均值空白)/(平均值对照-平均值空白) 用数据作图，对抑制50％的[3H]-胸苷掺入的化合物浓度进行定量 (EC50)。 测量GR诱导的AP-1反式阻抑的体内测定
AP-1测定是一种基于细胞的荧光素酶报道测定。用附着于荧光素 酶基因的AP-1 DNA结合位点稳定转染含内源性糖皮质激素受体的 A549细胞。然后使细胞在补加10％胎牛血清(炭处理的)+青霉素/ 链霉素与0.5mg/ml geneticin的RPMI中生长。在测定前一天将细胞以 大约40000细胞/板的密度铺板。在测定当天，将培养基吸去，向每孔 加入20μl测定缓冲液(无酚红的RPMI+10％FCS(炭处理的)+青霉素 /链霉素)。此时向每孔中加入20μl测定缓冲液(对照实验)或本发明 的化合物(“待检测化合物”)(以各种浓度溶于DMSO)或dexamethasome (以100nM溶于DMSO，阳性对照)。然后将板在37℃预孵育15分钟， 用10ng/ml PMA刺激细胞。向每孔中加入40μl荧光素酶底物试剂， 然后在37℃预孵育7小时。通过光度计分析测量与用缓冲液或地塞米 松处理的对照实验相比的活性。活性定义为与单独使用10ng/ml PMA 的缓冲液对照相比，报道系统的％抑制。对照，即浓度≤10μM的地塞 米松，一般使活性抑制65％。证明在≤10μM的浓度下抑制了50％或更 多PMA诱导的待检测化合物被认为是有活性的。 前列腺湿重测定AR拮抗剂测定：
在未成熟雄性大鼠模型中研究了本发明的化合物作为AR拮抗剂 的活性，采用测定给定化合物的抗雄激素活性的标准的、公认的检测， 如以下文献中的描述，L. G.Hershberger等，Proc.Soc.Expt.Biol Med.， 83，175(1953)；P.C.Walsh和R.F.Gittes，″Inhibition of extratesticular stimuli to prostate growth in the castrated rat by antiandrogens″， Endocrinology，86，624(1970)；以及B.J.Furr等，″ICI 176，334：A novel nonsteroid，peripherally selective antiandrogen″，J.Endocrinol.，113，R7-9 (1987)，其公开内容在此引入作为参考。
该测定的基础是，男性副性器官，如前列腺和精囊腺，在生殖功 能中起重要作用。这些腺体被持续存在的血清睾丸酮(T)刺激，从而 生长并维持其大小和分泌功能，睾丸酮是由睾丸中的莱迪希细胞产生 的主要血清雄激素(＞95％)，该细胞处于垂体促黄体生成素(LH)和卵泡 刺激激素(FSH)的控制下。睾丸酮在前列腺中被5α还原酶转化为更有 活性的形式，二氢睾丸酮(DHT)。肾上腺雄激素也在大鼠前列腺中占总 DHT的约20％，而在65岁的人中为40％。F.Labrie等，Clin.Invest.Med.， 16，475-492(1993)。然而，这不是主要途径，因为动物和人的睾丸切除 都导致几乎完全的前列腺和精囊腺退化，尽管没有进行肾上腺切除。 因此，在正常条件下，肾上腺不支持前列腺组织的显著生长。M.C.Luke 和D.S.Coffey，″The Physiology of Reproduction″，E.Knobil和J.D.Neill 编辑，1，1435-1487(1994)。由于雄性性器官是对雄激素活性的调节最有 反应性的组织，该模型被用于判断在未成熟睾丸切除大鼠副性器官中 的雄激素依赖性生长。
对雄性未成熟大鼠(19-20日龄，Sprague-Dawley，Harlan Sprague -Dawely)在甲氟乙烷麻醉下行睾丸切除。术后5天对这些睾丸切除大 鼠(60-70g，23-25日龄)进行定量给药3天。皮下(s.c.)给予动物溶于花生 油载体中的1mg/kg丙酸睾丸酮(TP)，通过灌胃(p.o.)给予溶解/悬浮于 80％PEG 400和20％Tween 80(PEGTW)中的待检测的抗雄激素化合物 (本发明的化合物)。给药剂量(v/w)为0.5ml载体/100g体重。实验 分组如下：
1.对照载体
2.丙酸睾丸酮(TP)(3mg/大鼠/日，皮下)
3.TP加Casodex(在PEGTW中p.o.给药，QD)，Casodex为一种公 认的抗雄激素药物，作为参照化合物。
4.为证明拮抗剂活性，以一定剂量范围给予本发明的化合物(“待 检测化合物”)(在PEGTW中p.o.给药，QD)，同时给予TP(s.c.，同第 二组)。
5.为证明激动剂活性，以一定剂量范围单独给予本发明的化合物 (“待检测化合物”)(在PEGTW中p.o.给药，QD)。
在3日的治疗结束后，处死动物，称量腹侧前列腺的重量。为比 较不同实验的数据，首先将性器官重量标准化为mg/100g体重，将TP 诱导的器官重量的增加作为最大增加(100％)。用ANOVA和随后的单 尾斯氏T检验和Fischer′s精确检验进行统计分析。
性器官重量的增加和减少反应了细胞数量(DNA含量)和细胞质 量(蛋白含量)的改变，这取决于血清雄激素浓度。见Y.Okuda等，J.Urol.， 145，188-191(1991)，在此引入其公开内容作为参考。因此，对器官湿 重的测量足够表示雄激素和雄激素拮抗剂的生物活性。在未成熟睾丸 切除大鼠中，外源性雄激素的替代以剂量依赖性方式增加了精囊腺(SV) 和腹侧前列腺(VP)。
当给予3mg/大鼠/日的睾丸酮(T)或1mg/大鼠/日的丙酸睾丸酮(TP) 共3日后，器官重量的最大增加为4-5倍。T和TP的EC50分别为约 1mg和0.03mg。VP和SV重量的增加也与血清T和DHT浓度的增加 相关。尽管T的给药在皮下注射后2小时表现出T和DHT血清浓度比 给予TP时的浓度高5倍，这些高水平降低非常迅速。相反，TP处理 动物的T和DHT的血清浓度在24小时中基本不变，因此，TP表现出 的效力比游离T高约10-30倍。
在该未成熟睾丸切除大鼠模型中，与0.1mg TP(ED80)一起皮下给 予了已知的AR拮抗剂(Casodex)，以剂量依赖性方式抑制睾丸酮介导 的VP和SV重量的增加。当口服或皮下给药时拮抗剂的作用相似。通 过抑制睾丸酮介导的VP和SV重量的增加，本发明的化合物也表现出 AR拮抗剂活性。 肛提肌和前列腺湿重测定AR激动剂测定
在未成熟雄性大鼠模型中研究了本发明的化合物作为AR激动剂 的活性，采用公认的给定化合物在肌肉中的合成代谢作用和在性器官 中的维持作用的检测，如以下文献中的描述，L. G.Hershberger等，Proc. Soc.Expt.Biol Med.，83，175(1953)；B.L.Beyler等，″Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals″，J.Amer. Med.Women′s Ass.，23，708(1968)；H.Fukuda等，″Investigations of the levator ani muscle as an anabolic steroid assay″，Nago Dai.Yak.Ken.Nem. 14，84(1966)，其公开内容在此引入作为参考。
该测定的基础是已经确定的雄激素制剂在动物和人的肌肉组织和 副性器官的维持和生长中的作用。已经鉴定到雄激素，如睾丸酮(T)维 持肌肉量的能力。在睾丸切除术后用外源性T治疗动物或人导致肌肉 萎缩的逆转。已经充分鉴定了T对大鼠肛提肌萎缩的作用。M.Masuoka 等，″Constant cell population in normal，testosterone deprived and testosterone stimulated levator ani muscles″Am.J.Anat.119，263(1966)；Z. Gori等，″Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats.I. Quantitative data″Boll.-Soc.Ital.Biol.Sper.42，1596(1966)；Z.Gori等， ″Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats.II. Electron microscopic observations″Boll.-Soc.Ital.Biol.Sper.42，1600 (1966)；A.Boris等，Steroids 15，61(1970)。如前面所述，已经充分描述 过雄激素对雄性副性器官如前列腺和精囊腺的维持作用。睾丸切除导 致前列腺和精囊腺的迅速退化和萎缩。该作用可以通过添加外源性雄 激素而逆转。由于肛提肌和雄性性器官是对雄激素制剂最有反应性的 组织，采用该模型判断未成熟睾丸切除大鼠雄激素依赖性肛提肌和副 性器官萎缩的逆转。从销售商(Taconic)处得到性成熟的睾丸切除大鼠 (200-250g，6-8周龄，Sprague-Dawley，Harlan)。对大鼠分组，用以下之 一每日进行处理，进行7-14天：
1.对照载体
2.丙酸睾丸酮(TP)(3mg/大鼠/日，皮下)
3.TP加Casodex(在PEGTW中p.o.给药，QD)，Casodex为一种公 认的抗雄激素药物，作为参照化合物。
4.为证明拮抗剂活性，以一定剂量范围给予本发明的化合物(“待 检测化合物”)(在PEGTW中p.o.给药，QD)，同时给予TP(s.c.，同第 二组)。
5.为证明激动剂活性，以一定剂量范围单独给予本发明的化合物 (“待检测化合物”)(在PEGTW中p.o.给药，QD)。
在7-14日的治疗结束后，用二氧化碳处死动物，称量肛提肌、精 囊腺和腹侧前列腺的重量。为比较不同实验的数据，首先将肛提肌和 性器官重量标准化为mg/100g体重，将TP诱导的器官重量的增加作为 最大增加(100％)。用Super-anova(单因素)进行统计分析。
性器官重量的增加和减少反应了细胞数量(DNA含量)和细胞质 量(蛋白含量)的改变，这取决于血清雄激素浓度。见Y.Okuda等，J.Urol.， 145，188-191(1991)，在此引入其公开内容作为参考。因此，对器官湿 重的测量足够表示雄激素和雄激素拮抗剂的生物活性。在未成熟睾丸 切除大鼠中，外源性雄激素的替代以剂量依赖性方式增加了肛提肌、 精囊腺(SV)和前列腺。
当给予3mg/大鼠/日的睾丸酮(T)或1mg/大鼠/日的丙酸睾丸酮(TP) 共3日后，器官重量的最大增加为4-5倍。T和TP的EC50分别为约 1mg和0.03mg。VP和SV重量的增加也与血清T和DHT浓度的增加 相关。尽管T的给药在皮下注射后2小时表现出T和DHT血清浓度比 给予TP时的浓度高5倍，这些高水平降低非常迅速。相反，TP处理 动物的T和DHT的血清浓度在24小时中基本不变，因此，TP表现出 的效力比游离T高约10-30倍。
MDA-PCa-2b人前列腺异种移植测定
体内抗肿瘤测定：在Balb/c nu/nu裸鼠中维持MDA-PCa-2b人前 列腺肿瘤。采用从供体小鼠获得的肿瘤片段在成熟雄性裸鼠(4-6周龄) 中增殖作为皮下移植物的肿瘤。每5-6周发生一次肿瘤细胞传代。
为进行抗肿瘤效力试验，在实验开始时将检测有意义反应所需要 数量的动物集中起来，每只动物用13号套管针皮下移植肿瘤片段(约 50mg)。使肿瘤生长至约100-200mg(排除此范围以外的肿瘤)，将 动物平均分配到各治疗和对照组。每只动物的治疗基于个体的体重。 每日检查受治疗动物的治疗相关毒性/死亡率。在开始治疗前对每组动 物称重(Wt1)，然后在最后一个治疗剂量后称重(Wt2)。体重的差异 (Wt2-Wt1)提供了治疗相关毒性的度量。
每周用卡尺测量肿瘤两次，以判断肿瘤反应，直到肿瘤达到预定 的“目标”大小，即0.5gm。肿瘤重量(mg)根据以下公式估计：肿瘤 重量＝(长度×宽度2)÷2。
终点肿瘤反应以肿瘤生长抑制(％T/C)的形式表达，定义为受治疗 肿瘤(T)平均肿瘤重量与对照组(C)肿瘤重量的比值。
为估计肿瘤细胞杀灭，首先用以下公式计算肿瘤体积加倍时间：
TVDT＝对照肿瘤达到目标大小的平均时间(日)-对照肿瘤达到 目标大小的一半的平均时间(日)
并且，Log细胞杀灭＝(T-C)÷(3.32×TVDT)
数据的统计评估采用Gehan′s普通Wilcoxon检验。 Dunning前列腺肿瘤：
Dunning R3327H前列腺肿瘤是前列腺的一种自发来源的，分化良 好的雄激素反应性腺癌。(Smolev JK，Heston WD，Scott WW，和Coffey DS，Cancer Treat Rep.61，273-287(1977))。R3327H亚系的生长是通过 其在未手术雄性大鼠中的高度雄激素依赖性和可繁殖的生长而选择 的。因此，此肿瘤的模型和其它亚系已经广泛用于评估抗雄激素药物 如氟他胺和比卡鲁胺/Casodex的体内抗肿瘤活性(Maucher A.，和von Angerer，J.Cancer Res.Clin.Oncol.，119，669-674(1993)，Furr B.J.A. Euro.URL.18(suppl.3)，2-9(1990)，Shain S.A.和Huot RI.J.Steriod Biochem.31，711-718(1988))。
在研究开始时，将Dunning肿瘤片(约4×4mm)皮下移植到 成熟雄性Copenhagen大鼠(6-7周龄，Harlan-Sprague Dawley，Indianapolis， MD)的侧腹部。移植约6周后，将具有可测量大小(约80-120mm2)的肿 瘤的动物随机分入治疗组(8-10只大鼠/组)，开始治疗。对一组大鼠进 行睾丸切除，作为肿瘤生长的阴性对照。每日用本发明的化合物、标 准抗雄激素药如bacilutamide或载体(对照)治疗动物，平均进行10 -14周。将待检测化合物溶于载体(2.5ml/kg体重)，该载体为1％的羧 甲基纤维素中的10％聚乙二醇和0.05％Tween-80，PEG/CMC，(Sigma，St Louis，MO)。典型的治疗实验将包括三组三个逐渐升高的剂量的每种标 准或待检测化合物(300-3mg/kg)。
载体(对照)组的肿瘤大小达到了1500-2500mm3，而睾丸切除 动物组一般在14周观察中表现出肿瘤静止。治疗14周后，口服20mg/kg 的比卡鲁胺或flutamide进行治疗的动物的肿瘤体积与对照组相比，预 计减少40％。每周通过游标卡尺(Froboz，Switzerland)测量肿瘤大小， 垂直测量长度和宽度。用以下公式测量用mm3表示的肿瘤体积：长× 宽×高＝体积。治疗组和对照组的统计学差异用ANOVA和其后的单 尾非参数斯氏t检验评价。 成熟大鼠前列腺重量测定：
在未成熟雄性大鼠模型中研究本发明化合物的活性，该活性为前 面所述肛提肌和前列腺湿重测定的一个变量。上述体内测定被认为是 判断给定化合物在肌肉中合成代谢和在性器官中的维持作用的测定方 法，如以下描述，L.G.Hershberger等.，83 Proc.Soc.Expt.Biol.Med.，175 (1953)；B.L.Beyler等，″Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals″，23 J.Amer.Med.Women′s Ass.，708(1968)； H.Fukuda等，″Investigations of the levator ani muscle as an anabolic steroid assay″，14 Nago Dai.Yak.Ken.Nem.84(1966)，其公开内容在此 引入作为参考。该测定的基础是已经确定的雄激素制剂在动物和人的 肌肉组织和副性器官的维持和生长中的作用。
男性副性器官，如前列腺和精囊腺，在生殖功能中起重要作用。 这些腺体被连续存在的血清睾丸酮(T)刺激，从而生长并维持其大小 和分泌功能，睾丸酮是由睾丸中的莱迪希细胞产生的主要血清雄激素(＞ 95％)，该细胞处于垂体促黄体生成素(LH)和卵泡刺激激素(FSH)的控制 下。睾丸酮在前列腺中被5α还原酶转化为更有活性的形式，二氢睾丸 酮(DHT)。肾上腺雄激素也在大鼠前列腺中占总DHT的约20％，而在 65岁的人中为40％。F.Labrie等，16，Clin.Invest.Med.，475-492(1993)。 然而，这不是主要途径，因为动物和人的睾丸切除都导致几乎完全的 前列腺和精囊腺退化，尽管没有进行肾上腺切除。因此，在正常条件 下，肾上腺不支持前列腺组织的显著生长。M.C.Luke和D.S. Coffey，″The Physiology of Reproduction″，E.Knobil和J.D.Neill编辑， 1，1435-1487(1994)。由于雄性性器官是对雄激素活性的调节最有反应 性的组织，该模型被用于判断在未成熟睾丸切除大鼠副性器官中的雄 激素依赖性生长。
除对前列腺、精囊腺和肌肉等组织的促有丝分裂活性，睾丸酮也 作为其自身生物合成的负调节剂。睾丸中莱迪希细胞的睾丸酮产量由 垂体释放的循环LH的水平控制。LH水平自身由下丘脑产生的LHRH 的水平控制。血液中的睾丸酮水平抑制LHRH的分泌，并随后降低LH 的水平并最终降低循环睾丸酮的水平。通过测量受本发明化合物(“待 检测化合物”)影响的血LH水平，可以判断本发明化合物在该内分 泌循环的下丘脑轴的激动剂或拮抗剂活性。
通过灌胃(p.o.)给予配对组的Harlan Sprague-Dawely大鼠(40-42 日龄，180-220g)溶解/悬浮于80％PEG 400和20％Tween 80(PEGTW) 中的待检测化合物(本发明的化合物)14天。给药剂量(v/w)为0.5ml 载体/100g体重。实验分组如下：
1.未手术，载体(p.o.，PEGTW，QD)
2.对照载体(p.o.，PEGTW，QD)
3.比卡鲁胺(一种公认的抗雄激素药物Casodex作为参照化合物) 或本发明的一种化合物，p.o.，PEGTW，QD(以一定范围的剂量)。 在14日的治疗结束后，处死动物，手术取出肛提肌、精囊腺和腹侧前 列腺并称重。为比较不同实验的数据，首先将肛提肌和性器官重量标 准化为mg/100g体重，并表达为未手术组的对应器官的值的百分比。
用Biotrak[125 I]试剂盒(Amersham Pharmacia Biotek)，按照生产 商的说明测定大鼠促黄体生成素(rLH)。该测定基于血清中的LH与[125I] 对rLHAmerlex-M珠/抗体悬浮液结合的竞争。与血清孵育并洗涤后剩 余的放射活性外推成标准曲线，以获得以ng/ml为单位的标准曲线。
性器官和肛提肌重量的增加和减少反应了细胞数量(DNA含量) 和细胞质量(蛋白含量)的改变，这取决于血清雄激素浓度。见Y.Okuda 等，J.Urol.，145，188-191(1991)，在此引入其公开内容作为参考。因此， 对器官湿重的测量足够表示雄激素和雄激素拮抗剂的生物活性。在成 熟大鼠测定中，活性激动剂将无作用或将增加一种或多种雄激素反应 器官(肛提肌、前列腺、精囊腺)的重量，并将对LH分泌无作用或 具有抑制作用。具有拮抗剂活性的化合物将减少一种或多种雄激素反 应器官(肛提肌、前列腺、精囊腺)的重量，并且将对LH分泌无作 用或具有减少的抑制作用。 CWR22人前列腺异种抑制测定：
体内抗肿瘤测定：在Balb/c nu/nu裸鼠中维持CWR22人前列腺肿 瘤。采用从供体小鼠获得的肿瘤片段在成熟雄性裸鼠(4-6周龄)中增殖 作为皮下移植物的肿瘤。每5-6周发生一次肿瘤细胞传代。
为进行抗肿瘤效力试验，在实验开始时将检测有意义反应所需要 数量的动物集中起来，每只动物用13号套管针皮下移植肿瘤片段(约 50mg)。使肿瘤生长至约100-200mg(排除此范围以外的肿瘤)，将 动物平均分配到各治疗和对照组。每只动物的治疗基于个体的体重。 每日检查受治疗动物的治疗相关毒性/死亡率。在开始治疗前对每组动 物称重(Wt1)，然后在最后一个治疗剂量后称重(Wt2)。体重的差异 (Wt2-Wt1)提供了治疗相关毒性的度量。
每周用卡尺测量肿瘤两次，以判断肿瘤反应，直到肿瘤达到预定 的“目标”大小，即0.5gm。肿瘤重量(mg)根据以下公式估计：肿瘤 重量＝(长度×宽度2)÷2。
终点肿瘤反应以肿瘤生长抑制(％T/C)的形式表达，定义为受治疗 肿瘤(T)平均肿瘤重量与对照组(C)肿瘤重量的比值。
为估计肿瘤细胞杀灭，首先用以下公式计算肿瘤体积加倍时间： TVDT＝对照肿瘤达到目标大小的平均时间(日)-对照肿瘤达到目标 大小的一半的平均时间(日)
并且，Log细胞杀灭＝(T-C)÷(3.32×TVDT)
数据的统计评估采用Gehan′s普通Wilcoxon检验。
以下实施例说明本发明的具体实施方式，但无意限制权利要求的 范围。
缩写词
本文使用下列缩写词：
DBU＝1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
4-DMAP＝4-二甲氨基吡啶
ee＝对映体过量
DMF＝二甲基甲酰胺
Et＝乙基
EtOAc＝乙酸乙酯
LDA＝二异丙基氨基锂
Hünig′s碱＝N，N-二异丙基乙胺
Me＝甲基
RT＝停留时间
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
TLC＝薄层色谱
TMS＝三甲基甲硅烷基
pTSA＝对甲苯磺酸
Δ＝加热
t-Bu＝叔丁基
Ph＝苯基
PhCH3＝甲苯
Pd/C＝披钯活性炭
TsCl＝甲苯磺酰氯
TBSOTf＝三氟甲磺酸叔了基二甲基甲硅烷基酯
TBS＝叔丁基二甲基硅烷
MeI＝碘甲烷
(BOC)2O＝二叔丁基二碳酸酯
TEA＝三乙胺
n-BuLi＝正丁基锂
rt＝室温
LC＝液相色谱
EtOH＝乙醇
DCE＝二氯乙烷
DMSO＝二甲亚砜
Ra-Ni＝阮内镍
MS＝分子筛
MS(ES)＝电子喷射(spray)质谱
h＝小时
Ac＝乙酰基
DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯
DPPA＝二苯基磷酰叠氮
实施例1
(5α，8α，8aα)-8，8a-二氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-5，8 -亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮(1B)
A.内/外-2-[[[3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]-2-氮杂双环 [2.2.1]庚-5-烯-3-羧酸乙酯(1A)
2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-羧酸乙酯(0.253g，0.15mmol) 溶解在甲苯中，加入异氰酸3-(三氟甲基苯基)酯(0.311g， 0.166mmol)。在70℃加热反应3小时，然后冷却至-20℃，保持12 小时。冷却后沉淀出化合物 1A，过滤，用冷甲苯洗涤。真空干燥后得 到0.097g  1A，无需进一步精制，直接用于下一步骤。
B.(5α，8α，8aα)-8，8a-二氢-2-[3-(三氟甲基)苯基] -5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 1B)
中间体化合物 1A(0.150mg，mmol)溶解在甲苯(5ml)中，加入 DBU(0.1ml)。在80℃加热反应1.5小时，然后在真空下脱除甲苯。 所得残留物用硅胶快速色谱进行精制，用10％-30％丙酮/-己烷洗 脱，得到0.76g白色固体的化合物 1B。HPLC：92％ 2.93分钟(停留 时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4 分钟，含0.1％TFA，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 309.09 [M+H]+。
实施例2
(5α，8α，8aα)-8，8a-二氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-5，8 -亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 2C)(制备1B 的替代步骤)
A.内/外-2-(氯羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3- 羧酸乙酯，( 2A)
在25℃往NaHCO3(2.5g，30mmol)在CH2Cl2中的悬浮液中加入 光气(20％溶液，5.9g，12mmol)。加入2-氮杂双环[2.2.1]庚-5- 烯-3-羧酸乙酯(0.5g，3.0mmol)，反应在25℃搅拌2小时。然后滤 除碳酸氢盐，用CH2Cl2洗涤。产物用硅胶快速色谱纯化，用1％-2％ MeOH/CH2CCl2洗脱，得到0.367g黄色油状的中间体化合物 2A。
B.内/外-2-[[[3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]-2-氮杂双环 [2.2.1]庚-5-烯-3-羧酸乙酯( 2B)
中间体化合物 2A(0.100g，0.44mmol)和3-三氟甲基苯胺(0.075ml， 0.44mmol)溶解在5.0ml甲苯中。然后加入催化剂4-DMAP和二异丙 基胺(0.3ml，2.1mmol)。在50℃加热反应14小时。脱除挥发性有机 物，所得残留物，用硅胶快速色谱进行精制，用0.5％-1.0％甲醇/CH2Cl2洗脱，得到0.39g浅黄色油状中间体化合物 2B。
C.(5α，8α，8aα)-8，8a-二氢-2-[3-(三氟甲基)苯基] -5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 2C)
该标题化合物按实施例1步骤B所述方法制备。
实施例3
(5α，8α，8aα)-8，8a-二氢-2-[1-萘基]-5，8-亚甲基咪 唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 3B)
A.内/外-2-〔(1-萘胺基)羰基〕-2-氮杂双环[2.2.1]庚 -5-烯-3-羧酸乙酯( 3A)
在25℃将1-萘胺(0.20g，1.39mmol)加入到三光气(0.136g， 0.46mmol)的二氯乙烷溶液中。该溶液在70℃加热30分钟，然后冷 却至25℃。加入三乙胺(0.58ml，4.17mmol)，将反应加热到70℃。2 小时后将反应冷却到25℃，加入2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3- 羧酸乙酯(0.209g，1.25mmol)。反应混合物在25℃搅拌14小时。然 后在真空下脱除挥发性有机物，所得残留物用硅胶快速色谱进行精制， 用(4∶1-1∶1)乙酸乙酯/己烷洗脱，得到0.190g白色固体中间体化 合物 3A。
B.(5α，8α，8aα)-8，8a-二氢-2-[1-萘基]-5，8-亚甲基 咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 3B)
中间体化合物 3A(0.150g)溶解在甲苯(5ml)，加入DBU(0.1ml)。 反应在80℃加热1.5小时，然后在真空下脱除甲苯。所得残留物用硅 胶快速色谱进行精制，用10％-30％丙酮/己烷洗脱，得到白色固体化 合物 3B 0.76g。HPLC：95％，3.067分钟(停留时间)(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/ 分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 291.2[M+H]+。
实施例4
(5α，8α，8aα)-2，3，8，8a-四氢-2-[3-(三氟甲基)苯基] -3-硫代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-酮( 4B)
A.内/外-2-[[[3-(三氟甲基)苯基]氨基]硫代甲基]-2-氮杂 双环[2.2.1]庚-5-烯-3-羧酸乙酯( 4A)
往2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-羧酸乙酯(0.253g， 1.5mmol)的甲苯(7.0ml)溶液中加入异硫氰酸3-(三氟甲基苯基) 酯(0.339g，1.66mmol)。在25℃反应14小时后，反应混合物用EtOAc 稀释，用1N NaOH(2×10ml)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，粗 产物用硅胶色谱进行精制，用0-20％丙酮/己烷进行梯度洗脱，得到 中间体化合物 4B 188mg(34％)。
B.(5α，8α，8aα)-2，3，8，8a-四氢-2-[3-(三氟甲基) 苯基]-3-硫代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-酮 ( 4B)
中间体化合物 4A(180mg，0.5mmol)溶解在无水甲苯(5ml)和 DBU(0.042ml)中。在80℃加热反应1.5小时，然后冷却至25℃。真 空脱除挥发性物质，所得残留物用硅胶快速色谱进行精制，用0-20％ 丙酮/己烷进行梯度洗脱，得到黄色油状纯化合物 4B(67mg)。HPLC： 66.9％，2.980分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10 -90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.1％TFA，4ml/分钟，在220nm处 监控)，MS(ES)：m/z 343.07[M+H]+。
实施例5
(5α，8α，8aα)-8，8a-二氢-8a-甲基-2-[3-(三氟甲基) 苯基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 5)
中间体化合物 1B(0.020g，0.06mmol，得自实施例1)溶解在无水 THF(2.0ml)中，冷却至-78℃，然后徐徐加入LDA(2.0M THF溶 液，0.195ml)。1小时后加入MeI(0.008ml，0.12mmol)，反应混合 物慢慢温热至25℃。然后用水猝灭反应，用CH2Cl2(3×10ml)萃取。 合并的有机层用无水硫酸钠干燥，经真空浓缩后得到白色固体纯化合 物 5(0.008g)。HPLC：100％，3.620分钟(停留时间)(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/ 分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 323.0[M+H]+。
实施例6
(5α，8α，8aα)-2，3，8，8a-四氢-8a-甲基-3-硫代-2-[3 -(三氟甲基)苯基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1(5H)-酮( 6)
在-78℃往化合物 4B(0.056g，0.173mmol，实施例4)的THF溶 液中加入二异丙基胺锂(2.0M THF溶液，0.173ml)。2小时后加入 MeI(0.022ml，0.35mmol)，在2小时内将反应混合物温热至25℃。 然后加水，反应用CH2Cl2(3×30ml)萃取。合并的有机层用无水硫酸 钠干燥。粗产物用硅胶快速色谱进行精制，用10％丙酮/己烷洗脱，得 到白色固体化合物 6 0.034g。HPLC：90％，4.023分钟(停留时间) (YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟， 含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 339.0[M+H]+。
实施例7
(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-2-(3，5-二氯苯基)四 氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮(分别为 7Bi 和 7Bii)
A.内/外-2-[[[3，5-二氯苯基]氨基]羰基]-2-氮杂双环[2.2.1] 庚-5-烯-3-羧酸乙酯( 7A)
往异氰酸3，5-二氯苯基酯(3.01g，16mmol)的甲苯(100ml)溶 液中加入2-氮杂双环[2.2.1]庚-3-羧酸乙酯(2.70g，16.0mmol)的 甲苯溶液，反应混合物在25℃搅拌14小时。14小时后生成白色固体 物，加入乙醚使更多的产物沉淀。将反应混合物过滤，用冷乙醚洗涤。 过滤分离出2.81g白色固体的粗脲中间体，干燥后直接用于下一步骤。
B.(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-2-(3，5-二氯苯基) 四氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 7Bi和 7Bii)
化合物 7A(0.025g，0.070mmol)加入到新活化的4 MS(0.050g) 在甲苯(2.0ml)中的悬浮液中。加入DBU(0.42ml，2.96mmol)，接 着加热至80℃，保持2小时。然后，将反应混合物冷却至25℃，通过 硅藻土过滤，用二氯甲烷冲洗。有机物用1N HCl洗涤，然后用无水 硫酸钠干燥，粗产物的NMR分析表明混合物中化合物 7Bi与化合物 7Bii 的比例为2∶1.5。该非对映体是通过SO2上制备性薄层色谱(TLC)， 用二氯甲烷洗脱而分离的。得到白色固体化合物 17Bi 0.006g和白色 固体化合物 17Bii 0.008g。 17Bi：HPLC：100％，3.383分钟(停留时 间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分 钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 312.1 [M+H]+。 17Bii：HPLC：99％，3.497分钟(停留时间)(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/ 分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 311.2[M+H]+。
实施例8
四氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-5，8-亚乙基咪唑并[1，5-a]吡啶 -1，3(2H，5H)-二酮( 8B)
A.2-[[[3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]-2-氮杂双环[2.2.2] 辛烷-3-羧酸乙酯( 8A)
往2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-羧酸乙酯(50mg，0.27mmol)的 无水甲苯(10ml)溶液中加入异氰酸3-(三氟甲基苯基)酯(55.5mg， 0.3mmol)。反应混合物在25℃搅拌过夜，然后进行真空浓缩，用硅 胶制备TLC进行精制，用30％丙酮/己烷洗脱，得到37mg(37％)中 间体化合物 8A。
B.四氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-5，8-亚乙基咪唑并[1，5-a] 吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 8B)
往中间体化合物 8A(37mg，0.1mmol)的无水甲苯(10ml)溶液 中加入DBU(20μl，0.11mmol)。该溶液在80℃加热2小时。通过旋 转蒸发脱除溶剂，粗产物用SO2制备性TLC进行精制，用30％丙酮/ 己烷洗脱，得到16mg(49％)白色固体化合物 8B。HPLC：99％，3.433 分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水 溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)： m/z 325.2[M+H]+。
实施例9
(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-四氢-2-[3-(三氟甲 基)苯基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮(分 别为 9Fi和 9Fii)，固体载体合成路线
A.改性Merrifield树脂( 9A)的生成
在0℃往NaH(60％矿物油悬浮液，0.353g，8.84mmol)在DMF 的悬浮液中徐徐加入3-(4-羟基苯基)-1-丙醇(1.3g，8.55mmol)， 然后温热至25℃，搅拌1小时。Merrifield树脂(5g，0.57mmol/g)依 次用二氯甲烷和DMF洗涤，然后悬浮于20ml DMF中。用5分钟时 间往该树脂中加入预形成的醇盐。然后将该反应混合物在80℃加热13 小时。冷却至25℃后，将反应混合物过滤，依次用DMF(3×50ml)、 己烷(2×50ml)、二氯甲烷(3×50ml)、甲醇(2×50ml)和二氯甲 烷(3×50ml)冲洗，经真空干燥后得到白色树脂(4.6g)。固相质子 NMR分析表明加入了3-(4-羟基苯基)-1-丙醇连接，从而生成 树脂 9A。
B.内/外-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，3-二羧酸2-(1，1-二 甲基乙基)酯( 9B)
2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸乙酯(10.0g，59.0mmol)溶解 在二噁烷(120ml)、水(60ml)和1N NaOH(66ml)的混合物中。 加入(BOC)2O(14.4g，218.25mmol)，然后将混合物在室温下搅拌14 小时。真空脱除挥发性有机物，然后再加入水(200ml)，混合物用CH2Cl2萃取(2×200ml)。然后加入5％KHSO4将水层调节至pH＝4-5。混 合物用二氯甲烷萃取(3×100ml)。将合并的有机层浓缩，得到白色 固体的粗中间体化合物 9B(8.5g)。该物质无需精制，直接使用。
C.内/外-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，3-二羧酸2-(1，1-二 甲基乙基)3-(改性Merrifield树脂)酯( 9C)
往树脂 9A中加入DMF(15ml)，随后振动15分钟。然后加入化 合物 9B(0.275g，1.14mmol)的DMF溶液，接着加入吡啶(0.152ml， 1.88mmol)。加入2，6-二氯苯甲酰氯(0.163ml，1.14mmol)，将反应 混合物振荡1天。然后再加入等量的酸、吡啶和氯化物，接着再振荡2 天。然后将反应混合物过滤，依次用DMF(3×20ml)、甲醇(3×20ml) 和二氯甲烷(6×20ml)冲洗，经真空干燥后得到白色粉末状树脂 9C。
D.内/外-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸改性Merrifield树 脂酯( 9D)
树脂 9C(1g)悬浮于50％TFA/DMF(30ml)中，然后在60℃ 进行超声波处理18小时。将反应混合物过滤，用DMF(5×20ml)、 甲醇(2×20ml)和二氯甲烷(2×20ml)洗涤，经真空干燥后得到白 色粉末树脂 9D 0.7g。
E.内/外-2-[[[3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]-2-氮杂双环 [2.2.1]庚烷-3-羧酸改性Merrfield树脂酯( 9E)
树脂 9D(0.50g)悬浮于二氯甲烷(10ml)中，加入异氰酸3-(三 氟甲基苯基)酯(0.5ml，1.25mmol)，然后将反应混合物振荡24小时。 将树脂过滤，用二氯甲烷(8×20ml)洗涤，经真空干燥后得到黄色固 体的树脂 9E。
F.(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-四氢-2-[3-(三氟 甲基)苯基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮 ( 9Fi和 9Fii)
往树脂 9E中加入无水甲苯(10ml)和0.25g活性4 MS。然后 加入DBU(0.25ml)，在80℃加热反应1.5小时。将反应混合物过滤， 用二氯甲烷冲洗，有机物再用1N HCl洗涤1次，然后用无水硫酸钠 干燥。最后处理得到24mg(26％收率，按加入的Merrifield树脂计)4∶ 1的化合物 9Fi和 9Fii的混合物。通过制备性HPLC(用0％-100％甲 醇水溶液洗脱20分钟，YMC  ODSA反相柱，20×100mm)达到化合 物 9Fi和 9Fii的分离，得到0.005白色固体化合物 9Fi和0.019g白色 固体化合物 9Fii。其表征参见实施例11和12。
实施例10
(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-四氢-2-(2-萘基)- 5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮(分别为 10Ci 和 10Cii)
A.内/外-2-(氯羰基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸 改性Merrifield树脂酯( 10A)
树脂 9D(0.50g，按实施例9所述合成的)悬浮于二氯甲烷(10ml) 中，加入光气(20％甲苯溶液，4.5g)和NaHCO3(1.5g)。该树脂在 22℃振荡22小时，然后过滤，用二氯甲烷(5×50ml)冲洗。经真空 干燥后得到黄色树脂 10A。
B.内/外-2-〔(2-萘氨基)羰基〕-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷 -3-羧酸改性Merrifield树脂酯( 10B)
树脂 10A(0.70g)悬浮于二氯甲烷(15ml)中，加入2-萘胺(0.58g， 4.0mmol)。加入Hünig′s碱(0.88ml)和催化剂4-DMAP，然后在将 混合物在70℃振荡20小时。冷却至22℃后，将树脂过滤，用二氯甲 烷(8×20ml)洗涤，经真空干燥后得到黄色固体的树脂 10B。
C.(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-四氢-2-(2-萘基) -5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 10Ci和 10Cii)
往树脂 10B(0.70g)中加入无水甲苯(10ml)和0.25g活性4 MS。 然后加入DBU(0.65ml，4.0mmol)，在80℃加热反应2.0小时。将反 应混合物过滤，用二氯甲烷冲洗，有机物用1N HCl(30ml)洗涤2次， 然后用无水硫酸钠干燥。最后处理得到13mg(收率11％)1.5∶1的化 合物 10Ci和 10Cii的混合物。通过硅胶快速色谱达到该混合物的分离， 用1％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到6mg白色固体化合物 10Ci和4mg白 色固体化合物 10Cii。 10Ci：HPLC：99％，2.94分钟(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，含0.1％TFA，4ml/分 钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 293.0[M+H]+。 10Cii：HPLC： 99％，3.09分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，含0.1％TFA，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 293.0[M+H]+。
实施例11
(5α，8α，8aβ)-四氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-5，8-亚甲 基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 11)
往新活化的4 MS(1.5g)在甲苯(15ml)中的悬浮液中加入2 -氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸乙酯(0.50g，2.96mmol)的甲苯溶液。 15分钟后加入异氰酸3-(三氟甲基)苯基酯(0.41ml.2.96mmol)， 反应混合物在25℃搅拌14小时。然后加入DBU(0.42ml，2.96mmol)， 接着加热至80℃，保持2小时。将混合物冷却至25℃，通过硅藻土过 滤，用二氯甲烷冲洗。将有机物干燥，让其在其余的纯DBU中在35 ℃静置5小时。粗混合物用硅胶色谱进行精制，得到735mg(收率80.1 ％)白色固体化合物 11。HPLC：98％，3.117分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％ 磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 311.1[M+H]+。
实施例12
(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-四氢-2-[3-(三氟甲 基)苯基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮(分 别为 12i和 12ii)
在-78℃用n-BuLi(1.6M己烷溶液，0.304ml)处理二异丙基胺 (0.091ml，0.650mmol)制备LDA。20分钟后，往LDA在THF中的 混合物中慢慢加入化合物 11(0.100g，0.325mmol)。让反应混合物慢 慢温热至-20℃，并保持15分钟。然后将反应混合物冷却至-78℃， 加入饱和NH4Cl使反应终止。溶液用二氯甲烷萃取(3×30ml)，有机 物用无水硫酸钠干燥。粗产物用SO2上制备性TLC进行精制，用二氯 甲烷洗脱，得到1∶3的 12i(化合物11)和 12ii的混合物(0.091g，91 ％)，是白色固体化合物。 12ii：HPLC：98％，2.987分钟(停留时间) (YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟， 含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 311.1[M+H]+。
实施例13
(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-[[2-(3，4-二氯苯基) 八氢-1-氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-亚基]氨基](分别 为 13Bi和 13Bii)
A.内/外-2-〔(氰基亚氨基)〔(3，4-二氯苯基)氨基〕甲 基〕-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸乙酯( 13A)
2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸乙酯(169mg，1.0mmol，1eq) 与N-氰基-N′-(3，4-二氯苯基)硫脲(246mg，1.0mmol，1eq)和 1-〔3-(二甲胺基)丙基〕-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(288mg， 1.5mmol，1.5eq)一起混合在DMF中。混合物在室温下搅拌过夜。用 1M柠檬酸水溶液终止反应，然后用二氯甲烷萃取。将合并的有机萃 取物干燥并进行真空浓缩。粗产物用硅胶快速色谱进行精制，用30％ 丙酮/己烷洗脱，得到192mg(50.4％)白色半固体化合物 13A。HPLC： 100％，3.260分钟(YMC Combiscreen ODS-A S5柱，用10-90％甲 醇水溶液进行梯度洗脱4分钟)MS(ES)：m/z 381[M+H]+。
B.(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-[[2-(3，4-二氯苯 基)八氢-1-氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-3-亚基]氨基] ( 13Bi和 13Bii)
化合物 13A(180mg，0.47mmol，1eq)与DBU(72mg，0.47mmol， 1eq)混合于无水甲苯中。将该溶液在60℃加热1小时。TLC(硅胶板， 1％甲醇/二氯甲烷)分析表明无起始原料剩下，而LC监测表明与起始 原料的具有相同停留时间的峰。用饱和NH4Cl水溶液终止反应，然后 用二氯甲烷萃取。将合并的有机萃取物干燥并进行真空浓缩。粗产物 用硅胶快速色谱进行精制，用0.5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到2种异 构体。化合物 13Bi呈白色半固体状，收率为52％(82mg)。HPLC： 100％，3.297分钟(YMC Combiscreen ODS-A S5柱，用10-90 ％甲醇水溶液进行梯度洗脱4分钟)MS(ES)：335.08[M+]。化合物 13Bii 呈白色固体状，收率为25％(40mg)。HPLC：100％，3.323分钟(YMC Combiscreen ODS-A S5柱，用10-90％甲醇水溶液进行梯度洗脱 4分钟)MS(ES)：m/z 335.06[M]+和337.07[M+2H]+。
实施例14
(5α，8α，8aα)-8a-〔(4-溴苯基)甲基〕-2-(3，5-二 氯苯基)四氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮 ( 14)
在-78℃将化合物 7Bi(0.217g，0.701mmol，如实施例7所述方法 制备)加入到在THF中的新制备的LDA(1.227mmol  n-BuLi， 1.402mmol二异丙基胺)中。加完后，让反应混合物慢慢温热至-20 ℃，并在此温度保持20分钟。然后再将反应混合物冷却至-78℃，加 入在THF中的4-溴苄基溴(0.175g，0.701mmol)。然后让反应混合 物温热至0℃，2小时后加入饱和NH4Cl水溶液使反应终止。该溶液用 二氯甲烷萃取(2×30ml)，然后用无水硫酸钠干燥。所得物料用SO2制备性TLC进行精制，用二氯甲烷洗脱，得到透明油状的化合物14 (0.083g)。HPLC：98％，4.160分钟(停留时间)(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/ 分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 481.1[M+H]+。
实施例15
(5α，8α，8aα)-六氢-2-(2-萘基)-3-(苯基亚氨基) -5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1(5H)-酮( 15B)
A.N-(2-萘基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-碳酰胺 (carboxamide)( 15A)
中间体化合物 9B(1.00g，4.15mmol，按实施例9制备)溶解在二 氯甲烷(8.0ml)中，加入TEA(2.31ml，16.6mmol)和2，6-二氯苯甲 酰氯(0.549ml，4.15mmol)。将混合物搅拌14小时，加入在二氯甲烷 中的2-氨基萘(0.593g，4.15mmol)，接着加入4-DMAP(0.010g)。 3小时后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用1 N HCl(40ml)和饱和 NaHCO3水溶液(40ml)各洗涤1次，然后用无水硫酸钠干燥。将粗中 间体(1.00g，2.73mmol)溶解在二氯甲烷(2.0ml)中，用20℃的TFA (2.0ml)处理。3小时后，用饱和NaHCO3水溶液终止反应。用二氯 甲烷萃取(3×30ml)，然后用无水硫酸钠干燥。粗产物用制备性反相 HPLC精制，得到0.770g白色固体化合物 15A。
B.(5α，8α，8aα)-六氢-2-(2-萘基)-3-(苯基亚氨 基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1(5H)-酮( 15B)
中间体化合物 15A(0.050g，0.188mmol)溶解在二氯乙烷(2.0ml) 中，加入二氯化异氰化苯(0.026ml，0.188mmol)、4-DMAP(0.010g) 和DBU(0.084ml，0.564mmol)，反应混合物在密封管中加热至90℃。 14小时后，将反应混合物冷却至室温，并进行真空浓缩。残留物用SO2制备性TLC进行精制，用二氯甲烷/丙酮(9∶1)洗脱，得到0.063g褐 色油状化合物 15B。HPLC：93％，3.590分钟(停留时间)(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/ 分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 368.37[M+H]+。
实施例16
六氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶 -1(5H)-酮( 16)
化合物 4B(0.020g，0.062mmol，按实施例4所述方法制备)溶解 在无水乙醇(2.0ml)中，加入Ra-Ni(过量)。在25℃保持3小时 后，将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙醇冲洗。粗产物用制备性TLC 精制，用30％丙酮/己烷洗脱，得到0.6mg白色固体化合物 16。HPLC： 100％，2.437分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10 -90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处 监控)，MS(ES)：m/z 297.3[M+H]+。
化合物 16的替代制备方法：
A.(5α，8α，8aα)-六氢-3-硫代-2-[3-(三氟甲基)苯 基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1(5H)-酮( 16A)
2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-羧酸乙酯(0.250g，0.15mmol) 溶解在甲苯中，加入异硫氰酸3-(三氟甲基苯基)酯(0.334g， 0.166mmol)。反应混合物在25℃搅拌14小时，然后加入1N NaOH(4ml)。半小时后，水层用二氯甲烷萃取(3×25ml)。合并的有机 层用盐水(50ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，然后在真空下脱除溶剂。 所得残留物用硅胶快速色谱进行精制，用10％-30％丙酮/己烷洗脱， 得到0.378g黄色固体化合物 16A。
B.六氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a] 吡啶-1(5H)-酮( 16B或 16)
化合物 16A(0.020g，0.062mmol)溶解在乙醇(2ml)中，加入 Ra-Ni(～0.020g)。3小时后，将反应混合物通过硅藻土过滤、浓缩， 所得残留物用SO2制备性TLC进行精制，用30％丙酮/己烷洗脱，得 到0.8mg白色固体化合物 16B。HPLC：99％，2.437分钟(停留时间) (YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟， 含0.1％TFA，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 297.3[M+H]+。
实施例17
[5R-(5α，8α，8aα)]和[5R-(5α，8α，8aβ)]-四氢-2- (4-硝基-1-萘基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H) -二酮(分别为 17i和 17ii)
R-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸乙酯(0.169g，1.0mmol) 溶解在含有新活化4 MS(0.200g)的甲苯(10ml)中。往其中加入 异氰酸4-硝基-1-萘基酯(0.210g，1.0mmol，按类似实施例3步骤 A所述方法制备)的甲苯(5ml)溶液。15小时后，由LC(液相色谱) 分析表明反应已完全，加入DBU(0.224ml，1.5mmol)，反应混合物在 80℃加热1.5小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤，然后倒入到1N HCl中，用二氯甲烷萃取(2×30ml)。有机物用无水硫酸钠干燥，然 后浓缩。经测定该粗产物为1∶2的化合物 17i和 17ii的混合物。该反 应混合物通过硅胶快速色谱分离，用二氯甲烷/丙酮(1％丙酮)洗脱， 得到化合物 17i，其HPLC：98％，2.923分钟(停留时间)(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/ 分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 338.1[M+H]+，和化合物 17ii， 其HPLC：96％，2.753分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm， 用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm 处监控)，MS(ES)：m/z 338.1[M+H]+。由手性HPLC分析表明二者 均为94％ee。
实施例18
(6α，9α，9aα)-四氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-6，9-亚 甲基-2H-吡啶并[1，2-d][1，2，4]三嗪-1，4(3H，9aH)-二酮(18D)
A.3-[[[3-(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]-2-氮杂双环[2.2.1] 庚烷-2-羧酸1，1-二甲基乙基酯( 18A)
中间体化合物 9B(964mg，4mmol，1eq，实施例9)溶解在20ml四 氢呋喃中，加入1-甲基-2-吡咯烷酮(487μl，4mmol，1eq)，接着 加入氯甲酸甲酯(309μl，4mmol，1eq)。混合物在室温下搅拌15分钟。 然后加入3-(三氟甲基)苯胺(499μl，4mmol，1eq)，反应混合物在 室温下搅拌72小时。加水和0.1M柠檬酸水溶液使反应终止。混合物 用二氯甲烷萃取。将合并的有机层干燥、真空浓缩，用硅胶快速色谱 进行精制，用0.3％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到640mg(41.6％)中间体 化合物 18A。
B.3-[[1-[3-(三氟甲基)苯基]肼基]羰基]-2-氮杂双环[2.2. 1]庚烷-2-羧酸1，1-二甲基乙基酯( 18B)
化合物 18A(308mg，0.8mmol，1eq)溶解在15ml四氢呋喃中。 加入氢化钠(60％油悬浮液，38mg，0.96mmol，1.2eq)，混合物在室 温下搅拌15分钟，加入O-二苯基膦基羟基胺(224mg，0.96mmol，1.2 eq)，反应混合物在室温下搅拌1小时。LC分析表明起始原料已消耗 完毕。加水，反应混合物用二氯甲烷萃取。将合并的有机萃取物干燥， 经真空浓缩后得到定量收率的半固体化合物 18B。该化合物未经精制 而使用。LC：R.T.＝3.39分钟(停留时间)(YMC Combiscreen  ODS -A S5柱，用10-90％甲醇水溶液进行梯度洗脱4分钟)。
C.2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸1-〔3-(三氟甲基)苯 基〕酰肼( 18C)
化合物 18B(136mg，0.34mmol，1eq)溶解在5ml二氯甲烷中。加 入三氟乙酸(2ml)，混合物在室温下搅拌1小时。LC分析表明完全 转化为化合物 18C。粗物料经真空浓缩后用于下一步骤。
D.(6α，9α，9aα)-四氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-6，9- 亚甲基-2H-吡啶并[1，2-d][1，2，4]三嗪-1，4(3H，9aH)-二酮( 18D)
化合物 18C溶解在10ml二氯甲烷中，加入Hünig′s碱(10eq)使 pH达到10。将混合物冷却至10℃。三光气(约1.5eq)溶解在二氯甲 烷中，然后滴加到反应混合物中。反应混合物在0℃搅拌，然后在室温 下搅拌过夜。LC分析表明起始原料已消耗完毕。混合物用饱和NH4Cl水溶液洗涤，接着用饱和食盐水洗涤。将二氯甲烷层干燥、真空浓缩， 然后用硅胶快速色谱进行精制，用2％甲醇/二氯甲烷洗脱。该物料进 一步用制备性LC精制，得到15mg(14％)浅黄色固体化合物 18D。 HPLC：100％，2.523分钟(停留时间)(YMC Combiscreen ODS- A S5柱，用10-90％甲醇水溶液进行梯度洗脱4分钟)MS(APCI)： m/z 326.2[M+H]+。
实施例19
(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-8，8a-二氢-2-(1H- 吲哚-3-基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二 酮(分别为 19Bi和 19Bii) A.3-异氰酸基吲哚( 19A)
往吲哚-3-羧酸(1g，6.20mmol，1eq)的四氢呋喃(30ml)溶液 中加入三乙胺(0.86ml，6.20mmol，1eq)和二苯基磷酰叠氮(1.3ml， 6.20mmol，1eq)。反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物经真空浓缩 后用硅胶快速色谱进行精制，用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到定量收 率的中间体叠氮化物。该叠氮化物在60ml甲苯中在100℃加热5小时。 经真空浓缩后完全转化得到的化合物 19A，其直接用于下一步骤。
B.(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-8，8a-二氢-2-(1H -吲哚-3-基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)- 二酮( 19Bi和 19Bii)
在室温，氩气保护下往在50ml甲苯中的化合物 19A(6.20mmol，1 eq)中加入2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸乙酯(1.03，6.20mmol，1 eq)在10ml含有4 MS的甲苯中的溶液。数小时后TLC分析表明 起始原料已消耗完毕。加入DBU(0.93ml，6.20mmol，1eq)，反应混 合物在80℃温热3小时。将混合物冷却、过滤，然后用硅胶快速色谱 进行精制，用50％丙酮/己烷洗脱，得到120mg(7％)微黄褐色结晶 化合物 19Bi。另外的495mg(29％)物质是4∶1的 19Bi和 19Bii的混 合物。HPLC：94％，2.17分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm， 用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm 处监控)，MS(APCI)：m/z 279.8[M+H]+。
实施例20
(5α，8α，8aα)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-8，8a-二氢-5，8 -亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 20B) A.3-氨基苯并噻吩( 20A)
往3-氨基-苯并[b]噻吩-2-羧酸甲酯(1g，4.83mmol，1eq)的 1-甲基-2-吡咯烷酮(8ml)溶液中加入哌嗪(2.08g，24.13mmol，5 eq)。反应混合物在130℃搅拌过夜。加入冰，混合物用乙酸乙酯萃取。 有机萃取物用水洗涤2次，干燥，并进行真空浓缩。粗物料用硅胶快 速色谱进行精制，用40％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到600mg(83％)黄 色油状的化合物 20A。
B.(5α，8α，8aα)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-8，8a-二氢 -5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮( 20B)
化合物 20A(480mg，3.22mmol，1eq)加入到光气(20％甲苯溶液， 6.38g，12.88mmol，4eq)和NaHCO3(2.7g，32.2mmol，10eq)在二氯甲 烷(50ml)的混合物中。所得混合物在N2中，室温下搅拌10分钟， 过滤除去NaHCO3，在不加热的条件下进行真空浓缩。往所得异氰酸 酯中加入2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-羧酸乙酯(599mg， 3.54mmol，1.1eq)在25ml含有4 MS的甲苯中的溶液。反应混合 物在室温下搅拌过夜。加入DBU(0.48ml，3.22mmol，1eq)，反应混 合物在76℃温热2小时。将混合物冷却、通过硅藻土过滤，然后倒入 到饱和NH4Cl水溶液中。混合物用二氯甲烷萃取。将有机萃取物进行 真空浓缩，然后用硅胶快速色谱进行精制，用0.6％甲醇/二氯甲烷洗 脱，得到480mg(50.4％)浅黄色固体化合物 20B。HPLC：99％，2.57 分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水 溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)： m/z 297.1[M+H]+。
实施例21
(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-2-(1，2-苯并异噁唑- 3-基)四氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮 (分别为 21Bi和 21Bii)
A.内/外-2-〔(1，2-苯并异噁唑-3-基氨基)-2-氮杂双 环[2.2.2]辛烷-3-羧酸乙酯( 21A)
在-5℃将1，2-苯并异噁唑-3-胺(134mg，1mmol，1eq)加入 到光气(20％甲苯溶液，0.5ml，1mmol，1eq)在5ml乙酸乙酯中的溶 液中。让反应混合物温热至室温，然后在回流下加热40分钟。将混合 物冷却至室温，然后加入2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羧酸乙酯 (422mg，2.5mmol，2.5eq)。反应混合物在回流下搅拌2小时。将混 合物倒入水中，用二氯甲烷萃取。有机萃取物经真空浓缩后用硅胶快 速色谱进行精制，用二氯甲烷洗脱，得到148mg(45.0％)浅黄色固体 化合物 21A。
B.(5α，8α，8aα)和(5α，8α，8aβ)-2-(1，2-苯并异噁 唑-3-基)四氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)- 二酮( 21Bi和 21Bii)
中间体化合物 21A(140mg，0.42mmol，1eq)溶解在含有4 MS 的甲苯中。加入DBU(65mg，0.42mmol，1eq)，反应混合物在80℃搅 拌1小时。用5％HCl水溶液使反应终止，然后用二氯甲烷萃取。将有 机萃取物干燥，经真空浓缩后用硅胶快速色谱进行精制，用二氯甲烷 洗脱，得到16mg(13.4％)化合物 21Bi和47mg(39.5％)化合物 21Bii。 化合物 21Bi：HPLC：93％，2.367分钟(停留时间)(YMC S5 ODS 柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/ 分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z 284.12[M+H]+。化合物 21Bii： HPLC：95％，2.517分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm， 用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm 处监控)，MS(ES)：m/z 284.13[M+H]+。
实施例22-88
用这里所述的步骤或通过对这里所述步骤的修改，本领域技术人 员很容易制备下面表2中所列的另一些化合物。下列化合物中以纯对 映体的方式制备的那些化合物在结构一栏中用专门术语(R)或(S) 指明。没有这样指明的那些化合物是外消旋混合物，这样的化合物很 容易被本领域技术人员分离或用本文所述步骤以纯对映体的方式制 备。
表2
用于测定表2化合物停留时间的色谱技术如下：
LC＝YMC  S5  ODS柱4.6×50mm，用10-90％MeOH/H2O洗 脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟。在220nm处监控。
LCMS＝YMC  S5  ODS柱4.6×50mm，用10-90％MeOH/H2O洗脱4分钟，含0.1％TFA；4ml/分钟。在220nm处监控。
实施例89
(1S-外)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，6-二羧酸2-(1， 1-二甲基乙基)6-甲基酯和(1S-内)-2，5-二氮杂双环[2.2.1] 庚烷-2，6-二羧酸2-(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯
该实施例说明获得式IIa化合物的优选方法，该化合物可用作制备 式Ia化合物的中间体(参见，例如本文中的图2)。
A.(2S-反)-4-羟基-2-[[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅 烷基]氧基]甲基]-1-吡咯烷羧酸1，1-二甲基乙基酯( 89A)
N-(叔丁氧基羰基)-L-4-羟基脯氨酸(10.0g，43.3mmol)溶 解在THF中，冷却至0℃，然后用15分钟时间加入硼烷/THF(1.0M 溶液，86.6ml)。将反应混合物温热至25℃，接着加热至回流，保持 16小时。将反应烧瓶从热源移开，然后慢慢加入无水甲醇(35ml)。 冷却至25℃后，真空脱除溶剂，所得粗二醇中间体直接用于下一步骤。 将该粗二醇(1.81g，8.34mmol)溶解在二氯甲烷(50ml)中，加入2，6 -卢剔啶(1.46ml，12.51mmol)，将混合物冷却至-78℃。加入三氟 甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯(1.92ml，8.34mmol)。2小时后，将 混合物倒入到1N  HCl(100ml)中，用二氯甲烷萃取(2×100ml)， 有机物用无水硫酸钠干燥。所得粗醇用硅胶快速色谱进行精制，用丙 酮/氯仿(0-5-10％丙酮)洗脱，得到1.011g(2步骤收率为37％) 透明油状化合物 89A。
B.(2S-反)-2-羟甲基-4-[[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基]- 1-吡咯烷羧酸1，1-二甲基乙基酯( 89B)
中间体化合物 89A(3.41g，10.3mmol)溶解在无水吡啶(30.0ml)， 冷却至0℃，然后用10分钟时间分批加入对甲苯磺酰氯(5.89g， 30.9mmol)。然后将该烧瓶放入4℃的冰箱中，保持48小时。所得溶 液倒入到1N HCl(300ml)中，用二氯甲烷萃取(3×200ml)，有机 物用无水硫酸钠干燥。该粗甲苯磺酸酯中间体溶解在THF(50ml)中， 往其中加入H2O(0.5ml)，接着加入PTSA-H2O(1.03mmol)。一旦 TLC检测表明反应完全，就将混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(150ml) 中，然后用二氯甲烷萃取(3×50ml)。合并的有机层用无水硫酸钠干 燥。该粗醇用硅胶快速色谱进行精制，用丙酮/氯仿(0-5-10％丙酮) 洗脱，得到2.71g(2步收率为71％)透明油状中间体化合物 89B。
C.(2S-反)-2-[氰基[(苯基甲基)氨基]甲基]-4-[[(4-甲 基苯基)磺酰基]氧基]-1-吡咯烷羧酸1，1-二甲基乙基酯( 89C)
在-78℃往草酰氯(2.0M的二氯甲烷溶液，2.82ml)的二氯甲烷 (40ml)溶液中加入无水二甲亚砜(0.462ml，6.51mmol)。让混合物 静置15分钟，然后慢慢加入化合物 89B(1.61g，4.34mmol)的二氯甲 烷(10ml)溶液。30分钟后，加入三乙胺(1.81ml，13.02mmol)，慢 慢使反应混合物温热至0℃。然后用水(25ml)终止反应，用二氯甲烷 (100ml)稀释。混合物依次用1N HCl(1×100ml)、饱和NaHCO3水溶液(50ml)和水(2×50ml)洗涤。有机物用无水硫酸钠干燥，然 后在真空下脱除挥发性有机物。所得粗醛中间体(1.60g，4.34mmol) 溶解在THF(25ml)中，加入氰基膦酸二乙酯(90％，0.95ml，5.64mmol)， 接着加入苄胺(1.23ml，11.3mmol)。2小时后，TLC分析表明反应完 全，于是在真空下脱除挥发性有机物。粗反应混合物用硅胶快速色谱 进行精制，用丙酮/氯仿(0-2-3％丙酮)洗脱，得到1.48g(70％) 白色固体中间体化合物 89C。NMR光谱分析表明化合物 89C是一种约 1∶1的非对映体混合物。
D.(1S-内)-6-氰基-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2. 2.1]庚烷-2-羧酸，1，1-二甲基乙基酯( 89Di)；(1S-外)-6- 氰基-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，1，1 -二甲基乙基酯( 89Dii)
中间体化合物89C(1.48g，3.05mmol)溶解在二氯乙烷(25ml) 中，加入二异丙基乙基胺(1.45ml)。混合物在密封管中加热至100℃， 保持18小时。然后在真空下脱除挥发性有机物，所得粗物质用硅胶快 速色谱进行精制，用丙酮/氯仿(0-2-3％丙酮)洗脱，得到一种透明 油状的中间体化合物 89Di(0.591g，62％)和中间体化合物 89Dii(0.370g， 38％)的混合物。经过NOE、COESY和DEPT NMR实验后，得出 了化合物 89Di和 89Dii的结构排布。
E.(1S-内)-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚 烷-2，6-二羧酸2-(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 89E)
中间体化合物 89Di(0.400g，1.28mmol)溶解在NaOMe(0.5M. 12.8ml)中，加热至60℃保持5小时。将反应混合物冷却至0℃，然后 慢慢加入3N HCl(4.0ml)。在0℃保持2小时后，将反应混合物倒 入饱和NaHCO3水溶液(50ml)中。混合物用二氯甲烷萃取(3×50ml)， 合并的有机层用无水硫酸钠干燥。所得粗酯用硅胶快速色谱进行精制， 用氯仿/丙酮(0-2-4％丙酮)洗脱，得到0.320g(0.92mmol，72％) 透明油状的中间体化合物 89E。
F.(1S-外)-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚 烷-2，6-二羧酸2-(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 89F)
中间体化合物 89Dii(0.400g，1.28mmol)溶解在NaOMe(0.5M. 12.8ml)中，加热至60℃保持5小时。将反应混合物冷却至0℃，然后 慢慢加入3N HCl(4.0ml)。在0℃保持2小时后，将反应混合物倒 入饱和NaHCO3水溶液(50ml)中。混合物用二氯甲烷萃取(3×50ml)， 合并的有机层用无水硫酸钠干燥。所得粗酯用硅胶快速色谱进行精制， 用氯仿/丙酮(0-2-4％丙酮)洗脱，得到0.290g(0.85mmol，66％) 透明油状的中间体化合物 89F。
G.(1S-内)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，6-二羧酸2 -(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 89G)
中间体化合物 89E(0.280g，0.81mmol)溶解在无水乙醇(10.0ml) 中，加入Pd/C(10％Pd，0.080g)。由气球通入1大气压H2，反应混 合物在25℃搅拌20小时。通过硅藻土过滤除去Pd，接着用乙酸乙酯 冲洗，在真空下脱除挥发性有机物，得到粘稠黄色油状的化合物 89G (0.205g，99％)。化合物 89G无需精制直接用于下一步骤。MS(ES)： m/z 257.18[M+H]+。HPLC RT＝1.223分钟(95％) (YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm；10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分 钟，220nM检测)。
H.(1S-外)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，6-二羧酸2 -(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 89H)
中间体化合物 89F(0.310g，0.89mmol)溶解在无水乙醇(10.0ml) 中，加入Pd/C(10％Pd，0.080g)。由气球通入1大气压H2，反应混 合物在25℃搅拌20小时。通过硅藻土过滤除去Pd，接着用乙酸乙酯 冲洗，在真空下脱除挥发性有机物，得到粘稠黄色油状的化合物 89H (0.210g，92％)。化合物 89H无需精制直接用于下一步骤。MS(ES)： m/z 257.16[M+H]+。HPLC RT＝1.293分钟(90％)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm；10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分 钟，220nM检测)。
实施例90
[5S-(5α，8α，8aα)]-2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]六 氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酸1，1- 二甲基乙基酯( 90i)
[5S-(5α，8α，8aβ)]-2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]六 氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酸1，1- 二甲基乙基酯( 90ii)
往4-异氰酸根基-2-(三氟甲基)-苄腈(1.0mmol)的含有 活化4 MS(0.300g)的甲苯(4ml)溶液中加入化合物 89G(0.220g， 0.856mmol)的甲苯(6ml)溶液。在25℃保持10小时后加入DBU(0.166ml， 1.11mmol)，反应混合物在81℃加热2小时，冷却至25℃后倒入1 N HCl(50ml)中。所得溶液用二氯甲烷萃取(3×30ml)，合并的有机层用 无水硫酸钠干燥。所得粗物质用硅胶快速色谱进行精制，用丙酮/氯仿 (0-2-4-8％丙酮)洗脱，得到化合物 90i(0.155g，42％)，MS(ES)： m/z 437.09[M+H]+。HPLC RT＝3.280分钟(100％)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm；10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分 钟，220nM检测)和化合物 90ii(0.061g，16％)，MS(ES)：m/z 437.09 [M+H]+。HPLC RT＝3.133分钟(100％)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm； 10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分钟，220nM检测)， 均为白色泡沫。
实施例91
[5S-(5α，8α，8aα)]-4-(六氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲 基咪唑并[1，5-a]吡嗪-2(3H)-基)-2-(三氟甲基)苄腈(91)
化合物 90i(0.115g，0.264mmol)溶解在无水二氯甲烷(3ml)中， 在25℃加入无水TFA(1.0ml)。1小时后，将反应混合物进行真空浓 缩，所得残留物溶解在二氯甲烷中，然后倒入到饱和NaHCO3水溶液 中。该溶液用二氯甲烷萃取(3×10ml)，合并的有机层用无水硫酸钠 干燥，得到0.089g(97％)黄色固体的游离化合物 91。MS(ES)：m/z 359.09 [M+H]+。HPLC RT＝1.477分钟(100％)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm； 10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分钟，220nM检测)。
实施例92
(1R-内)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，6-二羧酸2-(1， 1-二甲基乙基)6-甲基酯( 92H)和(1R-外)2，5-二氮杂双环[2.2. 1]庚烷-2，6-二羧酸2-(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 92I)
该实施例说明获得式IIa化合物的优选方法，该化合物可用作制备 式Ia化合物的中间体(参见，例如本文中的图2)。
A.(2R-顺)-4-羟基-1，2-吡咯烷二羧酸1-(1，1-二甲 基乙基)2-乙酯( 92A)
顺-4-羟基-D-脯氨酸(10.0g，131.1mmol)悬浮于无水乙醇 (100ml)中，在整个反应中通入无水HCl(g)气体，直至得到均匀 溶液。让其在25℃保持1小时，然后在真空下脱除挥发性有机物。所 得HCl盐用乙醚研制，过滤后得到白色粉末状粗乙酯。该乙酯盐直接 用于下一步反应。
将该盐(～12g)悬浮于丙酮中，冷却至0℃。然后加入10％Na2CO3水溶液(6.0ml)，接着加入BOC2O(1.37g，6.29mmol)，然后将该反 应混合物慢慢温热至25℃。12小时后。将反应混合物倒入水中，用二 氯甲烷萃取(3×100ml)。有机物用无水硫酸钠干燥，经真空浓缩后 得到白色粉末状粗化合物 92A。该物质无需进一步精制而直接使用。
B.(2R-反)-4-[[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基]-1，2-吡咯烷 二羧酸1-(1，1-二甲基乙基)2-乙酯( 92B)
粗化合物 92A(1.41g，5.44mmol)溶解在THF(50ml)中，加入 Ph3P(1.86g，70.8mmol)。将混合物冷却至0℃，加入DEAD(1.11ml， 70.8mmol)。15分钟后，加入对甲苯磺酸甲酯(1.32g，70.8mmol)， 将溶液慢慢温热至25℃。14小时后，将反应混合物进行真空浓缩，然 后用硅胶快速色谱进行精制，用丙酮/氯仿(0-2-3％丙酮)洗脱，得 到0.845g黄色油状所需化合物 92B。HPLC  RT＝3.373分钟(95％) (YMC S5 ODS柱，4.6×50mm；10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1 ％TFA；4ml/分钟，220nM检测)。该物质无需进一步精制而直接使 用。
C.(2R-反)-2-(羟甲基)-4-[[(4-甲基苯基)磺酰基]氧 基]-1-吡咯烷羧酸1，1-二甲基乙基酯( 92C)
粗化合物 92B(5.50g，13.32mmol)溶解在THF(150ml)中，冷却 至0℃。然后慢慢加入LiBH4(2.0M THF中，16.7ml，33.3mmol)， 让其慢慢温热至25℃。12小时后将混合物冷却至0℃，用水(10ml) 然后用AcOH(2.0ml)终止反应。15分钟后将该溶液倒入饱和NaHCO3水溶液中，用二氯甲烷萃取(3×50ml)，合并的有机层用无水硫酸钠 干燥，得到黄色油状粗化合物 92C(3.9lg)，该化合物无需精制而直 接使用。HPLC RT＝3.043分钟(100％)(YMC S5 ODS柱，4.6× 50mm；10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分钟，220nM 检测)。
D.(2R-反)-2-[氰基[(苯基甲基)氨基]甲基]-4-[[(4- 甲基苯基)磺酰基]氧基]-1-吡咯烷羧酸1，1-二甲基乙基酯( 92D)
在-78℃往草酰氯(2.0M的二氯甲烷溶液，2.82ml)的二氯甲烷 (40ml)溶液中加入无水二甲亚砜(0.462ml，6.51mmol)。让混合静 置15分钟，然后慢慢加入化合物 92C(1.61g，4.34mmol)的二氯甲烷 (10ml)溶液。30分钟后，加入三乙胺(1.81ml，13.02mmol)，慢慢 使反应混合物温热至0℃。然后用水(25ml)终止反应，用二氯甲烷 (100ml)稀释。混合物依次用1N HCl(1×100ml)、饱和NaHCO3水溶液(50ml)和水(2×50ml)洗涤。有机物用无水硫酸钠干燥，然 后在真空下脱除挥发性有机物。所得粗醛中间体(1.60g，4.34mmol) 溶解在THF(25ml)中，加入氰基膦酸二乙酯(90％，0.95ml，5.64mmol)， 接着加入苄胺(1.23ml，11.3mmol)。2小时后，TLC分析表明反应完 全，于是在真空下脱除挥发性有机物。粗反应混合物用硅胶快速色谱 进行精制，用丙酮/氯仿(0-2-3％丙酮)洗脱，得到1.48g(70％) 白色固体中间体化合物 92D。NMR光谱分析表明化合物 92D是一种约 1∶1的非对映体混合物。
E.(1R-内)-6-氰基-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2 2.1]庚烷-2-羧酸，1，1-二甲基乙基酯( 92Ei)；(1R-外)-6- 氰基-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸，1，1 -二甲基乙基酯( 92Eii)
中间体化合物 92D(1.48g，3.05mmol)溶解在二氯乙烷(25ml) 中，加入二异丙基乙基胺(1.45ml)。混合物在密封管中加热至100℃， 保持18小时。然后在真空下脱除挥发性有机物，所得粗物质用硅胶快 速色谱进行精制，用丙酮/氯仿(0-2-3％丙酮)洗脱，得到一种透明 油状的中间体化合物 92Ei(0.591g，62％)和中间体化合物 92Eii(0.370g， 38％)的混合物。经过NOE、COESY和DEPT NMR实验后，得出 了化合物 92Ei和 92Eii的结构排布。
F.(1R-内)-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚 烷-2，6-二羧酸2-(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 92F)
中间体化合物 92Ei(0.400g，1.28mmol)溶解在NaOMe(0.5M. 12.8ml)中，加热至60℃保持5小时。将反应混合物冷却至0℃，然后 慢慢加入3N HCl(4.0ml)。在0℃保持2小时后，将反应混合物倒 入饱和NaHCO3水溶液(50ml)中。混合物用二氯甲烷萃取(3×50ml)， 合并的有机层用无水硫酸钠干燥。所得粗酯用硅胶快速色谱进行精制， 用氯仿/丙酮(0-2-4％丙酮)洗脱，得到0.320g(0.92mmol，72％) 透明油状的中间体化合物 92F。
G.(1R-外)-5-(苯基甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚 烷-2，6-二羧酸2-(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 92G)
中间体化合物 92Eii(0.400g，1.28mmol)溶解在NaOMe(0.5M. 12.8ml)中，加热至60℃保持5小时。将反应混合物冷却至0℃，然后 慢慢加入3N HCl(4.0ml)。在0℃保持2小时后，将反应混合物倒 入饱和NaHCO3水溶液(50ml)中。混合物用二氯甲烷萃取(3×50ml)， 合并的有机层用无水硫酸钠干燥。所得粗酯用硅胶快速色谱进行精制， 用氯仿/丙酮(0-2-4％丙酮)洗脱，得到0.290g(0.85mmol，66％) 透明油状的中间体化合物 92G。
H.(1R-内)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，6-二羧酸2 -(1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 92H)
中间体化合物 92F(0.280g，0.81mmol)溶解在无水乙醇(10ml) 中，加入Pd/C(10％Pd，0.080g)。由气球通入1大气压H2，反应混 合物在25℃搅拌20小时。通过硅藻土过滤除去Pd，接着用乙酸乙酯 冲洗，在真空下脱除挥发性有机物，得到粘稠黄色油状的化合物 92H (0.205g，99％)。化合物 92H无需精制直接用于下一步骤。MS(ES)： m/z 257.18[M+H]+。HPLC RT＝1.223分钟(95％)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm；10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分 钟，220nM检测)。
I.(1R-外)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2，6-二羧酸2- (1，1-二甲基乙基)6-甲基酯( 92I)
中间体化合物 92G(0.310g，0.89mmol)溶解在无水乙醇(10ml) 中，加入Pd/C(10％Pd，0.080g)。由气球通入1大乞压H2，反应混 合物在25℃搅拌20小时。通过硅藻土过滤除去Pd，接着用乙酸乙酯 冲洗，在真空下脱除挥发性有机物，得到粘稠黄色油状的化合物 92I (0.210g，92％)。化合物 92I无需精制直接用于下一步骤。MS(ES)： m/z 257.16[M+H]+。HPLC RT＝1.293分钟(90％)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm；10-90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分 钟，220nM检测)。
实施例93
〔5R-(5α，8α，8aα)〕-4-八氢-7-〔(1，1-二甲基乙氧 基)羰基〕-1，3-二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-2-基〕 -2-(三氟甲基)苄腈(93i)
〔5R-(5α，8α，8aβ)〕-4-八氢-7-〔(1，1-二甲基乙氧 基)羰基〕-1，3-二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-2-基〕 -2-(三氟甲基)苄腈(93ii)
往4-异氰酸根基-2-(三氟甲基)苄腈(1.0mmol)的含有活 化4 MS(0.300g)的甲苯(4ml)溶液中加入化合物 92H或 92I(0.220g， 0.856mmol)(形成相同产物的差向异构化合物)的甲苯(6ml)溶液。 在25℃保持10小时后加入DBU(0.166ml，1.11mmol)，反应混合物 在81℃加热2小时，冷却至25℃后倒入1N HCl(50ml)中。所得溶 液用二氯甲烷萃取(3×30ml)，合并的有机层用无水硫酸钠干燥。所 得粗物质用硅胶快速色谱进行精制，用丙酮/氯仿(0-2-4-8％丙酮) 洗脱，得到化合物 93i(0.155g，42％)，MS(ES)：m/z 437.09[M+H]+。 HPLC RT＝3.280分钟(100％)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm；10 -90％MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分钟，220nM检测) 和化合物 93ii(0.061g，16％)，MS(ES)：m/z 437.09[M+H]-。 HPLC RT＝3.133分钟(100％)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm；10-90％ MeOH/H2O梯度洗脱，+0.1％TFA；4ml/分钟，220nM检测)，均为 白色泡沫。
实施例94
[5S-(5α，8α，8aα)]-六氢-2-(4-硝基-1-萘基)-1，3 -二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酸1，1-二甲基 乙基酯( 94)
将化合物 89G(0.220g，0.856mmol)加入到新活化的分子筛 (0.300g)在无水甲苯(10.0ml)中的悬浮液中。往该混合物中加入4 -硝基萘-1-基异氰酸酯(0.214g，1.0mmol)。在25℃搅拌14小时 后加入DBU(0.166ml，1.11mmol)，反应混合物在80℃加热2小时。 2小时后，将反应混合物冷却至25℃，然后倒入1N  HCl(50ml)中。 该溶液用二氯甲烷萃取(3×30ml)，合并的有机层用无水硫酸钠干燥。 粗物质用硅胶快速色谱进行精制，用0-2-6％丙酮/氯仿洗脱，得到 0.211g黄色泡沫状化合物 94。HPLC：95％，3.130分钟(停留时间) (YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟， 含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z439.19 [M+H]+。
实施例95
[5S-(5α，8α，8aα)]-四氢-2-(4-硝基-1-萘基)-5，8 -亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H)-二酮( 95)
化合物 94(0.160g，0.37mmol)溶解在二氯甲烷(5.0ml)中，在25 ℃加入TFA(1.5ml)。1.5小时后，将反应混合物进行真空浓缩，所 得残留物重新溶解在二氯甲烷中。所得溶液用饱和NaHCO3水溶液洗 涤，水层用二氯甲烷萃取(3×25ml)。合并的有机层用无水硫酸钠干 燥。经真空浓缩后得到0.115g黄色固体化合物 95。HPLC：93％，1.747 分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水 溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)： m/z369.07[M+MeOH]+。
实施例96
[5S-(5α，8α，8aα)]-7-[[4-氟代苯基]磺酰基]-四氢-2- (4-硝基-1-萘基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H) -二酮( 96)
化合物 94(0.025g，0.074mmol)溶解在吡啶(0.5ml)，然后加入 4-氟苯磺酰氯(0.028g，0.148mmol)。在25℃保持16小时后，将反 应混合物进行真空浓缩。粗产物用硅胶快速色谱进行精制，用5％丙酮 /氯仿洗脱，得到0.029g黄色固体化合物 96。HPLC：99％，3.107分 钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶 液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)： m/z497.2[M+H]+。
实施例97
(5α，8α，8aα)-2-(7-氟-3-苯并呋喃基)四氢-5，8-亚 甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮和(5α，8α，8aβ)-2 -(7-氟-3-苯并呋喃基)四氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3 (2H，5H)-二酮(分别为 97Ei和 97Eii)
A.7-氟-2-苯并呋喃羧酸( 97A)
按照Tanaka(J.Am.Chem.Soc.1951， 73，872)所述步骤使3- 氟水杨醛(1.000g，7.14mmol)与溴代丙二酸乙酯(1.900g，7.29mmol) 反应，得到562mg(44％)化合物 97A。
B.3-溴-7-氟苯并呋喃( 97B)
在Tanaka(J.Am.Chem.Soc.1951， 73，872)所述条件下使化合 物 97A(562mg，3.12mmol)经受脱羧反应，然后按Mochida等人(EP 355827 A2)所述步骤进行溴化和脱溴反应，得到186mg(28％)化合 物 97B。
C.7-氟-3-苯并呋喃羧酸( 97C)
按照Cugnon de Sévricourt等，Bull.Soc.Chim.144(1977)所述步 骤使化合物 97B(186mg，0.87mmol)经受锂氧化作用(Lithiation)， 接着进行羧化，得到36mg(23％)化合物 97C。
D.7-氟-3-苯并呋喃羧酸叠氮化物( 97D)
在室温下通过注射器往化合物 97C(36mg，0.20mmol)的THF(2ml) 溶液中加入Et3N(33μl，0.24mmol)和DPPA(52μl，0.24mmol)。将 所得混合物搅拌2小时，然后加入水(2ml)，使反应终止。分离各层， 水层用Et2O(1×5ml)萃取。合并的有机相用MgSO4干燥，然后减压 浓缩，留下的无色残留物用硅胶快速色谱进行精制，用0-5％乙酸乙 酯/己烷洗脱，得到36mg(88％)化合物 97D。
E.(5α，8α，8aα)-2-(7-氟-3-苯并呋喃基)四氢-5，8 -亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶-1，3(2H，5H)-二酮和(5α，8α，8aβ) -2-(7-氟-3-苯并呋喃基)四氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡啶 -1，3(2H，5H)-二酮(分别为 97Ei和 97Eii)
化合物 97D(36mg，0.18mmol)的甲苯(1.5ml)溶液加热至95℃， 保持2小时。将反应混合物冷却，然后加入50mg新活化的4分子筛 (粉状)和2-氮杂双环[2.2.1]庚-3-羧酸乙酯(32mg，0.19mmol) 的甲苯(1.5ml)溶液。将所得混合物搅拌过夜，用DBU(30μl，0.20mmol) 处理，加热至85℃，保持2小时。冷却后，将该物料通过硅藻土过滤， 用二氯甲烷(50ml)洗脱，用1N HCl溶液(2×25ml)洗涤，然后在 减压下浓缩。所得残留物用硅胶快速色谱进行精制，用20-5％己烷/ 二氯甲烷洗脱，得到23mg(44％)化合物 97Ei和19mg(36％)化合 物 97Eii，呈白色固体。化合物 97Ei：HPLC：100％，2.93分钟(停留 时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4 分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z301 [M+H]+。化合物 97Eii：HPLC：100％，3.00分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％ 磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z301[M+H]+。
也制备了其中7-氟-3-苯并呋喃基被下列各基团代换了的相应 的化合物：2-甲基-4，5，6，7-四氟-3-苯并呋喃基、3-苯并呋喃 基、2-苯并呋喃基和2-甲基-3-苯并呋喃基。
实施例98
[5S-(5α，8α，8aα)]-2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基] 六氢-8a-甲基-1，3-二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H) -羧酸1，1-二甲基乙基酯( 98)
在-78℃将化合物 90i(0.100g，0.229mmol)加入到新制备的LDA (0.048ml二异丙基胺，0.186ml，1.6M BuLi)的THF(3.0ml)溶液中。 30分钟后，加入碘甲烷(0.029ml，0.458mmol)，在1小时内将反应混 合物慢慢温热至-20℃，然后用饱和NH4Cl水溶液终止反应。混合物 用二氯甲烷萃取(3×30ml)。有机物用无水硫酸钠干燥。经真空浓缩 后得到0.077g粗化合物 98。该化合物无需精制可直接使用。HPLC：93 ％，3.243分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90 ％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)， MS(ES)：m/z473.12[M+NaH]+。
实施例99
[5S-(5α，8α，8aα)]-4-(六氢-1，3-二氧代-8a-甲基- 5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-2(3H)-基)-2-(三氟甲基)苄腈 ( 99)
化合物 98(0.070g，0.156mmol)溶解在二氯甲烷(2.0ml)中，在 25℃加入TFA(0.75ml)。30分钟后用饱和NaHCO3水溶液终止反应， 然后用二氯甲烷萃取(3×30ml)。有机物用无水硫酸钠干燥，然后在 真空下浓缩。粗物料为用制备性TLC精制，用25％丙酮/氯仿洗脱， 得到0.031g白色固体化合物 99。HPLC：86％，1.817分钟(停留时间) (YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟， 含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z351.15 [M+H]+。
实施例100
[5S-(5α，8α，8aα)]-7-苯甲酰基-2-[4-氰基-3-(三 氟甲基)苯基]四氢-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H) -二酮( 100)
化合物 99(0.023g，0.066mmol)溶解在二氯甲烷(2.0ml)，然后 加入TEA(0.018ml，0.132mmol)和4-DMAP(催化量)，接着加入苯 甲酰氯(0.011ml，0.099mmol)。3小时后，将反应混合物进行真空浓缩， 然后用制备性TLC硅胶进行精制，用7％丙酮/氯仿洗脱，得到0.021g 白色泡沫状化合物 100。HPLC：100％，2.927分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％ 磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z455.10[M+H]+。
实施例101
[5S-(5α，8α，8aα)]-7-(4-氟代苯甲酰基)-四氢-2- (4-硝基-1-萘基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H) -二酮( 101)
化合物 95(0.077g，0.228mmol)溶解在二氯甲烷(2.0ml)，加入 TEA(0.127ml，0.912mmol)和4-DMAP(0.001g)。将反应混合物冷 却至0℃，加入4-氟苯甲酰氯(0.040ml，0.342mmol)。然后将反应 混合物慢慢温热至25℃。3小时后，反应混合物用二氯甲烷(50ml) 稀释，然后依次用1 N HCl和饱和NaHCO3水溶液洗涤，接着用无水硫 酸钠干燥。粗物质用制备性TLC硅胶进行精制，用5％丙酮/氯仿洗脱， 得到0.022g黄色固体化合物 101。HPLC：100％，2.960分钟(停留时间) (YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含 0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z461.07[M+H]+。
实施例102
[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-四氢-7- (5-异噁唑基羰基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H) -二酮(102A)
[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-六氢-1，3 -二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酸4-氟代苯基 酯(102B)
[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-四氢-7- [(1-甲基-1H-咪唑-4-基)磺酰基]-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a] 吡嗪-1，3(2H，5H)-二酮(102C)和
[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-N-(4- 氟代苯基)-六氢-1，3-氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H) -碳酰胺(102D)
溶液相步骤(library)合成
下述步骤是在溶液相步骤格式中合成式I化合物的一般方法。通 过这种组合方法制备各化合物的更详细的描述如下。
一系列类似于[5S-(5α，8α，8aα)]-四氢-2-(4-硝基-1 -萘基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H)-二酮的游 离胺起始原料(0.05mmol，按实施例95所述方法制备)溶解在装在含 有粗玻璃料的聚苯乙烯管中的二氯甲烷(1.5ml)中。然后往每个反应 容器中加入N，N-(二异丙基)氨基甲基聚苯乙烯(3.49mmol/g，60mg)， 接着通过自动合成器加入所要求酰氯、异氰酸酯、氯甲酸酯或磺酰氯 (0.10mmol)的二氯乙烷(0.5ml)溶液。将反应容器在25℃振荡24 小时，然后往各个反应容器中加入三(2-氨基乙基)胺Polystyrene(聚 苯乙烯)HL(200-400目，3.3mmol/g，75mg)，反应容器在25℃再 振荡18小时。从各管出来的液体排入预先制备的(pretared)2.5ml  STR 管中，树脂用二氯甲烷(3×0.25ml)冲洗。然后将该预制(pretared) 管中物料浓缩，并用分析HPLC和LC-MS进行分析。HPLC： (Phenomenex-Prime  5μ C-18柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水 溶液洗脱4分钟，含0.1％TFA，4ml/分钟，在220nm处监控)。
A.[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-四氢 -7-(5-异噁唑基羰基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H， 5H)-二酮( 102A)
[5S-(5α，8α，8aα)]-4-(六氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲 基咪唑并[1，5-a]吡嗪-2(3H)-基)-1-萘腈(0.030g，0.094mmol)溶 解在装在含有粗玻璃料的聚苯乙烯管中的二氯甲烷(2.0ml)中。然后 往反应容器中加入N，N-(二异丙基)氨基甲基聚苯乙烯(3.49mmol/g， 65mg)，接着加入异噁唑甲酰氯(0.025g，0.19mmol)。将反应管在25 ℃振荡24小时，然后向反应容器中加入三(2-氨基乙基)胺Polystyrene HL(200-400目，3.3mmol/g，75mg)，反应容器在25℃再振荡18小 时。将液体排入到预制的(pretared)2.5ml STR管中，树脂用二氯甲 烷(3×0.25ml)冲洗。经真空浓缩后得到黄色固体粗化合物 102A (0.058g)。无需精制。HPLC：100％，2.237分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％ 磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z414.11[M+H]+。
B.[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-六氢 -1，3-二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酸4-氟代 苯基酯( 102B)
[5S-(5α，8α，8aα)]-4-(六氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲 基咪唑并[1，5-a]吡嗪-2(3H)-基)-1-萘腈(0.030g，0.094mmol)溶 解在装在含有粗玻璃料的聚苯乙烯管中的二氯甲烷(2.0ml)中。然后 往反应容器中加入N，N-(二异丙基)氨基甲基聚苯乙烯(3.49mmol/g， 65mg)，接着加入氯甲酸4-氟代苯基酯(0.033g，0.19mmol)。将反 应管在25℃振荡24小时，然后往反应容器中加入三(2-氨基乙基) 胺Polystyrene HL(200-400目，3.3mmol/g，75mg)，反应容器在25 ℃再振荡18小时。将液体排入到预制的(pretared)2.5ml STR管中， 树脂用二氯甲烷(3×0.25ml)冲洗。经真空浓缩后得到黄色固体粗化 合物 102B(0.053g)。无需精制。HPLC：93％，2.987分钟(停留时 间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分 钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z457.07 [M+H]+。
C.[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-四氢 -7-[(1-甲基-1H-咪唑-4-基)磺酰基]-5，8-亚甲基咪唑并 [1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H)-二酮( 102C)
[5S-(5α，8α，8aα)]-4-(六氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲 基咪唑并[1，5-a]吡嗪-2(3H)-基)-1-萘腈(0.030g，0.094mmol)溶 解在装在含有粗玻璃料的聚苯乙烯管中的二氯甲烷(2.0ml)中。然后 往反应容器中加入N，N-(二异丙基)氨基甲基聚苯乙烯(3.49mmol/g， 65mg)，接着加入咪唑磺酰氯(0.034g，0.19mmol)。将反应管在25 ℃振荡24小时，然后往反应容器中加入三(2-氨基乙基)胺Polystyrene HL(200-400目，3.3mmol/g，75mg)，反应容器在25℃再振荡18 小时。将液体排入到预制的(pretared)2.5ml STR管中，树脂用二 氯甲烷(3×0.25ml)冲洗。经真空浓缩后得到黄色固体粗化合物 102C (0.043g)。无需精制。HPLC：70％，1.603分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％ 磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z463.07[M+H]+。
D.[5S-(5α，8α，8aα)]-2-(4-氰基-1-萘基)-N-(4 -氟代苯基)-六氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪- 7(8H)-碳酰胺( 102D)
[5S-(5α，8α，8aα)]-4-(六氢-1，3-二氧代-5，8-亚甲基 咪唑并[1，5-a]吡嗪-2(3H)-基)-1-萘腈(0.030g，0.094mmol)溶解 在装在含有粗玻璃料的聚苯乙烯管中的二氯甲烷(2.0ml)中。然后往反 应容器中加入N，N-(二异丙基)氨基甲基聚苯乙烯(3.49mmol/g， 65mg)，接着加入异氰酸4-氟代苯基酯(0.026g，0.19mmol)。将反应 管在25℃振荡24小时，然后加入反应容器中加入三(2-氨基乙基)胺 Polystyrene HL(200-400目，3.3mmol/g，75mg)，反应容器在25℃ 再振荡18小时。将液体排入到预制的(pretared)2.5ml STR管中，树 脂用二氯甲烷(3×0.25ml)冲洗。经真空浓缩后得到黄色固体粗化合物 102D(0.058g)。无需精制。HPLC：100％，2.890分钟(停留时间)(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷 酸，4ml/分钟，在220nm处监控)，MS(ES)：m/z456.4[M+H]+。
实施例103
[5S-(5α，8 α，8aβ)]-四氢-2-(4-硝基-1-萘基)-7- (苯甲基)-5，8-亚甲基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1，3(2H，5H)-二酮
化合物 95的TFA盐(0.010g，0.022mmol)溶解在DMF(0.5ml) 中，然后加入K2CO3(0.009g，0.088mmol)和苄基溴(0.005ml， 0.044mmol)。1小时后，在真空下脱除DMF，粗产物用硅胶快速色谱 进行精制，用5％丙酮/氯仿洗脱，得到0.008g黄色固体化合物 103。 质子NMR分析表明存在一个完整的乙内酰脲(海因)环系。HPLC：100 ％，2.280分钟(停留时间)  (YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90 ％甲醇水溶液洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控)， MS(ES)：m/z461.12[M+H+MeOH]+。
实施例104至199
用类似于上述步骤制备了本发明的另一些化合物。实施例104至 199的化合物具有如下结构(L是一个键)：
其中G、X、化合物名称、停留时间、分子量及所用步骤列于表3 中。测定表3中化合物的停留时间所用的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5  ODS柱，4.6×50mm，用10-90％MeOH/H2O洗脱4分钟，含0.1 ％TFA；4ml/分钟，在220nm处监控。LCMS*＝YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用10-90％MeOH/H2O洗脱2分钟，含0.1％TFA；4mL/ 分钟，在220nm处监控LC＝YMC S5 ODS×50mm用10-90％MEOH/H2O洗脱4分钟，柱，4.6含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监控。表 3所列化合物的分子量用MS(ES)法测定，并以式m/z表示。
                      表3
实施例200至217
用类似物上述步骤制备了本发明的另一些化合物。实施例200至 217的化合物具有如下结构(L是一个键)：
其中G、X、化合物名称、停留时间、分子量及所用步骤列于表4 中。测定表4中化合物的停留时间所用的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用10-90％MeOH/H2O洗脱4分钟，含0.1 ％TFA；4ml/分钟，在220nm处监控。LCMS*＝YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用10-90％MeOH/H2O洗脱2分钟，含0.1％TFA，4ml/ 分钟，在220nm处监控。LC＝YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用10-90 ％MeOH/H2O洗脱4分钟，含0.2％磷酸，4ml/分钟，在220nm处监 控。表3所列化合物的分子量用MS(ES)法测定，并以式m/z表示。
                        表4
本申请要求来自下列的优先权：2000年6月28日提交的美国专 利申请序号60/214,392；2001年4月18日提交的美国专利申请序号 60/284,617；和2001年4月18日提交的美国专利申请序号60/284,438， 这些临时专利申请全文列为本文参考文献。