技术领域
[0001] 本
发明涉及抗肿瘤药物技术领域,具体涉及1,6-己二醇或其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
[0002] 1,6-己二醇,英文名为1,6-hexanediol,结构式为: 作为一种重要的精细化工材料,1,6-己二醇在聚
氨酯、聚酯、卷材涂料、光
固化剂等领域有广泛的应用。另外由于具有一定的渗透性,1,6-己二醇还可用于
化妆品活性组分以及
皮肤病
局部用药物组合物,而在抗肿瘤药物中的应用并无报道。
[0003] 胰腺癌(pancreatic cancer)是一种消化道肿瘤,其中95%的胰腺癌为胰腺
导管细胞癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)。虽然胰腺癌的发病率比较低,但是胰腺癌是导致肿瘤病人死亡的第四大肿瘤,为最恶性的肿瘤之一。随着对于肿瘤病因的认识和临床
治疗技术的提高,过去几十年中,绝大多数肿瘤的生存率有了大幅度的提高。但是,胰腺癌是例外,其5年生存率依然只有5%,1年生存率小于20%。这也说明,对于胰腺癌的治疗方法一直没有本质的突破,我们迫切地期待有效的胰腺癌治疗方法的出现。
[0004] 对于胰腺癌,到目前为止都没有非常有效的治疗方法。最普遍也最常用的就是化疗,虽然治疗效果不理想,这也是为数不多的可选择的方法之一。在早期,化疗主要以5-氟尿嘧啶(5-FU),为
基础药。现在主要以吉西他滨为主要药物,吉西他滨学名为2,2-双氟胞嘧啶核苷,属新型嘧啶类抗肿瘤代谢药物。以吉西他滨为
单药治疗,胰腺癌的反应率大约在23%,1年生存率大约是18%。吉西他滨联合其它一些化疗药,可以部分提高治疗效果。但是整体而言,胰腺癌对于现有的
化疗药物反应较差,而且很容易出现耐药现象,并且
副作用比较大。因此,要想显著提高胰腺癌的治疗效果,唯一的方法是开发更为有效的治疗策略,寻找新的治疗药物。
[0005] 液相分离是指通过某种机理,液体分离成两种不同成份互不混溶的液相。细胞内
信号通路或一些没有膜结构的细胞内亚结构的形成,有时通过液相分离形成。近年来,液相分离也被用于解释基因的转录调控。液相分离后,可以使细胞在一些特定部位形成新的结构,介导一些特定反应的进行,如信号通路传递,胞核物质传递,基因转录等。液相分离能确保生物过程高效地进行。细胞内的液相分离一般由一些特殊
蛋白质来介导,蛋白质间通过弱相互作用来实现这一过程。肿瘤细胞的恶变是否是通过过度的或异常的液相分离来实现,新型抗肿瘤药物的研发可否以抑制液相分离过程为出发点,然而
现有技术中并无这方面的报道。
发明内容
[0006] 本发明的目的在于公开1,6-己二醇或其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0007] 所述衍生物为C1~4烷基、羟基、氨基、卤素等取代的1,6-己二醇。取代基可以是一个或者两个以上。
[0008] 所述抗肿瘤药物可以以1,6-己二醇或其衍生物作为唯一活性成份。
[0009] 所述抗肿瘤药物还可以包含1,6-己二醇或其衍生物,及药学上可接受的辅助剂。
[0010] 所述抗肿瘤药物还可以包含其它活性成份,1,6-己二醇和其它活性联合协同作用。
[0011] 所述的抗肿瘤药物为注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或者乳剂。
[0012] 所述肿瘤为胰腺癌、
肺癌或者黑色素瘤。
[0013] 本发明认为肿瘤细胞可以通过过度的或异常的液相分离来实现其恶变,那么从理论上来看,抑制液相分离可以有效的抑制肿瘤的发生、发展。
[0014] 1,6-己二醇可以破坏蛋白的弱相互作用,从而抑制液相分离过程。因此本发明推测,1,6-己二醇可以通过抑制液相分离的发生,抑制肿瘤的发生、发展。本发明以胰腺癌为例,成功地印证了该假说,即1,6-己二醇可以有效地抑制胰腺癌的发生和发展。而进一步的实验证明该假说不仅仅限于胰腺癌,在其它肿瘤比如肺癌细胞和黑色素瘤中也成立。由于能有效的抑制肿瘤的发生和发展,1,6-己二醇或其衍生物或机制相似的替代物在抗肿瘤药物的制备方面将具有巨大潜
力。
[0015] 本发明的有益效果在于:本发明以液相分离对生物过程的影响为出发点,利用1,6-己二醇或其衍生物可以破坏蛋白的弱相互作用这一原理,从而抑制液相分离过程,抑制肿瘤的发生、发展,为抗肿瘤药物的研发提供新的思路。研究结果表明,1,6-己二醇在低浓度情况下能相对特异地抑制胰腺癌、肺癌以及黑色素瘤等
细胞增殖,而对正常细胞无明显的抑制作用,在制备防治比如胰腺癌、肺癌以及黑色素瘤等的抗肿瘤药物方面,具有良好的应用前景。
附图说明
[0016] 图1为不同浓度1,6-己二醇诱导胰腺癌细胞死亡的
显微镜照片;
[0017] 图2为不同浓度1,6-己二醇对抑制胰腺癌细胞增殖的结果示意图;
[0018] 图3为1,6-己二醇诱导胰腺癌细胞凋亡的PI
染色显微镜照片;
[0019] 图4为不同浓度1,6-己二醇抑制肺癌细胞H2087增殖的结果示意图;
[0020] 图5为不同浓度1,6-己二醇抑制黑色素瘤细胞B16增殖的结果示意图。
具体实施方式
[0021] 以下结合具体
实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
[0022] 实施例1
[0023] 一、实验材料
[0024] 1,6-己二醇,供应商Sigma;
[0025] DMEM高糖培养基,英文名DMEM/HIGH GLUCOSE,供应商HyClone;
[0026] PBS(1×),供应商HyClone;
[0027] 青霉素-
链霉素溶液,英文名Penicillin-Streptomycin Solution,供应商HyClone;
[0028] 胎
牛血清,供应商杭州四季青
生物工程材料有限公司;
[0029] CCK-8,英文名Cell Counting Kit-8,供应商Dojindo Laboratories;
[0030] PI,英文名Propidium Iodide,供应商Sigma。
[0031] 二、实验方法
[0032] 1、1,6-己二醇溶液、PI染色液配置
[0033] 1,6-己二醇粉末溶解于无菌
水中,储存浓度为1g/mL,至于4℃避光保存;
[0034] PI用PBS溶解,储存浓度为10mg/mL,至于4℃避光保存。
[0035] 2、细胞培养
[0036] 正常胰腺上皮细胞系HPDE6-C7、胰腺癌细胞系PANC-1、BxPC-3、ASPC-1、CFPAC-1(供应商上海钰博生物科技有限公司)培养在含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM高糖培养基中,每2~3天进行一次传代。
[0037] 3、显微镜拍照
[0038] 将HPDE6-C7、PANC-1、BxPC-3、ASPC-1、CFPAC-1细胞分别种于96孔板,分为空白组和实验组。空白组为不加1,6-己二醇处理的细胞。实验组为用不同浓度的1,6-己二醇处理的细胞,浓度分别为10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL和40mg/mL。空白组以及实验组的每个浓度均设置3个复孔,处理24h,用显微镜拍照,结果如图1所示。
[0039] 由图1可知,1,6-己二醇在10mg/mL和20mg/mL的浓度能显著降低胰腺癌细胞数量,并诱导部分细胞崩解而死亡。1,6-己二醇在10mg/mL和20mg/mL的浓度对正常胰腺上皮细胞没有明显影响。
[0040] 4、CCK-8检测
[0041] 将HPDE6-C7、PANC-1、BxPC-3、ASPC-1、CFPAC-1细胞分别种于96孔板,分为空白组、实验组和单纯培养基组。空白组为不加1,6-己二醇处理的细胞。单纯培养基组为不含1,6-己二醇且不含细胞的培养基。实验组为用不同浓度1,6-己二醇处理的细胞,处理浓度分别为10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL和40mg/mL。空白组、单纯培养基组和实验组的每个浓度均设置3个复孔,处理48h。每孔加入10uL的CCK-8溶液,在细胞
培养箱中孵育1~2h。利用Tecan M200酶标仪,选择450nm
波长,检测各孔光吸收值,计算相对细胞数,结果如图2所示,1,6-己二醇在10mg/mL和20mg/mL的浓度就能显著抑制胰腺癌细胞增殖,但在这种低浓度情况下,1,6-己二醇对正常胰腺上皮细胞基本无太大的杀伤作用。
[0042] 5、PI染色
[0043] 将HPDE6-C7、PANC-1、BxPC-3、ASPC-1、CFPAC-1细胞分别种于96孔板,分为空白组和实验组。空白组为不加1,6-己二醇的细胞,实验组为用1,6-己二醇处理的细胞,处理浓度为20mg/mL。每组设置3个复孔,处理48h。用10ug/mL的PI给各组细胞染色10min,用
荧光显微镜拍照。结果如图3所示,显示1,6-己二醇在20mg/mL的浓度能显著诱导胰腺癌细胞凋亡(PI染色阳性)。1,6-己二醇在20mg/mL的浓度对正常胰腺上皮细胞没有明显影响。
[0044] 三、实验结果
[0045] 在临床上,能特异杀死一种或几种肿瘤细胞,但对别的正常细胞没有毒副作用的药物具有重要的肿瘤治疗应用价值。为了研究1,6-己二醇是否对肿瘤细胞有更强的杀伤效果,而对正常细胞的杀伤效果相对较弱。上述实验中,选取了4个胰腺癌细胞系PANC-1、BxPC-3、ASPC-1和CFPAC-1,并同时用正常的胰腺上皮细胞HPDE6-C7作为对照,对这5种细胞分别用0、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL和40mg/mL的1,6-己二醇处理细胞48小时,显微镜拍照、CCK-8检测以及PI染色的结果显示,1,6-己二醇在低浓度条件下就能显著抑制胰腺癌细胞增殖,诱导胰腺癌细胞凋亡,但相同条件下,对正常胰腺上皮细胞基本无太大的杀伤作用,无明显副作用。这表明,1,6-己二醇能相对特异地抑制胰腺癌细胞的增值,具有胰腺癌治疗应用价值。在临床上,如果我们能很好地控制1,6-己二醇浓度,可能有比较好的治疗胰腺癌的潜力。
[0046] 实施例2
[0047] 参照实施例1,用不同浓度的1,6-己二醇分别处理肺癌细胞H2087和黑色素瘤细胞B16(供应商上海钰博生物科技有限公司),使用CCK-8检测活细胞数量的多少.[0048] 实验结果如图4和5所示,1,6-己二醇也能强烈地抑制肺癌细胞H2087和黑色素瘤细胞B16的增值。
[0049] 综合以上结果表明,1,6-己二醇能相对特异地抑制多种肿瘤细胞的增值。在肿瘤的临床治疗中有重要应用价值。
[0050] 以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明,但本发明创造并不限于所述实施例,熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换,这些等同的变型或替换均包含在本
申请权利要求所限定的范围内。