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具有化学预防活性的含NSAID的局部用药配方

阅读：836发布：2020-05-11

专利汇可以提供具有化学预防活性的含NSAID的局部用药配方专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明描述了利用非甾体类抗炎药物来预防和治疗紫外光诱导的例如人的哺乳动物的皮肤癌、癌前病变以及过度增生性疾病的化学预防方法和局部用药配方。局部用药配方中含有低剂量的非甾体类抗炎药物并可以持续规律地使用相当长的一段时间来预防这些疾病。特别地，本发明特别适合于非黑色素瘤皮肤癌，因为这些癌容易发生于历经过度阳光暴露的皮肤区域(头、颈和臂)，这意味着不需要将这种化学预防药物应用到一般患者的整个躯体上。此外，在人群中确认“高危”个体是有可能的，因为有过一次NSMC发作的人倾向于具有高的随后发作的发病率。，下面是具有化学预防活性的含NSAID的局部用药配方专利的具体信息内容。

权利要求

1.非甾体类抗炎药物在制备一种用于预防患者发生非黑色素瘤皮肤癌的局部用药配制品中的用途，其中所述局部用药配制品适于每天至少一次应用于所述患者的暴露的皮肤，其中所述局部用药配制品具有低的环氧化酶抑制活性，其中所述非甾体类抗炎药物以最高为2％w/v的浓度存在于所述局部用药配制品中并且其中所述非甾体类抗炎药物为纯化的R-氟比洛芬对映异构体。
2.根据权利要求1的用途，其中所述的非黑色素瘤皮肤癌包括基底细胞癌，且其中所述患者既往已经被诊断为患有基底细胞癌。
3.根据权利要求1的用途，其中所述的局部用药配制品包括存在于一种载体介质中的所述非甾体类抗炎药物。
4.根据权利要求1的用途，其中所述的非甾体类抗炎药物的浓度最高为1％w/v。
5.根据权利要求1的用途，其中所述的非甾体类抗炎药物的浓度最高为0.5％w/v。
6.根据权利要求3的用途，其中所述的载体介质包括水溶性凝胶。
7.根据权利要求3的用途，其中所述的载体介质包括水溶性面霜。
8.根据权利要求3的用途，其中所述的载体介质包括自由流动的洗剂。
9.根据权利要求3的用途，其中所述的载体介质包括防晒剂。
10.非甾体类抗炎药物在制备一种用于预防患者的皮肤病的局部用药配制品中的用途，其中所述的皮肤病与皮肤细胞的过度增殖相关，其中所述局部用药配制品适于每天至少一次应用到所述患者的暴露的皮肤上，且所述配制品包括含有浓度最高为2％w/v的所述非甾体类抗炎药物的载体介质，其中所述局部用药配制品具有低的环氧化酶抑制活性，并且其中所述非甾体类抗炎药物为纯化的R-氟比洛芬对映异构体。
11.根据权利要求10的用途，其中所述的载体介质包括水溶性凝胶。
12.根据权利要求10的用途，其中所述的载体介质包括水溶性面霜。
13.根据权利要求10的用途，其中所述的载体介质包括自由流动的洗剂。
14.根据权利要求10的用途，其中所述载体介质含有有效量的防晒剂。
15.根据权利要求10的用途，其中所述局部用药的载体介质在所述皮肤上连续每天应用达至少一个月是安全的。
16.根据权利要求10的用途，其中所述非甾体类抗炎药物的浓度最高为1％w/v。
17.根据权利要求10的用途，其中所述非甾体类抗炎药物的浓度最高为0.5％w/v。

说明书全文

具有化学预防活性的含NSAID的局部用药配方

[0001] 相关申请的交叉参考

[0002] 本申请要求于2002年1月25日提交的美国临时专利申请No.60/350,957和2002年12月6日提交的美国非临时专利申请No.10/310,824的优先权，在此将两者一起并入参考。

技术领域

[0003] 本发明涉及使用局部用药的药物来预防和治疗包括人在内的哺乳动物的皮肤癌和增生性皮肤病变。更具体地，本发明涉及使用局部用药的药物来预防和治疗非黑色素瘤皮肤癌，所述局部用药的药物能安全地持续应用于目标人群。

背景技术

[0004] 皮肤癌是西方人群中诊断最多的一种肿瘤。暴露于紫外光(UV光)被广泛地认为是例如鳞状上皮细胞癌和基底细胞癌等皮肤癌的发生过程中的主要致病因素，同时它也是黑色素瘤发生的危险因素。在不同的研究中已经发现UV光造成了皮肤炎症、上皮增生、以及多种与细胞增生和分化相关的基因表达的改变、类花生酸和细胞因子的生成、及生长因子的合成和效应。

[0005] 对包括鳞状上皮细胞癌及基底细胞癌的非黑色素瘤皮肤癌(“NMSC”)发病率的调查显示NMSC是一种有着显著高发病率的疾病，并且通常需要外科干预和昂贵的药物治疗。 [0006] NMSC是白种男性和女性中最为常见的肿瘤，大多数NMSC发生于大于40岁的人。具有浅色皮肤、白色或红色头发以及暴露于阳光后容易灼伤(Fitzpatrick皮肤分级1和
2)的人比黑皮肤的人更容易患NMSC。已经证实男性有着更高的危险。最近，研究已经显示在生命的最初几十年内对阳光的强暴露可能是决定性因素中最为重要的一个因素。 [0007] 相信澳大利亚的NMSC的发病率是全球最高的，这与过度地暴露于日光的紫外光照射有着因果关系。澳大利亚统计署显示每年有近270,000人被诊断为NMSC，这近乎等于澳大利亚人口的1.5％。然而，应当注意到经常不是所有的NMSC都被报告到癌症登记处，因此，每年NMSC病例的确切数目显然是更高的。白种人的NMSC发病率随着与赤道的接近程度而平行增长。在1993-1994年，NSW肿瘤中心估测澳大利亚的非黑色素瘤皮肤癌治疗的直接费用是大约2.32亿美元，远高于其他癌症。

[0008] 同样的，NMSC在美国占了所有癌症的1/3还多。在美国已经报道与皮肤癌治疗相关的医疗费用每年超过5亿美元。

[0009] 值得注意的是，所有皮肤癌的75％是基底细胞癌(“BCC”)。澳大利亚最近的人口研究显示BCC的发病率在1-2％之间。例如，在东南部昆士兰，20-69岁人口的发病率为2.4％。在南威尔士，1998年大于75岁个体的BCC发病率比50到55岁个体的发病率高将近5倍，这说明它与年龄有着相关关系。

[0010] 经计算，美国1994年BCC的发病率为0.3％，发病率以每年超过10％的速度增长以及终生发病的危险最高到30％。一些调查者目前估测，按目前的发病率，每5个美国人中就有1个在他们的整个生存期内将发生某种类型的皮肤癌。

[0011] 因此，NMSC以及特别是BCC，在全世界都有着显著的健康危险并产生了巨大的医疗消费。

[0012] 一旦患者被诊断为BCC，在之后的第一年内发生新的BCC的危险是最高的。最近发表于Archives of dermatology，2000年的Marcil和Stern对7个已发表的研究中所收集的数据的分析已经显示在诊断第一个BCC之后发生随后BCC的3年累计的危险平均为44％。因此，一个人一旦被诊断为BCC，他应当被认为是能发生新的BCC的高危人群的一部分。也发现增加了随后发生鳞状上皮癌的危险。发生随后皮肤癌的危险与既往的皮肤肿瘤的数目之间也有着强烈的关联。在一个研究中，该危险在既往NMSC少于3个的患者中为
38％，而在既往NMSC 3到9个的患者中增加到93％。因此，患者既往具有的皮肤癌越多，那么患者在将来发生皮肤癌的危险越大。

[0013] 尽管物理和化学防晒设备的应用在保护人体对紫外光的暴露上起到了重要作用，但是人群中皮肤癌的高发病率意味着需要开发其他的预防和治疗策略。特别是那些对于该威胁生命的疾病最为敏感的个体，需要一种安全而有效的预防策略。

[0014] 使用特殊的天然或合成药物(通常为非细胞毒性)用于逆转、抑制或预防癌症被称为“肿瘤的化学预防(Cancer Chemoprevention)”。一种理想的化学预防药物不仅应当是有效的，而且也应当是能够足够安全的用于目标人群，并且不造成不必要的或不可接受的毒性。重要的是药物所带来的有益作用(更低的肿瘤危险)应当与其安全性(低的不良反应危险)达到平衡。在研究中已经发现的肯定具有肿瘤化学预防作用的药物包括维生素A和绿茶对皮肤癌，以及他莫昔芬和雷洛昔芬(Raloxifene)对乳腺癌。一组已经被研究作为潜在的化学预防药物的药物是非甾体类抗炎药物(“NSAID”)。

[0015] NSAID是一组结构多变的化合物，临床上用于成功地治疗一系列与疼痛和/或炎症(包括关节疾病)相关的疾病。已知NSAID能抑制环氧化酶(“COX”)，该酶催化花生四烯酸向各种前列腺素的转化，相信该药物通过抑制COX而发挥它们的止痛和抗炎作用。在真核细胞中已经确定出两种COX酶的异构体：COX-1和COX-2。COX-1蛋白为组成型表达(也就是说它出现于正常条件下并不需要被诱导)，并参与保持内环境的稳定状态。例如，COX-1在血液凝固上有着作用并在例如胃肠道的器官中发挥保护性作用。在另一方面，COX-2蛋白是诱导型的，并参与对例如细胞因子、生长因子和UV光等各种刺激的瞬时早期的基因应答。老的NSAID例如阿斯匹林、布洛芬和氟比洛芬，抑制了两种COX形式，因而被称为非选择性NSAID。更新的药物，例如塞利西卜(celecoxib)和罗非西卜(rofexocib)，是更选择性地针对于COX-2，因而被称为COX-2选择性药物。NSAID通常能减轻皮肤炎症的能力是公认的，这可能是因为其对表皮和真皮的前列腺素生成的抑制。

[0016] 近些年以来，一些系列调查已经提供了一些NSAID可以用于某些肿瘤类型的化学预防的证据。例如，舒林酸(sulindac)和氟比洛芬，两者都是非选择性NSAID，它们可以抑制动物模型以及可能人的某些肠道肿瘤类型和前列腺癌。此外，1999年期间发表于″Carcinogenisis″的Pentlandetal的研究报告：当将COX-2抑制剂塞利西卜口服施用于小鼠后引起紫外光诱导的小鼠皮肤癌的减少。不过，塞利西卜是一种COX-2抑制剂，如果将它作为一种皮肤癌的化学预防治疗而被长期服用，它将对人造成严重的毒副作用。 [0017] 此外，授予Falk et al.的美国专利No.5,639,738和6,147,059阐述了将含有最多到3重量％的NSAID、透明质酸及其他赋形剂的局部用药的混合物用于治疗包括光化性角化症和基底细胞癌的各种皮肤病。在Falk的专利中所阐述的局部用药的混合物需要每天使用数次，持续3-4周时间，并直接应用于病变皮肤部位以帮助分解和清除病灶。然而，这些混合物不是用于预防性治疗的且不适合用作为在目标人群中长期使用的化学预防药物。

[0018] Solaraze是经核准用于局部用药治疗光化性角化症的产品的商品名，该产品目前由Bioglan Pharma，Inc上市。Solaraze是一种胶状溶液，它含有3重量％的活性成分双氯芬酸钠，即一种NSAID，并被每天两次地直接应用于光化性角化症病灶的紧邻部位。Solaraze产品虽然提供给皮肤病学家一种治疗光化性角化症病变的化学药物，但并不是能安全地连续地施用于患者的一种有效的皮肤癌和其他增生性皮肤病的化学预防药物。 [0019] 从上述的技术背景中可以清楚地看到需要一种针对NMSC的有效的化学预防药物。目前还没有这样的药物存在，否则复发率将不会是这么高。此外，需要一种能安全地施用于NMSC高危患者人群的化学预防药物。另外，仍然需要能直接应用于皮肤表面的用于预防和/或治疗皮肤癌和其他增生性皮肤病以限制药物的全身并发症的化学预防剂和药物。发明内容

[0020] 根据现有技术的上述的及其他的局限，本发明的一个目的是提供一种能安全地持续地用于目标人群并能有效地预防皮肤癌和相关病变复发的化学预防药物。 [0021] 此外，本发明的一个目的是提供一种用于预防和治疗非黑色素瘤皮肤癌的有效的化学预防性混合物，它在例如数月或数年的长时间内规律地局部用于人躯体的大多数区域是安全的。

[0022] 同样的，本发明的一个目的是提供一种应用于高危患者人群的针对非黑色素瘤皮肤癌和增生性病变的预防性治疗。

[0023] 此外，本发明的一个目的是提供一种有效地预防非黑色素瘤皮肤癌且只有低毒性的局部用药的化学预防性配方。

[0024] 同样的，本发明的一个目的是提供一种有效地预防非黑色素瘤皮肤癌且不造成全身显著的COX-1和COX-2抑制的局部用药的化学预防性配方，优选地也可局部用药。 [0025] 本发明的另一个目的是提供一种可作为诊断为非黑色素瘤皮肤癌的患者的安全处方药物并被所述患者使用的一种化学预防性产品，它可用于有过明显的紫外光暴露史的躯体的所有部位。

[0026] 为了达到本发明的这些和其他的目的，本发明来源于以下发现，即非甾体类抗炎药物的常规的局部用药剂量可以用于预防和治疗紫外光所诱导的例如人的哺乳动物的皮肤癌、癌前病变和增生性病变。

[0027] 特别是，NMSC对于根据本发明的局部用药的皮肤癌预防方法和配方的应用来说是一种理想疾病，因为这些肿瘤往往是出现于有着过度的阳光暴露的皮肤区域(头、颈和手臂)，这意味着化学预防药物不需要应用于一般患者的全身。此外，如下所示，在群体中确定出“高危”个体是有可能的，因为报告有一次NMSC发作的人往往有着随后发作的高发病率。

[0028] 本发明的一个实施方案包括用于预防患者发生非黑色素瘤皮肤癌的方法。这些方法通常需要将局部用药配方应用于上述患者的皮肤上，其中配方包括药用有效量的非甾体类抗炎药物。优选地，这些NSAID是芳基丙酸衍生物(arylpropionic acid derivatives)以及浓度最高达到大约2％w/v。

[0029] 另外，本发明的实施方案包括预防患者发生与皮肤细胞的增生相关的皮肤病的方法。这些方法包括将一种局部用药配方常规地应用于上述患者的皮肤，其中配方包括含有最多大约2％w/v NSAID的载体介质。优选地，局部用药配方的常规应用需要将配方每天至少一次应用于曾暴露于紫外光的躯体区域，例如头颈和手臂。

[0030] 此外，本发明的实施方案也涉及含有NSAID的局部用药的药物组合物。一个这样的实施方案包括一种载体介质和浓度最高大约为2％w/v的芳基丙酸衍生物类型的NSAID。另外一个这样的实施方案有着作为基本成分的一种非毒性的和可药用的惰性载体介质以及最大到近2％w/v的NSAID。

[0031] 特别适合用于本发明的实施方案的NSAID包括芳基丙酸衍生物，例如阿明洛芬、苯噁洛芬、柏莫洛芬、卡洛芬、环洛芬、酮洛芬、非诺洛芬、氟诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、氯索洛芬、微洛芬、萘普生、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和希莫洛芬。特别是，布洛芬和氟比洛芬可以被优选地用于本发明的实施方案，因为它们具有高效性和低毒性。其他类型的其他NSAID，例如舒林酸可以被应用于如下所述的本发明的实施方案中。 [0032] 本发明的优选的实施方案涉及局部使用浓度范围为最高大约2％w/v，但优选为最高大约1％w/v，最优选为最高大约0.5％w/v的氟比洛芬的方法和配方。施用这样一种配方造成了乳头瘤和皮肤癌肿块以及与紫外光暴露相关的其他皮肤病的发病率的减少(以及发病数量的减少)。局部使用的氟比洛芬的保护性作用联合于它的低毒性使得这样的根据本发明的局部药用配方成为一种抗紫外光所诱导的人皮肤癌的以及用于治疗易患皮肤癌患者的出众的化学预防药物。在此所确认的氟比洛芬的广泛的抗增殖作用表明，氟比洛芬，不管是它的外消旋形式还是它的各个的孤立的对映异构体(Enantiomer)的形式，或其他相似药物(芳基丙酸衍生物)，都能用于预防或治疗一系列皮肤表现为不正常增生的疾病。这些病变除了皮肤癌还包括银屑病和光化性角化症。

[0033] 在本发明的实施方案中，优选的局部用药配方中所采用的作为化学预防药物的NSAID具有足够低的毒性使得能在例如数月或甚至数年的长时间内被每天连续使用。特别的，优选的是所采用的NSAID具有低的环氧化酶抑制特性但同时具有高的抗增殖特性。本发明的某些优选的实施方案提供了一种能有效地预防非黑色素瘤皮肤癌的局部用药的化学预防配方，它通过将对映异构体的R-氟比洛芬用作为NSAID而不造成显著的COX-1和COX-2抑制，因为仅仅S-氟比洛芬表现出显著的COX抑制活性。

[0034] 参照于图表和举例说明的实验室实验，现在将详细地描述本发明的各种优选的实施方案。附图说明

[0035] 图1是图解地显示实验室实验测定数据的图表，它是关于局部用药的氟比洛芬对已暴露于紫外光一段时间的无毛小鼠的化学预防作用。

[0036] 图2是图解地显示实验室实验测定数据的图表，它是关于不同剂量强度的局部用药的氟比洛芬对已暴露于紫外光的无毛小鼠的化学预防作用。

[0037] 图3a到图3d是显示无毛小鼠在规律地暴露于紫外光以及用氟比洛芬化学预防治疗的不同阶段内的皮肤表现的黑白照片。

[0038] 图4是图解地显示实验室实验测定数据的图表，它是关于外消旋氟比洛芬和其各个对映异构体对癌性人皮肤细胞株的体外增殖的相对作用。

[0039] 具体实施方案

[0040] 各种研究和实验的发现都表明局部使用的含有NSAID的配方对包括人在内的哺乳动物的皮肤癌及其他增生性皮肤病的发生的有效作用，这支持了本发明。特别的，在此所述的研究和实验提示，外消旋氟比洛芬——一种已知的非选择性COX抑制剂并被广泛使用的口服NSAID——对于预防皮肤癌是特别有效的。

[0041] 下文所述的某些实验需要将无毛小鼠暴露于UV-A和UV-B的组合(接近于阳光光谱)来说明根据本发明的长期的预防作用。在此详细描述的实验中所使用的无毛小鼠已经被普遍地用作一种用于预测药物治疗对包括人在内的哺乳动物的疗效的较好的实验室测定模型。

[0042] 在所进行的第一个实验室实验中，雌性SKH-1鼠(无毛小鼠)购自西澳大利亚Murdoch大学的动物资源服务处，为近3-4周龄。在动物抵达申请人的实验室后，将小鼠饲养在气候控制的饲养笼内(22±1℃，50％湿度)，用黄色荧光灯产生12小时的亮/暗周期。所有动物容许自由地摄取啮齿动物食物和水。实验方案及所有的操作都经CSIRO保健学和营养学动物实验伦理委员会认可，并遵循澳大利亚实践标准进行用于科学目的的动物的管理和使用。在用UV光照射期间每天观察动物。在整个研究的28周内每周两次测定个体动物的体重。

[0043] 在本实验中用作为NSAID的外消旋氟比洛芬(“RS-FB”)购自Sigma化学公司(悉尼，澳大利亚)。通过将RS-FB溶解于作为载体介质的70％乙醇(水溶液)中使得RS-FB最终浓度为0.5、1.0、2.0和3.0％w/v来制备一些局部用药配方的溶液。在整个研究期间内每两周制备一次药物溶液。

[0044] 将SKH-1鼠分成5个处理组，每组30只动物。对照动物仅用载体介质(70％w/v乙醇水溶液)处理，而其他的动物组用溶解于70％乙醇的0.5％、1％、2％或3-2％w/v RS-FB处理(3-2％指的是一个鼠的处理组最初用3％w/v外消旋氟比洛芬处理，但是发现了一些不良反应的表现，因此，该处理组从研究的第10周开始接受2％w/v外消旋氟比洛芬的处理)。在每个处理组中，动物被进一步地分为每15只动物为一组的2个亚组。一个亚组在暴露于UV光一个小时之前用载体或RS-FB溶液处理。另一个亚组在暴露于UV光一个小时之后用载体或所分配的RS-FB溶液处理。每次用棉棒将大约50-125μl溶液应用于动物的背部。

[0045] 通过在一个定制的单元内将一组6个UV-A管(Sylvania F40BL)对称地排列于单个UV-B管(Philips FL 40SE)周围形成了模拟阳光照射。当动物皮肤逐渐增厚时，达到1个最小红斑剂量(MED)的暴露时间从每天7分钟增加到每天10分钟，每周5天。用IL
1700型分光辐射度计(International Light，Newburyport，MA)测定的组合的UV-B照射-4 2 -3 2
(280-320nm)为2.4×10 W/cm 及UV-A(320-400nm)为1.8×10 W/cm。在处理过程中，将各个组的鼠放置于装有UV的单元(UV housing unit)内的分隔的开放塑料笼中。没有一只鼠表现出任何皮肤过度发红、水疱形成或脱皮的证据。这种方式的处理持续了28周。 [0046] 在所有浓度最大达到2％并包括2％的局部用药的氟比洛芬中，在研究期间没有发现不良反应的表现或者在研究终末的尸解中也没有发现明显病态的证据。如上所提及的，最初用3％氟比洛芬处理的动物表现出不良反应(例如昏睡、脱水和腹泻)，随后改用
2％溶液处理。

[0047] 按乳头状瘤的肉眼外观评价皮肤癌的发生，在一个亚组中乳头状瘤随后发展为肿瘤。在出现第一个乳头状瘤后，每周进行乳头状瘤和肿瘤计数并持续到实验结束(第28周)。测定乳头状瘤和肿瘤的直径并记录下它们的部位。记录的数据代表每只动物的(a)乳头状瘤、(b)肿瘤和(c)乳头状瘤加上肿瘤的数目。本领域人员理解当从乳头状瘤自然地进展为肿瘤时，不能明确地区分乳头状瘤和肿瘤。分析数据时必须考虑到这一点。皮肤病变的外观逐步地表示为发病率(具有至少一个乳头状瘤/肿瘤的鼠的百分比)和产量(每只鼠的乳头状瘤/肿瘤的平均数目)以及负荷量(在研究结束时受到影响的皮肤面积)。 [0048] 用方差分析(ANOVA)确认出与对照(载体组)比较，施用RS-FB是否引起了乳头状瘤/肿瘤外观和产量的统计学上的显著变化。用Scheff方法进行组间比较。当p＜0.05认为有显著性差异。

[0049] 图1显示了在本实验中处理组和对照组的乳头状瘤和肿瘤产量的数据(每只动物的平均数目)，它清楚地显示作为时间(以及持续的UV暴露)函数的乳头状瘤加上肿瘤数目的逐步增长。图也显示比较于所有的外消旋氟比洛芬处理组，对照组的乳头状瘤/肿瘤数目稳定增长。从研究的第13周开始，差异(处理组和对照组之间)成为(及保持)统计学显著的(P＜0.05)，达到显著性＜0.001的水平。当数据仅仅用乳头状瘤或仅仅用肿瘤表示时也得到了相似的结果。

[0050] 图2是表示在处理22周后乳头状瘤加上肿瘤的平均数目的条线图(作为对从第13周到22周数据的典型描述)。与对照组比较，所有处理组中乳头状瘤加上肿瘤有着极为显著的减少(p＜0.001)。当单个地统计学分析其他周(第13周到第28周)的数据时也得到了相似结果。

[0051] 尽管通过比较两个亚组之间的乳头状瘤/肿瘤发病率证实参照于UV光暴露(也就是1小时前或1小时后)不论何时使用外消旋氟比洛芬都是有效的，但是显示在UV光之前局部使用外消旋氟比洛芬提供了对抗SKH-1无毛小鼠模型中的光致癌作用的更优的保护。

[0052] 用于评价本实验数据的另一个方法是监测鼠的每一个组以及每个组内50％鼠发生至少一个乳头状瘤的时间(DP50)或肿瘤的时间(DT50)。对于对照组，DP50和DT50值相应地为14和25周。对于用0.5、1、2、3-2％外消旋氟比洛芬处理的鼠，DP50是明显更长的，分别为17、17、17.5和18.5周。有趣的是，在研究终点，在0.5％、1.0％、2.0％和3-2％w/v外消旋氟比洛芬处理组相应地只有45％、25％、25％和10％动物发生至少一个肿瘤。因此，局部应用外消旋氟比洛芬的作用意味着在实验所观察的期间内有着明显更少的动物发生皮肤肿瘤。比较来自接受最高浓度氟比洛芬的动物以及对照组的数据，发现发生皮肤肿瘤的动物数目的减少超过80％。这个结果提供了明确的证据支持根据本发明的实施方案局部施用氟比洛芬所产生的益处。

[0053] 图3a是在开始根据上述实验的UV光暴露之前的无毛小鼠的“前”黑白照片。图3b到3d是在28周结束后不同组的鼠的“后”黑白照片。图3b所显示的鼠是仅仅被载体处理的对照组的代表，并表现出具有溃疡形成的高肿瘤负荷。剩下的两张图3c和3d照片相应地显示了来自1％和2％外消旋氟比洛芬处理组的典型动物。外消旋氟比洛芬所提供的减少肿瘤和溃疡的保护作用是明确的(比较于图3b中的动物)。

[0054] 申请人已经发现当局部使用外消旋混合物的非选择性NSAID时，非选择性NSAID表现出对抗哺乳动物皮肤癌变的化学预防作用，这在上述的用无毛小鼠和规律地局部施与外消旋氟比洛芬的实验中是明确的。氟比洛芬属于芳基丙酸衍生物类型的NSAID，在市场上可广泛得到外消旋物形式的氟比洛芬(也就是它们被用作为两种光学异构体或对映异构体的混合物)。本研究中所使用的氟比洛芬是R-氟比洛芬和S-氟比洛芬的等量混合物。氟比洛芬经核准被用作止痛药和用于炎性病变。

[0055] 另外，应当注意到与氟比洛芬相似的NSAID，例如那些NSAID的芳基丙酸类型的NSAID以及包括但不局限于阿明洛芬、苯噁洛芬、柏莫洛芬、卡洛芬、环洛芬、酮洛芬、非诺洛芬、氟诺洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、氯索洛芬、微洛芬、萘普生、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和希莫洛芬，当将它们局部使用后，预计它们的外消旋物和单个的对映异构体对哺乳动物都有着相似的化学预防和抗增殖活性。

[0056] 在此所描述的实验中，没有使用化学引发剂或增强剂，因为这些物质中的一些，特别是TPA，已知能造成对细胞的自由基损伤，因此它们可能不是一个UV诱导的人皮肤癌的合适模型。用于证实本发明的实验单单采用UV照射。所使用的混合光谱非常接近日光照射。

[0057] 在用于证实本发明的实验中，发现在无口服药物时外消旋氟比洛芬提供了对抗皮肤癌发生的显著的保护作用。保护作用表现为乳头状瘤和肿瘤生成的减少以及肿瘤发生时间的延迟。虽然并无意于局限在任何特殊的作用途径，但相信氟比洛芬获得的出色的结果可能是因为，局部施用外消旋氟比洛芬与全身口服施用策略相比是更为有效的。这似乎是因为药物被直接转送到UV诱导的致癌作用的部位。另外，因为例如胃溃疡的不良反应限制了口服COX抑制剂的剂量，这可能减弱先前所报道的作用。

[0058] 重要的是，本发明认识到氟比洛芬所引起的COX抑制是立体构像选择性的，其中(S)-对映异构体能通过抑制COX异构体而抑制前列腺素的合成，而R-对映异构体基本上没有COX抑制活性。包括体外实验室测定的另一个实验提供了表明氟比洛芬的单个对映异构体在抑制人皮肤癌细胞增生的能力上是同等有效的证据。

[0059] 图4是图解地显示关于外消旋氟比洛芬和它的单个对映异构体，R-氟比洛芬(“R-FB”)和S-氟比洛芬(“S-FB”)对癌性人皮肤细胞株体外增殖的相对作用的实验室实验测定数据的图表。对于下面的实验，利用MTS比色测定法体外研究了非色素性人皮肤癌细胞株MM96L并测定了细胞增生。也用DNA片段化检测、吖啶橙染色和流式细胞仪测定凋亡和细胞周期效应。如图4中所描述的数据可见，外消旋氟比洛芬以及它的两种对映异构体都很好地抑制了两种细胞株的增生速度和诱导了凋亡(显示了已经暴露于处理24小时的细胞的数据)。另一个重要的发现是在氟比洛芬对映异构体的抗增殖作用之间没有差异，尽管事实是只有S-异构体能降低COX活性。

[0060] 因此，两种氟比洛芬的对映异构体都可以引起所观察到的外消旋氟比洛芬的化学预防作用。这提出一种可能就是局部用药的外消旋氟比洛芬的化学预防作用可能是起自于不涉及COX抑制的机理。这也提出了一种可能就是在用于预防或治疗皮肤癌的局部用药配方中可使用任何一种氟比洛芬对映异构体。因此，本领域的任何一个人员都容易理解，使用纯的对映异构体形式的氟比洛芬预计有着许多潜在的优点。纯的对映异构体的使用使得使用者只暴露于最大活性的异构体，这明显地减少了所需的总剂量以及这样不会让使用者暴露于配方中所不必要的成分。也可以避免配方中所没有包含的对映异构体(或对映异构体的代谢物)所介导的不良反应。

[0061] 和本领域人员所明白的那样，对于在本发明优选的实施方案中使用氟比洛芬最令人感兴趣的因素之一是可能将治疗作用和毒性作用分开的能力。在制药领域通常接受的与NSAID使用所相关的毒性作用是因为对COX的抑制(特别是对COX-1的抑制)，特别是对胃肠道和肾脏的毒性作用。因此，局部使用药物可以在预计的作用部位具有高水平的药物，而在重要的中毒部位具有相对更低的水平。此外，使用R-氟比洛芬对映异构体(具有弱的COX抑制)可以出现治疗作用而不出现COX抑制的毒性作用。然而还不清楚在上述的无毛小鼠实验中用3％w/v的最高初始处理浓度的外消旋氟比洛芬时所观察到的不良反应是否是因为其对COX活性的抑制，推断这可能是因为这个因素是合乎情理的。因此，假定发现氟比洛芬的R-对映异构体具有与S-对映异构体相似的显著的抗增殖活性的正性作用，以及已经发现了在口服剂量后R-氟比洛芬在一些类型的动物肠道和前列腺肿瘤中发挥了化学预防活性的事实，可以推断在用局部用药的R-氟比洛芬的附加的光致癌作用的实验中可以获得相似的结果。因此根据本发明的实施方案将优选采用氟比洛芬的R-对映异构体的局部治疗(也就是不抑制COX活性的对映异构体)，因为它减少了潜在的毒性危险。 [0062] 上述的各个实验都已经表明当将外消旋氟比洛芬及它的单个的对映异构体暴露于快速分裂的人皮肤癌细胞时，它们将引发抗增殖(凋亡)作用(见图4)。它们也表明当将外消旋氟比洛芬局部应用到暴露于UV光的小鼠时，它们预防了特定的所关心的增生性疾病(皮肤癌)的发生(见图1到图3d)。这支持当局部使用时氟比洛芬预防其他的以过度增殖状态为特征的皮肤疾病的作用。这些疾病包括但不局限于角化过度症、银屑病、光化性角化症和脂溢性皮炎。

[0063] 进行与上面关于图4所讨论的实验相似的进一步的实验，以评价其他NSAID对人皮肤细胞的抗增殖作用。从这些实验中所收集到的数据显示阿斯匹林、舒林酸和布洛芬(布洛芬的两种R和S异构体)在和氟比洛芬所发现的相似的浓度表现出抗增殖作用。例如，R-和S-布洛芬的IC50值(抑制50％细胞增殖所需的浓度)分别是1.49和1.50mM，阿斯匹林是0.97到5.53mM(依赖于暴露的持续时间)以及舒林酸为1.03到2.16mM。这些值与氟比洛芬的值相似。

[0064] 这些结果表明NSAID的抗增殖作用不局限于芳基丙酸类型。事实上，有可能的是对于预防皮肤癌所需的局部的抗增殖作用是NSAID所共有的一种特性，而与它们的结构类型无关。这包括以下类型以及每个类型中的实例(来自Goodman and Gilman′s′The pharmacological basis oftherapeutics′，Ninth Edition，McGraw Hill，New York，page621，1996)：

[0065] 1.水杨酸衍生物，包括阿斯匹林、水杨酸钠、二氟尼柳、水杨酸偶氮磺胺吡啶、奥沙拉秦、阿斯匹林

[0066] 2.对氨基酚衍生物，包括扑热息痛

[0067] 3.吲哚乙酸和茚乙酸类，包括吲哚美辛、舒林酸和依托度酸

[0068] 4.异芳基乙酸类(Heteroaryl acetic acids)，包括双氯芬酸、托美汀和酮咯酸 [0069] 5.芳基丙酸类，包括布洛芬、萘普生、氟比洛芬、酮洛芬、非诺洛芬、舒洛芬、阿明洛芬、苯噁洛芬、卡洛芬、环洛芬、氟诺洛芬、吲哚洛芬、氯索洛芬、微洛芬、吡洛芬、普拉洛芬、噻洛芬酸和希莫洛芬

[0070] 6.氨基苯甲酸类(fenemates)，包括甲芬那酸和氟芬那酸

[0071] 7.烯醇酸类，包括吡罗昔康、替诺昔康、布他酮

[0072] 8.Alkanones，包括萘丁美酮

[0073] 当其中上述化合物以多种异构体形式(结构的或光学的)存在，可以合理地推测所有异构体的形式都能引发所需的抗增殖特性。

[0074] 此外，从这些实验中得到的数据显示氟比洛芬、阿斯匹林、舒林酸和布洛芬的体外抗增殖所生成的IC50值与这些NSAID作为环氧化酶抑制剂的相对能力无关。这个结果被以下发现进一步证实，即虽然仅仅(S)-氟比洛芬能抑制环氧化酶，但两种氟比洛芬对映异构体在减慢细胞生长上具有同等的活性。

[0075] 由于细胞增殖作用可能表现出与环氧化酶抑制无关的机制，因此，根据本发明的治疗和预防方法以及局部药用配方提供了一种相对安全的局部治疗，其通过使用这些具有最弱的环氧化酶抑制作用的NSAID(例如，布洛芬、舒林酸、氟比洛芬)来预防皮肤疾病，例如NMSC。按照这个方法，被吸收入血的少量的局部用药剂量所可能引发的潜在的不良反应将被最小化。

[0076] 虽然在上述的实验中，将NSAID应用到皮肤的溶液形式中使用了70％w/v乙醇溶液，但是本领域的任一人员知道也可以用其他的局部用药溶液(有和无乙醇)以及配方，包括面霜、凝胶、软膏、油以及微包囊和脂质体等转运所采用的活性NSAID。例如，在本发明的一个优选实施方案中，药用有效量的外消旋氟比洛芬可存在于用于预防发生UV诱导的皮肤损伤和UV诱导的皮肤癌的防晒乳中(也就是联合于UV阻断剂)。

[0077] 多种载体介质可适合用于局部施与用于预防皮肤癌的氟比洛芬(或其他的NSAID或它们的异构体)。这些介质包括软膏、面霜、凝胶、胶冻或其他的介质。理想的局部用药配方的性质将是容易应用于适当的大面积的有毛和无毛皮肤，要求最小的摩擦以及在皮肤表面留下的残留量最少。含有活性成分(单独或组合)的水溶性凝胶(water-miscible gel)将是这些配方的一个实例。下面提供了一些将1％w/v氟比洛芬作为NSAID成分的可能的局部用药配方的实例。

[0078] 实施例1

[0079] 一种含有下面表1的成分的合适的水溶性凝胶的配方

[0080] 氟比洛芬 1％

[0081] 西黄蓍胶(Tragacanth) 2.5％

[0082] 甘油 25％

[0083] 异丙醇 5％

[0084] 苯甲醇 1％

[0085] 纯化水到100％

[0086] 表1

[0087] 为了制备凝胶，将西黄蓍胶和甘油混合并添加绝大部分的纯化水。加热到沸腾并冷却，在冷却过程中进行混合。将氟比洛芬与异丙醇混合。混合水和醇相并添加苯甲醇，以及添加水到规定容积。在上述配方中，应当知道可以用布洛芬、萘普生或其他任何的在此描述的NSAID替换氟比洛芬。另外，应当知道可以调整NSAID浓度在药用上是安全的和有效的范围内。可以调整一个或所有成分的百分比数量使得能提供一种适宜的产品。对于局部用药，用适当方法消毒产品。

[0088] 实施例2

[0089] 下面的表2提供了另一种根据本发明的合适的凝胶配方。

[0090] 氟比洛芬 1％

[0091] 甘油 30％

[0092] Carbopol 934 0.5％

[0093] 异丙醇 2％

[0094] 苯甲醇 1％

[0095] 纯化水到100％

[0096] 表2

[0097] 按与实施例1的凝胶相似的方法制备这种凝胶。

[0098] 实施例3

[0099] 例如Aqueous Cream APF的水溶性面霜将是一种作为氟比洛芬或相关化合物的载体的合适的基于乳剂的配方。在这个实施例中，将采用下面表3所提供的配方。 [0100] 氟比洛芬 1％

[0101] 乳化软膏 30％

[0102] 甘油 5％

[0103] 苯氧乙醇 1％

[0104] 无菌水到100％

[0105] 表3

[0106] 在本实施例中，通过分开加热水相(甘油、水、苯氧乙醇)和油相(emulsifying ointment)到约60℃，混合并搅拌直到冷却来制备面霜基质。氟比洛芬可以通过混合到油相中或通过与最终的面霜基质水磨(levigation)而被加入到其中。

[0107] 实施例4

[0108] 另一种适合的配方为含有如下面表4的配方的自由流动的洗剂。

[0109] 氟比洛芬 1％

[0110] cetomacrogol 乳化蜡 3％

[0111] 液体石蜡 10％

[0112] 甘油 10％

[0113] 氯己定葡糖酸盐 0.02％

[0114] 无菌水到100％

[0115] 表4

[0116] 通过在60℃将乳化蜡熔化于液体石蜡中可以制备表4的配方。将含有甘油和氯己定的水相加温到相同的温度，混合两相并用温水调整到规定体积。同样地，氟比洛芬可通过水磨或通过在加热过程中加入到油相中而添加。

[0117] 本发明的优选的实施方案描述如上，本领域人员可以容易地知道，只要不脱离或根本性地改变在后面所请求保护的本发明的范围就可以对本发明进行许多非实质性的修改。

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具有化学预防活性的含NSAID的局部用药配方

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