[0002] 本申请要求2007年4月10日提交的美国临时申请No.60/910,864的权益，对于本文所省略的其中的任何内容，通过引用将其并入本文。
发明领域
[0003] 本发明一般涉及具有有用药理学性质的杂芳基酰胺类似物。本发明进一步涉及此类化合物用于
治疗与P2X7受体活化相关的病症的用途、用于鉴定与P2X7受体结合的其它
试剂的用途和作为检测和
定位P2X7受体的探针的用途。
[0004] 发明背景
[0005]
疼痛感受或伤害感受是通过一组专
门的感觉神经元的周围末梢(称为“伤害性
感受器”)介导的。在
哺乳动物中，各种各样的物理和化学刺激引起此类神经元的活化，导致对潜在有害刺激的识别。然而，伤害性感受器的不恰当活化或过度活化可导致使人虚弱的急性或慢性疼痛。
[0006] 典型地由神经系统损伤产生的神经病性疼痛(neuropathic pain)涉及：在没有刺激情况下的疼痛
信号传递，来自通常无害刺激的疼痛(异常性疼痛)和来自通常的疼痛刺激的增强的疼痛(痛觉过敏)。大多数情况下，认为神经病性疼痛的出现是由于周围神经系统初始损伤(例如，通过直接损伤或全身
疾病)之后的周围和中枢神经系统的致敏。神经病性疼痛典型地是灼痛(burning)、闪电样痛(shooting)和其强度方面不减弱，并且有时可比初始损伤或引起它的疾病过程更使人虚弱。
[0007] 神经病性疼痛的现有治疗一般是次最佳的。阿片制剂(例如吗啡)是有效的
镇痛药，但它们的有效性是有限的，这是由于它们的不良
副作用，例如身体成瘾和
戒断性能，以及呼吸
抑郁症，情绪变化和降低肠活动性(伴随有便秘、恶心、呕吐和内分泌与
植物性神经系统的变化)。另外，神经病性疼痛常常对常规阿片样物质止痛方案或对用其它药物(例如加巴喷丁)的治疗无反应或只是部分地敏感。使用N-甲基-D-天冬
氨酸拮抗剂氯胺
酮或α(2)-肾上腺素能激动剂可乐定进行治疗，可以降低急性或慢性疼痛，并且允许减少阿片样物质的消耗，但这些药剂由于副作用而常常具有差的耐受性。
[0008] 现有疗法不能胜任或有问题的另一种普通病症是
炎症。短暂性炎症是保护哺乳动物免受病原体侵袭的有利机理。然而，不受控制的炎症导致组织损伤和疼痛，并且是许多疾病的
基础原因，所述疾病包括哮喘以及其它过敏性、感染性、自身免疫性、变性和特发性疾病。现有治疗常常显示低效果、延迟效果或仅仅具有暂时性效果、具有不合需要的副作用和/或缺乏选择性。对于克服目前用于免疫抑制或用于治疗或
预防炎性病症的药物的一个或多个缺点的新药存在持续需要，所述病症包括变应性病症、自身免疫病症、
纤维发生病症和神经变性疾病，例如多发性硬化、
肌萎缩侧索硬化、阿尔茨海默氏病和亨廷顿病。
[0009] P2X7受体(“P2X7”)是通过ATP活化的配体门控型离子通道，并且存在于各种细胞类型中，包括中枢神经系统中的小胶质细胞和涉及炎症和免疫系统功能的细胞。尤其，P2X7涉及淋巴细胞和单核细胞/巨噬细胞的活化，导致从这些细胞中增加释放促炎细胞因子(例如TNFα和IL-1β)。最近的研究表明，在炎症(例如类
风湿性关节炎及其它自身免疫疾病、骨关节炎、葡萄膜炎、哮喘、慢性阻塞性
肺病和炎性肠病)或间质性纤维化状态下抑制P2X7活化产生治疗效果。这些及其它研究表明，P2X7拮抗剂可以用于治疗和预防疼痛(包括急性、慢性和神经病性疼痛)，以及各种其它病症，包括骨关节炎、类风湿性关节炎、关节硬化、炎性肠病、阿尔茨海默氏病、创伤性脑损伤、哮喘、慢性阻塞性肺病和内脏的纤维化(例如间质性纤维化)。
[0010] 对于此类治疗，小分子P2X7拮抗剂是合乎需要的。本发明满足这种需要，并且提供进一步的相关优点。
[0011] 发明概述
[0012] 本发明提供式I的杂芳基酰胺类似物及此类化合物的药学上可接受的盐：
[0013] 式I
[0014] 在式I中：
[0015] T、U和V独立地选自CR3、CRA和N；在某些实施方案中，确切地(exactly)，T、U和V中的一个是CRA；
[0016] W是-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)-或-NR4-NR4-C(＝O)-；
[0017] X不存在，或是被0至4个独立选自下列的取代基取代的C1-C6亚烷基：(i)C1-C4烷基、(C3-C8环烷基)C0-C2烷基和苯基C0-C2烷基；(ii)一起形成3至7元环烷基或杂环烷基环的取代基；和(iii)与R4一起形成4至7元杂环烷基的取代基；
[0018] Y是C1-C8烷基、C3-C16环烷基、4至16元杂环烷基、6至16元芳基或5至16元杂芳基，其各自任选被取代，且其各自优选被0至6个独立地选自下列的取代基取代：羟基、卤素、氰基、氨基、硝基、
氧代、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6氨基烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基、C1-C6烷基磺酰基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基羰基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基和(C1-C6烷基)磺酰氨基；
[0019] Z1和Z3独立地为N、CH或取代的
碳(例如CR2)；
[0020] Z2是N、CH或取代的碳(例如CRA或CR2)；
[0021] 每个R2和每个R3独立地选自氢、卤素、氰基、氨基、硝基、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6氨基烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷酰基、C2-C6烷基醚、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基羰基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基和(C1-C6烷基)磺酰氨基；
[0022] 每个R4独立地是氢、C1-C6烷基、(C3-C8环烷基)C0-C2烷基、或与X的取代基一起形成4至7元杂环烷基；
[0023] RA是式-L-A-M的基团，其中：
[0024] L不存在，或是C1-C6亚烷基，任选通过用碳-碳双键或碳-碳三键代替碳-碳单键将其改性(modified)，所述亚烷基任选被氧代或酸性部分(acidic moiety)(例如-COOH、-SO3H、-SO2NH2、-PO3H2、四唑或噁二唑酮(oxadizaolone))取代；
[0025] A不存在，或是CO、O、NR6、S、SO、SO2、CONR6、NR6CO、(C4-C7环烷基)C0-C4亚烷基或(4至7元杂环烷基)C0-C4亚烷基；其中R6是氢或C1-C6烷基；和
[0026] M是：
[0027] (i)羟基、氰基、氨基、氨基羰基、氨基磺酰基或COOH；或
[0028] (ii)C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、5至10元碳环、4至10元杂环、C1-C6烷酰氧基、C1-C6烷酰基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、C1-C6烷基磺酰氧基、单或二-C1-C6烷基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基、或单或二-(C1-C6烷基)氨基羰基；其各自任选被取代，并且其各自优选被0至4个独立地选自下列的取代基取代：氧代、氨基、卤素、羟基、氰基、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基、单或二-(C1-C6烷基氨基)羰基和4至7元杂环。
[0029] 在某些方面中，Y是C3-C16环烷基、4至16元杂环烷基、6至16元芳基或5至16元杂芳基，其各自被0至6个独立地选自下列的取代基取代：羟基、卤素、氰基、氨基、硝基、氧代、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6氨基烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基、C1-C6烷基磺酰基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基羰基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基和(C1-C6烷基)磺酰氨基；
[0030] 在某些方面中，式I的杂芳基酰胺类似物是P2X7拮抗剂，在测定P2X7拮抗活性的体外试验中具有不大于20微摩尔、10微摩尔、5微摩尔、1微摩尔、500纳摩尔或100纳摩尔的IC50值。在某些实施方案中，在浓度等于该IC50、10倍IC50或100倍IC50和/或在2,500nM的浓度条件下，此类P2X7拮抗剂在P2X7活性的体外试验(即，在本文
实施例4中提供的试验)中没有显示可检测的激动剂活性。
[0031] 在某些方面中，用可检测的标记物来标记(例如
放射性标记或
荧光素结合(conjugated))本文提供的杂芳基酰胺类似物。
[0032] 在其它方面中，本发明进一步提供药物组合物，其包含与生理学上可接受的载体或赋形剂组合的至少一种本文提供的杂芳基酰胺类似物。
[0033] 在另外方面中，提供调节(例如降低)细胞P2X7活化或活性的方法，其包括使表达P2X7的细胞(例如小胶质细胞、星形细胞或周围巨噬细胞或单核细胞)与至少一种本文所描述的P2X7调节剂
接触。此类接触可以在体内或体外发生，并且一般使用足以可检测地改变体外P2X7活性的P2X7调节剂浓度(如使用提供于实施例4中的试验所测定)来进行。
[0034] 本发明进一步提供在患者中治疗对P2X7调节敏感(responsive to)的病症的方法，其包括给予所述患者
治疗有效量的至少一种本文所描述的P2X7拮抗剂。
[0035] 在其它方面中，提供治疗患者的疼痛的方法，其包括给予患有疼痛(或处于疼痛风险之中)的患者治疗有效量的至少一种本文所描述的P2X7拮抗剂。
[0036] 在其它方面中，提供治疗患者的炎症的方法，其包括给予患有炎症(或处于炎症风险之中)的患者治疗有效量的至少一种本文所描述的P2X7拮抗剂。
[0037] 进一步提供治疗患者的骨关节炎、类风湿性关节炎、关节硬化、炎性肠病、阿尔茨海默氏病、创伤性脑损伤(traumatic brain injury)、哮喘、慢性阻塞性肺病、眼部病症(ocular disorder)(例如
青光眼)、肝硬化、狼疮、硬皮病或内脏纤维化(例如间质性纤维化)的方法，其包括给予患有一种或多种上述病症(或处于一种或多种上述病症风险之中)的患者治疗有效量的至少一种本文所描述的P2X7拮抗剂。
[0038] 在另外方面中，本发明提供抑制患者的
视网膜神经节细胞死亡的方法，其包括给予所述患者治疗有效量的至少一种本文所描述的P2X7拮抗剂。
[0039] 进一步提供鉴定与P2X7结合的药剂的方法，其包括：(a)在允许化合物与P2X7结合的条件下，使P2X7与标记化合物(其为本文所描述的杂芳基酰胺类似物)接触，由此产生结合的标记化合物；(b)在没有测试试剂的情况下，检测与结合的标记化合物的量对应的信号；(c)使结合的标记化合物与测试试剂接触；(d)在测试试剂的存在下，检测与结合的标记化合物的量对应的信号；和(e)与步骤(b)中所检测信号相比较，检测步骤(d)中所检测信号的降低。
[0040] 在另外方面中，本发明提供测定样品中存在或不存在P2X7的方法，其包括：(a)在允许通过具有P2X7活性的化合物调节的条件下，使样品与本文所描述的化合物接触；和(b)对调节P2X7活性的化合物
水平的信号指示(indicative)进行检测。
[0041] 本发明还提供
包装的药物制剂，其包含：(a)在容器中的本文所描述的药物组合物；和(b)使用该组合物进行以下用途的
说明书：(i)治疗对P2X7调节敏感的一种或多种病症，例如疼痛、骨关节炎、类风湿性关节炎、关节硬化、炎性肠病、阿尔茨海默氏病、创伤性脑损伤、哮喘、慢性阻塞性肺病、眼部病症(例如青光眼)、肝硬化、狼疮、硬皮病和/或内脏的纤维化(例如间质性纤维化)，或(ii)提供视网膜的神经保护(例如抑制视网膜神经节细胞的死亡)。
[0042] 在又一个方面中，本发明提供制备本文所公开化合物(包括中间体)的方法。
[0043] 本发明的这些及其它方面参考下列详细说明而变得明显。
[0044] 详细说明
[0045] 如上所述，本发明提供杂芳基酰胺类似物。在各种情况下，此类化合物可用于体外或体内调节P2X7活性。
[0046] 术语
[0047] 本文一般使用标准命名来描述化合物。对于具有不对称中心的化合物，应该理解(除非另作说明)，包括所有的旋光异构体及其混合物。另外，具有碳-碳双键的化合物可以Z-和E-形式存在，除非另作说明，该化合物的所有异构体形式包括在本发明中。当化合物以各种互变异构体形式存在时，所叙述的化合物不限于任何一个具体互变异构体，而是有意包括所有的互变异构体形式。本文使用包括各变量(例如R1、A、X)的通式来描述某些化合物。除非另作说明，此类化学式中的每个变量独立于任何其它变量来定义，在化学式中出现超过一次的任何变量在每次出现时独立地定义。
[0048] 本文使用的短语“杂芳基酰胺类似物”包括式I的所有化合物，以及本文提供的其它式的化合物(包括任何对映体、外消旋体和立体异构体)和其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，将本文提供的取代的嘧啶酮类化合物分离，以致基本上不含残余
有机溶剂(即，任何此类溶剂在制剂中的存在量等于或低于由International Council on Harmonisation of TechnicalRequirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use(ICH)所设定的限制)。
[0049] 本文所叙述化合物的“药学上可接受的盐”是适合与人或动物的组织接触使用，而没有过度的毒性或致癌性并且优选没有刺激性、过敏反应或其它问题或并发症的酸式盐或
碱式盐。此类盐包括碱性残基(例如胺)的无机和
有机酸式盐，以及酸性残基(例如
羧酸)的碱金属盐或有机盐。用于盐形成的具体的药学上可接受的阴离子包括但不限于：乙酸盐、2-乙酰氧基苯
甲酸盐、
抗坏血酸盐、
苯甲酸盐、碳酸氢盐、溴化物、
乙二胺四乙酸钙、碳酸盐、氯化物、
柠檬酸盐、二
盐酸盐、二
磷酸盐、二
酒石酸盐、乙二胺四乙酸盐、依托酸盐(estolate)(乙基
琥珀酸盐)、甲酸盐、富
马酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate)、葡糖酸盐、谷氨酸盐、
乙醇酸盐、乙醇酰阿散酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明(hydrabamine)、
氢溴酸盐、盐酸盐、
氢碘酸盐、羟基马来酸盐、羟基
萘甲酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、
扁桃酸盐、甲基溴(methylbromide)、甲基
硝酸盐、甲基
硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐(napsylate)、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐、聚半乳糖
醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、
硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺胺酸盐、
硫酸盐、磺酸盐(包括苯磺酸盐(苯磺酸盐)、樟磺酸盐(camsylate)(樟脑磺酸盐)、乙二磺酸盐(乙烷-1，2-二磺酸盐)、乙磺酸盐(esylate)(乙磺酸盐)、2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐(mesylate)(甲磺酸盐)、三氟甲磺酸盐(triflate)(三氟甲磺酸盐)和
甲苯磺酸盐(tosylate)(
对甲苯磺酸盐)、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐和三乙基碘(triethiodide)。类似地，用于盐形成的药学上可接受的阳离子包括但不限于：铵、苄星、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺、普鲁卡因和金属(例如
铝、钙、锂、镁、
钾、钠和锌)。本领域普通技术人员将识别本文所提供化合物的其它药学上可接受的盐。通常，通过任何常规的化学方法，可以从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成药学上可接受的酸或碱式盐。简要地说，此类盐可通过如下方式制备：使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的合适碱或酸在水或在
有机溶剂中或在该两种的混合物中反应；通常，优选使用非水性介质，例如醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、异丙醇或乙腈。
[0050] 显然，可以(但不必需)将本文提供的化合物和其盐配制为水合物，而且此类水合物由本文所叙述的式、名称和结构所涵盖。另外，本文所提供化合物的各种非水合(non-hydrate)的溶剂合物、非共价配合物、晶体形式和多晶型物在本发明的范围之内。本文还提供所述式的化合物的前药。“前药”是可以不充分满足本文所提供化合物的结构要求，但在给予患者之后进行体内修饰，产生本文所提供式的化合物的化合物。例如，前药可以是此类化合物的酰化衍
生物。前药包括其中羟基、胺或巯基与给予哺乳动物对象时可以裂解而分别形成游离羟基、氨基或巯基的任何基团键合的化合物。前药的例子包括但不限于：乙酸酯、甲酸酯、苯甲酸酯和本文所提供化合物中的醇和胺官能团的肽衍生物。一般通过以使该修饰可以在体内裂解产生母体化合物的方式修饰化合物中所存在的官能团来制备前药。
[0051] 本文使用的术语“烷基”是指直链或支链饱和脂族
烃。烷基包括具有1至8个碳
原子的基团(C1-C8烷基)、具有1至6个碳原子的基团(C1-C6烷基)和具有1至4个碳原子的基团(C1-C4烷基)，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基和3-甲基戊基。“C0-Cn烷基”是指单共价键(C0)或具有1至n个碳原子的烷基；例如“C0-C4烷基”是指单共价键或C1-C4烷基。在有些情况下，具体地标明烷基的取代基。例如，“C1-C6羟烷基”是被至少一个-OH取代的C1-C6烷基；“C1-C6氨基烷基”是被至少一个-NH2取代的C1-C6烷基；C1-C6氰基烷基是被至少一个-CN取代的C1-C6烷基。
[0052] “烯基”是指直链或支链烯烃基团，其包含至少一个不饱和碳-碳双键。烯基包括C2-C8烯基、C2-C6烯基和C2-C4烯基，其分别具有2至8个、2至6个或2至4个碳原子，例如乙烯基、烯丙基或异丙烯基。“C2-C6氰基烯基”是被至少一个-CN取代的C2-C6烯基。
[0053] “炔基”是指直链或支链炔烃基团，其具有一个或多个不饱和碳-碳键，其中至少一个是三键。炔基包括C2-C8炔基、C2-C6炔基和C2-C4炔基，其分别具有2至8个、2至6个或2至4个碳原子。
[0054] “亚烷基”是指如上所定义的二价烷基。C1-C2亚烷基是亚甲基或亚乙基；C0-C4亚烷基是单共价键或具有1、2、3或个碳原子的亚烷基；C0-C2亚烷基是单共价键、亚甲基或亚乙基。“任选通过用碳-碳双键或碳-碳三键替代碳-碳单键来改性的C1-C6亚烷基”是如上所述的C1-C6亚烷基或二价C2-C6烯烃或C2-C6炔烃。
[0055] “环烷基”是包含一个或多个饱和和/或部分饱和环的基团，其中所有的环成员是碳，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、金刚烷基、桃金娘烷基(myrtanyl)和上述的部分饱和变体，例如环己烯基。环烷基不包含芳香环或杂环。某些环烷基是C3-C7环烷基，其中环烷基含有具有3至7个环成员的单环，其中所有的环成员是碳。“(C3-C7环烷基)C0-C4烷基”是通过单共价键或C1-C4亚烷基连接的C3-C7环烷基。
[0056] “(C4-C7环烷基)C0-C4亚烷基”是通过两个单共价键与两个特定部分连接的二价(C3-C7环烷基)C0-C4烷基。通常，一个单共价键位于环状部分上，另一个位于亚烷基部分上(如果存在的话)；或者，如果不存在亚烷基，两个单共价键在不同的环成员上。例如，对于基团RA，如果A是(C6环烷基)C2亚烷基，M是COOH，则如此形成的一个RA部分是：
[0057]
[0058] 本文使用的“烷氧基”是指通过氧桥连接的上述烷基。烷氧基包括C1-C6烷氧基和C1-C4烷氧基，其分别具有1至6个或1至4个碳原子。代表性的烷氧基是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基和3-甲基戊氧基。
[0059] 本文使用的术语“氧代”指的是碳原子的氧取代基，其导致形成羰基(C＝O)。作为非芳香碳原子的取代基的氧代基团导致-CH2-转化为-C(＝O)-。作为芳香碳原子的取代基的氧代基团导致-CH-转化为-C(＝O)-，并且可以导致
芳香性的丧失。
[0060] 术语“烷酰基”是指酰基(例如-(C＝O)-烷基)，其中碳原子在直链或支链烷基排列中，并且其中通过酮基团的碳进行连接。烷酰基具有标明数目的碳原子，其中酮基团的碳包括在该编号(numbered)的碳原子中。例如，C2烷酰基是-(C＝O)CH3。烷酰基包括例如C2-C8烷酰基、C2-C6烷酰基和C2-C4烷酰基，其分别具有2至8个、2至6个或2至4个碳原子。“C1烷酰基”是指-(C＝O)H，其(与C2-C8烷酰基一起)被术语“C1-C8烷酰基”所涵盖。
[0061] “烷基醚”是指直链或支链醚取代基(即，被烷氧基取代的烷基)。烷基醚包括C2-C8烷基醚、C2-C6烷基醚和C2-C4烷基醚，其分别具有2至8个、2至6个或2至4个碳原子。C2烷基醚取代基是-CH2-O-CH3。
[0062] 术语“烷氧羰基”是指通过酮(-(C＝O)-)桥连接的烷氧基(即，具有一般结构-C(＝O)-O-烷基的基团)。烷氧羰基包括C1-C8、C1-C6和C1-C4烷氧羰基，其在基团的烷基部分中分别具有1至8个、1至6个或1至4个碳原子(即，酮桥的碳不包含在标明数目的碳原子中)。“C1烷氧羰基”是指-C(＝O)-O-CH3；C3烷氧羰基表示-C(＝O)-O-(CH2)2CH3或-C(＝O)-O-(CH)(CH3)2。
[0063] 本文使用的“烷酰氧基”是指通过氧桥连接的烷酰基(即，具有一般结构-O-C(＝O)-烷基的基团)。烷酰氧基包括C1-C8、C1-C6和C1-C4烷酰氧基，其在基团的烷基部分中分别具有1至8个、1至6个或1至4个碳原子。例如，“C1烷酰氧基”是指-O-C(＝O)-CH3。
[0064] 类似地，本文使用的“烷酰基氨基”是指通过氮桥连接的烷酰基(即，具有一般结构-N(R)-C(＝O)-烷基的基团)，其中R是氢或C1-C6烷基。烷酰基氨基包括C1-C8、C1-C6和C1-C4烷酰基氨基，其在基团的烷基部分中分别具有1至8个、1至6个或1至4个碳原子。
[0065] “烷基磺酰基”是指式-(SO2)-烷基的基团，其中硫原子是连接点。烷基磺酰基包括C1-C6烷基磺酰基和C1-C4烷基磺酰基，其分别具有1至6个或1至4个碳原子。甲基磺酰基是一个代表性的烷基磺酰基。“C1-C4卤代烷基磺酰基”是具有1至4个碳原子，并且被至少一个卤素取代的烷基磺酰基(例如，三氟甲磺酰基)。
[0066] “烷基磺酰氨基”是指式-N(R)-(SO2)-烷基的基团，其中R是氢或C1-C6烷基，氮原子是连接点。烷基磺酰氨基包括C1-C6烷基磺酰氨基和C1-C4烷基磺酰氨基，其分别具有1至6个或1至4个碳原子。甲基磺酰氨基是代表性的烷基磺酰氨基。“C1-C6卤代烷基磺酰氨基”是具有1至6个碳原子，并且被至少一个卤素取代的烷基磺酰氨基(例如，三氟甲磺酰氨基)。
[0067] “氨基磺酰基”是指式-(SO2)-NH2的基团，其中硫原子是连接点。术语“单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基”是指满足式-(SO2)-NR2的基团，其中硫原子是连接点，其中一个R是C1-C6烷基，另一个R是氢或独立选择的C1-C6烷基。
[0068] “烷基氨基烷基”是指通过亚烷基连接的烷基氨基(即，具有一般结构-亚烷基-NH-烷基或-亚烷基-N(烷基)(烷基)的基团)，其中每个烷基独立地选自烷基、环烷基和(环烷基)烷基。烷基氨基烷基包括例如单和二-(C1-C8烷基)氨基C1-C8烷基、单和二-(C1-C6烷基)氨基C1-C6烷基以及单和二-(C1-C6烷基)氨基C1-C4烷基。“单或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C6烷基”是指通过单共价键或C1-C6亚烷基连接的单或二-(C1-C6烷基)氨基。下列是代表性的烷基氨基烷基：
[0069]
[0070] 显然，术语“烷基氨基”和“烷基氨基烷基”中使用的“烷基”的定义与所有其它含有烷基的基团所使用的(例如包括在环烷基和(环烷基)烷基(例如，(C3-C7环烷基)C0-C6烷基中的))“烷基”的定义有区别。
[0071] 术语“氨基羰基”是指酰胺基(即，-(C＝O)NH2)。“单或二-(C1-C6烷基)氨基羰基”是指式-(C＝O)-N(R)2的基团，其中羰基是连接点，一个R是C1-C6烷基，另一个R是氢或独立选择的C1-C6烷基。
[0072] “单或二-(C1-C6烷基)氨基羰基C0-C4烷基”是其中一个或两个氢原子被C1-C6烷基置换，且其通过单共价键连接的氨基羰基(即，单或二-(C1-C6烷基)氨基羰基)或通过C1-C4亚烷基连接的氨基羰基(即，-(C0-C4烷基)-(C＝O)N(C1-C6烷基)2)。如果两个氢原子均被如此置换，那么C1-C6烷基可以相同或不同。
[0073] 术语“氨基磺酰基”是指磺酰胺基团(即，-(SO2)NH2)。“单或二-(C1-C8烷基)氨基磺酰基”是指式-(SO2)-N(R)2的基团，其中硫原子是连接点，一个R是C1-C8烷基，另一个R是氢或独立选择的C1-C8烷基。
[0074] “单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基C0-C4烷基”是其中一个或两个氢原子被C1-C6烷基置换，并且其通过单共价键连接的氨基磺酰基(即，单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基)或通过C1-C4亚烷基连接的氨基磺酰基(即，-(C1-C4烷基)-(SO2)N(C1-C6烷基)2)。如果两个氢原子均被如此置换，那么C1-C6烷基可以相同或不同。
[0075] 术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
[0076] “卤代烷基”是被1个或多个独立选择的卤素取代的烷基(例如“C1-C6卤代烷基”具有1至6个碳原子)。卤代烷基的例子包括但不限于：单、二或三氟甲基；单、二或三氯甲基；单、二、三、四或五氟乙基；单、二、三、四或五氯乙基；和1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型的卤代烷基是三氟甲基和二氟甲基。术语“卤代烷氧基”是指通过氧桥连接的如上定义的卤代烷基。
[0077] 不在两个字母或符号之间的破折号(“-”)用于表示取代基的连接点。例如，-CONH2是通过碳原子连接的。
[0078] “碳环”或“碳环基团”包含至少一个完全由碳-碳键形成的环(本文中称作碳环)，并且不含有杂环。除非另作说明，在碳环中的每个环可以独立地是饱和的、部分饱的和芳族的，并且如所指明的，是任选取代的。碳环一般具有1至3个稠合的、侧挂(pendant)环或螺环，并且任选进一步含有一个或多个亚烷基桥；在某些实施方案中，碳环具有一个环或两个稠环。典型地，每个环含有3至8个环成员(即C3-C8)；在某些实施方案中，叙述了C5-C7环。包含稠合环、侧挂环或螺环的碳环典型地含有9至16个环成员。某些代表性的碳环是上述环烷基(例如，环己基、环庚基或金刚烷基)。其它碳环是芳基(即，含有至少一个芳族碳环，有或者没有一个或多个其它芳族和/或环烷基环)。此类芳基碳环包括例如苯基、萘基(例如1-萘基和2-萘基)、芴基、茚满基和1，2，3，4-四氢萘基。
[0079] 本文叙述的某些碳环是C6-C10芳基C0-C8烷基(即，其中包含至少一个芳香环的6至10元碳环基团通过单共价键或C1-C8亚烷基连接的基团)。通过单共价键或C1-C2亚烷基连接的苯基表示为苯基C0-C2烷基(例如，苄基、1-苯基-乙基和2-苯基-乙基)。
[0080] “杂环”或“杂环基团”具有1至3个稠合环、侧挂环或螺环，其中的至少一个是杂环(即，一个或多个环原子是独立地选自O、S和N的杂原子，其余环原子是碳)。其它的环(如果存在的话)可以是杂环或碳环。典型地，杂环包含1、2、3或4个杂原子；在某些实施方案中，每个杂环具有1或2个杂原子(每个环)。每个杂环一般含有3至8个环成员(在某些实施方案中叙述了具有4或5至7个环成员的环)，并且包含稠合环、侧挂环或螺环的杂环典型地含有9至14个环成员。某些杂环包含硫原子作为环成员；在某些实施方案中，硫原子被氧化为SO或SO2。除非另作说明，杂环可以是杂环烷基(即，每个环是饱和或部分饱和的)，例如4至7元杂环烷基，其一般包含1、2、3或4个独立地选自C、O、N和S的环原子；或杂芳基(即，该基团中的至少一个环是芳香环)，例如5至10元杂芳基(其可以是单环或双环)或6元杂芳基(例如吡啶基或嘧啶基)。N-连接的杂环基团是通过成分氮原子c(omponent nitrogen atom)连接的。
[0081] “杂环C0-C4烷基”是通过单共价键或C1-C4亚烷基连接的杂环基团。“(4至7元杂环烷基)C1-C4烷基”是通过C1-C4亚烷基连接的、具有4至7个环成员的杂环烷基环。
[0082] “(4至7元杂环烷基)C0-C4亚烷基”是通过两个单共价键与两个特定部分连接的二价(4至7元杂环烷基)C0-C4烷基。通常，一个此类单共价键位于环状部分上，另一个位于亚烷基部分上(如果存在的话)；或者，如果不存在亚烷基，两个此类单共价键在不同的环成员上。例如，对于基团RA，如果A是(哌啶基)C2亚烷基，M是COOH，则如此形成的一个RA部分是：
[0083]
[0084] 本文使用的“取代基”是指与感兴趣的分子内的原子共价键合的分子部分。例如，环取代基可以是诸如卤素、烷基、卤代烷基或其它基团的部分，其与作为环成员的原子(优选碳或氮原子)共价键合。芳族基的取代基一般与环碳原子共价键合。术语“取代”是指在分子结构中用取代基替代氢原子，以使
指定原子上的化合价不被超出，且由取代产生化学上稳定的化合物(即，可以被分离、表征和测试生物活性的化合物)。
[0085] “任选取代的”基团是未取代的，或在一个或多个可利用
位置被非氢基团取代，典型地在1、2、3、4或5位被一个或多个合适基团(其可以相同或不同)取代。任选取代还可以用短语“被0至X个取代基取代”来表示，其中X是可能的取代基的最大数目。某些任选取代的基团可以被0至2个、3个或4个独立选择的取代基取代(即，是未取代的或至多被所述最大数目的取代基取代)。其它任选取代的基团被至少一个取代基取代(例如，被1至2个、3个或4个独立选择的取代基取代)。
[0086] 在下文中，术语“P2X7”是指任何P2X7受体，优选哺乳动物受体，例如美国
专利No.6,133,434中公开的人或大鼠P2X7受体，以及在其它物种中发现的其同系物。
[0087] “P2X7调节剂”在本文也称为“调节剂”，其是调节P2X7活化和/或P2X7介导的活性(例如信号转导)的化合物。本文具体提供的P2X7调节剂是式I的化合物和其药学上可接受的盐。调节剂可以是P2X7激动剂或拮抗剂。
[0088] 如果调节剂可检测地抑制P2X7-介导的信号转导(使
用例如实施例4中提供的代表性试验)，则认为该调节剂是“拮抗剂”；在提供于实施例4中的试验中，此类拮抗剂抑制P2X7活化，一般具有小于20微摩尔，优选小于10微摩尔，更优选小于5微摩尔，更优选小于1微摩尔，更加优选小于500纳摩尔，最优选小于100纳摩尔的IC50值。P2X7拮抗剂包括中性拮抗剂和逆激动剂。
[0089] P2X7的“逆激动剂”是将P2X7活性降低到低于其基础活性水平(在没有加入配体的情况下)的化合物。P2X7的逆激动剂还可以抑制P2X7的配体的活性，和/或抑制配体与P2X7的结合。P2X7的基础活性以及由于存在P2X7拮抗剂而造成的P2X7活性降低，可以用钙转移试验(calcium mobilizationassay)(例如实施例4的试验)来测定。
[0090] P2X7的“中性拮抗剂”是抑制P2X7的配体的活性，但不显著改变P2X7的基础活性的化合物(即，在没有配体的情况下进行的如实施例4中描述的钙转移试验中，将P2X7活性降低不超过10％，优选不超过5％，更优选不超过2％；最优选，检测不到活性的降低)。P2X7的中性拮抗剂可以抑制配体与P2X7的结合。
[0091] 本文使用的“P2X7激动剂”是将P2X7的活性提高至高于P2X7的基础活性水平的化合物(即，增加P2X7活化和/或P2X7介导的活性，例如信号转导)。可以使用提供于实施例4中的代表性试验来检测P2X7激动剂活性。P2X7激动剂包括ATP和2′(3′)-O-(4-苯甲酰基-苯甲酰基)腺苷5′-三磷酸(BzATP)。
[0092] “治疗有效量”(或剂量)是给予患者时对患者产生可识别益处(例如，提供可检测的对至少一种所治疗的病症的缓解)的量。可以使用任何适当标准来检测此类减轻，所述标准包括一种或多种症状(例如疼痛)的减轻。治疗有效量或剂量一般在体液(例如血液、
血浆、血清、CSF、滑液、淋巴、细胞间隙
流体、泪水或尿)中产生足以改变P2X7介导的信号转导(使用提供于实施例4中的试验)的化合物浓度。显然，根据所给予化合物针对的适应症，给予单一剂量之后，可识别的患者益处是显而易见的，或可以在按照预定方案重复给予治疗有效量之后变得显而易见。
[0093] 本文使用的“统计上显著”是指与对照物的差异在p＜0.1的显著性水平(使用统计显著性的标准参数试验例如学生t检验法来测定)的结果。
[0094] “患者”是用本文提供的化合物治疗的任何个体。患者包括人以及其它动物，例如伴侣(companion)动物(例如狗和猫)和
家畜。患者可能经历对P2X7调节敏感的病症的一种或多种症状，或可能没有此类症状(即，在认为处于发展此类症状的风险之中的患者中，治疗可以是预防性的)。
[0095] 杂芳基酰胺类似物
[0096] 如上所述，本发明提供式I的杂芳基酰胺类似物。在某些方面中，此类化合物是可以用于各种情况中(包括治疗对P2X7调节敏感的病症，例如疼痛)的调节剂。此类调节剂还用作P2X7的检测和定位用探针，和在P2X7介导的信号转导试验中用作标准样品。
[0097] 在式I中，杂芳基核：
[0098]
[0099] 包含至少一个氮原子(如所指明的)，在T、U、V、Z1、Z2和/或Z3中的一个或多个处任选包含其它的氮原子。在某些实施方案中，Z3是CR2；在另外的实施方案中，Z3是CH。在其它实施方案中，Z1、Z2和Z3各自是CR2。核的5元环部分：
[0100] 在某些实施方案中，是
[0101]
[0102] 当存在时，每个R3一般如上所述；在某些化合物中，每个R3独立地是氢或C1-C4烷基。
[0103] 变量RA是上述的环取代基。在某些化合物中，确切地，T、U和V中的一个是CRA(即，T、U和V中有一个且只有一个是被RA取代的碳原子)。代表性的RA基团包括例如C1-C6羟烷基、C1-C6氰基烷基、C2-C6烯基、C2-C6烷基醚、苯基C0-C4烷基(例如、苯基C1-C4烷基)、(4至7元杂环)C0-C4烷基、(C1-C6烷基磺酰氨基)C0-C4烷基、(C1-C6烷酰氧基)C0-C4烷基、(C1-C6烷基磺酰氧基)C0-C4烷基、(单或二-C1-C6烷基氨基)C0-C4烷基和(单或二-C1-C6烷基氨基羰基)C0-C4烷基；其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：(i)氧代、卤素、氨基、氰基、羟基、氨基羰基、氨基磺酰基和COOH；和(ii)C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、单或二-C1-C6烷基氨基羰基、单或二-C1-C6烷基氨基磺酰基、苯基和4至7元杂环；其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氨基、氧代、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基。
[0104] 在某些实施方案中，RA是C1-C6羟烷基、C1-C6氰基烷基、C2-C6氰基烯基、C2-C6烷基醚、(单或二-C1-C6烷基氨基)C0-C4烷基、(单或二-C1-C6烷基氨基羰基)C0-C4烷基或(4至7元杂环)C1-C4烷基；其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：氨基、羟基、氧代、卤素、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、单或二-(C1-C6烷基)氨基、单或二-C1-C6烷基氨基羰基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、4至7元杂环烷基和5或6元杂芳基。
[0105] 在另外的实施方案中，RA的“M”部分是N-连接的杂环烷基。某些此类RA基团满足下式：
[0106]
[0107] 其中：L不存在，或是任选被氧代取代的C1-C6亚烷基； 表示任选与苯基或5或6元杂芳基稠合的4至7元杂环烷基；R7表示0至4个独立地选自下列的取代基：(i)羟基、氨基、氧代、氨基羰基、氨基磺酰基和COOH；(ii)C1-C6烷基、单或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰基C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰氨基C0-C4烷基和4至7元杂环；其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氨基、氧代、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、单或二-(C1-C6烷基)氨基和C1-C6烷基磺酰氨基；(iii)一起形成式-(CH2)q-P-(CH2)r-的桥的取代基，其中q和r独立地是0或1，P是CH2、O、NH或S；和(iv)一起形成螺4至7元杂环烷基环的取代基，所述杂环烷基环被0至2个独立地选自氧代和C1-C4烷基的取代基取代。
[0108] 某些此类RA部分进一步满足下式：
[0109]
[0110] 其中：L是任选被氧代取代的C1-C2亚烷基；G是CHR8、NH或O；s和t独立地是0、1、2、3或4，以致s和t的总和为2至5；R8是：(i)氢、氨基、氨基羰基、氨基磺酰基或COOH；
或(ii)C1-C6烷基、单或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰基C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰氨基C0-C4烷基或4至7元杂环；其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氨基、氧代、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、单或二-(C1-C6烷基)氨基和C1-C6烷基磺酰氨基。
[0111] 其它此类RA部分进一步满足下式之一：
[0112]
[0113]
[0114] 其中J是CH或N；B、D、E和F独立地选自CH2、NH和O；R9表示0至2个独立地选自下列的取代基：(i)氨基、氨基羰基和COOH；和(ii)C1-C6烷基，单或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C2烷基、C1-C6烷基磺酰基和C1-C6烷基磺酰氨基；其中的每个被0至3个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氧代和COOH。
[0115] 在其它实施方案中，RA是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6烷基醚或单或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、其中的每个被1至4个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氰基、氨基、氧代、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷酰基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氧基、C1-C6烷基磺酰氨基、任选被卤素或C1-C4烷基取代的苯基和任选被C1-C4烷基取代的4至7元杂环。代表性的此类RA基团包括例如单(C1-C6烷基)氨基C0-C2烷基和C2-C6烷基醚，其中的每个被1至4个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氧代、COOH、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基。
[0116] 在另外的实施方案中，RA是上述式L-A-M的基团，其中L不是不存在；A不存在；M是苯基或5或6元杂芳基，其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：氧代、氨基、卤素、羟基、氰基、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基、单或二-(C1-C6烷基氨基)羰基和4至7元杂环。在某些此类化合物中，M是5或6元杂芳基，其中的每个被任选取代。某些此类5或6元杂芳基部分包括例如：
[0117] (i)咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基或嘧啶基、其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：氧代、氨基、卤素、羟基、氰基、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基、单或二-(C1-C6烷基氨基)羰基和4至7元杂环；和
[0118]
[0119] 其中的每个被0至2个独立地选自下列的取代基取代：氨基、卤素、羟基、氰基、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基、单或二-(C1-C6烷基氨基)羰基和4至7元杂环。
[0120] 在其它实施方案中，RA是式L-A-M的基团，其中L是任选被氧代或COOH取代的C0-C3亚烷基；A不存在；M是被氨基、氰基、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH或C1-C6烷基取代的苯基。
[0121] 在其它实施方案中，RA是式L-A-M的基团，其中L是任选被氧代取代的C1-C2亚烷基；A不存在；M是被5或6元杂芳基取代的单或二-(C1-C6烷基)氨基。其中的每个杂芳基被0至4个独立地选自下列的取代基取代：氧代、氨基、卤素、羟基、氰基、氨基羰基、氨基磺酰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰基氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基磺酰氨基、单或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基、单或二-(C1-C6烷基氨基)羰基和4至7元杂环。代表性的5或6元杂芳基如上面所举例说明。
[0122] 如上所述，在式A或式I中的变量Z1、Z2和Z3中的每个一般是N、CH或取代的碳。在某些实施方案中，Z1、Z2和Z3各自是CR2；Z1是N，Z2和Z3各自是CR2；Z2是N，Z1和Z3各自是CR2；Z3是N，Z1和Z3各自是CR2；或Z1和Z3是N，Z2是CR2。在某些此类化合物中的每个R2是氢或C1-C6烷基。
[0123] 某些代表性的杂芳基核：
[0124]
[0125] 包括例如：
[0126]
[0127] 如上所述的变量“W”一般是：W是-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)-或-NR4-NR4-C(＝O)-。显然，有意保留这些基团的取向；例如，在其中W是-C(＝O)NR4-的化合物中，W的羰基直接与该双环核的6元环连接，W的氮直接与X连接。R4一般如上所述；在某些实施方案中，R4是氢或甲基。
[0128] 变量“X”一般如上所述；在某些实施方案中，X是C1-C4亚烷基(例如亚甲基或亚乙基)，其中的每个被0至4个独立地选自下列的取代基取代：C1-C4烷基、(C3-C8环烷基)C0-C2烷基、苯基和一起形成3至7元环烷基或杂环烷基环的取代基。
[0129] 变量“Y”一般是任选取代的环状部分。在某些化合物中，Y是环烷基或杂环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、哌啶基、哌嗪基吗啉基或金刚烷基，其中的每个如上所述任选被取代；在某些此类化合物中，每个Y部分被0至4个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基和单或二-(C1-C6烷基)氨基。
[0130] 在本文提供的某些杂芳基酰胺类似物中，-W-X-Y是：
[0131]
[0132] 其中：n是0、1或2；R1表示0至2个独立地选自下列的取代基：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基和单或二-(C1-C6烷基)氨基；或由R1代表的两个取代基一起形成C1-C3亚烷基桥或稠合的或螺3至7元碳环或杂环；每个R5独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C7环烷基或苯基；或两个R5一起形成C3-C8环烷基。某些此类化合物进一步满足下式：
[0133]
[0134] 在其它化合物中，Y是芳族部分(aromatic moiety)，例如：(i)苯基或5或6元杂芳基，其中的每个任选与5至7元碳环或杂环稠合；或
[0135] (ii) 每个Y被0至4个独立地选自下列的取代基取代：卤素、羟基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基和单或二-(C1-C6烷基)氨基。在某些化合物中，-W-X-Y是：
[0136]
[0137] 其中： 是5至7元碳环或杂环； 是5或6元杂芳基；R1表示0至2个独立地选自下列的取代基：卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基和单或二-(C1-C6烷基)氨基；或由R1代表的两个取代基一起形成稠合的或螺3至7元碳环或杂环；每个R5独立地是氢、C1-C6烷基、C3-C7环烷基或苯基；或两个R5一起形成C3-C8环烷基；Q是CH2、CO、O、NH、S、SO或SO2；m是0或1。某些此类化合物进一步满足下式：
[0138]
[0139] 其中K是CH或N。显然，当K是CH时，K位置处的碳原子可以(但不必需)被R1代表的取代基取代。
[0140] 本文提供的代表性的杂芳基酰胺类似物包括但不限于实施例1-3中具体描述的那些。显然，本文叙述的具体化合物只是代表性的，其无意限制本发明的范围。此外，如上所述，本发明的所有化合物可作为游离酸或碱存在，或作为药学上可接受的盐存在。另外，本发明还具体考虑此类化合物的其它形式，例如水合物和前药。
[0141] 在本发明的某些方面中，本文提供的杂芳基酰胺类似物可检测地改变(调节)P2X7活性，如使用试验(例如本文实施例4中所述的试验)所测定。可以用于该目的的其它试验包括：测定IL-1β释放的试验；测定不能渗透膜的
荧光染料(例如YO-PRO1)的摄取的试验；测定萤光黄(lucifer yellow)摄取的试验；测定溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓摄取的试验；和使用钙成像来检测P2X7活性的试验；本领域众所周知的所有这些试验。本文提供的某些调节剂可以微摩尔浓度、纳摩尔浓度或亚纳摩尔浓度可检测地调节P2X7活性。
[0142] 如上所述，在某些实施方案中，优选作为P2X7拮抗剂的化合物。可以使用标准体外P2X7介导的钙转移试验(如实施例4中所提供的)来测定此类化合物的IC50值。简要地说，使表达P2X7的细胞与感兴趣的化合物接触，并与胞内钙浓度的指示物(例如，膜可渗++透钙敏感性染料例如Fluo-3、Fluo-4或Fura 2(Invitrogen，Carlsbad，CA)，当与Ca 结合时，其中的每个产生荧
光信号)接触。优选通过将细胞在包含化合物和/或指示物(在溶液中)的缓冲液或培养基中孵育一次或多次来进行此类接触。使接触保持足以允许染料进入细胞的时间(例如1-2小时)。洗涤或过滤细胞，以除去过量的染料，然后将细胞与P2X7激动剂(例如腺苷三磷酸或2′(3′)-O-(4-苯甲酰基-苯甲酰基)腺苷5′-三磷酸，其浓度例如等于该激动剂的EC50)接触，测定荧光响应。当接触激动剂的细胞与作为P2X7拮抗剂的化合物接触时，相比于没有测试化合物的情况下接触激动剂的细胞，荧光响应一般减少至少20％，优选至少50％，更优选至少80％。IC50代表50％抑制浓度，即，在试验中抑制受体(例如P2X7)活性达50％的化合物的浓度。应注意，对具体受体具有较低IC50值的化合物与对该受体显示更大功效的化合物相对应，较高IC50值与对该受体具有更小功效相对应。在某些实施方案中，在等于IC50的化合物浓度下，本文提供的P2X7拮抗剂在P2X7激动作用的体外试验中没有显示可检测的激动剂活性。在P2X7激动作用的体外试验中，在比IC50值高100倍的化合物浓度下，某些此类拮抗剂没有显示可检测的激动剂活性。
[0143] 还可以(或者)使用实施例5中提供的体内疼痛减轻试验来评价P2X7调节活性。优选地，在此类功能试验中，本文提供的调节剂对P2X7活性具有统计上显著的特异性作用。
[0144] 在某些实施方案中，优选的调节剂无
镇静作用。换句话说，在用于测定疼痛减轻的动物模型(例如本文实施例5提供的模型)中足以提供镇痛的两倍最小剂量的调节剂剂量，在镇静作用的动物模型试验(使用Fitzgerald等人(1988)Toxicology 49(2-3)：433-9描述的方法)中仅仅导致短暂的(即，持续不超过疼痛减轻持续时间的1/2)或优选没有统计上显著的镇静作用。优选地，足以提供镇痛的5倍最小剂量的剂量不产生统计上显著的镇静作用。更优选地，在小于25mg/kg(优选小于10mg/kg)的静脉内剂量、或小于
140mg/kg(优选小于50mg/kg，更优选小于30mg/kg)的口服剂量条件下，本文提供的调节剂不产生镇静作用。
[0145] 如果需要的话，可以评价本文提供的化合物的某些药理学性能，包括但不限于口服生物利用率(优选的化合物的口服生物利用率可以使化合物的治疗有效浓度达到下列程度：口服剂量小于140mg/kg，优选小于50mg/kg，更优选小于30mg/kg，甚至更优选小于10mg/kg，更加优选小于1mg/kg，最优选小于0.1mg/kg)、毒性(当给予对象治疗有效量时，优选的化合物是非毒性的)、副作用(当给予对象治疗有效量的化合物时，优选的化合物产生与安慰剂相当的副作用)、血清蛋白结合以及体外和体内
半衰期(优选的化合物显示的体内半衰期可允许不超过Q.I.D.
给药，优选T.I.D.给药，更优选B.I.D.给药，最优选每天给药一次)。另外，选择具有不同的血脑屏障渗透性的化合物可能是合意的。对于通过调节CNS P2X7活性来治疗疼痛或神经变性疾病所使用的调节剂，优选高血脑屏障渗透性，以使上述总的每日口服剂量在CNS中提供这种调节至治疗有效程度，而显示血脑屏障的低渗透性的化合物(产生调节剂的低的脑部水平)可以优选治疗周围神经介导的疼痛或某些周围炎性疾病(例如类风湿性关节炎)。优选在此类剂量下，这种低血脑屏障渗透性化合物不提供足以将P2X7活性调节至临床或治疗有效程度的化合物的脑部(例如CSF)水平。对于，本领域众所周知的常规试验可以用来评价这些性能和鉴定用于具体用途的优异(superior)化合物。例如，用于预测生物利用率的试验包括运输穿过人肠细胞
单层(包括Caco-2细胞单层)。在人中，化合物的血脑屏障的渗透性可以由给予(例如静脉内给予)化合物的实验动物中的该化合物的脑部水平来预测。血清蛋白结合可以由
白蛋白结合试验来预测。化合物半衰期与化合物的给药
频率成反比。化合物的体外半衰期可以由微粒体半衰期试验(例如如公开号为2005/0070547的美国专利申请的实施例7中所描述)来预测。
[0146] 如上所述，本文提供的优选化合物是非毒性的。通常，术语“非毒性的”应该以相对含义来理解，并有意指已获美国食品与药物管理局(FDA”)批准的施用于哺乳动物(优选人)的任何物质，或与确立的标准一致，为FDA对施用于哺乳动物(优选人)的批准所容许。另外，高度优选的非毒性化合物一般满足下列标准中的一个或多个：(1)基本不抑制细胞ATP的产生；(2)不显著地延长心脏QT间隔；(3)不导致实质性的肝脏肿大，或(4)不导致肝脏酶的实质性释放。
[0147] 本文使用的基本不抑制细胞ATP产生的化合物是满足公开号为2005/0070547的美国专利申请的实施例8中所设定标准的化合物。换句话说，用100μM此类化合物治疗(如其中所描述)的细胞，显示出未治疗细胞中所检测到的ATP水平的至少50％的ATP水平。在更高度优选的实施方案中，此类细胞显示出未治疗细胞中所检测到的ATP水平的至少80％的ATP水平。
[0148] 不显著延长心脏QT间隔的化合物是这样的化合物：当一定给予剂量(该剂量产生等于该化合物的EC50或IC50的血清浓度)时，化合物不会在豚鼠、小型猪或狗中导致心脏QT间隔的统计上显著性延长(如
心电图所测定)。在某些优选实施方案中，胃肠外或口服给予0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg的剂量不导致心脏QT间隔的统计上显著性延长。
[0149] 如果每天用产生等于该化合物的EC50或IC50的血清浓度的剂量来治疗实验室啮齿类(例如小鼠或大鼠)5-10天，那么化合物不会导致实质性的肝脏肿大，与匹配的对照相比肝脏与体重的比例提高不超过100％。在更高度优选的实施方案中，与匹配的对照物相比，此类剂量不会导致超过75％或50％的肝脏肿大。如果使用非啮齿类哺乳动物(例如狗)，与匹配的未经治疗的对照物相比，此类剂量不应该使肝脏与体重的比例提高超过50％，优选不超过25％，更优选不超过10％。在此类试验中，优选的剂量包括胃肠外或口服给予0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg。
[0150] 类似地，如果在实验动物(例如啮齿类)中给予两倍最小剂量(该剂量产生等于该化合物对于P2X7的EC50或IC50的血清浓度)的化合物，那么其不促进肝脏酶的实质性释放，与匹配的模拟治疗对照物相比，不会将ALT、LDH或AST的血清水平提高超过100％。在更高度优选的实施方案中，与匹配的对照物相比，此类剂量不会使这种血清水平提高超过75％或50％。或者，在体外
肝细胞试验中，如果等于化合物的EC50或IC50的浓度(在用肝细胞体外接触和孵育的培养基或其它此类溶液中)不导致任何此类肝脏酶以高于基线水平(在得自于匹配模拟治疗的对照细胞的培养基中所看到的)可检测地释放到培养基中，则该化合物不促进肝脏酶的实质性释放。在更高度优选的实施方案中，当此类化合物浓度是5倍、优选10倍于化合物的EC50或IC50时，没有检测出任何此类肝脏酶以高于基线水平释放到培养基中。
[0151] 在其它实施方案中，在等于该化合物针对P2X7的EC50或IC50的浓度下，某些优选化合物不抑制或引起微粒
体细胞色素P450酶的活性，例如CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。
[0152] 在等于该化合物的EC50或IC50的浓度下，某些优选化合物不造成畸变(例如，使用小鼠红血球前体细胞微核试验、Ames微核试验、螺旋微核试验等等进行测定)。在其它实施方案中，在此类浓度下，某些优选化合物不引起姐妹
染色单体交换(例如，在中国仓鼠卵巢细胞中)。
[0153] 就检测而言，如下面更详细讨论的，可将本文提供的调节剂同位素标记或放射性2
标记。用重同位素例如氘(即 H)取代可以提供某些治疗优势，产生更大的代谢
稳定性(例如，体内半衰期增加或剂量要求减低)，因此在一些情况下是优选的。
[0154] 杂芳基酰胺类似物的制备
[0155] 一般可使用标准合成方法来制备杂芳基酰胺类似物。起始原料可从供应商例如Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO)商购，或可以使用确立的规程(protocols)从可商购的前体来合成。例如，可以使用与任何下列方案相似的合成路线，连同合成
有机化学领域已知的合成方法。在一些情况下，在制备期间需要保护基。此类保护基可以用本领域普通技术人员熟知的方法除去，例如在Greene和Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis”(第二版，John Wiley & Sons，1991)中所描述的方法。在一些情况下，可以使用本领域普通技术人员熟知的方法进行进一步的有机转化，例如Richard C.Larock，″Comprehensive Organic Transformation″，(VCH Publisher，Inc.1989)中描述的方法。下面方案中的每个变量是指与本文所提供化合物的说明相一致的任何基团。在下列方案中使用的代表性反应条件提供于实施例中。
[0156] 在下列方案和本文其它地方使用的某些缩写包括：
[0157] Ac 乙酰基
[0158] aq. 水溶液(aqueous)
[0159] ACN 乙腈
[0160] BOP 苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐
[0161] Bu 丁基
[0162] δ 化学位移
[0163] DCM 二氯甲烷
[0164] DIBAL-H 二异丁基氢化铝
[0165] DMF 二甲基甲酰胺
[0166] DMSO 二甲亚砜
[0167] Et 乙基
[0168] EtOAc 乙酸乙酯
[0169] EtOH 乙醇
[0170] h 小时
[0172] Hz 赫兹
[0173] iPr 异丙基
[0174] MeOH 甲醇
[0175] min 分钟
[0176] Ms 甲磺酰基
[0178] Ph3P 三苯基膦
[0179] PTLC 制备薄层色谱
[0180] rt 室温
[0181] TEA 三乙胺
[0182] TFA 三氟乙酸
[0183] THF 四氢呋喃
[0184] 方案1
[0185]
[0186] 在方案I中，通过在乙炔二羧酸二甲酯的存在下，使3-吡啶甲醇类似物与O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺(O-mesitylenesulfonylhydroxylamine)反应来二羧酸二甲酯1。使
1与H2SO4水溶液反应，得到4-羟甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸类似物，通过与乙酰氯在无水乙醇中反应，将其转化为乙酯2。用琼斯试剂将2氧化，产生羧酸3，在BOP的存在下，通过与适当的胺反应，将其转化为酰胺4。
[0187] 方案II
[0188]
[0189] 在方案II中，将酯4
水解，以得到羧酸5。在BOP的存在下，通过与适当的胺反应来制备酰胺6。
[0190] 方案III
[0191]
[0192] 在方案III中，将酯4还原成醇7，将其转化为甲磺酸酯8。然后，在碳酸钾的存在下，通过与适当的胺反应，使用甲磺酸酯8来产生胺10，或通过与氰化钠反应，使用甲磺酸酯8来产生氰甲基衍生物9。
[0193] 方案IV
[0194]
[0195] 方案IV举例说明了通过与适当的溴化试剂反应，将醇7转化为各种醚部分11中的任意种。
[0196] 方案V
[0197]
[0198] 在方案V中，通过使3-氨基吡啶类似物与O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺反应来制备二羧酸二甲酯12。使12与H2SO4水溶液反应，得到4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸类似物13，通过与适当的羧酸反应，将其转化为酰胺14。
[0199] 方案VI
[0200]
[0201] 方案VI举例说明了从以上讨论的酯4来合成某些代表性的式I化合物。通过与DIBAL反应来产生甲酰基衍生物，并使用Ph3P＝CHCN将其转化为氰基乙烯基衍生物(Z和E异构体的混合物)。可以使用标准技术分离异构体。将氰基乙烯基化合物还原(例如用Pd/C和1
大气压H2)，得到氰乙基衍生物，可将其转化为各种化合物，包括举例说明的羧酸和四唑基乙基化合物。
[0202] 方案VII
[0203]
[0204] 在方案VII中，通过在丙炔酸酯衍生物的存在下，使3-吡啶基甲醇类似物15与O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺反应来制备羧酸甲酯16，其中R是氢或任何合适基团，例如烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中的每个任选被取代。使16与H2SO4水溶液反应，得到4-羟甲基吡唑并[1，5-a]吡啶17。用琼斯试剂将17氧化，得到羧酸18，在BOP的存在下，通过与适当的胺反应，将其转化为酰胺19。
[0205] 方案VIII
[0206]
[0207] 在方案VIII中，通过在丙炔酸甲酯衍生物的存在下，使3-氨基吡啶类似物20与O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺反应来制备羧酸甲酯21。使21与H2SO4水溶液反应，得到4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸类似物23，通过与适当的羧酸反应，其转化为酰胺24。或者，可使21直接与适当的羧酸反应，得到酰胺22。
[0208] 方案IX
[0209]
[0210] 在方案IX中，使用任何合适方法，例如在室温或高温下使用氨(在EtOH中)，将含氮杂环卤化物25转化为氨基杂环26。使氨基杂环26与α卤代羰基化合物反应，得到取代的咪唑并杂环28。使α卤代醛29与氨基杂环26反应，得到未取代的咪唑并杂环30，随后通过咪唑并官能团的亲电取代(例如，通过溴化得到溴化物)，可将咪唑并杂环30转化为取代的咪唑并杂环31，可将其以转化为所需的咪唑并杂环31。
[0211] 方案X
[0212]
[0213] 在方案X中，使用任何合适方法，例如在室温或高温下与肼在EtOH中反应，将含氮杂环卤化物25转化为肼基杂环32。通过与酸33反应(在室温或高温下，不用溶剂或用溶剂)，将中间体32转化为三唑并杂环34。
[0214] 方案XI
[0215]
[0216] 在方案XI中，使35与异硫氰酸酯36反应，以形成37。可以将化合物37中的伯胺单或二烷基化或酰化，得到化合物38。在酸性条件下，水解38的(当Q是CN或酯时)，得到39。或者，如果Q是卤素，用铵处理38，得到40。可以容易地将39和40转化为上面举例说明的式I化合物。
[0217] 方案XII
[0218]
[0219] 在方案XII中，在室温下，使35与例如O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺反应。然后加入醛41和KOH水溶液，得到中间体42。在酸性条件下，将42(当Q是CN或酯时)水解，得到43。或者，如果Q是卤素，用铵处理42，得到44。可以容易地将43和44转化为上面举例说明的式I化合物。
[0220] 方案XIII
[0221]
[0222] 在方案XIII中，使甲基取代的氮杂环羧酸酯45与α-卤代羰基化合物反应，用
氢氧化铵处理中间体盐，得到酯46。通过标准条件将其转化为目标化合物47。
[0223] 方案XIV
[0224]
[0225] 在方案XIV中，使卤代的含氮杂环卤化物46与氰化钾反应，对所得腈进行氢化，得到47。使47与酸48缩合，得到杂环49，通过本文描述的方法将其转化为50。
[0226] 在某些实施方案中，本文提供的化合物可以含有一个或多个不对称碳原子，以致化合物可以不同的立体异构体形式存在。此类形式可以是例如外消旋体或光学活性形式。如上所述，本发明涵盖所有的立体异构体。但是，获得单一对映体(即光学活性形式)可能是合意的。制备单一对映体的标准方法包括不对称合成和外消旋体的拆分。外消旋体的拆分可以例如通过常规方法(例如在拆分试剂的存在下进行结晶，或使用例如
手性HPL
C柱的色谱)来实现。
[0227] 可通过使用包含至少一个放射性同位素原子的前体实施其合成，将化合物进行放14 3 35
射性标记。每个放射性同位素优选是碳(例如 C)、氢(例如 H)、硫(例如 S)或碘(例
125
如 I)。氚标记的化合物还可通过如下方式催化制备：在氚化的乙酸中通过铂催化的交换，在氚化的三氟乙酸中通
过酸催化的交换，或使用化合物作为底物与氚气体进行多相催化的交换。另外，可以使某些前体进行与氚气的氚-卤素交换、不饱和键的氚气还原、或使用
硼氚化钠进行还原，视情况而定。放射性标记化合物的制备可以由放射性同位素供应商来方便地进行，其专门进行放射性标记探针化合物的委托合成。
[0228] 药物组合物
[0229] 本发明还提供药物组合物，其包含本文提供的一种或多种化合物以及至少一种生理学上可接受的载体或赋形剂。药物组合物可以包含例如下列中的一种或多种：水、缓冲液(例如
碳酸氢钠、中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲盐水)，乙醇、矿物油、
植物油、二甲亚砜、碳水化合物(例如葡糖、甘露糖、
蔗糖、
淀粉、甘露糖醇或葡聚糖)、蛋白、佐剂、多肽或氨基酸(例如甘氨酸)、抗
氧化剂、螯合剂(例如EDTA或谷胱甘肽)和/或
防腐剂。另外，其它活性组分可以(但不必需)包括在本文提供的药物组合物中。
[0230] 可以将药物组合物配制成任何合适的给药方式，包括例如局部、口服、鼻部、直肠、
阴道或
肠胃外给药。本文使用的术语“肠胃外”包括皮下、真皮内、血管内(例如静脉内)、肌内、脊髓、颅内、鞘内和腹膜内注射，以及任何类似的注射或输注技术。在某些实施方案中，可以将组合物制备成栓剂。在其它实施方案中，优选适合于口服使用的组合物。此类组合物包括例如片剂、锭剂(troches)、糖锭(lozenges)、水或油性混悬剂、可分散性粉末或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆剂或酏剂。在其它实施方案中，可以将药物组合物配制成
冷冻干燥物。对于某些病症(例如治疗
皮肤病症例如灼痛或发痒)，可以优选局部给予制剂。对于治疗尿失禁和膀胱活动过度，可以优选直接给药到膀胱中的制剂(膀胱给药)。
[0231] 有意用于口服使用的组合物可以进一步包含一种或多种诸如
甜味剂，矫味剂，
着色剂和/或防腐剂的组分，以便提供有吸引
力和适口的制剂。片剂含有与生理学上可接受的赋形剂(其适合于生产片剂)混合的活性成分。此类赋形剂包括例如惰性稀释剂(例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠)、
造粒和崩解剂(例如玉米淀粉或海藻酸)、
粘合剂(例如淀粉、明胶或阿拉伯胶)和
润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉)。可以使用标准技术形成片剂，包括干法造粒、直接压缩和湿法造粒。片剂可以无包衣或可以通过已知技术将它们包衣。
[0232] 口服使用的制剂还可以作为硬胶囊存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或
高岭土)混合，或作为软胶囊存在，其中活性成分与水或油介质(例如
花生油、液体
石蜡或
橄榄油)混合。
[0233] 水性混悬剂含有与合适赋形剂混合的活性物质，合适赋形剂例如为悬浮剂(例如羧甲基
纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶)；和分散或湿润剂(例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七亚乙氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxycetano))、环氧乙烷与衍生自
脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐(hexitol anhydrides)的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。水性混悬剂还可以包含一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和/或一种或多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。
[0234] 可以通过将活性成分悬浮在植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或
椰子油)或者矿物油(如液体石蜡)中来配制油性混悬剂。该油性混悬剂可以含有
增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂(如上述那些)和/或矫味剂，以提供可口的口服制剂。可以通过加入抗氧化剂(如抗坏血酸)来保存此类混悬剂。
[0235] 适于通过加入水制备水性混悬剂的可分散性粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散或润湿剂以及悬浮剂通过以上已经提到的那些来举例说明。还可以存在其它赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。
[0236] 药物组合物还可以配制成水包油乳剂的形式。油相可以是植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或其混合物。合适的乳化剂包括天然存在的树胶(例如阿拉伯胶或黄蓍胶)、天然存在的磷脂(例如大豆卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇的酯或偏酯)、酸酐(例如失水山梨醇单油酸酯)和衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯与环氧乙烷的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯)。该乳剂还可以包含一种或多种甜味剂和/或矫味剂。
[0237] 可以用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)来配制糖浆和酏剂。此类制剂还可以包含一种或多种缓和剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。
[0238] 局部给药用制剂典型地包含与活性剂混合的局部赋形剂，含有或没有其它的任选组分。合适的局部赋形剂和其它组分在本领域是众所周知的，显然，赋形剂的选择取决于具体物理形式和递送模式。局部赋形剂包括水；有机溶剂例如醇(例如乙醇或异丙醇)或甘油；二元醇(例如丁二醇、异戊二醇或丙二醇)；脂族醇(例如羊毛脂)；水和有机溶剂的混合物以及有机溶剂例如醇和甘油的混合物；基于脂质的物质，例如脂肪酸、酰基甘油(包括油类、例如矿物油和天然或合成来源的脂肪)、磷酸甘油酯、鞘脂和石蜡；基于蛋白的物质，例如胶原和明胶；基于
硅氧烷的物质(非挥发性和挥发性的)；和烃基物质(hydrocarbon-based materials)，例如微海绵和
聚合物基质。组合物可以进一步包含一种或多种适合于改善所施用制剂的稳定性或效果的组分，例如稳定剂、悬浮剂、乳化剂、
粘度调节剂、
胶凝剂、防腐剂、抗氧化剂、
皮肤渗透增强剂、增湿剂和持续释放物质。此类组分的例子描述于Martindale--The Extra Pharmacopoeia(Pharmaceutical Press，London 1993)和Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版，LippincottWilliams & Wilkins，Philadelphia，PA(2005)中。制剂可以包括微胶囊例如羟甲基纤维素或凝胶微胶囊、脂质体、白蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒或
纳米胶囊。
[0239] 可以将局部制剂制备成任何各种物理形式，包括例如固体、糊剂、
软膏剂、乳膏剂、
泡沫、洗剂、胶凝剂、散剂、水成液和乳剂。此类药学上可接受的形式的物理外观和粘度可取决于制剂中存在的乳化剂和粘度调节剂的存在和数量。固体一般是坚实的和不可倒出的，通常配制成条状物或棒状物，或为颗粒形式；固体可以不透明或透明，任选可以含有溶剂、乳化剂、增湿剂、
软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和提高或增加最终产物功效的其它活性成分。乳膏剂和洗剂常常彼此类似，主要区别于它们的粘度；洗剂和乳膏剂均可以不透明、透明或清澈，并且常常含有乳化剂、溶剂和粘度调节剂以及增湿剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和可提高或增加最终产物功效的其它活性成分。凝胶剂以各种粘度制备，从粘稠或高粘度至稀薄或低粘度。这些制剂与洗剂和乳膏剂一样，还可以含有溶剂、乳化剂、增湿剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和可提高或增加最终产物功效的其它活性成分。液体剂比乳膏剂、洗剂或凝胶剂稀，并且常常不含有乳化剂。局部用液体产品常常含有溶剂、乳化剂、增湿剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和可提高或增加最终产物功效的其它活性成分。
[0240] 用于局部制剂的合适的乳化剂包括但不限于离子型乳化剂、鲸蜡醇、非离子型乳化剂(例如聚氧乙烯油酰醚)、PEG-40硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚(ceteareth)-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇聚醚-30、鲸蜡硬脂醇聚醚醇、PEG-100硬脂酸酯和硬脂酸甘油酯。合适的粘度调节剂包括但不限于保护性胶体或非离子树胶、例如羟乙基纤维素、黄原胶、
硅酸铝镁、
二氧化硅、
微晶蜡、蜂蜡、石蜡和十六酸鲸蜡酯。凝胶组合物可以通过加入胶凝剂而形成，所述胶凝剂例如为壳聚糖、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚季铵、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、卡波姆或氨化甘草甜素(ammoniated glycyrrhizinate)。合适的表面活化剂包括但不限于非离子、两性、离子和阴离子
表面活性剂。例如，在局部制剂中可以使用下列中的一种或多种：聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚山梨醇酯(polysorbate)20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、月桂酰胺DEA、椰油酰胺DEA和椰油酰胺MEA、油酰甜菜碱、椰油酰胺丙基磷脂酰基PG-二甲基
氯化铵(cocamidopropyl phosphatidyl PG-dimoniumchloride)和月桂醇硫酸铵(ammonium laureth sulfate)。合适的防腐剂包括但不限于：抗
微生物剂，例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸和甲醛，以及物理稳定剂和抗氧化剂，例如维生素E、抗坏血酸钠/抗环血酸和
没食子酸丙酯。合适的增湿剂包括但不限于：乳酸及其它羟基酸和它们的盐、甘油、丙二醇和丁二醇。合适的软化剂包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、胆固醇、凡士林、异硬脂基新戊酸酯和矿物油。合适香料和颜料包括但不限于：FD&C红No.40和FD&C黄No.5。局部制剂可以包含的其它合适成分包括但不限于：磨蚀剂、
吸附剂、抗结
块剂、消泡剂、抗静电剂、收敛剂(例如金缕梅、醇和草药提取物例如甘菊提取物)、粘合剂/赋形剂、缓冲剂、螯合剂、成膜剂、调理剂、推进剂、
遮光剂、pH调节剂和保护剂。
[0241] 凝胶制剂的合适局部用赋形剂的例子是：羟丙基纤维素(2.1％)；70/30异丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；和聚山梨醇酯80(1.9％)。用于泡沫制剂的合适局部用赋形剂的例子是：鲸蜡醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％；季铵盐52(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95 PGF3(61.05％)；去离子水(30.05％)；P75烃推进剂(4.30％)。所有的百分比按重量计。
[0242] 用于
局部组合物的典型递送模式包括：使用
手指施用；使用实体施涂物例如布、薄纱、药签、棍或刷来施用；喷剂(包括雾剂、气雾剂或泡沫
喷涂)；滴管施用；喷洒；浸泡；和冲洗。
[0243] 可以将药物组合物制备成无菌的可注射水性或油性混悬剂。根据使用的赋形剂和浓度，本文提供的化合物可以悬浮或溶于赋形剂中。可以按照本领域已知的方法配制此类组合物，使用诸如上述那些的合适分散剂、湿润剂和/或悬浮剂。在可接受的赋形剂和溶剂之中，可以使用的是水、1，3-丁二醇、林格溶液和等渗
氯化钠溶液。此外，可以使用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。对于这种目的，可以使用任何柔和的不挥发油，包括合成的单或二甘油脂。另外，在注射组合物的制剂中可以使用脂肪酸例如油酸，佐剂例如局部麻醉剂、防腐剂和/或缓冲剂可以溶于赋形剂中。
[0244] 药物组合物还可以配制为栓剂(例如，用于直肠给药)。这种组合物可以通过将药物与合适的无刺激赋形剂(其在常温下是固体，但在直肠
温度下是液体，因此在直肠中熔融，以释放药物)混合来制备。合适赋形剂包括例如可可脂和聚乙二醇。
[0245] 用于吸入剂的组合物典型地可以以溶液、混悬剂或乳剂的形式提供，其可以以干粉形式给予，或以使用普通推进剂(例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)的气雾剂形式给予。
[0246] 可以将药物组合物配制成以预定速度释放的形式。可以实现瞬时释放，例如，通过舌下给药(即通过
口腔给药，用这样方法可以使活性成分通过舌下的血管快速地吸收，而不是通过消化道吸收)。可以通过例如口服、直肠或皮下植入或通过在靶位点进行植入来给予
控释制剂(即，给药之后减缓和/或延迟活性成分释放的制剂例如胶囊、片剂或包衣片剂)。通常，控释制剂包括可在胃肠道(或植入位置)延迟崩解和吸收的基质和/或包衣，由此提供延迟作用或较长周期的持续作用。控释制剂的一种类型是缓释制剂，其中至少一种活性成分在一定时期内以恒速连续地释放。优选，治疗剂以血液(例如血浆)浓度保持在治疗范围内，但低于毒性水平的速度释放，持续至少4小时，优选至少8小时，且更优选至少12小时。此类制剂一般使用众所周知的技术来制备，并且通过例如口服、直肠或皮下植入或通过在目标靶位点植入的方式给药。在此类制剂中使用的载体是生物相容的，并且还可以是可
生物降解的；优选，该制剂可释放相对恒定水平的调节剂。持续释放制剂中所包含调节剂的量取决于例如植入位点、释放的速度和释放的预期时间、和所治疗或预防的病症的性质。
[0247] 控制释放可通过如下实现：将活性成分与本身可改变释放速度的基质混合，和/或通过使用控释包衣。可以使用本领域众所周知的方法改变释放速度，包括：(a)改变包衣的厚度或组成，(b)改变包衣中
增塑剂的量或加入方式，(c)包含其它成分，例如释放调节剂，(d)改变基质的组成、粒径或颗粒形状，和(e)提供通过包衣的一个或多个通路。持续释放制剂中所包含调节剂的量取决于例如给药方法(例如植入的位点)、释放的速度和释放的预期时间、和所治疗或预防的病症的性质。
[0248] 本身可以或不能提供可控释放功能的基质一般是承载活性成分的任何物质。例如，可以使用时间延迟物质例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。在形成剂型(例如片剂、胶囊、锭剂或喷剂)之前，活性成分可以与基质混合。或者，或另外，可以在包含基质的颗粒、细粒、圆球、微球体、珠粒或小丸的表面上将活性成分包衣。这种包衣可以利用常规方法实现，例如将活性组分溶解在水或其它合适溶剂中，并喷涂。任选，在包衣之前加入其它的成分(例如，帮助活性成分与基质结合的成分，或使溶液染色的成分)。然后可以将基质包上屏障剂，而后施用控释包衣。如果需要的话，可以将多包衣的基质单元密封，产生最后的剂型。
[0249] 在某些实施方案中，控制释放是通过使用控制释放的包衣(即，在水介质中，以可控速度使活性成分释放的包衣)实现的。控制释放包衣应该是坚固的连续膜，其是平滑的，能够承载色素及其它添加剂，是无毒的、惰性和不剥落的。调节调节剂释放的包衣包括：不依赖pH的包衣，pH依赖性包衣(其可以在胃中用于释放调节剂)和
肠溶衣(其使制剂完整通过胃，并到达小肠中，其中包衣溶解，含量为身体所吸收)。显然，可以使用多层包衣(例如，使剂量在胃中释放一部分，一部分进一步沿着胃肠道释放)。例如，一部分活性组分可以用肠溶衣包衣，由此在胃中释放，而在基质核中的其余活性成分用肠溶衣保护，并在GI区域的下游释放。pH依赖性包衣包括例如虫胶、邻苯二甲酸
醋酸纤维素、聚醋酸乙烯酯邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、异丁烯酸酯共聚物和玉米蛋白。
[0250] 在某些实施方案中，包衣是疏水性物质，优选，以给药之后可有效减缓胶凝剂水合的数量使用。合适的疏水性物质包括烷基纤维素(例如乙基纤维素或羧甲纤维素)、纤维素醚、纤维素酯、
丙烯酸类聚合物(例如聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰乙基酯、甲基丙烯酸椰油酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸胺基酯共聚物、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(甲基丙烯酸酐)和甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物)和上述的混合物。乙基纤维素的代表性水分散体包括例如： Corp.，Philadelphia，PA)和 (Colorcon，Inc.，West Point、PA)，其中两者都
可以按照制造商的说明书施用于基质。代表性丙烯酸类聚合物包括例如各种EUDRA(Rohm America，Piscataway，NJ)聚合物，按照制造商的说明书，根据目标释放特性，可以单独或组合使用。
[0251] 包含疏水物的水分散体的包衣的物理性能可以通过加入一种或多种增塑剂而得到改善。用于烷基纤维素的合适增塑剂包括例如癸二酸二丁酯、邻苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯和三醋精。用于丙烯酸类聚合物的合适增塑剂包括例如柠檬酸酯例如柠檬酸三乙酯和柠檬酸三丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、聚乙二醇、丙二醇、邻苯二甲酸二乙酯、
蓖麻油和三醋精。
[0252] 一般使用常规技术施用控释包衣，例如，以水分散体形式进行喷涂。如果需要的话，包衣可以包含孔或通道，以便于释放活性成分。孔和通道可以用众所周知的方法产生，包括加入有机或无机材料，其在使用环境中可以从包衣中溶解、提取或
浸出。某些此类成孔物质包括亲水性聚合物，例如羟烷基纤维素(例如，羟丙基甲基纤维素)，纤维素醚，合成的
水溶性聚合物(例如，聚乙烯吡咯烷酮，交联的聚乙烯吡咯烷酮和聚环氧乙烷)，水溶性聚糊精，糖和多糖和碱金属盐。或者，或另外，控释包衣可以包括一个或多个孔，其可以用例如描述在美国专利No.3,845,770；4,034,758；4,077,407；4,088,864；4,783,337和5,071,607中的方法形成。使用常规技术，可控释放还可以通过使用
透皮贴剂实现(参见例如美国专利No.4,668,232)。
[0253] 控释制剂和其组分的其它例子可以在例如下列中找到：美国专利No.4,572,833；4,587,117；4,606,909；4,610,870；4,684,516；4,777,049；4,994,276；4,996,058；
5,128,143；5,202,128；5,376,384；5,384,133；5,445,829；5,510,119；5,618,560；
5,643,604；5,891,474；5,958,456；6,039,980；6,143,353；6,126,969；6,156,342；
6,197,347；6,387,394；6,399,096；6,437,000；6,447,796；6,475,493；6,491,950；
6,524,615；6,838,094；6,905,709；6,923,984；6,923,988；和6,911,217；通过引用将其中每一篇的控制释放剂型的制备教导并入本文。
[0254] 除了上述给药模式之外或连同上述给药模式，可以将本文提供的化合物方便地加入到食物或
饮用水中(例如，用于给予非人动物，包括伴侣动物(例如狗和猫)和家畜)。可以配
制动物
饲料和饮用水组合物，使得动物可以与其饮食一起接受合适数量的组合物。还可以方便地提供预混合形式的组合物，用于加入到饲料或饮用水中。
[0255] 一般以治疗有效量给予化合物。优选的全身剂量不高于每天每公斤体重50mg的剂量(例如，大约0.001mg至大约50mg)/天/公斤体重，口服剂量一般比静脉内剂量高大约5-20倍(例如0.01至40mg/日/公斤体重)。
[0256] 可以与载体物质混合以产生单剂量单位的活性成分的量可以变化，这取决于例如所治疗的患者、给药的具
体模式和任何其它共同给予的药物。剂量单位一般包含大约10μg至大约500mg活性成分。可以使用本领域众所周知的常规试验和方法建立最佳剂量。
[0257] 可以将药物组合物包装，用于治疗对P2X7调节敏感的病症(例如本文描述的疼痛、炎症、神经变性或其它病症)。包装的药物组合物一般包括：(i)容纳药物组合物的容器，该药物组合物包含本文所描述的至少一种调节剂，和(ii)说明书(例如标签或包装说明书)，其标明：所包含的组合物用于治疗患者的对P2X7调节敏感的病症。
[0258] 使用方法
[0259] 本文提供的P2X7调节剂可以在各种情况(contexts)下用于改变P2X7的活性和/或活化，包括体外和体内。在某些方面中，P2X7拮抗剂可以用于体外或体内抑制配体激动剂与P2X7的结合。通常，这种方法包括下面的步骤：在配体的存在下，在水溶液中，和在另外适合于配体与P2X7结合的条件下，使P2X7与一种或多种本文提供的P2X7调节剂接触。调节剂一般以足够改变P2X7所介导的信号转导(使用实施例4提供的试验)的浓度存在。P2X7可以存在于溶液或悬浮液中(例如，在分离的膜或细胞制剂中)，或存在于培养或分离的细胞中。在某些实施方案中，用存在于患者中的细胞表达P2X7，水溶液是体液。优选，以一定数量给予动物一种或多种调节剂，该数量可以使调节剂以治疗有效浓度存在于动物的至少一种体液中，该治疗有效浓度是20微摩尔或更小，10微摩尔或更小，5微摩尔或更小，或1微摩尔或更小。例如，此类化合物可以以小于20mg/kg体重的治疗有效量给予，优选小于5mg/kg，在有些情况下，小于1mg/kg。
[0260] 本文还提供了调节(优选降低)细胞的P2X7活化和/或活性(例如调节信号转导活性(例如钙传导性))的方法。可以通过如下方式实现此类调节：在适合于调节剂与P2X7结合的条件下，使P2X7(体外或体内)与一种或多种本文提供的调节剂接触。调节剂一般以足以改变本文所描述的P2X7介导的信号转导的浓度存在。P2X7可以存在于溶液或悬浮液中，在培养或分离的细胞制剂中，或在患者的细胞中。例如，可以在动物体内接触细胞。信号转导活性的调节可以通过检测对钙离子传导性(还称为钙转移或流动)的效果来评价。信号转导活性的调节或者可以通过检测用本文提供的一种或多种调节剂所治疗患者的症状(例如疼痛或炎症)的改变来评价。
[0261] 优选地，将本文提供的P2X7调节剂口服或局部给予患者(例如人)，并且存在于动物的至少一种体液中，同时调节P2X7信号转导活性。
[0262] 本发明进一步提供治疗对P2X7调节敏感的病症的方法。在本发明的范围中，术语“治疗”包括疾病改善治疗和症状治疗，两者都可以是预防性的(即，为了预防、延迟或降低症状的严重程度，在症状发作之前进行治疗)或治疗性的(即，为了降低症状的严重程度和/或持续时间，在症状发作之后治疗)。如果病症表征为P2X7的不适当的活性，与局部存在的P2X7激动剂的量无关，和/或如果P2X7活性的调节导致病症或其症状的减轻，那么病症是“对P2X7调节敏感”的病症。这种病症包括例如疼痛、炎症、心
血管疾病、眼部病症、神经变性病症和呼吸疾病(例如咳嗽、哮喘、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、囊性纤维化)和鼻炎(包括过敏性鼻炎(例如季节性及常年性鼻炎)和非过敏性鼻炎)，纤维化以及下面将更详细地描述的其它病症。使用本领域已经确立的标准，可以确诊和控制此类病症。患者可以包括人、驯养的伴侣动物和家畜，剂量如上所讨论。
[0263]
治疗方案可以根据所使用的化合物和所治疗的具体病症变化；然而，对于大部分病症的治疗，优选每天4次或更小的给药频率。通常，每天2次的给药方案是更优选的，尤其优选一天给药一次。对于急性疼痛的治疗，快速达到有效浓度的单剂量是合乎需要的。然而，应该理解，对于任何具体患者，具体剂量水平和治疗方案将取决于各种因素，包括所使用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康情况、性别、饮食、给药时间、给药途径和排泄速度、药物联合和所治疗具体疾病的严重程度。通常、使用足以提供有效治疗的最小剂量是优选的。使用适合于所治疗或预防的病症的标准，一般可以监控患者的疗效。
[0264] 可以使用本文提供的调节剂治疗的疼痛包括例如急性、慢性、炎性和神经病性疼痛。可以按照本文所述治疗的具体疼痛适应症包括但不限于：与骨关节炎或类风湿性关节炎有关的疼痛；各种神经病性的疼痛综合症(例如疱疹后神经痛、三叉神经痛、反射交感性营养不良、糖尿病性神经病变、Guillian Barre综合症、肌纤维痛、口腔神经病性疼痛、假肢痛、乳房
切除术后的疼痛、周围神经病、肌筋膜疼痛综合症、MS-相关的神经病、HIV或AIDS相关的神经病和
化学治疗引起的及其它医原性的神经病)；内脏疼痛、(例如与胃食管回流疾病(GERD)、肠易激综合症、炎性肠病、胰腺炎、肠胀气、妇科病症(例如月经疼痛、痛经、与膀胱炎有关的疼痛、阵痛、慢性盆腔疼痛、慢性前列腺炎、子宫内膜异位、心脏疼痛和腹痛)和泌尿病症有关的疼痛)；
牙齿疼痛(例如牙痛、假牙疼痛、神经根疼痛、由
牙周病产生的疼痛、和由于口腔外科造成的疼痛，包括手术和手术后的疼痛)；头痛(例如头痛，包括周围神经活动，静脉窦头痛，集束性头痛(即，偏头痛性神经痛)，肌紧张性头痛，偏头痛，颞下颌的疼痛和上颌窦疼痛)；
残肢痛；感觉异常性股痛；灼口综合症；与神经和根部损伤有关的疼痛，包括与周围神经病症有关的疼痛(例如，神经卡压和臂丛撕裂，截肢，周围性神经病包括双向周围神经病，三叉神经痛，非典型性的面部疼痛，神经根损伤和蛛网膜炎)，灼痛，神经炎(包括例如坐骨神经炎，周围神经炎，多发性神经炎，视神经炎，发热后神经炎，游走性神经炎，分节性神经炎和Gombault′s神经炎)，神经元炎，神经痛(例如，上述那些，颈臂神经痛，颅神经痛，
耳部神经痛，舌咽神经痛，偏头痛性神经痛，突发性的神经痛，胸壁神经痛，乳腺神经痛，下颌关节神经痛，跖骨痛症，鼻睫部神经痛，枕神经痛，红斑性肢痛病，Sluder′s神经痛，蝶腭神经痛，眶上神经痛和翼管神经痛)；手术相关的疼痛；肌骨胳疼痛；中枢神经系统疼痛(例如，由于脑干损伤造成的疼痛，坐骨神经痛和强直性脊柱炎)；和脊髓疼痛，包括脊髓损伤相关的疼痛。
[0265] 可以按照本文所述治疗的其他疼痛病症包括：Charcot′s疼痛、耳痛、肌肉疼痛、眼痛、口面疼痛(例如牙痛)、腕管综合症、急性和慢性背痛(例如下背疼痛)、痛风、瘢痕痛、痔痛、消化不良造成的疼痛、绞痛、神经根疼痛，“非疼痛性”神经病、综合区域疼痛综合症、同位疼痛和异位疼痛(包括与癌有关的疼痛，常常称为癌症相关的疼痛(例如患有骨癌的患者中的疼痛))、与接触毒液有关的疼痛(和炎症)(例如由于蛇咬、蜘蛛咬伤或虫螫造成的疼痛)和创伤相关的疼痛(例如手术后疼痛、外阴切开术疼痛、切口疼痛、肌骨胳疼痛、骨骼碰伤和断裂、和灼伤疼痛，特别是与其有关的原发性痛觉过敏)。可以按照本文所描述方法治疗的其它疼痛病症包括：与自身免疫疾病或免疫
缺陷病症相关的疼痛，热潮红(hot flashes)、灼伤、晒斑或接触热、冷或外部化学刺激物引起的疼痛。
[0266] 可以使用本文所提供调节剂治疗的、与炎症和/或免疫系统障碍相关的病症包括但不限于：关节炎(包括骨关节炎、类风湿性关节炎、
牛皮癣关节炎、瑞特氏综合症、痛风、外伤性关节炎、风疹关节炎、类风湿性脊椎炎、痛风性关节炎和幼年关节炎)；囊性纤维化；葡萄膜炎；系统性红斑狼疮(和相关的肾小球肾炎)；脊椎关节病；牛皮癣；巩膜炎；过敏病症(包括过敏性反应、过敏性鼻炎、过敏性接触超敏反应、过敏性皮炎、湿疹和接触性皮炎)、
再灌注损伤(例如心脏和肾再灌注损伤)、呼吸系统病症(包括
呼吸道的高
反应性、咳嗽、哮喘(例如在这种哮喘发病之后、预防或降低急性早期哮喘发病和晚期反应的严重程度；包括支气管、过敏、内在、外来、锻炼引起的、药物引起的(例如阿司匹林或NSAID引起的)和粉末引起的哮喘)、反应性气道疾病、肺气肿、急性(成年人)呼吸困难综合征(ARDS)、支气管炎(例如感染性的和嗜酸性支气管炎)、支气管扩张症、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性肺炎性疾病、硅肺、肺结节病、农民肺、过敏性肺炎和肺纤维化)、
病毒感染、
真菌感染、细菌感染、克罗恩病、肾小球肾炎、HIV感染和AIDS、肠易激综合症、炎性肠病、皮肤肌炎、多发性硬化、天疱疮、类天疱疮、硬皮病、重症肌无力、自身免疫性溶血和血小板减少状态、Goodpasture′s综合症(和相关的肾小球肾炎和肺出血)、组织移植排斥、移植器官的超急排斥、同种异体移植排斥、器官移植毒性、中性白细胞减少、败血症、脓毒性休克、内毒素性休克、结膜炎性休克、中毒性休克综合症、阿尔茨海默氏病、与严重灼伤相关的炎症、肺损伤、全身炎症反应综合症(SIRS)、初生儿-发作多系统炎性疾病(NOMID)、桥本氏甲状腺炎、Grave′s疾病、阿狄森氏病、特发性的血小板减少性紫癜、嗜酸性筋膜炎、高IgE综合症、抗磷脂综合症、麻疯病、西泽里综合征、
肿瘤伴随综合征、Muckle-Wells综合症、扁平苔癣、家族性寒冷型自身炎症综合症(FCAS)、大肠炎、破裂腹主
动脉瘤和多器官功能紊乱综合症(MODS)。还包括的是：与胰岛素依赖性糖尿病相关的病理性后遗症(包括糖尿病性视网膜病)、狼疮性肾病、Heyman肾炎、膜肾炎和肾小球肾炎的其它形式、黄斑变性、接触敏感性反应、和由血液与合成材料表面接触引起的炎症、例如在血液的体外循环期间(例如在血液
透析或通过心肺机期间、例如与血管手术有关连的炎症、例如
冠状动脉旁路移植术或
心脏瓣膜置换)、例如体外透析后的综合症、或与其它人造血管或容器表面接触有关连的后遗症(例如心室辅助医疗装置、人造心脏机械、输液管、血液储存袋、血浆除去、血小板分离等等)。
[0267] 可以使用本文提供的调节剂治疗的其他病症包括：
[0268] 心血管性病症，例如心血管疾病、中风、脑缺血、心肌梗塞、动脉粥样硬化、缺血性心脏病、缺血-再灌注损伤、主动脉瘤和充血性心力衰竭；
[0269] 眼部病症例如青光眼；
[0270] 神经疾病(例如神经变性)，例如，与渐进性CNS病症相关的神经变性病症，包括但不限于阿尔茨海默氏病、帕金森氏症、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿病、Creutzfeldt-Jakob疾病、路易体痴呆、创伤性脑损伤、脊髓损伤、神经外伤、大脑淀粉样蛋白血管病和脑炎；
癫痫和癫痫发作病症；多发性脑硬化及其它脱髓鞘综合症；脑动脉粥样硬化；血管炎；颞动脉炎；重症肌无力；中枢神经系统结节病；和恶性的中枢和周围神经系统并发症，感染性或自身免疫性过程；本文所提供的调节剂还可以用于促进神经再生；
[0271] 中枢介导的神经
精神病学病症，例如忧郁症、忧郁狂躁症、双极疾病、焦虑、
精神分裂症、
进食障碍、
睡眠障碍和
认知障碍；和
[0272] 其它病症，例如肝硬化；间质性纤维化；前列腺、膀胱和肠功能障碍(例如尿失禁、尿迟、直肠超敏反应、肛门失禁和良性前列腺肥大)；发痒/
瘙痒；
肥胖症；脂质病症；癌症；
高血压症；肾病；异常创伤愈合；髓细胞白血病；糖尿病；脑膜炎；静脉曲张；肌退化(muscle degeneration)；恶病质；
再狭窄；血栓；脑型疟疾；骨骼和关节病症(例如骨质疏松症、骨吸收疾病、人造关节
植入物的松弛及其它上列病症)；大疱性表皮松解(epidermolysis bullosa)；眼血管生成；
角膜损伤；角膜创痕和组织溃烂。
[0273] 本文提供的调节剂还可以用于视神经的神经保护(例如抑制患者的视网膜神经节细胞的死亡)。
[0274] 在其它方面中，本文提供的调节剂可以用于联合疗法中，用于治疗对P2X7调节敏感的病症(例如涉及疼痛和/或炎症成分的病症)。此类病症包括例如已知具有炎性成分的自身免疫病症和病理性自身免疫反应，所述炎性成分包括但不限于关节炎(特别是类风湿性关节炎)、牛皮癣、克罗恩氏病、红斑狼疮、肠易激综合症、组织移植排斥和移植器官的超急排斥。其它此类病症包括创伤(例如头部或脊髓的损伤)，心血管和脑血管病和某些传染病。
[0275] 在此类
联合治疗中，给予患者调节剂以及第二治疗剂(例如
镇痛药和/或消炎药)。调节剂和第二治疗剂可以存在于相同药物组合物中，或可以以任何顺序单独给药。消炎药包括例如非甾体消炎药物(NSAIDs)、非特异性的和环加氧酶-2(COX-2)特异性环加氧酶
抑制剂、金化合物、皮质甾类、甲氨喋呤、来氟米特、环孢素A、IM金、二甲胺
四环素、硫唑嘌呤、肿瘤
坏死因子(TNF)受体拮抗剂、可溶性TNFα受体(依那西普)、抗TNFα
抗体(例如英夫利昔单抗和阿达木单抗)、抗C5抗体、白介素-1(IL-1)受体拮抗剂(例如阿那白滞素或IL-1 trap)、IL-18结合蛋白、CTLA4-Ig(例如阿巴西普(abatacept))、抗-人IL-6受体单克隆抗体(例如托珠单抗(tocilizumab))、LFA-3-Ig融合蛋白(例如阿法赛特(alefacept))、LFA-1拮抗剂、抗VLA4单抗(例如那他珠单抗(natalizumab))、抗CD11a单克隆抗体、抗CD20单克隆抗体(例如利妥昔单抗)、抗IL-12单克隆抗体、抗IL-15单克隆抗体、CDP484、CDP870、趋化因子受体拮抗剂、选择性iNOS抑制剂、p38激酶抑制剂、整联蛋白拮抗剂、血管生成抑制剂和TMI-1双重抑制剂。其它消炎药包括美洛昔康、罗非考昔、塞来考昔、
艾托考昔、帕瑞考昔、伐地考昔和tilicoxib。
[0276] NSAIDs包括不限于布洛芬、氟比洛芬、萘普生或萘普生钠、双氯芬酸、双氯芬酸钠和迷索前列醇的组合、舒林酸、噁丙嗪、二氟尼柳、吡罗昔康、吲哚美辛、依托度酸、非诺洛芬钙、酮洛芬、萘丁美酮钠、柳氮磺吡啶、托美丁钠和羟氯喹。一类NSAIDs由抑制环加氧酶(COX)的化合物组成；此类化合物包括塞来考昔和罗非考昔。NSAIDs进一步包括水杨酸盐，例如乙酰水杨酸或阿司匹林、水杨酸钠、胆碱和水杨酸镁、和双水杨酯(salsalate)，以及皮质类固醇，例如可的松、地塞米松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠和泼尼松。
[0277] 在此类联合疗法中，P2X7调节剂的合适剂量一般如上所述。消炎药的剂量和给药方法可以例如在Physician′s Desk Reference中的制造商的说明书中找到。在某些实施方案中，联合给予调节剂与消炎药导致产生治疗效果所要求的消炎药的剂量降低(即，减少最小治疗有效量)。因此优选地，在组合或联合治疗方法中，消炎药的剂量小于制造商对给予消炎药(没有联合给予调节剂)所建议的最大剂量。更优选地，该剂量小于制造商对给予消炎药(当没有联合给予调节剂而施用时)所建议最大剂量的3/4，甚至更加优选小于1/2，高度优选小于最大剂量的1/4，而最优选该剂量小于最大剂量的10％。显然，需要实现预期效果的组合中的调节剂组分的剂量，可以通过共同给予消炎药而类似地得到降低。
[0278] 在某些优选实施方案中，联合给予调节剂与消炎药通过如下方式实现：将一种或多种调节剂和一种或多种消炎药包装在同一包装中，或者在该包装中的独立容器内，或者作为一种或多种调节剂与一种或多种抗炎药的混合物存在于相同容器内。将优选的混合物配制用于口服施用(例如作为丸剂、胶囊、片剂等)。在某些实施方案中，所述包装包含带有标志的标签，其注明了一种或多种调节剂和一种或多种消炎药一起用于治疗炎性疼痛病症。
[0279] 在其他方面中，本文提供的调节剂可以与一种或多种其它的疼痛减轻药物联合使用。某些此类药物也是消炎药，并且是以上所列举的。其它此类药物是镇痛药，包括麻醉剂(narcotic agents)，其典型地针对一种或多种阿片样物质受体亚型(例如μ、κ和/或δ)起作用，优选作为激动剂或部分激动剂。此类药剂包括阿片剂、阿片剂衍生物和阿片样物质、以及其药学上可接受的盐和水合物。在优选实施方案中，麻醉性镇痛药的具体例子包括：阿芬太尼、阿法罗定、阿尼利定、贝齐米特、丁丙诺啡、布托啡诺、可待因、双醋氢吗啡、海洛因、双氢可待因、地芬诺酯、乙基吗啡、芬太尼、海洛因、氢可酮、氢吗啡酮、异美沙酮(isomethadone)、左美沙芬(levomethorphan)、左吗喃(levorphane)、左啡诺、派替啶、美他佐辛、美沙酮、甲吗喃(methorphan)、美托酮、吗啡、纳布啡(nalbuphine)、阿片提取物、阿片流出物、阿片粉、小颗粒的阿片、原料阿片、阿片的酊剂、羟考酮、羟吗啡酮、复方樟脑酊、喷他佐辛、哌替啶、非那佐辛、匹米诺定、右丙氧芬、消旋甲啡烷、消旋啡烷(racemorphan)、新芬太尼(sulfentanyl)、蒂巴因和前述药剂的药学上可接受的盐和水合物。
[0280] 麻醉镇痛药的其它例子包括醋托啡、醋氢可待因、醋美沙朵、烯丙罗定、阿醋美沙朵(alphracetylmethadol)、阿法美罗定、阿法美沙朵、苄替啶、苄吗啡、倍醋美沙朵、倍他美罗定、倍他美沙朵、倍他罗定、氯尼他秦、溴甲可待因、可待因-N-氧化物、环丙诺啡、地索吗啡、右吗拉胺、地恩丙胺、二乙噻丁(diethylthiambutene)、双氢吗啡、地美沙朵、地美庚醇、二甲噻丁(dimethylthiamubutene)、吗苯丁酯、地匹哌酮、羟蒂巴酚、乙醇、乙甲噻丁、依托尼秦、埃托啡、依托利定、呋替啶(furethidine)、氢吗啡醇(hydromorphinol)、羟哌替啶(hydroxypethidine)、凯托米酮(ketobemidone)、左吗拉胺(levomoramide)、左芬 啡烷(levophenacylmorphan)、甲 地索 啡(methyldesorphine)、甲 二氢 吗 啡(methyldihydromorphine)、吗哌利定、吗啡、methylpromide、甲基磺酸吗啡、吗啡-N-氧化物、myrophin、纳洛酮、钠曲酮(naltyhexone)、烟酰可待因(nicocodeine)、尼可吗啡(nicomorphine)、诺美沙朵(noracymethadol)、去甲左啡诺(norlevorphanol)、去甲美沙酮(normethadone)、去甲吗啡、诺匹哌酮(norpipanone)、喷他佐辛(pentazocaine)、非吗庚酮、非那丙胺(phenampromide)、非诺啡烷、苯哌利定、哌腈米特(piritramide)、福尔可定、proheptazoine、丙哌利定、丙吡兰(propiran)、消旋吗拉胺(racemoramide)、醋氢可酮(thebacon)、曲米帕明(trimeperidine)和其药学上可接受的盐和水合物。
[0281] 其它具体的代表性镇痛药包括例如醋氨酚(对乙酰氨基酚)；阿司匹林和上述其它NSAIDs；NR2B拮抗剂；缓激肽拮抗剂；抗偏头痛药；抗惊厥药，例如奥卡西平和卡马西平；抗抑郁药(例如TCAs、SSRIs、SNRIs、物质P拮抗剂等)；脊髓阻断剂；喷他佐辛/纳洛酮；派替啶；左啡诺(Levorphanol)；丁丙诺啡；氢吗啡酮；芬太尼；舒芬太尼；羟考酮(oxycodone)；羟考酮/醋氨酚、纳布啡(nalbuphine)和羟吗啡酮。其他镇痛药包括CB2-受体激动剂，例如AM1241；辣椒碱受体拮抗剂和与
电压门控钙通道的α2δ亚单位结合的化合物，例如加巴喷丁和普瑞巴林。
[0282] 与本文所提供调节剂联合使用的代表性抗偏头痛药包括CGRP拮抗剂、辣椒碱受体拮抗剂、麦角胺和5-HT1激动剂，例如舒马曲坦(sumatripan)、那拉曲坦、唑咪曲坦(zolmatriptan)和利扎曲坦。
[0283] 在另外方面中，本文提供的调节剂可以与一种或多种β(2)-肾上腺素能受体激动剂或白三烯受体拮抗剂(例如抑制半胱氨酰白三烯CysLT1受体的药剂)联合，例如用于治疗肺部病症，例如哮喘。CysLT1拮抗剂包括孟鲁司特钠、扎鲁司特和普仑司特。
[0284] 对于视网膜神经保护和眼部病症的治疗，可将P2X7调节剂与例如以下的药剂联合+2给予眼部：一种或多种可抑制ATP释放的药剂、增强ATP转化为腺苷的药剂和/或抑制Ca流入视网膜神经节细胞中的药剂。此类药剂包括例如腺苷A3受体激动剂、腺苷A1受体激动+2
剂、胞外核苷酸酶激动剂、Ca 螯合剂和NMDA受体拮抗剂。
[0285] 在此类联合疗法中，P2X7调节剂的合适剂量一般如上所述。其它疼痛减轻药物的剂量和给药方法可以例如在Physician′s Desk Reference中的制造商的说明书中找到。在某些实施方案中，与一种或多种其它疼痛药物联合给予调节剂导致产生治疗效果所要求的各个治疗剂的剂量降低(例如，一种或两种药剂的剂量可以小于以上所列或制造商所建议的最大剂量的3/4，小于1/2，小于1/4或小于10％)。
[0286] 组合治疗中使用的上述药物组合物可以进一步包含一种或多种其它上述药物。在某些此类组合物中，其它药物是镇痛药。本文还提供包装的药物制剂，其在同一包装中包含一种或多种调节剂和一种或多种其它药物(例如镇痛药)。此类包装的药物制剂一般包括：(i)容纳药物组合物的容器，该药物组合物包含本文所描述的至少一种调节剂；(ii)容纳药物组合物的容器，该药物组合物包含至少一种上述其它药物(例如疼痛减轻和/或抗炎药物)，和(iii)说明书(例如标签或包装说明书)，其标明同时、单独或顺序使用组合物，用于在患者中治疗或预防对P2X7调节敏感的病症(例如其中疼痛和/或炎症起主要作用的病症)。
[0287] 在单独的方面，本发明提供本文所提供的调节剂化合物的各种非药学的体外和体内用途。例如，可以将此类化合物标记，并用作检测和定位P2X7的探针(在样品(例如细胞制剂或
组织切片、其制剂或级分(fractions))中)。另外，包含合适反应基团(例如芳基羰基、硝基或叠氮基)的本文所提供的调节剂可用于受体结合位点的光亲和标记研究。另外，本文提供的调节剂可以用作受体活性试验中的阳性对照，或作为放射性示踪剂(例如，在受体定位(mapping)程序中)。例如，可以使用各种众所周知的技术中的任意种将调节剂化合物标记(例如，用
放射性核素例如氚进行放射性标记，如本文所描述)，并且用作培养的细胞或组织样品中的P2X7的受体自动射线照相术(受体定位)用的探针，可以按照Kuhar在Current Protocols inPharmacology(1998)John Wiley & Sons，New York的8.1.1至8.1.9部分中所描述的方法进行，通过引用将该部分并入本文。这种受体定位程序还包括：
可在活体中用于表征P2X7的方法，例如，
正电子发射层析成象(PET)或单
光子发射计算机化
断层显象(SPECT)。
[0288] 以举例说明方式提供下列实施例，其并非用于限制。除非另作说明，所有的试剂和溶剂是标准商品级，并且未经进一步纯化而使用。使用常规
修改，可以改变起始原料和其它使用的步骤，以制备本文提供的其它化合物。实施例
[0289] 本文提供的质谱数据是电喷雾MS，以正离子模式获得。除非另作说明，使用配备有Waters 600
泵(Waters Corp.)、Waters 996光
二极管阵列检测器(Waters Corp.)和Gilson 215自动取样器(Gilson，Inc.；Middleton，WI)的Micromass Time-of-Flight TMLCT(Waters Corp.；Milford，MA)获得此类数据。MassLynx (Waters Corp.)4.0版
软件TM TM TM
(带有OpenLynx GlobalServer 、OpenLynx 和AutoLynx 处理)用于数据收集和分析。
MS条件如下：毛细管电压＝3.5kV；锥电压＝30V，去溶剂化温度和源温度分别等于350℃和120℃；质量范围＝181-750，扫描时间0.22秒，内扫描延迟0.05秒。
[0290] 对于用“§”标记的数据，使用配备有Waters 600泵(Waters Corp.)、Waters 996光二极管阵列检测器(Waters Corp.)和Gilson 215自动取样器(Gilson，Inc.；Middleton，WI)的 Waters ZMD II质 谱 仪(Waters Corp.)获 得 质 谱 数 据。
TM TM TM
MassLynx (Waters Corp.)4.0版软件(带有OpenLynx GlobalServer 、OpenLynx 和TM
AutoLynx 处理)用于数据收集和分析。MS条件如下：毛细管电压＝3.5kV；锥电压＝30V，去溶剂化温度和源温度分别等于250℃和100℃；质量范围＝100-800，扫描时间0.5秒，内扫描延迟0.1秒。
[0291] 对于任何一种方法，将1微升体积的样品注射到50x4.6mm ChromolithSpeedROD RP-18e柱(Merck KGaA，Darmstadt，德国)上，使用2相线性梯度洗脱，流速6ml/min。在220-340nm UV范围内检测样品，使用总吸光度计算。洗脱条件是：流动相A：95％水、5％MeOH(含有0.05％TFA)；流动相B：5％水、95％ MeOH(含有0.025％TFA)。使用下列梯度：
0-0.5min，10-100％B，在100％B处保持1.2min，在1.21min时回到10％B。注射周期是
2.15min。
[0292] 在指明时，保留时间(RT)以分钟提供。
[0293] 实施例1
[0294] 代表性杂芳基酰胺类似物的制备
[0295] 本实施例举例说明式I的代表性杂芳基酰胺类似物的制备，以及有用于制备此类化合物的某些中间体。对于化合物1-15，按照实施例4A所述测定的P2X7 IC50是2微摩尔或更小。
[0296] A.4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-A]吡啶-2-羧酸乙酯(化合物1)
[0297] 步骤1.4-羟甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-2，3-二羧酸二甲酯
[0298]
[0299] 在0℃下，经40分钟将O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺、约30-35％水(14.5g，52mmol)和CH2Cl2(100ml)的溶液滴加到3-吡啶基甲醇(5.0ml，52mmol)和CH2Cl2(100ml)的溶液中。在0℃下30分钟之后，除去
冰浴，在
环境温度下将溶液搅拌20分钟。减压除去挥发物，得到黄色油状的N-氨基-3-羟甲基吡啶鎓 基磺酸盐(N-amino-3-hydroxymethylpyridinium mesityl sulfonate)。加入DMF(100mL)和K2CO3(15g，110mmol)。将暗褐色混合物在水浴中冷却。经10分钟滴加乙炔二羧酸二甲酯(6.9mL，56mmol)。15分钟之后，除去水浴，在空气下将混合物剧烈搅拌18小时。通过过滤
硅藻土(CH2Cl2冲洗)之后，减压除去挥发物。将残余物在EtOAc中成浆，使混合物过滤通过硅藻土(EtOAc冲洗)。减压除去挥发物，得到暗褐色油。通过快速柱色谱纯化(2∶1己烷∶EtOAc至1∶1己烷∶EtOAc)，+ §
得到浅黄色固体状的标题化合物。LC-MS m/z(M+Na)：287.08 。
[0300] 步骤2.4-羟甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯
[0301]
[0302] 在空气下，将50％H2SO4水溶液(400mL)加入到4-羟甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-2，3-二羧酸二甲酯(11.6g，43.9mmol)中。将混合物温热至80℃。3.5小时之后，将溶液转移入2L烧瓶中，冷却至0℃。用10N NaOH水溶液将溶液中和。用1M HCl水溶液将所得
浆液酸化至pH3。减压除去挥发物。用30％ EtOH/CH2Cl2洗涤残余物。减压除去挥发物，得到+
褐色固体状标题化合物。LC-MS m/z(M+H)：193.07。
[0303] 将乙酰氯(9.5mL，130mmol)加入到无水乙醇(200mL)中。30分钟之后，将该溶液是倾入容纳4-羟甲基-吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸的烧瓶中。将混合物温热至50℃，保持3.5小时。冷却至室温后，滴加饱和NaHCO3水溶液，使混合物呈碱性。减压除去挥发物。用EtOAc萃取水溶液。用Na2SO4干燥有机物，过滤，浓缩，得到褐色粉末状标题化合物。+ §
LC-MS m/z(M+Na)：242.98 。
[0304] 步骤3.吡唑并[1，5-a]吡啶-2，4-二羧酸2-乙酯
[0305]
[0306] 在空气下，在水浴冷却下，经40分钟将2.65M琼斯试剂溶液(28mL)滴加入4-羟甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯(5.30g，24.1mmol)和丙酮(240mL)溶液中。20分钟之后，滴加入异丙醇(3mL)。搅拌30分钟之后，将蓝绿色混合物过滤(丙酮冲洗)。减压浓缩有机物。将残余物溶于水中。加入Et2O，搅拌混合物15分钟。过滤收集所得固体。干+燥滤液，得到褐色固体状标题化合物。LC-MS m/z(M+Na)：257.02§。
[0307] 步骤4.4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯
[0308] 化合物1
[0309] 在N2下，将BOP(11g，24mmol)加入到吡唑并[1，5-a]吡啶-2，4-二羧酸2-乙酯(5.6g，24mmol)、金刚烷-1-基甲胺(4.4g，27mmol)、iPr2NEt(21mL，120mmol)和DMF(240mL)的浆液(slurry)中。将反应容器密封，搅拌混合物15小时。加入EtOAc(200mL)。用50％饱和NH4Cl水溶液(2×500mL)洗涤该溶液。用EtOAc(3×200mL)萃取水相。将合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(2∶1己烷∶EtOAc至1∶1己烷∶EtOAc)，得到褐色固体状标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.62(d，1H)，7.60(d，1H)，7.44(s，1H)，7.00(t，1H)，6.23(bs，1H)，4.48(q，2H)，3.23(d，2H)，1.98-2.07(m，3H)，+
1.57-1.78(m，12H)，1.45(t，3H)。LC-MSm/z(M+H)：382.2；RT＝1.09min。
[0310] B.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-{[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]羰基}吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺(化合物2)
[0311] 步骤1.4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a ]吡啶-2-羧酸[0312]
[0313] 将3M KOH水溶液(2.6mL)加入到4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]-吡唑并[1，5-a ]吡啶-2-羧酸乙酯(503mg，1.32mmol)和EtOH(6.6mL)的混合物中。4小时之后，减压除去挥发物。将残余物水溶液用水(2mL)稀释，而后用1M HCl水溶液酸化
1
至约pH2。过滤收集固体，而后干燥，得到浅黄色粉末状标题化合物。H NMR(400MHz，((CD3)2SO)δ：8.86(d，1H)，8.50(t，1H)，7.71(d，1H)，7.26(s，1H)，7.12(t，1H)，3.00(d，+
2H)，1.88-1.98(m，3H)，1.48-1.69(m，12H)..LC-MS m/z(M+H)：354.09。
[0314] 步骤2.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-{[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]羰基}吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺
[0315] 化合物2
[0316] 在N2下，将BOP(680mg，1.5mmol)加入到4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]-吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸(417mg，1.18mmol)、(R)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(242mg，1.30mmol)、iPr2Net(620μL，3.6mmol)和DMF(12mL)的混合物中。将反应容器密封，搅拌溶液20小时。加入EtOAc(50mL)。用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤该溶液。将有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(2％MeOH/CH2Cl2)，得到褐色固体状(R)-(1-{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]-吡啶-2-羰基}吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯。加入MeOH(6.8mL)和4M HCl/二噁烷(1.7mL)。20小时之后，减压除去挥发物，得到淡褐色固体。加入15％ K2CO3水溶液(50mL)。用EtOAc(5×50mL)萃取溶液。将合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(1％ NH4OH/9∶11
CH2Cl2∶MeOH)，得到褐色泡沫状标题化合物。H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.48(ddd，1H)，
7.62(dd1H)，7.22(dd，1H)，6.87(t，1H)，6.50(bt，1H)，3.42-4.20(m，5H)，3.20(d，2H)，+
2.14(七重峰，1H)，1.96-2.04(m，3H)，1.55-1.88(m，12H)。LC-MS m/z(M+H)：422.3；RT＝
1.2min。
[0317] C.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-(羟甲基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺(化合物3
[0318] 化合物3
[0319] 在N2下，在0℃，将2.0M LiBH4的THF溶液(5.8mL)滴加到4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯(2.01g，5.27mmol)和THF(50mL)的溶液中。10分钟后，除去冰浴。3小时之后，加入另外的2.0M LiBH4的THF溶液(2.0mL)。4小时之后，滴加入饱和NH4Cl水溶液。减压除去挥发物。加入水(20mL)，过滤收集固体。使固体在MeOH(75mL)中成浆，温热至50℃，保持4小时。减压除去挥发物，得到淡褐色固体状1
标题化合物。H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.58(ddd，1H)，7.56(dd，1H)，6.92(t，1H)，6.90(s，+
1H)，4.80(s，2H)，3.12(s，2H)，1.96-2.04(m，3H)，1.62-1.84(m，12H)..LC-MS m/z(M+H)：
340.3；RT＝1.27min。
[0320] D.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-{[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]甲基}吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺(化合物4)
[0321] 步骤1.甲磺酸4-[(金刚烷基-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基甲酯
[0322]
[0323] 在N2下，将甲磺酰氯(140μL，1.2mmol)加入到2-羟甲基-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)酰胺(510mg，1.5mmol)的THF(15mL)和三乙胺(310μL，2.3mmol)浆液中。1小时之后，过滤混合物(THF冲洗)。减压除去挥发物，得到浅黄色固体+
状标题化合物。LC-MS m/z(M+Na)：440.04。
[0324] 步骤2.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-{[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]甲基}吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺
[0325] 化合物4
[0326] 在N2下，将(R)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(420mg，2.3mmol)加入到甲磺酸4-[(金刚烷基-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基甲酯(630mg，1.5mmol)、K2CO3(530mg，3.8mmol)和DMF(15mL)的混合物中。3小时之后，加入水(50mL)。
用EtOAc(50mL)萃取溶液。用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机物，而后用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(1％ NH4OH/95∶5 CH2Cl2∶MeOH)，得到褐色泡沫状(R)-(1-{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基甲基}吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯。将该泡沫溶于MeOH(12mL)和4M HCl的二噁烷(3.0mL)溶液中。6小时之后，减压除去挥发物，得到褐色泡沫。加入15％饱和K2CO3水溶液(50mL)，用EtOAc(5×25mL)萃取混合物。将合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(1％ NH4OH/9∶1 CH2Cl2∶MeOH至2％NH4OH/4∶1 CH2Cl2∶MeOH)，褐色泡
1
沫状得到标题化合物。H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.49(d，1H)，7.54(dd，1H)，6.77(s，1H)，
6.75(t，1H)，6.30(bt，1H)，4.85(dd，2H)，3.48-3.58(m，1H)，3.20(d，2H)，2.77-2.88(m，+
2H)，2.52(m，1H)，2.43(dd，1H)，2.14-2.28(m，1H)，1.45-2.05(m，18H)。LC-MSm/z(M+H)：
408.3；RT＝1.15min。
[0327] E.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-(氰基甲基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺(化合物5)
[0328] 化合物5
[0329] 在N2下，将氰化钠(520mg，11mmol)加入到甲磺酸4-[(金刚烷基-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基甲酯(720mg，2.1mmol)和DMF(20mL)的溶液中。将混合物温热至60℃，保持1小时。冷却至室温后，用EtOAc(50mL)稀释混合物，而后用50％饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(2∶1 EtOAc∶己烷)，得到褐色泡沫状标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.48(d，1H)，7.54(dd，1H)，6.91(s，1H)，6.83(t，1H)，6.26(bs，1H)，3.97(s，2H)，3.20(d，2H)，1.97-2.05(m，3H)，1.55-1.79(m，12H)。LC-MS m/z(M+H+)：349.3；
RT＝1.28min。
[0330] F.{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基}乙酸(化合物6)
[0331] 化合物6
[0332] 将浓HCl(2.3mL)和AcOH(4.6mL)的溶液加入到2-氰基甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)酰胺中。将溶液温热至60℃，保持20小时。减压除去挥发物，将残余物溶于1M NaOH水溶液(10mL)中。用Et2O(20mL)洗涤溶液。用1MHCl水溶液将1
水层酸化至约pH3。过滤混合物，干燥滤液，得到淡褐色固体状标题化合物。H NMR(400MHz，((CD3)2SO)δ：8.71(d，1H)，8.40(bt，1H)，7.60(d，1H)，6.90(t，1H)，6.79(s，1H)，3.75(s，+
2H)，2.99(d，2H)，1.88-1.96(m，3H)，1.46-1.70(m，12H)。LC-MS m/z(M+H)：368.3；RT ＝
1.27min。
[0333] G.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-{2-[(3R)-3-氨基哌啶-1-基]-2-氧代乙基}吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺(化合物7)
[0334] 化合物7
[0335] 在N2下，将BOP(250mg，570mmol)加入到{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]-吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基}乙酸(160mg，435μmol)、(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(96mg，480μmol)、iPr2NEt(230μL，1.3mmol)和DMF(2.2mL)的混合物中。将反应容器密封，搅拌溶液15小时。加入EtOAc(25mL)。用水(2×50mL)和盐水(25mL)洗涤该溶液。将有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(95∶5 CH2Cl2∶MeOH)，得到橙色泡沫状(R)-(1-{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基}乙酰基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。加入MeOH(4.2mL)和4M HCl的二噁烷(1.1mL)溶液。16小时之后，减压除去挥发物，得到淡褐色固体。加入15％K2CO3水溶液(30mL)。用EtOAc(3×30mL)萃取溶液。将合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯
1
化(1％ NH4OH/9∶1CH2Cl2∶MeOH)，得到褐色泡沫状标题化合物。H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.46-8.64(m，1H)，7.44(bs，1H)，6.68-6.80(m，2H)，3.86-4.17(m，3H)，3.38-3.61(m，+
3H)，3.12-3.25(m，3H)，1.40-2.04(m，19H)。LC-MS m/z(M+H)：450.3；RT＝1.17。
[0336] H.{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基甲氧基}乙酸乙酯(化合物8)
[0337] 化合物8
[0338] 在0℃，在N2下，将1.0M tBuOK的THF(0.3mL)溶液加入到2-羟甲基-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)酰胺(73mg，210μmol)和DMF(1mL)的混合物中。
5分钟之后，加入溴乙酸乙酯(30μL，280μmol)。将低温浴除去，搅拌混合物23小时。加入50％饱和NaHCO3水溶液，用EtOAc(20mL)萃取该溶液。将有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓
1
缩。通过PTLC纯化(2∶1 EtOAc∶己烷)，得到标题化合物，为浅黄色膜。HNMR(400MHz，CDCl3)δ：8.50(dd，1H)，7.57(d，1H)，6.88(s，1H)，6.81(dt，1H)，6.27(bs，1H)，4.88(s，
2H)，4.22(q，2H)，4.19(s，2H)，3.21(d，2H)，1.94-2.04(m，3H)，1.56-1.78(m，12H)，1.28(t，+
3H)。LC-MS m/z(M+H)：426.3；RT＝1.31。
[0339] I.{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基甲氧基}乙酸(化合物9)
[0340] 化合物9
[0341] 将3M KOH水溶液(50μL)加入到{4-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]-吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基甲氧基}乙酸乙酯(11mg，25μmol)和EtOH(250μL)的溶液中。
18小时之后，减压除去挥发物。将残余物用水(0.3mL)稀释，而后用1M HCl水溶液酸化。
1
过滤收集标题化合物。H NMR(400MHz，((CD3)2SO)δ：8.74(d，1H)，8.42(bs，1H)，7.62(d，
1H)，6.93(t，1H)，6.84(s，1H)，4.70(s，2H)，4.08(s，2H)，2.99(d，2H)，1.86-2.00(m，3H)，+
1.48-1.73(m，12H)。LC-MS m/z(M+H)：398.3；RT＝1.26。
[0342] J.4-(2-金刚烷-1-基乙酰氨基)吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯(化合物10)[0343] 步骤1.4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2，3-二羧酸二甲酯
[0344]
[0345] 在0℃下，经30分钟将O-2，4，6-三甲基苯磺酰羟胺、约30-35％水(14.5g，52mmol)和CH2Cl2(100mL)的溶液滴加到3-氨基吡啶(4.9g，52mmol)和CH2Cl2的溶液(100mL)中。在0℃，30分钟之后，除去冰浴，在室温下将溶液搅拌30分钟。减压除去挥发物，得到黄色油状N-氨基-3-氨基吡啶鎓 基磺酸盐。加入DMF(100mL)和K2CO3(15g，
110mmol)。将暗褐色混合物在水浴中冷却。经10分钟滴加入乙炔二羧酸二甲酯(6.9mL，
56mmol)。15分钟之后，除去水浴，在空气下将混合物剧烈搅拌66小时。减压除去挥发物。
将残余物在MeOH中成浆，使混合物过滤通过硅藻土(MeOH冲洗)。减压除去挥发物，得到暗褐色油。加入33％饱和NaHCO3水溶液(150mL)，用EtOAc(6×200mL)萃取该溶液。将合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速柱色谱纯化(CH2Cl2)，得到橙红色油状标题+
化合物。LC-MS m/z(M+Na)：272.01。
[0346] 步骤2.4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯
[0347]
[0348] 在空气下，将50％H2SO4水溶液(60mL)加入到4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2，3-二羧酸二甲酯(1.47g，5.90mmol)中。将混合物温热至80℃。6.5小时之后，将溶液冷却至0℃，而后用10N NaOH水溶液中和。用1M HCl水溶液将所得浆液酸化至pH3。减压除去挥发物。用30％EtOH/CH2Cl2洗涤残余物。减压除去挥发物，得到4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸(在Na2SO4中)。LC-MS m/z(M+H+)：178.01。将浓H2SO4(6.0mL)和乙醇(120mL)的溶液加入到粗品4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸中。将混合物温热至75℃，保持
3.5小时。冷却至室温后，滴加入饱和NaHCO3水溶液，使混合物呈碱性。减压除去挥发物。
过滤混合物水溶液(EtOAc冲洗)。用EtOAc(3×250mL)萃取水溶液。用Na2SO4干燥合并的有机物，过滤，浓缩，得到暗褐色固体状标题化合物。LC-MS m/z(M+Na+)：228.03。
[0349] 步骤3.4-(2-金刚烷-1-基乙酰氨基)吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯
[0350] 化合物10
[0351] 在N2下，将1.0M三乙胺的甲苯(0.3mL)溶液加入到1-金刚烷乙酸(14mg，80μmol)和4-氨基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯(12mg，60μmol)的DMF(0.3mL)溶液中。加入2-氯-1，3-二甲基咪唑啉鎓氯化物(20mg，120μmol)的ACN(0.3mL)溶液。将反应容器密封，将混合物温热至50℃，保持2小时。将混合物冷却至室温。加入50％饱和NaHCO3水溶液(2mL)。用EtOAc(2×1mL)萃取该溶液。浓缩合并的有机物。通过制备薄层
1
色谱纯化(2∶1 己烷∶EtOAc)，得到淡褐色固体状标题化合物。H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.32(d，1H)，8.05(d，1H)，7.15(s，1H)，7.05(s，1H)，6.91(t，1H)，4.59(q，2H)，2.21(s，+
2H)，1.98-2.06(m，3H)，1.56-1.78(m，12H)，1.46(t，3H)。LC-MS m/z(M+H)：382.10。
[0352] 实施例2
[0353] 其它代表性杂芳基酰胺类似物的合成
[0354] 本实施例举例说明了式I的其它代表性杂芳基酰胺类似物的合成，以及在制备此类化合物中使用的某些中间体的合成。
[0355] A.2-(2-氰基-乙烯基)-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)-酰胺(化合物11)
[0356] 步骤1.2-甲酰基-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)-酰胺
[0357]
[0358] 将4-[(金刚烷-1-基甲基)-氨基甲酰基]-吡唑并[1，5-a]吡啶-2-羧酸乙酯(1.2g，3.1mmol)的THF(25mL)溶液冷却至-78℃。滴加入DIBAL-H溶液(25mL，1M，在己烷中)。将混合物在-78℃搅拌2小时。加入饱和罗谢尔(Rochelle)盐溶液，在室温搅拌混合物4小时。用DCM(4×70mL)萃取混合物，用Na2SO4干燥有机层。通过快速柱纯化(用2-3％MeOH/DCM洗脱)，得到标题化合物。
[0359] 步骤2.2-(2-氰基-乙烯基)-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)-酰胺
[0360] 化合物11
[0361] 在室温，将Ph3P＝CHCN(735mg，2.5mmol)加入到2-甲酰基-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)-酰胺(700mg，2.1mmol)的THF溶液中。将混合物搅拌2小时。除去溶剂，用快速柱(用20至30％ EtOAc/己烷洗脱)将所得Z和E异构体的混合物分离为纯的Z异构体、纯的E异构体和混合物(Z/E)。
[0362] B.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-(2-氰乙基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-甲酰胺(化合物12)
[0363] 化合物12
[0364] 将Pd/C(50mg)加入到2-(2-氰基-乙烯基)-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)-酰胺的MeOH溶液中。在氢气球(hydrogen balloon)下将混合物搅拌+6小时。使混合物过滤通过硅藻土，除去溶剂，得到标题化合物。LC-MS m/z(M+H)：363。
[0365] C.2-[2-(1H-四唑-5-基)-乙基]-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)-酰胺(化合物13)
[0366] 化合物13
[0367] 在室温，将NaN3(65mg，0.48mmol)和NH4Cl(26mg，0.48mmol)加入到2-(2-氰基-乙基)-吡唑并[1，5-a]吡啶-4-羧酸(金刚烷-1-基甲基)-酰胺(58mg，0.16mmol)的DMSO溶液中。将混合物加热至130℃，保持6小时。加入另外的NaN3(65mg，0.48mmol)，并将混合物加热14小时。将混合物冷却至室温。加入水，将pH调节至大约7。用EtOAc(3×15mL)萃取水层，经Na2SO4干燥，除去溶剂至干。将粗产物通过PTLC纯化(用2％MeOH/DCM洗脱)，1
得到标题化合物。H NMR(CDCl3)：8.49-8.47(d，1H)，7.52-7.50(d，1H)，6.79-6.69(t，1H)，
6.69(s，1H)，6.40(b，1H)，3.44-3.41(m，2H)，3.31-3.29(m，2H)，3.20-3.19(m，2H)，2.00(b，+
3H)，1.74-1.60(m，12H)..LC-MSm/z(M+H)：406.07。
[0368] D.N-(金刚烷-1-基甲基)-3-(3-氰基苯甲酰基)中氮茚-8-甲酰胺(化合物14)[0369] 步骤1.N-(金刚烷-1-基甲基)-2-甲基烟酰胺
[0370]
[0371] 向2-甲基烟酸(2.06g，15mmol)在40mL DMF中的混合物中顺序加入二异丙基乙胺(5.2mL，30mmol)、1-金刚烷-1-基甲胺(2.5g，15mmol)和苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)-磷鎓六氟磷酸盐(BOP试剂，8g，18mmol)。将所得混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物倾入冰水(150mL)中，通过
真空抽滤收集沉淀的固体，真空干燥，得到灰白色固体状标题化合物。质谱：(285.19，M+H)。
[0372] 步骤2.3-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]-1-[2-(3-氰基苯基)-2-氧代乙基]-2-甲基吡啶鎓溴化物
[0373]
[0374] 将N-(金刚烷-1-基甲基)-2-甲基烟酰胺(300mg，1.05mmol)和3-(溴乙酰基)苄腈(235mg，1.05mmol)在10mL丙酮中的混合物回流搅拌2.5天。冷却至室温后，
蒸发大1
部分丙酮，过滤剩余的混合物。将收集的固体真空干燥，得到白色固体状标题化合物。H
6
NMR(400MHz，DMSO-d)δ8.93(1H，m)，8.86(1H，bs)，8.62(1H，d)，8.58(1H，s)，8.33(1H，d)，
8.26(1H，d)，8.14(1H，t)，7.87(1H，t)，6.60(2H，s)，3.01(2H，d)，2.67(3H，s)，1.94(3H，s)，
1.63(6H，m)，1.51(6H，s)。
[0375] 步骤3.N-(金刚烷-1-基甲基)-3-(3-氰基苯甲酰基)中氮茚-8-甲酰胺
[0376]
[0377] 将3-[(金刚烷-1-基甲基)氨基甲酰基]-1-[2-(3-氰基苯基)-2-氧代乙基]-2-甲基吡啶鎓溴化物(400mg，0.81mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(0.22mL，
1.62mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物在110℃搅拌3小时。真空浓缩混合物，通过柱色谱
1
纯化(梯度从CH2Cl2至10％ EtOAc/CH2Cl2)，得到黄色固体状标题化合物。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.91(1H，d)，8.53(1H，t)，8.15(1H，m)，8.05(2H，m)，7.74(1H，t)，7.66(1H，dd)，
7.44(1H，d)，7.22(1H，t)，6.95(1H，d)，3.01(2H，d)，1.93(3H，s)，1.63(6H，m)，1.52(6H，s)。
质谱(438.19，M+H)。
[0378] E.N-(金刚烷-1-基甲基)-3-(3-氨基甲酰基苯甲酰基)中氮茚-8-甲酰胺(化合物15)
[0379]
[0380] 向冰冷的H2SO4(0.5mL)中一次加入N-(金刚烷-1-基甲基)-3-(3-氰基-苯甲酰基)中氮茚-8-甲酰胺(50mg，0.11mmol)。在0℃搅拌混合物，直到它变成均相为止，此时除去冰浴，将反应液温热至室温。搅拌12小时之后，将混合物冷却回到0℃，用冰猝灭。用5N NaOH将所得溶液中和至pH＝7-8，用EtOAc(20mL)萃取。将EtOAc萃取物干燥(Na2SO4)，过1
滤，蒸发，得到黄色固体状标题化合物。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.92(1H，d)，8.50(1H，t)，8.22(1H，s)，8.09(2H，m)，7.88(1H，d)，7.62(2H，m)，7.48(1H，s)，7.40(1H，d)，7.19(1H，t)，6.94(1H，d)，3.00(2H，s)，1.93(3H，s)，1.62(6H，m)，1.52(6H，s)。质谱：(456.21，M+H)。
[0381] 实施例3
[0382] 其它代表性杂芳基酰胺类似物的合成
[0383] 使用常规修改(modifications)，可以改变起始原料和其它使用的步骤，以制备本文提供的其它化合物。使用此类方法制备列于表I和II中的化合物。在表I的标记″IC50″的栏中，“＊”表示按照实施例4A中所述测定的IC50是2微摩尔或更小(即，将与80μM的(2′(3′)-O-(4-苯甲酰基-苯甲酰基)腺苷5′-三磷酸(triphosephate)接触的细胞的荧光反应降低50％所要求的此类化合物浓度是2微摩尔或更小)。
[0384] 质谱数据(以(M+1)计)提供于表I中的标题为“MS”的栏中。保留时间(分钟)提供于标题为RT的栏中。
[0385] 表I
[0386] 代表性杂芳基酰胺类似物
[0387]
[0388]
[0389]
[0390]
[0391]
[0392]
[0393]
[0394]
[0395]
[0396]
[0397]
[0398]
[0399]
[0400]
[0401]
[0402]
[0403]
[0404]
[0405]
[0406]
[0407]
[0408]
[0409]
[0410]
[0411]
[0412] 表II
[0413] 其它代表性杂芳基酰胺类似物
[0414]
[0415]
[0416]
[0417] 实施例4
[0418] P2X7试验
[0419] 本实施例举例说明了用于评价测试化合物的激动剂活性和拮抗剂活性的代表性试验。
[0420] A.高通量P2X7钙转移试验
[0421] 在5％ CO2中，在37℃下，将SH-SY5Y细胞(ATCC编号CRL-2266)(美国模式培养物保藏所，Manassas，VA)在补充有10％ FBS和10mM HEPES(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)的DMEM/高糖培养基(DMEM/High medium)中培养。在实验前一天，将细胞以100,000个细胞/孔的
密度涂覆(plated)在96孔黑色/透明的TC平板(Sigma-Aldrich Co.，St.Louis，MO)中。在实验开始时，除去培养基，在试验溶液(5mM KCl，
9.6mM NaH2PO4.H2O，25mM HEPES，280mM蔗糖，5mM葡糖和0.5mM CaCl2；用NaOH将pH调节至
7.4)中于37℃，将细胞与50μL 2.3μM Fluo-4 AM染料(Invitrogen Corp.)孵育一小时。染料孵育一个小时之后，用50μL试验溶液冲洗孔一次，然后在室温下用包含测试化合物的100μL试验溶液孵育一小时。测试化合物的终浓度一般为1至2500nM；对于阳性对TETRA
照细胞，不加入测试化合物。孵育一个小时之后，将平板转移至FLIPR 仪器(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)中，进行钙转移分析。
[0422] 对于测定拮抗剂活性，使用FLIPR将50μL试验溶液中的P2X7激动剂(2′(3′)-O-(4-苯甲酰基-苯甲酰基)腺苷5′-三磷酸(BzATP；Sigma-Aldrich)转移到平板中，以使激动剂终浓度是80μM(大约是EC50)。在阴性对照细胞中，在此步骤中加入不含激动剂的50μL试验溶液。然后测定2分钟周期内的峰值荧光信号。
[0423] 数据分析如下。首先，从每个其它实验孔所检测的最大响应中减去阴性对照孔(没有激动剂)的平均最大相对荧光单位(RFU)响应。其次，计算阳性对照孔(激动剂孔)的平均最大RFU响应。然后，使用以下方程式计算测试的每个化合物的抑制百分比：
[0424] 抑制百分比＝100-100×(试验细胞的峰值信号/对照细胞的峰值信号)
[0425] 以测试化合物浓度的函数形式将％抑制数据作图，使用例如KALEIDAGRAPH软件(Synergy Software，Reading，PA)测定测试化合物的IC50，将数据按以下方程式进行最佳拟合：
[0426] y＝m1＊(1/(1+(m2/m0)m3))
[0427] 其中y是抑制百分比，m0是激动剂的浓度，m1是最大RFU，m2对应于测试化合物IC50(相对于存在激动剂且没有拮抗剂时所观察的响应，提供50％降低所要求的浓度)，m3是Hill系数。或者，使用线性回归测定测试化合物的IC50，其中x是ln(测试化合物的浓度)，y是ln(抑制百分比/(100-抑制百分比))。排除大于90％或小于15％的抑制百分(-截距/斜率)比的数据，并且不用于回归。用这种方式计算的IC50是e 。对于P2X7的拮抗剂，计算的IC50优选低于20微摩尔，更优选低于10微摩尔，更加优选低于5微摩尔，最优选低于
1微摩尔。
[0428] 在没有加入激动剂的情况下进行类似的试验，以测定测试化合物的激动剂活性。在此类试验中，通过测量作为化合物浓度函数的测试化合物所引起的荧光响应，测定测试化合物充当P2X7的激动剂的能力。没有显示可检测的激动剂活性的P2X7拮抗剂在2,500nM的浓度下没有引起可检测的荧光响应。
[0429] B.P2X7电生理学试验
[0430] 在5％ CO2中，在37℃下，将SH-SY5Y细胞在 补充有10％ FBS和 10mMHEPES(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)的DMEM/高糖培养基中培养，在实验前一天，在
35mm盘中，将细胞分离到12mm圆形聚-D-赖氨酸(PDL)涂布的盖玻片(BD Biosciences，San Jose，CA)上，密度是130K个细胞/盘。用Axopatch-200B
放大器(Axon Instruments，Foster City，CA)制备全细胞电压钳记录。记录
电极是在水平拉制器(Sutter Instrument ModelP-87)上从硼硅酸盐吸管(borosilicate pipette)(World PrecisionInstruments，Sarasota，FL)拉制的，当用内部溶液反填充时，其具有2至3MΩ的
电阻。所有的电压规程使用pClamp 8(Axon Instruments)软件生成。在1或5kHz处将数据数字化，并记录到PC上用于进一步分析。使用Clampfit(Axon Instruments)、Excel(Microsoft，Redmond，WA)和Origin软件(MicroCal，LLC；Northampton，MA)分析数据。在室温下进行所有的全细胞记录。内部溶液包含(mM)：100 KF，40 KCl，5 NaCl，10 EGTA和10 HEPES(pH＝7.4，用KOH调节)。外部溶液包含70mM NaCl，0.3mM CaCl2，5mM KCl，20mM HEPES，10mM
葡萄糖和134mM蔗糖(pH＝7.4，用NaOH调节)。除非另有说明，所有的化学品得自Sigma。
[0431] 通过200μM的P2X7激动剂BzATP活化P2X7。在-80mV的钳制电压下，在存在和不存在测试化合物的条件下，记录活化的向内(inward)
电流。然后，使用下面的方程式计算试验的每个化合物的抑制百分比：
[0432] ％抑制＝100-100×(化合物的电流振幅/对照物的电流振幅)。
[0433] 为了电生理学测定测试化合物对于P2X7的IC50，试验化合物的数种浓度，如上计算它们对P2X7电流的抑制。用下列方程式，使用Origin软件(Microcal，MA)，最好地拟合剂量反应曲线：
[0434] 抑制％＝100/(1+(IC50/C)N)
[0435] 其中C是拮抗剂的浓度，N是Hill系数，IC50表示针对P2X7的化合物IC50。
[0436] 实施例5
[0437] 用于测定疼痛减轻的卡拉胶诱导的机械痛觉过敏(爪压力)试验
[0438] 本实施例举例说明评价测试化合物所提供的疼痛减轻程度的代表性方法。
[0439] 将成年雄性Sprague Dawley大鼠(200-300g；得自Harlan SpragueDawley，Inc.，Indianapolis，IN)在12小时光照/黑暗周期的条件下放置(housed)，自由采食食物和水。对于该试验，使所有动物形成习惯(habituated)一次、基线测试(baselined)两次和试验一次，其中各程序(procedure)在单独的一天进行。在每天(each day’s)的程序之前，使动物在试验室中适应至少1小时，而后开始该程序。对于形成习惯，将每个动物的每个后爪连续地伸长到动物的前面温和地束缚，因为这是试验必需的。通过更迭后爪并对每个后爪重复三次来进行该程序。然后在连续数日中，使动物经受第一基线、第二基线测试和经受试验。对于各基线测试，将动物按照习惯形成期间的方式进行束缚，使用爪压力试验装置(Digital RandallSelitto，IITC Inc.，Woodland Hills，CA)进行爪试验。将动物进行基线测试，分十组进行试验，每个动物对左和右后爪试验一次，而后试验下一个顺序的动物。将该程序重复三次，每个后爪总共进行三个测定。对于给定的后爪，如果任何单一读数与其它两个明显不同(变化超过大约100g)，则对该后爪重新试验第4次，使用三个最一致评分(score)的平均值。在试验当天，在试验之前3小时，给所有动物趾内注射0.1mL0.5％-1.5％卡拉胶(溶于盐水中)。在试验之前，可在各个时间点通过各种途径给予试验化合物或赋形剂，但对于任何具体试验，对于给予试验化合物的每个试验组(可以给予每个此类组不同剂量的试验化合物)中的动物和给予赋形剂对照物的处理组中的动物来说，
