本发明涉及细胞毒性抗肿瘤剂。更具体来说，本发明涉及新的 携带包括细胞毒性氮芥部分的取代基的(1，4-醌基)链烷酸衍生物。本 发明还涉及制备所述(1，4-醌基)链烷酸衍生物的方法、含有它们的药 用组合物以及涉及它们在温血动物如人类中产生抗肿瘤效应的用 途。

细胞增生性疾病如癌症和牛皮癣的许多现有疗法采用抑制DNA 合成或细胞分裂的细胞毒性剂。这类化合物往往缺乏特异性并对所 有细胞均有毒性，因为肿瘤细胞通常只略微不同于正常细胞。细胞 毒性剂对快速分裂的肿瘤细胞的毒性效应是有利的，但是对持续细 胞分裂的正常细胞如骨髓细胞和肠道上皮细胞可能产生不利的影 响。

用细胞毒性剂的化学治疗或放射治疗在实体瘤的毛细血管网缺 乏、细胞分裂缓慢或缺乏的肿瘤块内低氧区获得实体瘤的有效治疗 特别困难。这样的低氧区在大多数主要类型的实体瘤中均存在，例 如膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、头颈部肿瘤、肺癌、卵 巢癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌。特别是通过临床样品分析表明， 较大部分的大多数头颈部肿瘤、乳腺癌和宫颈癌例如所述肿瘤块的 10-30％严重低氧，氧张力低于5mmHg(0.0066巴)。

已知在实体瘤中存在这样的低氧区可能为基于前体药物或双前 体药物(double-prodrug)法的选择性更高的细胞毒性药物疗法提供了机 会。例如，由B.D.Palmer等在 J.Med.Chem.，1992， 35，3214-3222和 涉及能够还原为更有效的氨基取代苯胺氮芥的硝基取代苯胺基芥 (anilino mustard)化合物的国际专利申请WO 93/11099中公开了前体 药物法。关于前体药物法的问题是这些快速酶还原的硝基必需的另 外的取代基趋向于使所产生的氨基取代的化合物的细胞毒性效力降 低。以双前体药物法阐明该问题。例如，G.J.Atwell等在 J.Med.Chem.， 1994， 37，371-380中和B.M.Sykes等在 J.Chem.Soc.Perkin Transact.II， 1995，337-342中公开某些 N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-2-硝基苯 乙酰胺衍生物能够还原成为相应的2-氨基苯乙酰胺衍生物，该衍生 物可以环化释放出苯胺基芥4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯胺。一种替代 的双前体药物法涉及醌和氢醌部分的生物体系中的相互转换。例如， 由L.A.Carpino等在 J.Org.Chem.，1989， 54，3303-3310中公开，某 些(1，4-醌基)链烷酸衍生物能够提供一种传递细胞毒性剂的可行方 法。所制备的典型化合物包括用来释放简单的芥子双-(2-氯代乙基)胺 的 N， N-双-(2-氯代乙基)-3-(2-甲氧基-3，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酰 胺和 N， N-双-(2-氯代乙基)-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁 酰胺。还从 Proceedings of the American Association for Cancer Research， 1997， 38，433-434(文摘第2894号)知道细胞毒性芥子药物苯丙氨酸氮 芥可以与(1，4-醌基)链烷酸连接。值得注意的是某些前体药物的体外 最快生物还原活化约为每小时25％即t1/2约2.5小时，这与还原电位 范围-480--520mV有关。相反，体外生物还原活化较慢(约每小时 10％即t1/2约6小时)的其它前体药物与还原电位约-730mV有关。

本发明目的之一是提供还原为氢醌时快速分解释放细胞毒性剂 的双前体药物醌化合物。

按照本发明，提供下式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐：

其中R1为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、羟基-(1-4C) 烷基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷基 氨基-(1-4C)烷基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1-基- (1-4C)烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪-1- 基-(1-4C)烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C) 烷基、(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基 甲酰基-(1-4C)烷基、羟基、(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C) 烷氧基-(2-4C)烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C) 烷氧基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C) 烷氧基、哌啶子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1- 基-(2-4C)烷氧基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基、(1-4C) 烷硫基、(1-4C)烷基亚磺酰基或(1-4C)烷基磺酰基；

R2为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、羟基-(1-4C)烷 基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷基氨 基-(1-4C)烷基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1-基- (1-4C)烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪-1- 基-(1-4C)烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C) 烷基、(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基 甲酰基-(1-4C)烷基、羟基、(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C) 烷氧基-(2-4C)烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C) 烷氧基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C) 烷氧基、哌啶子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1- 基-(2-4C)烷氧基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基；

R3为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、羟基-(1-4C)烷 基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷基氨基- (1-4C)烷基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1-基-(1-4C) 烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪-1-基-(1-4C) 烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C)烷基、(1-4C) 烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N-(1-4C)烷基 氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基-(1-4C) 烷基、羟基、(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷氧基-(2-4C) 烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷氧基、双- [(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C)烷氧基、哌啶 子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧 基、哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧 基；

R4为(1-4C)烷基；

R5为(1-4C)烷基；

R6为氢或(1-4C)烷基；

R7为氢或(1-4C)烷基；

X为 N-(1-4C)烷基亚氨基、 N-(3-4C)链烯基亚氨基或 N-(3-4C)链炔基 亚氨基；

m为1或2，每个R8独立为氢、卤代、羟基、(1-4C)烷氧基、(2-4C) 链烯氧基、(2-4C)链炔氧基、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链 炔基、氨基、(1-4C)烷基氨基、双-[(1-4C)烷基]氨基、氰基、(2-4C) 链烷酰氨基、羧基、(1-4C)烷氧基羰基、氨基甲酰基、 N-(1-4C)烷 基氨基甲酰基或 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基；

Y1是卤代、(1-4C)烷基磺酰氧基、苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰 氧基；和

Y2是卤代、(1-4C)烷基磺酰氧基、苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰 氧基；

其中R1、R2或R3中的任何杂环基团任选被1、2或3个(1-4C)烷基取 代基取代，其中当Y1和Y2为苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰 氧基时，在Y1或Y2中的任何一个苯基基团任选被1、2或3个选 自卤代、硝基、氰基、三氟甲基、羟基、氨基、(1-4C)烷基、(1-4C) 烷氧基、(1-4C)烷基氨基和双-[(1-4C)烷基]氨基的取代基取代；

前提是R1、R2和R3中的至少一个不是氢。

在本发明中将观察到，本发明的抗肿瘤剂可以具有一个或多个 不对称碳原子，所以它可能存在非对映异构体、外消旋体和旋光性 形式。应该理解的是本发明包括任何具有抗肿瘤活性的所述形式的 化合物，如何分离各种非对映异构形式和如何将外消旋化合物分离 为其旋光性形式是人所共知的。

还应该理解的是，本发明的化合物能够以溶剂化或非溶剂化形 式存在，例如水合形式。当然本发明包括所有这类具有抗肿瘤活性 的溶剂化形式。

以下给出上述普通基团的合适值。

术语“烷基”包括直链和枝链烷基，但是对单个烷基例如“丙基” 仅特指直链型丙基。类似的常规适用于其它常用术语。

对于当R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8中的每个为(1-4C)烷 基时，或对于在苯基或杂环基团上的(1-4C)烷基取代基而言，其适当 涵义是例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或异丁基。

对于当R1、R2、R3和R8为(1-4C)烷氧基时，或对于在苯基上的(1-4C) 烷氧基取代基而言，其适当涵义是例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、 丁氧基或异丁氧基。

对于当R8为(1-4C)烷基氨基时，或对于在苯基上的(1-4C)烷基氨 基取代基而言，其适当涵义是例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、 异丙基氨基、丁基氨基或异丁基氨基。

对于当R8为双-[(1-4C)烷基]氨基，或对于在苯基上的双-[(1-4C) 烷基]氨基取代基而言，其适当涵义是例如二甲基氨基、二乙基氨基、 N-乙基- N-甲基氨基、二丙基氨基或二异丙基氨基。

对于每个R1、R2或R3基团的适当涵义包括例如：-

(3-4C)链烯基的涵义为：           烯丙基、甲基烯丙基、2-丁烯基

                                 和3-丁烯基；

(3-4C)链炔基的涵义为：           2-丙炔基和2-丁炔基；

羟基-(1-4C)烷基的涵义为：        羟甲基、1-羟乙基、2-羟乙基和3-

                                 羟丙基；

(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基的涵义

为：                             甲氧基甲基、乙氧基甲基、1-甲

                                 氧基乙基、2-甲氧基乙基、2-乙

                                 氧基乙基和3-甲氧基丙基；

氨基-(1-4C)烷基的涵义为：        氨基甲基、1-氨基乙基、2-氨基

                                 乙基和3-氨基丙基；

(1-4C)烷基氨基-(1-4C)烷基的涵

义为：                           甲基氨基甲基、乙基氨基甲基、1-

                                 甲基氨基乙基、2-甲基氨基乙基、

                                 2-乙基氨基乙基和3-甲基氨基丙

                                 基；

双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基

的涵义为：                       二甲基氨基甲基、二乙基氨基甲

                                 基、1-二甲基氨基乙基、2-二甲

                                 基氨基乙基和3-二甲基氨基丙

                                 基；

吡咯烷-1-基-(1-4C)烷基的涵义

为：                             吡咯烷-1-基甲基和2-(吡咯烷-1-

                                 基)乙基；

哌啶子基-(1-4C)烷基的涵义为：    哌啶子基甲基和2-哌啶子基乙基

吗啉代-(1-4C)烷基的涵义为：      吗啉代甲基和2-吗啉代乙基；

哌嗪-1-基-(1-4C)烷基的涵义为：   哌嗪-1-基甲基和2-(哌嗪-1-基)乙

                                 基；

4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷

                                 4-甲基哌嗪-1-基甲基，4-乙基哌

基的涵义为：                     嗪-1-基甲基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)

                                 乙基和2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙

                                 基；

羧基-(1-4C)烷基的涵义为：        羧甲基，1-羧乙基，2-羧乙基和3-

                                 羧丙基；

(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基的

涵义为：                         甲氧基羰基甲基，乙氧基羰基甲

                                 基，叔丁氧基羰基甲基，1-甲氧

                                 基羰基乙基，1-乙氧基羰基乙基，

                                 2-甲氧基羰基乙基，2-乙氧基羰

                                 基乙基，3-甲氧基羰基丙基和3-

                                 乙氧基羰基丙基；

氨基甲酰基-(1-4C)烷基的涵义

为：                             氨基甲酰基甲基，1-氨基甲酰基

                                 乙基，2-氨基甲酰基乙基和3-氨

                                 基甲酰基丙基；

N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)

烷基的涵义为：                    N-甲基氨基甲酰基甲基， N-乙基

                                 氨基甲酰基甲基， N-丙基氨基甲

                                 酰基甲基，1-( N-甲基氨基甲酰基)

                                 乙基，1-( N-乙基氨基甲酰基)乙

                                 基，2-( N-甲基氨基甲酰基)乙基，

                                 2-( N-乙基氨基甲酰基)乙基和3-

                                 ( N-甲基氨基甲酰基)丙基；

N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基-

(1-4C)烷基的涵义为：              N， N-二甲基氨基甲酰基甲基， N-

                                 乙基- N-甲基氨基甲酰基甲基，

                                  N， N-二乙基氨基甲酰基甲基，1-

                                 ( N， N-二甲基氨基甲酰基)乙基，1-

                                 ( N， N-二乙基氨基甲酰基)乙基，2-

                                 ( N， N-二甲基氨基甲酰基)乙基，2-

                                 ( N， N-二乙基氨基甲酰基)乙基和

                                 3-( N， N-二甲基氨基甲酰基)丙基；

羟基-(2-4C)烷氧基的涵义为：      2-羟基乙氧基，3-羟基丙氧基和4-

                                 羟基丁氧基；

(1-4C)烷氧基-(2-4C)烷氧基的涵

义为：                           2-甲氧基乙氧基，2-乙氧基乙氧

                                 基，3-甲氧基丙氧基和3-乙氧基

                                 丙氧基；

氨基-(2-4C)烷氧基的涵义为：      2-氨基乙氧基和3-氨基丙氧基；

(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷氧基的

涵义为：                         2-甲基氨基乙氧基，2-乙基氨基

                                 乙氧基，2-丙基氨基乙氧基，3-

                                 甲基氨基丙氧基和3-乙基氨基丙

                                 氧基；

二-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧

基的涵义为：                     2-二甲基氨基乙氧基，2-( N-乙基-

                                  N-甲基氨基)乙氧基，2-二乙基氨

                                 基乙氧基，2-二丙基氨基乙氧基，

                                 3-二甲基氨基丙氧基和3-二乙基

                                 氨基丙氧基；

吡咯烷-1-基-(2-4C)烷氧基的涵义

为：                             2-(吡咯烷-1-基)乙氧基和3-(吡咯

                                 烷-1-基)丙氧基；

哌啶子基-(2-4C)烷氧基的涵义

为：                             2-哌啶子基乙氧基和3-哌啶子基

                                 丙氧基；

吗啉代-(2-4C)烷氧基的涵义为：    2-吗啉代乙氧基和3-吗啉代丙氧

                                 基；

哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基的涵义

为：                             2-(哌嗪-1-基)乙氧基和3-(哌嗪-1-

                                 基)丙氧基；

4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷

氧基的涵义为：                   2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基和3-

                                 (4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基。

当R8、Y1或Y2为卤代时或对在苯基上的卤代取代基而言，其适 当涵义为例如氟代、氯代、溴代或碘代。

当X为 N-(1-4C)烷基亚氨基时，它的涵义为例如 N-甲基亚氨基 (即式-N(Me)-的二价基团)， N-乙基亚氨基或 N-丙基亚氨基；当其为 N-(3-4C)链烯基亚氨基时，X的涵义为例如 N-烯丙基亚氨基(即式 -N(CH2-CH＝CH2)-的二价基团)、 N-甲基烯丙基亚氨基或 N-(2-丁烯基) 亚氨基；和当其为 N-(3-4C)链炔基亚氨基时，X的涵义为例如 N-(2- 丙炔基)亚氨基(即式-N(CH2-C≡CH)-的二价基团)或 N-(2-丁炔基)亚氨 基。

每个R8基团的适当涵义包括例如：-

(2-4C)链烯氧基的适当涵义为：    乙烯氧基，烯丙氧基，甲基烯丙

                                氧基和2-丁烯氧基；

(2-4C)链炔氧基的适当涵义为：    乙炔氧基和2-丙炔氧基；

(3-4C)链烯基的适当涵义为：      烯丙基，甲基烯丙基，3-丁烯基

                                和3-丁烯基；

(3-4C)链炔基的适当涵义为：      2-丙炔基和2-丁炔基；

(2-4C)链烷酰基的适当涵义为：    乙酰基，丙酰基和丁酰基；

(1-4C)烷氧基羰基的适当涵义

为：                            甲氧基羰基，乙氧基羰基和叔丁

                                氧基羰基；

N-(1-4C)烷基氨基甲酰基的适当

涵义为：                         N-甲基氨基甲酰基和 N-乙基氨基

                                甲酰基；

N， N-二-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基

的适当涵义为：                   N， N-二甲基氨基甲酰基和 N， N-二

                                乙基氨基甲酰基。

当Y1或Y2为(1-4C)烷基磺酰氧基时，其适当涵义为例如甲基磺 酰氧基、乙基磺酰氧基或丙基磺酰氧基；当其为例如苯基-(1-4C)烷 基磺酰氧基时，其适当涵义为例如苯基甲基磺酰氧基或2-苯基乙基 磺酰氧基。

应该认识到，一般认为当在R1、R2或R3中的杂环基团可任选被 取代时，所述杂环基团包括在R1、R2和R3定义中规定的基团例如吡 咯烷-1-基、吗啉代、哌啶子基-(1-4C)烷基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基- (2-4C)烷氧基基团。

本发明抗肿瘤剂的合适的药学上可接受的盐为例如足够碱性的 本发明抗肿瘤剂的酸加成盐，例如与如无机酸或有机酸(如盐酸、氢 溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、柠檬酸或马来酸)的酸加成盐。另外， 足够酸性的本发明抗肿瘤剂的适当的药学上可接受的盐为碱金属盐 例如钠盐或钾盐、碱土金属盐如钙盐或镁盐、铵盐、或与提供生理 上可接受的阳离子的有机碱的盐如与甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、 吗啉或三-(2-羟乙基)胺的盐。

特别新的本发明抗肿瘤剂包括例如式I的化合物或其药学上可 接受的盐，其中：

(a)R1、R2或R3独立为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、 羟基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C) 烷基氨基-(1-4C)烷基、二-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1- 基-(1-4C)烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪- 1-基-(1-4C)烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C) 烷基、(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)烷基或 N， N-二-[(1-4C)烷基]氨基甲 酰基-(1-4C)烷基，前提是：R1、R2或R3中至少一个不是氢；而R4、 R5、R6、R7、R8、m、X、Y1和Y2中的每一个具有此前或在涉及 特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(b)R1、R2或R3独立为(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷 氧基-(2-4C)烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷 氧基、二-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C)烷 氧基、哌啶子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1-基- (2-4C)烷氧基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-C)烷氧基；而R4、R5、 R6、R7、R8、m、X、Y1和Y2中的每一个具有此前或在涉及特别 新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(c)每个R4和R5独立为甲基、乙基、丙基或异丙基和R1、R2、R3、 R6、R7、R8、m、X、Y1和Y2中的每一个具有此前或在涉及特别 新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(d)R6为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基而R7为氢或甲基；R1、R2、 R3、R4、R5、R8、m、X、Y1和Y2中的每一个具有此前或在涉及 特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(e)X为 N-(1-4C)烷基亚氨基或 N-(3-4C)链烯基亚氨基；R1、R2、R3、 R4、R5、R6、R7、R8、m、Y1和Y2中的每一个具有此前或在涉及 特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(f)m为1或2，每个R8独立为氢、卤代、羟基、(1-4C)烷氧基、(1-4C) 烷基、氨基、(1-4C)烷基氨基、二-[(1-4C)烷基]氨基或氰基；R1、 R2、R3、R4、R5、R6、R7、X、Y1和Y2中的每一个具有此前或在 涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(g)m为1而R8为氢、卤代、羟基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基、氨 基、(1-4C)烷基氨基、二-[(1-4C)烷基]氨基或氰基；R1、R2、R3、 R4、R5、R6、R7、X、Y1和Y2中的每一个具有此前或在涉及特别 新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(h)Y1和Y2各为卤代或Y1和Y2各为(1-4C)烷基磺酰氧基、苯磺酰氧 基或苯基-(1-4C)烷基磺酰氧基；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、 m和X中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的 部分所定义的任何涵义；

本发明优选的化合物为式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐，

其中R1、R2和R3独立为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲基烯丙 基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、3- 甲氧基丙基、3-乙氧基丙基、2-羧乙基、3-羧丙基、2-甲氧基羰基 乙基、2-乙氧基羰基乙基、3-甲氧基羰基丙基、3-乙氧基羰基丙基、 2-( N-甲基氨基甲酰基)乙基、3-( N-甲基氨基甲酰基)丙基、2-( N， N- 二甲基氨基甲酰基)乙基、3-( N， N-二甲基氨基甲酰基)丙基、甲氧 基或乙氧基；

R4和R5中的每一个独立为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R6为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R7为氢或甲基；

X为 N-甲基亚氨基、 N-乙基亚氨基、 N-丙基亚氨基或 N-烯丙基亚氨 基；

m为1或2，每个R8独立为氢、氟代、氯代、溴代、甲氧基、乙氧 基、甲基、乙基、丙基、异丙基或氰基；和

Y1和Y2中的各自独立为氯代、溴代、碘代、甲磺酰氧基、苯磺酰氧 基或苯基甲磺酰氧基；

前提是：R1、R2和R3中至少一个不是氢。

本发明进一步优选的化合物为式I的抗肿瘤剂或其药学上可接 受的盐：

其中R1为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲基烯丙基、甲氧基或 乙氧基；

R2为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、烯丙基、甲基烯丙基、 甲氧基或乙氧基；

R3为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、烯丙基、甲基烯丙基、 甲氧基或乙氧基；

R4为甲基、乙基、丙基或异丙基；

R5为甲基、乙基、丙基或异丙基；

R6为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R7为氢或甲基；

X为 N-甲基亚氨基、 N-乙基亚氨基、 N-丙基亚氨基或 N-烯丙基亚氨基；

m为1或2，每个R8独立为氢、氟代、氯代、溴代、甲氧基、乙氧 基、甲基、乙基、丙基或异丙基；

Y1为氯代、溴代、碘代或甲磺酰氧基；和

Y2为氯代、溴代、碘代或甲磺酰氧基；

前提是：R1、R2和R3中至少一个不是氢。

本发明进一步优选的化合物为式I的抗肿瘤剂或其药学上可接 受的盐：

其中R1为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R2为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R3为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R4为甲基或乙基；

R5为甲基或乙基；

R6为氢、甲基或乙基；

R7为氢；

X为 N-甲基亚氨基、 N-乙基亚氨基、 N-丙基亚氨基或 N-烯丙基亚氨 基；

m为1，R8位于X的间位，而且R8为氢、氟代、氯代、甲基、乙 基、丙基或异丙基；

Y1和Y2各为氯代、溴代或碘代；

前提是：R1、R2和R3中至少一个不是氢。

本发明更优选的化合物为式I的抗肿瘤剂及其药学上可接受的 盐，其中：

R1为氢、甲基或甲氧基；

R2为氢、甲基、烯丙基或甲氧基；

R3为甲基、乙基、丙基或烯丙基；

R4和R5各为甲基；

R6和R7各为氢；

X为 N-甲基亚氨基；

m为1而R8为氢；和

每个Y1和Y2均为氯代。

特别优选的本发明化合物为式I的以下抗肿瘤剂或其药学上可 接受的盐：-

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲 基- N-甲基丁酰胺；

3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3- 甲基- N-甲基丁酰胺；

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲 基丁酰胺；

3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3- 甲基- N-甲基丁酰胺；

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基-3-(2，3，5-三甲基-1，4- 醌基)丁酰胺，

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3- 甲基- N-甲基丁酰胺，或

N-烯丙基- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基- 1，4-醌基)-3-甲基丁酰胺。

本发明再一方面的目的是提供一组新的具有平衡还原电位(即还 原电位既不是太低使得1.4-醌基还原率明显减慢，也不是太高使得在 肿瘤块的低氧区发生大量还原)的(1，4-醌基)链烷酸衍生物。

按照本发明的这个方面，提供以上定义的式I的抗肿瘤剂或其 药学上可接受的盐，其中所述化合物的还原电位范围为例如-300-- 600mV、优选范围-300--500mV、更优选范围为例如-300--475 mV。

用来测定本发明化合物的还原电位的方法学在下文进行详细描 述。

可以用任何用于制备化学相关的化合物的已知方法制备式I的 抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐。按照本发明的又一方面提供此后 定义的用于制备式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐的方法，其 中，除非另作说明，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m、X、Y1 和Y2中的每一个具有此前所定义的任何涵义。通过标准的有机化学 方法可以获得必需的原料。在此后的附属实施例中描述这些原料的 制备。通过类似于所述方法的方法可获得替代的必需原料，而用有 机化学家的一般技术就可获得所述类似的方法。

按照本发明的这个方面，提供制备以上定义的式I的抗肿瘤剂 或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括：-

使式II的酸或其活性衍生物

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7中的每一个具有此前所定义的任 何涵义，

与式III的化合物反应，

其中X、R8、m、Y1和Y2中的每一个具有此前所定义的任何涵义。

式II的酸的合适活性衍生物为例如酰卤，例如所述酸与无机酸 氯化物反应形成的酰氯如亚硫酰氯；混合的酸酐，例如所述酸与氯 甲酸酯反应形成的酸酐如氯甲酸异丁酯；活性酯，例如所述酸与酚 如五氟苯酚反应形成的酯，如五氟苯基三氟乙酸酯的酯，如1-羟基 苯并三唑的醇或如2-(1-苯并三唑基)-1，1，3，3-四甲基铀六氟磷酸盐(V) 的铀盐；酰基叠氮，例如所述酸与叠氮化物反应形成的酰基叠氮如 二苯基磷酰叠氮；酰基氰，例如酸和氰化物反应形成的氰化物如二 乙基磷酰基氰；或所述酸与碳二亚胺反应形成的产物如 N， N’-二环己 基碳二亚胺或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺。

优选在存在以下合适的碱的情况下进行所述反应，所述碱有例 如碱金属或碱土金属的碳酸盐、醇盐、氢氧化物或氢化物，例如碳 酸钠、碳酸钾、氢化钠或氰化钾；或有机金属碱如烷基-锂，例如二 异丙基氨化锂，或例如有机胺碱如吡啶、2，6-卢剔啶、可力丁、4-二 甲基氨基吡啶、三乙胺、吗啉或二氮杂二环-[5.4.0]十一碳-7-烯。所 述反应也可以优选在合适的惰性溶剂或稀释剂存在下于-78℃至-150 ℃温度范围、通常于室温或接近室温下进行，所述惰性溶剂或稀释 剂有例如二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、 N， N-二甲 基甲酰胺、 N， N-二甲基乙酰胺、 N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亚砜或丙 酮。

任选的是，当在R1、R2、R3或R8中有氨基、烷基氨基、羟基或 羧基基团时，所述任何基团可以在需要时用常规方法可以去除的常 规保护基团进行保护。

氨基或烷基氨基的合适保护基团有例如酰基基团，例如链烷酰 基如乙酰基；烷氧基羰基如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰 基；芳基甲氧基羰基如苄氧基羰基；或芳酰基如苯甲酰基。上述保 护基团的去保护条件当然随所选择的保护基团而不同。因此，例如 诸如链烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基的酰基基团可以通过例如与合 适的碱如碱金属氢氧化物(例如氢氧化锂或氢氧化钠)水解去除。另一 方面，诸如叔丁氧基羰基的酰基基团可以例如用合适的酸(如盐酸、 硫酸或磷酸或三氟乙酸)处理去除，而诸如苄氧基羰基的芳基甲氧基 羰基基团可以例如通过催化剂(如披钯碳)下的氢化作用去除或用 Lewis酸如三(三氟乙酸)硼处理去除。伯氨基的合适替代保护基团为 例如可以用烷基胺(例如二甲基氨基丙胺)或肼处理去除的邻苯二甲酰 基基团。

羟基的合适保护基团为例如酰基如苄酰基，或芳基甲基基团如 苄基。上述保护基团的去保护条件必然随所选择的保护基而不同。 因此，例如诸如链烷酰基或芳酰基的酰基基团可以例如通过与合适 的碱如碱金属氢氧化物(例如氢氧化锂或氢氧化钠)水解去除。另一方 面，诸如苄基的芳基甲基基团可以例如通过在催化剂(如披钯碳)上氢 化去除。

羧基的合适保护基为例如酯化基团，如可以用碱如氢氧化钠水 解去除的甲基或乙基；或例如可以用酸(例如有机酸如三氟乙酸)处理 去除的叔丁基；或例如可以通过催化剂(如披钯碳)下的氢化去除的苄 基。

式II和III的原料可以市售获得或可以通过有机化学标准方法制 得。例如，通过水解式IV的3，4-二氢香豆素及随后氧化这样形成的 氢醌可以制备式II的原料。

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7中的每一个具有此前所定义的任 何涵义。

用于由式IV的3，4-二氢香豆素制备式II的原料的水解和随后的 氧化反应的合适条件包括例如本领域已知的关于这类转化的任何试 剂素。例如，可以用合适的碱例如碱金属的氢氧化物如氢氧化锂或 氢氧化钠进行所述水解步骤。如果所述水解步骤在空气或氧的气氛 下进行，则所述氢醌的氧化作用自然发生。另外，在氧化剂例如卤 化铁(如氯化铁)存在下可以用水水解3，4-二氢香豆素。一般来说，在 合适的惰性溶剂或稀释剂例如水、乙腈、 N， N-二甲基甲酰胺、甲醇 或乙醇存在下于例如15℃-100℃温度范围、通常为例如20℃-80℃范 围内进行所述反应。

当需要式I化合物的药学上可接受的盐时，例如采用常规的方 法通过使所述化合物与合适的酸或碱反应可以获得。当需要旋光性 形式的式I化合物时，可以通过用旋光性原料实施前述方法或通过用 常规方法折分外消旋形式的所述化合物获得。

如上所述，本发明式I的化合物具有抗肿瘤活性、尤其是借助 于在肿瘤块的低氧区释放细胞毒性剂的活性。例如利用一种或多种 以下给出的方法可以评价本发明化合物的细胞毒性活性和抗肿瘤活 性。

(a)一种体外检测法，该方法利用从Sunter等( Biochemical Pharmacology，1992， 44，59-64)的著作改进的方法检测试验化合物 引起DNA片段交联的能力。通过其使线性化32P标记的质粒的 DNA链交联的能力评价试验化合物的作用。使所述DNA变性并 检测其在中性琼脂糖凝胶上的凝胶电泳的迁移率，从而检测交 联。根据分子大小分离双链和单链DNA片段。所述详细方法学 如下：-

用Hind III限制性核酸内切核酸酶使PBR322环形质粒DNA (Pharmacia Biotech.，St.Albans，Hertfordshire，UK)线性化，用碱性 磷酸酶使末端去磷酸化后，用T4多核苷酸激酶(Biolabs，Hitchin， Hertfordshire，UK)来将[γ-32P]ATP添加到所述DNA的5’端。

将每种试验化合物溶解于DMSO，并加入所述质粒DNA(每 次测定为12.5ng)和包括25mM三乙醇胺缓冲剂和1mM EDTA 的pH 7.2缓冲液的混合物中。在有氧(aerobic)条件(用空气充气溶 液)或低氧条件(用氮气鼓泡过夜使溶液脱气，然后保持在加入3-10 倍超量的还原剂连二亚硫酸钠的无氧室内)下于30℃-37℃温度范 围处理长达3小时。加入0.6M乙酸钠、20mM EDTA和100ug/ml tRNA(Sigma，Poole，Dorset，UK)的冰冷混合物终止所述反应。加 入95％乙醇沉淀所述DNA，分离并贮藏于-20℃过夜。

将每一个质粒DNA样品重悬浮于30％DMSO水溶液和1 mM EDTA的混合物中，并加热至90℃变性2小时。所变性的DNA 样品与包括20％Ficoll 400(Sigma，Poole，Dorset，UK)、0.1M EDTA和0.25％溴酚蓝的pH 8.0缓冲液混合，并加样于电泳凝胶 (0.8％琼脂糖的pH 8.2三硼酸盐EDTA缓冲液)。各个凝胶于30 伏(3v/cm)极化3小时或直到所述溴酚蓝达到凝胶末端为止。干 燥凝胶，用磷成像仪(phosphoimager)(Molecular Dynamics Limited， Kemsing，England)定量单链和双链DNA。标准单链和双链DNA 样品也在每个凝胶上电泳，并计算试验样品中的双链DNA的百 分率。用不同浓度的各个试验化合物绘制剂量反应曲线以确定产 生50％双链DNA的试验剂量。

(b)一种体外检测法，该方法测定试验化合物在有氧(oxic)的条件下 抑制细胞培养物中的T18小鼠乳腺癌细胞生长的能力。所述细胞 单层生长于96孔板中，用化合物在90％空气和10％CO2的气氛 下处理2小时。然后所述细胞继续生长6天，用3-(4，5-二甲基噻 唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)终点评价增殖程度。该试 验类似于 J.Immunological Methods，1983， 65，55-63中所述的方 法。所述详细方法学如下：-

从指数生长期的单层培养物收获T18小鼠乳腺癌细胞(得自 于Balb/c小鼠群中自然发生的乳腺肿瘤，Zeneca Pharmaceuticals， Mereside，Macclesfield，UK)。计数细胞，在RPMI 1640培养基 (Gibco BRL，Life Technologies，Paisley，UK；添加15％胎牛血清、 谷酰胺、丙酮酸、青霉素和链霉素)中稀释细胞，并以500个细 胞/每孔50ul转移到96孔板。细胞在CO2培养箱(即在90％空气 和10％CO2的气氛下)于37℃培养2天。再于每孔加入新鲜培养 基。将每种试验化合物溶解于DMSO中，并在水中稀释到所需 要的试验浓度。每孔加入25ul的各个试验溶液。然后将板放回 所述培养箱2小时。结束时，去除含有试验化合物的上清培养基。 每孔中留下的细胞用200ul磷酸缓冲盐溶液(PBSA)洗涤一次，加 入新鲜的培养基(200ul)。再将板放回CO2培养箱中生长6天。 每孔中加入50ul MTT(5mg/ml)，并将所述板再温育4小时，在 此期间活细胞将MTT转化为不溶性、贮留在细胞内的蓝色甲， 转化的程度与孔中的活细胞数成正比。去除含有过量MTT的上 清培养基，加入DMSO(100ul)以溶解甲，在540nm检测光密 度来确定其浓度。测定不同浓度的每个试验化合物以确定引起50 ％抑制(IC50)的浓度。

(c)一种体外检测法，该方法测定试验化合物抑制EMT6小鼠乳腺癌 细胞球形聚集物(直径～400um)在充氧的培养基中生长的能力。因 为通过组织的氧扩散能距离约120-150微米，所以所述球形体具 有慢性低氧中心细胞群和供氧充分的外细胞层。作为供氧充分的 悬浮培养物，用试验化合物处理所述多细胞球体2小时。随后在 不含试验化合物的情况下洗涤球体，将选定的球体转移到静止培 养物中，以便检测对体积增长的处理效果。详细的方法学如下：-

从指数生长期的单层培养物收获EMT6小鼠乳腺癌细胞(得 自于P.R.Twentyman，MRC Oncology and Radiotherpertics Unit， Cambridge，UK)，约1×106细胞用来接种到装有Eagles基本必需 培养基(200ml；添加10％胎牛血清、谷酰胺、非必需氨基酸、 青霉素和链霉素)的旋转培养容器中。旋转培养容器用90％空气 和10％CO2的混合气体充气，密封，缓慢搅拌下(最初24小时为 50rpm，此后为40rpm)于37℃培养4-5天。所述细胞聚集成团 块，并生长为紧密的球体，平均直径约400微米。将等份(5ml) 含有球体的培养基转移到锥形瓶(已硅化，25ml)，用90％空气和 10％CO2的混合气体充气，用橡皮塞密封。将锥形瓶放于37℃的 CO2培养箱中的轨道式摇动器中，并轻轻振摇至少15分钟。将 每种试验化合物溶解于DMSO中并用水稀释到所需要的试验浓 度。用注射器将200ul的每种试验溶液加入各个密封瓶。所得的 混合物培养2小时，将每一个转移到离心管并让其沉降。倾析含 有所述试验化合物的上清培养基，每管加入新鲜的培养基(5ml)。 然后将每管内容物转移到塑料培养皿(直径35mm)，在配有校准 的目镜测微尺的解剖显微镜下观察。从每一处理组选择6个形状 一致约400微米直径的球体转移到24孔板的单独的孔中，此前24 孔板的每孔中已经加入了1％琼脂(0.3ml；形成防止球体附着的 基底层)和1ml培养基。用图像分析仪测量每个球体的面积，将 24孔板转移到37℃的CO2培养箱中。然后每2-3天重复测量所 述球体，持续长达21天，每3天向每孔中加入新鲜的培养基(250 ul)。根据面积测量结果计算(假定为球形)球体体积并绘制体积增 长曲线，据此评价处理效果。注意在2-3周内引起停滞(无球体体 积的增加或球体体积缩小)的试验剂量。

(d)在一组Balb/c小鼠中的体内试验，该试验检测试验化合物延迟T18 小鼠乳腺肿瘤生长的能力。详细方法学如下：-

通过动物到动物的传代常规维持T18小鼠乳腺肿瘤组织。为 了制备一批试验用肿瘤，从几只供体Balb/c小鼠取出肿瘤组织并 放于盐水中。去除外部组织，将看起来健康的肿瘤区域切割成约 1mm3的肿瘤块，用套管针将其皮下植入麻醉的雌性Balb/c小鼠 的左侧肋腹。2-3周后大多数植入物生长至约8mm直径。随机 将动物分为6-7组，排除任何具有极大或极小肿瘤的动物。将各 个试验化合物溶解于DMSO中，用Cremophor EL然后用盐水稀 释，获得DMSO、Cremophor EL和盐水的1∶1∶3混合物。以单 次大剂量(0.1ml/10g体重/动物)经腹膜内途径给予每个试验化合 物。对照动物只接受溶媒。所有小鼠每天称重，用游标双脚规每 2-3天测量各个肿瘤的大小(长和宽)。假定为长椭圆形(体积＝π/6 ×长×宽2)，将所述测量结果用来估算每个肿瘤的体积。绘制生 长曲线，用生长延迟终点评价处理效果。

尽管式I化合物的药理性质随预期的结构变化而变化，但是一 般来说在以上一种或多种试验方法中在以下浓度或剂量可以证实式I 化合物具有的活性：-

试验(a)：-    在低氧条件下，例如IC50为1-20μM；

              在有氧条件下，一般IC50高3倍；

试验(b)：-    在低氧条件下，例如IC50为1-30μM；

试验(c)：-    对于生长停滞而言；例如ED50为1-16μM；和

试验(d)：-    例如腹膜内30-100mg/kg剂量引起例如4-15天的

              生长延迟

因此，作为实例，以下的实施例1的化合物在试验(c)中停滞的 ED50剂量约4uM，在试验(d)中单次大剂量20mg/kg腹腔内给予的生 长延迟约9天。

如前所述，本发明的一个方面的目的是提供当它们在低氧张力 的区域如实体瘤的低氧区时快速释放细胞毒性药物的双前体药物化 合物。例如用以下试验方法可以评价该性质。

将每个试验化合物溶解于乙腈中(约2mg/ml)，并在pH 7.4磷酸 缓冲液中稀释(如果遇到溶解困难，加入额外的最小量乙腈)，得到约 5×10-5M的试验浓度。在氦气下对每个试验溶液进行充分脱气，温 热至37℃的恒温控制的反应温度。将连二亚硫酸钠(NaS2O4)溶液(100 μl 100mg/ml脱气水溶液)加入到一部分(1.4ml)各个试验溶液。以规 律的间隔取出等份的反应溶液，用高效液相层析(HPLC)分析释放的 细胞毒性药物部分和形成的合适的3，4-二氢香豆素。典型的HPLC条 件包括使用S5ODS1反相柱(250×4.6mm，装填5微米十八烷基硅烷 包被的Spherisorb颗粒，得自Jones Chromatography，Hengoed， Glamorgan，UK)，采用乙腈、水和三氟乙酸的75∶25∶0.1混合物作洗 脱剂，流速为1.5ml/分钟。

一般来说，发现在还原条件下式I的本发明化合物以t1/2低于2 小时、优选低于1小时、更优选低于20分钟而特别优选低于10分 钟快速释放细胞毒性药物部分。一般对于其中X为烷基亚氨基的许 多式I的本发明化合物而言，发现还原条件引起细胞毒性药物迅速 释放以至于检测不到还原步骤的氢醌产物。在这样的情况下，细胞 毒性药物释放的t1/2显著低于10分钟。

如前所述，本发明另一方面的目的是提供具有平衡还原电位(即 还原电位既不是太高使得大部分的还原发生于低氧张力区外也不是 太低使得大部分的还原甚至不发生在低氧张力区内)双-前体药物化合 物。例如用以下试验方法可以评价本发明化合物的还原电位：-

将每个试验化合物(2mg)溶解于DMF中，用配有铂工作电极、 第二电极和标准饱和甘汞参比电极(SCE)以及叔丁基溴化铵(在DMF 中的0.1摩尔/L)作电解质(参见例如G.A.Mabbott， J Chem.Ed，1983， 60，697和J.G.Dick等，Metrohm Monographs，Eletrode Reaction Kinetics determined by Cyclic Sweep Triangular Wave Voltammetry， 1983)的Luggin Cell进行循环伏安法。在一般的试验中，例如，以每 秒100mV从起始电位到切换电位再回到初始电位对相对于参比电极 控制的工作电极电位进行扫描。以所产生的电流作为电位的函数进 行绘图，阴极峰电位(Epc)用来测定DMF溶液的还原电位。通过基于 测定一组已知水溶液的pH 7 Eaq值的标准醌化合物的DMF溶液的 Epc值的校准曲线，确定每个试验化合物水溶液的Eaq值(P.Wardman， J.Phys.Chem.参考资料，1989  18，1637)。校准曲线使得确定了以下 等式：-

Eaq(V)＝1.23 Epc(V)+0.62

一般来说，所计算的式I的本发明化合物Eaq值为例如-300--600 mV、优选为例如-300--500mV、更优选为例如-300--475mV。

按照本发明的又一方面，提供包含以上定义的式I的抗肿瘤剂 或其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合 物。

所述组合物可以是适合于经口给予的形式，例如为片剂或胶囊 剂；胃肠外注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输注)的形式如 无菌溶液、悬浮液或乳液；局部给予形式如软膏或霜剂；或直肠给 予的形式如栓剂。

一般来说，可以用常规赋形剂以常规方式制备上述组合物。

所述抗肿瘤剂通常将以在每平方米动物体表面积50-10000mg 范围内的单位剂量即约1-200mg/kg给予温血动物，而且这通常提供 治疗有效量。单位剂型如片剂或胶囊剂将通常含有例如1-250mg活 性成分。优选使用的日剂量在1-50mg/kg范围内。然而，所述日剂 量必然随所治疗的宿主、具体的给予途径和需要治疗的疾病的严重 程度而定。因此，可以由治疗任何具体病人的执业医师确定最适剂 量。

按照本发明的再一方面提供在治疗处理人体或动物体的方法中 使用的以上定义的式I的抗肿瘤剂。

我们已经发现，本发明的化合物具有抗增殖特性如认为由所述 式I的双-前体药物低氧选择性释放细胞毒性剂产生的抗肿瘤特性。 因此，预期本发明化合物可用于治疗具有低氧区的足够大小的肿瘤， 以便1，4-醌基部分发生还原，因此迅速释放细胞毒性部分。

本领域技术人员应该认识到，本发明化合物抑制EMT6小鼠乳 腺癌细胞的球形聚合物的上述抗增殖活性不仅证实了本发明化合物 是低氧选择性前体药物的细胞毒性剂，而且证实了所述细胞毒性剂 释放后能够扩散入附近的细胞聚集物低氧区以持续破坏癌细胞。因 此，能够释放足够的细胞毒性活性使癌细胞球形聚集物生长停滞。

因此，按照本发明的该方面提供以上定义的式I抗肿瘤剂或其 药学上可接受的盐用于生产药物的用途，所述药物用于在温血动物 如人类产生抗增殖效应。

按照本发明该方面的又一特性，提供在需要该治疗的温血动物 如人类中产生抗增殖效应的方法，该方法包括给予所述动物有效量 的以上定义的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐。

如上所述，治疗或预防治疗具体增殖性疾病需要的剂量大小必 然将随所治疗的宿主、给予途径和需要治疗的疾病的严重程度而不 同。设计了例如1-200mg/kg、优选1-100mg/kg、更优选1-10mg/kg 范围内的单位剂量。

本发明化合物的抗肿瘤作用可以用作唯一的治疗或可以包括另 外的一种或多种其它物质和/或治疗。通过同时、序贯或分开给予各 个治疗部分可以达到这样的联合治疗。在医学肿瘤学领域中，常规 联合使用不同形式的治疗法治疗各个癌症病人，例如联合外科手术、 放射治疗和/或化学治疗。具体来说，已知辐射或用抗血管生成剂和/ 或血管渗透性减少剂(vascular permeability reducing agents)的治疗能够 增加肿瘤中的低氧组织数量。因此，预期与放射治疗和/或抗血管生 成剂的联合治疗将提高本发明化合物的功效。

一般来说，所述化学治疗包括三个主要类型的治疗药物：-

(i)抗血管生成剂：包括认为通过抑制血管内皮生长因子(VEGF) 起作用的药物的抗血管生成剂，例如国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035和WO 97/32856中公开的化合物；以及通过不同机制起作 用的抗血管生成剂例如linomide、具有整联蛋白αvβ3功能的抑制剂、 制管张素、razoxin和酞胺哌啶酮。

(ii)细胞抑制剂：例如抗雌激素(如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛 昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、孕激素(如甲地孕酮醋酸盐)、芳香酶 (aromatase)抑制剂(如anastrozole、letrazole、vorazole和依西美坦)、 抗孕激素、抗雄激素(如氟利坦、尼鲁米特、比卡鲁胺和环丙孕酮醋 酸盐)、LHRH激动剂和拮抗剂(如戈舍瑞林醋酸盐、luprolide和布舍 瑞林)、睾酮5α-二氢还原酶抑制剂(如非那雄胺)、抗侵袭剂(例如金 属蛋白酶抑制剂如marimastat和尿激酶纤溶酶原激活物受体功能的抑 制剂)和生长因子抑制剂(如表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因 子(FGF)、血小板衍生生长因子和肝细胞生长因子的抑制剂，例如EGF 受体酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)；和

(iii)用于医学肿瘤学的抗增生、抗肿瘤药物及其组合物：例如 抗代谢剂(例如抗叶酸盐剂如氨甲喋呤和raltitrexed、氟嘧啶如5-氟尿 嘧啶、嘌呤和腺苷类似物以及胞嘧啶和阿糖胞苷)；抗肿瘤抗生素(例 如博来霉素和anthracycline如多柔比星、柔红霉素、表柔比星、和伊 达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D(dactinomycin)和普卡霉素)；铂衍 生物(例如顺铂和卡铂)；烷化剂(例如氮芥、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸 氮芥、白消安、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝脲和塞替派)；抗有丝 分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱和taxoid如紫杉醇和taxotere)； 拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素类如依托泊苷和替尼泊苷、安吖 啶和托泊替堪)。

现在以下列非限制性实施例说明本发明，除非另作说明，否则 其中：-

(i)通过真空旋转蒸发进行蒸发和在通过过滤去除残留的固体如 干燥剂后进行后处理方法；

(ii)除非另作说明，否则在室温即在18-25℃范围内和惰性气体 如氩的气氛下进行操作；

(iii)在得自E.Merck，Darmstadt，德国的Merck Kieselgel二氧化 硅(Art.9385)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303)反相二氧化硅上进 行柱层析(快速法)和中压液相色谱法(MPLC)；

(iv)仅说明性给出得率而不一定是最大可获得的得率；

(v)利用Mettler SP62自动熔点装置、油浴装置或Koffler热板 装置测定熔点；

(vi)用核(一般为质子)磁共振(NMR)和质谱技术确定式I终产物 的结构；以δ尺度检测质子核磁共振化学位移值，峰裂数表示如下： s，单峰；d，双峰；t，三重峰；m，多重峰；除非另作说明，否则将 式I的终产物溶解于CD3SOCD3以测定NMR值；

(vii)中间体一般未完全进行特征鉴定，纯度用薄层层析(TLC)、 红外(IR)或NMR分析评价；

(viii)使用了以下简写：-

DMF              N， N-二甲基甲酰胺；

DMA              N， N-二甲基乙酰胺；

DMSO            二甲基亚砜；

EDTA            乙二胺四乙酸。

实施例1

将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.185g)加入3- (5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸(0.17g)、4-[双(2-氯乙基)氨 基]- N-甲基苯胺二盐酸盐( Chem.Abs.， 73，120373和 J.Chem.Soc. Perkin Trans.I，1973，2397-2401；0.17g)、1-羟基苯并三唑(0.087g)、 三乙胺(0.277ml)和二氯甲烷(7ml)的搅拌混合物中。生成的混合物在 室温下搅拌16小时。蒸发混合物，残留物利用石油醚(沸点40-60℃) 和乙酸乙酯的4∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。如 此获得 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基)-3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)- 3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.105g)；

NMR谱：(CDCl3)0.97(t，3H)，1.32(s，6H)，1.46(m，2H)，1.98(s，3H)， 2.52(m，2H)，2.78(m，2H)，3.12(s，3H)，3.67(t，4H)，3.77(t，4H)，6.52(s， 1H)，6.68(d，2H)，7.03(d，2H)；

质谱：(M+Na+)519，517，515。

如下获得用作原料的3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸：-

将6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素( J.Amer.Chem.Soc.，1983， 105，2752-2760；10g)、烯丙基溴(12.6ml)、碳酸钾(20g)和DMF(100ml) 的混合物在室温下搅拌2小时。所述混合物分配于乙醚和水之间。 用饱和氯化物水溶液洗涤有机相，干燥(MgSO4)并蒸发。因此获得6- 烯丙氧基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(12g)； NMR谱：(CDCl3)1.32(s， 6H)，2.22(s，3H)，2.58(s，2H)，4.53(m，2H)，5.35(m，2H)，6.05(m，2H)， 6.71(s，1H)，6.85(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(6g)和 N， N-二甲基苯胺(96ml)的混合 物搅拌并加热至200℃5小时。蒸发混合物，残留物利用石油醚(沸 点40-60℃)和乙酸乙酯的4∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层 析纯化。因此获得5-烯丙基-6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(3.7 g)； NMR谱：(CDCl3)1.42(s，6H)，2.22(s，3H)，2.56(s，2H)，3.58(m，2H) 4.87(s，1H)，5.2(m，2H)，6.08(m，1H)，6.8(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(1g)、10％披钯木炭催化剂(0.15g)和 乙醇(60ml)的混合物在3个大气压的氢下搅拌30分钟。将混合物过 滤，蒸发滤液得到6-羟基-5-丙基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(1g)；

NMR谱：(CDCl3)1.06(t，3H)，1.46(s，6H)，1.66(m，2H)，2.21(s，3H)， 2.56(s，2H)，2.72(m，2H)，4.57(s，1H)，6.72(s，1H)。

将由此获得的物质的乙腈(12ml)溶液搅拌并加热至回流。在2 小时内分批加入在乙腈(10ml)和水(10ml)的混合物中的氯化铁六水合 物(2.18g)溶液。将该混合物冷却至室温并分配在乙醚和5％碳酸氢钠 水溶液之间。水相加入2N盐酸水溶液酸化并用乙醚提取。干燥 (MgSO4)并蒸发生成的有机相。由此获得作为油的3-(5-甲基-3-丙基- 1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸(0.335g)； NMR谱：(CDCl3)0.99(t，3H)，1.42 (m，2H)，1.46(s，6H)，1.97(s，3H)，2.6(m，2H)，3.03(s，2H)，6.45(s， 1H)。

实施例2

将3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(1.38g)、4-[双(2- 氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐(1.6g)、2-(1-苯并三唑基)-1，1，3，3- 四甲基脲鎓(uronium)六氟代磷酸盐(V)(1.99g)、三乙胺(1.52g)和乙 腈(30ml)的混合物在室温下搅拌18小时。蒸发该混合物，残留物用 己烷和乙酸乙酯的17∶3混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯 化。由此获得3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)- N-{4-[双(2-氯乙基)氨 基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.88g)；

NMR谱：(CDCl3)1.3(s，6H)，2.0(s，3H)，2.1(s，3H)，2.73(s，3H)，3.2(d， 2H)，3.62-3.82(m，8H)，5.04(m，2H)，5.8(m，1H)，6.65-7.1(m，4H)。

质谱：(M+H+)509，507，505。

如下获得用作原料的3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁 酸：-

将烯丙基溴(8.45g)加入6-羟基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素( J. Org.Chem，1989， 54，3303-3310；5g)、碳酸钾(9.4g)和DMF(50ml)的 混合物中。所生成的混合物在室温下搅拌2小时。所述混合物分配 在乙醚和水之间。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(硫 酸镁)并蒸发。由此获得6-烯丙氧基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素(5.2 g)； NMR谱：(CDCl3)1.48(s，6H)，2.28(s，3H)，2.34(s，3H)，2.57(s，2H)， 4.5(m，2H)，5.36(m，2H)，6.07(m，1H)，6.63(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(6g)和 N， N-二甲基苯胺(40ml)的混合 物搅拌并加热至180℃18小时。将该混合物冷却至室温，加入5N 盐酸水溶液酸化并用乙酸乙酯提取。有机相用水和用饱和氯化钠水 溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。由此获得7-烯丙基-6-羟基-4，4，5，8- 四甲基-3，4-二氢香豆素(2.9g)； NMR谱：(CDCl3)1.48(s，6H)，2.24(s， 3H)，2.37(s，3H)，2.58(s，2H)，3.44(d，2H)，4.84(宽s，1H)，5.12(m，2H)， 5.98(m，1H)。

将由此获得物质的一部分(2.6g)、1N氢氧化钠水溶液(17.5ml) 和乙腈(50ml)的混合物在室温下的空气中搅拌4天。加入5N盐酸水 溶液酸化该混合物并用乙酸乙酯提取。有机相用饱和氯化钠水溶液 洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。由此获得作为油的3-(3-丙烯基-2，5-二甲 基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(2.7g)；

NMR谱：(CDCl3)1.44(s，6H)，1.95(s，3H)，2.14(s，3H)，3.0(s，2H)，3.19 (d，2H)，5.0(m，2H)，5.77(m，1H)。

实施例3

将3-(2，5-二甲基-3-丙基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(0.65g)、4-[双(2- 氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐(0.716g)、2-(1-苯并三唑基)- 1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟代磷酸盐(V)(0.935g)、三乙胺(0.709g)和乙 腈(15ml)的混合物在室温下搅拌40小时。蒸发该混合物，残留物用 己烷和乙酸乙酯的17∶3混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯 化。由此获得作为树胶的 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，5-二甲 基-3-丙基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.464g)；

NMR谱：(CDCl3)0.97(t，3H)，1.32(s，6H)，1.47(m，2H)，2.01(s，3H)，2.1 (s，3H)，2.4(t，2H)，2.75(s，2H)，3.1(s，3H)，3.64-3.82(m，8H)，6.7(d， 2H)，7.06(d，2H)；

质谱：(M+H+)511，509，507。

如下获得用作原料的3-(2，5-二甲基-3-丙基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：

将7-烯丙基-6-羟基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素(3g)、10％披 钯木炭催化剂(0.5g)和甲醇(75ml)的混合物在氢气氛下搅拌1小时。 过滤混合物，蒸发滤液。由此获得6-羟基-4，4，5，8-四甲基-7-丙基-3，4- 二氢香豆素(1.06g)； NMR谱：(CDCl3)1.03(t，3H)，1.46(s，6H)，1.57(s， 2H)，2.23(s，3H)，2.36(s，3H)，2.6(m，4H)，4.58(s，1H)。

将由此获得的物质、1N氢氧化钠水溶液(4.5ml)和乙腈(15ml)的 混合物在室温下的空气中搅拌4天。加入2N盐酸水溶液酸化该混 合物并用乙酸乙酯提取。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥 (MgSO4)并蒸发。由此获得作为油的3-(2，5-二甲基-3-丙基-1，4-醌基)-3- 甲基丁酸(1.12g)； NMR谱：(CDCl3)0.93(t，3H)，1.38-1.5(m，8H)，1.95 (s，3H)，2.14(s，3H)，2.39(m，2H)，3.0(s，2H)。

实施例4

将 N， N’-二环己基碳二亚胺(0.285g)加入到3-(2，5-二甲基-1，4-醌 基)-3-甲基丁酸(0.297g)、 N-羟基苯并三唑(0.02g)和二氯甲烷(20ml) 的已经在冰浴中冷却的搅拌混合物中，搅拌所获得的混合物5分钟。 依次加入三乙胺(0.267g)和4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸 盐物(0.423g)，于0℃搅拌反应混合物1.5小时，然后在室温下搅拌4 小时。蒸发混合物，残留物用己烷和乙酸乙酯的极性逐渐升高的混 合物作为洗脱剂在矾土上经柱层析纯化。由此获得作为树胶的 N-{4- [双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰 胺(0.028g)；

NMR谱：(CDCl3)1.3(s，6H)，2.05(d，3H)，2.08(s，3H)，2.75(s，2H)，3.1 (s，3H)，3.65-3.85(m，8H)，6.4(d，1H)，6.7(d，2H)，7.05(d，2H)；

质谱：(M+H+)465。

如下获得用作原料的3-(2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：-

将6-羟基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素( J.Org.Chem.，1989， 54， 3303-3310；2.2g)、1N氢氧化钠水溶液(10ml)和乙腈(20ml)的混合物 在室温下的空气中搅拌2天。加入5N盐酸水溶液酸化该混合物并 用乙酸乙酯提取。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥 (MgSO4)并蒸发。由此获得所需要的不需要进一步纯化就可使用的原 料(1.8g)； NMR谱：(CDCl3)1.44(s，6H)，2.12(s，3H)，2.4(s，3H)，3.02(d， 2H)，7.25(s，1H)。

实施例5

将在二氯甲烷(2ml)中的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺 盐酸盐(0.126g)溶液加入3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸 (0.115g)、4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐(0.146g)、三乙 胺(0.13ml)和二氯甲烷(4ml)的搅拌混合物中。所得的混合物在室温 下搅拌16小时。蒸发混合物，残留物用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸 乙酯的4∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获 得3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)- N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3- 甲基- N-甲基丁酰胺(0.06g)；

NMR谱：(CDCl3)1.32(s，6H)，1.99(s，3H)，2.78(s，2H)，3.12(s，3H)， 3.43(m，2H)，3.67(t，4H)，3.77(t，4H)，5-5.8(m，3H)，5.87(m，1H)，6.56 (s，1H)，6.68(d，2H)，7.04(d，2H)。

如下获得用作原料的3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁 酸：

将6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素( J.Amer.Chem.Soc.，1983， 105，2752-2760；10g)、烯丙基溴(12.6ml)、碳酸钾(20g)和DMF(100ml) 的混合物在室温下搅拌2小时。所述混合物分配在乙醚和水之间。 有机相用饱和氯化物水溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。由此获得6- 烯丙氧基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(12g)； NMR谱：(CDCl3)1.32(s， 6H)，2.22(s，3H)，2.58(s，2H)，4.53(m，2H)，5.35(m，2H)，6.05(m，2H)， 6.71(s，1H)，6.85(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(6g)和 N， N-二甲基苯胺(96ml)的混合 物搅拌并加热至200℃5小时。蒸发混合物，残留物用石油醚(沸点 40-60℃)和乙酸乙酯的4∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层 析纯化。由此获得5-烯丙基-6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(3.7 g)； NMR谱：(CDCl3)1.42(S，6H)，2.22(s，3H)，2.56(s，2H)，3.58(m，2H)， 4.87(S，1H)，5.2(m，2H)，6.08(m，1H)，6.8(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(3g)的乙腈(30ml)溶液搅拌并加热至 回流。在2小时内分批加入在乙腈(60ml)和水(60ml)的混合物中的氯 化铁六水合物(13g)溶液。将该混合物冷却至室温并分配在乙醚和5 ％碳酸氢钠水溶液之间。水相加入2N盐酸水溶液酸化并用乙醚提 取。所生成的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。 由此获得3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸(0.97g)； NMR 谱：(CDCl3)1.47(s，6H)，1.99(s，3H)，3.04(s，2H)，3.48(m，2H)，5.02(m， 2H)，5.85(m，1H)，6.49(s，1H)。

实施例6

采用类似于实施例2中所述的方法，使3-(2，3，5-三甲基-1，4-醌 基)-3-甲基丁酸与4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐反应。 产物用己烷和乙酸乙酯的9∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱 层析纯化。由此获得为固体的 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}- N-甲基 -3-甲基-3-(2，3，5-三甲基-1，4-醌基)丁酰胺，得率为30％；

NMR谱：(CDCl3)1.32(s，6H)，1.95(s，3H)，2.0(s，3H)，2.1(s，2H)，2.75 (s，2H)，3.1(s，3H)，3.64-3.82(m，8H)，6.66-7.1(m，4H)。

质谱：(M+H+)479。

如下获得用作原料的3-(2，3，5-三甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：

将3，3-二甲基丙烯酸甲酯(6g)加入2，3，5-三甲基氢醌(7.6g)和甲 磺酸(40ml)的已经加热至75℃的搅拌混合物中，混合物在75℃搅拌 1小时。将混合物倾入冰和水的混合物中，用乙酸乙酯的提取生成的 混合物。有机相用5％碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。 由此获得6-羟基-4，4，5，7，8-五甲基-3，4-二氢香豆素(10.7g)； NMR谱： (CDCl3)1.48(s，6H)，2.18(s，3H)，2.22(s，3H)，2.37(s，3H)，2.55(s，2H)， 4.6(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(5.85g)、0.5N氢氧化钠水溶液(50ml) 和乙腈(100ml)的混合物在室温下的空气中搅拌18小时。加入5N盐 酸水溶液酸化并用乙酸乙酯提取混合物。有机相用水和用饱和氯化 钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。由此获得所需要的不需要进一 步纯化就可使用的原料(4.1g)； NMR谱：(CDCl3)1.46(s，6H)，1.93(s， 3H)，1.96(s，3H)，2.15(s，3H)，2.15(s，3H)，3.02(s，2H)。

实施例7

用类似于实施例4中所述的方法，将3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4- 醌基)-3-甲基丁酸( J.Org.Chem，1989， 54，3303-3310)与4-[双(2-氯乙 基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐反应。产物用己烷和乙酸乙酯的极性 增加的混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得为 油的 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌 基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺，得率为7％；

NMR谱：(CDCl3)1.31(s，6H)，2.1(s，3H)，2.78(s，2H)，3.11(s，3H)， 3.67-3.82(m，8H)，3.95(s，3H)，3.99(s，3H)，6.72(d，2H)，7.06(d，2H)；

质谱：(M+H+)511。

实施例8

用类似于实施例5中所述的方法，将3-(5-烯丙基-2，3-二甲氧基- 1，4-醌基)-3-甲基丁酸与4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐反 应。产物用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的极性增加的混合物作 为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得为油的3-(5-烯丙基- 2，3-二甲氧基-1，4-醌基)- N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基 丁酰胺，得率为29％；

NMR谱：(CDCl3)1.32(s，6H)，2.76(s，2H)，3.11(s，3H)，3.39(d，2H)， 3.68(t，4H)，3.77(t，4H)，3.96(s，3H)，3.97(s，3H)，5.02-5.06(m，2H)， 5.76-5.86(m，1H)，6.69(d，2H)，7.04(d，2H)；

质谱：(M+Na+)559，561 & 563。

如下获得用作原料的3-(5-烯丙基-2，3-二甲氧基-1，4-醌基)-3-甲基 丁酸：

将连二亚硫酸钠(Na2S2O4，26g)分批加入在甲醇(50ml)和水(100 ml)的混合物中的2，3-二甲氧基-1，4-苯醌( J.Med.Chem.，1971， 14，45； 5g)的搅拌溶液中。生成的混合物在室温下搅拌1小时。混合物在乙 酸乙酯和水之间分配。干燥(MgSO4)并蒸发有机相得到2，3-二甲氧基 氢醌(2g)； NMR谱：(CD3SOCD3)3.71(s，6H)，6.37(s，2H)，8.47(s， 2H)。

将2，3-二甲氧基氢醌(3.6g)、3，3-二甲基丙烯酸甲酯(3.2ml)和甲 磺酸(36ml)的混合物搅拌并加热至70℃2小时。将混合物倾入冰和 水的混合物中，用乙酸乙酯的提取生成的混合物。有机相用5％碳酸 氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物用石油醚(沸点40-60 ℃)和乙酸乙酯的3∶2混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯 化。由此获得6-羟基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(2.3g)；

NMR谱：(CDCl3)1.3(s，6H)，2.59(s，2H)，3.95(s，6H)，5.58(s，1H)，6.64 (s，1H)。

将6-羟基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(1.6g)、烯丙 基溴(1.65ml)、碳酸钾(2.63g)和DMF(15ml)的混合物搅拌并加热至 70℃1小时。使混合物在乙醚和水之间分配。用饱和氯化钠水溶液 洗涤有机相，干燥(MgSO4)并蒸发。残留物用石油醚(沸点40-60℃)和 乙醚的3∶2混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获 得6-烯丙氧基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(1.51g)； NMR 谱：(CDCl3)1.31(s，6H)，2.59(s，2H)，3.9(s，3H)，3.95(s，3H)，4.57(d， 2H)，5.37(m，2H)，6.08(m，1H)，6.58(s，1H)。

将由此获得的物质和 N， N-二甲基苯胺(20ml)的混合物搅拌并加 热至200℃4小时。蒸发混合物，残留物用石油醚(沸点40-60℃)和 乙醚的1∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获 得5-烯丙基-6-羟基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(1.4g)； NMR谱：(CDCl3)1.44(s，6H)，2.56(s，2H)，3.58(m，2H)，3.91(s，2H)， 3.97(s，3H)，5.02(m，2H)，5.73(s，1H)，6.02(m，1H)。

将由此获得物质的一部分(0.65g)、2N氢氧化钠水溶液(1ml)和 水(50ml)的混合物在室温下的空气中搅拌1.5小时。用乙醚提取混合 物。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。 残留物用石油醚(沸点40-60℃)、乙醚和乙酸的50∶50∶0.1混合物 作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得所需要的原料 (0.112g)； NMR谱：(CDCl3)1.46(s，6H)，3.03(s，2H)，3.44(s，2H)，3.9(s， 3H)，3.95(s，3H)，5.02(m，2H)，5.83(m，1H)。

实施例9

将氯代甲酸乙酯(0.060ml)加入3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌 基)-3-甲基丁酸(0.14g)、三乙胺(0.087ml)和二氯甲烷(5ml)的已经冷 却至0℃的搅拌混合物中，搅拌混合物30分钟。依次加入 N-烯丙基- 4-[双(2-氯乙基)氨基]苯胺二盐酸盐(0.173g)和三乙胺(0.14ml)，在室 温下搅拌所生成的混合物3天。蒸发混合物，残留物用二氯甲烷和 乙醚的19∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获 得 N-烯丙基- N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基- 1，4-醌基)-3-甲基丁酰胺(0.11g)； NMR谱：(CDCl3)1.31(s，6H)，2.09(s， 3H)，2.77(s，2H)，3.67(t，4H)，3.77(t，4H)，3.93(s，3H)，3.98(s，3H)，4.13 (d，2H)，5.04(m，2H)，5.73(m，1H)，6.67(d，2H)，7.01(d，2H)，。

如下获得用作原料的 N-烯丙基-4-[双(2-氯乙基)氨基]苯胺二盐酸 盐：

将2-(叔丁氧基羰基氧基亚氨基)苯基乙腈(BOC-ON；13.5g)加入 4-[双(2-羟乙基)氨基]苯胺[10g，通过中和相应的二盐酸盐制备( J.Org. Chem.，1961， 26，1933)]、丙酮(100ml)和水(100ml)的混合物中，生成 的混合物在室温下搅拌16小时。用乙酸乙酯提取混合物。有机相用 2N盐酸水溶液提取。加入2N氢氧化钠水溶液中和水相，并用乙酸 乙酯提取。蒸发有机相，残留物用乙酸乙酯作洗脱剂在二氧化硅上 经柱层析纯化。由此获得4-[双(2-羟乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯 胺(11.84g)； NMR谱：(CDCl3)1.59(s，9H)，3.56(t，4H)，3.84(t，4H)，6.5 (宽s，1H)，6.71(d，2H)，7.24(d，2H)。

将由此获得物质的一部分(2g)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯(2.5 g)、咪唑(2.3g)和DMF(20ml)的混合物在室温下搅拌2天。加入水， 并用乙酸乙酯提取混合物。蒸发有机提取物，残留物用二氯甲烷和 乙醚的19∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得 4-[双(2-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯 胺(3.86g)； NMR谱：(CDCl3)0.0(s，12H)，0.85(s，18H)，1.47(s，9H)， 3.42(t，4H)，3.69(t，4H)，6.18(宽s，1H)，6.58(d，2H)，7.13(d，2H)。

将氢化钠(在矿物油中的60％分散物；0.265g)加入在DMF(20ml) 中的4-[双(2-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰 基)苯胺(3.15g)的已经冷却至0℃的搅拌溶液中。生成的混合物在室 温下搅拌1小时。加入烯丙基溴(0.625ml)，混合物在室温下搅拌12 小时。加水(5ml)，混合物在乙醚和水之间分配。干燥(MgSO4)并蒸 发有机相获得 N-烯丙基-4-[双(2-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基乙基)氨 基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(3.5g)； NMR谱：(CDCl3)0.0(s，12H)，0.81 (s，9H)，0.82(s，9H)，1.4(s，9H)，3.43(t，4H)，3.71(t，4H)，4.11(d，2H)， 5.07(m，2H)，5.87(m，1H)，6.58(d，2H)，6.93(d，2H)。

将由此获得的物质和四正丁基氟化铵(1.1M在THF中；55ml) 的混合物在室温下搅拌30分钟。蒸发溶剂，残留物用乙酸乙酯作洗 脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得 N-烯丙基-4-[双(2-羟乙 基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(2.09g)； NMR谱：(CDCl3)1.44(s，9H)， 3.55(t，4H)，3.83(t，4H)，4.13(d，2H)，5.11(m，2H)，5.89(m，1H)，6.61(d， 2H)，7.04(d，2H)。

将由此获得的物质、四氯化碳(12ml)、三苯基膦(4.92g)和乙腈(40 ml)的混合物在室温下搅拌30分钟。蒸发溶剂，残留物用石油醚(沸 点40-60℃)和乙酸乙酯的17∶3混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层 析纯化。由此获得 N-烯丙基-4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基) 苯胺(1.49g)； NMR谱：(CDCl3)1.44(s，9H)，3.61(t，4H)，3.7(t，4H)， 4.14(d，2H)，5.12(m，2H)，5.88(m，1H)，6.61(d，2H)，7.08(d，2H)。

将在乙酸乙酯(6.5ml)中的氯化氢气体的饱和溶液加入到由此获 得的物质在乙酸乙酯(5ml)中的溶液中，在室温下搅拌混合物30分 钟。分离沉淀物。由此获得 N-烯丙基-4-[双(2-氯乙基)氨基]苯胺二盐 酸盐(0.56g)； NMR谱：(CD3SOCD3)3.75(s，8H)，3.87(d，2H)，5.37(d， 1H)，5.45(d，1H)，5.95(m，1H)，6.86(d，2H)，7.37(d，2H)。

实施例10

药用组合物

以下说明本文定义的典型的本发明药物剂型(活性成分称为“混 合物X”)，所述剂型用于在人类的治疗或预防用途。

(a)片剂I                             mg/片

化合物X                              100

乳糖Ph.Eur.                          182.75

交联羧甲基纤维素钠                   12.0

玉米淀粉糊(5％(w/v)糊)               2.25

硬脂酸镁                             3.0

(b)片剂II                            mg/片

化合物X                              50

乳糖Ph.Eur.                          223.75

交联羧甲基纤维素钠                   6.0

玉米淀粉                             15.0

聚乙烯吡咯烷酮(5％(w/v)糊)           2.25

硬脂酸镁                             3.0

(c)片剂III                           mg/片

化合物X                              1.0

乳糖Ph.Eur.                          93.25

交联羧甲基纤维素钠                   4.0

玉米淀粉糊(5％(w/v)糊)               0.75

硬脂酸镁                             1.0

(d)胶囊剂                            mg/胶囊

化合物X                              10

乳糖Ph.Eur.                          488.5

镁                                   1.5

(e)注射剂I                           (50mg/ml)

化合物X                              5.0％(w/v)

1M氢氧化钠溶液                       15.0％(v/v)

0.1M盐酸

(调节pH至7.6)

聚乙二醇400                          4.5％(w/v)

注射用水至100％

(f)注射剂II                          (10mg/ml)

化合物X                              1.0％(w/v)

磷酸钠BP                             3.6％(w/v)

0.1M氢氧化钠溶液                     15.0％(v/v)

注射用水至100％

(g)注射剂III                         (1mg/ml，缓冲至pH6)

化合物X                              0.1％(w/v)

磷酸钠BP                             2.26％(w/v)

枸橼酸                               0.38％(w/v)

聚乙二醇400                          3.5％(w/v)

注射用水至100％

(h)气雾剂I                           mg/ml

化合物X                              10.0

失水山梨醇三油酸酯                   13.5

三氯氟甲烷                           910.0

二氯二氟甲烷                         490.0

(i)气雾剂II                          mg/ml

化合物X                              0.2

失水山梨醇三油酸酯                   0.27

三氯氟甲烷                           70.0

二氯二氟甲烷                         280.0

二氯四氟乙烷                         1094.0

(j)气雾剂III                         mg/ml

化合物X                              2.5

失水山梨醇三油酸酯                   3.38

三氯氟甲烷                           67.5

二氯二氟甲烷                         1086.0

二氯四氟乙烷                         191.6

(k)气雾剂IV                          mg/ml

化合物X                              2.5

大豆卵磷脂                           2.7

三氯氟甲烷                           67.5

二氯二氟甲烷                         1086.0

二氯四氟乙烷                         191.6

(l)软膏                              ml

化合物X                              40mg

乙醇                                 300ul

水                                   300ul

1-十二烷基氮杂环庚-2-酮              50ul

丙二醇                               至1ml

注释

用药学领域公知的常规方法可以获得上述制剂。可以用例如提 供苯二甲酸醋酸纤维素包衣的常规方法包衣片剂(a)-(c)。气雾剂(h)-(k) 可以与标准计量剂量的气雾剂仪器一起使用，而且悬浮剂失水山梨 醇三油酸酯和大豆卵磷脂可以用替代的悬浮剂如山梨糖醇酐单油酸 酯、失水山梨醇醇倍半油酸酯、聚山梨醇酯80、聚甘油油酸酯或油 酸替代。