技术领域
[0001] 本
发明涉及药品技术领域，特别是一种天然脑蛋白水解物注射剂及其制备方法。 背景技术
[0002] 脑蛋白水解物是由健康猪脑组织经现代控制水解技术制备的低分子肽类神经营 养药物。低分子肽具有
生物活性，能调节人体脑代谢、神经传递及神经生长，能提高
葡萄糖 分解酶活性，增加脑对葡萄糖的无
氧能量代谢。降低脑内乳酸的浓度，在缺血缺氧时对神经 细胞的线粒体有保护作用。临床主要用于颅脑外伤、脑血管病后遗证、老年性痴呆症等。
[0003] 现有脑蛋白水解物注射剂原料均是采用猪脑提取后，外源性“补加”或“修饰”
氨 基酸而得，并非天然提取氨基酸。而外源性“补加”或“修饰”的氨基酸都是属于生物
发酵 氨基酸和部分石油副产品合成氨基酸，和动物
蛋白质的水解氨基酸有很大的区别。用其专 属性指标“比旋度”测定天然提取物和添加物有极大差异（P < 0. 001)。
发明内容
[0004] 本发明的目的是克服在脑蛋白水解物注射剂中外源性“补加”或“修饰”氨基酸的 做法，提供一种产品
质量稳定可控的经天然提取脑蛋白水解物注射剂及其制备方法。
[0005] 本发明是在原脑蛋白水解物原料提取工艺的
基础上进行了创新性的改进。具体技 术方案为：本发明的脑蛋白水解物注射剂原料是以猪脑中经控制水解获得的淡黄色至棕黄 色液体，有效成份为小分子多肽和游离氨基酸，为天然水解物。是一种不含蛋白质的脑组织 水解物，脑多肽分子量小于10000的占15 %，游离氨基酸占85 %，包括各种必需和非必需以 及其它特殊氨基酸，其氨基酸的恒定比例为天然猪脑组织的恒定比例。
[0006] 上述脑蛋白水解物注射剂原料的制备方法按以下步骤进行：
[0007] 1、粗提取：
[0008] 1)胃蛋白酶水解：猪脑组织加入等量水勻浆，50〜90°C保温30〜50分钟，冷却 至20〜50°C搅拌加入猪脑重量1〜5% [按2800〜5000Eu/g计（活性要求）]的胃蛋白 酶，30〜50°C搅拌，加入
盐酸调pH3. 0〜5. 0，搅拌30〜50°C保温1〜5小时后停止搅拌， 再30〜50°C保温1〜4小时，收集上清液，沉淀离心，合并上清液；
[0009] 2)高温灭活：上清液减压浓缩到猪脑重1/4〜1/2的量，100〜125°C灭活3〜6 小时，加水至猪脑重，调pH值5. 0〜7. 0，布袋过滤，加入
活性炭（IKg猪脑加入10〜20g)， 微沸10〜30分钟，冷却至40〜60°C脱炭，调pH值6. 7〜7. 5 ；
[0010] 3)再酶解：上述脱炭液加入猪脑重量1〜3% (按2000〜3500Eu/g计）的胰酶， 35〜45°C保温1〜4小时，调pH值2. 0〜4. 5，静置10〜16小时，取上清液，沉淀过滤，合 并上清液；
[0011] 2、精提取： [0012] 1)柱层析：上述上清液上柱后，用水冲洗至pH值2.0〜4.0，用lmol/L
氨水洗脱， 收集洗脱液，PH值在8. 0〜12. 0,每公斤猪脑加入1. 0〜3. Og氢氧化钠减压浓缩去氨水，浓缩至猪脑重1/5〜1/3的量，过夜，去除沉淀，得原液，-20°C冻结保存；
[0013] 2)
超滤：调配前解冻超滤，用10000分子量超滤膜超滤，收集过滤液，定容，按原液标准检定含量后即为调配用原液；
[0014] 3)上述原液的检定：
[0015] (1)性状：为浅黄色至棕黄色液体；
[0016] (2)
鉴别：供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图基本一致；
[0017] (3)pH 值：8· 0 〜10. 0 ；
[0018] (4) 16种游离氨基酸含量应符合标准规定；（在不添加氨基酸的情况下，总N 5. 49 〜6. 71mg/ml 时，16 种氨基酸总量为 28. 08 〜42. 14mg/ml,)
[0019] 3、调配：
[0020] 根据检测结果计算需加入原液量，计算方法如下：
[0021] 原液加入量（ml)=药液总量（ml) X 35. 6mg/ml+原液氨基酸含量（mg/ml)
[0022] 量取上述计算量的原液，加注射用水至药液总量的90%，混勻，用盐
酸溶液调pH 值至6. 9〜7. 5，加药液总量0. 035%的亚
硫酸氢钠，加注射用水至药液总量，混勻，即可。
[0023] 4、灌封：
[0024] 用安瓿洗烘灌联动机组灌装，每支灌装10. Oml0
[0025] 5、灭菌：
[0026] 将已灌封的脑蛋白水解物注射液放入灭菌柜内，115°C灭菌30min ；
[0027] 6、灯检。
[0029] 本发明的脑蛋白水解物注射剂原料及其制备方法有以下特点：
[0030] 1.通过工艺改进，得到天然水解的游离氨基酸，而不是外源性“添加”或“修饰”的氨基酸。
[0031] 2.虽然创新的工艺与原工艺相比发生变化，但其药品标准完全符合国家对该产品 的标准要求，且质量更稳定可靠。
[0032] 3.在原标准的基础上增加了异常毒性、高分子物质等安全性指标，更加保证了产 品的临床用药安全。
[0033] 4.在原标准基础上增加比旋度测定专属性指标，以区分天然提取氨基酸和添加氨 基酸。专属性试验及标准确定如下：
[0034] 1).专属性试验：
[0035] 取本发明的脑蛋白水解物注射液（规格：10ml)各13批，按中国药典2005年版二 部附录VIE中的方法测定比旋度，测定结果如下：
[0036]
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[0038] 结果表明：本发明产品与现有的产品有明显区别，其中现有产品比旋度 在-0.574°〜-0.644°之间，本发明产品比旋度在-0. 419°〜-0. 464°之间。现有产品 比旋度与本发明产品比旋度进行组间比较，其P < 0. 001，有非常显著性差异。
[0039] 2).标准确定：
[0040] 取本发明产品13批脑蛋白水解物注射液（规格：10ml)，按照检测方法进行检测， 结果均在-0.40°〜-0.5°之间，平均偏差为1.57%，结果如下：故规定本品比旋度的范围 为-0.40° 至-0.50°。
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[0042] 本发明的药理毒理：
[0043] 本发明的药品为大脑所特有的肽能神经营养药物，能以多种方式作用于中枢神 经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细 胞免受各种缺血和神经毒素的损害。本品可通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼 吸链，具有抗缺氧的保护能
力，改善脑内能量代谢。激活腺苷酸环化酶和催化其它
激素系 统，提供神经递质、肽类激素及辅酶前体。
[0044] 药代动力学：本品可透过血脑屏障进入神经细胞，氨基酸在脑内迅速代谢，
半衰期 (Τ1/2)由数秒至数小时。
[0045] 适应症：用于颅脑外伤、脑血管病后遗症伴有记忆减退及注意力集中障碍的症状 改善。
[0046] 用法用量：每一
疗程最好连续注射，参考病人年龄，病情以决定疗程长短及剂量， 皮下注射不超过2ml，肌肉注射不超过5ml，静脉滴注一般使用IOml，稀释于250ml生理盐水 中缓慢滴注，每日一次。约60-120分钟滴完，可连续使用10-14天为一疗程。
具体实施方式
[0048] 本发明的药品按以下工艺步骤制得：
[0049] 1、粗提取：
[0050] 1)胃蛋白酶水解：猪脑组织加入等量水勻浆，50〜90°C保温30〜50分钟，冷却 至20〜50°C搅拌加入猪脑重量(按2800〜5000Eu/g计）的胃蛋白酶，30〜60°C搅 拌，加入盐酸调PH3. 0〜5. 0，搅拌30〜50°C保温1〜5小时后停止搅拌，再30〜50°C保 温1〜4小时，收集上清液，沉淀离心，合并上清液；
[0051] 2)高温灭活：上清液减压浓缩到猪脑重1/4〜1/2的量，100〜125°C灭活3〜6 小时，加水至猪脑重，调PH值5. 0，布袋过滤，每公斤猪脑加入IOg活性炭，微沸10〜30分钟，冷却至40〜60°C脱炭，调pH值6. 7。
[0052] 3)再酶解：上述脱炭液加入猪脑重量1 % (按2000〜3500Eu/g计）的胰酶，35〜 45°C保温1〜4小时，调pH值2. 0，静置10〜16小时，取上清液，沉淀过滤，合并上清液。
[0053] 2、精提取：
[0054] 1)柱层析：上述上清液上柱后，用水冲洗至pH值2.0，用lmol/L氨水洗脱，收集洗 脱液，PH值在8. 0，每公斤猪脑加入1. Og氢氧化钠减压浓缩去氨水，浓缩至猪脑重1/5〜 1/3的量，过夜，去除沉淀，得原液，-20°C冻结保存； [0055] 2)超滤：调配前解冻超滤，用10000分子量超滤膜超滤，收集过滤液，定容，按原液 标准检定含量后即为调配用原液；
[0056] 3)上述原液的检定：
[0057] (1)性状：为浅黄色至棕黄色液体；
[0058] (2)鉴别：供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图基本一致；
[0059] (3)口!1值：8.0;
[0060] (4) 16种游离氨基酸含量应符合标准规定；
[0061] 3、调配：
[0062] 按生产脑蛋白水解物注射液1000支计算，药液总量为10000ml，若原液氨基酸含 量为120mg/ml，则原液加入量为：
[0063] 10000ml X 35. 6mg/ml + 120mg/ml = 2967ml
[0064] 量取2967ml的原液，加注射用水至药液总量的90%，S卩加注射用水至9000ml，混 勻，用盐酸溶液调PH值至6. 9，加3. 5g的亚硫酸氢钠，加注射用水至药液总量，混勻，即可。
[0065] 4、灌封：
[0066] 用安瓿洗烘灌联动机组灌装，每支灌装10. Oml0
[0067] 5、灭菌：
[0068] 将已灌封的脑蛋白水解物注射液放入灭菌柜内，115°C灭菌30min ；
[0069] 6、灯检。
[0070] 7、包装。
[0071] 实施例2:
[0072] 1、粗提取：
[0073] 1)胃蛋白酶水解：猪脑组织加入等量水勻浆，50〜90°C保温30〜50分钟，冷却至 20〜50°C搅拌加入猪脑重量5% (按2800〜5000Eu/g计）的胃蛋白酶，30〜60°C搅拌， 加入盐酸调PH 5. 0，搅拌30〜50°C保温1〜5小时后停止搅拌，再30〜50°C保温1〜4 小时，收集上清液，沉淀离心，合并上清液；
[0074] 2)高温灭活：上清液减压浓缩到猪脑重1/4〜1/2的量，100〜125°C灭活3〜6 小时，加水至猪脑重，调pH值7. 0，布袋过滤，每公斤猪脑加入活性炭20g，微沸10〜30分 钟，冷却至40〜60°C脱炭，调pH值7. 5 ；
[0075] 3)再酶解：上述脱炭液加入猪脑重量3% (按2000〜3500Eu/g计）的胰酶，35〜 451：保温1〜4小时，调？!1值4.5，静置10〜16小时，取上清液，沉淀过滤，合并上清液。
[0076] 2、精提取：
[0077] 1)柱层析：上述上清液上柱后，用水冲洗至pH值4.0，用lmol/L氨水洗脱，收集洗脱液，PH值在12. 0，每公斤猪脑加入3. Og氢氧化钠减压浓缩去氨水，浓缩至猪脑重1/5〜 1/3的量，过夜，去除沉淀，得原液，-20°C冻结保存；
[0078] 2)超滤：调配前解冻超滤，用10000分子量超滤膜超滤，收集过滤液，定容，按原液 标准检定含量后即为调配用原液；
[0079] 3)上述原液的检定：
[0080] (1)性状：为浅黄色至棕黄色液体；
[0081] (2)鉴别：供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图基本一致；
[0082] (3)?!1值：10.0;
[0083] (4) 16种游离氨基酸含量应符合标准规定； [0084] 以下步骤与实施例1相同。
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