用封装的可诱导的脉络丛细胞治疗CNS疾病
阅读：1016发布：2020-09-14
专利汇可以提供用封装的可诱导的脉络丛细胞治疗CNS疾病专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文公开了组合物和方法，其涉及利用植入CNS的半透性 生物 相容的胶囊对神经系统 疾病 和病症的改善的 治疗 ，所述胶囊包含封装的无病原体的异种脉络丛(CP)细胞，所述细胞被诱导以产生 水 平改变(以及在某些实施方案中，增加的)的一种或多种脑脊髓液(CSF)组分。如所公开的选择胶囊以能够诱导寿命非常长的CP细胞(植入后>16个月)升高的CSF产生水平，而不引发免疫排斥、 炎症 或异物应答反应。，下面是用封装的可诱导的脉络丛细胞治疗CNS疾病专利的具体信息内容。
1.治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：
(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的脉络丛(CP)组织碎片，所述
组织碎片通过进行哺乳动物脉络丛组织的机械分离和酶解分离中的一种或两种获得，从而
获得直径为约50μm至约200μm并且包含CP上皮细胞的CP细胞簇，基本上所有所述胶囊的直径为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；
(b)向所述对象的一个中枢神经系统(CNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及
(c)在所述施用步骤(b)之前，同时或者之后，使所述一个或多个胶囊中的脉络丛组织
细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导脉络丛组织细胞产生一种或多种脑脊髓液
(CSF)组分，其水平相对于在没有所述接触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种
或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
2.治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：
(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的体外分化的脉络丛(CP)细
胞，所述细胞通过在足以获得多个体外分化的脉络丛(CP)细胞的条件下和时间内培养多能
细胞群来获得，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约
200至约10,000个CP细胞；
(b)向所述对象的一个中枢神经系统(CNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及
(c)在所述施用步骤(b)之前，同时或者之后，使所述一个或多个胶囊中的体外分化的
脉络丛(CP)细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导所述体外分化的脉络丛(CP)细胞释
放一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在所述接触步骤之前脉络丛组织细胞产
生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述脉络丛诱导剂诱导产生一种或多种CSF组分，
其水平高于在没有所述接触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓
液(CSF)组分的水平。
4.如权利要求1或2所述的方法，其中使所述CP细胞与所述脉络丛诱导剂接触的步骤发
生在所述施用步骤(b)之前。
5.如权利要求1或2所述的方法，其中所述脉络丛诱导剂包括选自下述的一种或多种试
剂：
(a)Wnt信号传导通路激动剂，
(b)GSK3β抑制剂，
(c)β-连环蛋白活化剂，
(d)抗氧化剂，和
(e)1,25-二羟维生素D3。
6.如权利要求5所述的方法，其中：
(1)所述Wnt信号传导通路激动剂选自：WAY-316606(SFRP抑制剂)、IQ1(PP2A活化剂)、
QS11(ARFGAP1活化剂)、(异)芳基嘧啶或者2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-
(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin、R-spondin-1、R-spondin-2、R-spondin-3、R-spondin-4，(2)所述GSK3β抑制剂选自SB-216763、BIO(6-溴靛玉红-3’-肟)、氯化锂、碳酸锂、柠檬
酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者包含阳离子锂的其它锂盐，
(3)所述β-连环蛋白活化剂选自脱氧胆酸(DCA)和图5的化合物，以及
(4)所述抗氧化剂选自10-(6’-泛醌基(ubiquinoyl))癸基三苯基磷盐(mitoquinol、
)、泛醇(辅酶Q)、生育酚、生育三烯酚(维生素E)、α-生育酚、γ-生育酚、2-氨基
乙磺酸(牛磺酸)、抗坏血酸、谷胱甘肽以及褪黑激素。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物脉络丛组织来自相对于所述对象是异
种或者同种异体的哺乳动物。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述哺乳动物脉络丛组织包括猪、绵羊、牛、山羊或非
人灵长类动物的脉络丛组织。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述猪的脉络丛组织包括胎儿或新生儿的脉络丛组
织。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述胎儿或新生儿的脉络丛组织基本上没有人类病
原体。
11.如权利要求9所述的方法，其中所述胎儿或新生儿的脉络丛组织基本上没有噬人性
可传播的猪内源性逆转录病毒。
12.如权利要求9所述的方法，其中下述中的至少一项：(i)所述胎儿或新生儿的脉络丛
组织基本上不能产生传染性的噬人性猪内源性逆转录病毒(PERV)，或者(ii)所述胎儿或新
生儿的脉络丛组织获自缺乏PERV基因的动物。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述胎儿或新生儿的脉络丛组织获自缺乏能够与
PERV-A env基因重组的PERV-C env基因的动物。
14.如权利要求2所述的方法，其中下述中的一项或两项：
(i)所述多能细胞群获自选自下述的来源：胚胎细胞、脐带细胞、胎盘细胞、神经嵴祖细
胞、成体组织干细胞和体细胞组织细胞；以及
(ii)将所述多能细胞群在足以获得所述多个体外分化的脉络丛(CP)细胞的条件下和
时间内，在包含选自下述的一种或多种体外CP分化剂的培养基中培养：骨形态发生蛋白
(BMP)或BMP信号传导通路激动剂、转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员或TGF-β信号传导通路激动剂、nodal蛋白或nodal信号传导通路激动剂、哺乳动物生长和分化因子(GDF)或GDF
信号传导通路激动剂、Wnt蛋白配体或Wnt信号传导通路激动剂、成纤维细胞生长因子(FGF)或FGF信号传导通路激动剂以及音猬因子(Shh)或Shh信号传导通路激动剂。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述Wnt信号传导通路激动剂选自：WAY-316606
(SFRP抑制剂)、IQ1(PP2A活化剂)、QS11(ARFGAP1活化剂)、2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin、R-spondin-1、R-spondin-2、R-spondin-3或R-spondin-4、氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者包含阳离子锂的其它锂盐。
16.如权利要求2所述的方法，其中所述封装的体外分化的脉络丛(CP)细胞相对于所述
对象是异种或者同种异体的。
17.如权利要求1或2所述的方法，其中下述中的一项或两项：
(i)所述胶囊在所述CNS注射位点处不引发慢性炎症，和
(ii)不需要向所述对象施用免疫抑制剂以减轻所述CNS注射位点处对所述胶囊的免疫
排斥。
18.如权利要求1或2所述的方法，其中所述一种或多种CSF组分包含如图7A-J中所呈现
的下述中的至少一种：(i)一种或多种生长因子，(ii)一种或多种CSF抗氧化剂，(iii)一种或多种趋化因子，(iv)一种或多种伴侣蛋白或者(v)一种或多种CP产物。
19.如权利要求18所述的方法，其中：
(a)所述一种或多种生长因子选自：IGF-1、IGF-II、FGF-1、bFGF(FGF-2)、FGF-9、FGF-
12、FGF-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、VEGF、VEGF-2、VEGF-B、VEGF-C、EGF、生长激素(GH)、BMP-1、BMP-2、BMP-4、BMP7、BMP-11、BMP-15、GDF-1、GDF-7、GDF-8、GDF-9、神经生长因子(NGF)、PEDF(色素上皮衍生因子，也被称为SerpinF1)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、IGF2、BDNF、NT-3、NT-4、GDF-15、GDNF、结缔组织生长因子(CTGF)、axotrophin、肝素结合EGF样生长因子(HB-EGF)、血小板衍化生长因子-α(PDGF-α)、角质细胞生长因子(KGF)或促神经突生长因子-2/中期因子(NEGF2)；
(b)所述一种或多种CSF抗氧化剂选自：血浆铜蓝蛋白、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)、超
氧化物歧化酶-2(SOD-2、Mn型)、超氧化物歧化酶铜伴侣(CCS)、DJ-1/PARK7、过氧化氢酶、硒蛋白(I、M、N、P、S、T、W、X，15kDa)、谷胱甘肽S-转移酶、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、羟酰谷胱甘肽水解酶或硫氧还蛋白；
(c)所述一种或多种趋化因子选自：肺泡巨噬细胞来源的趋化因子-I(AMCF-I)、AMCF-
II、基质细胞衍生的因子-2、趋化因子(CXC基序)配体2、趋化因子(CCL8、CCL16、CCL19、CCL21、CCL25、CXCL2、CXCL4、CXCL9、CXCL12、CXCL13、CXCL14)、趋化因子(CXC基序)受体-4、趋化素样因子超家族(CKLF-3、-6、-7)或促神经突生长因子-2/中期因子(NEGF2)；或者
(d)所述伴侣蛋白选自：转甲状腺素蛋白、脂质运载蛋白型前列腺素D合酶/β-微量蛋白
(L-PGDS)、载脂蛋白(A、B、C、D、E、H、J、M、N、R)、脂质运载蛋白-6、脂质运载蛋白-7、半胱氨酸蛋白酶抑制剂B、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、半胱氨酸蛋白酶抑制剂EM、半胱氨酸蛋白酶抑制剂11、热休克蛋白(HSP)家族成员或DJ-1/PARK7。
20.如权利要求1或2所述的方法，其中在各胶囊内，所述CP细胞以小于1微升的核心体
积存在。
21.如权利要求1或2所述的方法，其中所述施用步骤包括施用各包含至少约200、400、
600、800、1000、2000、3000、4000、5000、7500或9000个且不超过约10,000个CP细胞的一个或多个胶囊。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述一个或多个胶囊各包含至少约400、600、800、
1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000或7500个且不超过约8000个细胞。
23.如权利要求1或2所述的方法，其中所述施用步骤包括向所述CNS注射位点施用治疗
有效量的所述胶囊。
24.如权利要求23所述的方法，其包括向1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、125、
150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、
1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000个胶囊。
25.如权利要求1或2所述的方法，其中在所述施用步骤之后至少六个月，所述封装的CP
细胞的至少1％、5％、10％、20％、30％、40％或50％仍是存活的。
26.如权利要求1或2所述的方法，其中在所述施用步骤之后至少一年，所述生物相容的
胶囊的外表面基本上没有细胞外基质沉积。
27.如权利要求1或2所述的方法，其中向所述CNS注射位点施用所述胶囊包括递送包含
在载体溶液中的胶囊的悬液。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述载体溶液包含NaCl、人造脑脊髓液(CSF)、抗坏
血酸盐或抗炎剂中的至少一种。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述抗炎剂选自非甾体类抗炎药(NSAID)、甾体类
抗炎药和连接蛋白拮抗剂。
30.如权利要求1或2所述的方法，其中所述对象是人或非人的哺乳动物。
31.如权利要求1或2所述的方法，其中所述对象已知患有神经系统疾病。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述神经系统疾病选自：(a)通过神经元的死亡来
表征的神经退行性疾病，以及(b)选自下述的神经系统疾病：帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS，也被称为运动神经元病)、共济失调毛细血管扩张、进行性延髓麻痹、进行性肌萎缩、路易体痴呆、多系统萎缩、1型脊髓小脑共济失调(SCA 1)或年龄相关的神经退行性病症。
33.如权利要求31所述的方法，其中所述神经系统疾病选自：(a)通过至少一种神经细
胞功能水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的降
低来表征的疾病，以及(b)选自下述的(a)的疾病：帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化和抑郁症。
34.如权利要求31所述的方法，其中所述神经系统疾病选自(a)通过至少一种神经细胞
功能水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的增加
来表征的疾病，以及(b)选自下述的(a)的疾病：精神病、精神分裂症、癫痫性发作、缺血性脑卒中和与不宁腿综合征相关的失眠。
35.如权利要求31所述的方法，其中所述神经系统疾病选自：(a)通过所述对象中存在
包含水平改变的一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的脑脊髓液(CSF)来表征的疾病，所述改变
是相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述一种或多种CSF组分的水平而言，
以及(b)选自阿尔兹海默病和糖尿病的(a)的疾病。
36.如权利要求31所述的方法，其中所述神经系统疾病选自：
(a)通过所述对象中存在水平改变的至少一种脉络丛功能来表征的疾病，所述改变是
相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述脉络丛功能的水平而言，
(b)选自斯特奇-韦伯综合征(Sturge-Weber syndrome)和克-特-韦综合征(Klippel-
Trenaunay-Weber syndrome)的(a)的疾病，
(c)通过所述对象的脑组织中异常折叠的蛋白沉积水平相对于已知未患所述神经系统
疾病的对照对象中所述异常折叠的蛋白沉积水平的增加来表征的疾病，以及
(d)选自下述的(c)的疾病：脑淀粉样血管病、冰岛型遗传性脑出血伴淀粉样变性病
(HCHWA-I)、荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)、脑膜脑血管和眼软脑膜淀粉样变性、凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病、芬兰型家族性淀粉样变性(FAF)、朊蛋白血管变体脑淀粉样变性(vascular variant prion cerebral amyloidosis)、家族性英国痴呆
(FBD)(也被称为英国型家族性脑淀粉样血管病或英国型脑血管淀粉样变性)、家族性丹麦
痴呆(也被称为眼耳脑遗传病(heredopathia ophthalmo-oto-encephalica))、家族性转甲
状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性和PrP脑淀粉样血管病(PrP-CAA)。
37.如权利要求1或2所述的方法，其中所述神经系统疾病是中枢神经系统(CNS)疾病。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述CNS疾病是下述中的至少一种：(i)通过CNS神
经元的死亡来表征的神经退行性疾病，和(ii)通过至少一种CNS神经细胞功能水平相对于
已知未患所述CNS疾病的对照对象中所述CNS神经细胞功能水平的降低来表征的CNS疾病，
以及iii)通过至少一种CNS神经细胞功能水平相对于已知未患所述CNS疾病的对照对象中
所述CNS神经细胞功能水平的增加来表征的CNS疾病，其中所述CNS神经元和CNS神经细胞存
在于脑、脊髓、视网膜、视神经、脑神经、嗅神经或嗅上皮中的至少一种中。
39.如权利要求1或2所述的方法，其中所述神经系统疾病是外周神经系统(PNS)疾病。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述PNS疾病是下述中的至少一种：(i)通过PNS神
经元的死亡表征的神经退行性疾病，和(ii)通过至少一种PNS神经细胞功能水平相对于已
知未患所述PNS疾病的对照对象中所述PNS神经细胞功能水平的降低来表征的PNS疾病，以
及iii)通过至少一种PNS神经细胞功能水平相对于已知未患所述PNS疾病的对照对象中所
述PNS神经细胞功能水平的增加来表征的PNS疾病，其中所述PNS神经元和PNS神经细胞存在
于外周神经节或外周神经中的至少一种中。
41.如权利要求1或2所述的方法，其中所述CNS注射位点位于所述对象的脑组织中。
42.如权利要求1或2所述的方法，其中所述CNS注射位点位于所述对象的脑室中。
43.如权利要求1或2所述的方法，其中所述对象中的所述CNS注射位点选自：
(a)CNS位点，其包含受所述神经系统疾病影响的神经细胞纤维的靶位点,
(b)CNS位点，其包含由于所述神经系统疾病而处于死亡风险下的神经元细胞,
(c)CNS位点，其包含处于至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统疾
病的对照对象中的所述神经细胞功能水平降低的风险下的神经元细胞，
(d)CNS位点，其包含处于至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统疾
病的对照对象中的所述神经细胞功能水平增加的风险下的神经元细胞，
(e)CNS位点，其被选择以使所述胶囊基本上不与血液接触，以及
(f)CNS位点，其被选择以使所述施用步骤之后由所述胶囊分泌的CSF组分通过CSF循环
遍及所述对象的脑进行分布。
44.如权利要求1或2所述的方法，其中所述生物相容的胶囊包含用阳离子交联剂交联
的高甘露糖醛酸海藻酸盐的核心层、形成半透膜的多聚阳离子的中间层和用阳离子交联剂
交联的高甘露糖醛酸海藻酸盐的外层，其中所述核心层和外层中的所述高甘露糖醛酸海藻
酸盐相同或不同，并且包含约50％至约95％甘露糖醛酸残基，其中所述多聚阳离子层不是
由多聚-L-赖氨酸组成的。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述高甘露糖醛酸海藻酸盐具有大于约300kDa且
不超过1000kDa的平均分子量，并且所述多聚阳离子层由具有10至40kDa的平均分子量的多
聚阳离子试剂形成。
46.如权利要求1或2所述的方法，其中向所述CNS位点施用所述胶囊包括通过导管递送
所述胶囊。
47.如权利要求46所述的方法，其中递送包括用立体定位装置可控地定位所述导管。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述立体定位装置包括选自脑深层刺激术(DBS)微
型推进器、无框架头部立体定位架、头骨安装瞄准装置、Leksell框架和Cosman-Roberts-
Wells框架的立体定位装置或改进的立体定位装置。
49.如权利要求46所述的方法，其中所述导管包括外部导管、芯杆、柱塞和递送导管。
50.如权利要求31所述的方法，其中所述神经系统疾病选自：帕金森病，阿尔兹海默病，
亨廷顿氏病，肌萎缩性侧索硬化(ALS)，朊病毒病，运动神经元病，脊髓小脑性共济失调，脊髓性肌萎缩，帕金森型多系统萎缩，小脑型多系统萎缩，特发性震颤，进行性核上性麻痹，运动障碍，路易体痴呆，特发性震颤，药源性帕金森综合征，共济失调毛细血管扩张，脊髓小脑性共济失调，小脑退化，大脑萎缩，橄榄体脑桥小脑萎缩，皮质基底核退化症，肌阵挛性小脑协同障碍，弗里德赖希共济失调；静态神经疾病，脑卒中，中枢性疼痛综合征，慢性疼痛，偏头痛，舌咽神经痛，癫痫发作，癫痫，大脑性麻痹；创伤相关的CNS疾病，格斯特曼综合征，闭锁综合征，脊髓损伤，进行性神经退行性疾病，与老化和痴呆相关的进行性神经退行性疾
病，阿尔兹海默病，帕金森病，额颞叶痴呆，杰茨曼-斯脱司勒-史茵克病，巨轴索神经病，遗传性神经病，幼儿神经轴索性营养不良，克拉伯病，Landau-Kleffner综合征，脊髓痨，运动神经元和神经肌肉接头疾病，脊髓性肌萎缩，肯尼迪病，单肢肌萎缩，肌张力障碍，遗传性痉挛性截瘫，艾萨克综合征，Lambert-Eaton肌无力综合征，运动神经元病，不宁腿综合征，Tourette综合征；CNS炎性疾病，多发性硬化；药物或毒素诱发的CNS疾病，神经阻滞剂恶性综合征，迟发性运动障碍，威尔森氏病，神经中毒；代谢衰竭的神经系统疾病，Refsum病，神经系统感染性疾病，脑膜炎，急性播散性脑脊髓炎，格林-巴利综合征，AIDS神经系统并发症，肉毒中毒，破伤风，神经梅毒，脊髓灰质炎，狂犬病，HIV/AIDS，朊病毒病，福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)(阿米巴脑部感染)；囊虫病；神经精神疾病，抑郁症，情绪障碍；
强迫症，进食障碍，成瘾，焦虑相关障碍，双相障碍，注意缺陷多动障碍，孤独症，精神分裂症；神经内分泌病，嗜眠发作，失眠，与神经元死亡、谷氨酸毒性、蛋白聚集或沉积或者淀粉样斑块形成中的一种或多种相关或以其为表征的疾病，脑淀粉样血管病，冰岛型遗传性脑
出血伴淀粉样变性病(HCHWA-I)，荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)，脑膜脑血管和
眼软脑膜淀粉样变性，凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病，芬兰型家族性淀粉样变
性(FAF)，朊蛋白血管变体脑淀粉样变性，家族性英国痴呆(FBD)(也被称为英国型家族性脑淀粉样血管病或英国型脑血管淀粉样变性)，家族性丹麦痴呆(也被称为眼耳脑遗传病)，家族性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性，PrP脑淀粉样血管病(PrP-CAA)；线粒体功能障碍的神经系统疾病，包括活性氧(ROS)产生水平超过正常健康对照对象中发现的ROS产生水平的
线粒体功能障碍的神经系统疾病，脑原性神经营养因子相关的病症，双相障碍，Rett综合征以及Rubinstein-Taybi综合征。
51.治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：
(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的脉络丛(CP)组织碎片，所述
组织碎片通过进行哺乳动物脉络丛组织的机械和酶解分离中的一种或两种获得，从而获得
直径约50μm至约200μm并且包含CP上皮细胞的CP细胞簇，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；
(b)向所述对象中的一个外周神经系统(PNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或
12个PNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及
(c)在所述施用步骤(b)之前，同时或者之后，使所述一个或多个胶囊中的脉络丛组织
细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导脉络丛组织细胞产生一种或多种脑脊髓液
(CSF)组分，其水平相对于在没有接触步骤的情况下所述脉络丛组织细胞产生的所述一种
或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
52.治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：
(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的体外分化的脉络丛(CP)细
胞，所述细胞通过在足以获得多个体外分化的脉络丛(CP)细胞的条件下和时间内培养多能
细胞群来获得，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约
200至约10,000个CP细胞；
(b)向所述对象中的一个外周神经系统(PNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或
12个PNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及
(c)在所述施用步骤(b)之前，同时或者之后，使所述一个或多个胶囊中的体外分化的
脉络丛(CP)细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导所述体外分化的脉络丛(CP)细胞释
放一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在所述接触步骤之前所述脉络丛组织细
胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
53.如权利要求51或52所述的方法，其中所述脉络丛诱导剂诱导产生一种或多种CSF组
分，其水平高于在没有接触步骤的情况下所述脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊
髓液(CSF)组分的水平。
用封装的可诱导的脉络丛细胞治疗CNS疾病
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求于2015年5月15日提交的美国第62/162,390号临时申请的权益，将该申请通过引用整体并入本文。
[0003] 背景
技术领域
[0004] 本申请一般地涉及包括神经退行性疾病在内的神经疾病和病症的治疗。更具体地，描述了关于包含半透性胶囊的中枢神经系统(CNS)植入物的组合物和方法，所述半透性胶囊含有令人惊讶地长期存活的异种脉络丛(CP)细胞，其可以出乎意料地被诱导产生水平
改变的(例如，以统计学显著的方式增加或降低)脑脊髓液(CSF)组分，对于某些实施方案，其会是增加水平的特定CSF组分。胶囊是非免疫原性，以使局部炎症反应最小化，并避免对辅助性免疫抑制疗法的需求。
改变的(例如，以统计学显著的方式增加或降低)脑脊髓液(CSF)组分，对于某些实施方案，其会是增加水平的特定CSF组分。胶囊是非免疫原性，以使局部炎症反应最小化，并避免对辅助性免疫抑制疗法的需求。
[0005] 相关技术描述
[0006] 神经系统的疾病和病症呈现出重大的医学、社会和经济挑战，对其而言，有效的救济方法仍然难以找到。神经退行性疾病通常与老化相关，并且可以表征为来自中枢神经系统(CNS)和/或周围神经系统(PNS)的神经元细胞的进行性丧失，通常伴随着抑郁症或痴呆
以及记忆、运动技能、认知技能和感觉能力中的一种或多种的退化或丧失，以及其它神经功能缺陷(Suksuphew等人，2015World J.Stem Cells 7:502；Schadt等人，
2014Front.Pharmacol.5:252)。阿尔兹海默病、帕金森病、亨廷顿氏病、精神分裂症和其它神经系统疾病由于增长的发病率和增加的对医疗卫生费用的影响已经成为社会负担。
以及记忆、运动技能、认知技能和感觉能力中的一种或多种的退化或丧失，以及其它神经功能缺陷(Suksuphew等人，2015World J.Stem Cells 7:502；Schadt等人，
2014Front.Pharmacol.5:252)。阿尔兹海默病、帕金森病、亨廷顿氏病、精神分裂症和其它神经系统疾病由于增长的发病率和增加的对医疗卫生费用的影响已经成为社会负担。
[0007] 疾病相关的神经系统细胞退化可以导致具有有害后果的受损的神经系统功能，所述神经系统细胞在健康个体中是正常神经系统维持和活性的重要贡献者。例如，分泌重要
的生物活性分子(如生长因子、分化因子、组织修复因子、神经递质、解毒蛋白、蛋白伴侣等)的神经系统细胞的损伤或丧失可以导致破坏性的疾病，如帕金森病、阿尔兹海默病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)以及其它病况。当丧失的细胞的正常功能包括生理学状态的稳态维持或
对改变的生理学诱因的合适应答，则仅试图以非调节的方式恢复患者中多种消耗的因子中
的一种或少数几种的治疗策略通常是失败的。相反地，有效的疾病改善疗法应当包括在生
理学浓度下并且以生物学应答的调控的方式，持续调节通常由这些细胞分泌的所有因子的
供应。
的生物活性分子(如生长因子、分化因子、组织修复因子、神经递质、解毒蛋白、蛋白伴侣等)的神经系统细胞的损伤或丧失可以导致破坏性的疾病，如帕金森病、阿尔兹海默病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)以及其它病况。当丧失的细胞的正常功能包括生理学状态的稳态维持或
对改变的生理学诱因的合适应答，则仅试图以非调节的方式恢复患者中多种消耗的因子中
的一种或少数几种的治疗策略通常是失败的。相反地，有效的疾病改善疗法应当包括在生
理学浓度下并且以生物学应答的调控的方式，持续调节通常由这些细胞分泌的所有因子的
供应。
[0008] 因此，治疗神经退行性变的最近的可选方法包括将可以恢复、修复或者功能性替代损伤细胞的有活性的治疗性细胞引入CNS。通过此类方法，认为补充的细胞可以灵活以及多效地应答由局部环境提供的环境诱因，例如通过随着CNS细胞和组织生长、分化、修复和/或重塑的发生，它们的基因表达和蛋白分泌特性的定量和/或定性改变的进展。此类CNS细
胞替代疗法包括试图直接用原初效应细胞替代由于疾病而丧失的细胞，例如用一旦移植入
患有帕金森病的患者中则可以分化为产生多巴胺的神经元的胎儿中脑组织移植物
(Kordower等人，1995N Engl J Med.332(17):1118；Lindvall,1998Mov Disord.13Suppl
1:83；Roitberg等人，2004Neurol Res.26(4):355；Kefalopoulou等人，2014JAMA
Neurol.71(1):83；Bega等人，2014JAMA 311(6):617)。
胞替代疗法包括试图直接用原初效应细胞替代由于疾病而丧失的细胞，例如用一旦移植入
患有帕金森病的患者中则可以分化为产生多巴胺的神经元的胎儿中脑组织移植物
(Kordower等人，1995N Engl J Med.332(17):1118；Lindvall,1998Mov Disord.13Suppl
1:83；Roitberg等人，2004Neurol Res.26(4):355；Kefalopoulou等人，2014JAMA
Neurol.71(1):83；Bega等人，2014JAMA 311(6):617)。
[0009] 与直接CNS细胞替代疗法不同，其它近期鉴定的替代疗法关注向损伤的CNS组织位点提供能够间接改善CNS缺乏的细胞。例如，鉴于这些特化的CNS细胞在CSF产生中的公认的作用，脉络丛(CP)细胞已经吸引了特别的关注(例如，Damkier等人，2013Physiol.Rev.93:
1847)。脉络丛(CP)是脑室内特化的上皮组织。如通过来自多种小动物和非人的灵长类疾病模型研究的行为改善和组织学数据所证实的，其关键功能之一是分泌提供神经营养性、神
经保护性和神经恢复性因子的脑脊髓液(CSF)(Redzic等人，2005Curr Top Dev Biol.71:
1；Borlongan等人，2004Stroke35(9):2206；Emerich等人，2006Neurobiol Dis.23(2):471；
Borlongan等人，2008Cell Transplant 16(10):987；Luo等人，2013J Parkinsons Dis.3
(3):275)。
1847)。脉络丛(CP)是脑室内特化的上皮组织。如通过来自多种小动物和非人的灵长类疾病模型研究的行为改善和组织学数据所证实的，其关键功能之一是分泌提供神经营养性、神
经保护性和神经恢复性因子的脑脊髓液(CSF)(Redzic等人，2005Curr Top Dev Biol.71:
1；Borlongan等人，2004Stroke35(9):2206；Emerich等人，2006Neurobiol Dis.23(2):471；
Borlongan等人，2008Cell Transplant 16(10):987；Luo等人，2013J Parkinsons Dis.3
(3):275)。
[0010] 随着年龄的增长，CNS中CSF的功能和更新率显著降低，这可以导致多种老年人中发生的神经退行性疾病(Redzic等人，2005Curr Top DevBiol.71:1；Chen等人，2009Exp
Gerontol.44(4):289；Chen等人，2012ExpGerontol.47(4):323)。近期的发现表明，CSF通过脑内的细胞间隙的循环在动物的睡眠周期期间更有效地发生(Xie等人，2013Science342
(6156):373)，这暗示减少的睡眠可以导致已知导致神经退行性变的废物副产物的清除降
低和斑块形成增加(Iliff等人，2014J Neurosci.34(49):16180)。然而，这些发现还提示，整个昼夜循环期间，脑内损伤位点局部CSF的连续产生可能具有临床非期望的后果。例如，损伤的CNS位点处过量的CSF产生可能导致突触区域中活性突触蛋白或神经递质被稀释至
潜在的次优浓度。因此，难以预测增加的CSF产生是否会是治疗CNS疾病的可行的治疗策略。
Gerontol.44(4):289；Chen等人，2012ExpGerontol.47(4):323)。近期的发现表明，CSF通过脑内的细胞间隙的循环在动物的睡眠周期期间更有效地发生(Xie等人，2013Science342
(6156):373)，这暗示减少的睡眠可以导致已知导致神经退行性变的废物副产物的清除降
低和斑块形成增加(Iliff等人，2014J Neurosci.34(49):16180)。然而，这些发现还提示，整个昼夜循环期间，脑内损伤位点局部CSF的连续产生可能具有临床非期望的后果。例如，损伤的CNS位点处过量的CSF产生可能导致突触区域中活性突触蛋白或神经递质被稀释至
潜在的次优浓度。因此，难以预测增加的CSF产生是否会是治疗CNS疾病的可行的治疗策略。
[0011] 然而，许多努力已经指向脉络丛(CP)细胞移植物通过植入CNS的用途，通过该用途，CP来源的CSF组分或其它CP进程、产物或代谢物可以作为继发效应物恢复损伤的宿主组织，最可能是通过植入位点内和其周围的多种细胞类型的重编程和/或恢复。出于实用和伦理原因，CP植入物通常采用异种CP细胞，因此需要实施免疫抑制性和抗炎性措施，以对抗针对异种移植物的免疫排斥和/或宿主炎症(例如，异物应答)反应。生物相容的半透性海藻酸盐胶囊被称为非免疫原性介质，在其中向脑内引入治疗性细胞以使此类反应最小化，同时
允许可溶的细胞产物扩散进植入的胶囊周围的组织(例如，US6322804、US5834001、
US6083523、US2007/134224、US5869463、US2004/213768、US2009/0047325)。例如，在
US2007/134224、US2004/213768和US2009/0047325以及相关的专利申请公开中描述了用于
治疗CNS疾病的生物相容性胶囊内的脉络丛组织碎片在脑中的特定植入，如例如US2009/
0047325中所述，除了封装的异种移植的CP细胞在CNS组织损伤的植入位点局部产生CSF外，新生儿的CP细胞的使用可以提供高于成体CP细胞提供的浓度的生物活性CSF分子，考虑到
新生哺乳动物的CSF通常富含CSF组分。
允许可溶的细胞产物扩散进植入的胶囊周围的组织(例如，US6322804、US5834001、
US6083523、US2007/134224、US5869463、US2004/213768、US2009/0047325)。例如，在
US2007/134224、US2004/213768和US2009/0047325以及相关的专利申请公开中描述了用于
治疗CNS疾病的生物相容性胶囊内的脉络丛组织碎片在脑中的特定植入，如例如US2009/
0047325中所述，除了封装的异种移植的CP细胞在CNS组织损伤的植入位点局部产生CSF外，新生儿的CP细胞的使用可以提供高于成体CP细胞提供的浓度的生物活性CSF分子，考虑到
新生哺乳动物的CSF通常富含CSF组分。
[0012] 然而，尽管治疗性异种移植物的开发中取得这些进展，仍然存在许多未解决的挑战。例如，可以获得的异种CP组织的数量有限，并且即使当使用新生的CP细胞时，异种移植之后复杂的CSF组分的量可能也不足以实现神经系统缺陷的纠正。
[0013] 类似地，当存在广泛的神经系统组织损伤时，和/或当对于含有CP的胶囊在受体中的放置仅存在有限空间时，和/或当期望高水平的CSF组分产生时，如果必须在CNS位点处植入大量胶囊和/或如果需要多个CNS植入位点或者重复介入性程序来递送期望水平的CSF产
生量，则存在进一步损伤封装的异种CP细胞的植入位点(例如，直接植入脑组织的CP胶囊的CNS位点)的真正风险。
生量，则存在进一步损伤封装的异种CP细胞的植入位点(例如，直接植入脑组织的CP胶囊的CNS位点)的真正风险。
[0014] 根据之前的报告，CP异种移植物的寿命也不清楚，但是慢性神经退行性疾病可能需要长期疗法。重复的外科手术来替代耗竭的封装的CP移植物对于患者而言将是不便的、
潜在有害的，并且是昂贵的。此外，异种移植带来非期望地向移植受体中引入存在于供体CP组织中有害病原体的风险。
潜在有害的，并且是昂贵的。此外，异种移植带来非期望地向移植受体中引入存在于供体CP组织中有害病原体的风险。
[0015] 现有方法的这些以及其它缺点阻碍了用于CNS疗法的异种移植物的开发，特别是在本公开内容之前，还不可能预测将封装的CP细胞植入损伤的CNS位点是否会带来长期有
益的临床结果。本发明公开的实施方案解决了这些需求，并提供了其它相关优势。
益的临床结果。本发明公开的实施方案解决了这些需求，并提供了其它相关优势。
[0016] 概述
[0017] 在某些实施方案中，本发明提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的脉络丛(CP)组织碎片，所述组织碎片通过哺乳动物脉络丛组织的机械分离和酶解分离中的一种或两种获
得，从而获得直径为约50μm至约200μm并且包含CP上皮细胞的CP细胞簇，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个中枢神经系统(CNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述步骤(b)的施用之前，在施用的同时或者在
施用之后，使所述一个或多个胶囊中的脉络丛组织细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂
诱导脉络丛组织细胞产生一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在无所述接触步
骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的
(例如，以统计学显著的方式增加或降低)，并且在某些实施方案中，一种或多种CSF组分的水平高于在无所述接触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液
(CSF)组分的水平。
得，从而获得直径为约50μm至约200μm并且包含CP上皮细胞的CP细胞簇，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个中枢神经系统(CNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述步骤(b)的施用之前，在施用的同时或者在
施用之后，使所述一个或多个胶囊中的脉络丛组织细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂
诱导脉络丛组织细胞产生一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在无所述接触步
骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的
(例如，以统计学显著的方式增加或降低)，并且在某些实施方案中，一种或多种CSF组分的水平高于在无所述接触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液
(CSF)组分的水平。
[0018] 在某些其它实施方案中，提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的体外分化的脉络丛(CP)细胞，所述细胞通过在足以获得多个体外分化的脉络丛(CP)细胞的条件下和时间内
培养多能细胞群而获得，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个中枢神经系统(CNS)注射位点
或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述步骤(b)的施用之前，在施用的同时或者在施用之后，使所述一个或多个胶囊中的体外分化的脉络丛(CP)细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导所述体外分化的脉络丛(CP)细
胞释放一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在无所述接触步骤的情况下脉络丛
组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的(例如，以统计学显著
的方式增加或降低)，以及在某些实施方案中，一种或多种CSF组分的水平高于在无所述接
触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平。在某
些实施方案中，CP细胞与脉络丛诱导剂接触的步骤发生在所述步骤(b)的施用之前。在某些实施方案中，脉络丛诱导剂包括选自下述的一种或多种试剂：(a)Wnt信号传导通路激动剂，(b)GSK3β抑制剂，(c)β-连环蛋白活化剂，(d)抗氧化剂和(e)1,25-二羟维生素D3。在某些实施方案中，(1)Wnt信号传导通路激动剂选自WAY-316606(SFRP抑制剂)、IQ1(PP2A活化剂)、QS11(ARFGAP1活化剂)、(异)芳基嘧啶或者2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-
(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin、R-spondin-1、R-spondin-2、R-spondin-3、R-spondin-4；(2)GSK3β抑制剂选自SB-216763、BIO(6-溴靛玉红-3’-肟)、氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者包含阳离子锂的其它锂盐；(3)β-连环蛋白活化剂选自脱氧胆酸(DCA)和图5的化合物；以及
(4)抗氧化剂选自10-(6’-泛醌基(ubiquinoyl))癸基三苯基磷盐(mitoquinol、
)、泛醇(辅酶Q)、生育酚、生育三烯酚(维生素E)、α-生育酚、γ-生育酚、2-氨基乙磺酸(牛磺酸)、抗坏血酸、谷胱甘肽以及褪黑激素。
培养多能细胞群而获得，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个中枢神经系统(CNS)注射位点
或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述步骤(b)的施用之前，在施用的同时或者在施用之后，使所述一个或多个胶囊中的体外分化的脉络丛(CP)细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导所述体外分化的脉络丛(CP)细
胞释放一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在无所述接触步骤的情况下脉络丛
组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的(例如，以统计学显著
的方式增加或降低)，以及在某些实施方案中，一种或多种CSF组分的水平高于在无所述接
触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平。在某
些实施方案中，CP细胞与脉络丛诱导剂接触的步骤发生在所述步骤(b)的施用之前。在某些实施方案中，脉络丛诱导剂包括选自下述的一种或多种试剂：(a)Wnt信号传导通路激动剂，(b)GSK3β抑制剂，(c)β-连环蛋白活化剂，(d)抗氧化剂和(e)1,25-二羟维生素D3。在某些实施方案中，(1)Wnt信号传导通路激动剂选自WAY-316606(SFRP抑制剂)、IQ1(PP2A活化剂)、QS11(ARFGAP1活化剂)、(异)芳基嘧啶或者2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-
(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin、R-spondin-1、R-spondin-2、R-spondin-3、R-spondin-4；(2)GSK3β抑制剂选自SB-216763、BIO(6-溴靛玉红-3’-肟)、氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者包含阳离子锂的其它锂盐；(3)β-连环蛋白活化剂选自脱氧胆酸(DCA)和图5的化合物；以及
(4)抗氧化剂选自10-(6’-泛醌基(ubiquinoyl))癸基三苯基磷盐(mitoquinol、
)、泛醇(辅酶Q)、生育酚、生育三烯酚(维生素E)、α-生育酚、γ-生育酚、2-氨基乙磺酸(牛磺酸)、抗坏血酸、谷胱甘肽以及褪黑激素。
[0019] 在某些实施方案中，哺乳动物脉络丛组织来自相对于对象为异种或者同种异体的哺乳动物。在某些实施方案中，哺乳动物脉络丛组织包括猪、绵羊、牛、山羊或非人灵长类的脉络丛组织。在某些实施方案中，猪的脉络丛组织包括胎儿或新生儿的脉络丛组织，其在某些其它实施方案中基本没有人类病原体。在某些相关实施方案中，胎儿或新生儿的脉络丛
组织基本没有噬人性可传播的猪内源性逆转录病毒，以及在某些实施方案中，胎儿或新生
儿的脉络丛组织基本不能产生感染性的噬人性猪内源性逆转录病毒(PERV)，或者胎儿或新
生儿的脉络丛组织获自缺乏PERV基因的动物。在某些其它实施方案中，胎儿或新生儿的脉
络丛组织获自缺乏能够与PERV-A env基因重组的PERV-C env基因的动物。
组织基本没有噬人性可传播的猪内源性逆转录病毒，以及在某些实施方案中，胎儿或新生
儿的脉络丛组织基本不能产生感染性的噬人性猪内源性逆转录病毒(PERV)，或者胎儿或新
生儿的脉络丛组织获自缺乏PERV基因的动物。在某些其它实施方案中，胎儿或新生儿的脉
络丛组织获自缺乏能够与PERV-A env基因重组的PERV-C env基因的动物。
[0020] 在以上所述的方法的某些实施方案中，多能细胞群获自选自下述的来源：胚胎细胞、脐带细胞、胎盘细胞、神经嵴祖细胞、成体组织干细胞和体细胞组织细胞。在某些实施方案中，将多能细胞群在一定条件下，在包含选自下述的一种或多种体外CP分化剂的培养基
中培养一段时间，以足以获得所述多个体外分化的脉络丛(CP)细胞：骨形态发生蛋白(BMP)或BMP信号传导通路激动剂、转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员或TGF-β信号传导通路激动剂、nodal蛋白或nodal信号传导通路激动剂、哺乳动物生长和分化因子(GDF)或GDF信号
传导通路激动剂、Wnt蛋白配体或Wnt信号传导通路激动剂、成纤维细胞生长因子(FGF)或
FGF信号传导通路激动剂以及音猬因子(Shh)或Shh信号传导通路激动剂。在某些其它实施
方案中，Wnt信号传导通路激动剂选自：WAY-316606(SFRP抑制剂)、IQ1(PP2A活化剂)、QS11(ARFGAP1活化剂)、2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、
Norrin、R-spondin-1、R-spondin-2、R-spondin-3或R-spondin-4、氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者包含阳离子锂的其它锂盐。
中培养一段时间，以足以获得所述多个体外分化的脉络丛(CP)细胞：骨形态发生蛋白(BMP)或BMP信号传导通路激动剂、转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员或TGF-β信号传导通路激动剂、nodal蛋白或nodal信号传导通路激动剂、哺乳动物生长和分化因子(GDF)或GDF信号
传导通路激动剂、Wnt蛋白配体或Wnt信号传导通路激动剂、成纤维细胞生长因子(FGF)或
FGF信号传导通路激动剂以及音猬因子(Shh)或Shh信号传导通路激动剂。在某些其它实施
方案中，Wnt信号传导通路激动剂选自：WAY-316606(SFRP抑制剂)、IQ1(PP2A活化剂)、QS11(ARFGAP1活化剂)、2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、
Norrin、R-spondin-1、R-spondin-2、R-spondin-3或R-spondin-4、氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者包含阳离子锂的其它锂盐。
[0021] 在以上所述的方法的某些实施方案中，封装的体外分化的脉络丛(CP)细胞相对于对象是异种或者同种异体的。在某些实施方案中，下述中的一项或两项：(i)胶囊在CNS注射位点处不引发慢性炎症，和(ii)不需要向对象施用免疫抑制剂以减轻CNS注射位点处胶囊
的免疫排斥。在某些实施方案中，一种或多种CSF组分包含如图7A-J中所呈现的下述中的至少一种：(i)一种或多种生长因子，(ii)一种或多种CSF抗氧化剂，(iii)一种或多种趋化因子，(iv)一种或多种伴侣蛋白，或(v)一种或多种CP产物。在某些其它实施方案中，(a)一种或多种生长因子选自可以包括但不必限于下述的生长因子：IGF-1、IGF-II、FGF-1、bFGF
(FGF-2)、FGF-9、FGF-12、FGF-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、VEGF、VEGF-2、VEGF-B、VEGF-C、EGF、生长激素(GH)、BMP-1、BMP-2、BMP-4、BMP7、BMP-11、BMP-15、GDF-1、GDF-7、GDF-8、GDF-
9、神经生长因子(NGF)、PEDF(色素上皮衍生因子，也被称为SerpinF1)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、IGF2、BDNF、NT-3、NT-4、GDF-15、GDNF、结缔组织生长因子(CTGF)、axotrophin、肝素结合EGF样生长因子(HB-EGF)、血小板衍化生长因子-α(PDGF-α)、角质细胞生长因子
(KGF)或促神经突生长因子-2/中期因子(NEGF2)；(b)一种或多种CSF抗氧化剂选自：血浆铜蓝蛋白、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)、超氧化物歧化酶-2(SOD-2、Mn型)、超氧化物歧化酶铜伴侣(CCS)、DJ-1/PARK7、过氧化氢酶、硒蛋白(I、M、N、P、S、T、W、X，15kDa)、谷胱甘肽S-转移酶、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、羟酰谷胱甘肽水解酶或硫氧还蛋白；(c)一种或多种趋化因子选自可以包括但不必限于下述的趋化因子：肺泡巨噬细胞来源的趋化因子-I
(AMCF-I)、AMCF-II、基质细胞衍生的因子-2、趋化因子(CXC基序)配体2、趋化因子(CCL8、CCL16、CCL19、CCL21、CCL25、CXCL2、CXCL4、CXCL9、CXCL12、CXCL13、CXCL14)、趋化因子(CXC基序)受体-4、趋化素样因子超家族(CKLF-3、-6、-7)或促神经突生长因子-2/中期因子
(NEGF2)；或者(d)伴侣蛋白选自可以包括但不必限于下述的蛋白：转甲状腺素蛋白、脂质运载蛋白型前列腺素D合酶/β-微量蛋白(L-PGDS)、载脂蛋白(A、B、C、D、E、H、J、M、N、R)、脂质运载蛋白-6、脂质运载蛋白-7、半胱氨酸蛋白酶抑制剂B、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、半胱氨酸蛋白酶抑制剂EM、半胱氨酸蛋白酶抑制剂11、热休克蛋白(HSP)家族成员或DJ-1/PARK7。
的免疫排斥。在某些实施方案中，一种或多种CSF组分包含如图7A-J中所呈现的下述中的至少一种：(i)一种或多种生长因子，(ii)一种或多种CSF抗氧化剂，(iii)一种或多种趋化因子，(iv)一种或多种伴侣蛋白，或(v)一种或多种CP产物。在某些其它实施方案中，(a)一种或多种生长因子选自可以包括但不必限于下述的生长因子：IGF-1、IGF-II、FGF-1、bFGF
(FGF-2)、FGF-9、FGF-12、FGF-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、VEGF、VEGF-2、VEGF-B、VEGF-C、EGF、生长激素(GH)、BMP-1、BMP-2、BMP-4、BMP7、BMP-11、BMP-15、GDF-1、GDF-7、GDF-8、GDF-
9、神经生长因子(NGF)、PEDF(色素上皮衍生因子，也被称为SerpinF1)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、IGF2、BDNF、NT-3、NT-4、GDF-15、GDNF、结缔组织生长因子(CTGF)、axotrophin、肝素结合EGF样生长因子(HB-EGF)、血小板衍化生长因子-α(PDGF-α)、角质细胞生长因子
(KGF)或促神经突生长因子-2/中期因子(NEGF2)；(b)一种或多种CSF抗氧化剂选自：血浆铜蓝蛋白、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)、超氧化物歧化酶-2(SOD-2、Mn型)、超氧化物歧化酶铜伴侣(CCS)、DJ-1/PARK7、过氧化氢酶、硒蛋白(I、M、N、P、S、T、W、X，15kDa)、谷胱甘肽S-转移酶、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、羟酰谷胱甘肽水解酶或硫氧还蛋白；(c)一种或多种趋化因子选自可以包括但不必限于下述的趋化因子：肺泡巨噬细胞来源的趋化因子-I
(AMCF-I)、AMCF-II、基质细胞衍生的因子-2、趋化因子(CXC基序)配体2、趋化因子(CCL8、CCL16、CCL19、CCL21、CCL25、CXCL2、CXCL4、CXCL9、CXCL12、CXCL13、CXCL14)、趋化因子(CXC基序)受体-4、趋化素样因子超家族(CKLF-3、-6、-7)或促神经突生长因子-2/中期因子
(NEGF2)；或者(d)伴侣蛋白选自可以包括但不必限于下述的蛋白：转甲状腺素蛋白、脂质运载蛋白型前列腺素D合酶/β-微量蛋白(L-PGDS)、载脂蛋白(A、B、C、D、E、H、J、M、N、R)、脂质运载蛋白-6、脂质运载蛋白-7、半胱氨酸蛋白酶抑制剂B、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、半胱氨酸蛋白酶抑制剂EM、半胱氨酸蛋白酶抑制剂11、热休克蛋白(HSP)家族成员或DJ-1/PARK7。
[0022] 在某些实施方案中，在各胶囊内，CP细胞以小于一微升的核心体积(core volume)存在。在某些实施方案中，施用步骤包括施用各自包含至少约200、400、600、800、1000、
2000、3000、4000、5000、7500或9000个且不超过约10,000个CP细胞的一个或多个胶囊。在某些其它实施方案中，一个或多个胶囊各自包含至少约400、600、800、1000、1500、2000、2500、
3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000或7500个且不超过约8000个细胞。在某些实施方案中，施用步骤包括向CNS注射位点施用治疗有效量的胶囊，在某些其它实施方案中，其包括向1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用不超过1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250、300、350、
400、450,500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200、1300、1400、
1500、1600、1700、1800、1900或2000个胶囊。
2000、3000、4000、5000、7500或9000个且不超过约10,000个CP细胞的一个或多个胶囊。在某些其它实施方案中，一个或多个胶囊各自包含至少约400、600、800、1000、1500、2000、2500、
3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000或7500个且不超过约8000个细胞。在某些实施方案中，施用步骤包括向CNS注射位点施用治疗有效量的胶囊，在某些其它实施方案中，其包括向1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个CNS注射位点施用不超过1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250、300、350、
400、450,500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200、1300、1400、
1500、1600、1700、1800、1900或2000个胶囊。
[0023] 在以上所述的方法的某些实施方案中，在施用步骤之后至少六个月，封装的CP细胞中至少1％、5％、10％、20％、30％、40％或50％保有活力。在某些实施方案中，在施用步骤之后至少一年，生物相容的胶囊的外表面基本上没有细胞外基质沉积。在某些实施方案中，向CNS注射位点施用胶囊包括递送包含在载体溶液中的胶囊的悬液，在某些其它实施方案
中，所述载体溶液包含NaCl、人造脑脊髓液(CSF)、抗坏血酸盐或抗炎剂中的至少一种。在某些其它实施方案中，抗炎剂选自非甾体类抗炎药(NSAID)、甾体类抗炎药和连接蛋白拮抗
剂。
中，所述载体溶液包含NaCl、人造脑脊髓液(CSF)、抗坏血酸盐或抗炎剂中的至少一种。在某些其它实施方案中，抗炎剂选自非甾体类抗炎药(NSAID)、甾体类抗炎药和连接蛋白拮抗
剂。
[0024] 在以上所述的方法的某些实施方案中，对象是人或非人的哺乳动物。在某些实施方案中，已知对象患有神经系统疾病，在某些其它实施方案中，所述神经系统疾病选自：(a)通过神经元死亡表征的神经退行性疾病；和(b)选自下述的神经系统疾病：帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS、也被称为运动神经元病)、共济失调毛细血管扩张、进行性延髓麻痹、进行性肌萎缩、路易体痴呆、多系统萎缩、1型脊髓小脑共济失调(SCA 1)或年龄相关的神经退行性病症。在某些其它实施方案中，神经系统疾病选自：(a)通过至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患神经系统疾病的对照对象中所述神经细胞
功能水平的降低来表征的疾病，以及(b)选自下述的(a)的疾病：帕金森病(多巴胺能神经
元)、阿尔兹海默病(去甲肾上腺素能神经元，Adori等人，2015,Acta Neuropathol 129(4):
541)、亨廷顿氏病(中型棘突GABA神经元，MSN)、肌萎缩性侧索硬化(运动神经元病)和抑郁症(羟色胺能神经元)。在某些其它实施方案中，神经系统疾病选自：(a)通过至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的
增加来表征的疾病，以及(b)选自下述的(a)的疾病：精神病、精神分裂症(极度活跃的多巴胺信号传导)；癫痫性发作(谷氨酸能兴奋性毒性)、缺血性脑卒中(谷氨酸能兴奋性毒性)和与不宁腿综合征相关的失眠(过于活跃的谷氨酸能活性)。在某些其它实施方案中，神经系
统疾病选自：(a)通过对象中包含一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的脑脊髓液(CSF)的存在
来表征的疾病，所述CSF组分的水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述
CSF组分的水平是改变的，以及(b)选自阿尔兹海默病和糖尿病的(a)的疾病。在某些其它实施方案中，神经系统疾病选自：(a)通过对象中水平改变的至少一种脉络丛功能的存在来表征的疾病，所述脉络丛功能水平的改变是相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中
所述脉络丛功能的水平，(b)选自斯特奇-韦伯综合征和克-特-韦综合征的(a)的疾病，(c)
通过对象的脑组织中异常折叠的蛋白沉积的水平相对于已知未患神经系统疾病的对照对
象中所述异常折叠的蛋白沉积的水平的增加来表征的疾病，以及(d)选自下述的(c)的疾
病：脑淀粉样血管病、冰岛型遗传性脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-I)、荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)、脑膜脑血管和眼软脑膜淀粉样变性、凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病、芬兰型家族性淀粉样变性(FAF)、朊蛋白血管变体脑淀粉样变性(vascular
variant prion cerebral amyloidosis)、家族性英国痴呆(FBD)(也被称为英国型家族性
脑淀粉样血管病或英国型脑血管淀粉样变性)、家族性丹麦痴呆(也被称为眼耳脑遗传病
(heredopathia ophthalmo-oto-encephalica))、家族性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性
和PrP脑淀粉样血管病(PrP-CAA)。
功能水平的降低来表征的疾病，以及(b)选自下述的(a)的疾病：帕金森病(多巴胺能神经
元)、阿尔兹海默病(去甲肾上腺素能神经元，Adori等人，2015,Acta Neuropathol 129(4):
541)、亨廷顿氏病(中型棘突GABA神经元，MSN)、肌萎缩性侧索硬化(运动神经元病)和抑郁症(羟色胺能神经元)。在某些其它实施方案中，神经系统疾病选自：(a)通过至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的
增加来表征的疾病，以及(b)选自下述的(a)的疾病：精神病、精神分裂症(极度活跃的多巴胺信号传导)；癫痫性发作(谷氨酸能兴奋性毒性)、缺血性脑卒中(谷氨酸能兴奋性毒性)和与不宁腿综合征相关的失眠(过于活跃的谷氨酸能活性)。在某些其它实施方案中，神经系
统疾病选自：(a)通过对象中包含一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的脑脊髓液(CSF)的存在
来表征的疾病，所述CSF组分的水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述
CSF组分的水平是改变的，以及(b)选自阿尔兹海默病和糖尿病的(a)的疾病。在某些其它实施方案中，神经系统疾病选自：(a)通过对象中水平改变的至少一种脉络丛功能的存在来表征的疾病，所述脉络丛功能水平的改变是相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中
所述脉络丛功能的水平，(b)选自斯特奇-韦伯综合征和克-特-韦综合征的(a)的疾病，(c)
通过对象的脑组织中异常折叠的蛋白沉积的水平相对于已知未患神经系统疾病的对照对
象中所述异常折叠的蛋白沉积的水平的增加来表征的疾病，以及(d)选自下述的(c)的疾
病：脑淀粉样血管病、冰岛型遗传性脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-I)、荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)、脑膜脑血管和眼软脑膜淀粉样变性、凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病、芬兰型家族性淀粉样变性(FAF)、朊蛋白血管变体脑淀粉样变性(vascular
variant prion cerebral amyloidosis)、家族性英国痴呆(FBD)(也被称为英国型家族性
脑淀粉样血管病或英国型脑血管淀粉样变性)、家族性丹麦痴呆(也被称为眼耳脑遗传病
(heredopathia ophthalmo-oto-encephalica))、家族性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性
和PrP脑淀粉样血管病(PrP-CAA)。
[0025] 在以上所述的方法的某些实施方案中，神经系统疾病是中枢神经系统(CNS)疾病，在某些实施方案中，所述中枢神经系统疾病是下述中的至少一种：(i)通过CNS神经元的死
亡来表征的神经退行性疾病，和(ii)通过至少一种CNS神经细胞功能水平相对于已知未患
所述CNS疾病的对照对象中所述CNS神经细胞功能水平的降低来表征的CNS疾病，以及iii)
通过至少一种CNS神经细胞功能水平相对于已知未患所述CNS疾病的对照对象中所述CNS神
经细胞功能水平的增加来表征的CNS疾病，其中所述CNS神经元和CNS神经细胞存在于脑、脊髓、视网膜、视神经、脑神经、嗅神经或嗅上皮中的至少一种中。
亡来表征的神经退行性疾病，和(ii)通过至少一种CNS神经细胞功能水平相对于已知未患
所述CNS疾病的对照对象中所述CNS神经细胞功能水平的降低来表征的CNS疾病，以及iii)
通过至少一种CNS神经细胞功能水平相对于已知未患所述CNS疾病的对照对象中所述CNS神
经细胞功能水平的增加来表征的CNS疾病，其中所述CNS神经元和CNS神经细胞存在于脑、脊髓、视网膜、视神经、脑神经、嗅神经或嗅上皮中的至少一种中。
[0026] 在以上所述的方法的某些实施方案中，神经系统疾病是外周神经系统(PNS)疾病，在某些实施方案中，所述外周神经系统疾病是下述中的至少一种：(i)通过PNS神经元的死
亡表征的神经退行性疾病，和(ii)通过至少一种PNS神经细胞功能水平相对于已知未患PNS
疾病的对照对象中所述PNS神经细胞功能水平的降低来表征的PNS疾病，以及iii)通过至少
一种PNS神经细胞功能水平相对于已知未患PNS疾病的对照对象中所述PNS神经细胞功能水
平的增加来表征的PNS疾病，其中所述PNS神经元和PNS神经细胞存在于外周神经节或外周
神经中的至少一种中。
亡表征的神经退行性疾病，和(ii)通过至少一种PNS神经细胞功能水平相对于已知未患PNS
疾病的对照对象中所述PNS神经细胞功能水平的降低来表征的PNS疾病，以及iii)通过至少
一种PNS神经细胞功能水平相对于已知未患PNS疾病的对照对象中所述PNS神经细胞功能水
平的增加来表征的PNS疾病，其中所述PNS神经元和PNS神经细胞存在于外周神经节或外周
神经中的至少一种中。
[0027] 在以上所述的方法的某些实施方案中，CNS注射位点位于对象的脑组织中。在某些实施方案中，CNS注射位点位于对象的脑室中。在某些实施方案中，对象中的CNS注射位点选自：(a)CNS位点，并且优选包含受神经系统疾病影响的神经细胞纤维的靶位点的CNS注射位点；(b)CNS位点，并且优选包含由于神经系统疾病而处于死亡风险下的神经元细胞的CNS注射位点；(c)CNS位点，并且优选包含处于至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述
神经系统疾病的对照对象中的所述神经细胞功能水平降低的风险下的神经元细胞的CNS注
射位点；(d)CNS位点，并且优选包含处于至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述
神经系统疾病的对照对象中的所述神经细胞功能水平增加的风险下的神经元细胞的CNS注
射位点；(e)CNS位点，并且优选被选择以使胶囊基本上不与血液接触的CNS注射位点；以及(f)CNS位点，并且优选被选择使得在施用步骤之后由胶囊分泌的CSF组分通过CSF循环遍及
对象脑进行分布的CNS注射位点。
神经系统疾病的对照对象中的所述神经细胞功能水平降低的风险下的神经元细胞的CNS注
射位点；(d)CNS位点，并且优选包含处于至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述
神经系统疾病的对照对象中的所述神经细胞功能水平增加的风险下的神经元细胞的CNS注
射位点；(e)CNS位点，并且优选被选择以使胶囊基本上不与血液接触的CNS注射位点；以及(f)CNS位点，并且优选被选择使得在施用步骤之后由胶囊分泌的CSF组分通过CSF循环遍及
对象脑进行分布的CNS注射位点。
[0028] 在以上所述的方法的某些实施方案中，施用发生在PNS位点，如PNS注射位点。在某些实施方案中，对象中的PNS注射位点选自：(a)PNS位点，并且优选包含受神经系统疾病影响的神经细胞纤维的靶位点的PNS注射位点；(b)PNS位点，并且优选包含由于神经系统疾病而处于死亡风险下的神经元细胞的PNS注射位点；(c)PNS位点，并且优选包含处于至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中的所述神经细胞功能水平降低的风险下的神经元细胞的PNS注射位点；(d)PNS位点，并且优选包含处于至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中的所述神经细胞功能
水平增加的风险下的神经元细胞的PNS注射位点；(e)PNS位点，并且优选被选择以使胶囊基本上不与血液接触的PNS注射位点；以及(f)PNS位点，并且优选被选择以使施用步骤之后由胶囊分泌的CSF组分在PNS注射位点邻近的PNS组织内或周围分布的PNS注射位点。
水平增加的风险下的神经元细胞的PNS注射位点；(e)PNS位点，并且优选被选择以使胶囊基本上不与血液接触的PNS注射位点；以及(f)PNS位点，并且优选被选择以使施用步骤之后由胶囊分泌的CSF组分在PNS注射位点邻近的PNS组织内或周围分布的PNS注射位点。
[0029] 在以上所述的方法的某些实施方案中，生物相容的胶囊包含用阳离子交联剂交联的高甘露糖醛酸海藻酸盐的核心层、形成半透膜的多聚阳离子的中间层和用阳离子交联剂
交联的高甘露糖醛酸海藻酸盐的外层，其中所述核心层和外层中的高甘露糖醛酸海藻酸盐
相同或不同，并且包含约50％至约95％甘露糖醛酸残基，其中所述多聚阳离子层不由多聚-L-赖氨酸组成。在某些其它实施方案中，高甘露糖醛酸海藻酸盐具有大于约300kDa且不超
过1000kDa的平均分子量，并且多聚阳离子层由具有10至40kDa的平均分子量的多聚阳离子
试剂形成。
交联的高甘露糖醛酸海藻酸盐的外层，其中所述核心层和外层中的高甘露糖醛酸海藻酸盐
相同或不同，并且包含约50％至约95％甘露糖醛酸残基，其中所述多聚阳离子层不由多聚-L-赖氨酸组成。在某些其它实施方案中，高甘露糖醛酸海藻酸盐具有大于约300kDa且不超
过1000kDa的平均分子量，并且多聚阳离子层由具有10至40kDa的平均分子量的多聚阳离子
试剂形成。
[0030] 在以上所述的方法的某些实施方案中，向CNS注射位点(或者在某些其它实施方案中，向PNS注射位点)施用胶囊包括通过导管递送胶囊。在某些其它实施方案中，递送包括用立体定位装置可控地定位导管。在某些其它实施方案中，立体定位装置可以包括通过示例
性阐明且非限制性的下述立体定位装置或改进的立体定位装置：脑深层刺激术(DBS)微型
推进器、“无框架”头部立体定位架、头骨安装瞄准装置、Leksell框架、Cosman-Roberts-Wells框架或者其它类似的改进的立体定位装置等。在某些实施方案中，导管包括外部导
管、芯杆(obdurator)、柱塞和递送导管。
性阐明且非限制性的下述立体定位装置或改进的立体定位装置：脑深层刺激术(DBS)微型
推进器、“无框架”头部立体定位架、头骨安装瞄准装置、Leksell框架、Cosman-Roberts-Wells框架或者其它类似的改进的立体定位装置等。在某些实施方案中，导管包括外部导
管、芯杆(obdurator)、柱塞和递送导管。
[0031] 在以上所述的方法的某些实施方案中，神经系统疾病选自：帕金森病、阿尔兹海默病，亨廷顿氏病，肌萎缩性侧索硬化(ALS)，朊病毒病，运动神经元病，脊髓小脑性共济失调，脊髓性肌萎缩，帕金森型多系统萎缩，小脑型多系统萎缩，特发性震颤，进行性核上性麻痹，运动障碍，路易体痴呆，特发性震颤，药源性帕金森综合征，共济失调毛细血管扩张，脊髓小脑性共济失调，小脑退化，大脑萎缩，橄榄体脑桥小脑萎缩，皮质基底核退化症，肌阵挛性小脑协同障碍，弗里德赖希共济失调；静态神经疾病，脑卒中，中枢性疼痛综合征，慢性疼痛，偏头痛，舌咽神经痛，癫痫发作，癫痫，大脑性麻痹；创伤相关的CNS疾病，格斯特曼综合征，闭锁综合征，脊髓损伤，进行性神经退行性疾病，与老化和痴呆相关的神经退行性疾病，阿尔兹海默病，帕金森病，额颞叶痴呆，杰茨曼-斯脱司勒-史茵克病，巨轴索神经病，遗传性神经病，幼儿神经轴索性营养不良，克拉伯病，Landau-Kleffner综合征，脊髓痨，运动神经元和神经肌肉接头疾病，脊髓性肌萎缩，肯尼迪病，单肢肌萎缩，肌张力障碍，遗传性痉挛性截瘫，艾萨克综合征，Lambert-Eaton肌无力综合征，运动神经元病，不宁腿综合征，Tourette综合征；CNS炎性疾病，多发性硬化；药物或毒素诱发的CNS疾病，神经阻滞剂恶性综合征，迟发性运动障碍，威尔森氏病，神经中毒；代谢衰竭的神经系统疾病，Refsum病，神经系统感染性疾病，脑膜炎，急性播散性脑脊髓炎，格林-巴利综合征，AIDS神经系统并发症，肉毒中毒，破伤风，神经梅毒，脊髓灰质炎，狂犬病，HIV/AIDS，朊病毒病，福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)(阿米巴脑部感染)；囊虫病；神经精神疾病，抑郁症，情绪障碍；强迫症，进食障碍，成瘾，焦虑相关障碍，双相障碍，注意缺陷多动障碍，孤独症，精神分裂症；神经内分泌病，嗜眠发作，失眠，与神经元死亡、谷氨酸毒性、蛋白聚集或沉积或者淀粉样斑块形成中的一种或多种相关或以其为表征的疾病，脑淀粉样血管病，冰岛型遗传性脑出血伴
淀粉样变性病(HCHWA-I)，荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)，脑膜脑血管和眼软脑
膜淀粉样变性，凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病，芬兰型家族性淀粉样变性
(FAF)，朊蛋白血管变体脑淀粉样变性，家族性英国痴呆(FBD)(也被称为英国型家族性脑淀粉样血管病或英国型脑血管淀粉样变性)，家族性丹麦痴呆(也被称为眼耳脑遗传病)，家族性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性，PrP脑淀粉样血管病(PrP-CAA)；线粒体功能障碍的神经系统疾病，包括活性氧(ROS)产生水平超过正常健康对照对象中发现的ROS产生水平的线
粒体功能障碍的神经系统疾病；脑原性神经营养因子相关的病症，双相障碍，Rett综合征以及Rubinstein-Taybi综合征。
淀粉样变性病(HCHWA-I)，荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)，脑膜脑血管和眼软脑
膜淀粉样变性，凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病，芬兰型家族性淀粉样变性
(FAF)，朊蛋白血管变体脑淀粉样变性，家族性英国痴呆(FBD)(也被称为英国型家族性脑淀粉样血管病或英国型脑血管淀粉样变性)，家族性丹麦痴呆(也被称为眼耳脑遗传病)，家族性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性，PrP脑淀粉样血管病(PrP-CAA)；线粒体功能障碍的神经系统疾病，包括活性氧(ROS)产生水平超过正常健康对照对象中发现的ROS产生水平的线
粒体功能障碍的神经系统疾病；脑原性神经营养因子相关的病症，双相障碍，Rett综合征以及Rubinstein-Taybi综合征。
[0032] 转向另一实施方案，提供了治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的脉络丛(CP)组织碎片，所述组织碎片通过进行哺乳动物脉络丛组织的机械和酶解分离中的一种或两种获得，
从而获得直径约50μm至约200μm并且包含CP上皮细胞的CP细胞簇，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊含有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个外周神经系统(PNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个PNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述施用步骤(b)之前，同时或之后，使所述一个或多个胶囊中的脉络丛组织细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导脉络丛组织细胞产生一
种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在无接触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生
的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
从而获得直径约50μm至约200μm并且包含CP上皮细胞的CP细胞簇，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊含有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个外周神经系统(PNS)注射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个PNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述施用步骤(b)之前，同时或之后，使所述一个或多个胶囊中的脉络丛组织细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导脉络丛组织细胞产生一
种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在无接触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生
的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
[0033] 在某些其它实施方案中，提供了治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其包括：(a)选择一个或多个半透性生物相容的胶囊，其内是封装的体外分化的脉络丛(CP)细胞，所述细胞通过在一定条件下培养多能细胞群一段时间以足以获得多个体外
分化的脉络丛(CP)细胞而获得，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个外周神经系统(PNS)注
射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个PNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述步骤(b)的施用之前，在施用的同时或者在施用之后，使所述一个或多个胶囊中
的体外分化的脉络丛(CP)细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导所述体外分化的脉络
丛(CP)细胞释放一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在所述接触步骤之前脉络
丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
分化的脉络丛(CP)细胞而获得，基本上所有所述胶囊的直径均为约400μm至约800μm，并且每个胶囊具有约200至约10,000个CP细胞；(b)向所述对象中的一个外周神经系统(PNS)注
射位点或者2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个PNS注射位点施用一个或多个所述胶囊；以及(c)在所述步骤(b)的施用之前，在施用的同时或者在施用之后，使所述一个或多个胶囊中
的体外分化的脉络丛(CP)细胞与脉络丛诱导剂接触，所述诱导剂诱导所述体外分化的脉络
丛(CP)细胞释放一种或多种脑脊髓液(CSF)组分，其水平相对于在所述接触步骤之前脉络
丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水平是改变的。
[0034] 在某些其它实施方案中，脉络丛诱导剂诱导一种或多种CSF组分的产生，其水平高于在无接触步骤的情况下脉络丛组织细胞产生的所述一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的水
平。
平。
[0035] 通过参考下述详细描述和附图，本文所述的本发明的实施方案的这些和其它方面是明显的。将本说明书中引用的和/或申请数据表中列出的所有美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国(非美国)专利、外国专利申请以及非专利出版物通过引用整体并入本文，如同将其各自单独并入。如果需要，可对本发明的方面和实施方案进行改进，以利用不同专利、申请和出版物的概念来提供其它实施方案。
[0036] 附图若干视图的简要描述
[0037] 图1显示了与如本文所述选择的包含海藻酸盐封装的猪脉络丛(CP)细胞的胶囊相比，包含海藻酸盐封装的猪脉络丛(CP)细胞的胶囊的随机样本(非选择的)体外分泌的培养
基中的VEGF(pg VEGF/μg DNA)。
基中的VEGF(pg VEGF/μg DNA)。
[0038] 图2显示了通过暴露于所示的候选CP诱导剂72小时刺激的猪脉络丛(CP)细胞簇的总抗氧化能力(TAC)。
[0039] 图3显示了(图3A)通过暴露于所示浓度的氯化锂(LiCl)72小时刺激的猪脉络丛(CP)细胞簇的总抗氧化能力(TAC)，其用培养基对照数值进行归一化。图3B显示了通过暴露于所示浓度的氯化锂(LiCl)、碳酸锂、牛磺酸和mitoquinol 72小时刺激的封装
的猪脉络丛(CP)细胞簇的总抗氧化能力(TAC)。
的猪脉络丛(CP)细胞簇的总抗氧化能力(TAC)。
[0040] 图4显示了植入所选海藻酸盐封装的CP细胞12(图4A)或16(图4B)个月的大鼠脑部代表性组织学切片中PEDF(色素上皮衍生因子，小箭头)的免疫过氧化物酶染色，指示胶囊
内的CP细胞体内存活16个月，同时维持CP功能特征。胶囊壁(大箭头)显示无纤维化疤痕形
成或细胞免疫应答的迹象。
内的CP细胞体内存活16个月，同时维持CP功能特征。胶囊壁(大箭头)显示无纤维化疤痕形
成或细胞免疫应答的迹象。
[0041] 图5(A-KK)显示了公开于美国申请公开第US/2014/0187510号中的示例性的β-连环蛋白活化剂。
[0042] 图6(A-C)显示了示例性的体外CP分化剂。
[0043] 图7(A-J)显示了可以作为CSF组分出现的示例性的CP产物。
[0044] 图8(A-K)显示了示例性CSF组分编码基因，其表达在通过暴露于诱导剂(LiCl)72小时刺激的脉络丛(CP)细胞簇中是改变的(例如，以统计学显著的方式相对于对照增加
(8A-E)或降低(8F-K))。
(8A-E)或降低(8F-K))。
[0045] 详细描述
[0046] 在如本文所述的某些实施方案中，本发明涉及治疗神经系统疾病或病症，包括神经退行性疾病和其它神经疾病的的组合物和方法。
[0047] 这些和相关的实施方案基于下述出人意料的发现：可以通过与本文提供的脉络丛诱导剂接触来诱导哺乳动物脉络丛细胞，特别是适当选择的包含非免疫原性的封装的异种
和/或同种异体脉络丛(CP)细胞的中枢神经系统植入物，以产生水平改变的，以及在某些优选实施方案中水平增加的一种或多种脑脊髓液(CSF)组分。封装的异种移植的(和/或同种
异体移植的)脉络丛细胞在植入中枢神经系统位点(例如，脑组织)之后令人惊讶地长期存
活，并且其优选包含获自基本上没有人类病原体的供体哺乳动物的异种和/或同种异体脉
络丛细胞。本发明的实施方案有利地增加了脉络丛细胞异种移植物和/或同种异体移植物
的效能和效力，同时降低了所需的植入位点和植入胶囊的数目；优选的实施方案还降低了
病原体传播至受体的风险。
和/或同种异体脉络丛(CP)细胞的中枢神经系统植入物，以产生水平改变的，以及在某些优选实施方案中水平增加的一种或多种脑脊髓液(CSF)组分。封装的异种移植的(和/或同种
异体移植的)脉络丛细胞在植入中枢神经系统位点(例如，脑组织)之后令人惊讶地长期存
活，并且其优选包含获自基本上没有人类病原体的供体哺乳动物的异种和/或同种异体脉
络丛细胞。本发明的实施方案有利地增加了脉络丛细胞异种移植物和/或同种异体移植物
的效能和效力，同时降低了所需的植入位点和植入胶囊的数目；优选的实施方案还降低了
病原体传播至受体的风险。
[0048] 因此，根据本发明包含脉络丛细胞的胶囊的适当选择和诱导，包括胶囊的组成和大小，其内包含的细胞的来源、制备和数目，以及改变且对于某些优选的CSF组分，增加CP细胞的CSF组分的产生的脉络丛诱导剂的使用，代表用于治疗神经系统疾病的CP封装的新的
且有用的改进，该改进无法从本领域先前的知识中预期到。
且有用的改进，该改进无法从本领域先前的知识中预期到。
[0049] 如本文首次公开的，在将所选择的封装的异种和/或同种异体脉络丛(CP)细胞与脉络丛诱导剂接触之后，此类细胞可以产生水平改变(例如，相对于与CP诱导剂接触之前或者在不存在与CP诱导剂接触的情况下，以统计学显著的方式增加或降低)的一种或多种CSF
组分，并且对于某些优选的CSF组分，其水平高于在不与脉络丛诱导剂接触的情况下异种移植的和/或同种异体移植的CP细胞产生的CSF组分的水平。
组分，并且对于某些优选的CSF组分，其水平高于在不与脉络丛诱导剂接触的情况下异种移植的和/或同种异体移植的CP细胞产生的CSF组分的水平。
[0050] 令人惊讶地，可以利用植入之后长于2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、20、24或更多个月在半透性胶囊中仍然具有活力的CP细胞来实现下述效果：诱导中枢神经系统(CNS)中(或者，在某些实施方案中，外周神经系统(PNS)中)所选择的包含异种和/或同种异体脉络丛(CP)细胞的封装的植入物产生此种增加水平(例如，以统计学显著的方式
高于未诱导的水平)的CSF，基本上不引发局部免疫反应或炎症反应，如包含CP细胞的胶囊
的免疫排斥、胶囊上宿主细胞外基质沉积或者针对胶囊的异物应答。
高于未诱导的水平)的CSF，基本上不引发局部免疫反应或炎症反应，如包含CP细胞的胶囊
的免疫排斥、胶囊上宿主细胞外基质沉积或者针对胶囊的异物应答。
[0051] 具体地，本文公开内容首次描述了本文提供的脉络丛诱导剂对如本文所述选择的封装的CP细胞的直接作用，改变编码已知CSF组分的基因(如例如图8中所示)的表达水平，
包括增加CP细胞产生在CNS中具有有利影响(如神经保护)的某些CSF组分。因此，以通过使
用本公开所述的脉络丛诱导剂来实现增加的CSF产生的有益效果，并且可将其用于治疗多
种神经系统疾病或病症，或者其中改变的，以及在某些优选实施方案中增加的一种或多种
CSF组分的产生是期望的其它病况中的任何一种。例如，通过阐明且非限制性地，可将本文公开的实施方案用于治疗某些CNS病症，所述CNS病症通过低于正常水平、不足或者次优水
平的一种或多种CSF组分和/或通过一种或多种CNS活性缺陷(如可能由于衰老过程、暴露于
毒素或者疾病导致的CNS活性缺陷，以及可以通过增加的CSF产生至少部分恢复的CNS活性
缺陷)来表征。
包括增加CP细胞产生在CNS中具有有利影响(如神经保护)的某些CSF组分。因此，以通过使
用本公开所述的脉络丛诱导剂来实现增加的CSF产生的有益效果，并且可将其用于治疗多
种神经系统疾病或病症，或者其中改变的，以及在某些优选实施方案中增加的一种或多种
CSF组分的产生是期望的其它病况中的任何一种。例如，通过阐明且非限制性地，可将本文公开的实施方案用于治疗某些CNS病症，所述CNS病症通过低于正常水平、不足或者次优水
平的一种或多种CSF组分和/或通过一种或多种CNS活性缺陷(如可能由于衰老过程、暴露于
毒素或者疾病导致的CNS活性缺陷，以及可以通过增加的CSF产生至少部分恢复的CNS活性
缺陷)来表征。
[0052] CP诱导剂
[0053] 因此以及在某些实施方案中，尽管本领域常规理解CSF在CNS中组成型产生，本文公开内容部分涉及下述令人惊讶的发现：如本文所述的CP诱导剂可以诱导CP细胞增加某些
CSF组分的产生，并且还可以诱导降低的某些其它CSF组分的产生(例如图8)。因此在不意图受理论的束缚的情况下，认为通过作用于CP细胞，以促进某些CSF组分(如神经保护性组分)的更高产生水平，本发明的CP诱导剂允许植入比之前认为的可能达到此类CP细胞的治疗有
效量的CP细胞更少的封装的异种移植和/或同种异体移植的CP细胞。此外，根据非限制性理论，因为诱导的CP细胞异种移植物和/或同种异体移植物产生CSF组分，本发明的方法通过
避免对在更多数目的CNS植入位点处更多数目的植入胶囊的需求以及还通过避免对全身施
用更高剂量的CP诱导剂的需求，提供前所未有的效力和安全性，所述CP诱导剂的效果可以
通过其与其它细胞类型的相互作用以其它方式抵消或稀释。
CSF组分的产生，并且还可以诱导降低的某些其它CSF组分的产生(例如图8)。因此在不意图受理论的束缚的情况下，认为通过作用于CP细胞，以促进某些CSF组分(如神经保护性组分)的更高产生水平，本发明的CP诱导剂允许植入比之前认为的可能达到此类CP细胞的治疗有
效量的CP细胞更少的封装的异种移植和/或同种异体移植的CP细胞。此外，根据非限制性理论，因为诱导的CP细胞异种移植物和/或同种异体移植物产生CSF组分，本发明的方法通过
避免对在更多数目的CNS植入位点处更多数目的植入胶囊的需求以及还通过避免对全身施
用更高剂量的CP诱导剂的需求，提供前所未有的效力和安全性，所述CP诱导剂的效果可以
通过其与其它细胞类型的相互作用以其它方式抵消或稀释。
[0054] 此外，根据本公开，之前认为通过对神经元的直接作用而具有神经保护效果的试剂在此出人意料地显示作为CP诱导剂有利地发挥作用。如本文所提供的CP诱导剂包括当与
CP组织细胞接触时能够诱导CP细胞改变(例如，相对于未引入CP诱导剂时的对照情况，以统计学显著的方式增加或降低)，以及在某些优选实施方案中，增加CSF组分的产生，即通过诱导CP细胞产生增加水平的(例如，以统计学显著的方式高于在未引入CP诱导剂的情况下产
生的那些水平)一种或多种CSF组分的任何试剂。然后，CSF组分(例如，其代表性的实例公开于图7和8中)可以为神经元提供保护作用和/或可以产生治疗神经系统疾病的其它有益效
果。但是，本文考虑的实施方案不意图限制于此，因此还考虑这样的实施方案：其中使CP细胞与CP诱导剂接触可以诱导CP细胞降低CSF组分的产生，即通过诱导CP细胞产生降低水平
(例如，以统计学显著的方式低于在未引入CP诱导剂的情况下产生的那些水平)的一种或多
种CSF组分，并因此为正在进行治疗的对象提供临床益处。
CP组织细胞接触时能够诱导CP细胞改变(例如，相对于未引入CP诱导剂时的对照情况，以统计学显著的方式增加或降低)，以及在某些优选实施方案中，增加CSF组分的产生，即通过诱导CP细胞产生增加水平的(例如，以统计学显著的方式高于在未引入CP诱导剂的情况下产
生的那些水平)一种或多种CSF组分的任何试剂。然后，CSF组分(例如，其代表性的实例公开于图7和8中)可以为神经元提供保护作用和/或可以产生治疗神经系统疾病的其它有益效
果。但是，本文考虑的实施方案不意图限制于此，因此还考虑这样的实施方案：其中使CP细胞与CP诱导剂接触可以诱导CP细胞降低CSF组分的产生，即通过诱导CP细胞产生降低水平
(例如，以统计学显著的方式低于在未引入CP诱导剂的情况下产生的那些水平)的一种或多
种CSF组分，并因此为正在进行治疗的对象提供临床益处。
[0055] 例如，以及如在本文别处包括在实施例中更加详细描述的(例如，图8)，本文首次显示碱金属锂是脉络丛诱导剂，其诱导CP细胞产生水平相对于在与锂(例如，作为氯化锂
(LiCl)或碳酸锂)接触之前CP细胞产生的某些CSF组分的水平增加的所述CSF组分(图8A-
E)，同时还诱导某些其它CSF组分相对于在与锂接触之前CP细胞产生的CSF组分水平的降低
(图8F-K)的表达。
(LiCl)或碳酸锂)接触之前CP细胞产生的某些CSF组分的水平增加的所述CSF组分(图8A-
E)，同时还诱导某些其它CSF组分相对于在与锂接触之前CP细胞产生的CSF组分水平的降低
(图8F-K)的表达。
[0056] 锂长期以来被认为是提供神经保护效果的试剂，尽管其作用位点和机制未完全理解。通过非限制性理论，锂被认为至少部分作为糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)的抑制剂，以及通过间接抑制N-甲基-D-天冬氨酸盐(NMDA)-受体-介导的神经元中的钙流入发挥作用(例
如，Chiu等人，2011Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban 36(6):461(PMID 21743136)；
Chiu等人，2010Pharmacol.Ther.128:281；Rowe等人，2004Expert Rev.Mol.Med.6:1)，基于此，考虑其作为目前在治疗双向情绪障碍中的临床应用以及其在治疗多种CNS损伤和神经
退行性疾病中的建议用途基础的神经保护作用(Id.)。
如，Chiu等人，2011Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban 36(6):461(PMID 21743136)；
Chiu等人，2010Pharmacol.Ther.128:281；Rowe等人，2004Expert Rev.Mol.Med.6:1)，基于此，考虑其作为目前在治疗双向情绪障碍中的临床应用以及其在治疗多种CNS损伤和神经
退行性疾病中的建议用途基础的神经保护作用(Id.)。
[0057] CNS中的锂活性与其对神经元和CNS电解质转运(包括通过脉络丛(CP)的电解质转运)的影响相关，但是在本文首次公开该影响之前，还未认识到锂对CP增加的CSF组分的产
生的影响。例如，Pulford等人(2006Neuropsychiatr.Dis.Treat.2(4):549)描述了锂诱导
的大鼠CP中主要CSF组分转甲状腺素蛋白的下调，模拟了临床抑郁症中检测到的降低的转
甲状腺素蛋白水平。但是，根据此类观察并且考虑到对锂的神经保护机制或CP调节的认识
的普遍缺乏，不能预期如本文所公开的本发明所述的锂诱导的CP细胞某些CSF组分产生的
增加。
生的影响。例如，Pulford等人(2006Neuropsychiatr.Dis.Treat.2(4):549)描述了锂诱导
的大鼠CP中主要CSF组分转甲状腺素蛋白的下调，模拟了临床抑郁症中检测到的降低的转
甲状腺素蛋白水平。但是，根据此类观察并且考虑到对锂的神经保护机制或CP调节的认识
的普遍缺乏，不能预期如本文所公开的本发明所述的锂诱导的CP细胞某些CSF组分产生的
增加。
[0058] 因此，某些实施方案考虑可以包含任何合适的锂盐，即包含阳离子锂并且可以无毒性或者以最小毒性与细胞接触的锂化合物的CP诱导剂，例如，氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者对于相关领域技术人员而言可能是已知的的任何其它锂盐。
[0059] 类似地，本文提供的其它CP诱导剂出乎意料地诱导CP细胞产生增加水平的CSF组分，并且根据某些实施方案可以用于增强本文所述的封装的CP植入物的效能。考虑的CP诱
导剂包括Wnt信号传导通路激动剂、β-连环蛋白活化剂、抗氧化剂和1,25-二羟维生素D3。
Wnt信号传导通路激动剂在本领域是已知的，并且包括例如，WAY-316606(Bodine等人，
2009Bone 44:1063；SFRP抑制剂，5-(苯磺酰基)-N-4-哌啶基-2-(三氟甲基)苯磺酰胺盐酸
盐，商品号4767，可获自Tocris Bioscience,Bristol,UK)、IQ1(Miyabayashi等人，
2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:5668；PP2A活化剂)、QS11(Zhang等人，
2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:7444；ARFGAP1活化剂)、(异)芳基嘧啶或者2-氨基-4-
[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin(例如，Ohlmann等人，
2012Pr og.Retin Eye Res.31:243；Rey等人，2010Dev.Dyn 239:102；
erratum2010Dev.Dyn.239:1034；GenBank登录号NM_000266)、R-spondin-1(例如，Peng等
人，013Cell Rep.3:1885；GenBank登录号NM_001038633；NM_001242910.1)、R-spondin-2(例如，GenBank登录号NM_178565；NM_178565.4；NM_001282863.1)、R-spondin-3(例如，GenBank登录号NM_032784)以及R-spondin-4(例如，GenBank登录号NM_001029871.3)。还参见例如，Dodge等人，2011Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.51:289；Chen等人，
2010Am.J.Physiol.Gastrointest.Liv.Physiol.299:G293；Barker等人，
2006Nat.Rev.Drug Discov.5:997；Meijer等人，2004Trends Pharmacol.Sci.25:471；网址为URL:web.stanford.edu/gr oup/nusselab/cgi-bin/wnt/smallmolecules的
Dr.R.Nusse,Stanford Uni v.,Palo Alto,CA实验室的网站。
导剂包括Wnt信号传导通路激动剂、β-连环蛋白活化剂、抗氧化剂和1,25-二羟维生素D3。
Wnt信号传导通路激动剂在本领域是已知的，并且包括例如，WAY-316606(Bodine等人，
2009Bone 44:1063；SFRP抑制剂，5-(苯磺酰基)-N-4-哌啶基-2-(三氟甲基)苯磺酰胺盐酸
盐，商品号4767，可获自Tocris Bioscience,Bristol,UK)、IQ1(Miyabayashi等人，
2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:5668；PP2A活化剂)、QS11(Zhang等人，
2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:7444；ARFGAP1活化剂)、(异)芳基嘧啶或者2-氨基-4-
[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin(例如，Ohlmann等人，
2012Pr og.Retin Eye Res.31:243；Rey等人，2010Dev.Dyn 239:102；
erratum2010Dev.Dyn.239:1034；GenBank登录号NM_000266)、R-spondin-1(例如，Peng等
人，013Cell Rep.3:1885；GenBank登录号NM_001038633；NM_001242910.1)、R-spondin-2(例如，GenBank登录号NM_178565；NM_178565.4；NM_001282863.1)、R-spondin-3(例如，GenBank登录号NM_032784)以及R-spondin-4(例如，GenBank登录号NM_001029871.3)。还参见例如，Dodge等人，2011Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.51:289；Chen等人，
2010Am.J.Physiol.Gastrointest.Liv.Physiol.299:G293；Barker等人，
2006Nat.Rev.Drug Discov.5:997；Meijer等人，2004Trends Pharmacol.Sci.25:471；网址为URL:web.stanford.edu/gr oup/nusselab/cgi-bin/wnt/smallmolecules的
Dr.R.Nusse,Stanford Uni v.,Palo Alto,CA实验室的网站。
[0060] 在某些实施方案中，脉络丛诱导剂(CP诱导剂)可以是GSK3β抑制剂，例如诸如氯化锂或碳酸锂的锂盐或者任何合适的锂盐，即包含阳离子锂并且可以无毒性或者以最小毒性与细胞接触的锂化合物，例如，氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者对于相关领域技术人员而言可能是已知的的任何其它锂盐。
[0061] 在某些实施方案中，脉络丛诱导剂(CP诱导剂)可以是另一GSK3β抑制剂，如SB-216763(Coghlan等人，2000Chem.Biol.7:793)或BIO(6-溴靛玉红-3’-肟；Sato等人，
2004Nat.Med.10:55)。
2004Nat.Med.10:55)。
[0062] 在某些考虑的实施方案中包括但在某些其它考虑的实施方案中明确排除的是，脉络丛诱导剂(CP诱导剂)可以是抗氧化剂，如mitoquinol(例如，10-(6’-泛醌基)癸基三苯基鏻盐，Nierobisz等人，2010Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol.158(2):125，可根据商标 获自Antipodean Pharmaceuticals,Inc.,Auckland,NZ，或者WO/05/
019232、美国专利第7,888,335号、WO/05/019233或美国专利第7,888,334号中公开的任何
其它线粒体靶向的抗氧化剂)、泛醇(辅酶Q,Wang等人，2013Crit Rev Biochem Mol
Biol.48(1):69)、生育酚、生育三烯酚(维生素E,Traber等人，2011Free Radic Biol
Med.51(5):1000)、α-生育酚、γ-生育酚、2-氨基乙磺酸(牛磺酸)、抗坏血酸、谷胱甘肽或者褪黑激素。
019232、美国专利第7,888,335号、WO/05/019233或美国专利第7,888,334号中公开的任何
其它线粒体靶向的抗氧化剂)、泛醇(辅酶Q,Wang等人，2013Crit Rev Biochem Mol
Biol.48(1):69)、生育酚、生育三烯酚(维生素E,Traber等人，2011Free Radic Biol
Med.51(5):1000)、α-生育酚、γ-生育酚、2-氨基乙磺酸(牛磺酸)、抗坏血酸、谷胱甘肽或者褪黑激素。
[0063] 在某些考虑的实施方案中包括但在某些其它考虑的实施方案中明确排除的是，脉络丛诱导剂(CP诱导剂)可以是β-连环蛋白活化剂，如脱氧胆酸(DCA)或者本文图5中所列的任何化合物集，该化合物公开于公开号为US2014/0187510的美国申请中。
[0064] 在某些考虑的实施方案中包括但在某些其它考虑的实施方案中明确排除的是，脉络丛诱导剂(CP诱导剂)可以是牛磺酸(图3b)。牛磺酸或2-氨基乙磺酸是氨基酸半胱氨酸的
衍生物。尽管已知牛磺酸在神经系统的发育和功能中具有重要作用(例如，Gebara等人，
2015Stem Cell Res.14(3):369；Shivaraj等人，2012PLoS One 7(8):e42935；Xu等人，
2015Neurosci Lett.590:52；El Idrissi等人，2013Amino Acids 45(4):735；Jong等人，
2012Amino Acids 42(6):2223；Schaffer等人，2009Can J Physiol Pharmacol.87(2):91)Gebara等人，2015；Shivaraj等人，2012；Xu等人，2015；El Idrissi等人2013)，在本文公开内容之前，其对CP功能的影响(包括如本文所提供的其作为CP诱导剂的活性)未被描述。
衍生物。尽管已知牛磺酸在神经系统的发育和功能中具有重要作用(例如，Gebara等人，
2015Stem Cell Res.14(3):369；Shivaraj等人，2012PLoS One 7(8):e42935；Xu等人，
2015Neurosci Lett.590:52；El Idrissi等人，2013Amino Acids 45(4):735；Jong等人，
2012Amino Acids 42(6):2223；Schaffer等人，2009Can J Physiol Pharmacol.87(2):91)Gebara等人，2015；Shivaraj等人，2012；Xu等人，2015；El Idrissi等人2013)，在本文公开内容之前，其对CP功能的影响(包括如本文所提供的其作为CP诱导剂的活性)未被描述。
[0065] 如本文所述，本文公开的CP诱导剂诱导CP细胞改变(例如，增加或降低，以及在某些优选实施方案中增加)一种或多种CSF组分的产生(包括编码基因的表达、生物合成、分
泌、输出、转运和/或释放入细胞外环境)，其水平不同于(即以统计学显著的方式)在不与CP诱导剂接触的情况下CP细胞产生此类CSF组分的水平，在某些优选实施方案中，该水平将高于省略使CP细胞与CP诱导剂接触这一步骤时的产生水平。熟悉该领域的人员将会认识到，
CP细胞产生的CSF组分包含大量限定的且表征良好的肽、蛋白以及其它生物活性物质(例
如，Redzic等人，2005Curr.Topics Dev.Biol.71:1；参见，例如图7)，其具有可以利用已建立的技术和常规方法进行检测的限定的化学结构。
泌、输出、转运和/或释放入细胞外环境)，其水平不同于(即以统计学显著的方式)在不与CP诱导剂接触的情况下CP细胞产生此类CSF组分的水平，在某些优选实施方案中，该水平将高于省略使CP细胞与CP诱导剂接触这一步骤时的产生水平。熟悉该领域的人员将会认识到，
CP细胞产生的CSF组分包含大量限定的且表征良好的肽、蛋白以及其它生物活性物质(例
如，Redzic等人，2005Curr.Topics Dev.Biol.71:1；参见，例如图7)，其具有可以利用已建立的技术和常规方法进行检测的限定的化学结构。
[0066] 例如，图7(图7A-7J)中列出了编码多种CSF组分(其为肽或蛋白)的多核苷酸序列和此类肽和蛋白的编码氨基酸序列的公共数据库(例如， National Center
for Biotechnology Information,National Institutes of Health,Bethesda,MD)登录
号。因此，可以通过多种方法中的任何方法来实现CP细胞一种或多种特定CSF组分的产生的测定，如经基于核酸杂交的技术通过检测编码CSF组分的基因的表达，例如通过编码CSF组
分的RNA序列的聚合酶链式反应(PCR)扩增(例如，Wang等人，2009Nat.Rev.Genet.10(1):
57)，和/或通过编码CSF组分的RNA或cDNA与探针序列阵列中存在的互补寡核苷酸或多核苷
酸序列杂交(例如， 阵列,Affymetrix,Santa Clara,CA)，和/或通过经RNA
测序(或“RNA-seq”，例如利用经合成(SBS)化学的Illumina测序的下一代测序(NGS)，
Illumina,Inc.,San Diego,CA)鉴定编码CSF组分的转录产物(Bentley等人，2008Nature,
456:53)和/或通过原位杂交(例如，Yin等人，1998Brain Res.783:347；Swanger等人，
2011Meths.Mol.Biol.714:103)或者通过本领域已知的用于测定特定核酸序列，如编码本
文提供的任何CSF组分的任何一种或多种RNA序列或其对应的DNA序列的全部或部分(例如，
图7和8中提供的)的存在的其它核酸检测技术。
for Biotechnology Information,National Institutes of Health,Bethesda,MD)登录
号。因此，可以通过多种方法中的任何方法来实现CP细胞一种或多种特定CSF组分的产生的测定，如经基于核酸杂交的技术通过检测编码CSF组分的基因的表达，例如通过编码CSF组
分的RNA序列的聚合酶链式反应(PCR)扩增(例如，Wang等人，2009Nat.Rev.Genet.10(1):
57)，和/或通过编码CSF组分的RNA或cDNA与探针序列阵列中存在的互补寡核苷酸或多核苷
酸序列杂交(例如， 阵列,Affymetrix,Santa Clara,CA)，和/或通过经RNA
测序(或“RNA-seq”，例如利用经合成(SBS)化学的Illumina测序的下一代测序(NGS)，
Illumina,Inc.,San Diego,CA)鉴定编码CSF组分的转录产物(Bentley等人，2008Nature,
456:53)和/或通过原位杂交(例如，Yin等人，1998Brain Res.783:347；Swanger等人，
2011Meths.Mol.Biol.714:103)或者通过本领域已知的用于测定特定核酸序列，如编码本
文提供的任何CSF组分的任何一种或多种RNA序列或其对应的DNA序列的全部或部分(例如，
图7和8中提供的)的存在的其它核酸检测技术。
[0067] 此外或者可选地，可以通过检测包含此类CSF组分的肽、蛋白或者相关电解质、代谢物或分解代谢物来实现CP细胞一种或多种特定CSF组分(例如，图7或8中的组分)的产生
的测定，例如通过特定的免疫化学、生物化学或者放射化学分析或者通过其他可检测的指
示物部分，通过液相色谱法和/或质谱法(例如，Holtta等人，2015J.Proteome Res.14:654；
Chiasserini等人，2014J.Proteomics 106:191；Naureen等人，2014ChildsNerv.Syst.30:
1155；Davidsson等人，2005Dis.Markers 21:81；Aluise等人，2008Biochim.Biophys.Acta
1782:549；Bonk等人，2001Neuroscientist 7:6；Casado等人，2014Electrophoresis 35:
1181)，通过功能性磁共振成像(fMRI，例如，Jasanoff,2007Curr.Opin.Neurobiol.17:593；
Bell等人，2000Gene Therap.7:1259)等，或者通过其他可应用的检测技术。CSF组分还描述于，例如R.A.Fishman,Cerebrospinal in Diseases of the Nervous System,
W.B.Saunders,Philadelphia,PA,1980；Cutler等人，1982Ann.Neurol.11:1以及Hershey等人，1980Ann.Neurol.8:426中。
的测定，例如通过特定的免疫化学、生物化学或者放射化学分析或者通过其他可检测的指
示物部分，通过液相色谱法和/或质谱法(例如，Holtta等人，2015J.Proteome Res.14:654；
Chiasserini等人，2014J.Proteomics 106:191；Naureen等人，2014ChildsNerv.Syst.30:
1155；Davidsson等人，2005Dis.Markers 21:81；Aluise等人，2008Biochim.Biophys.Acta
1782:549；Bonk等人，2001Neuroscientist 7:6；Casado等人，2014Electrophoresis 35:
1181)，通过功能性磁共振成像(fMRI，例如，Jasanoff,2007Curr.Opin.Neurobiol.17:593；
Bell等人，2000Gene Therap.7:1259)等，或者通过其他可应用的检测技术。CSF组分还描述于，例如R.A.Fishman,Cerebrospinal in Diseases of the Nervous System,
W.B.Saunders,Philadelphia,PA,1980；Cutler等人，1982Ann.Neurol.11:1以及Hershey等人，1980Ann.Neurol.8:426中。
[0068] CSF组分
[0069] 脑脊髓液(CSF)在中枢神经系统(CNS)中由脉络丛上皮细胞产生，脉络丛上皮细胞是内衬于脑室的特化的室管膜细胞，值得注意的是它们极化为具有多个电解质转运通道的
底外侧和顶膜结构域，以及它们的组成型CSF分泌活性。CSF包含CSF分子组分的复杂混合
物，其可以包含但不限于：电解质，抗氧化剂，代谢物，媒介物和蛋白，可变地包括多种生长因子、趋化因子、伴侣蛋白、载脂蛋白、免疫球蛋白、血红蛋白、酶、防御素、组蛋白、角蛋白以及其它细胞骨架相关蛋白。
底外侧和顶膜结构域，以及它们的组成型CSF分泌活性。CSF包含CSF分子组分的复杂混合
物，其可以包含但不限于：电解质，抗氧化剂，代谢物，媒介物和蛋白，可变地包括多种生长因子、趋化因子、伴侣蛋白、载脂蛋白、免疫球蛋白、血红蛋白、酶、防御素、组蛋白、角蛋白以及其它细胞骨架相关蛋白。
[0070] 对CSF组成，包括CSF蛋白质组进行了广泛表征，并且描述了与多种病理相关的生物标志物(例如，Bora等人，2012J.Proteome Res.11:3143；Whitin等人，2012PLoS One 7(11):e49724；Perrin等人，2013PLoS One8(5):364314；Naureen等人，2013Fluid Barriers CNS 10:34；Fraisier等人，2014PLoS One 9(4):e93637)。
[0071] 因此，一种或多种CSF组分的定量表示中相关改变(例如，统计学显著的增加或降低)的检测对于熟悉本领域的人而言是已知的，例如在包含获自人或动物组织的CSF，并且
还包含来自能够产生CSF并且已在一定条件下体外维持一段时间以足以产生CSF或者一种
或多种CSF组分的细胞(例如，CP细胞)或组织(例如，CP组织或组织碎片)的上清液或条件化培养基等的生物样本中。因此并且考虑到本公开内容，可以通过使用现有的方法常规测定
在针对通过CP诱导剂的诱导的应答中，改变的(例如，相对于合适的对照，以统计学显著的方式增加或降低)，以及对于某些优选CSF组分而言，增加的CP组织细胞一种或多种CSF组分的产生。
还包含来自能够产生CSF并且已在一定条件下体外维持一段时间以足以产生CSF或者一种
或多种CSF组分的细胞(例如，CP细胞)或组织(例如，CP组织或组织碎片)的上清液或条件化培养基等的生物样本中。因此并且考虑到本公开内容，可以通过使用现有的方法常规测定
在针对通过CP诱导剂的诱导的应答中，改变的(例如，相对于合适的对照，以统计学显著的方式增加或降低)，以及对于某些优选CSF组分而言，增加的CP组织细胞一种或多种CSF组分的产生。
[0072] 根据某些实施方案，考虑如本文所提供的脉络丛诱导剂可以诱导CP组织细胞或者体外分化的CP细胞产生水平改变的(例如，相对于对照，以统计学显著的方式增加或降低
的)，以及在某些优选实施方案中，水平增加的一种或多种CSF组分，如图7和/或8中列出的CP产物和/或CSF组分，并且其包括下述中的一种或多种：
的)，以及在某些优选实施方案中，水平增加的一种或多种CSF组分，如图7和/或8中列出的CP产物和/或CSF组分，并且其包括下述中的一种或多种：
[0073] 生长因子，其可以是：IGF-1、IGF-II、FGF-1、bFGF(FGF-2)、FGF-9、FGF-12、FGF-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、VEGF、VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C/VEGF-2、EGF、生长激素(GH)、BMP-1、BMP-2、BMP-4、BMP-7、BMP-11、BMP-15、GDF-1、GDF-7、GDF-8、GDF-9、GDF-10、GDF-11、神经生长因子(NGF)、PEDF(色素上皮衍生因子、也被称为SerpinF1)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、IGF2、BDNF、NT-3、NT-4、GDF-15、GDNF、结缔组织生长因子(CTGF)、axotrophin、肝素结合EGF样生长因子(HB-EGF)、血小板衍化生长因子-α(PDGF-α)、角质细胞生长因子(KGF)或者促神经突生长因子-2/中期因子(NEGF2)；
[0074] CSF抗氧化剂，其可以是血浆铜蓝蛋白、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)、超氧化物歧化酶-2(SOD-2，Mn型)、超氧化物歧化酶铜伴侣(CCS)、DJ-1/PARK7、过氧化氢酶、硒蛋白(I、M、N、P、S、T、W、X，15kDa)、谷胱甘肽S-转移酶、谷胱甘肽S-转移酶μ2(肌肉)、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、羟酰谷胱甘肽水解酶或者硫氧还蛋白；
[0075] 趋化因子，其可以是：肺泡巨噬细胞来源的趋化因子-I(AMCF-I)、AMCF-II、基质细胞衍生的因子-2、趋化因子(CXC基序)配体2、趋化因子(例如CCL8、CCL16、CCL19、CCL21、CCL25、CXCL2、CXCL4、CXCL9、CXCL12、CXCL13、CXCL14)、趋化因子(CXC基序)受体-2、趋化因子(CXC基序)受体-4、趋化素样因子超家族(例如CKLF-3、-6、-7)或者促神经突生长因子-2/中期因子(NEGF2)；和/或
[0076] 伴侣蛋白，其可以是转甲状腺素蛋白、脂质运载蛋白型前列腺素D合酶/β-微量蛋白(L-PGDS)、载脂蛋白(例如载脂蛋白A、B、C、D、E、H、J、M、N、O或R)、脂质运载蛋白-6、脂质运载蛋白-7、脂质运载蛋白-15、半胱氨酸蛋白酶抑制剂B、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、半胱氨酸蛋白酶抑制剂EM、半胱氨酸蛋白酶抑制剂11、热休克蛋白(HSP)家族成员或者DJ-1/PARK7。
[0077] 将会理解，任何给定的CSF组分均可以以具有本文公开(例如，通过登录号，或者通过本文通过引入并入的参考出版物中的公开内容，或者如对本领域熟悉的人员所已知的等)的氨基酸序列存在，或者可以由如本文所公开(例如，通过登录号或者通过本文通过引
用并入的参考出版物中的公开内容，或者如本领域已知的等)的多核苷酸序列编码，并且任何给定的CSF组分可以具有与本文所公开(例如，通过登录号或者通过参考出版物中的公开
内容等)的氨基酸序列至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，或者可以由与本文所公开(例如，通过登录号或者通过参考出版物中的公开内容等)的
多核苷酸序列至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、
90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多核苷酸序列编码(Stevens等人，2005J MolRecognit 18(2):150)。就这一点而言，将与本文所公开的序列
(例如，通过登录号等)低于100％同一性的CSF组分或其编码序列看做变体，其中此类变体
可以来自累积的或获得性突变、等位基因变异、翻译后或转录后加工、翻译或转录错误等的产物。还考虑这样的变体：其中同种异体或异种组织是CP细胞的来源，例如其中本文公开的CSF组分的同种异体或异种同源物可以分别与如本文所公开(例如，通过登录号等)的氨基
酸序列或多核苷酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、
87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、or 99％的同一性。
用并入的参考出版物中的公开内容，或者如本领域已知的等)的多核苷酸序列编码，并且任何给定的CSF组分可以具有与本文所公开(例如，通过登录号或者通过参考出版物中的公开
内容等)的氨基酸序列至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，或者可以由与本文所公开(例如，通过登录号或者通过参考出版物中的公开内容等)的
多核苷酸序列至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、
90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多核苷酸序列编码(Stevens等人，2005J MolRecognit 18(2):150)。就这一点而言，将与本文所公开的序列
(例如，通过登录号等)低于100％同一性的CSF组分或其编码序列看做变体，其中此类变体
可以来自累积的或获得性突变、等位基因变异、翻译后或转录后加工、翻译或转录错误等的产物。还考虑这样的变体：其中同种异体或异种组织是CP细胞的来源，例如其中本文公开的CSF组分的同种异体或异种同源物可以分别与如本文所公开(例如，通过登录号等)的氨基
酸序列或多核苷酸序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、
87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、or 99％的同一性。
[0078] 当对多肽(氨基酸)或多核苷酸序列进行比较时，当如以下所述进行最大一致性对齐时，如果两个序列中的氨基酸或核苷酸序列相同，则认为这两个序列“相同”。两个序列之间的比较通常通过在比较窗中比较所述序列来进行，以鉴定并比较具有序列相似性的局部
区域。本文使用的“比较窗”指至少约20个连续位点，通常30至约75，40至约50个连续位点的区段，其中在将两个序列最佳对齐之后，可将序列与具有同样数目的连续位点的参考序列
进行比较。
区域。本文使用的“比较窗”指至少约20个连续位点，通常30至约75，40至约50个连续位点的区段，其中在将两个序列最佳对齐之后，可将序列与具有同样数目的连续位点的参考序列
进行比较。
[0079] 可以利用LasergeneTM生物信息学软件套装中的MegalignTM程序(DNASTAR,Inc.,Madison,WI)，利用默认参数进行用于比较的序列的最佳比对。该程序使下述参考文献中描述的数个比对方案具体化：Dayhoff,M.O.(1978)A model of evolutionary change in
proteins–Matrices for detecting distant relationships.In Dayhoff,M.O.(ed.)
Atlas of Protein Sequence and Structure,National Biomedical Research
Foundation,Washington DC Vol.5,Suppl.3,pp.345；Hein J.,1990Unified Approach to Alignment and Phylogenes,pp.626；Methods in Enzymology vol.183,Academic Press,
Inc.,San Diego,CA；Higgins,D.G.and Sharp,P.M.,1989CABIOS 5:151；Myers,E.W.和
Muller W.,1988CABIOS 4:11；Robinson,E.D.,1971Comb.Theor 11:105；Santou,N.Nes,
1987M.,Mol.Biol.Evol.4:406；Sneath,P.H.A.和Sokal,R.R.,1973Numerical Taxonomy–
the Principles and Practice of Numerical Taxonomy,Freeman Press,San
Francisco,CA；Wilbur,W.J.和Lipman,D.J.,1983Proc.Natl.Acad.,Sci.USA 80:726。
proteins–Matrices for detecting distant relationships.In Dayhoff,M.O.(ed.)
Atlas of Protein Sequence and Structure,National Biomedical Research
Foundation,Washington DC Vol.5,Suppl.3,pp.345；Hein J.,1990Unified Approach to Alignment and Phylogenes,pp.626；Methods in Enzymology vol.183,Academic Press,
Inc.,San Diego,CA；Higgins,D.G.and Sharp,P.M.,1989CABIOS 5:151；Myers,E.W.和
Muller W.,1988CABIOS 4:11；Robinson,E.D.,1971Comb.Theor 11:105；Santou,N.Nes,
1987M.,Mol.Biol.Evol.4:406；Sneath,P.H.A.和Sokal,R.R.,1973Numerical Taxonomy–
the Principles and Practice of Numerical Taxonomy,Freeman Press,San
Francisco,CA；Wilbur,W.J.和Lipman,D.J.,1983Proc.Natl.Acad.,Sci.USA 80:726。
[0080] 可选地，可以通过以下进行用于比较的序列的最佳比对：Smith和Waterman,1981Add.APL.Math 2:482的局部一致性算法(local identity algorithm)，通过
Needleman和Wunsch,1970J.Mol.Biol.48:443的一致性比对算法，通过Pearson和Lipman,
1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444的检索相似性方法，通过这些算法(Wisconsin遗传
学软件包中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA,Genetics Computer Group(GCG),
575Science Dr.,Madison,WI)的计算机化实施或者通过目测法。
Needleman和Wunsch,1970J.Mol.Biol.48:443的一致性比对算法，通过Pearson和Lipman,
1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444的检索相似性方法，通过这些算法(Wisconsin遗传
学软件包中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA,Genetics Computer Group(GCG),
575Science Dr.,Madison,WI)的计算机化实施或者通过目测法。
[0081] 适用于测定序列同一性和序列相似性百分数的算法的优选实例是BLAST和BLAST 2.0算法，其分别描述于Altschul等人，1977Nucl.AcidsRes.25:3389和Altschul等人，
1990J.Mol.Biol.215:403中。可以使用BLAST和BLAST 2.0，例如用本文所述的参数，来测定两个或更多个多肽或多核苷酸之间的序列同一性百分数。用于实施BLAST分析的软件可以
通过美国国家生物技术信息中心公开获得。
1990J.Mol.Biol.215:403中。可以使用BLAST和BLAST 2.0，例如用本文所述的参数，来测定两个或更多个多肽或多核苷酸之间的序列同一性百分数。用于实施BLAST分析的软件可以
通过美国国家生物技术信息中心公开获得。
[0082] 在一个示例性实例中，对于核苷酸序列，可以利用参数M(匹配残基对的奖励得分；总是>0)和N(错配残基的罚分；总是<0)来计算累积得分。当下述情况时则停止各方向命中
字符的扩展：累积对齐得分从最大实现数值降低量X；由于一个或多个负分残基对齐的累积导致累积得分变为零或更低；或者在到达一个序列的末端时。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏性和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用11作为默认字长(W)，和10的期望
(E)以及BLOSUM62打分矩阵(参见Henikoff和Henikoff,1989Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:
10915)对齐、50的(B)、10的期望(E)、M＝5、N＝-4以及两条链的比较。
字符的扩展：累积对齐得分从最大实现数值降低量X；由于一个或多个负分残基对齐的累积导致累积得分变为零或更低；或者在到达一个序列的末端时。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏性和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用11作为默认字长(W)，和10的期望
(E)以及BLOSUM62打分矩阵(参见Henikoff和Henikoff,1989Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:
10915)对齐、50的(B)、10的期望(E)、M＝5、N＝-4以及两条链的比较。
[0083] 可选地，将获自RNA序列分析(例如，以上以及实施例中所述的RNA-seq)的序列与参考基因组进行比对。例如，可将各样本的RNA序列读取定位于参考基因组(例如，Ensembl Sscrofa10.2，以及用于注释、可视化和整合发现的数据库(DAVID),Samborski等人，
Transcriptome changes in the porcine endometrium during the preattachment
phase,2013Biol Reprod.2013Dec 12；89(6):134)；Dennis等人，DAVID:Database for
Annotation,Visualization,and Integrated Discovery,2003Genome Biol.4(5):P3；
Huang等人，DAVID Bioinformatics Resources:expanded annotation database and
novel algorithms to better extract biology from large gene lists.2007Nucleic
Acids Res.2007Jul；35(Web Server issue):W169-75；Huang等人，Systematic and
integrative analysis of large gene lists using DAVIDbioinformatics resources,
2009Nat Protoc.2009；4(1):44-57)，利用Tophat(v2.0.13)软件将RNA-seq读取与参考基
因组比对，利用CuffLinks软件组装已通过Tophat定位至可能的转录本的读取从而产生组
装的转录组，以及利用CuffDiff软件接受组装自两种或更多种生物条件的读取，并分析它
们在不同条件下(例如，诱导的条件相对于对照条件)基因和转录本的差异表达。(参见，例如Ghosh等人，Analysis of RNA-Seq Data Using TopHat and Cufflinks.2016Methods
Mol.Biol.2016；1374:339-61)。对于文库文库标准化，可以使用多种方法，如classic-
fpkm、几何学(geometric)、四分位数或者其它方法(参见，例如http website://cole-
trapnell-lab.github.io/cufflinks/cuffdiff/#library-normalization-methods)，连
同多种交叉复制分散估计方法(cross-replicate dispersion estimation method)(例
如，混合的各条件，bline或poisson方法，参见，例如http website://cole-trapnell-
lab.github.io/cufflinks/cuffdiff/#library-normalization-methods)。
Transcriptome changes in the porcine endometrium during the preattachment
phase,2013Biol Reprod.2013Dec 12；89(6):134)；Dennis等人，DAVID:Database for
Annotation,Visualization,and Integrated Discovery,2003Genome Biol.4(5):P3；
Huang等人，DAVID Bioinformatics Resources:expanded annotation database and
novel algorithms to better extract biology from large gene lists.2007Nucleic
Acids Res.2007Jul；35(Web Server issue):W169-75；Huang等人，Systematic and
integrative analysis of large gene lists using DAVIDbioinformatics resources,
2009Nat Protoc.2009；4(1):44-57)，利用Tophat(v2.0.13)软件将RNA-seq读取与参考基
因组比对，利用CuffLinks软件组装已通过Tophat定位至可能的转录本的读取从而产生组
装的转录组，以及利用CuffDiff软件接受组装自两种或更多种生物条件的读取，并分析它
们在不同条件下(例如，诱导的条件相对于对照条件)基因和转录本的差异表达。(参见，例如Ghosh等人，Analysis of RNA-Seq Data Using TopHat and Cufflinks.2016Methods
Mol.Biol.2016；1374:339-61)。对于文库文库标准化，可以使用多种方法，如classic-
fpkm、几何学(geometric)、四分位数或者其它方法(参见，例如http website://cole-
trapnell-lab.github.io/cufflinks/cuffdiff/#library-normalization-methods)，连
同多种交叉复制分散估计方法(cross-replicate dispersion estimation method)(例
如，混合的各条件，bline或poisson方法，参见，例如http website://cole-trapnell-
lab.github.io/cufflinks/cuffdiff/#library-normalization-methods)。
[0084] 通过非限制性的说明性实例，可以利用来自Cuffdiff软件程序的‘gene_exp.diff’输出来鉴定差异表达基因(DEG)。为了检测对照与‘诱导的’样本之间的DEG，可以应用两种过滤过程。首先，利用Cuffdiff状态码，获得各样本中仅具有“OK”状态的基因。状态码‘OK’指示各条件在位点内包含足够的序列读取用于可靠的表达水平的计算，以及该测试成功计算了所述样本中的基因表达水平。对于第二过滤，计算表达水平的两倍变化，并且仅选择在比较的样本之间(对照vs.诱导的)显示多于两倍变化的基因。对于本体分析，将所选的基因列表应用于DAVID软件(Huang等人，2009Nat Protoc.2009；4(1):44-57；Huang等人，2007Nucleic Acids Res.2007 35(Web Server issue):W169-75；Dennis等人，
2003Genome Biol.4(5):P3)，以获得全面的功能注释集。可以选择诸如基因-疾病关联、同源物匹配、基因本体或者通路类别等的类别。然后DAVID产生列出了注释项及其相关基因的功能注释图表。
2003Genome Biol.4(5):P3)，以获得全面的功能注释集。可以选择诸如基因-疾病关联、同源物匹配、基因本体或者通路类别等的类别。然后DAVID产生列出了注释项及其相关基因的功能注释图表。
[0085] 在某些实施方案中，通过在至少20个位点的比较窗中将两个最佳对齐的序列进行比较来测定“序列同一性百分数”，其中与用于两个序列的最佳对齐的参考序列(其不包含添加或缺失)相比，比较窗中的多肽或多核苷酸序列部分可以包含20％或更少，通常5％至
15％，或者10％至12％的添加或缺失(即空位)。通过下述来计算百分数：测定两条序列中均存在的相同的氨基酸残基或核酸碱基的位点数目，从而获得匹配位点的数目，将匹配位点
的数目除以参考序列中的位点总数(即窗口大小)，并将结果乘以100以获得序列同一性百
分数。
15％，或者10％至12％的添加或缺失(即空位)。通过下述来计算百分数：测定两条序列中均存在的相同的氨基酸残基或核酸碱基的位点数目，从而获得匹配位点的数目，将匹配位点
的数目除以参考序列中的位点总数(即窗口大小)，并将结果乘以100以获得序列同一性百
分数。
[0086] 本领域技术人员将会理解，由于遗传密码的简并性，存在多个可以编码如本文所述的特定CSF组分的核苷酸序列。这些多核苷酸中的一些与编码具有本文公开的氨基酸序
列的CSF组分多肽的原始多核苷酸序列的核苷酸序列具有最小序列同一性。但是，本公开内容明确考虑由于密码子使用的差异而改变的多核苷酸。在某些实施方案中，特别考虑被密
码子优化以用于哺乳动物表达的序列。
列的CSF组分多肽的原始多核苷酸序列的核苷酸序列具有最小序列同一性。但是，本公开内容明确考虑由于密码子使用的差异而改变的多核苷酸。在某些实施方案中，特别考虑被密
码子优化以用于哺乳动物表达的序列。
[0087] CP细胞来源
[0088] 本文公开的实施方案涉及用于向CNS施用的改善的生物相容的非免疫原性半透性海藻酸盐胶囊，其包含治疗性的异种和/或同种异体CP细胞。在某些实施方案中，可以通过改进之前关于CP异种移植的教导，制备CP组织碎片，如本文别处所述选择包含CP细胞的胶
囊。制备的一般方法和此类胶囊的用途描述于，例如US6322804、US5834001、US6083523、US2007/134224、US5869463、US2004/213768、US2009/0214660以及US2009/0047325中。用于治疗CNS疾病的生物相容的胶囊内异种脉络丛组织碎片在脑中的植入描述于，例如US2007/
134224和US2004/213768、US2005/0265977、US6083523和US2009/0047325以及相关的专利
申请公开中。US2009/0047325描述了用于异种移植的新生儿的CP细胞的示例性制备。
囊。制备的一般方法和此类胶囊的用途描述于，例如US6322804、US5834001、US6083523、US2007/134224、US5869463、US2004/213768、US2009/0214660以及US2009/0047325中。用于治疗CNS疾病的生物相容的胶囊内异种脉络丛组织碎片在脑中的植入描述于，例如US2007/
134224和US2004/213768、US2005/0265977、US6083523和US2009/0047325以及相关的专利
申请公开中。US2009/0047325描述了用于异种移植的新生儿的CP细胞的示例性制备。
[0089] 但是，关于CP组织和/或CP细胞的生物来源，本发明的实施方案不意图限于此，以便还存在这样的本发明考虑的实施方案：其中哺乳动物脉络丛组织可以获自相对于用包含
治疗性的异种CP细胞的本文所述选择的和诱导的生物相容的非免疫原性半透性海藻酸盐
胶囊进行治疗的对象而言是异种的哺乳动物。因此，CP组织可以获自猪、绵羊、牛、山羊、非人的灵长类或者其它哺乳动物来源。在某些其它实施方案中，CP细胞可以获自与正在经受
治疗的对象是同种异体的生物来源，例如来源可以是来自与所述对象物种相同基因不同的
个体的组织。
治疗性的异种CP细胞的本文所述选择的和诱导的生物相容的非免疫原性半透性海藻酸盐
胶囊进行治疗的对象而言是异种的哺乳动物。因此，CP组织可以获自猪、绵羊、牛、山羊、非人的灵长类或者其它哺乳动物来源。在某些其它实施方案中，CP细胞可以获自与正在经受
治疗的对象是同种异体的生物来源，例如来源可以是来自与所述对象物种相同基因不同的
个体的组织。
[0090] 在某些说明性的示例性实施方案中，可在一定条件下将能够分化为CP细胞的同种异体或异种多能细胞体外培养一段时间，以足以获得多个体外分化的CP细胞。用于从人胚
胎干细胞(ESC)体外产生人CP细胞以及从小鼠ESC体外产生小鼠CP细胞的条件描述于，例如
Watanabe等人，2012J.Neurosci.32(45):15934以及Sternberg等人，2014Regen Med9(1):
53中。用于这些以及相关实施方案中的多能细胞可以包括胚胎细胞，如胚胎干细胞、胚胎干细胞来源的克隆胚胎祖细胞系、神经嵴祖细胞，和/或还可以包括非胚胎细胞中的一种或多种，如脐带细胞、胎盘细胞、牙髓细胞、来自体细胞组织的成体组织干细胞和/或间充质干细胞，其制备方法对于相关领域技术人员而言是已知的(例如，Loeffler等人，2002Cells
Tissues Organs 171(1):8-26)。
胎干细胞(ESC)体外产生人CP细胞以及从小鼠ESC体外产生小鼠CP细胞的条件描述于，例如
Watanabe等人，2012J.Neurosci.32(45):15934以及Sternberg等人，2014Regen Med9(1):
53中。用于这些以及相关实施方案中的多能细胞可以包括胚胎细胞，如胚胎干细胞、胚胎干细胞来源的克隆胚胎祖细胞系、神经嵴祖细胞，和/或还可以包括非胚胎细胞中的一种或多种，如脐带细胞、胎盘细胞、牙髓细胞、来自体细胞组织的成体组织干细胞和/或间充质干细胞，其制备方法对于相关领域技术人员而言是已知的(例如，Loeffler等人，2002Cells
Tissues Organs 171(1):8-26)。
[0091] 在这些以及相关实施方案中，可以在包含一种或多种体外CP分化剂的培养基中培养多能细胞，所述体外CP分化剂如图6(图6A-6C)中公开的任何体外CP分化剂。例如，可以在一定条件下，在包含下述中的一种或多种的培养基中培养多能细胞一段时间以足以获得所
述多个体外分化的脉络丛(CP)细胞：骨形态发生蛋白(BMP)或BMP信号传导通路激动剂、转
化生长因子-β(TGF-β)超家族成员或TGF-β信号传导通路激动剂、哺乳动物生长和分化因子(GDF)或GDF信号传导通路激动剂、VEGF、Wnt蛋白配体或Wnt信号传导通路激动剂、音猬因子(Shh)、Shh信号传导通路激动剂(例如，合成的小分子激动剂，如purmorphamine和/或SAG，参见Stanton等人，2009Mol.BioSyst 6:44)以及成纤维细胞生长因子(FGF)或FGF信号传导
通路激动剂(参见，例如Watanabe等人，2012Jl.Neurosci.32(45):15934；Sternberg等人，
2014,Regen Med,9(1):53，还参见，例如Ward等人，2015Neuroscience S0306-4522(15)
00415；Liddelow,2015Front.Neurosci.9(32):1)；Huang等人，2009Development 340(2):
430)；Schober等人，2001J Comp Neurol 439(1):32)。
述多个体外分化的脉络丛(CP)细胞：骨形态发生蛋白(BMP)或BMP信号传导通路激动剂、转
化生长因子-β(TGF-β)超家族成员或TGF-β信号传导通路激动剂、哺乳动物生长和分化因子(GDF)或GDF信号传导通路激动剂、VEGF、Wnt蛋白配体或Wnt信号传导通路激动剂、音猬因子(Shh)、Shh信号传导通路激动剂(例如，合成的小分子激动剂，如purmorphamine和/或SAG，参见Stanton等人，2009Mol.BioSyst 6:44)以及成纤维细胞生长因子(FGF)或FGF信号传导
通路激动剂(参见，例如Watanabe等人，2012Jl.Neurosci.32(45):15934；Sternberg等人，
2014,Regen Med,9(1):53，还参见，例如Ward等人，2015Neuroscience S0306-4522(15)
00415；Liddelow,2015Front.Neurosci.9(32):1)；Huang等人，2009Development 340(2):
430)；Schober等人，2001J Comp Neurol 439(1):32)。
[0092] 例如，Wnt信号传导通路激动剂可以包括下述中的一种或多种：WAY-316606(SFRP抑制剂，5-(苯磺酰基)-N-4-哌啶基-2-(三氟甲基)苯磺酰胺盐酸盐，Bodine等人，2009Bone
44:1063)、IQ1(PP2A活化剂,Miyabayashi等人，2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:5668)、QS11(ARFGAP1活化剂,Zhang等人，2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:7444)、(异)芳基嘧啶或2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin(例如，
Ohlmann等人，2012Prog.Retin Eye Res.31:243；Rey等人，2010Dev.Dyn 239:102；erratum
2010Dev.Dyn.239:1034；GenBank登录号NM_000266)、R-spondin-1(例如，Peng等人，
013Cell Rep.3:1885；GenBank登录号NM_001038633、NM_001242910.1)、R-spondin-2(例
如，GenBank登录号NM_178565、NM_178565.4、NM_001282863.1)、R-spondin-3(例如，
GenBank登录号NM_032784)以及R-spondin-4(例如，GenBank登录号NM_001029871.3)。在某些实施方案中，Wnt信号传导通路激动剂还可以包括任何合适的锂盐，即包含阳离子锂并且可以无毒性或者以最小毒性与细胞接触的锂化合物，例如氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者相关领域技术人员可能已知的任何其它锂盐。
44:1063)、IQ1(PP2A活化剂,Miyabayashi等人，2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:5668)、QS11(ARFGAP1活化剂,Zhang等人，2007Proc.Nat.Acad.Sci.USA 104:7444)、(异)芳基嘧啶或2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、Norrin(例如，
Ohlmann等人，2012Prog.Retin Eye Res.31:243；Rey等人，2010Dev.Dyn 239:102；erratum
2010Dev.Dyn.239:1034；GenBank登录号NM_000266)、R-spondin-1(例如，Peng等人，
013Cell Rep.3:1885；GenBank登录号NM_001038633、NM_001242910.1)、R-spondin-2(例
如，GenBank登录号NM_178565、NM_178565.4、NM_001282863.1)、R-spondin-3(例如，
GenBank登录号NM_032784)以及R-spondin-4(例如，GenBank登录号NM_001029871.3)。在某些实施方案中，Wnt信号传导通路激动剂还可以包括任何合适的锂盐，即包含阳离子锂并且可以无毒性或者以最小毒性与细胞接触的锂化合物，例如氯化锂、碳酸锂、柠檬酸锂、乳清酸锂、溴化锂、氟化锂、碘化锂、醋酸锂、氢氧化锂、氢化铝锂、高氯酸锂、硝酸锂、二异丙基氨基锂、硼氢化锂、氧化锂、硫酸锂、六氟磷酸锂、四氧化锂、硫化锂、氢化锂、氨基锂、乳酸锂、四氟硼酸锂、二甲氨基锂、磷酸锂、过氧化锂、高锰酸锂、甲氧基锂、偏硼酸锂、硬脂酸锂或者相关领域技术人员可能已知的任何其它锂盐。
[0093] 某些其它优选实施方案考虑从相对于正在经受治疗的对象是异种的组织制备的封装的脉络丛组织碎片。例如，对于人的治疗，设想异种封装的CP细胞可以获自非人来源，优选非人的哺乳动物来源。在某些此类实施方案中，包含封装进本文所述的半透性生物相
容的(例如，海藻酸盐)胶囊内的CP细胞的CP组织的非人的哺乳动物来源可以是猪组织。某
些其它实施方案涉及新生儿的猪CP组织，其作为用于本文方法的待封装的CP细胞的来源，
其中“新生儿的”可以理解为包括在紧接着出生之后直至长至三个月龄的任何时间获得的
组织。
容的(例如，海藻酸盐)胶囊内的CP细胞的CP组织的非人的哺乳动物来源可以是猪组织。某
些其它实施方案涉及新生儿的猪CP组织，其作为用于本文方法的待封装的CP细胞的来源，
其中“新生儿的”可以理解为包括在紧接着出生之后直至长至三个月龄的任何时间获得的
组织。
[0094] 根据本文公开的某些实施方案，还提供来源于基本上没有人类病原体以及特别地可以基本上没有噬人性可传播的猪内源性逆转录病毒(PERV)的胎儿或新生儿的CP组织(如
胎儿或新生儿的猪CP组织)的使用的令人惊讶的优势。应当理解，“基本上没有”指这样的情况，其中用于检测人病原体的常规方法或者用于检测噬人性可传播的PERV的常规方法未能
以统计学显著的方式检测出此类病原体或PERV，并且置信度为至少95％、96％、97％、98％或99％。
胎儿或新生儿的猪CP组织)的使用的令人惊讶的优势。应当理解，“基本上没有”指这样的情况，其中用于检测人病原体的常规方法或者用于检测噬人性可传播的PERV的常规方法未能
以统计学显著的方式检测出此类病原体或PERV，并且置信度为至少95％、96％、97％、98％或99％。
[0095] 在这方面，伴随着用于异种移植进入人的猪组织和细胞的使用，PERV呈现出严重的健康和安全风险，尽管许多特征使得猪组织和细胞很好地适于此类移植。具体地，可能存在于用于移植的猪供体细胞中的PERV能够感染人细胞(Fishman,1998Ann.NY
Acad .Sci .862:52；Elliott等人，U.S .8 ,088 ,969；Park等人，
2008J.Microbiol.Biotechnol.18:1735；Hector等人，2007Xenotransplant.14:222)。相比之下，在新西兰奥克兰，已经通过一组限定的标准，鉴定出一群显示不含病原体并且其基因组缺乏之前与PERV感染人细胞的能力相关的全长PERV-C基因座的家养猪(家猪(Sus
scrofa domesticus))(Garkavenko等人，2008Cell Transplant.17:1381；Hector等人
2007Xenotransplant.14:222)。不含病原体的动物包括缺乏能够与PERV-A env基因重组的
PERV-C env基因的猪的子集(Id.)。
Acad .Sci .862:52；Elliott等人，U.S .8 ,088 ,969；Park等人，
2008J.Microbiol.Biotechnol.18:1735；Hector等人，2007Xenotransplant.14:222)。相比之下，在新西兰奥克兰，已经通过一组限定的标准，鉴定出一群显示不含病原体并且其基因组缺乏之前与PERV感染人细胞的能力相关的全长PERV-C基因座的家养猪(家猪(Sus
scrofa domesticus))(Garkavenko等人，2008Cell Transplant.17:1381；Hector等人
2007Xenotransplant.14:222)。不含病原体的动物包括缺乏能够与PERV-A env基因重组的
PERV-C env基因的猪的子集(Id.)。
[0096] 因此，在本文公开的某些实施方案的实践中考虑，如本文所述选择、施用并诱导的半透性生物相容的胶囊中存在的CP细胞的异种组织来源将包括基本上没有噬人性PERV的胎儿或新生儿的猪CP组织。在某些其它实施方案中，CP组织获自缺乏能够与PERV-A env基
因重组的PERV-Cenv基因的动物或者利用已建立的基因编辑技术，如成簇规律间隔的短回
文重复(CRISPR)-Cas9编辑被基因工程化以缺乏任何或者全部PERV基因的动物(例如，
Jinek等人，2012Science 337:816；Doudna等人，2014Science346:1258096)。
因重组的PERV-Cenv基因的动物或者利用已建立的基因编辑技术，如成簇规律间隔的短回
文重复(CRISPR)-Cas9编辑被基因工程化以缺乏任何或者全部PERV基因的动物(例如，
Jinek等人，2012Science 337:816；Doudna等人，2014Science346:1258096)。
[0097] CP制备和封装
[0098] 一般而言，可以通过将本文所述的改进并入可见于下述出版物中的一种或多种的与脉络丛组织和细胞制备、半透性生物相容的胶囊(如海藻酸盐胶囊等)和/或CNS施用(包
括胶囊的脑部植入)相关的适应的教导来获得用于实践某些本文公开的实施方案的材料、
方法和技术：Elliott及其同事(例如US 2009/0047325、US 8,129,186)、Vasconcellos等人(例如US2009/0214660)、Dionne等人(例如US 6,322,804、US 6,083,523)、Major等人(例如US 5,753,491)、Monuki等人(例如US 8,748,176，还参见Watanabe等人，
2012Jl.Neurosci.32(45):15934)和/或US 2007/0134224(Harlow等人)、US 4,892,538
(Aebischer等人)和/或US 2012/0003190(Yamoah等人)，将其全部通过引用并入，但是其单独或者任何组合的形式未教导或提示根据本文公开的组合的改进。
括胶囊的脑部植入)相关的适应的教导来获得用于实践某些本文公开的实施方案的材料、
方法和技术：Elliott及其同事(例如US 2009/0047325、US 8,129,186)、Vasconcellos等人(例如US2009/0214660)、Dionne等人(例如US 6,322,804、US 6,083,523)、Major等人(例如US 5,753,491)、Monuki等人(例如US 8,748,176，还参见Watanabe等人，
2012Jl.Neurosci.32(45):15934)和/或US 2007/0134224(Harlow等人)、US 4,892,538
(Aebischer等人)和/或US 2012/0003190(Yamoah等人)，将其全部通过引用并入，但是其单独或者任何组合的形式未教导或提示根据本文公开的组合的改进。
[0099] 根据本文首次公开的某些优选实施方案，出乎意料地发现，根据本文所述的治疗方法，可以通过包括选择一种或多种其内是封装的CP组织碎片和/或体外分化的CP细胞的
半透性生物相容的胶囊(例如海藻酸盐胶囊)这一步骤获得特定优势。
半透性生物相容的胶囊(例如海藻酸盐胶囊)这一步骤获得特定优势。
[0100] 具体地并且以在本公开之前不能预测到的方式，向CNS位点施用的胶囊的尺寸以及每一胶囊中包含的CP细胞的数目有助于以每个细胞为基础的由封装的细胞产生的CSF组
分产生水平。反常识地并且根据非限制性理论，每个细胞增加的CSF组分产生，包括用CP诱导剂诱导之后每个细胞的CSF组分不是简单直接地与各胶囊中存在的细胞的数目成比例，
而是发现其是利用选择这样的胶囊而实现的：所述胶囊具有约400μm至约800μm的直径，并且通常具有小于约一微升的内部体积，并且每个胶囊包含约200至约10,000个细胞，其中
“约”可以理解为表示可以多于或少于所述量不到50％，更优选不到40％，更优选不到30％，以及更优选不到20％、15％、10％或5％的量变。
分产生水平。反常识地并且根据非限制性理论，每个细胞增加的CSF组分产生，包括用CP诱导剂诱导之后每个细胞的CSF组分不是简单直接地与各胶囊中存在的细胞的数目成比例，
而是发现其是利用选择这样的胶囊而实现的：所述胶囊具有约400μm至约800μm的直径，并且通常具有小于约一微升的内部体积，并且每个胶囊包含约200至约10,000个细胞，其中
“约”可以理解为表示可以多于或少于所述量不到50％，更优选不到40％，更优选不到30％，以及更优选不到20％、15％、10％或5％的量变。
[0101] 因此，在某些优选实施方案中，选择各包含至少约200、400、600、800、1000、2000、3000、4000、5000、7500或9000个且不多于约10,000个CP细胞的半透性生物相容的胶囊。在某些优选实施方案中，选择各包含至少约400、600、800、1000、1500、2000、2500、3000、3500、
4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000或7500个且不多于约8000个细胞的胶囊。
4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000或7500个且不多于约8000个细胞的胶囊。
[0102] 在某些优选实施方案中，可将半透性生物相容的(例如海藻酸盐)胶囊制备为具有约400μm至约800μm，约500μm至约700μm，约450μm至约750μm或者约400μm至约700μm的直径，并且通常其各自具有小于约一微升的内部体积。
[0103] 可以通过技术人员熟悉的多种技术中的任何技术来完成选择。例如，可将如本文所述并根据引用的参考文件中所述的已建立的方法制备的半透性生物相容的胶囊在显微
镜下可视化，并利用显微操纵器、显微操作针、微毛细吸管、膜片钳装置等，根据所包括体积的细胞的校准占用(例如，以经验为主建立的一致的胶囊占用和/或通过利用色度法或荧光
标志物，如活体染料或DNA结合染料等)进行手动选择。可选地，可将自动化的设备，如大颗粒流式分选仪(例如，COPASTMFlowPilotTM平台，UnionBiometrica Inc.,Holliston,MA,
USA)、粒度分析仪、数字图像分析仪、流式细胞仪等用于进行包含封装的CP细胞的半透性生物相容的胶囊的制备。
镜下可视化，并利用显微操纵器、显微操作针、微毛细吸管、膜片钳装置等，根据所包括体积的细胞的校准占用(例如，以经验为主建立的一致的胶囊占用和/或通过利用色度法或荧光
标志物，如活体染料或DNA结合染料等)进行手动选择。可选地，可将自动化的设备，如大颗粒流式分选仪(例如，COPASTMFlowPilotTM平台，UnionBiometrica Inc.,Holliston,MA,
USA)、粒度分析仪、数字图像分析仪、流式细胞仪等用于进行包含封装的CP细胞的半透性生物相容的胶囊的制备。
[0104] 在优选实施方案中，其内是“封装的”CP组织碎片和/或体外分化的CP细胞的本文的半透性生物相容的胶囊包括这样的胶囊，其在视觉显微镜观察时显示，在胶囊的外表面
基本上检测不到细胞或者检测到部分细胞，以及在胶囊的内表面基本上无细胞突出胶囊或
者部分细胞突出胶囊。
基本上检测不到细胞或者检测到部分细胞，以及在胶囊的内表面基本上无细胞突出胶囊或
者部分细胞突出胶囊。
[0105] 根据非限制性理论，认为根据本文所述的关于胶囊直径、封装的CP细胞的数目以及胶囊外表面基本上没有细胞或部分细胞，包括没有从胶囊的内表面至胶囊的外表面突出
的细胞或者部分细胞的标准进行选择有利地产生以下胶囊：在向对象的中枢神经系统
(CNS)位点施用或者植入胶囊，如植入已知患有或者疑似患有神经系统疾病的哺乳动物对
象的脑组织中之后，胶囊引发极少的或者检测不到的组织排斥(例如，免疫排斥)或炎症反
应(例如，异物应答)。此外，根据本文的方法通过体内植入CNS位点而向对象施用的封装的CP细胞显示出令人惊讶且出乎意料的长寿命，其可以在植入后大于2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、18、20、24或者更多个月，在半透性生物相容的(例如，海藻酸盐)胶囊中仍然具有活力，基本上不引发局部免疫或慢性炎症反应，如包含CP细胞的胶囊的免疫排
斥，胶囊上的宿主细胞外基质沉积或者针对胶囊的异物应答。因此并且在某些实施方案中，在施用进程中的植入之后，在CNS位点处，胶囊不引发慢性炎症，和/或不需要向对象施用免疫抑制剂(例如，Craft等人，2005Exp.Opin.Ther.Targets 9:887；Jha等人，2014Recent Pat.Inflamm.Allergy Drug Discov.8:118；Bellavance等人，2014Front.Immunol.5:136；
Lossinsky等人，2004Histol.Histopath.19:535，以及其内引用的参考文献)来改善CNS位
点处胶囊的免疫排斥。
的细胞或者部分细胞的标准进行选择有利地产生以下胶囊：在向对象的中枢神经系统
(CNS)位点施用或者植入胶囊，如植入已知患有或者疑似患有神经系统疾病的哺乳动物对
象的脑组织中之后，胶囊引发极少的或者检测不到的组织排斥(例如，免疫排斥)或炎症反
应(例如，异物应答)。此外，根据本文的方法通过体内植入CNS位点而向对象施用的封装的CP细胞显示出令人惊讶且出乎意料的长寿命，其可以在植入后大于2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、18、20、24或者更多个月，在半透性生物相容的(例如，海藻酸盐)胶囊中仍然具有活力，基本上不引发局部免疫或慢性炎症反应，如包含CP细胞的胶囊的免疫排
斥，胶囊上的宿主细胞外基质沉积或者针对胶囊的异物应答。因此并且在某些实施方案中，在施用进程中的植入之后，在CNS位点处，胶囊不引发慢性炎症，和/或不需要向对象施用免疫抑制剂(例如，Craft等人，2005Exp.Opin.Ther.Targets 9:887；Jha等人，2014Recent Pat.Inflamm.Allergy Drug Discov.8:118；Bellavance等人，2014Front.Immunol.5:136；
Lossinsky等人，2004Histol.Histopath.19:535，以及其内引用的参考文献)来改善CNS位
点处胶囊的免疫排斥。
[0106] 此外，如本文所公开的进行选择的小封装体积的半透性生物相容的(例如，海藻酸盐)胶囊允许在制备和递送封装的CP细胞植入物中的效率和经济，并且通过本文所述的与
CP诱导剂的接触步骤，还提供向脑组织递送有效的CSF来源的能力，同时在植入位点处占用最小组织空间，从而使施用步骤所伴随的组织破坏的量最小化。
CP诱导剂的接触步骤，还提供向脑组织递送有效的CSF来源的能力，同时在植入位点处占用最小组织空间，从而使施用步骤所伴随的组织破坏的量最小化。
[0107] 神经系统病症
[0108] 相关领域技术人员熟悉可以指示本文所述的封装的CP细胞组合物的施用的临床适当性和/或可以进行调整的多种诊断、手术和/或其它临床标准。参见，例如Sontheimer,Diseases of the Nervous System,2015Academic Press/Elsevier,Waltham,MA；”
Neurologic Disorders”in The Merck Manual of Diagnosis and Therapy 19th Ed.
(R.S.Porter,Ed.,2011,Merck,Inc.,NJ)；马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院，国家神经病症和脑卒中研究所的网址www.ninds.nih.gov/disorders/misc/diagnostic_tests.htm的
“Neurological Diagnostic Tests and Procedures”；Neurology in Clinical
Practice–Vol.II,4th Edition,Bradley等人，(Eds),2004Butterworth Heinemann/
Elsevier,Philadelphia,PA；Non-Neoplastic Diseases of the Central Nervous
System(Atlas of Nontumor Pathology-First Series Fascicle),D.N.Lewis等人，
(eds.),2010Amer.Registry of Pathology,Annapolis Junction,MD；Bradley’s
Neurology in Clinical Practice(6th Ed.),R.B.Daroff等人(eds.),2012Saunders/
Elsevier,Waltham,MA。因此，诊断和临床监测患有或者疑似患有神经系统病症或疾病的患者的标准为相关领域技术人员所熟知。
Neurologic Disorders”in The Merck Manual of Diagnosis and Therapy 19th Ed.
(R.S.Porter,Ed.,2011,Merck,Inc.,NJ)；马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院，国家神经病症和脑卒中研究所的网址www.ninds.nih.gov/disorders/misc/diagnostic_tests.htm的
“Neurological Diagnostic Tests and Procedures”；Neurology in Clinical
Practice–Vol.II,4th Edition,Bradley等人，(Eds),2004Butterworth Heinemann/
Elsevier,Philadelphia,PA；Non-Neoplastic Diseases of the Central Nervous
System(Atlas of Nontumor Pathology-First Series Fascicle),D.N.Lewis等人，
(eds.),2010Amer.Registry of Pathology,Annapolis Junction,MD；Bradley’s
Neurology in Clinical Practice(6th Ed.),R.B.Daroff等人(eds.),2012Saunders/
Elsevier,Waltham,MA。因此，诊断和临床监测患有或者疑似患有神经系统病症或疾病的患者的标准为相关领域技术人员所熟知。
[0109] 因此，考虑本文所述的组合物和方法可以在大范围的神经系统疾病中发现有益用途，其中对象中存在所述神经系统疾病或者患有所述神经系统疾病的风险对于有经验的临
床医师将是显而易见的。因此，根据本文中出现的教导进行治疗的神经系统疾病的非限制
性实例包括，例如帕金森病、帕金森型多系统萎缩、小脑型多系统萎缩、进行性核上性麻痹、路易体痴呆、特发性震颤、药源性帕金森综合征、阿尔兹海默病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、朊病毒病、运动神经元病、脊髓小脑性共济失调、脊髓性肌萎缩、静态神经疾病(如脑卒中、CNS创伤)、癫痫发作(包括癫痫)；进行性神经退行性疾病，包括与老化和痴呆相关的那些进行性神经退行性疾病，如阿尔兹海默病、帕金森病等；运动神经元和神经肌肉接头的疾病；亨廷顿氏病；多发性硬化；CNS肿瘤，特别是脑部肿瘤，包括成神经细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤；感染性神经系统疾病，包括脑膜炎、肉毒中毒、破伤风、神经梅毒、脊髓灰质炎、狂犬病、HIV/AIDS、朊病毒病、福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)(阿米巴脑部感染)；囊虫病；神经精神疾病，包括抑郁症、情绪障碍；强迫症、精神分裂症；与神经元死亡、谷氨酸盐性、蛋白聚集和/或沉积(例如淀粉样斑块形成)中的一种或多种相关或以其为表
征的疾病，线粒体功能障碍，包括活性氧(ROS)产生水平超过正常健康对照对象中发现的
ROS产生水平的线粒体功能障碍；脑原性神经营养因子相关的病症以及其它神经系统疾病。
床医师将是显而易见的。因此，根据本文中出现的教导进行治疗的神经系统疾病的非限制
性实例包括，例如帕金森病、帕金森型多系统萎缩、小脑型多系统萎缩、进行性核上性麻痹、路易体痴呆、特发性震颤、药源性帕金森综合征、阿尔兹海默病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、朊病毒病、运动神经元病、脊髓小脑性共济失调、脊髓性肌萎缩、静态神经疾病(如脑卒中、CNS创伤)、癫痫发作(包括癫痫)；进行性神经退行性疾病，包括与老化和痴呆相关的那些进行性神经退行性疾病，如阿尔兹海默病、帕金森病等；运动神经元和神经肌肉接头的疾病；亨廷顿氏病；多发性硬化；CNS肿瘤，特别是脑部肿瘤，包括成神经细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤；感染性神经系统疾病，包括脑膜炎、肉毒中毒、破伤风、神经梅毒、脊髓灰质炎、狂犬病、HIV/AIDS、朊病毒病、福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)(阿米巴脑部感染)；囊虫病；神经精神疾病，包括抑郁症、情绪障碍；强迫症、精神分裂症；与神经元死亡、谷氨酸盐性、蛋白聚集和/或沉积(例如淀粉样斑块形成)中的一种或多种相关或以其为表
征的疾病，线粒体功能障碍，包括活性氧(ROS)产生水平超过正常健康对照对象中发现的
ROS产生水平的线粒体功能障碍；脑原性神经营养因子相关的病症以及其它神经系统疾病。
[0110] 因此，在某些实施方案中，提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病是通过神经元的死亡来表征的神经退行性疾病。例如，这些以及相关实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中神经
系统疾病可以是下述中的至少一种：帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS，另外也被称为运动神经元病)、进行性延髓麻痹、进行性肌萎缩、路易体痴呆、多系统萎缩、1型脊髓小脑共济失调(SCA 1)或者年龄相关的神经退行性病症。但是，涵盖的实施方案不意图受限于此，以便还考虑治疗通过神经元的死亡来表征的其它神经退行性疾病
的方法。
系统疾病可以是下述中的至少一种：帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS，另外也被称为运动神经元病)、进行性延髓麻痹、进行性肌萎缩、路易体痴呆、多系统萎缩、1型脊髓小脑共济失调(SCA 1)或者年龄相关的神经退行性病症。但是，涵盖的实施方案不意图受限于此，以便还考虑治疗通过神经元的死亡来表征的其它神经退行性疾病
的方法。
[0111] 在某些实施方案中，提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病通过至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统
疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的降低来表征。例如，这些和相关实施方案考虑
治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病可以是下
述中的至少一种：帕金森病(其中多巴胺能神经元的功能水平降低)、阿尔兹海默病(其中去甲肾上腺素能神经元的功能水平降低，参见，例如Adori等人，2015,Acta Neuropathol 129(4):541)、亨廷顿氏病(其中中型棘突GABA神经元(MSN)的功能水平降低)、肌萎缩性侧索硬化(ALS，其中运动神经元的功能水平降低)和抑郁症(其中羟色胺能神经元的功能水平降
低)。
疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的降低来表征。例如，这些和相关实施方案考虑
治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病可以是下
述中的至少一种：帕金森病(其中多巴胺能神经元的功能水平降低)、阿尔兹海默病(其中去甲肾上腺素能神经元的功能水平降低，参见，例如Adori等人，2015,Acta Neuropathol 129(4):541)、亨廷顿氏病(其中中型棘突GABA神经元(MSN)的功能水平降低)、肌萎缩性侧索硬化(ALS，其中运动神经元的功能水平降低)和抑郁症(其中羟色胺能神经元的功能水平降
低)。
[0112] 在某些实施方案中，提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病通过至少一种神经细胞功能水平相对于已知未患所述神经系统
疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的增加来表征。例如，这些和相关实施方案考虑
治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病可以是下
述中的至少一种：精神病、精神分裂症(其中神经细胞水平增加，其可以表现为极度活跃的多巴胺信号传导)；癫痫性发作(其中神经细胞的水平增加，其可以表现为谷氨酸能兴奋性
毒性)、缺血性脑卒中(其中神经细胞的水平增加，其可以表现为谷氨酸能兴奋性毒性)以及与不宁腿综合征相关的失眠(其中神经细胞的水平增加，其可以表现为过于活跃的谷氨酸
能活性)。
疾病的对照对象中所述神经细胞功能水平的增加来表征。例如，这些和相关实施方案考虑
治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病可以是下
述中的至少一种：精神病、精神分裂症(其中神经细胞水平增加，其可以表现为极度活跃的多巴胺信号传导)；癫痫性发作(其中神经细胞的水平增加，其可以表现为谷氨酸能兴奋性
毒性)、缺血性脑卒中(其中神经细胞的水平增加，其可以表现为谷氨酸能兴奋性毒性)以及与不宁腿综合征相关的失眠(其中神经细胞的水平增加，其可以表现为过于活跃的谷氨酸
能活性)。
[0113] 在某些实施方案中，提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病通过对象中包含水平改变的一种或多种脑脊髓液(CSF)组分的
脑脊髓液(CSF)的存在来表征，所述改变是相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象
中的所述CSF组分的水平。图7中列出了代表性的CSF组分。例如，这些和相关实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病可以是阿
尔兹海默病和糖尿病中的至少一种。
脑脊髓液(CSF)的存在来表征，所述改变是相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象
中的所述CSF组分的水平。图7中列出了代表性的CSF组分。例如，这些和相关实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病可以是阿
尔兹海默病和糖尿病中的至少一种。
[0114] 在某些实施方案中，提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神经系统疾病通过对象中水平改变的至少一种脉络丛功能的存在来表征，所
述改变是相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述脉络丛功能水平。例如，这
些和相关实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述
神经系统疾病可以是斯特奇-韦伯综合征或克-特-韦综合征(或者多种其他具有公认的诊
断体征和症状的临床可鉴定的先天性神经系统疾病的任一种。
述改变是相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述脉络丛功能水平。例如，这
些和相关实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述
神经系统疾病可以是斯特奇-韦伯综合征或克-特-韦综合征(或者多种其他具有公认的诊
断体征和症状的临床可鉴定的先天性神经系统疾病的任一种。
[0115] 在某些实施方案中，提供治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中对象中的所述神经系统疾病是对象神经系统内内皮和平滑肌细胞中的淀粉样沉积
水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述沉积的水平增加(例如，以统计
学显著的方式)的继发效应(例如，Ghiso等人，2001J.Alzheimer’s Dis.3:65)。例如，这些和相关实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神
经系统疾病可以是脑淀粉样血管病、冰岛型遗传性脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-I)、荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)、脑膜脑血管和眼软脑膜淀粉样变性、凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病、芬兰型家族性淀粉样变性(FAF)、朊蛋白血管变体脑淀粉样变
性、家族性英国痴呆(FBD)(另外也被称为英国型家族性脑淀粉样血管病或者英国型脑血管
淀粉样变性)、家族性丹麦痴呆(也被称为眼耳脑遗传病(heredopathia ophthalmo-oto-
encephalica))、家族性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性或者PrP脑淀粉样血管病(PrP-
CAA)(Ghiso等人，2001 J Alzheimer’s Dis 3:65)。
水平相对于已知未患所述神经系统疾病的对照对象中所述沉积的水平增加(例如，以统计
学显著的方式)的继发效应(例如，Ghiso等人，2001J.Alzheimer’s Dis.3:65)。例如，这些和相关实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的对象的方法，其中所述神
经系统疾病可以是脑淀粉样血管病、冰岛型遗传性脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-I)、荷兰型脑出血伴淀粉样变性病(HCHWA-D)、脑膜脑血管和眼软脑膜淀粉样变性、凝溶胶蛋白相关的脊髓和脑淀粉样血管病、芬兰型家族性淀粉样变性(FAF)、朊蛋白血管变体脑淀粉样变
性、家族性英国痴呆(FBD)(另外也被称为英国型家族性脑淀粉样血管病或者英国型脑血管
淀粉样变性)、家族性丹麦痴呆(也被称为眼耳脑遗传病(heredopathia ophthalmo-oto-
encephalica))、家族性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性或者PrP脑淀粉样血管病(PrP-
CAA)(Ghiso等人，2001 J Alzheimer’s Dis 3:65)。
[0116] 治疗方法
[0117] 优选的实施方案考虑治疗已知患有或者疑似患有神经系统疾病的人或非人哺乳动物对象的方法。因此，哺乳动物可以包括人，并且还可以包括家养动物，如实验动物、家畜和家庭宠物(例如，啮齿类、猫、狗、兔子以及其它兔形目动物、猪、牛、绵羊、山羊、马、其它有蹄类动物等)以及非家养动物，如野生动物等。
[0118] “治疗有效量”指当向哺乳动物优选人施用时，根据本文公开内容的组合物或制备物的量足以有效治疗哺乳动物优选人中的神经系统疾病或病况。构成“治疗有效量”的此类组合物或制备物的量，诸如本文所述的其内是封装的脉络丛(CP)细胞一种或多种所选半透性生物相容的胶囊的量和/或本文提供的脉络丛诱导剂的的量将根据组合物和制备物、神
经系统疾病或病况及其严重性以及待治疗的哺乳动物的年龄而改变，但是考虑到本领域技
术人员的自身知识以及本文公开内容，其可以由本领域普通技术常规地确定。
经系统疾病或病况及其严重性以及待治疗的哺乳动物的年龄而改变，但是考虑到本领域技
术人员的自身知识以及本文公开内容，其可以由本领域普通技术常规地确定。
[0119] “治疗(treating)”或“治疗(treatment)”指治愈、减轻患有目标疾病或病况(例如神经退行性疾病)的哺乳动物，优选人类中的所述目标神经系统疾病、病症或病况的症状和/或纠正导致上述疾病的潜在缺陷或其病因的疗法，并且包括将导致神经系统疾病、病症或病况的有缺陷的分子、细胞和/或组织组分和/或导致神经系统疾病、病症或病况的有害
过程抑制(例如，损害、降低或阻止，如以统计学显著的方式降低)或修复(例如，替代、补充或者取代)至实质性的且统计学显著的抑制或修复程度(尽管不必是完全的)，例如相对于
合适的未治疗对照，至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、
95％或者更高的抑制或修复；并且还包括部分或完全减轻由所述疾病、病症或病况导致的
体征或症状，例如降低与疾病相关的炎性损伤，恢复一种或多种正常的神经元和/或神经胶质细胞结构和/或功能等。
过程抑制(例如，损害、降低或阻止，如以统计学显著的方式降低)或修复(例如，替代、补充或者取代)至实质性的且统计学显著的抑制或修复程度(尽管不必是完全的)，例如相对于
合适的未治疗对照，至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、
95％或者更高的抑制或修复；并且还包括部分或完全减轻由所述疾病、病症或病况导致的
体征或症状，例如降低与疾病相关的炎性损伤，恢复一种或多种正常的神经元和/或神经胶质细胞结构和/或功能等。
[0120] 用于制备包含CP细胞的生物相容的半透性海藻酸盐胶囊并将其植入CNS位点的一般方法描述于，例如US6322804、US5834001、US6083523、US2007/134224、US5869463、
US2004/213768、US2009/0047325以及相关出版物中，包括其内引用的参考文献，并且可以根据本文的教导对其进行改进。因此，根据本公开，考虑使本领域已知的手术程序适应某些实施方案，其中向CNS注射位点施用胶囊的步骤包括经导管递送胶囊，所述导管可以，例如包括外部导管、芯杆、柱塞或递送导管。在某些其它实施方案中，递送包括用立体定位装置可控地定位导管，在某些其它实施方案中，立体定位装置包括脑深层刺激术(DBS)微型推进器或者可以进行改进以用于本发明的方法的类似的装置。
US2004/213768、US2009/0047325以及相关出版物中，包括其内引用的参考文献，并且可以根据本文的教导对其进行改进。因此，根据本公开，考虑使本领域已知的手术程序适应某些实施方案，其中向CNS注射位点施用胶囊的步骤包括经导管递送胶囊，所述导管可以，例如包括外部导管、芯杆、柱塞或递送导管。在某些其它实施方案中，递送包括用立体定位装置可控地定位导管，在某些其它实施方案中，立体定位装置包括脑深层刺激术(DBS)微型推进器或者可以进行改进以用于本发明的方法的类似的装置。
[0121] 在以上所述的方法的某些实施方案中，向CNS注射位点(或者在某些其它实施方案中，向PNS注射位点)施用胶囊包括经导管递送胶囊。在某些其它实施方案中，施用包括通过用立体定位装置可控地定位导管来递送。在某些其它实施方案中，立体定位装置通过示例
性说明可以包括且不限于：脑深层刺激术(DBS)微型推进器、“无框架”头部立体定位架、头骨安装瞄准装置、Leksell框架、Cosman-Roberts-Wells框架或者其它类似的改进的立体定位装置等，或者任何等同物，例如Bot等人，2015Stereotact.Funct.Neurosurg.93:316；
Sharma等人，2014Neurol.India62:503；Larson等人，2012Neurosurg.70(1Suppl
Operative):95；Kelman等人，2010Stereotact.Funct.Neurosurg.88:288；Starr等人，
2010J.Neurosurg.112:479；Starr等人，2009Neurosurg.Clin.N.Am.20:193中所述的任何
装置。在某些实施方案中，导管包括外部导管、芯杆、柱塞和递送导管。
性说明可以包括且不限于：脑深层刺激术(DBS)微型推进器、“无框架”头部立体定位架、头骨安装瞄准装置、Leksell框架、Cosman-Roberts-Wells框架或者其它类似的改进的立体定位装置等，或者任何等同物，例如Bot等人，2015Stereotact.Funct.Neurosurg.93:316；
Sharma等人，2014Neurol.India62:503；Larson等人，2012Neurosurg.70(1Suppl
Operative):95；Kelman等人，2010Stereotact.Funct.Neurosurg.88:288；Starr等人，
2010J.Neurosurg.112:479；Starr等人，2009Neurosurg.Clin.N.Am.20:193中所述的任何
装置。在某些实施方案中，导管包括外部导管、芯杆、柱塞和递送导管。
[0122] 在这些和相关实施方案中，施用一种或多种本文所述的胶囊可以包括向本文提及的期望解剖位置递送，在某些优选实施方案中，如本文提供的CNS注射位点(或PNS注射位
点)。施用可以包括递送，例如经对于正在治疗的特定医学指征和/或对于递送的靶标注射
位点可能是特异性的双导管递送系统。示例性的双导管递送系统可以包括外部引导导管系
统和内部胶囊递送系统。外部引导导管系统可以是钝头，并设计为在插入CNS组织或PNS组
织时降低组织损伤，并且还被设计为当从组织中部分或者完全撤出导管时，在合适的靶标
(受体)组织中产生待被在注射位点处递送胶囊之后一个或多个递送的胶囊占有的空间。利
用柱塞系统将胶囊装载进内部导管，然后利用例如，以及在某些优选实施方案中，靶向/引导/瞄准装置，如立体定位装置，将装载的内部导管系统插入用于引导递送的外部引导导管系统内。
点)。施用可以包括递送，例如经对于正在治疗的特定医学指征和/或对于递送的靶标注射
位点可能是特异性的双导管递送系统。示例性的双导管递送系统可以包括外部引导导管系
统和内部胶囊递送系统。外部引导导管系统可以是钝头，并设计为在插入CNS组织或PNS组
织时降低组织损伤，并且还被设计为当从组织中部分或者完全撤出导管时，在合适的靶标
(受体)组织中产生待被在注射位点处递送胶囊之后一个或多个递送的胶囊占有的空间。利
用柱塞系统将胶囊装载进内部导管，然后利用例如，以及在某些优选实施方案中，靶向/引导/瞄准装置，如立体定位装置，将装载的内部导管系统插入用于引导递送的外部引导导管系统内。
[0123] 例如，为了确保对正在治疗的适应症特异的受控胶囊递送，可以利用微驱动系统以逐步式地精确增量缓慢缩回CNS或PNS组织中靶位点处的整个胶囊递送装置，从而在本文
被称为注射位点的CNS(或PNS)组织中产生空间，其可以容纳一个或多个通过胶囊递送装置
可控释放的递送的胶囊。在递送装置每次增加的缩回之间，可以压缩内部导管的柱塞，从而将一个或多个胶囊缓慢递送入通过撤出外部导管产生的空间位置处(例如注射位点)的空
间内。这种递增式缩回整个胶囊递送装置，随后压缩内部导管的柱塞以将一个或多个胶囊
递送至注射位点(例如CNS注射位点或PNS注射位点)的过程可以重复，直至期望递送至注射
位点的所有或基本上所有胶囊已被递送至靶位点。在一些实施方案中，内部导管中和/或通过撤出胶囊递送装置而产生的空间位置(例如注射位点)处的空间内的胶囊排列的配置可
以提供为注射位点中分层的胶囊结构，其中各层包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、
1、5、16、17、18、19、20或更多个胶囊，和/或在某些其它实施方案中，其可以提供为注射位点中成比例叠加的单个胶囊的一维柱状配置，以具有每层仅可以容纳一个胶囊的直径。此类
注射位点中注射位点和胶囊排列的优选配置可以随期望进行治疗的具体医学指征的变化
而变化和/或随期望注射位点的具体解剖位置而变化和/或可能适合于各位点处待递送的
胶囊的数目。还可以例如通过相对于内部导管的柱塞被压低以向注射位点可控地释放期望
数目的胶囊的距离，改变整个胶囊递送装置撤出的距离来控制注射位点内的胶囊的配置。
被称为注射位点的CNS(或PNS)组织中产生空间，其可以容纳一个或多个通过胶囊递送装置
可控释放的递送的胶囊。在递送装置每次增加的缩回之间，可以压缩内部导管的柱塞，从而将一个或多个胶囊缓慢递送入通过撤出外部导管产生的空间位置处(例如注射位点)的空
间内。这种递增式缩回整个胶囊递送装置，随后压缩内部导管的柱塞以将一个或多个胶囊
递送至注射位点(例如CNS注射位点或PNS注射位点)的过程可以重复，直至期望递送至注射
位点的所有或基本上所有胶囊已被递送至靶位点。在一些实施方案中，内部导管中和/或通过撤出胶囊递送装置而产生的空间位置(例如注射位点)处的空间内的胶囊排列的配置可
以提供为注射位点中分层的胶囊结构，其中各层包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、
1、5、16、17、18、19、20或更多个胶囊，和/或在某些其它实施方案中，其可以提供为注射位点中成比例叠加的单个胶囊的一维柱状配置，以具有每层仅可以容纳一个胶囊的直径。此类
注射位点中注射位点和胶囊排列的优选配置可以随期望进行治疗的具体医学指征的变化
而变化和/或随期望注射位点的具体解剖位置而变化和/或可能适合于各位点处待递送的
胶囊的数目。还可以例如通过相对于内部导管的柱塞被压低以向注射位点可控地释放期望
数目的胶囊的距离，改变整个胶囊递送装置撤出的距离来控制注射位点内的胶囊的配置。
[0124] 例如，已通过从导管释放进单一导管递送系统的末端作为递送通道形成的CNS注射位点而将如本文所述制备的半透性生物相容的胶囊施用于患有帕金森病的患者的硬膜，
从而在注射位点处获得一列叠加的胶囊。Snow等人，2015年6月,Safety and clinical
effects of [immunoprotected(alginate-encapsulated)porcine choroid
plexus cells for xenotransplantation]in patients with Parkinson's disease
(PD):26weeks follow-up.在美国加州圣地亚哥举办的第19届帕金森病病和运动障碍国际
会议上展示的海报论文。.
从而在注射位点处获得一列叠加的胶囊。Snow等人，2015年6月,Safety and clinical
effects of [immunoprotected(alginate-encapsulated)porcine choroid
plexus cells for xenotransplantation]in patients with Parkinson's disease
(PD):26weeks follow-up.在美国加州圣地亚哥举办的第19届帕金森病病和运动障碍国际
会议上展示的海报论文。.
[0125] 如本文别处所注意的，某些考虑的实施方案涉及方法，其包括向一个或多个外周神经系统(PNS)位点，如PNS注射位点施用本文所述的包含CP细胞的生物相容的胶囊。可以
通过利用治疗PNS的相关领域中已经开发的方法来进行此类向PNS注射位点的施用。可以通
过经引导导管或者例如与本文所述的仪器/装置相对应的用于CNS位点其它合适的仪器引
入包含CP的胶囊来实现向PNS注射位点的施用。对于向PNS注射位点的施用，熟悉本领域的
技术人员会识别多个可以接近PNS的解剖位置，包括常规进行许多局部和区域麻醉技术的
位置，如将药剂注射进神经或神经节以及周围区域，任选地使用超声引导。
通过利用治疗PNS的相关领域中已经开发的方法来进行此类向PNS注射位点的施用。可以通
过经引导导管或者例如与本文所述的仪器/装置相对应的用于CNS位点其它合适的仪器引
入包含CP的胶囊来实现向PNS注射位点的施用。对于向PNS注射位点的施用，熟悉本领域的
技术人员会识别多个可以接近PNS的解剖位置，包括常规进行许多局部和区域麻醉技术的
位置，如将药剂注射进神经或神经节以及周围区域，任选地使用超声引导。
[0126] 可以例如用具有足够大的内部直径以容纳本文所述的生物相容的胶囊(通过非限制性实例，其直径可以为400-800微米)的17-至22-号针头来进行注射。然而理想地，向CNS导入胶囊可以使用能够注射进脑部而不损伤CNS血管的专门的导管，对于外周位点，由于其可以被接近以递送至PNS注射位点，偶然的血管损伤，如注射位点附近间质组织中的血管的损伤较少被特别关注。
[0127] 向PNS注射位点的施用将优选利用能够穿透皮肤和/或PNS位点的其它邻近组织的针。参见，例如Admir Hadzic编辑的Hadzic’s Peripheral Nerve Blocks and Anatomy
for Ultrasound-Guided Regional Anesthesia(New York School or Regional
Anesthesia)(2011).722pp.McGraw-Hill,New York,N.Y.,ISBN-13:978-0-0715-4961-5。
还参见，例如Admir Hadzic编辑的Textbook of Regional Anesthesia and Acute Pain
Management(2007)Edited by,1259pp.,McGraw-Hill Education,New York,N.Y.,
ISBN007144906X,9780071449096。还参见，例如Carneiro HM,Teixeira KI,de MP,
Limongi RM,Magacho L.(2016)Comparison of Needle Path,Anesthetic Dispersion,
and Quality of Anesthesia in Retrobulbar and Peribulbar Blocks.Reg Anesth
Pain Med.41(1):37-42。还参见，例如Jeganathan VS1,Jeganathan VP.(2009)Sub-Tenon's anaesthesia:a well tolerated and effective procedure for ophthalmic
surgery.Curr Opin Ophthalmol.20(3):205-9。
for Ultrasound-Guided Regional Anesthesia(New York School or Regional
Anesthesia)(2011).722pp.McGraw-Hill,New York,N.Y.,ISBN-13:978-0-0715-4961-5。
还参见，例如Admir Hadzic编辑的Textbook of Regional Anesthesia and Acute Pain
Management(2007)Edited by,1259pp.,McGraw-Hill Education,New York,N.Y.,
ISBN007144906X,9780071449096。还参见，例如Carneiro HM,Teixeira KI,de MP,
Limongi RM,Magacho L.(2016)Comparison of Needle Path,Anesthetic Dispersion,
and Quality of Anesthesia in Retrobulbar and Peribulbar Blocks.Reg Anesth
Pain Med.41(1):37-42。还参见，例如Jeganathan VS1,Jeganathan VP.(2009)Sub-Tenon's anaesthesia:a well tolerated and effective procedure for ophthalmic
surgery.Curr Opin Ophthalmol.20(3):205-9。
[0128] 在优选实施方案中，施用步骤包括施用治疗有效量的本文所述的包含CP细胞的生物相容的半透性海藻酸盐胶囊，在某些实施方案中其可以包括施用一个或多个各自包含至
少约200、400、600、800、1000、2000、3000、4000、5000、7500或9000个且不超过约10,000个CP细胞的胶囊。在某些实施方案中，可以向CNS(或PNS)注射位点施用不超过1、2、3、4、5、6、7、
8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250、300、
350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200、1300、1400、
1500、1600、1700、1800、1900或2000个胶囊。在某些实施方案中，可以向1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12个或者更多个CNS(或PNS)注射位点施用胶囊。
少约200、400、600、800、1000、2000、3000、4000、5000、7500或9000个且不超过约10,000个CP细胞的胶囊。在某些实施方案中，可以向CNS(或PNS)注射位点施用不超过1、2、3、4、5、6、7、
8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250、300、
350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200、1300、1400、
1500、1600、1700、1800、1900或2000个胶囊。在某些实施方案中，可以向1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12个或者更多个CNS(或PNS)注射位点施用胶囊。
[0129] 在某些实施方案中，向一个或多个CNS(或PNS)注射位点施用胶囊可以包括递送在载体溶液中包含胶囊的悬液，所述载体溶液可以例如包含NaCl、人造脑脊髓液(CSF)、抗坏血酸盐或抗炎剂中的至少一种。示例性的抗炎剂可以选自本领域已知的非甾体类抗炎药
(NSAID)或甾体类抗炎药(例如，Brunton等人，(Eds.),Goodman&Gilman’s The
Pharmacological Basis of Therapeutics-12th Ed.2011McGraw-Hill,New York)，和/或
还可以包含连接蛋白拮抗剂(例如，Chen等人，2014Brain137(Pt 8):2193；Zhang等人，
2014FEBS Lett,588(8):1365；Davidson等人，2014PLoS One 9(5):e96588)。
(NSAID)或甾体类抗炎药(例如，Brunton等人，(Eds.),Goodman&Gilman’s The
Pharmacological Basis of Therapeutics-12th Ed.2011McGraw-Hill,New York)，和/或
还可以包含连接蛋白拮抗剂(例如，Chen等人，2014Brain137(Pt 8):2193；Zhang等人，
2014FEBS Lett,588(8):1365；Davidson等人，2014PLoS One 9(5):e96588)。
[0130] 优选地，在施用步骤之后至少6个月，封装的CP细胞中至少1％、5％、10％、20％、30％、40％或50％仍是存活的。更优选地，在施用步骤之后至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17或18个月，封装的CP细胞中至少1％、5％、10％、20％、30％、40％或50％仍是存活的。
更优选地，在施用步骤之后至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或
24个月，封装的CP细胞中至少5％、10％、20％、30％、40％或50％仍是存活的。更优选地，在施用步骤之后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10年或更多年，封装的CP细胞中至少1％、5％、10％、
20％、30％、40％或50％仍是存活的。优选地，在施用步骤之后至少6个月，更优选地，在施用步骤之后至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，以及更优选地，在施用步骤之后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10年或更多年，生物相容的胶囊的外表面仍然基本没有细胞外基质(ECM)沉积。
16、17或18个月，封装的CP细胞中至少1％、5％、10％、20％、30％、40％或50％仍是存活的。
更优选地，在施用步骤之后至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或
24个月，封装的CP细胞中至少5％、10％、20％、30％、40％或50％仍是存活的。更优选地，在施用步骤之后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10年或更多年，封装的CP细胞中至少1％、5％、10％、
20％、30％、40％或50％仍是存活的。优选地，在施用步骤之后至少6个月，更优选地，在施用步骤之后至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，以及更优选地，在施用步骤之后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10年或更多年，生物相容的胶囊的外表面仍然基本没有细胞外基质(ECM)沉积。
[0131] 可以通过多种既有技术中的任何技术直接或间接实现植入的封装的CP细胞的活力和状态监测。例如，通过神经元18F-氟多巴和/或11C-四苯喹嗪代谢、CSF的生物化学分析或者验尸分析进行的对象神经系统功能的临床评估或者多巴胺能神经功能的正电子发射
断层扫描(PET)评估可以间接指示来源于诱导的CP植入物增加的CSF产生的恢复的功能性。
作为另一实例，可以通过磁共振成像(MRI)技术(Sibson等人，2011Meths.Mol.Biol.711:
379；McAteer等人，2011Meths.Mol.Biol.680:103)或者通过测定CSF和/或一种或多种生物标志物(如C反应蛋白(CRP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-6或者其它标志物)的循环中的水平的方法(例如，Lindqvist等人，2013Brain Behav.Immun.33:183；Frodl等人，
2014Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry,48:295-303；Polachini等人，
2014Neurosci.266:266；Satizabal等人，2012Neurol.78:720)来评估体内的CNS炎症。可将这些以及相关技术用于测定在操作相关的炎症消失之后，植入的封装的CP细胞是否可以激
发炎症反应，其被预期会伴随着有ECM沉积的异物应答。
断层扫描(PET)评估可以间接指示来源于诱导的CP植入物增加的CSF产生的恢复的功能性。
作为另一实例，可以通过磁共振成像(MRI)技术(Sibson等人，2011Meths.Mol.Biol.711:
379；McAteer等人，2011Meths.Mol.Biol.680:103)或者通过测定CSF和/或一种或多种生物标志物(如C反应蛋白(CRP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-6或者其它标志物)的循环中的水平的方法(例如，Lindqvist等人，2013Brain Behav.Immun.33:183；Frodl等人，
2014Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry,48:295-303；Polachini等人，
2014Neurosci.266:266；Satizabal等人，2012Neurol.78:720)来评估体内的CNS炎症。可将这些以及相关技术用于测定在操作相关的炎症消失之后，植入的封装的CP细胞是否可以激
发炎症反应，其被预期会伴随着有ECM沉积的异物应答。
[0132] 考虑到本文所述的CNS植入之后，封装的CP细胞令人惊讶的长寿命，某些其它实施方案考虑在向CNS注射位点施用封装的细胞这一步骤的同时或者之后，使此类CP细胞与本
文提供的CP诱导剂接触。在某些此类实施方案中，可以在对象的头皮下皮下植入奥马耶贮
器(Ommaya,1963Lancet 2:98；Dudrick,2006J.Parenter.Enteral.Nutr.30(1Suppl):
S47)，以提供从贮器至位于或者邻近胶囊植入的CNS位点的导管的流体联通。通过此类贮器或者经可以通过其实现流体至CNS位点附近的递送的其它类似的装置，能够以可以鉴定的
使对象有益地接受所述CP诱导剂的任何时间间隔(例如，每周1、2、3、4、5或6次，每周一次，两周一次、每月一次，两月一次，每季一次，每半年一次，每年一次或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、
10、11、12、13、14、15年或更多年的时间的任何其它间隔)使封装的CP组织细胞与CP诱导剂接触一次或多次。
文提供的CP诱导剂接触。在某些此类实施方案中，可以在对象的头皮下皮下植入奥马耶贮
器(Ommaya,1963Lancet 2:98；Dudrick,2006J.Parenter.Enteral.Nutr.30(1Suppl):
S47)，以提供从贮器至位于或者邻近胶囊植入的CNS位点的导管的流体联通。通过此类贮器或者经可以通过其实现流体至CNS位点附近的递送的其它类似的装置，能够以可以鉴定的
使对象有益地接受所述CP诱导剂的任何时间间隔(例如，每周1、2、3、4、5或6次，每周一次，两周一次、每月一次，两月一次，每季一次，每半年一次，每年一次或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、
10、11、12、13、14、15年或更多年的时间的任何其它间隔)使封装的CP组织细胞与CP诱导剂接触一次或多次。
[0133] 将会理解，除非明确表明与之相反，否则本发明的一些实施方案的实践将利用本领域技术范围内的病毒学、免疫学、微生物学、分子生物学和重组DNA技术中的常规方法，并且下文出于说明的目的描述了其中的许多方法。文献中充分解释了此类技术。参见，例如
Current Protocols in Molecular Biology or Current Protocols in Immunology,
John Wiley & Sons,New York,N.Y.(2009)；Ausubel等人，Short Protocols in
Molecular Biology,3rd ed.,Wiley&Sons,1995；Sambrook和Russell,Molecular Cloning:
A Laboratory Manual(3rd Edition,2001)；Maniatis等人，Molecular Cloning:A
Laboratory Manual(1982)；DNA Cloning:A Practical Approach,vol.I&II(D.Glover,
ed.)；Oligonucleotide Synthesis(N.Gait,ed.,1984)；Nucleic Acid Hybridization
(B.Hames&S.Higgins,eds.,1985)；Transcription and Translation(B.Hames&
S.Higgins,eds.,1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney,ed.,1986)；Perbal,A
Practical Guide to Molecular Cloning(1984)以及其它类似的参考文献。
Current Protocols in Molecular Biology or Current Protocols in Immunology,
John Wiley & Sons,New York,N.Y.(2009)；Ausubel等人，Short Protocols in
Molecular Biology,3rd ed.,Wiley&Sons,1995；Sambrook和Russell,Molecular Cloning:
A Laboratory Manual(3rd Edition,2001)；Maniatis等人，Molecular Cloning:A
Laboratory Manual(1982)；DNA Cloning:A Practical Approach,vol.I&II(D.Glover,
ed.)；Oligonucleotide Synthesis(N.Gait,ed.,1984)；Nucleic Acid Hybridization
(B.Hames&S.Higgins,eds.,1985)；Transcription and Translation(B.Hames&
S.Higgins,eds.,1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney,ed.,1986)；Perbal,A
Practical Guide to Molecular Cloning(1984)以及其它类似的参考文献。
[0134] 可将标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成以及组织培养和转化(例如，电穿孔、脂质体转染)。可以根据制造商的说明书或者如本领域通常完成的或者如本文所述进行酶促反应和纯化技术。通常可以根据本领域众所周知的常规方法以及如贯穿本申请说明书中所
引用和讨论的多种一般性的和更具体地参考文献所述，进行这些以及相关技术和程序。除
非提供具体定义，否则本文所述的与分子生物学、分析化学、合成有机化学以及医药化学关联使用的命名以及分子生物学、分析化学、合成有机化学以及医药化学的实验程序和技术
是本领域众所周知且经常使用的那些。可将标准技术用于重组技术，分子生物学、微生物
学、化学合成，化学分析，药物制备、配制和递送以及患者的治疗。
引用和讨论的多种一般性的和更具体地参考文献所述，进行这些以及相关技术和程序。除
非提供具体定义，否则本文所述的与分子生物学、分析化学、合成有机化学以及医药化学关联使用的命名以及分子生物学、分析化学、合成有机化学以及医药化学的实验程序和技术
是本领域众所周知且经常使用的那些。可将标准技术用于重组技术，分子生物学、微生物
学、化学合成，化学分析，药物制备、配制和递送以及患者的治疗。
[0135] 如本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述”包括复数指代，除非内容另外明确指示。贯穿本说明书，除非上下文另外需要，词语“包含(comprise)”或其变型，如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”将被理解为暗示包括所述的元素或整数或者元素或整数组，但是不排除任何其它元素或整数或者
元素或整数组。本说明书中的各实施方案在细节上进行必要地修正可应用于各其它实施方
案，除非另外明确说明。
元素或整数组。本说明书中的各实施方案在细节上进行必要地修正可应用于各其它实施方
案，除非另外明确说明。
[0136] 等同物：尽管出于说明的目的，本文显示并描述了本发明的具体步骤、元素、实施方案和应用，但是当然应当理解，本发明不限于此，因为本领域技术人员可以进行改进，特别是根据前述教导进行改进，而不背离本发明的精神和范围。因此，除了受所附权利要求的限制，本发明不被限制。
[0137] 通过说明且非限制性地呈现了下述实施例。实施例
[0138] 实施例1
[0139] 用于升高的脑脊髓液(CSF)产生的包含脉络丛(CP)细胞的胶囊的选择
[0140] 该实施例描述了利用CSF组分VEGF作为CSF产生的代表性指示物，选择用于升高的CSF产生的包含CP细胞的胶囊。
[0141] 基本如US2009/0047325和US2009/0214660中所述对新生的猪脉络丛组织进行处理并将其封装于海藻酸盐胶囊中。简言之，从新生的猪的脑部无菌分离CP组织，将其用剪刀切的很碎，用胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化，并经过550μm的不锈钢过滤器，离心并轻轻重悬，以获得包含直径为约50-200μm的细胞簇的组织碎片。通过在室温进行两次单位重力沉降40分钟从血细胞中分离CP细胞簇。如所述，将沉降的CP细胞以每mL大约3,000簇的密度重悬于RPMI培养基/2％新生儿的猪血清中，并在超低附着瓶中培养6-7天，获得球状、卵形和分枝的CP细胞簇。将细胞簇在包含含有高甘露糖醛酸的海藻酸盐的无菌盐溶液中孵育，通过液
滴发生器滴喷入109mM的氯化钙凝胶化溶液，相继用聚-L-鸟氨酸和海藻酸盐包被，以获得
半透性胶囊，其中基本上所有半透性胶囊的直径均为约400μm至约800μm。然后将胶囊在旋转的50mL管中用55mM等渗柠檬酸钠溶液处理2分钟。在包含血清的培养基中维持胶囊，并等份采样，以验证细胞活力。
滴发生器滴喷入109mM的氯化钙凝胶化溶液，相继用聚-L-鸟氨酸和海藻酸盐包被，以获得
半透性胶囊，其中基本上所有半透性胶囊的直径均为约400μm至约800μm。然后将胶囊在旋转的50mL管中用55mM等渗柠檬酸钠溶液处理2分钟。在包含血清的培养基中维持胶囊，并等份采样，以验证细胞活力。
[0142] 将数目相等的等份非选择的(随机)包含CP细胞的胶囊和选择的包含CP细胞的胶囊中每个细胞分泌的VEGF的量进行比较。对于每个胶囊中存在的200至10,000个封装的细
胞，选择的包含CP细胞的胶囊是基于直接显微观察精选的，其中胶囊显示出光滑的外表面，其不被突出的细胞或来自胶囊内部的细胞进程或者表面附着的细胞或组织碎片中断。将24
孔多孔板的培养孔接种500个非选择(随机)的包含CP细胞的胶囊或者500个选择的胶囊，并
在37℃下培养24小时。收集等份的上清液，并根据制造商的说明书，利用ELISA试剂盒
(Human VEGF QuantikineTMELISA,Cat.#DVE00,R&D Systems,Minneapolis,MN)分析VEGF。
还收集等份细胞培养物，以根据提供商的说明书(Cat.#P7589,Life Technologies,Inc./
Thermo Fisher Scientific,Grand Island,NY)？]，利用Quant iTTMPicogreen dsDNA分析进行DNA定量，从而确定各孔中细胞的相对数目。
胞，选择的包含CP细胞的胶囊是基于直接显微观察精选的，其中胶囊显示出光滑的外表面，其不被突出的细胞或来自胶囊内部的细胞进程或者表面附着的细胞或组织碎片中断。将24
孔多孔板的培养孔接种500个非选择(随机)的包含CP细胞的胶囊或者500个选择的胶囊，并
在37℃下培养24小时。收集等份的上清液，并根据制造商的说明书，利用ELISA试剂盒
(Human VEGF QuantikineTMELISA,Cat.#DVE00,R&D Systems,Minneapolis,MN)分析VEGF。
还收集等份细胞培养物，以根据提供商的说明书(Cat.#P7589,Life Technologies,Inc./
Thermo Fisher Scientific,Grand Island,NY)？]，利用Quant iTTMPicogreen dsDNA分析进行DNA定量，从而确定各孔中细胞的相对数目。
[0143] 培养孔可比较的DNA定量揭示，接收500个选择的胶囊(每个胶囊200-10,000个封装的细胞)的孔包含的DNA为接收500个非选择(随机)的胶囊的孔的DNA的3倍。令人惊讶地，接收500个选择的胶囊的孔的上清液包含为来自非选择(随机)的胶囊培养物上清液6倍的
VEGF。当将样本标准化为DNA含量作为基于每个细胞分泌的VEGF的量的反映时，令人惊讶地发现，选择的胶囊比非选择的胶囊分泌略多两倍的VEGF(每μgDNA)(图1)。该结果出人意料，因为之前从未报道过每细胞增加的VEGF产生与较高的细胞密度之间的对应性。
VEGF。当将样本标准化为DNA含量作为基于每个细胞分泌的VEGF的量的反映时，令人惊讶地发现，选择的胶囊比非选择的胶囊分泌略多两倍的VEGF(每μgDNA)(图1)。该结果出人意料，因为之前从未报道过每细胞增加的VEGF产生与较高的细胞密度之间的对应性。
[0144] 实施例2
[0145] 脉络丛诱导剂的鉴定
[0146] 该实施例描述了诱导哺乳动物脉络丛(CP)细胞产生CSF组分的试剂的鉴定，所述CSF组分的水平高于在无诱导剂的情况下CP细胞产生的CSF组分的水平。已知CSF包含多种
作为抗氧化剂发挥功能的组分(例如，Kolmakova等人，2010Neurochem.J.4:41)；这些组分的总体抗氧化特性可被称为总抗氧化能力(TAC)。
作为抗氧化剂发挥功能的组分(例如，Kolmakova等人，2010Neurochem.J.4:41)；这些组分的总体抗氧化特性可被称为总抗氧化能力(TAC)。
[0147] 可以如以上实施例1中所述制备包含CP细胞的脉络丛(CP)细胞簇(5×103簇/mL)，但是不封装，并且在24孔超低(细胞)附着板中于37℃下在5％CO2培养箱中体外培养24或72
小时，以及根据制造商的说明书，利用OxiSelectTMTAC分析(Cat.No.STA-360,Cell
Biolabs,Inc.,San Diego,CA)对培养上清液的总抗氧化能力(TAC)进行测试。为了避免TAC
分析中来自培养基组分的干扰，将培养物在补充有10mM烟酰胺、不含血清、不含苯酚的RPMI培养基中孵育。还通过CP细胞测试了一组候选CP诱导剂对TAC细化(elaboration)的影响。
也将仅接受培养基或者各候选CP诱导剂但无CP细胞簇的对照孔进行孵育，并测试TAC。代表性的候选CP诱导剂如表1中所示：
小时，以及根据制造商的说明书，利用OxiSelectTMTAC分析(Cat.No.STA-360,Cell
Biolabs,Inc.,San Diego,CA)对培养上清液的总抗氧化能力(TAC)进行测试。为了避免TAC
分析中来自培养基组分的干扰，将培养物在补充有10mM烟酰胺、不含血清、不含苯酚的RPMI培养基中孵育。还通过CP细胞测试了一组候选CP诱导剂对TAC细化(elaboration)的影响。
也将仅接受培养基或者各候选CP诱导剂但无CP细胞簇的对照孔进行孵育，并测试TAC。代表性的候选CP诱导剂如表1中所示：
[0148] 表1.候选CP诱导剂
[0149]候选诱导剂 浓度1 浓度2 浓度3
LiCl 2mM 4mM 8mM
环丙沙星 4ug/ml 8ug/ml 16ug/ml
抗坏血酸 1μM 5μM 10μM
乳酸 3mM 10mM 25mM
N乙酰半胱氨酸 7.5μM 15μM 30μM
谷胱甘肽 3μM 6μM 12μM
烟酰胺 10mM 20mM 40mM
LiCl 2mM 4mM 8mM
环丙沙星 4ug/ml 8ug/ml 16ug/ml
抗坏血酸 1μM 5μM 10μM
乳酸 3mM 10mM 25mM
N乙酰半胱氨酸 7.5μM 15μM 30μM
谷胱甘肽 3μM 6μM 12μM
烟酰胺 10mM 20mM 40mM
[0150] TAC分析结果显示于图2中。在测试的候选CP诱导剂中，氯化锂促进CP细胞释放升高的TAC水平，其在72小时之后可容易地检测到。
[0151] 因此，在另一实验中，在不同浓度的LiCl的存在下，将CP簇(5x 103簇/mL)在含有10mM烟酰胺、不含血清、不含苯酚的RPMI培养基中孵育72小时，以确定在针对LiCl的应答
中，CP细胞是否以剂量依赖的形式将抗氧化活性释放进上清液中。这些结果显示于图3A中，其中在减去不存在LiCl的情况下CP簇释放的背景TAC水平，并对不存在CP细胞的情况下各
培养基/LiCl中检测的任何TAC信号进行修正之后，呈现针对LiCl的应答中CP簇释放的可检
测的TAC水平。
中，CP细胞是否以剂量依赖的形式将抗氧化活性释放进上清液中。这些结果显示于图3A中，其中在减去不存在LiCl的情况下CP簇释放的背景TAC水平，并对不存在CP细胞的情况下各
培养基/LiCl中检测的任何TAC信号进行修正之后，呈现针对LiCl的应答中CP簇释放的可检
测的TAC水平。
[0152] 为了确定某些诱导剂可以增加已封装的CP分泌CSF组分，在存在或不存在各种诱导剂(包括LiCl)的情况下，将包含1000个CP的胶囊于37℃下在24孔多孔板中培养24小时。
如实施例1中所述，收集等份上清液，并对VEGF进行分析。也如实施例1中所述，还收集等份细胞培养物，用于DNA定量，从而确定每孔中的相对细胞数目。结果显示于图3B中，其中LiCl和碳酸锂均诱导封装的CP分泌VEGF，其水平高于在不存在诱导剂培养的情况下，封装的CP
分泌的水平。此外，两种其它试剂牛磺酸和MitoQ也诱导封装的CP分泌VEGF。
如实施例1中所述，收集等份上清液，并对VEGF进行分析。也如实施例1中所述，还收集等份细胞培养物，用于DNA定量，从而确定每孔中的相对细胞数目。结果显示于图3B中，其中LiCl和碳酸锂均诱导封装的CP分泌VEGF，其水平高于在不存在诱导剂培养的情况下，封装的CP
分泌的水平。此外，两种其它试剂牛磺酸和MitoQ也诱导封装的CP分泌VEGF。
[0153] 在鉴定与本文提供的诱导剂接触之后，在CP细胞中的表达水平改变的基因的另一实验中，在12mM LiCl不存在(对照)或存在(诱导剂处理)的情况下，将获自12-13天的小猪
3
并在体外培养了20-22天的包含CP细胞的CP簇(5x 10 簇/mL)在包含10mM烟酰胺的不含血
清、不含苯酚的RPMI培养基中培养72小时。收获细胞团，并添加0.25ml TRITM试剂
(Catalog#T9424,Sigma-Aldrich Corporation,St.Louis,MO)，以裂解细胞。将裂解物用移液管上下吹打大约10次，并于-80℃保存直至RNA-Seq分析。将来自对照和处理的CP簇的结
果进行比较，并显示于图8中，图8列出了多种在暴露于LiCl之后，在CP细胞中的表达水平增加(图8A-E)或降低(图8F-K)的猪基因，这些基因被鉴定为编码已知CSF组分的基因。通过已建立的同源分析，鉴定编码人CSF组分的相应人基因(Groenen等人，2012Nature 491
(7424):393-8)。
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并在体外培养了20-22天的包含CP细胞的CP簇(5x 10 簇/mL)在包含10mM烟酰胺的不含血
清、不含苯酚的RPMI培养基中培养72小时。收获细胞团，并添加0.25ml TRITM试剂
(Catalog#T9424,Sigma-Aldrich Corporation,St.Louis,MO)，以裂解细胞。将裂解物用移液管上下吹打大约10次，并于-80℃保存直至RNA-Seq分析。将来自对照和处理的CP簇的结
果进行比较，并显示于图8中，图8列出了多种在暴露于LiCl之后，在CP细胞中的表达水平增加(图8A-E)或降低(图8F-K)的猪基因，这些基因被鉴定为编码已知CSF组分的基因。通过已建立的同源分析，鉴定编码人CSF组分的相应人基因(Groenen等人，2012Nature 491
(7424):393-8)。
[0154] 实施例3
[0155] 植入CNS的封装的异种脉络丛(CP)细胞在不存在免疫抑制方案的情况下的长期体内存活
[0156] 如以上以及US2009/0047325和US2009/0214660中所述制备每个胶囊中包含200至10,000个CP细胞的海藻酸盐封装的新生儿的猪脉络丛(CP)簇。利用设计用于啮齿类脑部移
植的导管，将胶囊(每个受体10个)通过手术植入多重麻醉的斯泼累格-多雷(Sprague-
Dawley)大鼠的纹状体中。将动物维持1-16个月(对于初次实验，从一个月开始收集每月的
时间点；从12个月开始，后续实验提供确认数据)，并以每月的间隔人道地处死样本动物，用于死后脑部的组织学检查。未施用抗炎或免疫抑制处理。
植的导管，将胶囊(每个受体10个)通过手术植入多重麻醉的斯泼累格-多雷(Sprague-
Dawley)大鼠的纹状体中。将动物维持1-16个月(对于初次实验，从一个月开始收集每月的
时间点；从12个月开始，后续实验提供确认数据)，并以每月的间隔人道地处死样本动物，用于死后脑部的组织学检查。未施用抗炎或免疫抑制处理。
[0157] 组织学结果指示，在各处死时间点(9、12或16个月)，植入的胶囊内存在活细胞，并且存在少量或者不存在宿主针对胶囊的免疫排斥、炎症反应或异物应答(例如纤维化疤痕形成)的可检测的迹象。参见图4。将死后的脑部组织处理，用于CP细胞产生的多功能CSF组分色素上皮衍生因子(PEDF，也被称为SerpinF1)的免疫组织学染色(Fernandez-Garcia等
人，2007J.Mol.Med.(Berl.)85:15-22；Barnstable等人，2004Prog.Retin.Eye Res.23:
561；Becerra等人，1995J.Biol.Chem.270:25992；Orgaz等人，2011Melanoma Res.21:285)。
在存在于簇内(图4)以及大鼠脑部组织周围的CP细胞中，可以容易地检测到PEDF。
人，2007J.Mol.Med.(Berl.)85:15-22；Barnstable等人，2004Prog.Retin.Eye Res.23:
561；Becerra等人，1995J.Biol.Chem.270:25992；Orgaz等人，2011Melanoma Res.21:285)。
在存在于簇内(图4)以及大鼠脑部组织周围的CP细胞中，可以容易地检测到PEDF。
[0158] 可将以上所述的各实施方案进行组合，以提供其它实施方案。将本说明书中提及的和/或申请数据表中列出的所有美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利、外国专利申请以及非专利出版物通过引用整体并入本文。如果需要，可对实施方案的方面
进行改进，以利用不同专利、申请和出版物的概念来提供其它实施方案。
进行改进，以利用不同专利、申请和出版物的概念来提供其它实施方案。
[0159] 可以根据以上详细描述对实施方案进行这些以及其它改变。一般而言，在下述权利要求中，使用的术语不应被解释为将权利要求局限于说明书和权利要求中公开的具体实
施方案，而应被解释为包括所有可能的实施方案以及此类权利要求赋予的等同物的全部范
围。因此，权利要求不受本文公开内容限制。
施方案，而应被解释为包括所有可能的实施方案以及此类权利要求赋予的等同物的全部范
围。因此，权利要求不受本文公开内容限制。
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