天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用
阅读：551发布：2022-12-29
专利汇可以提供天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于中药技术领域，具体涉及一种天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875 细胞增殖 药物中的应用及天胡荽愈肝片的制备方法。所述天胡荽愈肝片由天胡荽699g、杏叶防 风 1398g、酢浆草699g、虎掌草209g作为 原料药 制成，采用超临界萃取制备而成，使得 齐墩果酸 含量有很大提高。，下面是天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用专利的具体信息内容。
1.天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用，所述天胡荽愈肝片由天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g作为原料药制成，其特征在于，所述天胡荽愈肝片的制备方法包括如下步骤：取天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草
699g、虎掌草209g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间
800-1000min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.30g。
2.根据权利要求l所述的天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用，其特征在于，所述天胡荽愈肝片的制备方法包括如下步骤：取天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间900min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成
500片，每片重0.30g。
天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中
的应用
技术领域
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用及天胡荽愈肝片的制备方法。
背景技术
[0002] 天胡荽愈肝片标准号WS-10213（ZD-0213）-2002，记载于国家中成药标准汇编内科肝胆分册。由天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g作为原料药制成，具有清热解毒，疏肝利胆的功效，用于肝胆湿热所致的急、慢性肝炎。
[0003] 现有技术中，尚未有天胡荽愈肝片在在制备抑制人黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用的报道，也未见有天胡荽愈肝片提取制备方面采用超临界萃取的报道，而传统水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
[0004] 发明目的：本发明的目的在于提供一种天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种天胡荽愈肝片的制备方法。
[0006] 本发明的目的是通过如下的方案实现的：天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用，所述天胡荽愈肝片由天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g作为原料药制成，所述天胡荽愈肝片的制备方法包括如下步骤：取天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间800-1000min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重
0.30g。
0.30g。
[0007] 优选的，上述的天胡荽愈肝片在制备抑制黑色素瘤细胞A875细胞增殖药物中的应用，所述天胡荽愈肝片的制备方法包括如下步骤：取天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间900min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重
0.30g。
0.30g。
[0008] 现有技术中，天胡荽愈肝片口服，一次6片，一日3次。天胡荽愈肝片服药量大。采用本发明方法制备成的天胡荽愈肝片每片重0.30g，每次仅需3片，一日服用3次。在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。
[0009] 试验一、不同方法制备的天胡荽愈肝片中齐墩果酸含量的比较l、仪器及试药本发明天胡荽愈肝片：按实施例1方法制备，使用3005g原料药，经提取制成500片，每片重0.30g。原天胡荽愈肝片，按照WS-10213（ZD-0213）-2002标准方法制备。
Agilent1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
Agilent1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
[0010] 2、方法照高效液相色谱法（中国药典2015年版第四部凡例十五）测定。
[0012] 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
[0013] 本发明的天胡荽愈肝片供试品溶液的制备 取本发明的天胡荽愈肝片，研细，取0.75g（2.5片的量），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加20％盐酸溶液5ml，加热回流2.5小时，加水30ml，水浴上浓缩至无醇味，放冷，用二氯甲烷振摇提取3次（40ml、30ml、30ml），合并二氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0014] 对照产品供试品溶液的制备 取对照的天胡荽愈肝片20g，研细，取1.5g（5片的量），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加20％盐酸溶液5ml，加热回流2.5小时，加水30ml，水浴上浓缩至无醇味，放冷，用二氯甲烷振摇提取3次（40ml、30ml、30ml），合并二氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
[0015] 测定法 分别精密吸取对照品溶液与本发明的天胡荽愈肝片供试品溶液、对照产品供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0016] 3、结果结果表明，本发明天胡荽愈肝片中齐墩果酸的含量为3.22-6.45mg/片；而原天胡荽愈肝片中齐墩果酸的含量为0.81mg/片，每次服用量3片的齐墩果酸含量为原片剂6片含量的
2-4倍，在服用量减少的情况下，齐墩果酸含量有很大提高。
2-4倍，在服用量减少的情况下，齐墩果酸含量有很大提高。
[0017] 上述研究表明，采用本发明制备方法制备的天胡荽愈肝片，有效成分含量远远高于WS-10213（ZD-0213）-2002标准记载的方法制备的天胡荽愈肝片。
具体实施方式
[0018] 下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0019] 实施例1取天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间900min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.30g。
[0020] 经检测，成品中齐墩果酸的含量为6.45mg/片。
[0021] 实施例2取天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1ml/g生药·min，萃取时间1000min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.30g。
[0022] 经检测，成品中齐墩果酸的含量为4.98mg/片。
[0023] 实施例3取天胡荽699g、杏叶防风1398g、酢浆草699g、虎掌草209g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度60℃，CO2流量3ml/g生药·min，萃取时间800min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.30g。
[0024] 经检测，成品中齐墩果酸的含量为3.22mg/片。
[0025] 实施例4：天胡荽愈肝片抑制人黑色素瘤细胞A875细胞增殖的实验研究资料1．实验材料
1.1实验用细胞株
人黑色素瘤细胞A875细胞，山东大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
1.1实验用细胞株
人黑色素瘤细胞A875细胞，山东大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
[0026] 1.2实验药物研究药物：本发明天胡荽愈肝片：按实施例1方法制备。
[0027] 药液储液：称取100mg天胡荽愈肝片，溶于5ml无水乙醇中，0.2µm滤器过滤，500µldoff管分装，-20℃存储，同时0.2µm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0028] 1.3实验试剂DMEM( GIBCO公司Cat.No.12100-061 Lot.No.758137)；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033 Lot.No. 1088387)；Trypsin（AMRESCO公司）；EDTA（AMRESCO公司）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公司1）；Streptomycin Sulfate(AMRESCO)；无水乙醇（淄博亚杜兰经贸有限公司）；MTT (Biosharp批号：0793)：PBS（实验室自配）；
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMIL）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX 190）；C02培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：
SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Sprlng公司型号：S/N 020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2µm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；1cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMIL）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX 190）；C02培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：
SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Sprlng公司型号：S/N 020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2µm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；1cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0029] 2．实验方法1)A875细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%C02进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至
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