在国际专利申请PCT/EP03/11762与PCT/EP2005/003094中，并在US 2005/0215576中，CGRP拮抗剂已经被描述用于治疗偏头痛。
发明详述
在第一个实施方案中，在上述通式I中， B表示选自以下的基团


R1与R2和所相连(enclosed)的氮原子一起表示通式II基团

其中
Y1表示碳原子，或如果R4表示自由电子对，则其也表示氮原子，
R3表示环戊基、环己基或环庚基，或
R3表示杂环，选自吗啉-4-基、1，1-二氧代-硫吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌
啶-4-基、哌嗪-1-基或吡咯烷-1-基，
其中上述在环中的单环状杂环可被羟基、甲基、乙基、三氟甲基、羟 甲基或羟乙基单-或二-取代，或可任选另外被羟基环丙基、三氟甲基羰 基甲基、氨基、羧基-羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基-羰基、羧甲基、 羧乙基、乙氧基羰基甲基、乙氧基羰基乙基、羧基-乙基羰基、乙氧基 羰基-乙基羰基、氨基磺酰基、甲基氨基磺酰基、二甲基氨基磺酰基、 甲基磺酰基、乙基磺酰基、异丙基磺酰基、环丙基磺酰基、(羟基氨基)- 羰基甲基、羟基-(甲基)-氨基羰基-甲基或甲氧基氨基羰基-甲基单取代， 其中取代基可相同或不同，且可结合至环碳或环氮原子上，或 在环中的上述单环状杂环可被羧基单取代，如果羧基不是通过氮原子 结合时，且
R4，如果Y1表示碳原子时，表示氢原子，或
R4，如果Y1表示氮原子时，表示自由电子对， 其互变异构体、非对映异构体、对映异构体、水合物，其混合物，及其盐， 以及所述盐的水合物，尤其是其与无机或有机酸或碱形成的生理学上可接 受盐。
例如，作为上述通式I的最优选的化合物是下列化合物：































其对映异构体、非对映异构体、水合物，其混合物，及其盐，以及所述盐 的水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受盐。
上述通式I的其他的优选的化合物是选自以下的化合物：
(1)，(2)，(3)，(4)，(5)，(6)，(7)，(8)，(9)，(10)，(11)，(12)，(13)，(14)， (15)，(16)，(17)，(18)，(19)，(20)，(21)，(22)，(23)，(24)，(25)，(26)，(27)， (28)，(29)，(30)，(31)，(32)，(33)，(34)，(35)，(36)，(37)，(38)，(39)，(40)， (41)，(42)，(43)，(44)，(45)，(46)，(47)，(48)，(49)，(50)，(51)，(52)，(53)， (54)，(55)，(56)，(57)，(58)，(59)，(60)，(61)，(62)，(63)，(64)，(65)，(66)， (67)，(68)，(69)，(70)，(71)，(72)，(73)，(74)，(75)，(76)，(77)，(78)，(79)， (80)和(81)，
其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(82)，(83)，(84)，(85)，(86)，(87)，(88)，(89)，(90)，(91)，(92)，(93)，(94)， (95)，(96)，(97)，(98)，(99)，(100)，(101)，(102)，(103)，(104)，(105)， (106)，(107)，(108)，(109)，(110)，(111)，(112)，(113)，(114)，(115)，(116)， (117)，(118)，(119)，(120)，(121)，(122)，(123)，(124)，(125)，(126)，(127)， (128)，(129)，(130)，(131)，(132)，(133)，(134)，(135)，(136)，(137)，(138)， (139)，(140)，(141)，(142)，(143)，(144)，(145)，(146)，(147)，(148)，(149)， (150)，(151)，(152)，(153)，(154)，(155)，(156)，(157)，(158)，(159)，(160)， (161)和(162)，
其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(163)，(164)，(165)，(166)，(167)，(168)，(169)，(170)，(171)，(172)，(173)， (174)，(175)，(176)，(177)，(178)，(179)，(180)，(181)，(182)，(183)，(184)， (185)，(186)，(187)，(188)，(189)，(190)，(191)，(192)，(193)，(194)，(195)， (196)，(197)，(198)，(199)，(200)，(201)，(202)，(203)，(204)，(205)，(206)， (207)，(208)，(209)，(210)，(211)，(212)，(213)，(214)，(215)，(216)，(217)， (218)，(219)，(220)，(221)，(222)，(223)，(224)，(225)，(226)，(227)，(228)， (229)，(230)，(231)，(232)，(233)，(234)，(235)，(236)，(237)，(238)，(239)， (240)，(241)，(242)和(243)，
其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(244)，(245)，(246)，(247)，(248)，(249)，(250)，(251)，(252)，(253)，(254)， (255)，(256)，(257)，(258)，(259)，(260)，(261)和(262)，
其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(263)，(264)，(265)，(266)，(267)，(268)，(269)，(270)，(271)，(272)，(273)， (274)，(275)，(276)，(277)，(278)，(279)，(280)和(281)，
其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐以及所述盐的水 合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(282)，(283)，(284)，(285)，(286)，(287)，(288)，(289)，(290)，(291)，(292) 和(293)
其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(294)，(295)，(296)，(297)，(298)，(299)，(300)，(301)，(302)，(303)，(304) 和(305)，
其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(306)，(307)，(308)，(309)，(310)，(311)，(312)，(313)，(314)，(315)和(316)， 其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
作为上述通式I的另外优选的化合物是选自下列的化合物：
(317)，(318)，(319)，(320)，(321)，(322)，(323)，(324)，(325)，(326)和(327)， 其对映异构体、非对映异构体、水合物、其混合物及其盐，以及所述盐的 水合物，尤其是其与无机或有机酸类或碱形成的生理学上可接受的盐。
所使用的术语与定义
在本申请案的范围内，在可能的取代基的定义中，其也可以以结构式 形式表示。应明了在取代基结构式中的星号(*)是作为与分子其余部分的连 结点。
也被包含在本发明主题内的，是根据本发明的化合物，包括其盐，其 中一个或多个氢原子，例如一、二、三、四或五个氢原子被氘置换。
通式I化合物可具有酸基团，主要为羧基，及/或碱性基团，例如氨基 官能团。通式I化合物可因此以内盐存在，作为具有药学上可使用的无机酸 加成盐，无机酸例如氢溴酸、磷酸、硝酸、盐酸、硫酸、甲烷磺酸、乙烷 磺酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸，或与有机酸形成的加成盐，有机酸例如苹果 酸、琥珀酸、乙酸、富马酸、马来酸、扁桃酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸， 或作为与药学上可使用碱形成的盐，该碱类如碱金属或碱土金属的氢氧化 物，例如氢氧化钠或氢氧化钾，或碳酸盐类，氨，氢氧化锌或氢氧化铵， 或有机胺类，例如是二乙胺、三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环 己胺、二环己基胺等。
如前文所指出，式I化合物可转化成其盐，尤其是供医药用途，成为 其生理学上与药理学上可接受的盐。这种盐一方面可呈式I化合物与无机或 有机的酸类的生理学上与药理学上可接受的酸加成盐形式。另一方面，如 果B含有酚性的OH基，则式I化合物也可通过与无机碱反应，而转化成生 理学上与药理学上可接受的盐，碱金属或碱土金属阳离子作为抗衡离子。 为制备酸加成盐可使用例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲烷磺酸、乙酸、 富马酸、琥珀酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸或马来酸制备。此外也可使用上 述所提及的酸类的混合物。为制备式I化合物的碱金属与碱土金属盐优选使 用碱金属与碱土金属的氢氧化物与氢化物，其中碱土金属尤其是钠与钾的 氢氧化物与氢化物，为优选，而氢氧化钠与氢氧化钾为特优选。
根据本发明的化合物如果其仅具有一个手性元素，则可以外消旋体存 在，但其也可以纯的对映异构体获得，即呈(R)或(S)形式。优选化合物是以 外消旋体或以(R)形式存在。
但是，本申请也包括存在的个别非对映异构体的对映体对或其混合物， 其在通式I化合物中有超过一个手性原子时存在，以及其中构成上述所提及 外消旋体的个别光活性对映异构体。
本发明涉及各种化合物，任选其呈个别光学异构体、个别对映异构体 的混合物或外消旋体形式，呈互变异构体形式以及呈游离态碱形式或其与 药理学上可接受酸类的相应酸加成盐-例如与氢卤酸-例如氢氯酸或氢溴酸 或有机酸类-例如草酸、富马酸、二甘醇酸或甲烷磺酸形成的酸加成盐。
制备方法
通式I化合物原则上是按已经知方法制备。下述方法已经证实特别适 于制备根据本发明的通式I化合物：
(a)为制备其中所有基团均如前文所给出义的通式I化合物：使式III 哌啶

与通式IV碳酸衍生物反应

其中Y2与Y3表示离核性基团(nucleofugic group)，其可相同或不同，优选为 氯原子、对-硝基苯氧基或三氯甲氧基，
及与通式V化合物反应

其中B是如前文定义，且Z1表示羧基保护基，例如C1-6-烷基或苄基，其中 烷基可为直链或支链，且苄基可被一或两个甲氧基取代。Z1优选表示甲基、 乙基、叔丁基或苄基。
在第一个步骤中，在溶剂中，例如在二氯甲烷、THF、吡啶或其混合 物中，通式III化合物在-20至50℃之间的温度下，在碱存在下，例如三乙 胺、吡啶或乙基二异丙基胺，与通式IV碳酸衍生物反应。所形成的中间物 可经纯化或进一步反应而无需纯化。这中间步骤的反应物与通式V化合物 在上述所提及的溶剂之一中，且在前文所指定的温度下，在有碱如三乙胺 或吡啶存在下，添加或未添加活性试剂，例如4-二甲基氨基吡啶进行反应。 为使彼等活化，通式V化合物亦可利用金属氢化物例如NaH或KH去质子 化，在此种情况中，无需存在碱或活性试剂。
起始的式III与IV化合物可市购获得，或可由文献已经知，或可按文 献上已经知方法制成。
制备通式III化合物的方法描述在例如EP 1 619 187 A1中。
(b)为制备通式I化合物，其中所有基团均如前文定义：使通式VI羧 酸

其中B如前文定义，与通式VII胺偶联
H-NR1R2，
其中R1与R2均如前文定义。在进行反应前，存在于通式VII胺的基团R1 与R2中的任何羧酸官能团、伯或仲氨基或羟基官能团，可被常规的保护基 保护，且所使用的任何保护基可在反应后，按专业人员所熟悉的方法再一 次裂解。
偶联优选可使用由肽化学中已经知方法进行(参阅，例如Houben-Weyl， Methoden der Organischen Chemie，第15/2卷)，例如使用碳二亚胺，如二环 己基碳二亚胺(DCC)，二异丙基碳二亚胺(DIC)或乙基-(3-二甲基氨基丙基)- 碳二亚胺，六氟磷酸O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(HBTU) 或其四氟硼酸盐(TBTU)，或六氟磷酸1H-苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨 基)-鏻(BOP)。通过添加1-羟基苯并三唑(HOBt)或3-羟基-4-氧代-3，4-二氢 -1，2，3-苯并三嗪(HOObt)，可增加反应速度。这些偶联通常是以等摩尔量的 偶联成份以及偶联试剂，在溶剂中，如二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、二甲 基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或其混合物， 并在-30℃与+30℃间，较优选为-20℃与+25℃的温度下进行。如果必要，优 选使用N-乙基-二异丙基胺(Hunig氏碱)作为另一种助碱。
使用所谓“酸酐方法”作为另一种偶联方法，以合成通式(I)化合物(也 参阅：M.Bodanszky，“肽化学”，Springer-Verlag1988，第58-59页；M. Bodanszky，“肽合成的原理”，Springer-Verlag1984，第21-27页)。在Vaughan 变异方法中混合酸酐方法为优选的(J.R.Vaughan Jr.，J.Amer.Chem.Soc.73， 3547(1951))，其中由要偶合的通式VI羧酸与碳酸单异丁酯的混合酸酐，是 在碱如4-甲基吗啉或4-乙基吗啉存在下使用氯碳酸异丁酯而获得。此混合 酸酐的制备及与通式VII胺类的偶合，是在单锅方法(one-pot process)中，使 用上述溶剂，并在-20与+25℃之间，较优选为0℃与+25℃间的温度下进行。
(c)为制备其中所有基团均如前文定义的通式I化合物：使通式VIII 化合物

其中B如前文所给出义，且Nu表示离去基，例如卤原子，如氯、溴或碘原 子，在烷基部分具有1至10个碳原子的烷基磺酰氧基，任选被氯或溴原子 或被甲基或硝基单-、二-或三取代的苯基磺酰氧基或萘基磺酰氧基，其中取 代基可相同或不同，1H-咪唑-1-基，任选在碳骨架中被一或两个甲基取代的， 1H-吡唑-1-基、1H-1，2，4-三唑-1-基、1H-1，2，3-三唑-1-基、1H-1，2，3，4-四唑-1- 基、乙烯基、炔丙基、对-硝基苯基、2，4-二硝基苯基、三氯苯基、五氯苯基、 五氟苯基、吡喃基或吡啶基、二甲基氨基氧基(dimethylaminyloxy)、2-(1H)- 氧代吡啶-1-基-氧基、2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基、邻苯二甲酰亚氨基氧基、 1H-苯并-三唑-1-基氧基或叠氮基团，与通式VII胺偶联
H-NR1R2，
其中R1与R2均如前文所给出义。
在进行反应前，在通式VII胺的基团R1与R2中必要时存在的羧酸官能 团、伯或仲氨基或羟基官能团，可被常规的保护基保护，且在反应后，所 使用的任何保护基可按专业人员所熟悉的方法再一次裂解。
此反应是在Schotten-Baumann或Einhorn条件下进行，意即，使各成分 在至少有一当量的辅助碱存在下，在-50℃与+120℃，优选为-10℃与+30℃ 间的温度下，并任选在有溶剂存在下进行反应。所用的辅助碱优选为碱金 属与碱土金属的氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡，碱金属 碳酸盐，例如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯，碱金属乙酸盐，例如乙酸钠或钾， 以及叔胺类，例如吡啶、2，4，6-三甲基吡啶、喹啉、三乙胺、N-乙基-二异丙 基胺、N-乙基-二环己基胺、1，4-二氮杂双环[2，2，2]辛烷或1，8-二氮杂-双环 [5，4，0]十一-7-烯，所用的溶剂可为例如二氯甲烷、四氢呋喃、1，4-二噁烷、 乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮或其混合物；如果 碱金属或碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐或乙酸盐用作辅助碱，则也可 将水作为共溶剂添加至反应混合物中。
根据本发明的新颖通式I化合物含有一或多个手性中心。例如，如果 有两个手性中心，则化合物可以两对非对映异构对映体的形式存在。本发 明包含个别异构体以及其混合物。
非对映异构体的分离可基于其不同物理-化学性质，例如由适当溶剂中 通过分级结晶，通过使用手性，或优选为非手性固定相的高压液相色谱或 柱层析。
被通式I所包含的外消旋体的分离可例如可在适当的手性固定相(例如 手性AGP、Chiralpak AD)上用HPLC进行。含有碱性或酸性官能团的外消 旋体也可经由非对映异构体、光学活性盐进行分离，该盐是在与光学活性 酸，例如(+)或(-)酒石酸、(+)或(-)-二乙酰基酒石酸、(+)或(-)酒石酸单甲酯 或(+)或(-)-樟脑磺酸，或光学活性碱，例如与(R)-(+)-1-苯基乙胺、(S)-(-)-1- 苯基乙胺或(S)-番木鳌碱反应时所产生。
根据分离异构体的常规方法，是使通式I化合物的外消旋体，与等摩 尔量的上述光学活性酸或碱之一，在溶剂中反应，并将其所形成的结晶性 非对映异构体光学活性盐，利用其不同溶解度而分离。这反应可在任何类 型的溶剂中进行，其条件是以盐的溶解度是充分不同。优选为使用甲醇、 乙醇或其例如比例为50∶50体积比的混合物。然后，使各光学活性盐溶于水 中，以碱，例如碳酸钠或碳酸钾，或以适当酸，例如以稀盐酸或甲烷磺酸 水溶液，小心地中和，因而获得其相应的，呈(+)或(-)形式的游离态化合物。
被通式I所包含的单独(R)或(S)对映异构体，或两种光学活性非对映异 构化合物的混合物，也可以呈(R)或(S)构型的反应成份，进行上述合成而获 得。
合成所需要的通式V羟基羧酸

其中B是如前文定义，且Z1表示羧基保护基，例如C1-6-烷基或苄基，其中 烷基可为直链或支链，且苄基可被一或两个甲氧基取代。其中Z1优选表示 甲基、乙基、叔丁基或苄基，可得自通式IX化合物

其中B是如前文定义。
通过以适当重氮化试剂，较优选为亚硝酸钠，在酸性介质中，使通式 IX化合物重氮化，可获得通式V化合物。当使用对映异构体纯的化合物时， 是获得其相应的对映异构体纯的羟基羧酸化合物，此反应是在保留构型下 进行。
获得通式V化合物的另一方法，包括使通式X醛

其中B是如前文定义，与N-乙酰基甘氨酸，在作为溶剂的乙酸酐中，在有 碱金属乙酸盐存在下，优选为乙酸钠或乙酸钾，在适当温度下，优选在80 至130℃下进行反应。
初始形成的吖内酯(azlactone)是未经分离而经水解，以形成通式XI化 合物

其中B是如前文定义。
在有含水无机酸类存在下，例如硫酸、磷酸或盐酸，优选为盐酸，通 过进一步反应，获得通式XII化合物

其中B是如前文定义。然后，使这以适当还原剂转化成通式V化合物。
适当还原剂为碱金属硼氢化物，如硼氢化钠或硼氢化钾。其他适当还 原剂为氯基二烷基硼烷，例如氯基二环己基硼烷。如果使用手性氯代二烷 基硼烷，如B-氯代二异检蒎基硼烷(B-chlorodiisopinocampheylborane)，则通 式V化合物可以以对映异构体上纯方式分离。
其中Z1表示氢原子的通式V化合物的进一步反应，成为通式V化合物， 其中Z1是如前文定义，接着在醇的介质中，优选在甲醇或乙醇中，在有适 当酸如盐酸存在下进行。反应可替代地在醇的溶剂中，优选在甲醇，通过 与亚硫酰氯反应而进行。
另一种获得通式V化合物的方法，包括将式XIII化合物

以通式XIV的芳基-或杂芳基-甲基卤化物进行烷基化

其中Hal表示氯、溴或碘原子，且B如前文定义，类似文献上已经知的方 法(Michael T.Crimmins，Kyle A，Emmitte及Jason D.Katz，Org.Lett.2， 2165-2167[2000])。所形成的非对映异构体产物可接着使用物理化学方法分 离，优选通过层析方法或再结晶作用分离。手性辅助剂的水解裂解，及使 苄基保护基裂解，同样提供获得通式V对映异构体纯的羟基羧酸化合物的 方法。
含有伯氨或仲氨基、羟基或羟羰基官能团的所有通式I化合物，优选 是由具有保护基的前体获得。氨基官能团保护基的实例包括如苄氧基羰基、 2-硝基苄氧基羰基、4-硝基-苄氧基羰基、4-甲氧基-苄氧基羰基、2-氯-苄氧 基羰基、3-氯-苄氧基羰基、4-氯-苄氧基羰基、4-联苯基-α，α-二甲基-苄氧基 羰基或3，5-二甲氧基-α，α-二甲基-苄氧基羰基，烷基部分具有总共1至5个 碳原子的烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、正-丙氧基羰基、异 丙氧基羰基、正-丁氧基羰基、1-甲基丙氧基羰基、2-甲基丙氧基-羰基或叔- 丁氧基羰基，烯丙氧基羰基、2，2，2-三氯-(1，1-二甲基乙氧基)羰基或9-芴基 甲氧基羰基，或甲酰基、乙酰基或三氟乙酰基。
羟基官能团保护基的实例包括三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三 异丙基、叔丁基二甲基甲硅烷基或叔丁基二苯基甲硅烷基，叔丁基、苄基、 4-甲氧基苄基或3，4-二甲氧基苄基。羟羰基官能团的保护基可为例如具有总 共1至5个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、 叔丁基、烯丙基、2，2，2-三氯乙基、苄基或4-甲氧基苄基。
新颖通式I化合物及其生理学上可接受的盐具有有价值的药理学性质， 基于其选择性CGRP-拮抗性质。本发明进一步涉及含有这些化合物的药物， 其用途及其制备。
上述所提及的新颖化合物及其生理学上可接受的盐，具有CGRP-拮抗 性质，且在CGRP受体结合研究中显示良好亲和力。这些化合物在后文所 述的药理学试验系统中，显示CGRP-拮抗性质。
进行下述实验，以证实上述所提及的化合物对于人类CGRP受体的亲 和力及其拮抗性质：
A.与SK-N-MC细胞(表达人CGRP受体)的结合研究
将SK-N-MC细胞在“Dulbecco氏改性Eagle培养基”中培养。自铺满 培养物中移除培养基。将细胞以PBS缓冲剂(Gibco041-04190M)洗涤两次， 通过添加已经与0.02％EDTA混合的PBS缓冲剂而脱离，并通过离心分离。 再悬浮在20毫升“平衡盐溶液”[BSS(以mM表示)：NaCl120，KCl5.4， NaHCO316.2，MgSO40.8，NaHPO41.0，CaCl21.8，D-葡萄糖5.5，HEPES30， pH7.40]中之后，使细胞在100×g下离心两次，并再悬浮于BSS中。在已经 经测得细胞数目后，使用Ultra-Turrax使细胞均化，并在3000×g下离心10 分钟。弃去上层清液，并使这沉淀在富含1％牛血清白蛋白与0.1％杆菌肽的 Tris缓冲液(10mM Tris，50mM NaCl，5mM MgCl2，1mM EDTA，pH7.40) 中再离心，并再悬浮(1毫升/1000000个细胞)。使均化物在-80下冷冻。细 胞膜制剂在这条件下，稳定超过6周。
在解冻后，将均化物以测试缓冲液(50mM Tris，150mM NaCl，5mM MgCl2，1mM EDTA，pH7.40)以1∶10稀释，并以Ultra-Turrax均化30秒。 使230微升的均化物在环境温度下，与50pM125I-碘基酪氨酰基-降钙素-基 因-相关肽(Amersham)，及总体积250微升中的渐增浓度的待测物质培养180 分钟。使用细胞采集器，通过经以聚乙烯亚胺(0.1％)处理的GF/B-玻璃纤维 滤器快速过滤，使培养停止。使用γ计数器测量在蛋白质上结合的放射性。 非特异性结合是被定义为在培养期间，在1μM人类CGRP-α存在下的结合 放射活性。
浓度结合曲线是使用计算机辅助的非线性曲线配合进行分析。
在所述试验中，前文所提及的化合物显示的IC50值≤10000nM。
B.在SK-N-MC细胞中的CGRP拮抗作用
将SK-N-MC细胞(1百万个细胞)以250微升培养缓冲剂(Hanks’HEPES， 1mM3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，1％BSA，pH7.4)洗涤两次，并在37℃下预培养 15分钟。作为激动剂以渐增浓度(10-11至10-6M)添加CGRP(10微升)或另外 以3至4种不同浓度的物质添加，使混合物再培养15分钟。
然后，通过由添加20微升1M HCl萃取胞内的cAMP，并离心分离 (2000×g，4℃，历经15分钟)。使上层清液在液态氮中冷冻，并储存在-20 ℃下。
试样的cAMP含量是通过放射免疫检测法(Messrs.Amersham)测定，并 以图示方式测定拮抗作用的物质的pA2值。
在所述活体外试验模型中，根据本发明的化合物在10-12至10-5M间的 剂量范围内，显示CGRP拮抗性质。
适应征的类型
鉴于根据本发明化合物及其与生理学上可接受酸的盐类的药理学性 质，因此其适用于头痛的急性与预防性治疗，尤其是偏头痛、丛集性头痛 及紧张性头痛。再者，根据本发明的化合物也对于下列疾病具有积极的作 用：非胰岛素依赖性糖尿病(“NIDDM”)、心血管疾病、吗啡耐药性、因 梭状芽胞肝菌毒素引起的腹泻，皮肤病，尤其是热与辐射引致的皮肤损伤， 包括晒斑、苔藓、痒疹、痒疹的中毒性皮炎及严重搔痒，炎性疾病，例如 关节的炎性疾病(骨关节炎、风湿性关节炎、神经性关节炎)、全身性软组织 风湿病(纤维肌痛)、口腔粘膜神经性发炎、炎性肺病、过敏性鼻炎、哮喘、 COPD，伴随着过度血管扩张并因而出现的血液供应减少的疾病，例如休克 与脓毒症，慢性疼痛，例如糖尿病性神经病、因化学疗法引起的神经病、 HIV-引起的神经病、苞疹后神经病，因组织损伤引起的神经病、三叉神经 痛、颞下颌机能障碍、CRPS(complex regional pain syndrome，复合区域性疼 痛综合症)、背痛，及内脏疾病，例如刺激性肠综合症(IBS)、炎性肠综合症。 此外，根据本发明的化合物具有一般减轻疼痛的作用。雌激素不足的妇女 以并经激素治疗的前列腺癌患者及割除睾丸的男性中因血管扩张与增加血 流引起的绝经的热潮红，利用本申请的CGRP拮抗剂进行的预防与急性治 疗具有有利的影响，这种治疗途径表明没有副作用而超过激素替代。
根据本发明化合物优选适用于偏头痛与丛集性头痛的急性与预防治 疗，用于治疗刺激性肠综合症(IBS)，及预防与急性治疗雌激素不足妇女的 热潮红。
达成相应作用所需要的剂量，当以静脉内方式或皮下方式给药时，适 宜地为0.0001至3毫克/公斤体重，优选为0.01至1毫克/公斤体重，而当 口服、经鼻方式或吸入给药时，为0.01至10毫克/公斤体重，优选为0.1至 10毫克/公斤体重，在各情况下一天1至3次。
如果使用CGRP拮抗剂及/或CGRP释出抑制剂的治疗是以补充常规的 激素置换而给予，则建议降低上述所指定的剂量，于此种情况下，剂量可 为上述所提及下限的1/5，至高达所指定上限的1/1。
本发明另一方面涉及利用根据本发明化合物作为有价值的佐剂，以制 造与纯化(亲和层析法)抗体，以并在适当的放射性标记后，用于RIA与 ELISA检测中，例如通过适当前体的氚化作用，例如经氚的催化性氢化， 或以氚置换卤原子，并在神经递质研究中作为诊断或分析助剂。
组合
可组合使用的活性物质种类，包括例如止吐药、前激动剂、神经安定 剂、抗抑郁剂、神经激肽拮抗剂、抗惊厥药、组胺-H1-受体拮抗剂、β-阻断 剂、α-激动剂与α-拮抗剂、麦角生物碱、温和止痛剂、非类固醇消炎剂、 皮质类固醇、钙拮抗剂、5-HT1B/1D激动剂或其他抗偏头痛剂，其可与一种 或多种惰性常规载剂及/或稀释剂，例如与玉米淀粉、乳糖、蔗糖、微晶性 纤维素、硬脂酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、柠檬酸、酒石酸、水、水/乙醇、 水/甘油、水/山梨醇、水/聚乙二醇、丙二醇、鲸蜡基硬脂基醇、羧甲基纤维 素，或含脂肪物质，如硬质脂肪或其适当的混合物，一起调配成常规的盖 伦制剂，如片剂或经包衣片剂、胶囊、粉剂、悬浮液、溶液、经计量的气 溶胶或栓剂。
因此，可用于上述所提及组合的其他活性物质，包括例如非类固醇消 炎剂、醋氯芬酸、阿西美辛、对乙酰氨基酚(扑热息痛)、硫唑嘌呤、双氯芬 酸、二氟尼柳、芬布芬、非诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛 芬、来氟米特、氯诺昔康、甲灭酸(mefenaminsaure)、萘普生、保泰松、吡 罗昔康、柳氮磺吡啶、佐美酸或其药学上可接受的盐，以及美洛昔康，及 其他选择性COX2-抑制剂，例如罗非考昔、伐地考昔、帕瑞考昔、艾托考 昔及塞来考昔，以及会抑制前列腺素合成中的较早或较后阶段的物质，或 前列腺素受体拮抗剂，如EP2-受体拮抗剂与IP-受体拮抗剂。
另外可使用麦角胺、二氢麦角胺、甲氧氯普胺、多潘立酮、苯海拉明、 赛克力嗪、异丙嗪、氯丙嗪、氨己烯酸、噻吗洛尔、异美汀、苯噻啶、玻 拓克斯(botox)、加巴喷丁、普瑞加巴林、度洛西汀、托吡酯(topiramat)、核 黄素、孟鲁司特、赖诺普利、替米沙坦、丙氯拉嗪(prochloroperazine)、地塞 米松、氟桂利嗪、右旋丙氧吩(dexfropropoxyphen)、度冷丁(meperidin)、美 托洛尔、普萘洛尔、纳多洛尔、阿替洛尔、可乐定、吲哚拉明、氨甲酰苯 (carbamazepin)、苯妥英(phenyfoin)、丙戊酸盐、阿米替林(amitryptiline)、 丙米嗪、文拉法辛、利多卡因或地尔硫，及其他5-HT1B/1D-激动剂，例 如阿莫曲坦、阿维曲普坦、依来曲普坦、夫罗曲普坦、那拉曲坦、利扎曲 普坦、舒马普坦及佐米曲坦。
此外，CGRP-拮抗剂可并且类香草素受体拮抗剂，如VR-1拮抗剂，谷 氨酸酯受体拮抗剂，如mGlu5-受体拮抗剂、mGlu1-受体拮抗剂、iGlu5-受 体拮抗剂、AMPA-受体拮抗剂，嘌呤受体阻断剂，例如P2X3拮抗剂，N，Q- 合成酶抑制剂，如iNOS抑制剂，钙通道阻断剂，如PQ型阻断剂、N-型阻 断剂，钾通道开启剂，如KCNQ通道开启剂，钠通道阻断剂，如PN3通道 阻断剂，NMDA-受体拮抗剂，酸感测离子通道拮抗剂，如ASIC3拮抗剂， 激肽受体拮抗剂，如B1-受体拮抗剂，类大麻苷受体激动剂，如CB2激动 剂、CB1激动剂，抑生长素受体激动剂，如sst2受体激动剂。
这些活性物质的剂量可适宜地为正常情况下建议最低剂量的1/5至正 常情况下建议剂量的1/1，意即例如20至100毫克沙马催坦(sumatriptan)。
制剂
根据本发明制成的化合物可无论是为单独或任选组合使用其他用于治 疗偏头痛的活性物质，以静脉内、皮下、肌内、关节内、直肠内或鼻内途 径，用吸入，局部方式、经皮方式或口服方式给药，其中气溶胶制剂特别 适于吸入。这些组合物可同时或相继地给药。
供给药的适当形式包括例如片剂、胶囊、溶液、糖浆、乳液或可吸入 粉末或可吸入气溶胶。其中，医药活性化合物的比例，应在全部组合物的 0.1至90重量％的范围内，优选为0.5至50重量％，即以足以达到前文所提 及剂量范围的量。
口服可以以片剂、粉末、在胶囊(例如硬明胶胶囊)中的粉末形式或以溶 液或悬浮液的方式。当以吸入服用时，活性物质组合物可以粉末、含水或 含水-含乙醇溶液或利用推进剂气体制剂给药。
因此，优选情况是，药用制剂的特征在于其含有一种或多种根据前文 所述的优选实施方案的式I化合物。
特优选的是，如果式I化合物以口服方式给药，而最优选情况是，如果 其是一天给药一次或两次。适当片剂可例如通过将活性物质与已经知助剂 混合而获得，例如惰性稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或乳糖，崩解剂，如玉 米淀粉或藻酸，粘合剂，如淀粉或明胶，润滑剂，如硬脂酸镁或滑石，及/ 或用于延迟释出的制剂，如羧甲基纤维素、乙酸酞酸纤维素或聚乙酸乙烯 酯。片剂亦可包含多层。
包衣片剂可因此通过以常用于片剂包层的物质涂覆类似片剂所制成的 片芯而制成，该物质例如可力酮或虫胶、阿拉伯胶、滑石、二氧化钛或糖。 为达到延迟释出或防止不相容性，片芯也可包含多层。同样地，片剂涂层 可包含数层，以达到延迟释出，可使用上述涉及片剂所提及的助剂。
含有根据本发明活性物质或活性物质组合物的糖浆，可另外含有增甜 剂，如糖精、环己氨基磺酸盐、甘油或糖，以及矫味增强剂，例如芳香剂， 如香草醛或橘子提取液。其也可含有悬浮助剂或增稠剂，如羧甲基纤维素 钠，润湿剂，例如脂肪醇类与环氧乙烷的缩合产物，或防腐剂，如对-羟基 苯甲酸酯类。
含有一种或多种活性物质或活性物质组合物的胶囊，可例如通过活性 物质与惰性载剂如乳糖或山梨糖醇混合，并将其填充至明胶胶囊中而制成。
适当栓剂可经由例如和与此相配合的载剂混合而制成，如中性脂肪类 或聚乙二醇或其衍生物。
可使用的助剂包括例如水，药学上可接受的有机溶剂，如石蜡(例如石 油馏份)、植物源油(例如花生或芝麻油)、单-或多官能性醇类(例如乙醇或甘 油)，载剂，如天然矿物粉末(例如高岭土、粘土、滑石、白垩)、合成矿物 粉末(例如高度分散的硅酸与硅酸盐)、糖类(例如蔗糖、乳糖及葡萄糖)、乳 化剂(例如木质素、亚硫酸盐废液、甲基纤维素、淀粉及聚乙烯基吡咯烷酮) 及润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石、硬脂酸及月桂基硫酸钠)。
对口服用途而言，片剂除了所指定的载剂以外显示可含有添加剂，例 如柠檬酸钠、碳酸钙及磷酸二钙，伴随着各种其他添加物质，例如淀粉， 优选为马铃薯淀粉、明胶等。润滑剂，如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠及滑石， 也可用以制造片剂。在含水悬浮液的情况中，除了上述所提及的助剂以外， 活性物质可并用各种矫味增强剂或着色剂。
亦优选的情况是，如果式I化合物是以吸入给药，特优选情况是，如果 其是一天给药一或两次。对此，式I化合物必须被制成可用于适合吸入的剂 型。可吸入的制剂包括可吸入粉末、含推进剂的计量气溶胶或不含推进剂 的可吸入溶液，其任选与常规生理学上可接受的助剂混合。
在本发明范围内，不含推进剂的可吸入溶液一词，亦包括立即供使用 的浓缩液或无菌的可吸入溶液。
可于本发明范围内使用的剂型，是更详细地描述于本专利说明书的下 一部分中。
实验部分
通常，对已经制得的化合物提供1H-NMR及/或质谱。除非另有述及， 否则Rf值是使用现成的硅胶TLC板60F254(E.Merck，Darmstadt，项目编号 1.05714)获得，未经层析槽饱和。
涉及所给出的洗脱剂比例，是涉及涉及的溶剂的体积比单位。涉及NH3 所指定的体积比单位，是指NH3在水中的浓溶液。
除非另有述及，否则用于处理反应溶液的酸、碱及盐溶液，是规定浓 度的含水体系。
涉及层析纯化，使用由Millipore制造的硅胶(MATREXTM，35-70微米)。
所给出的HPLC数据是使用下文所示的参数测量：
方法A：
时间(分钟) 水(具有0.1％甲酸)的体积百分比 乙腈(具有0.1％甲酸)的体积百分比 0 95 5 4.5 10 90 5 10 90 5.5 90 10
分析柱：Zorbax柱(Agilent Technologies)，SB(Stable Bond)C18；3.5微米； 4.6×75毫米；柱温：30℃；流速：1.6毫升/分钟；注射体积：5微升；在254 毫微米下检测
方法B：
时间(分钟) 水(具有0.1％甲酸)的体积百分比 乙腈(具有0.1％甲酸)的体积百分比 0 95 5 9 10 90 10 10 90 11 95 5
分析柱：Zorbax柱(Agilent Technologies)，SB(Stable Bond)C18；3.5微米； 4.6×75毫米；柱温：30℃；流速：0.8毫升/分钟；注射体积：5微升；在254 毫微米下检测
方法C：
时间(分钟) 水(具有0.1％甲酸)的体积百分比 乙腈(具有0.1％甲酸)的体积百分比 0 95 5 4 50 50 4.5 10 90 5 10 90 5.5 90 10
分析柱：Zorbax柱(Agilent Technologies)，SB(Stable Bond)C18；3.5微米； 4.6×75毫米；柱温：30℃；流速：1.6毫升/分钟；注射体积：5微升；在254 毫微米下检测
方法D：
时间(分钟) 水(具有0.04％TFA)的体积百分比 乙腈(具有0.04％TFA)的体积百分 比 0 80 20 30 20 80
分析柱：Waters Symmetry C8，5微米，4.6×150毫米；柱温：25℃；流速： 1.3毫升/分钟，注射体积：5微升；在254毫微米下检测
方法E：
时间(分钟) 水(具有0.04％TFA)的体积百分比 乙腈(具有0.04％TFA)的体积百分 比 0 80 20 15 20 80 17 20 80
分析柱：Waters对称性C8-4.6×150毫米；5微米，流速：1.3毫升/分钟，柱 温：25℃，在254毫微米下检测
在制备性HPLC纯化中，通常是使用与用以收集分析HPLC数据相同 的梯度。
产物是在质谱控制下收集，并将含有产物的洗脱部分合并，并冻干。
如果缺乏构型的详细数据，则不明了其是否为纯的对映异构体，或是 否已经发生部分或甚至全部外消旋化。
下列缩写用于实验的描述中：
Cyc     环己烷
DCM     二氯甲烷
DIPE    二异丙基醚
DMF     N，N-二甲基甲酰胺
EtOAc   乙酸乙基酯
EtOH    乙醇
HATU    O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
AcOH    乙酸
i.vac.  在真空中(于真空下)
MeOH    甲醇
MTBE    叔丁基甲基醚
NaOAc   乙酸钠
NMP     N-甲基吡咯烷酮
PE      石油醚
RT      环境温度
TBTU    O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐
TFA     三氟乙酸
THF     四氢呋喃
起始化合物的制备：
胺A1
[4，4’]联哌啶-1-基-氧代-乙酸乙基酯

A1a)1’-乙氧基草酰基-[4，4’]联哌啶-1-羧酸叔丁基酯
在冰冷却将1.68毫升(15.0毫摩尔)氯-氧代-乙酸乙基酯慢慢地逐滴添加 至4.0克(14.9毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-羧酸叔丁基酯与2.15毫升(15.4毫摩尔) 三乙胺在80毫升DCM中的溶液内，并将反应混合物在室温下搅拌1小时 后。将少量水添加至反应溶液中，分离出有机相，并以Na2SO4干燥。在已 经去除干燥剂与溶剂后，使残留物溶于EtOAc中，并经硅胶过滤，其中产 物以EtOAc洗脱。在真空中蒸发后，获得产物，使其进一步反应而无需纯 化。
产量：3.1克(理论值的57％)
ESI-MS：(M+NH4)+＝386
A1b)[4，4’]联哌啶-1-基-氧代-乙酸乙基酯
将5毫升TFA逐滴添加至3.08克(8.36毫摩尔)1’-乙氧基草酰基-[4，4’] 联哌啶-1-羧酸叔丁基酯在40毫升DCM中的溶液内，并将反应混合物在室 温下搅拌4小时。在真空中蒸干混合物，使残留物溶于50毫升DCM中， 并将此溶液慢慢搅拌至4克Na2CO3在20毫升水中的冰冷溶液内。在添加 完成后，将混合物再搅拌15分钟，分离出有机相，将水相以DCM萃取两 次，并将合并的有机相以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，获得的产 物为碳酸氢盐。
产量：2.33克(理论值的84％)
ESI-MS：(M+H)+＝269
胺A2
4-[4，4’]联哌啶-1-基-4-氧代-丁酸乙基酯

A2a)1’-(3-羧基-丙酰基)-[4，4’]联哌啶-1-羧酸叔丁基酯 将4.07克(41.0毫摩尔)琥珀酸酐在50毫升THF中的溶液，慢慢滴加至 10.0克(37.0毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-羧酸叔丁基酯在100毫升THF中的溶液 内，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。为完成反应，再添加2.0克(20.0 毫摩尔)琥珀酸酐，将反应混合物在50℃下搅拌4小时，并在室温下搅拌过 夜。将混合物小心地与200毫升7.5％K2CO3溶液及200毫升EtOAc混合， 分离出有机相，再一次以100毫升7.5％K2CO3溶液萃取，并将合并的水相 以10％柠檬酸溶液酸化。将水相以300毫升EtOAc萃取，分离出有机相， 并在真空中去除溶剂。
产量：11.7克(理论值的85％)
ESI-MS：(M-H)-＝367
A2b)4-[4，4’]联哌啶-1-基-4-氧代-丁酸乙基酯
将11.7克(31.7毫摩尔)1’-(3-羧基-丙酰基)-[4，4’]联哌啶-1-羧酸叔丁基酯 在250毫升HCl的乙醇溶液(1.25M)中的溶液，在室温下搅拌过夜。使混合 物在真空中蒸发至干，使残留物溶于100毫升EtOAc与100毫升15％K2CO3 溶液中，分离出有机相，并以Na2SO4干燥。在已经去除干燥剂与溶剂后， 产物可进一步反应而无需纯化。
产量：4.3克(理论值的46％)
ESI-MS：(M+H)+＝297
最终化合物的制备：
实施例1
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[4-(4- 甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-1-(3-三氟甲基-苄基)-乙基酯

1a)(Z，E)-2-乙酰氨基-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙烯酸
将15.8克(115毫摩尔)3-三氟甲基-苯甲醛与21.3克(182毫摩尔)N-乙 酰基甘氨酸在60毫升乙酸酐中的溶液在120℃(浴温)加热4小时。于冷却后， 慢慢添加40毫升水，并将混合物在80℃下搅拌1小时。冷却后，将其与 400毫升水及150毫升甲苯混合，搅拌1小时，滤出所形成的沉淀物，以甲 苯洗涤，并在50℃下干燥。
产量：16.7克(理论值的53％)
ESI-MS：(M+H)+＝274
Rf＝0.4(硅胶，DCM/MeOH/AcOH90∶10∶1)
1b)2-氧代-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸
将200毫升4M HCl滴加至在80℃(浴温)加热的16.6克(60.8毫摩尔) (Z，E)-2-乙酰氨基-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙烯酸在200毫升1，4-二噁烷中的悬 浮液内，使反应混合物回流1.5小时，接着在室温下搅拌过夜。为完成反应， 使混合物再回流4小时。在真空中去除有机溶剂，将含水残留物与NaOH 混合，直到碱性反应，以MTBE洗涤，并以HCl酸化。将混合物以EtOAc 充分萃取，并将合并的有机相以MgSO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，获 得所要的产物，使其进一步反应而无需纯化。
产量：5.7克(理论值的40％)
ESI-MS：(M-H)-＝231
Rf＝0.19(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
1c)(R)-2-羟基-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸
在氮气氛下，将11.8克(36.8毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷在40 毫升THF中的溶液，在15分钟内滴加至在-35℃冷却的5.70克(24.6毫摩尔) 2-氧代-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸与4.4毫升(31.4毫摩尔)三乙胺在60毫升 THF中的溶液内，并将反应溶液在室温下搅拌过夜。然后以冰冷却小心地 以20毫升1M NaOH使反应溶液呈碱性，并搅拌30分钟。添加40毫升 EtOAc，分离出水相，将有机相以15毫升1M NaOH溶液洗涤三次，并以 15毫升水洗涤一次。将合并的水相以半浓HCl酸化，以40毫升EtOAc萃 取两次，并将合并的有机相以MgSO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，获得 产物，其可进一步反应而无需纯化。
产量：4.25克(理论值的74％)
ESI-MS：(M-H)-＝233
Rf＝0.35(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
1d)(R)-2-羟基-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸甲酯
将4.20克(17.9毫摩尔)(R)-2-羟基-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酸在80毫升 HCl的甲醇溶液中的溶液在室温下搅拌70小时。在真空中蒸干反应溶液， 使残留物溶于水中，并以EtOAc充分萃取。将合并的有机相以15％K2CO3 溶液洗涤三次，并以水洗涤一次，并以MgSO4干燥。在去除干燥剂与溶剂 后，使残留物进一步反应而无需纯化。
产量：2.47克(理论值的55％)
ESI-MS：(M+H)+＝249
Rf＝0.73(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
1e)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-甲 氧基羰基-2-(3-三氟甲基-苯基)-乙基酯
在氮气氛下，将2.10克(10.4毫摩尔)氯甲酸4-硝基苯酯添加至1.64克 (13.4毫摩尔)4-二甲基氨基吡啶在40毫升吡啶中的溶液内，并在室温下搅 拌3小时。然后添加20毫升吡啶中的2.47克(9.95毫摩尔)(R)-2-羟基-3-(3- 三氟甲基-苯基)-丙酸甲酯并将反应混合物在室温下搅拌2.5小时。将反应溶 液与4.1克(10.9毫摩尔)3-哌啶-4-基-1，3，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-2-酮(纯 度65％)混合，并在室温下搅拌20小时。在真空中蒸干混合物，使残留物溶 于60毫升EtOAc中，将有机相以15％K2CO3溶液洗涤两次，以饱和NaHCO3 溶液洗涤四次，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使残留物用层 析纯化(硅胶，环己烷/EtOAc1∶2)。
产量：3.16克(理论值的61％)
ESI-MS：(M+H)+＝520
Rf＝0.93(硅胶，EtOAc/MeOH/NH380∶20∶2)
1f)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧 基-2-(3-三氟甲基-苯基)-乙基酯
将0.22克(9.00毫摩尔)氢氧化锂在40毫升水中的溶液，添加至3.10克 (5.97毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-甲氧基羰基-2-(3-三氟-甲基-苯基)-乙基酯在80毫升THF中的溶液内， 并将反应混合物在室温下搅拌1小时。在真空中去除有机溶剂，将含水残 留物与80毫升水混合，并以1M HCl酸化。将所析出的沉淀物抽气过滤， 并在35℃下干燥过夜。
产量：2.80克(理论值的93％)
ESI-MS：(M+H)+＝506
Rf＝0.58(硅胶，EtOAc/MeOH/NH370∶30∶3)
1g)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-1-(3-三氟甲基-苄基)-乙基酯
将30毫克(0.16毫摩尔)1-甲基-4-哌啶-4-基-哌嗪在室温下添加至80.0 毫克(0.16毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧 酸(R)-1-羧基-2-(3-三氟-甲基-苯基)-乙基酯、61毫克(0.19毫摩尔)TBTU及 27微升(0.20毫摩尔)三乙胺在1毫升THF中的溶液内，并将反应溶液在室 温下搅拌70小时。使其用HPLC纯化，无需任何进一步处理；合并含有产 物的洗脱部分，并冻干。
产量：67毫克(理论值的63％)
ESI-MS：(M+H)+＝671
Rf＝0.4(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
下列化合物是在各情况中，以类似方式从80毫克(实施例1.1至1.4)或 140毫克(实施例1.5与1.6)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(3-三氟-甲基-苯基)-乙基酯及相应量的胺进行制 备：



##)(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)或保留时间HPLC
实施例1.7
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3-三 氟甲基-苄基)-2-氧代-2-(4-哌嗪-1-基-哌啶-1-基)-乙基酯

将131毫克(0.17毫摩尔)4-{1-[(R)-2-[4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二 氮杂-3-基)-哌啶-1-羰基氧基]-3-(3-三氟甲基-苯基)-丙酰基]-哌啶-4-基}-哌 嗪-1-羧酸叔丁基酯(实施例1.5)在1.5毫升4M HCl中的溶液在室温下搅拌过 夜。使反应溶液通过HPLC纯化，无需任何进一步处理。合并含有产物的 洗脱部分，并冻干。
产量：75毫克(理论值的67％)
ESI-MS：(M+H)+＝657
Rf＝0.38(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
实施例1.8
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-氧代 -2-(4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基)-1-(3-三氟甲基-苄基)-乙基酯

类似实施例1.7，由149毫克(0.20毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3-三氟甲基-苄基)-2-[4-(1-叔-丁氧基 -羰基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基酯(实施例1.6)制得产物。
产量：66毫克(理论值的51％)
ESI-MS：(M+H)+＝657
Rf＝0.18(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
实施例2
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[4-(4- 甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-1-(3-甲基-苄基)-乙基酯

2a)(Z，E)-2-乙酰氨基-3-间-甲苯基-丙烯酸
类似实施例1a，由25.0克(212毫摩尔)3-甲基-苯甲醛与24.9克(212毫 摩尔)N-乙酰基甘氨酸制备产物。
产量：26.0克(理论值的56％)
ESI-MS：(M+H)+＝220
保留时间(HPLC)：5.4分钟(方法B)
2b)2-氧代-3-间-甲苯基-丙酸
将400毫升4M HCl添加至13.0克(59.3毫摩尔)(Z，E)-2-乙酰氨基-3-间- 甲苯基-丙烯酸在200毫升1，4-二噁烷中的溶液内，并使反应混合物回流加 热2.5小时。在真空中蒸干有机溶剂，将所析出的沉淀物抽气过滤，并干燥。 使其溶于300毫升EtOAc中，将有机相以200毫升水洗涤两次，并以Na2SO4 干燥。在已经去除干燥剂与溶剂后，使残留物进一步反应无需纯化。
产量：9.2克(理论值的88％)
ESI-MS：(M-H)-＝177
保留时间(HPLC)：7.3分钟(方法B)
2c)(R)-2-羟基-3-间-甲苯基-丙酸
类似实施例1c，由9.24克(51.9毫摩尔)2-氧代-3-间-甲苯基-丙酸与24.0 克(74.8毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷制得产物。
产量：8.4克(理论值的90％)
ESI-MS：(M-H)-＝179
保留时间(HPLC)：7.2分钟(方法B)
2d)(R)-2-羟基-3-间-甲苯基-丙酸甲酯
将3.74克(51.28毫摩尔)SOCl2慢慢滴加至8.40克(46.6毫摩尔)(R)-2- 羟基-3-间-甲苯基-丙酸在200毫升MeOH中的已经冷却至0℃的溶液内，并 在添加结束后，将反应混合物在室温下搅拌1小时。在真空中干燥混合物， 并使残留物用层析法纯化(硅胶，环己烷/EtOAc3∶1)。
产量：6.28克(理论值的69％)
ESI-MS：(M+H)+＝195
保留时间(HPLC)：6.9分钟(方法B)
2e)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-甲 氧基羰基-2-间-甲苯基-乙基酯
类似实施例1e，由1.12克(5.76毫摩尔)(R)-2-羟基-3-间-甲苯基-丙酸甲 酯与1.41克(5.76毫摩尔)3-哌啶-4-基-1，3，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-2-酮制 得产物。
产量：2.07克(理论值的77％)
ESI-MS：(M+H)+＝466
保留时间(HPLC)：9.0分钟(方法B)
2f)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧 基-2-间-甲苯基-乙基酯
类似实施例1f，由2.07克(4.45毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并 二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-甲氧基羰基-2-间-甲苯基)-乙基酯与0.16 克(6.72毫摩尔)氢氧化锂制得产物。
产量：1.86克(理论值的93％)
ESI-MS：(M+H)+＝452
保留时间(HPLC)：8.0分钟(方法B)
2g)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-1-(3-甲基-苄基)-乙基酯
将80.0毫克(0.18毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3- 基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-间-甲苯基-乙基酯、57毫克(0.18毫摩尔)TBTU 及31微升(0.22毫摩尔)三乙胺在1毫升DMF中的溶液在室温下搅拌1小时。 然后，将33毫克(0.18毫摩尔)1-甲基-4-吡啶-4-基-哌嗪添加至反应溶液中， 接着在室温下搅拌过夜。使其通过HPLC纯化，无需任何进一步处理；合 并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：46.7毫克(理论值的43％)
ESI-MS：(M+H)+＝617
保留时间(HPLC)：5.5分钟(方法B)
下列化合物是在各情况中，以类似方式制自80毫克4-(2-氧代-1，2，4，5- 四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-间-甲苯基-乙基酯及 相应量的胺：



实施例3
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3，5- 双-三氟甲基-苄基)-2-(1’-乙氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

3a)2-乙酰氨基-3-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-丙烯酸甲酯
在氮气氛下，将475毫升三乙胺与250毫升乙腈中的50.0克(171毫摩 尔)3，5-双-(三氟甲基)-溴苯与25.0克(171毫摩尔)2-乙酰氨基-丙烯酸甲酯， 与3.9克(12.4毫摩尔)三-邻-甲苯基-膦(phosphane)及2.8克(12.5毫摩 尔)Pd(OAc)2混合，并在80℃下搅拌18小时。在反应结束后，使反应混合 物在真空中浓缩至约200毫升，与400毫升EtOAc及400毫升水混合，将 沉淀物抽气过滤，并分离液相。将有机相以Na2SO4干燥，与活性炭混合， 过滤，并蒸发至干。将残余物与DIPE一起搅拌，抽气过滤，并在真空中干 燥。
产量：19.5克(理论值的32％)
ESI-MS：(M+H)+＝356
Rf＝0.76(硅胶，PE/EtOAc1∶1)
3b)3-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-2-氧代-丙酸
将100毫升1，4-二噁烷中的19.5克(54.9毫摩尔)2-乙酰氨基-3-(3，5-双- 三氟甲基-苯基)-丙烯酸甲酯在100℃浴温加热，与100毫升4M HCl混合， 并在100℃浴温下搅拌8小时。在真空中蒸干反应混合物，将晶体抽气过滤， 并以水洗涤，并于50℃下，在干燥箱中干燥。
产量：16.1克(理论值的98％)
ESI-MS：(M-H)-＝299
Rf＝0.18(硅胶，EtOAc)
3c)(R)-3-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-2-羟基-丙酸
将9.5毫升(70.0毫摩尔)三乙胺与100毫升THF中的16.1克(53.6毫摩 尔)3-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-2-氧代-丙酸，于-35℃下，在30分钟内，与26.0 克(81.1毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷在40毫升THF中的溶液混合， 于此温度下搅拌1小时，并在室温下搅拌过夜。在反应结束后，在0℃下， 以160毫升1M NaOH使反应混合物呈碱性，搅拌15分钟后，与100毫升 MTBE混合，并分离液相。将有机相以50毫升水及50毫升1M NaOH洗涤。 以4M HCl使合并的水相酸化，以MTBE充分萃取，将合并的有机相以 Na2SO4干燥，经过活性炭抽气过滤，并在真空中蒸干。使产物进一步反应， 无需纯化。
产量：12.5克(理论值的77％)
ESI-MS：(M-H)-＝301
Rf＝0.45(硅胶，EtOAc)
3d)(R)-3-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯
将150毫升HCl的甲醇溶液(1.25M)中的12.5克(41.4毫摩尔)(R)-3-(3，5- 双-三氟甲基-苯基)-2-羟基-丙酸在室温下搅拌4小时，接着在真空中蒸干。 使残留物溶于EtOAc中，并以饱和NaHCO3溶液洗涤，将有机相以Na2SO4 干燥，经活性炭抽气过滤，并在真空中蒸干。将残留物与PE一起搅拌，抽 气过滤，并在真空中蒸干。使产物进一步反应，无需纯化。
产量：11.4克(理论值的87％)
ESI-MS：(M+H)+＝316
Rf＝0.80(硅胶，PE/EtOAc1∶1)
3e)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-1-甲氧基羰基-乙基酯
类似实施例1e，由6.0克(8.2毫摩尔)(R)-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-2-羟 基-丙酸甲酯与5.13克(20.9毫摩尔)3-哌啶-4-基-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂 -2-酮制得产物。用层析进行纯化(硅胶，梯度PE/EtOAc1∶1至1∶9)。
产量：5.1克(理论值的46％)
ESI-MS：(M+H)+＝588
Rf＝0.63(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
3f)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯
将307毫克(12.8毫摩尔)氢氧化锂在5毫升水中的溶液，添加至5.0克 (8.5毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-1-甲氧基-羰基-乙基酯在50毫升THF中的溶 液内，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸干，使残留物溶于 水中，以1M HCl酸化，滤出沉淀物，并于40℃下，在真空干燥箱中干燥。
产量：4.5克(理论值的92％)
ESI-MS：(M+H)+＝574
Rf＝0.32(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
3g)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(3，5-双-三氟甲基-苄基)-2-(1’-乙氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧 代-乙基酯
在室温下，将50毫克(0.20毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-基-乙酸乙基酯添加 至100毫克(0.17毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌 啶-1-羧酸(R)-2-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯、61毫克(0.20毫摩 尔)TBTU及33微升(0.16毫摩尔)乙基二异丙基胺在1毫升DMF中的溶液 内，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应溶液经过注射滤器过滤， 并直接通过HPLC纯化，无需任何进一步处理。合并含有产物的洗脱部分， 并冻干。
产量：55毫克(理论值的39％)
ESI-MS：(M+H)+＝810
保留时间(HPLC-MS)：7.3分钟(方法B)
实施例3.1
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3，5- 双-三氟甲基-苄基)-2-(1’-羧甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

将1.5毫克(0.06毫摩尔)氢氧化锂在1毫升水中的溶液，添加至35克 (0.04毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(3，5-双-三氟甲基-苄基)-2-(1’-乙氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧 代-乙基酯(实施例3g)在5毫升THF中的溶液内，并将反应溶液在室温下搅 拌过夜。在真空中蒸干混合物，使残留物溶于水中，以1N HCl酸化，滤出 沉淀物，并在真空干燥箱中干燥。
产量：15毫克(理论值的44％)
ESI-MS：(M+H)+＝782
Rf＝0.41(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
实施例3.2
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-氨 基-4-甲基-1，4’-联哌啶-1’-基)-1-(3，5-双-三氟甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将52毫克(0.14毫摩尔)(4-甲基-[1，4’]联哌啶-4-基)-氨基甲酸叔丁基酯 (以双盐酸盐使用)在室温下添加至80.0毫克(0.14毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5- 四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(3，5-双-三氟甲基-苯基)-1- 羧基-乙基酯、58毫克(0.18毫摩尔)TBTU及140微升(1.00毫摩尔)三乙胺在 1.8毫升DMF中的溶液内，并使反应溶液在室温下振荡过夜。使其通过HPLC 纯化，无需任何进一步处理；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。使偶合 产物溶于4毫升DCM中，溶液与0.5毫升TFA混合，在室温下搅拌5小时， 接着在室温下放置过夜，于此期间内蒸发溶剂。使残留物溶于2毫升15％ K2CO3溶液中，以2毫升DCM萃取两次，并使合并的有机相振荡过夜，于 其间蒸发溶剂。使残留物通过HPLC纯化；将含有产物的洗脱部分合并， 并冻干，且获得呈甲酸盐的产物。
产量：47毫克(理论值的42％)
ESI-MS：(M+H)+＝753
保留时间(HPLC)：5.4分钟(方法B)
实施例4
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-氨 基-3，5-二甲基-苄基)-2-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

4a)(Z，E)-2-乙酰氨基-3-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-丙烯酸甲酯
在氮气氛下，首先将90.0克(441毫摩尔)4-溴-2，6-二甲基-苯胺在200 毫升乙腈中的溶液，添加至7.2克(32.1毫摩尔)Pd(OAc)2与10.1克(32.1毫 摩尔)三-邻-甲苯基-膦在1.2升三乙胺与600毫升乙腈中的混合物内，然后， 滴加65.0克(445毫摩尔)2-乙酰氨基-丙烯酸甲酯在200毫升乙腈中的溶液。 在添加结束后，将混合物在80℃下搅拌18小时。为完成反应，将反应混合 物再一次与4.0克(17.8毫摩尔)Pd(OAc)2及5.0克(16.4毫摩尔)三-邻-甲苯基 -膦混合，并于80℃下再保持5小时。使混合物在真空中蒸发至约200毫升， 将残留物与400毫升EtOAc混合，过滤残留物(A)，并以Na2SO4干燥有机 相。经活性炭过滤去除干燥剂后，使滤液蒸发至约100毫升，抽气过滤已 经沉淀的物质，以30毫升EtOAc洗涤，并干燥。将上述残留物A与1升 DCM、Na2SO4及活性炭混合，并经硅藻土过滤。使滤液蒸发，将残留物与 350毫升乙醚合并，抽气过滤所形成的沉淀物，接着以100毫升乙醚洗涤， 并干燥。将两种产物级份合并。
产量：74.8克(理论值的65％)
ESI-MS：(M+H)+＝263
Rf＝0.51(硅胶，EtOAc)
4b)3-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-2氧代-丙酸
将74.0克(282毫摩尔)(Z，E)-2-乙酰氨基-3-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-丙 烯酸甲酯在500毫升1，4-二噁烷中的悬浮液加热至100℃，并与460毫升4M HCl混合，这时形成溶液。将混合物在100℃下再加热8小时，并使已经冷 却的溶液在真空中蒸发至约200毫升，于其间，产物结晶析出。将其过滤， 以50毫升水洗涤残留物，并使产物于50℃下干燥。
产量：43.6克(理论值的63％)
ESI-MS：(M+H)+＝208
Rf＝0.68(硅胶，PE/EtOAc1∶1)
4c)(R)-3-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯
在氮气氛下，使20.0克(82.1毫摩尔)3-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-2-氧 代-丙酸与25.7毫升(189毫摩尔)三乙胺在400毫升THF中的混合物在-35℃ 冷却。然后，滴加40.0克(125毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷在100 毫升THF中的溶液，使反应温度仍然保持在-35℃与-25℃之间。使反应混 合物在此温度下保持1小时，移除冷却浴，并将反应混合物在室温下搅拌 夜。于真空中蒸发THF，将残留物与HCl的甲醇溶液(1.25M)混合，并在室 温下搅拌2小时。使其在真空中蒸发，残留物溶于2M HCl中，并以EtOAc 充分萃取。以半浓NaOH使水相呈碱性，并以EtOAc充分萃取。将合并的 有机相以Na2SO4干燥，经活性炭抽气过滤，及蒸发。获得褐色油的产物。
产量：8.3克(理论值的45％)
ESI-MS：(M+H)+＝224
Rf＝0.46(硅胶，PE/EtOAc1∶1)
4d)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-1-甲氧基羰基-乙基酯
类似实施例1e，由4.0克(17.9毫摩尔)(R)-3-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-2- 羟基-丙酸甲酯与4.8克(19.6毫摩尔)3-哌啶-4-基-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮 杂-2-酮制得所要产物。
产量：3.2克(理论值的36％)
ESI-MS：(M+H)+＝495
Rf＝0.35(硅胶，DCM/MeOH/NH390∶10∶1)
4e)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯
将500毫克(20.9毫摩尔)氢氧化锂在10毫升水中的溶液，添加至6.7 克(13.6毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-1-甲氧基羰基-乙基酯在30毫升THF中的溶 液内，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。为完成反应，再添加300毫克(12.5 毫摩尔)氢氧化锂，并将反应溶液于40℃下搅拌3小时。使其在真空中蒸发， 使残留物溶于15％K2CO3溶液中，并以DCM充分萃取。以4M HCl使水相 酸化，以DCM充分萃取，并将合并的有机相以Na2SO4干燥。去除干燥剂 与溶剂后，使残留物进一步反应，无需纯化。
产量：4.2克(理论值的65％)
ESI-MS：(M+H)+＝481
Rf＝0.21(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
4f)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(4-氨基-3，5-二甲基-苄基)-2-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯
类似实施例3g，由80毫克(0.17毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-氨基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基 酯与32毫克(0.19毫摩尔)4-哌啶-4-基-吗啉制得产物。
产量：52毫克(理论值的49％)
ESI-MS：(M+H)+＝633
保留时间(HPLC)：4.9分钟(B)
实施例4.1
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-氨 基-3，5-二甲基-苄基)-2-(1’-乙氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例3g，由100毫克(0.21毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-氨基-3，5-二甲基-苄基)-1-羧基-乙基 酯与59毫克(0.23毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-基-乙酸乙基酯制得产物。
产量：58毫克(理论值的39％)
ESI-MS：(M+H)+＝717
保留时间(HPLC)：4.7分钟(方法B)
实施例4.2
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-氨 基-3，5-二甲基-苄基)-2-(1’-羧甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

将3.1毫克(0.13毫摩尔)氢氧化锂在1毫升水中的溶液，添加至55毫 克(0.08毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 -(R)-1-(4-氨基-3，5-二甲基-苄基)-2-(1’-乙氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2- 氧代-乙基酯(实施例4.1)在5毫升THF中的溶液内，并将反应混合物在室温 下搅拌过夜。在真空中蒸发混合物，使残留物溶于1毫升DMF中，并使粗 产物用HPLC纯化。合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：22毫克(理论值的42％)
ESI-MS：(M+H)+＝689
保留时间(HPLC)：4.8分钟(方法B)
实施例5
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

5a)2-苄氧基-5-溴-1，3-二甲基苯
将39.9克(286毫摩尔)K2CO3添加至50.0克(249毫摩尔)2，6-二甲基-4- 溴酚在500毫升DMF中的溶液内，并搅拌20分钟。然后慢慢滴加34.0毫 升(286毫摩尔)苄基氯，并将反应混合物在100℃浴温下搅拌3小时。在反 应结束后，将混合物倾倒在500毫升水中，并以EtOAc充分萃取。合并有 机相，以Na2SO4干燥，并在真空中蒸干。
产量：定量
GC-MS：(M+)＝290/292(Br)
Rf＝0.87(硅胶，环己烷/EtOAc3∶1)
5b)2-乙酰氨基-3-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-丙烯酸甲酯
在氮气氛下，将40.0克(137毫摩尔)2-苄氧基-5-溴-1，3-二甲基苯与24.1 克(165毫摩尔)2-乙酰氨基-丙烯酸甲酯在420毫升三乙胺与200毫升乙腈中 的混合物，与3.5克(11.2毫摩尔)三-邻-甲苯基-膦及2.5克(11.1毫摩 尔)Pd(OAc)2混合，并将混合物在80℃下搅拌18小时。将沉淀物抽气过滤， 使滤液在真空中蒸发，并与800毫升DCM及800毫升水混合。分离出有机 相，经Na2SO4抽气过滤，于真空中移除溶剂，将残留物与EtOAc一起搅拌， 抽气过滤，并在真空中干燥。
产量：31.1克(理论值的64％)
ESI-MS：(M+H)+＝354
保留时间(HPLC-MS)：8.6分钟(方法B)
5c)3-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-2-氧代-丙酸
将150毫升1，4-二噁烷中的31.1克(88.1毫摩尔)2-乙酰氨基-3-(4-苄氧 基-3，5-二甲基-苯基)-丙烯酸甲酯，与125毫升4M HCl混合，于回流下搅拌 7小时，并在室温下搅拌过夜。将沉淀物抽气过滤，以水洗涤，并于45℃ 下，在真空干燥箱中干燥。
产量：14.3克(理论值的54％)
ESI-MS：(M)+＝298
保留时间(HPLC-MS)：9.0分钟(方法B)
5d)(R)-3-(4-苯甲酰基-3，5-二甲基-苯基)-2-羟基-丙酸
在氮气氛下，将14.3克(47.8毫摩尔)3-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-2- 氧代-丙酸与8.3毫升(59.8毫摩尔)三乙胺在170毫升THF中的溶液，于-35 ℃下，于30分钟内，与22.1(69.0毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷在70 毫升THF中的溶液混合，添加结束后，移除冷却浴，并将反应溶液在室温 下搅拌过夜。于0℃下，以70毫升1M NaOH使反应混合物呈碱性，与100 毫升MTBE混合，搅拌15分钟，并分离液相。将有机相以50毫升水洗涤， 并以50毫升1M NaOH洗涤三次。以半浓HCl使合并的水相酸化，以EtOAc 充分萃取，并将合并的有机相以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使 残留物进一步反应，无需纯化。
产量：14.0克(理论值的98％)
ESI-MS：(M-H)-＝299
保留时间(HPLC-MS)：7.9分钟(方法B)
5e)(R)-3-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯
经冷却至0℃的于14.0克(23.3毫摩尔)(R)-3-(4-苯甲酰基-3，5-二甲基- 苯基)-2-羟基-丙酸在150毫升MeOH中的溶液内，滴加2.0毫升(27.4毫摩 尔)SOCl2，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。在真空中蒸发反应溶液， 并使残留物用层析法纯化(硅胶，环己烷/EtOAc3∶1)。
产量：5.7克(理论值的78％)
ESI-MS：(M+NH4)+＝332
保留时间(HPLC-MS)：9.1分钟(方法B)
5f)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-1-甲氧基羰基-乙基酯
在氮气氛下，将1.93克(9.58毫摩尔)氯甲酸4-硝基苯酯添加至1.17克 (9.58毫摩尔)4-二甲基氨基吡啶在50毫升吡啶中的溶液内，在室温下搅拌 1.5小时，与3.0克(9.58毫摩尔)(R)-3-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-2-羟基- 丙酸甲酯混合，并在室温下搅拌20分钟。然后，添加2.35克(9.58毫摩尔)3- 哌啶-4-基-1，3，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-2-酮，并将混合物在室温下搅拌20 小时。在真空中蒸发反应混合物，使残留物溶于EtOAc中，以10％KHSO4 及饱和NaHCO3溶液洗涤有机相，并经Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂 后，使残留物用层析纯化(硅胶，梯度环己烷/EtOAc1∶1至1∶2)。
产量：3.21克(理论值的57％)
ESI-MS：(M+H)+＝586
保留时间(HPLC-MS)：10.4分钟(方法A)
5g)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯
将3.21克(5.48毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-1-甲氧基-羰基-乙基酯在80 毫升THF中的溶液，与200毫克(8.35毫摩尔)氢氧化锂在40毫升水中的溶 液混合，并在室温下搅拌1小时。在真空中蒸发反应混合物，使残留物溶 于100毫升水中，以2M HCl酸化，抽气过滤沉淀物，并于40℃下，在真 空干燥箱中干燥。
产量：定量
ESI-MS：(M+H)+＝572
保留时间(HPLC-MS)：9.2分钟(方法B)
5h)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯
将50毫升DCM中的3.72克(6.51毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基- 乙基酯，与300毫克10％Pd/C混合，并于室温及3000hPa氢压力下振荡， 直到反应停止。抽气过滤催化剂，并在真空中蒸发溶剂。将残留物以DIPE 研制，并抽气过滤。
产量：2.41克(理论值的77％)
ESI-MS：(M+H)+＝482
保留时间(HPLC-MS)：7.0分钟(方法B)
5i)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4- 羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-氧代-乙基酯
将70毫克(0.15毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯、51毫克(0.16毫 摩尔)TBTU及26微升(0.18毫摩尔)三乙胺在1毫升DMF中的溶液，在室温 下搅拌1小时。然后，将25毫克(0.15毫摩尔)4-哌啶-4-基-吗啉添加至反应 溶液中，接着将其在室温下搅拌16小时。使反应溶液经HPLC纯化，无需 任何进一步处理；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：35毫克(理论值的38％)
ESI-MS：(M+H)+＝634
保留时间(HPLC-MS)：5.6分钟(方法B)
实施例5.1
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟 基-1，4’-联哌啶-1’-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例5i，由70毫克(0.15毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并 二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯 与27毫克(0.15毫摩尔)[1，4’]联哌啶-4-醇制得产物。
产量：35毫克(理论值的37％)
ESI-MS：(M+H)+＝648
保留时间(HPLC)：5.5分钟(方法B)
实施例5.2
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-羟基-3，5-二甲基-苄基)-(4-羟基-4-甲基-[1，4’]-联哌啶-1’-基)-2-氧代-乙基 酯

5.2a)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-2-(4-氧代-哌啶-1-基)-乙基酯
将130毫克(0.83毫摩尔)哌啶-4-酮(以其盐酸盐的水合物使用)在室温下 添加至400毫克(0.83毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3- 基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯、320毫克 (1.00毫摩尔)TBTU及260微升(1.87毫摩尔)三乙胺在10毫升DMF中的溶 液内，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在真空中蒸发混合物，使残 留物溶于EtOAc中，以半饱和NaHCO3溶液洗涤有机相，并以Na2SO4干燥。 在去除干燥剂与溶剂后，使残留物用层析法纯化(硅胶，EtOAc)。使含有产 物的洗脱部分蒸发，将残留物与DIPE一起搅拌，抽气过滤，并干燥。
产量：333毫克(理论值的71％)
ESI-MS：(M+H)+＝563
保留时间(HPLC-MS)：6.9分钟(方法B)
5.2b)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-(4-羟基-4-甲基-[1，4’]联哌啶-1’-基)-氧代- 乙基酯
将50毫克(0.09毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-2-(4-氧代-哌啶-1-基)-乙 基酯在1.5毫升DCM中的溶液，与21毫克(0.18毫摩尔)4-甲基-哌啶-4-醇 及10.3微升(0.19毫摩尔)AcOH混合，冷却至0℃，并搅拌2小时。然后添 加28毫克(0.19毫摩尔)三乙酰氧基硼氢化钠，并将混合物在0℃下搅拌过夜。 在去除溶剂后，将残留物与2毫升DMF混合，并经HPLC纯化。合并含有 产物的洗脱部分，并冻干。
产量：25毫克(理论值的42％)
ESI-MS：(M+H)+＝662
保留时间(HPLC-MS)：2.90分钟(方法A)
实施例5.3
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4，4- 二甲基-[1，4’]联哌啶-1’-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例5.2b，由50.0毫克(0.09毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代 -2-(4-氧代-哌啶-1-基)-乙基酯(实施例5.2a)与31.0毫克(0.18毫摩尔)4，4-二甲 基哌啶制得产物。
产量：18.3毫克(理论值的31％)
ESI-MS：(M+H)+＝660
保留时间(HPLC-MS)：3.2分钟(方法A)
实施例5.4
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-氨 基-4-甲基-[1，4’]联哌啶-1’-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将150毫克(0.27毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3- 基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-2-(4-氧代-哌啶-1- 基)-乙基酯(实施例5.2a)在4毫升DCM中的溶液，与120毫克(0.53毫摩尔) (4-甲基-哌啶-4-基)-氨基甲酸叔丁基酯及31微升(0.56毫摩尔)AcOH混合， 冷却至0℃，并搅拌2小时。然后添加85毫克(0.56毫摩尔)三乙酰氧基硼氢 化钠，并将混合物在0℃下搅拌过夜。接着，将反应溶液与0.5毫升TFA混 合，并再一次在室温下搅拌过夜。在去除溶剂后，使残留物溶于2毫升DMF 中，并经HPLC纯化。合并含有产物的洗脱部分，并冻干，其中获得呈TFA 盐的产物。
产量：94毫克(理论值的46％)
ESI-MS：(M+H)+＝661
保留时间(HPLC-MS)：2.5分钟(方法A)
实施例5.5
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(1’-乙 氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将117毫克(0.46毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-基-乙酸乙基酯在室温下添加至 200毫克(0.42毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶 -1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯(实施例5h)、148毫克 (0.46毫摩尔)TBTU及64微升(0.46毫摩尔)三乙胺在10毫升THF与1毫升 DMF中的溶液内，并使反应混合物在室温下振荡过夜。在真空中蒸发反应 溶液，使残留物溶于MeOH中，并经HPLC纯化。合并含有产物的洗脱部 分，在真空中蒸发，将残留物以DIPE研制，抽气过滤，并干燥。
产量：222毫克(理论值的74％)
ESI-MS：(M+H)+＝718
保留时间(HPLC)：3.1分钟(方法A)
实施例5.6
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(1’-羧 甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将3.8毫克(0.16毫摩尔)氢氧化锂在1毫升水中的溶液，添加至100毫 克(0.14毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(1’-乙氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2- 氧代-乙基酯在3毫升THF中的溶液内，并将反应溶液在室温下搅拌过夜。 在氮气流中去除有机溶剂，将残留物与1毫升水及乙腈混合，并以甲酸酸 化。使产物经HPLC纯化；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：56毫克(理论值的58％)
ESI-MS：(M-H)-＝688
保留时间(HPLC)：3.0分钟(方法A)
实施例5.7
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-环 己基-哌嗪-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例3g，由69毫克(0.14毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基 酯(实施例5h)与24毫克(0.14毫摩尔)1-环己基-哌嗪制得产物。
产量：51毫克(理论值的91％)
ESI-MS：(M+H)+＝632
保留时间(HPLC)：3.1分钟(方法A)
实施例5.8
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[4-(4- 乙氧基羰基甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代- 乙基酯

类似实施例5i，由150毫克(0.31毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基 酯(实施例5h)与87毫克(0.34毫摩尔)(4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基)-乙酸乙基酯制 得产物。
产量：64毫克(理论值的28％)
ESI-MS：(M+H)+＝719
保留时间(HPLC)：3.6分钟(方法A)
实施例5.9
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[4-(4- 羧甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将2.3毫克(0.09毫摩尔)氢氧化锂在5毫升水中的溶液，添加至40.0毫 克(0.06毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[4-(4-乙氧基羰基甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄 基)-2-氧代-乙基酯在5毫升THF中的溶液内，并将反应混合物在室温下搅 拌2小时。在真空中蒸发混合物，使残留物溶于1毫升DMF中，并经HPLC 纯化；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：20毫克(理论值的38％)
ESI-MS：(M+H)+＝691
保留时间(HPLC)：2.6分钟(方法A)
实施例5.10
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[4-(1- 乙氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代- 乙基酯

5.10a)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苄基)-2-[4-(1-乙氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-哌嗪 -1-基]-2-氧代-乙基酯
将8.00克(14.0毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯(实施例5g)、 5.17克(16.1毫摩尔)TBTU及8.84毫升(63.0毫摩尔)三乙胺在100毫升DMF 中的溶液在室温下搅拌1小时。然后，将5.28克(16.1毫摩尔)(4-哌嗪-1-基 -哌啶-1-基)-乙酸乙基酯(以双盐酸盐使用)添加至反应混合物中，接着将其在 室温下搅拌1小时。添加150毫升15％K2CO3溶液，以200毫升EtOAc萃 取混合物，分离出有机相，并以150毫升10％柠檬酸溶液萃取。以K2CO3 使水相呈碱性，以200毫升EtOAc萃取，并将有机相以Na2SO4干燥。在去 除干燥剂与溶剂后，使残留物用层析方法纯化(硅胶，EtOH)。合并含有产 物的洗脱部分，在真空中蒸发，将残留物与DIPE一起搅拌，抽气过滤，并 干燥。
产量：8.58克(理论值的76％)
ESI-MS：(M+H)+＝809
保留时间(HPLC)：3.7分钟(方法A)
5.10b)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[4-(1-乙氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄 基)-2-氧代-乙基酯
将4.00克(4.94毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苄基)-2-[4-(1-乙氧基羰基甲基-哌啶 -4-基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基酯与400毫克10％Pd/C在50毫升EtOH中的 悬浮液，在室温及3000hPa氢压力下氢化，直达到吸收理论量的氢为止。 滤出催化剂，在真空中蒸发滤液，将残留物与DIPE一起搅拌，抽气过滤， 并干燥。
产量：3.40克(理论值的96％)
ESI-MS：(M+H)+＝719
保留时间(HPLC)：2.5分钟(方法A)
实施例5.11
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[4-(1- 羧甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将126毫克(5.25毫摩尔)氢氧化锂在10毫升水中的溶液，在室温下添 加至2.50克(3.48毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌 啶-1-羧酸(R)-2-[4-(1-乙氧基羰基甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-1-(4-羟基-3，5- 二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯在30毫升THF中的溶液内，并将反应混合物 在室温下搅拌过夜。使混合物在真空中蒸发至干，并使残留物用层析纯化(硅 胶，梯度DCM至DCM/MeOH/NH370∶30∶3)。合并含有产物的级份，在真空 中蒸干，将残留物以DIPE研制，抽气过滤，并干燥。
产量：1.80克(理论值的75％)
ESI-MS：(M+H)+＝691
Rf＝0.10(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
实施例5.12
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-{4-[1-(2-乙氧基羰基-乙基)-哌啶-4-基]-哌嗪-1-基}-1-(4-羟基-3，5-二甲 基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将352毫克(0.93毫摩尔)3-(4-哌嗪-1-基-哌啶-1-基)-丙酸乙基酯(以双盐 酸盐使用)添加至400毫克(0.83毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮 杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯、299 毫克(0.93毫摩尔)TBTU及477微升(3.40毫摩尔)三乙胺在5毫升DMF中的 溶液内，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应溶液与15％K2CO3 溶液混合，以DCM充分萃取，并将合并的有机相以Na2SO4干燥。在去除 干燥剂与溶剂后，使残留物经HPLC纯化；合并含有产物的洗脱部分，并 冻干。
产量：305毫克(理论值的50％)
ESI-MS：(M+H)+＝733
保留时间(HPLC)：2.6分钟(方法A)
实施例5.13
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-{4-[1-(2-羧基-乙基)-哌啶-4-基]-哌嗪-1-基}-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄 基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例5.11，由2.60克(3.55毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-{4-[1-(2-乙氧基羰基-乙基)-哌啶-4-基]- 哌嗪-1-基}-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯与128毫克(5.33毫摩 尔)氢氧化锂制得产物。
产量：1.60克(理论值的64％)
ESI-MS：(M+H)+＝705
Rf＝0.07(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
实施例5.14
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[1’-(2-乙氧基羰基-乙基)-4，4’-联哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄 基)-2-氧代-乙基酯

80毫克(0.17毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌 啶-1-羧酸(R)-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-羧基-乙基酯(实施例5h)、59毫 克(0.18毫摩尔)TBTU及76微升(0.54毫摩尔)三乙胺在1毫升DMF中的溶 液，在室温下搅拌1小时。然后，将49毫克(0.18毫摩尔)3-[4，4’]联哌啶-1- 基-丙酸乙基酯添加至反应混合物中，接着将其在室温下搅拌2小时。使其 经HPLC纯化，无需任何进一步处理；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：11毫克(理论值的9％)
ESI-MS：(M+H)+＝732
保留时间(HPLC)：3.4分钟(方法C)
实施例5.15
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[1’-(2-羧基-乙基)-4，4’-联哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧 代-乙基酯

类似实施例5.11，由2.50克(3.42毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[1’-(2-乙氧基羰基-乙基)-4，4’-联哌啶-1- 基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯与128毫克(5.33毫摩尔)氢氧 化锂制得产物。
产量：1.70克(理论值的71％)
ESI-MS：(M+H)+＝704
Rf＝0.20(硅胶，DCM/MeOH/环己烷/NH370∶15∶15∶2)
实施例5.16
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-{1’-[(羟基-甲基-氨基甲酰基)-甲基]-4，4’-联哌啶-1- 基}-2-氧代-乙基酯

将80.0毫克(0.12毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3- 基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(1’-羧甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄 基)-2-氧代-乙基酯(实施例5.6)、44.6毫克(0.14毫摩尔)TBTU及64.6微升 (0.46毫摩尔)三乙胺在1.2毫升DMF中的溶液，在室温下搅拌1小时。然 后，将29.1毫克(0.35毫摩尔)N-甲基羟胺(以其盐酸盐使用)添加至反应混合 物中，接着将其在室温下搅拌20小时。于反应混合物中添加5滴AcOH， 经过注射滤器过滤混合物，并经HPLC纯化。合并含有产物的洗脱部分， 添加30毫升EtOAc与5％NaHCO3溶液，分离出有机相，并以Na2SO4干燥。 在去除干燥剂与溶剂后，使残留物通过层析法纯化(硅胶，DCM/MeOH/NH3 90∶10∶1)。合并含有产物的洗脱部分，在真空中蒸干，将残留物以DIPE研 制，抽气过滤，并在空气中干燥，直到获得恒重为止。
产量：12.4毫克(理论值的15％)
ESI-MS：(M+H)+＝719
Rf＝0.16(硅胶，DCM/MeOH/NH390∶10∶1)
保留时间(HPLC)：3.0分钟(方法A)
实施例5.17
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-[1’-(甲氧基氨基甲酰基-甲基)-4，4’-联哌啶-1-基]-2-氧 代-乙基酯

类似实施例5.16，由80.0毫克(0.12毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(1’-羧甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯(实施例5.6)与29.1毫克(0.35毫摩尔)O- 甲基羟胺(以其盐酸盐使用)制得产物。
产量：13.0毫克(理论值的16％)
ESI-MS：(M+H)+＝719
Rf＝0.27(硅胶，DCM/MeOH/NH390∶10∶1)
保留时间(HPLC)：3.0分钟(方法A)
实施例5.18
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-环 戊基-哌嗪-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

5.18a)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苄基)-2-(4-苄基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基酯
将1.54克(2.69毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苄基)-1-羧基-乙基酯(实施例5g)、 0.95克(2.96毫摩尔)TBTU及0.47毫升(3.37毫摩尔)三乙胺在20毫升THF 与2毫升DMF中的溶液，在室温下搅拌1小时。然后，将0.52毫升(2.96 毫摩尔)N-苄基哌嗪添加至反应混合物中，接着将其在室温下搅拌14小时。 将30毫升EtOAc添加至反应混合物中，将其以半饱和NaHCO3溶液洗涤， 并以Na2SO4使有机相干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使残留物通过层析法 纯化(硅胶，EtOAc/环己烷95∶5)。蒸干含有产物的洗脱部分，将残留物以 DIPE研制，抽气过滤，并干燥。
产量：1.62克(理论值的82％)
ESI-MS：(M+H)+＝730
保留时间(HPLC)：4.3分钟(方法A)
5.18b)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基酯
将1.62克(2.22毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)- 哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-苄氧基-3，5-二甲基-苄基)-2-(4-苄基-哌嗪-1-基)-2-氧代- 乙基酯与10％Pd/C在40毫升MeOH中的悬浮液，在室温及3000hPa氢压 力下氢化，直到吸收理论量的氢为止。抽气过滤催化剂，在真空中蒸干溶 剂，并使残留物通过层析法纯化(硅胶，EtOAc+15％MeOH/NH39∶1)。
产量：1.03克(理论值的85％)
ESI-MS：(M+H)+＝550
保留时间(HPLC)：2.7分钟(方法A)
5.18c)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(4-环戊基-哌嗪-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯
将100毫克(0.18毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3- 基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-2-哌嗪-1-基-乙基酯、 48微升(0.55毫摩尔)环戊酮及20微升(0.37毫摩尔)AcOH在2毫升 THF/MeOH(2∶1)中的溶液，在室温下搅拌过夜。然后，将24毫克(0.36毫摩 尔)氰基硼氢化钠添加至已经冷却至0℃的反应溶液中，接着，将其在0℃下 搅拌4小时，并在室温下过夜。于40℃下去除溶剂，使残留物溶于1毫升 DMF中，并经HPLC纯化；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：48毫克(理论值的43％)
ESI-MS：(M+H)+＝618
保留时间(HPLC)：3.2分钟(方法A)
实施例5.19
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-环 庚基-哌嗪-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例5.18c，由100毫克(0.18毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-2- 哌嗪-1-基-乙基酯、40.8毫克(0.36毫摩尔)环庚酮及12毫克(0.18毫摩尔)氰 基硼氢化钠而制得产物。
产量：21毫克(理论值的18％)
ESI-MS：(M+H)+＝646
保留时间(HPLC)：3.5分钟(方法A)
实施例5.20
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-(1’-甲烷磺酰基-4，4’-联哌啶-1-基]-2-氧代-乙基酯

将100毫克(0.21毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3- 基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)乙基酯、73毫克(0.23 毫摩尔)TBTU及36微升(0.26毫摩尔)三乙胺在1毫升DMF中的溶液在室温 下搅拌1小时。然后，将56毫克(0.23毫摩尔)1-甲烷磺酰基-[4，4’]联哌啶添 加至反应混合物中，接着，将其在室温下搅拌5小时。使反应混合物经HPLC 纯化，无需任何进一步处理；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：63毫克(理论值的43％)
ESI-MS：(M-H)-＝708
保留时间(HPLC)：4.0分钟(方法A)
实施例5.21
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-[4-(4-甲烷磺酰基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-乙基 酯

类似实施例5.20，由100毫克(0.21毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸酯-(R)-1-羧基-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)- 乙基与57毫克(0.23毫摩尔)1-甲烷磺酰基-4-哌啶-4-基-哌嗪而制得产物。
产量：43毫克(理论值的29％)
ESI-MS：(M+H)+＝711
保留时间(HPLC)：3.1分钟(方法A)
实施例5.22
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-{4-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-哌啶-1-基}-2-氧代-乙 基酯

类似实施例5.20，由80毫克(0.17毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-乙 基酯与52毫克(0.18毫摩尔)2-(4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基)-乙醇而制得产物。
产量：63毫克(理论值的56％)
ESI-MS：(M+H)+＝677
保留时间(HPLC)：2.4分钟(方法A)
实施例5.23
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[1’-(3-乙氧基羰基-丙酰基)-4，4’-联哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄 基)-2-氧代-乙基酯

将207毫克(0.70毫摩尔)4-[4，4’]联哌啶-1-基-4-氧代-丁酸乙酯(胺A2) 在室温下添加至300毫克(0.62毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮 杂-3-基)-哌啶-1-羧酸-(R)-1-羧基-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-乙基酯、225 毫克(0.70毫摩尔)TBTU及97微升(0.70毫摩尔)三乙胺在5毫升DMF中的 溶液内，并使反应混合物在室温下振荡过夜。使其直接经HPLC纯化，无 需任何进一步处理步骤；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：170毫克(理论值的36％)
ESI-MS：(M+H)+＝760
保留时间(HPLC)：4.1分钟(方法A)
实施例5.24
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[1’-(3-羧基-丙酰基)-4，4’-联哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2- 氧代-乙基酯

将0.96毫克(0.04毫摩尔)氢氧化锂在1毫升水中的溶液，添加至20.0 毫克(0.03毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧 酸(R)-2-[1’-(3-乙氧基羰基-丙酰基)-4，4’-联哌啶-1-基]-1-(4-羟基-3，5-二甲基- 苄基)-2-氧代-乙基酯在1毫升THF中的溶液内，并将反应混合物在室温下 搅拌2小时。在氮气流中去除溶剂，使残留物溶于水/乙腈中，及冻干。获 得产物，为Li盐。
产量：17毫克(理论值的88％)
ESI-MS：(M+H)+＝732
Rf＝0.13(硅胶，DCM/MeOH/NH390∶10∶1)
实施例5.25
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(1’-乙 氧基草酰基-4，4’-联哌啶-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2-氧代-乙基酯

将231毫克(0.70毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-基-氧代-乙酸乙基酯(胺A1，以碳 酸氢盐使用)在室温下添加至300毫克(0.62毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢 -1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(4-羟基-3，5-二甲基-苯 基)-乙基酯、225毫克(0.70毫摩尔)TBTU及197微升(1.40毫摩尔)三乙胺在 5毫升DMF中的溶液内，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在真空中 蒸干混合物，使残留物溶于DCM，以15％K2CO3溶液洗涤有机相，并以 Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使残留物经HPLC纯化；合并含有 产物的洗脱部分，在真空中蒸干，将残留物以DIPE研制，抽气过滤，并干 燥。
产量：360毫克(理论值的79％)
ESI-MS：(M+H)+＝732
保留时间(HPLC)：4.0分钟(方法A)
实施例5.26
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(4-羟 基-3，5-二甲基-苄基)-2-(1’-草酰基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

将0.96毫克(0.04毫摩尔)氢氧化锂在1毫升水中的溶液，添加至20.0 毫克(0.03毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧 酸(R)-2-(1’-乙氧基草酰基-4，4’-联哌啶-1-基)-1-(4-羟基-3，5-二甲基-苄基)-2- 氧代-乙基酯在1毫升THF中的溶液内，并将反应混合物在室温下搅拌2小 时。在氮气流中去除溶剂，使残留物溶于水/乙腈中，及冻干。获得产物， 为Li盐。
产量：19毫克(理论值的99％)
ESI-MS：(M+H)+＝704
Rf＝0.10(硅胶，DCM/MeOH/NH390∶10∶1)
实施例6
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4-环 己基-哌嗪-1-基)-1-(3，5-二溴-4-羟基-苄基)-2-氧代-乙基酯

6a)(Z，E)-3-(4-乙酰氧基-3，5-二溴苯基)-2-乙酰氨基-丙烯酸
在氮气氛下，将30.0克(107毫摩尔)3，5-二溴-4-羟基-苯甲醛、18.8克(268 毫摩尔)N-乙酰基甘氨酸及13.2克(161毫摩尔)NaOAc在120毫升乙酸酐中 的混合物，在130℃加热，1.5小时。使混合物冷却至90℃，并将15毫升 水慢慢滴加至其中，其方式要使温度不超过100℃。添加结束后，将混合物 在90℃下再保持2小时，冷却至70℃，与300毫升水混合，并搅拌30分 钟。滤出沉淀物，以水洗涤，并于50℃下干燥。使粗产物进一步反应，无 需纯化。
产量：35.7克(理论值的79％)
ESI-MS：(M+H)+＝420/422/424(2Br)
Rf＝0.20(硅胶，DCM/MeOH/AcOH90∶10∶1)
6b)3-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-2氧代-丙酸
在冰冷却下，将325毫升4M HCl添加至35.7克(84.8毫摩尔)(Z，E)-3-(4- 乙酰氧基-3，5-二溴苯基)-2-乙酰氨基-丙烯酸在290毫升NMP中的溶液内， 并将反应混合物在120℃(浴温)加热1.5小时。使混合物冷却至0℃，与1.4 升水混合，并再搅拌30分钟。滤出所形成沉淀物，并干燥。
产量：20.5克(理论值的72％)
ESI-MS：(M-H)-＝335/337/339(2Br)
Rf＝0.35(硅胶，DCM/MeOH/AcOH80∶20∶2)
6c)(R)-3-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸
在氩气氛下，将6毫升(43.1毫摩尔)三乙胺添加至14.5克(42.9毫摩尔) 3-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-2-氧代-丙酸在250毫升THF中的溶液内，并使混 合物冷却至-32℃。然后，滴加22.6克(70.5毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基 硼烷在90毫升THF中的溶液，要使温度不超过-20℃。将反应混合物在-30 ℃下搅拌30分钟，并在2.5小时内，将其加温至0℃。为完成反应，将混 合物再一次冷却至-32℃，滴加5.8克(18.1毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基 硼烷在40毫升THF中的溶液，要使温度不超过-20℃，然后将反应混合物 在冰浴中搅拌过夜。于再一次冷却至-32℃后，再滴加2.5克(7.8毫摩尔) (1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷在20毫升THF中的溶液，将反应混合物在此 温度下搅拌30分钟，于2.5小时内加温至0℃，接着在室温下搅拌66小时。 将100毫升10％NaOH添加至反应溶液中，要使温度不超过25℃，再搅拌 30分钟，与MTBE混合，分离出有机相，并再一次以20毫升10％NaOH 溶液萃取。将合并的水相以MTBE洗涤数次，以20％HCl酸化，并以乙醚 /EtOAc(1∶1)充分萃取。将合并的有机相与活性炭混合，及过滤。使产物进 一步反应，无需纯化。
产量：12.7克(理论值的87％)
ESI-MS：(M-H)-＝337/339/341(2Br)
Rf＝0.4(硅胶，DCM/MeOH/AcOH80∶20∶2)
保留时间(HPLC-MC)：6.4分钟(方法D)
6d)(R)-3-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯
将14.0克(34.8毫摩尔)(R)-3-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸在100 毫升HCl的甲醇溶液(6M)中的溶液在室温下搅拌3小时。在真空中蒸干混 合物，并使残留物用层析法纯化(硅胶，正-己烷/EtOAc7∶3)。
产量：7.0克(理论值的57％)
ESI-MS：(M-H)-＝351/353/355(2Br)
保留时间(HPLC-MC)：9.8分钟(方法D)
6e)(R)-3-[3，5-二溴-4-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-2-羟基-丙 酸甲酯
在氮气氛下，将11.1克(76.6毫摩尔)40％KF/Al2O3添加至6.78克(19.2 毫摩尔)(R)-3-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯在100毫升乙腈中的 溶液内，并将所形成的悬浮液在室温下搅拌数分钟。然后，添加4.07毫升 (23.0毫摩尔)(2-氯甲氧基-乙基)-三甲基硅烷在20毫升乙腈中的溶液，并将 反应混合物在室温下搅拌20小时。经过硅藻土过滤混合物，在真空中蒸干 溶剂，并使残留物用层析法纯化(硅胶，正-己烷/EtOAc7∶3)。
产量：5.49克(理论值的59％)
Rf＝0.45(硅胶，正-己烷/EtOAc1∶1)
6f)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[3，5-二溴-4-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-1-甲氧基-羰基-乙 基酯
在氮气氛下，将1.23克(10.0毫摩尔)4-二甲基氨基吡啶添加至冷却至 15℃的1.99克(9.56毫摩尔)氯甲酸4-硝基苯酯在80毫升乙腈中的溶液内。 使所形成的悬浮液冷却至-7℃，并慢慢地与4.63克(9.56毫摩尔)(R)-3-[3，5- 二溴-4-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-2-羟基-丙酸甲酯在20毫升乙 腈中的溶液混合。将混合物在此温度下再搅拌15分钟，添加2.35克(9.56 毫摩尔)3-哌啶-4-基-1，3，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-2-酮，并将反应混合物 在室温下搅拌2.5小时。在真空中蒸干混合物，使残留物溶于EtOAc中， 以10％柠檬酸及10％Na2CO3溶液洗涤有机相，并以Na2SO4干燥。在去除干 燥剂与溶剂后，使残留物用层析法纯化(硅胶，梯度正-己烷/EtOAc1∶1至 2∶8)。
产量：4.35克(理论值的69％)
ESI-MS：(M+H)+＝754/756/758(2Br)
保留时间(HPLC)：29.2分钟(方法D)
6g)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂霸-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3，5-二溴-4-羟基-苯基]-1-甲氧基羰基-乙基酯
在氮气氛下，将5.46克H2SO4的甲醇溶液(0.5M)添加至4.30克(5.69毫 摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[3，5- 二溴-4-(2-三甲基硅烷-乙氧基甲氧基)-苯基]-1-甲氧基-羰基-乙基酯在40毫 升THF与40毫升MeOH中的溶液内，并将反应溶液在室温下搅拌6小时。 在真空中蒸干反应混合物，并使残留物进一步反应，无需纯化。
产量：定量
ESI-MS：(M+H)+＝624/626/628(2Br)
保留时间(HPLC)：17.3分钟(方法D)
6h)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1- 羧基-2-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-乙基酯
将0.51克(21.3毫摩尔)氢氧化锂溶液添加至4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-1-甲氧基羰基 -乙基酯(得自实施例6g的粗产物)在80毫升THF中的溶液内，并将反应混 合物在室温下搅拌3小时。在真空中去除THF，将水相以EtOAc洗涤，以 10％HCl酸化，并以EtOAc充分萃取水相。于真空中蒸干合并的有机相， 悬浮于乙醚中，过滤，使残留物干燥，接着用层析法纯化(硅胶， DCM/MeOH/AcOH90∶10∶1)。
产量：3.5克(理论值的100％)
ESI-MS：(M+H)+＝610/612/614(2Br)
保留时间(HPLC)：14.1分钟(方法D)
6i)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(4- 环己基-哌嗪-1-基)-1-(3，5-二溴-4-羟基-苄基)-2-氧代-乙基酯
将30毫克(0.18毫摩尔)1-环己基-哌嗪在室温下添加至100毫克(0.16 毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧 基-2-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-乙基酯、58毫克(0.18毫摩尔)TBTU及25微升 (0.18毫摩尔)三乙胺在1毫升DMF中的溶液内，并将反应混合物在室温下 搅拌过夜。经过注射滤器过滤反应溶液，并直接经HPLC纯化，无需任何 进一步处理。合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：64毫克(理论值的51％)
ESI-MS：(M+H)+＝760/762/764(2Br)
保留时间(HPLC-MS)：3.3分钟(方法A)
实施例6.1
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3，5- 二溴-4-羟基-苄基)-2-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例6i，由100毫克(0.16毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-乙基酯 与31毫克(0.18毫摩尔)4-哌啶-4-基-吗啉制得产物。
产量：72毫克(理论值的58％)
ESI-MS：(M+H)+＝762/764/766(2Br)
保留时间(HPLC-MS)：3.1分钟(方法A)
实施例6.2
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3，5- 二溴-4-羟基-苄基)-2-[4-(4-乙氧基羰基甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-乙 基酯

类似实施例6i，由100毫克(0.16毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯 并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(3，5-二溴-4-羟基-苯基)-乙基酯 与46毫克(0.18毫摩尔)(4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基)-乙酸乙基酯制得产物。
产量：5毫克(理论值的4％)
ESI-MS：(M+H)+＝847/849/851(2Br)
保留时间(HPLC-MS)：2.9分钟(方法A)
实施例7
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3-溴 -4-羟基-苄基)-2-(4-环己基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基酯

7a)(Z，E)-3-(4-乙酰氧基-3-溴苯基)-2-乙酰氨基-丙烯酸
类似实施例6a，由75.0克(366毫摩尔)3-溴-4-羟基-苯甲醛与64.2克(548 毫摩尔)N-乙酰基甘氨酸制得。对反应混合物冷却后，使产物沉淀析出，并 过滤，以水洗涤，并干燥。
产量：69.8克(理论值的56％)
保留时间(HPLC)：7.6分钟(方法D)
7b)3-(3-溴-4-羟基-苯基)-2-氧代-丙酸
在冰冷却下，将750毫升4M HCl添加至69.7克(204毫摩尔)(Z，E)-3-(4- 乙酰氧基-3-溴苯基)-2-乙酰氨基-丙烯酸在300毫升NMP中的溶液内，并将 反应混合物在95℃(浴温)加热2.5小时。使其在室温冷却过夜，与2升水混 合，以各300毫升EtOAc萃取三次，将合并的有机相以各1升水洗涤两次， 并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使残留物进一步反应，无需纯 化。
产量：45.8克(理论值的87％)
保留时间(HPLC)：7.8分钟(方法D)
7c)(R)-3-(3-溴-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸
在氩气氛下，将29毫升(356毫摩尔)三乙胺添加至45.0克(174毫摩尔) 3-(3-溴-4-羟基-苯基)-2-氧代-丙酸在350毫升THF中的溶液内，并使混合物 冷却至-27℃。然后，滴加114克(356毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷 在200毫升THF中的溶液，要使温度不超过-20℃。将反应混合物在-30℃ 下搅拌15分钟，并在1小时内使其温热至室温。将200毫升10％NaOH添 加至反应溶液中，要使温度不超过25℃，再搅拌15分钟，以400毫升水稀 释，与400毫升MTBE混合，并分离出水相。将其以400毫升MTBE洗涤， 以150毫升4M HCl酸化，以各400毫升EtOAc萃取两次，将合并的有机 相以饱和NaCl溶液洗涤，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使 残留物进一步反应，无需纯化。
产量：53.7克(理论值的89％)
保留时间(HPLC)：4.0分钟(方法D)
7d)(R)-3-(3-溴-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯
将2.5毫升浓硫酸添加至53.6克(154毫摩尔)(R)-3-(3-溴-4-羟基-苯 基)-2-羟基-丙酸在250毫升MeOH中的溶液内，并将反应混合物在室温下 搅拌4小时。在真空中蒸干混合物，使残留物溶于250毫升EtOAc中，将 有机相以各100毫升饱和NaHCO3及饱和NaCl溶液洗涤两次，并以Na2SO4 干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使残留物进一步反应，无需纯化。
产量：定量
保留时间(HPLC)：6.8分钟(方法D)
7e)(R)-3-[3-溴-4-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-2-羟基-丙酸甲 酯
将6.7毫升(39.1毫摩尔)乙基二异丙基胺添加至10.2克(34.6毫摩尔) (R)-3-(3-溴-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯在100毫升DCM中的溶液内，并 使反应混合物在冰浴中冷却。然后，添加7.9毫升(44.6毫摩尔)(2-氯甲氧基 -乙基)-三甲基硅烷在20毫升DCM中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌 3小时，接着，为完成反应，再与0.67毫升乙基二异丙基胺及0.8毫升(4.5 毫摩尔)(2-氯代甲氧基-乙基)-三甲基硅烷混合，并在室温下搅拌1.5小时。 将反应混合物以5％Na2CO3及饱和NaCl溶液洗涤，并以Na2SO4干燥。在 去除干燥剂与溶剂后，使残留物用层析法纯化(硅胶，环己烷/EtOAc75∶25)。
产量：9.6克(理论值的68％)
保留时间(HPLC)：15.1分钟(方法E)
7f)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[3-溴-4-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-1-甲氧基羰基-乙基酯
类似实施例6f，由4.55克(11.2毫摩尔)(R)-3-[3-溴-4-(2-三甲基硅烷基- 乙氧基甲氧基)-苯基]-2-羟基-丙酸甲酯与2.75克(11.2毫摩尔)3-哌啶-4-基 -1，3，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-2-酮制备。
产量：5.46克(理论值的72％)
保留时间(HPLC)：16.5分钟(方法E)
7g)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3-溴-4-羟基-苯基]-1-甲氧基羰基-乙基酯
类似实施例6g，由5.40克(7.98毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并 二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[3-溴-4-(2-三甲基硅烷-乙氧基甲氧基)-苯 基]-1-甲氧基羰基-乙基酯与7.7毫升(4.2毫摩尔)硫酸的甲醇溶液(0.5M)制 备。使粗产物(5.44克)进一步反应，无需纯化。
保留时间(HPLC)：9.9分钟(方法E)
7h)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3-溴-4-羟基-苯基)-1-羧基-乙基酯
将0.84克(34.1毫摩尔)氢氧化锂在20毫升水中的溶液添加至5.44克得 自实施例7g的粗产物在80毫升THF中的溶液内，并将反应混合物在室温 下搅拌1小时。在真空中去除有机溶剂，将水相以EtOAc洗涤，以10％HCl 酸化，并以EtOAc充分萃取。将合并的有机相以饱和NaCl溶液洗涤，并以 Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，将残留物以90毫升乙醚研制，过滤， 将固体以乙醚洗涤，并于45℃下干燥。
产量：4.10克(理论值的89％，历经2个步骤)
保留时间(HPLC)：8.2分钟(方法E)
7i)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3- 溴-4-羟基-苄基)-2-氧代-2-[4-(四氢吡喃-4-基)-哌嗪-1-基]-乙基酯
类似实施例5.20，由100毫克(0.19毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(3-溴-4-羟基-苯基)-1-羧基-乙基酯与 35毫克(0.21毫摩尔)1-环己基-哌嗪制备。
产量：62毫克(理论值的49％)
ESI-MS：(M+H)+＝682/684(Br)
保留时间(HPLC-MS)：3.2分钟(方法A)
实施例7.1
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂革-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3-溴 -4-羟基-苄基)-2-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例5.20，由100毫克(0.19毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(3-溴-4-羟基-苯基)-1-羧基-乙基酯与 36毫克(0.21毫摩尔)4-哌啶-4-基-吗啉制备。
产量：66毫克(理论值的51％)
ESI-MS：(M+H)+＝684/686(Br)
保留时间(HPLC-MS)：2.9分钟(方法A)
实施例7.2
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3-溴 -4-羟基-苄基)-2-(1’-乙氧基羰基甲基-4，4’-联哌啶-1-基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例5.20，由150毫克(0.28毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(3-溴-4-羟基-苯基)-1-羧基-乙基酯与 79毫克(0.31毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-基-乙酸乙基酯制备。
产量：63毫克(理论值的29％)
ESI-MS：(M+H)+＝768/770(Br)
保留时间(HPLC-MS)：3.2分钟(方法A)
实施例7.3
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3-溴 -4-羟基-苄基)-2-[4-(4-乙氧基羰基甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-乙基酯

类似实施例5.20，由150毫克(0.28毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-(3-溴基-4-羟基-苯基)-1-羧基-乙基酯 与79毫克(0.31毫摩尔)(4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基)-乙酸乙基酯制备。
产量：82毫克(理论值的38％)
ESI-MS：(M+H)+＝769/771(Br)
保留时间(HPLC-MS)：3.1分钟(方法A)
实施例7.4
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3-溴 -4-羟基-苄基)-2-[4-(4-羧甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-氧代-乙基酯

将3.0克(0.12毫摩尔)氢氧化锂在5毫升水中的溶液，在室温下添加至 50毫克(0.07摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧 酸(R)-1-(3-溴-4-羟基-苄基)-2-[4-(4-乙氧基羰基甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1- 基]-2-氧代-乙基酯在5毫升THF中的溶液内，并将反应混合物搅拌1小时。 在真空中去除有机溶剂，将含水残留物以1M HCl酸化，并再一次于真空中 蒸干。使残留物经HPLC纯化；合并含有产物的洗脱部分，并冻干。
产量：28毫克(理论值的59％)
ESI-MS：(M+H)+＝741/743(Br)
保留时间(HPLC-MS)：2.5分钟(方法A)
实施例8
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3，5- 二氯-4-羟基-苄基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-乙基酯

8a)2，6-二氯-4-碘-苯酚
将40.7克(245毫摩尔)碘化钠在160毫升水与9.6毫升(143毫摩尔)乙烷 -1，2-二胺在16毫升水中的溶液，添加至40.0克(245毫摩尔)2，6-二氯-苯酚 在180毫升EtOH中的溶液内，并将混合物在室温下搅拌15分钟。接着， 以小批量，将62.3克(245毫摩尔)碘添加至反应混合物中。为完成反应，在 3小时后，在室温下再添加31.1克(122毫摩尔)碘与4.8毫升(72毫摩尔)乙 烷-1，2-二胺，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加饱和NaHSO3溶液， 直到酸性反应为止，将混合物以各400毫升EtOAc萃取三次，以饱和NaCl 溶液洗涤合并的有机相，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使残 留物进一步反应，无需纯化。
产量：69.0克(理论值的97％)
Rf＝0.5(硅胶，正-己烷/EtOAc4∶1)
8b)[2-(2，6-二氯-4-碘-苯氧基甲氧基)-乙基]-三甲基硅烷
在氮气氛下，将33.5克(242毫摩尔)K2CO3与20.7毫升(117毫摩尔)(2- 氯代甲氧基-乙基)-三甲基硅烷添加至28.0克(96.9毫摩尔)2，6-二氯-4-碘-苯 酚在800毫升乙腈中的溶液内，并使反应混合物加热回流1小时。在真空 中蒸干反应混合物，使残留物溶于300毫升水中，以各300毫升EtOAc萃 取三次，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使残留物进一步反应， 无需纯化。
产量：38.4克(理论值的95％)
Rf＝0.83(硅胶，正-己烷/EtOAc4∶1)
8c)3，5-二氯-4-羟基-苯甲醛
在氩气氛下，将以50毫升THF稀释的39.4毫升(78.8毫摩尔)异丙基氯 化镁(2M，在THF中)，慢慢滴加至冷却至-20℃的30.0克(71.6毫摩尔)[2-(2，6- 二氯-4-碘-苯氧基甲氧基)-乙基]-三甲基硅烷在200毫升THF中的溶液内。 在添加结束后，在-10℃下添加11.0毫升(143毫摩尔)DMF，并使反应混合 物慢慢上升至室温。在反应停止后(TLC监控)，添加100毫升2M HCl，并 将反应溶液在室温下搅拌过夜。将其以各300毫升EtOAc萃取两次，以饱 和NaCl溶液洗涤合并的有机相，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂 后，使残留物自环己烷/EtOAc(1∶1)，经二次重结晶纯化。
产量：12.0克(理论值的88％)
8d)(Z，E)-3-(4-乙酰氧基-3，5-二氯-苯基)-2-乙酰氨基-丙烯酸
将12.2克(64毫摩尔)3，5-二氯-4-羟基-苯甲醛、11.2克(96毫摩尔)N-乙 酰基甘氨酸及7.86克(96毫摩尔)乙酸钠在50毫升乙酸酐中的混合物，在130 ℃(浴温)加热3小时。使反应混合物冷却至90℃，并添加5毫升水，要使内 部温度不超过100℃。将混合物在90℃下搅拌2小时，并添加200毫升水， 这时形成沉淀物。将其滤出，以水充分洗涤，并干燥。
产量：12.0克(理论值的57％)
Rf＝0.84(硅胶，环己烷/EtOAc1∶1)
8e)3-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-2-氧代-丙酸
将131毫升4M HCl在室温下添加至12.0克(36.1毫摩尔)(Z，E)-3-(4-乙 酰氧基-3，5-二氯-苯基)-2-乙酰氨基-丙烯酸在70毫升NMP中的溶液内，并 将反应混合物在130℃(浴温)加热，4小时。在冷却至0℃后，添加200毫升 水，并将混合物搅拌过夜，此时形成沉淀物。将其滤出，并干燥(2.9克；纯 度95％)。将滤液以各300毫升环己烷/EtOAc(1∶3)萃取三次，使合并的有机 相干燥，并在真空中蒸干。在去除干燥剂与溶剂后，获得4克产物(纯度： 80％)。
产量：6.0克(理论值的66％)
ESI-MS：(M+H)+＝250/252/254(2Cl)
Rf＝0.30(硅胶，DCM/MeOH/AcOH90∶10∶1)
8f)(R)-3-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸
类似实施例7c，由3.00克(10.0毫摩尔)3-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-2-氧 代-丙酸(纯度：80％)与6.34克(20.0毫摩尔)(1R)-B-氯代二异松蒎基硼烷制 备。使粗产物(1.9克)进一步反应，无需纯化。
8g)(R)-3-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯
将2毫升浓硫酸添加至得自实施例8f的粗产物在30毫升MeOH中的 已经冷却至0℃的溶液内，并将反应混合物在此温度下搅拌2小时。将混合 物以固体KHCO3中和，以水稀释，并以EtOAc充分萃取。将合并的有机相 以饱和NaCl溶液洗涤，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，使产 物进一步反应，无需纯化。
产量：1.8克(理论值的75％，历经2个步骤)
8h)(R)-3-[3，5-二氯-4-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-2-羟基-丙 酸甲酯
在氮气氛下，将5.79克(76.6毫摩尔)40％KF/Al2O3添加至2.64克(9.96 毫摩尔)(R)-3-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-2-羟基-丙酸甲酯在20毫升乙腈中的 溶液内，并将所形成的悬浮液在室温下搅拌数分钟。然后，添加2.12毫升 (12.0毫摩尔)(2-氯基甲氧基-乙基)-三甲基硅烷在20毫升乙腈中的溶液，并 将反应混合物在室温下搅拌20小时。经过硅藻土过滤混合物，并在真空中 蒸干溶剂。使残留物进一步反应，无需纯化。
产量：3.80克(理论值的97％)
8i)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-[3，5-二氯-4-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-1-甲氧基羰基-乙 基酯
类似实施例6f，由3.80克(8.65毫摩尔)(R)-3-[3，5-二氯-4-(2-三甲基硅 烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-2-羟基-丙酸甲酯与2.12克(8.65毫摩尔)3-哌啶 -4-基-1，3，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-2-酮。使产物用层析法纯化(硅胶， DCM/MeOH98∶2)。
产量：3.10克(理论值的54％)
8k)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-1-甲氧基羰基-乙基酯
类似实施例6g，由3.10克(4.65毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并 二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-[3，5-二氯-4-(2-三甲基-硅烷基-乙氧基甲氧 基)-苯基]-1-甲氧基羰基-乙基酯与4.48毫升硫酸的甲醇溶液(0.5M)制备。
产量：2.49克(理论值的100％)
81)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧 基-2-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-乙基酯
将0.42克(17.3毫摩尔)氢氧化锂在20毫升水中的溶液，添加至2.49克 (4.64毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-2-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-1-甲氧基羰基-乙基酯在50毫升THF中的溶液 内，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。在真空中去除有机溶剂，将水 相以EtOAc洗涤，以10％HCl酸化，以EtOAc充分萃取，将合并的有机相 以饱和NaCl溶液洗涤，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂与溶剂后，将残 留物以乙醚研制，抽气过滤，并干燥。
产量：1.60克(理论值的66％)
Rf＝0.05(硅胶，DCM/MeOH9∶1)
8m)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸 (R)-1-(3，5-二氯-4-羟基-苄基)-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-2-氧代-乙 基酯
在氮气氛下，将150毫克(0.29毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并 二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-乙基酯、 63.8毫克(0.34毫摩尔)1-甲基-4-哌啶-4-基-哌嗪及0.17毫升(0.98毫摩尔)乙 基二异丙基胺在10毫升DMF中的混合物在室温下搅拌5分钟。然后，将 124毫克(0.32毫摩尔)HATU添加至反应混合物中，接着将其搅拌4小时。 使其在真空中蒸发，并使残留物用层析法纯化(硅胶，梯度DCM至 DCM/MeOH85∶15)。合并含有产物的洗脱部分，在真空中蒸干，并经过氧 化铝过滤，其中将产物以DCM/MeOH9∶1洗脱。在真空中蒸发混合物，将 残留物以乙醚研制，并过滤并干燥产物。
产量：43毫克(理论值的22％)
ESI-MS：(M+H)+＝687/689(2Cl)
保留时间(HPLC-MS)：2.8分钟(方法A)
下列化合物在各情况中，以类似方式由150毫克4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢 -1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)- 乙基酯及相应量的胺制备：


实施例8.4
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-(3，5- 二氯-4-羟基-苄基)-2-氧代-2-(4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基)-乙基酯

在氮气氛下，将150毫克(0.29毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并 二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(3，5-二氯-4-羟基-苄基)-乙基酯、 105毫克(0.34毫摩尔)4-哌嗪-1-基-哌啶-1-羧酸叔丁基酯(以其盐酸盐使用) 及0.17毫升(0.98毫摩尔)乙基二异丙基胺在10毫升DMF中的混合物，在 室温下搅拌5分钟。然后，将124毫克(0.32毫摩尔)HATU添加至反应混合 物中，接着将其搅拌4小时。使其在真空中蒸干，并使残留物用层析法纯 化(硅胶，梯度DCM至DCM/MeOH85∶15)。合并含有产物的洗脱部分，并 于真空中蒸干。使残留物溶于10毫升甲酸中，并在室温下搅拌3小时。在 真空中蒸干混合物，使残留物溶于饱和NH3溶液中，以EtOAc充分萃取， 将合并的有机相以饱和NaCl溶液洗涤，并以Na2SO4干燥。在去除干燥剂 与溶剂后，将残留物以乙醚研制，抽气过滤，并干燥。
产量：47毫克(理论值的24％)
ESI-MS：(M+H)+＝673/675(2Cl)
保留时间(HPLC-MS)：2.6分钟(方法A)
实施例8.5
4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3-苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-2-4，4’- 联哌啶-1-基-1-(3，5-二氯-4-羟基-苄基)-2-氧代-乙基酯

类似实施例8.4，由150毫克(0.29毫摩尔)4-(2-氧代-1，2，4，5-四氢-1，3- 苯并二氮杂-3-基)-哌啶-1-羧酸(R)-1-羧基-2-(3，5-二氯-4-羟基-苯基)-乙基 酯与92毫克(0.34毫摩尔)[4，4’]联哌啶-1-羧酸叔丁基酯制备。
产量：84毫克(理论值的44％)
ESI-MS：(M+H)+＝672/674(2Cl)
保留时间(HPLC-MS)：3.1分钟(方法A)