含有MK2抑制剂肽的组合物用于治疗非小细胞肺癌的用途
阅读：389发布：2021-03-22
专利汇可以提供含有MK2抑制剂肽的组合物用于治疗非小细胞肺癌的用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且所描述的 发明 提供用于 治疗 包含 肿瘤 细胞群体的非小细胞 肺 癌(NSCLC)实体肿瘤的药物组合物、系统和方法。所述方法包括施用药物组合物，所述药物组合物包含治疗量的具有 氨 基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，其中治疗量的所述多肽有效抑制所述肿瘤细胞群体中的激酶活性并减少癌 细胞增殖 、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性或其组合。，下面是含有MK2抑制剂肽的组合物用于治疗非小细胞肺癌的用途专利的具体信息内容。
1.一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌(NSCLC)实体肿瘤的药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，以及
其中治疗量有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自表1中所列的组的激酶的激酶活性并减少癌细胞增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性、减缓所述肿瘤细胞群体的进展或其组合。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：原发性肿瘤、继发性肿瘤、复发性肿瘤、难治性肿瘤以及其组合。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述原发性肿瘤选自由以下组成的组：鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌以及其组合。
4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述继发性肿瘤是转移性肿瘤。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中所述转移性肿瘤选自由以下组成的组：肾上腺转移性肿瘤、骨转移性肿瘤、肝转移性肿瘤、脑转移性肿瘤以及其组合。
6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的化学治疗剂：Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、二马来酸阿法替尼、爱宁达(培美曲塞二钠)、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、色瑞替尼、顺铂、克唑替尼、Cyramza(雷莫芦单抗)、多西他赛、盐酸埃罗替尼、Folex PFS(甲氨蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(二马来酸阿法替尼)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸氮芥、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、Mustargen(盐酸氮芥)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、铂尔定(卡铂)、培美曲塞二钠、顺氯氨铂(顺铂)、顺氯氨铂-AQ(顺铂)、雷莫芦单抗、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、紫杉酚(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、酒石酸长春瑞滨、赛可瑞(克唑替尼)、Zykadia(色瑞替尼)、卡铂-紫杉酚、吉西他滨-顺铂以及其组合。
8.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的糖皮质激素：泼尼松、布地奈德、糠酸莫米松、丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松以及其组合。
9.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的支气管扩张剂：白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、短效β2激动剂和长效β2激动剂以及其组合。
10.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是镇痛剂。
11.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是抗感染剂。
12.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的所述功能等效物具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)。
13.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的所述功能等效物具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)。
14.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的所述功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。
15.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的所述功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。
16.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的所述功能等效物具有氨基酸序列HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
17.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的所述功能等效物的治疗结构域(TD)由为细胞穿透肽(CPP)的第一多肽与为治疗结构域(TD)的第二多肽可操作地连接的融合制成，是序列与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有基本同一性的多肽。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽。
19.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽。
20.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
21.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的所述功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽是选自由以下组成的组的功能上等效于YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)的细胞穿透肽：具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)、WLRRIKA(SEQ ID NO：13)、YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)、WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)、FAKLAARLYR(SEQ ID NO：
16)、KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)以及HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽，并且所述第二多肽具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽。
23.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽。
24.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽。
25.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽。
26.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽。
27.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。
28.根据权利要求121所述的药物组合物，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
29.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述载体选自由以下组成的组：控制释放载体、延迟释放载体、持续释放载体和长期释放载体。
30.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物呈干粉形式。
31.根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述干粉包含具有1至5微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。
32.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物经由吸入装置施用。
33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述吸入装置是雾化器。
34.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述吸入装置是计量剂量吸入器(MDI)。
35.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述吸入装置是干粉吸入器(DPI)。
36.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述吸入装置是干粉雾化器。
37.一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌实体肿瘤的方法，所述方法包括：
向有需要的受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，
其中治疗量的所述多肽有效抑制所述肿瘤细胞群体的激酶活性、减少癌细胞增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导癌细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性、减缓所述肿瘤细胞群体的进展或其组合。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：原发性肿瘤、继发性肿瘤、复发性肿瘤、难治性肿瘤以及其组合。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述原发性肿瘤选自由以下组成的组：鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌以及其组合。
40.根据权利要求38所述的方法，其中所述继发性肿瘤是转移性肿瘤。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述转移性肿瘤选自由以下组成的组：肾上腺转移性肿瘤、骨转移性肿瘤、肝转移性肿瘤、脑转移性肿瘤以及其组合。
42.根据权利要求37所述的方法，其中所述施用步骤在气管内、胃肠外、静脉内、腹膜内或通过肺部施用发生。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述施用步骤通过肺部施用发生。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述肺部施用是吸入。
45.根据权利要求37所述的方法，其中所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的化学治疗剂：Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、二马来酸阿法替尼、爱宁达(培美曲塞二钠)、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、色瑞替尼、顺铂、克唑替尼、Cyramza(雷莫芦单抗)、多西他赛、盐酸埃罗替尼、Folex PFS(甲氨蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(二马来酸阿法替尼)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸氮芥、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、Mustargen(盐酸氮芥)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、铂尔定(卡铂)、培美曲塞二钠、顺氯氨铂(顺铂)、顺氯氨铂-AQ(顺铂)、雷莫芦单抗、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、紫杉酚(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、酒石酸长春瑞滨、赛可瑞(克唑替尼)、Zykadia(色瑞替尼)、卡铂-紫杉酚、吉西他滨-顺铂以及其组合。
47.根据权利要求45所述的方法，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的糖皮质激素：泼尼松、布地奈德、糠酸莫米松、丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松以及其组合。
48.根据权利要求45所述的方法，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的支气管扩张剂：白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、短效β2激动剂和长效β2激动剂以及其组合。
49.根据权利要求45所述的方法，其中所述另外的治疗剂是镇痛剂。
50.根据权利要求45所述的方法，其中所述另外的治疗剂是抗感染剂。
51.根据权利要求37所述的方法，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)。
52.根据权利要求37所述的方法，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)。
53.根据权利要求37所述的方法，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。
54.根据权利要求37所述的方法，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。
55.根据权利要求37所述的方法，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
56.根据权利要求37所述的方法，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物的治疗结构域(TD)由为细胞穿透肽(CPP)的第一多肽与为治疗结构域(TD)的第二多肽可操作地连接的融合制成，是序列与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：
2)具有基本同一性的多肽。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽。
58.根据权利要求56所述的方法，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽。
59.根据权利要求56所述的方法，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
60.根据权利要求37所述的方法，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽是选自由以下组成的组的功能上等效于YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)的细胞穿透肽：具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)、WLRRIKA(SEQ ID NO：13)、YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)、WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)、FAKLAARLYR(SEQ ID NO：
16)、KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)以及HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽，并且所述第二多肽具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列
WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽。
62.根据权利要求60所述的方法，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽。
63.根据权利要求60所述的方法，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽。
64.根据权利要求60所述的方法，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽。
65.根据权利要求60所述的方法，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽。
66.根据权利要求60所述的方法，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。
67.根据权利要求60所述的方法，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
68.根据权利要求37所述的方法，其中所述载体选自由以下组成的组：控制释放载体、延迟释放载体、持续释放载体和长期释放载体。
69.根据权利要求37所述的方法，其中所述药物组合物呈干粉形式。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述干粉包含具有1至5微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。
71.根据权利要求37所述的方法，其中所述药物组合物经由吸入装置施用。
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述吸入装置是雾化器。
73.根据权利要求71所述的方法，其中所述吸入装置是计量剂量吸入器(MDI)。
74.根据权利要求71所述的方法，其中所述吸入装置是干粉吸入器(DPI)。
75.根据权利要求71所述的方法，其中所述吸入装置是干粉雾化器。
76.一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤的系统，所述系统包括：
(a)药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，以及
其中治疗量可有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自表1中所列的组的激酶的激酶活性并减少所述肿瘤细胞群体的增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性、减缓所述肿瘤细胞群体的进展或其组合；以及(b)用于肺部递送的吸入装置。
77.根据权利要求76所述的系统，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：原发性肿瘤、继发性肿瘤、复发性肿瘤、难治性肿瘤以及其组合。
78.根据权利要求77所述的系统，其中所述原发性肿瘤选自由以下组成的组：鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌以及其组合。
79.根据权利要求77所述的系统，其中所述继发性肿瘤是转移性肿瘤。
80.根据权利要求79所述的系统，其中所述转移性肿瘤选自由以下组成的组：肾上腺转移性肿瘤、骨转移性肿瘤、肝转移性肿瘤、脑转移性肿瘤以及其组合。
81.根据权利要求76所述的系统，其中所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。
82.根据权利要求81所述的系统，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的化学治疗剂：Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、二马来酸阿法替尼、爱宁达(培美曲塞二钠)、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、色瑞替尼、顺铂、克唑替尼、Cyramza(雷莫芦单抗)、多西他赛、盐酸埃罗替尼、Folex PFS(甲氨蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(二马来酸阿法替尼)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸氮芥、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、Mustargen(盐酸氮芥)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、铂尔定(卡铂)、培美曲塞二钠、顺氯氨铂(顺铂)、顺氯氨铂-AQ(顺铂)、雷莫芦单抗、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、紫杉酚(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、酒石酸长春瑞滨、赛可瑞(克唑替尼)、Zykadia(色瑞替尼)、卡铂-紫杉酚、吉西他滨-顺铂以及其组合。
83.根据权利要求81所述的系统，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的糖皮质激素：泼尼松、布地奈德、糠酸莫米松、丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松以及其组合。
84.根据权利要求81所述的系统，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的支气管扩张剂：白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、短效β2激动剂和长效β2激动剂以及其组合。
85.根据权利要求81所述的系统，其中所述另外的治疗剂是镇痛剂。
86.根据权利要求81所述的系统，其中所述另外的治疗剂是抗感染剂。
87.根据权利要求76所述的系统，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)。
88.根据权利要求76所述的系统，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)。
89.根据权利要求76所述的系统，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。
90.根据权利要求76所述的系统，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。
91.根据权利要求76所述的系统，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物具有氨基酸序列HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
92.根据权利要求76所述的系统，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物的治疗结构域(TD)由为细胞穿透肽(CPP)的第一多肽与为治疗结构域(TD)的第二多肽可操作地连接的融合制成，是序列与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：
2)具有基本同一性的多肽。
93.根据权利要求92所述的系统，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽。
94.根据权利要求92所述的系统，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽。
95.根据权利要求92所述的系统，其中所述第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
96.根据权利要求76所述的系统，其中所述多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：
1)的所述功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽是选自由以下组成的组的功能上等效于YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)的细胞穿透肽：具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)、WLRRIKA(SEQ ID NO：13)、YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)、WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)、FAKLAARLYR(SEQ ID NO：
16)、KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)以及HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽，并且所述第二多肽具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)。
97.根据权利要求96所述的系统，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列
WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽。
98.根据权利要求96所述的系统，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽。
99.根据权利要求96所述的系统，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽。
100.根据权利要求96所述的系统，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽。
101.根据权利要求96所述的系统，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽。
102.根据权利要求96所述的系统，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。
103.根据权利要求96所述的系统，其中所述第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
104.根据权利要求76所述的系统，其中所述载体选自由以下组成的组：控制释放载体、延迟释放载体、持续释放载体和长期释放载体。
105.根据权利要求76所述的系统，其中所述药物组合物呈干粉形式。
106.根据权利要求105所述的系统，其中所述干粉包含具有1至5微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。
107.根据权利要求76所述的系统，其中所述吸入装置是雾化器。
108.根据权利要求76所述的系统，其中所述吸入装置是计量剂量吸入器(MDI)。
109.根据权利要求76所述的系统，其中所述吸入装置是干粉吸入器(DPI)。
110.根据权利要求76所述的系统，其中所述吸入装置是干粉雾化器。
含有MK2抑制剂肽的组合物用于治疗非小细胞肺癌的用途
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2015年3月12日提交的美国临时申请号62/132,374的优先权权益，所述美国临时申请的内容以引用的方式整体并入本文。发明领域
[0003] 本发明属于细胞和分子生物学、多肽以及治疗性使用方法领域。
[0004] 背景
[0005] 非小细胞肺癌(NSCLC)
[0006] 肺癌已经成为全球癌症中的头号杀手(Molina，J.R.等人，Mayo Clin Proc.2008年5月；83(5)：584-594)。所有肺癌患者中仅15％在诊断后五(5)年或更多年存活(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。肺癌的两(2)种主要类型是小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，后者占肺癌所有病例的大约85％(Molina，J.R.等人，Mayo Clin Proc.2008年5月；83(5)：584-594；Navada，S.等人，J Clin Oncol.2006；24(18S)增刊：384S；Sher，T.等人，Mayo Clin Proc.2008；83(3)：355-367)。
[0008] 肺癌的主要风险因素是吸烟，其占所有肺癌相关死亡的85％以上(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801；Doll，R.等人，Br Med J 1976；2：1525-1536)。肺癌的风险随着每天的吸烟数量和吸烟年数而增加。除了一手烟的危害之外，暴露的非吸烟者发展肺癌的相对风险增加(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw
2010；8：740-801；Wald N.J.等人，Br Med J 1986；293：1217-1222)。氡气(由镭226衰变产生的放射性气体)是肺癌的第二大原因。这种同位素的衰变导致产生发射α粒子的物质，这可能导致细胞损伤且因此增加恶性转化的可能性(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801；Schrump，D.S.等人，DeVita，Hellman，and Rosenberg′sCancer：Principles&Practice of Oncology，第8版.第1卷.Philadelphia：Lippincott Williams&Wilkins；2008：896-946)。
2010；8：740-801；Wald N.J.等人，Br Med J 1986；293：1217-1222)。氡气(由镭226衰变产生的放射性气体)是肺癌的第二大原因。这种同位素的衰变导致产生发射α粒子的物质，这可能导致细胞损伤且因此增加恶性转化的可能性(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801；Schrump，D.S.等人，DeVita，Hellman，and Rosenberg′sCancer：Principles&Practice of Oncology，第8版.第1卷.Philadelphia：Lippincott Williams&Wilkins；2008：896-946)。
[0009] 石棉(一种分解成小型空气传播碎片的矿物化合物)是增加暴露于空气传播的纤维的人、特别是吸烟者的肺癌风险的已知致癌物(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw2010；8：740-801)。估计3％至4％的肺癌是由石棉暴露引起的(Omenn，G.S.等人，Environ Health Perspect 1986；70：51-56)。其他可能的风险因素包括复发性肺炎症、继发于结核病的肺瘢痕、家族史和暴露于其他致癌物，如双(氯甲基)醚、多环芳烃、铬、镍和有机砷化合物(Fraumeni，J.F.，J Natl Cancer Inst 1975；55：1039-1046；Janerich D.T.等人，N Engl J Med 1990；323：632-636)。
[0010] 在过去60年以来，已经报道了肺癌的家族群集性或聚集性，从而表明了疾病发展的遗传基础(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801；Sellers，T.A.和Yang P.，King RA，Rotter JI，Motulsky AG，编辑.The Genetic Basis of Common Diseases.第2版.New York，NY：Oxford University Press；2002.第700-712页；Hwang，S.J.等人，Hum Genet.2003年8月；113(3)：238-243；Bailey-Wilson，J.E.等人，Am J Human Genet.2004年9月；75(3)：460-474；Hung，R.J.等人，Nature.2008；452(7178)：633-637)。在肿瘤蛋白p53(TP53)种系序列变异的携带者中发现肺癌的风险增加(Hwang，S.J.等人，Hum Genet.2003年8月；113(3)：238-243)。在具有多例NSCLC的家族中报道了种系表皮生长因子受体(EGFR)T790M序列变异(Lie，X.和Hemminki，K.，Int J Cancer.2004；112(3)：451-457)。52个扩展家族的全基因组关联研究鉴别了6q23-25p处影响肺癌风险的主要易感基因座(Bailey-Wilson，J.E.等人，Am J Human Genet.2004年9月；75(3)：460-474)。
[0011] 三(3)项独立遗传研究已经发现了与肺癌相关的15号染色体上的标志物(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。在所有三(3)项研究中，对于具有所述标志物的1个拷贝的人所述风险高大约30％，并且对于具有两(2)个拷贝的人所述风险高大约70％-80％。标志物所在的区域包含编码烟碱乙酰胆碱受体(烟碱分子锁定在其上的细胞表面上的一种蛋白质)的亚基的3种基因，从而触发细胞变化(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801；Thorgeirsson，T.E.等人，Nature.2008；452(7178)：638-642；Hung，R.J.等人，Nature.2008；452(7187)：633-637)。
[0012] NSCLC的分期
[0013] 在NSCLC中存在五个分期(0期至IV期)。I期、II期和III期被进一步细分为A亚型和B亚型。这些阶段是基于肿瘤、淋巴结和转移(TMN)分期系统指定的(参见，癌症分期指南，www.NCCN.org)。NSCLC的TMN分期系统总结在表1中。
[0014] 表1.NSCLC的0期至IV期
[0015]
[0016]
[0017]
[0018]
[0019]
[0020]
[0021] 筛选NSCLC
[0022] 计算机断层摄影术(CT)
[0023] 计算机断层摄影术(CT)使得能够检测较小损伤(在3cm的区域中)(Read，C.等人，Primary Care Respiratory Journal(2006)15，332-336)。直到最近，CT的慢速扫描时间和高辐射暴露使其为不适合用于筛选的工具。然而，随着螺旋CT的发展和完善，已经可能显著减少扫描时间和辐射暴露。CT筛查的结果是令人鼓舞的，其中大约80％-90％的CT筛查检测的支气管癌被诊断为早期1期肿瘤(Kaneko，M.等人，Radiology 1996；201：798-802；Swensen，S.J.等人，Am J Respir Crit Care Med 2002；165：508-513；Henschke，C.I.等人，Radiology 2006；239(2)：586-590)。
[0024] 痰细胞计量术
[0025] 已知痰细胞学的诊断率关于肿瘤位置变化(Read，C.等人，Primary Care Respiratory Journal(2006)15，332-336)。它在中枢肿瘤的鉴别中具有最大用途，并且在外周癌的鉴别中几乎没有或没有价值(Thunnissen F.B.J.M.，J Clin Pathol 2003；56：805-810)。然而，已经提出可通过使用恶性肿瘤的分子遗传学和免疫细胞化学标志物来改善其灵敏度(Marek，W.等人，Eur Respir J 2001；18：942-950；Xing，S.等人，Eur Respir J
2005；25：956-963)。
2005；25：956-963)。
[0027] 自身荧光支气管镜检对于异常细胞的检测具有高灵敏度(Read，C.等人，Primary Care Respiratory Journal(2006)15，332-336)。此技术利用与侵袭前和侵袭性疾病的粘膜相比支气管粘膜的荧光性质的差异。
[0028] 用于自身荧光支气管镜检的最有名的仪器是肺成像荧光内窥镜检查(LIFE)系统(Lam，S.等人，J Thorac Cardiovasc Surg 1993；105：1035-1040)。此仪器使用蓝色(442nm)氦镉激光器来照射支气管粘膜，并且然后将所得荧光数字化为实时视频图像。其他装置(如D光自动荧光系统)不需要图像增强摄像机，而是使用并入支气管镜的滤光器(Leonhard，M.，Diagn Therap Endosc 1999；5：71-75)。
[0029] 大多数关于自身荧光支气管镜检的已发表的研究已经显示对发育不良和癌原位检测的诊断敏感性的显著增加(Read，C.等人，Primary Care Respiratory Journal(2006)15，332-3；Lam，S.等人，Chest 1998；113：696-702；Vermylen，P.等人，Lung Cancer 1999；
25：161-168；Venmans B.J.等人，Diagn Therap Endosc 1999；5：77-84；Ikeda，N.等人，Diagn Therap Endosc 1997；3：197-201；Yokomise，H.等人，J Bronchol 1997；4：205-208；
Hirsch，F.R.等人，J Natl Cancer Inst 2001；93：1385-1391)。
25：161-168；Venmans B.J.等人，Diagn Therap Endosc 1999；5：77-84；Ikeda，N.等人，Diagn Therap Endosc 1997；3：197-201；Yokomise，H.等人，J Bronchol 1997；4：205-208；
Hirsch，F.R.等人，J Natl Cancer Inst 2001；93：1385-1391)。
[0030] 生物标志物
[0031] 几种生物标志物已经成为NSCLC的预后和预测标志物(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。为先天肿瘤侵袭性的指标的预后生物标志物是指示与所接受治疗无关的患者存活的生物分子。预测生物标志物是指示治疗功效的生物分子，即生物分子与影响患者结果的治疗之间存在相互作用。在这些生物标志物中，证据对于EGFR、核苷酸剪切修复复合物(ERCC1)的5′核酸内切酶、Kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(K-ras)和核糖核苷酸还原酶(RRM1)的调控亚基是最强的。
[0032] 表皮生长因子受体(EGFR)外显子19缺失或外显子21L858R突变的存在似乎不是NSCLC患者的与治疗无关的存活的预后(Tsao，M.S.等人，N Engl J Med 2005；353：133-144)。然而，EGFR外显子19缺失或外显子21L858R突变的存在预测来自EGFR-TKI治疗的治疗益处(Sequist，L.V.等人，J Clin Oncol 2008；26：2442-2449；Miller，V.A.，J Clin Oncol
2008；26：1472-1478)。当与低水平的ERCC1表达相比时，高ERCC1水平是NSCLC患者的与治疗无关的较好存活的预后(Simon，G.R.等人，Chest 2005；127：978-983；Olaussen K.A.等人，N Engl J Med 2006；355：983-991)。高水平的ERCC1表达还预测对基于铂的化学疗法的反应较差(Olaussen K.A.等人，N Engl J Med 2006；355：983-991；Bepler，G.等人，J Clin Oncol 2006；24：4731-4737)。当与不存在这些突变相比时，K-ras突变的存在是NSCLC患者的与治疗无关的较差存活的预后(Slebos，R.J.等人，N Engl J Med 1990；323：561-565)。
K-ras突变的存在也预测缺乏来自铂/长春瑞滨化学疗法或EGFR-TKI疗法的益处(Miller，V.A.，J Clin Oncol 2008；26：1472-1478；Tsao，M.S.等人，J Clin Oncol 2007；25：5240-
5247)。与低水平的RRM1表达相比，高RRM1水平是NSCLC患者的与治疗无关的较好存活的预后(Bepler，G.等人，J Clin Oncol 2004；22：1878-1885；Zheng，Z.等人，N Engl J Med
2007；356：800-808)。高水平的RRM1表达还预测对基于吉西他滨的化学疗法的反应较差(Bepler，G.等人，J Clin Oncol 2008；26(增刊1)：Abstract 8033；Reynolds，C.等人，J Clin Oncol 2009；27：5808-5815)。
2008；26：1472-1478)。当与低水平的ERCC1表达相比时，高ERCC1水平是NSCLC患者的与治疗无关的较好存活的预后(Simon，G.R.等人，Chest 2005；127：978-983；Olaussen K.A.等人，N Engl J Med 2006；355：983-991)。高水平的ERCC1表达还预测对基于铂的化学疗法的反应较差(Olaussen K.A.等人，N Engl J Med 2006；355：983-991；Bepler，G.等人，J Clin Oncol 2006；24：4731-4737)。当与不存在这些突变相比时，K-ras突变的存在是NSCLC患者的与治疗无关的较差存活的预后(Slebos，R.J.等人，N Engl J Med 1990；323：561-565)。
K-ras突变的存在也预测缺乏来自铂/长春瑞滨化学疗法或EGFR-TKI疗法的益处(Miller，V.A.，J Clin Oncol 2008；26：1472-1478；Tsao，M.S.等人，J Clin Oncol 2007；25：5240-
5247)。与低水平的RRM1表达相比，高RRM1水平是NSCLC患者的与治疗无关的较好存活的预后(Bepler，G.等人，J Clin Oncol 2004；22：1878-1885；Zheng，Z.等人，N Engl J Med
2007；356：800-808)。高水平的RRM1表达还预测对基于吉西他滨的化学疗法的反应较差(Bepler，G.等人，J Clin Oncol 2008；26(增刊1)：Abstract 8033；Reynolds，C.等人，J Clin Oncol 2009；27：5808-5815)。
[0033] NSCLC的治疗
[0034] 外科手术
[0035] 一般来说，对于患有I期或II期疾病的患者，外科手术提供治愈的最佳机会(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。所使用的外科手术取决于患者的疾病程度和心肺储备。如果可实现解剖学上适当的和边缘阴性的切除术，则保肺解剖学切除术(袖状肺叶切除术)优于肺切除术。否则，如果生理上可行，则进行肺叶切除术或肺切除术(Boffa，D.J.等人，J Thorac Cardiovasc Surg 2008；135：247-254；Scott，W.J.等人，Chest 2007；132：234S-242S)。切除术(包括楔形切除术)优于消融(即，射频消融[RFA]、冷冻疗法、立体定向放射)(Scott，W.J.等人，Chest 2007；132：234S-242S)。然而，保肺外科手术(即，亚肺叶切除术)，如肺段切除术和楔形切除术是否适用于在其它方面不是外科手术的候选者的肺功能严重下降的患者是有争议的(Scott，W.J.等人，Chest 2007；132：234S-242S；Ginsberg，R.J.等人，Ann Thorac Surg 1995；60：615-622；Koike，T.等人，J Thorac Cardiovasc Surg 2003；125：924-928)。
[0036] 放射疗法(RT)
[0037] RT可用作1)患有可切除的NSCLC的无外科手术禁忌症的患者的辅助疗法；2)对于患有医学上不宜动手术或不可切除的NSCLC的患者的主要局部治疗(即，根治性RT)；和/或3)对于患有不可治愈的NSCLC的患者的重要姑息治疗方式(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。然而，常规RT单独仅产生10个月的中值存活期和5％的5年存活率(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw2010；8：740-801)。
[0038] 化学疗法
[0039] 许多药物对IV期NSCLC具有活性。这些药物包括紫杉烷类(紫杉醇、多西他赛)、长春瑞滨、依托泊苷、培美曲塞、喜树碱类似物(伊立替康)和吉西他滨。使用许多这些药物的组合产生30％至40％的1年存活率并且优于单一药剂。方案包括卡铂/紫杉醇、顺铂/紫杉醇、顺铂/长春瑞滨、吉西他滨/顺铂、顺铂/培美曲塞和多西他塞/顺铂(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801；Ohe，Y.等人，Ann Oncol 2007；18：317-323；Fossella，F.等人，J Clin Oncol 2003；21：3016-3024；Smit，E.F.等人，J Clin Oncol
2003；21：3909-3917；Zatloukal，P.等人，Lung Cancer 2004；46：87-98；Scagliotti，G.V.等人，J Clin Oncol2008；26：3543-3551)。
2003；21：3909-3917；Zatloukal，P.等人，Lung Cancer 2004；46：87-98；Scagliotti，G.V.等人，J Clin Oncol2008；26：3543-3551)。
[0040] 虽然化学疗法适用于许多肺癌患者，但有共识是，使用传统的化学治疗剂来治疗NSCLC已达到治疗平台期(Molina，J.R.等人，Mayo Clin Proc 2008年5月；83(5)：584-594)。
[0041] 靶向疗法
[0042] 已经开发了用于治疗晚期肺癌的特异性靶向疗法(Sandler，A.B.等人，Clin Cancer Res 2004；10：4258s-4262s；Giaccone，G.等人，J Clin Oncol2005；23：3235-3242)。贝伐单抗是阻断血管内皮生长因子(VEGF)的重组单克隆抗体。埃罗替尼是EGFR的小分子抑制剂。西妥昔单抗是靶向EGFR的单克隆抗体。
[0043] 在2006年，FDA批准了贝伐单抗用于患有不可切除的局部晚期、复发性或转移性非鳞状NSCLC的患者(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。已经推荐贝伐单抗与紫杉醇和卡铂组合用于患有晚期非鳞状NSCLC的选定患者(Sandler，A.等人，N Engl J Med 2006；355：2542-2550)。为了经历用贝伐单抗和化学疗法治疗，患者必须患有非鳞状NSCLC并且没有咳血史。当与贝伐单抗组合时，应谨慎使用具有高血小板减少风险(即，可能出血)的任何方案(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw2010；8：740-801)。
[0044] 在2004年，FDA批准了埃罗替尼用于治疗在至少一种先前化学治疗方案失败后的患有局部晚期或转移性NSCLC的患者(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。然而，埃罗替尼也可在具有已知活性EGFR突变或基因扩增的晚期或转移性NSCLC患者中作为一线治疗给予(Sequist，L.V.等人，Oncologist 2007；12：90-98；N Eng J Med 2009；361：947-957；Inoue，A.等人，J Clin Oncol 2009；27：1394-1400)。
[0045] 最近的III期随机试验评估了用于晚期NSCLC患者的有或无西妥昔单抗的顺铂/长春瑞滨(Pirker，R.等人，Lancet 2009；373：1525-1531)。结果表明，添加西妥昔单抗稍微增加总体存活率(11.3对比10.1个月；P＝.04)(Pirker，R.等人，Lancet 2009；373：1525-1531；Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。
[0046] 然而，存在累积证据表明NSCLC获得对这些特异性靶向疗法(例如埃罗替尼和吉非替尼)的抗性以及诸如NSCLC的癌症变得对例如EGFR抑制剂具有抗性的方式(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。最常见的已知机制是获得EGFR中的称为T790M的二级突变，所述突变使激酶对埃罗替尼和吉非替尼具有抗性(Nguyen，K.S.等人，Clin Lung Cancer 2009；10：281-289；Gazdar，A.F.，Oncogene 2009；28(增刊1)：S24-S31)。MET致癌基因的扩增是另一种经过验证的抗性机制(Ettinger，D.S.等人，J Natl Compr Canc Netw 2010；8：740-801)。
[0048] DNA损伤信号传导和检查点控制途径是人肿瘤中最常见的突变网络之一(Morandell，S.等人，Cell Reports 5，868-877，2013年11月27日；Negrini，S.等人，Nat Rev Mol Cell Biol 2010；11：220-228)。三种主要的DNA损伤反应性细胞周期检查点是G1/S检查点、S期内检查点和G2/M检查点。响应于DNA损伤，真核细胞活化介导DNA修复和细胞周期阻滞的复杂信号传导网络，或者如果损伤广泛，则触发细胞凋亡(Ciccia，A.和Elledge，S.J.，Mol Cell 2010；40：179-204)。正常细胞和癌细胞中的三种典型蛋白激酶途径响应于受损的DNA阻滞细胞周期：通过Chk1相关的共济失调-毛细血管扩张和Rad-3(ATR-Chk1)途径、通过Chk2突变的共济失调-毛细血管扩张(ATM-Chk2)途径、以及应激活化蛋白激酶p38有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)及其底物MAPKAP激酶-2(MK2)(Morandell，S.等人，Cell Reports 5，868-877，2013年11月27日)。ATM/Chk2途径主要响应于DNA双链断裂，而ATRpChk1途径通过大的DNA损伤以及随后S期期间的复制叉被活化。与Chk1和Chk2的DNA损伤特异性活化相比，p38MAPK途径是对各种细胞刺激(包括细胞因子、高渗透性和UV照射)有反应的通用应激活化激酶途径。
[0049] 肿瘤抑制蛋白p53是上述DNA损伤激酶途径的主要下游效应物。在正常细胞中，p53依赖性信号传导导致G1阻滞，其主要由p21的转录上调介导。在γ照射后，P21也似乎在维持G2检查点中起作用。然而，如果DNA损伤是广泛的，则p53依赖性途径靶向受损细胞以用于凋亡细胞死亡。MK2途径对于在基因毒性应激后阻滞细胞周期至关重要，包括仅在缺乏功能性p53的肿瘤细胞中的顺铂诱导的DNA交联和拓扑异构酶抑制剂诱导的DNA链断裂(Manke，I.A.等人，Mol Cell 2005；17：37-48；Reinhardt，H.C.等人，Cancer Cell 2007；11：175-189)。在不存在p53的情况下，ATRChk1途径和p38-MK2途径两者均是有效细胞周期检查点功能所需的(Reinhardt，H.C.等人，Mol Cell 2010；40：34-49)。
[0050] 最近，Morandell等人(Cell Reports 5，868-877，2013年11月27日)显示，响应于基因毒性化学疗法，MK2是缺乏功能性p53的NSCLC肿瘤细胞的存活所必需的，但在p53健全型细胞中是非必要的。发现MK2特异性地使p53缺陷型肿瘤对DNA损伤剂顺铂敏感，但对p53健全型癌细胞的治疗反应无影响。这表明通过p53与MK2之间的合成致死性，p53缺陷型肿瘤对体内DNA损伤化学疗法的增强化学增敏的潜力(Morandell，S.等人，Cell Reports 5，868-877，2013年11月27日)。
[0051] 激酶
[0052] 激酶是一组普遍存在的酶，所述酶催化从磷酸供体(通常腺苷-5′-三磷酸(ATP))至受体底物的磷酰基转移反应。所有可用的激酶序列(大约60,000个序列)的分类表明激酶可被分为25个家族的同源(意指来源于共同的祖先)蛋白质。这些激酶家族基于结构折叠的相似性被组装成12个折叠组。此外，25个家族中的22个(大约所有序列的98.8％)属于结构折叠已知的10个折叠组。在其他3个家族中，多磷酸激酶形成不同的折叠组，并且2个剩余家族均是整合膜激酶且构成最终折叠组。这些折叠组不仅包括一些最广泛分布的蛋白质折叠，如罗斯曼(Rossmann)样折叠(以拓扑顺序β-α-β-α-β由两个α螺旋连接的三个或更多个平行的β链)、铁氧化还原蛋白样折叠(沿其主链具有特征βαββαβ二级结构的常见α+β蛋白质折叠)、TIM-barrel折叠(意指由沿着肽主链交替的八个α-螺旋和八个平行β-链组成的保守蛋白质折叠)以及反平行的β-barrel折叠(β-barrel是扭曲且盘绕以形成封闭结构的大的β折叠，其中第一链与最后一条链氢键合)，而且包括所有主要类别(所有α、所有β、α+β、α/β)的蛋白质结构。在折叠组内，每个家族的核苷酸结合结构域的核心具有相同的结构，并且蛋白质核心的拓扑结构是相同的或通过循环排列相关联。并不暗示折叠组内的家族之间的同源性。
[0053] I组(23,124个序列)激酶并入蛋白S/T-Y激酶、非典型蛋白激酶、脂质激酶和ATP抓握酶(ATP grasp enzyme)，并且还包含蛋白S/T-Y激酶和非典型蛋白激酶家族(22,074个序列)。这些激酶包括：胆碱激酶(EC 2.7.1.32)；蛋白激酶(EC 2.7.137)；磷酸化酶激酶(EC 2.7.1.38)；高丝氨酸激酶(EC 2.7.1.39)；I-磷脂酰肌醇4-激酶(EC 2.7.1.67)；链霉素6-激酶(EC 2.7.1.72)；乙醇胺激酶(EC 2.7.1.82)；链霉素3′-激酶(EC 2.7.1.87)；卡那霉素激酶(EC 2.7.1.95)；5-甲基硫代核糖激酶(EC 2.7.1.100)；紫霉素激酶(EC 2.7.1.103)；
[羟甲基戊二酰基-辅酶A还原酶(NADPH2)]激酶(EC 2.7.1.109)；蛋白质-酪氨酸激酶(EC
2.7.1.112)；[异柠檬酸脱氢酶(NADP+)]激酶(EC 2.7.1.116)；[肌球蛋白轻链]激酶(EC
2.7.1.117)；潮霉素-B激酶(EC 2.7.1.119)；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(EC
2.7.1.123)；视紫红质激酶(EC 2.7.1.125)；[β-肾上腺素能受体]激酶(EC 2.7.1.126)；
[肌球蛋白重链]激酶(EC 2.7.1.129)；[Tau蛋白]激酶(EC 2.7.1.135)；大环内酯2′-激酶(EC 2.7.1.136)；I-磷脂酰肌醇3-激酶(EC 2.7.1.137)；[RNA-聚合酶]-亚单位激酶(EC
2.7.1.141)；磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶(EC 2.7.1.153)；以及磷脂酰肌醇-4-磷酸3-激酶(EC 2.7.1.154)。I组还包含脂质激酶家族(321个序列)。这些激酶包括：I-磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶(EC 2.7.1.68)；I D-肌醇-三磷酸3-激酶(EC 2.7.1.127)；肌醇-四磷酸
5-激酶(EC 2.7.1.140)；I-磷脂酰肌醇-5-磷酸4-激酶(EC 2.7.1.149)；I-磷脂酰肌醇-3-磷酸5-激酶(EC 2.7.1.150)；肌醇-多磷酸多激酶(EC 2.7.1.151)；以及肌醇-六磷酸激酶(EC 2.7.4.21)。I组还包含ATP-抓握激酶(729个序列)，其包括肌醇-四磷酸I-激酶(EC
2.7.1.134)；丙酮酸磷酸二激酶(EC 2.7.9.1)；以及丙酮酸水二激酶(EC 2.7.9.2)。
[羟甲基戊二酰基-辅酶A还原酶(NADPH2)]激酶(EC 2.7.1.109)；蛋白质-酪氨酸激酶(EC
2.7.1.112)；[异柠檬酸脱氢酶(NADP+)]激酶(EC 2.7.1.116)；[肌球蛋白轻链]激酶(EC
2.7.1.117)；潮霉素-B激酶(EC 2.7.1.119)；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(EC
2.7.1.123)；视紫红质激酶(EC 2.7.1.125)；[β-肾上腺素能受体]激酶(EC 2.7.1.126)；
[肌球蛋白重链]激酶(EC 2.7.1.129)；[Tau蛋白]激酶(EC 2.7.1.135)；大环内酯2′-激酶(EC 2.7.1.136)；I-磷脂酰肌醇3-激酶(EC 2.7.1.137)；[RNA-聚合酶]-亚单位激酶(EC
2.7.1.141)；磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶(EC 2.7.1.153)；以及磷脂酰肌醇-4-磷酸3-激酶(EC 2.7.1.154)。I组还包含脂质激酶家族(321个序列)。这些激酶包括：I-磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶(EC 2.7.1.68)；I D-肌醇-三磷酸3-激酶(EC 2.7.1.127)；肌醇-四磷酸
5-激酶(EC 2.7.1.140)；I-磷脂酰肌醇-5-磷酸4-激酶(EC 2.7.1.149)；I-磷脂酰肌醇-3-磷酸5-激酶(EC 2.7.1.150)；肌醇-多磷酸多激酶(EC 2.7.1.151)；以及肌醇-六磷酸激酶(EC 2.7.4.21)。I组还包含ATP-抓握激酶(729个序列)，其包括肌醇-四磷酸I-激酶(EC
2.7.1.134)；丙酮酸磷酸二激酶(EC 2.7.9.1)；以及丙酮酸水二激酶(EC 2.7.9.2)。
[0054] II组(17,071个序列)激酶并入罗斯曼样激酶。II组包含P-环激酶家族(7,732个序列)。这些包括葡糖酸激酶(EC 2.7.1.12)；磷酸核酮糖激酶(EC 2.7.1.19)；胸苷激酶(EC 2.7.1.21)；核糖基烟酰胺激酶(EC 2.7.1.22)；脱磷酸-辅酶A激酶(EC 2.7.1.24)；腺苷酰硫酸激酶(EC 2.7.1.25)；泛酸激酶(EC 2.7.1.33)；蛋白激酶(细菌)(EC 2.7.1.37)；尿苷激酶(EC 2.7.1.48)；莽草酸激酶(EC 2.7.1.71)；脱氧胞苷激酶(EC 2.7.1.74)；脱氧腺苷激酶(EC 2.7.1.76)；多核苷酸5′-羟基-激酶(EC 2.7.1.78)；6-磷酸果糖-2-激酶(EC
2.7.1.105)；脱氧鸟苷激酶(EC 2.7.1.113)；四酰基二糖4′-激酶(EC 2.7.1.130)；脱氧核苷激酶(EC 2.7.1.145)；腺苷酰钴啉醇酰胺激酶(EC 2.7.1.156)；多磷酸激酶(EC
2.7.4.1)；磷酸甲羟戊酸激酶(EC 2.7.4.2)；腺苷酸激酶(EC 2.7.4.3)；核苷-磷酸激酶(EC
2.7.4.4)；鸟苷酸激酶(EC 2.7.4.8)；胸苷酸激酶(EC 2.7.4.9)；核苷-三磷酸-腺苷酸激酶(EC 2.7.4.10)；(脱氧)核苷-磷酸激酶(EC 2.7.4.13)；胞苷酸激酶(EC 2.7.4.14)；以及尿苷酸激酶(EC 2.7.4.22)。II组还包含磷酸烯醇丙酮酸羧激酶家族(815个序列)。这些酶包括蛋白激酶(HPr激酶/磷酸酶)(EC 2.7.1.37)；磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(GTP)(EC
4.1.1.32)；以及磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(ATP)(EC 4.1.1.49)。II组还包含磷酸甘油酸激酶(1,351个序列)家族。这些酶包括磷酸甘油酸激酶(EC 2.7.2.3)和磷酸甘油酸激酶(GTP)(EC 2.7.2.10)。II组还包含天冬氨酸激酶家族(2,171个序列)。这些酶包括氨基甲酸激酶(EC 2.7.2.2)；天冬氨酸激酶(EC 2.7.2.4)；乙酰谷氨酸激酶(EC 2.7.2.81)；谷氨酸5-激酶(EC 2.7.2.1)以及尿苷酸激酶(EC 2.7.4)。II组还包含磷酸果糖激酶样激酶家族(1,998个序列)。这些酶包括6-磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.11)；NAD(+)激酶(EC 2.7.1.23)；I-磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.56)；二磷酸-果糖-6-磷酸I-磷酸转移酶(EC 2.7.1.90)；二氢鞘氨醇激酶(EC 2.7.1.91)；二酰基甘油激酶(EC 2.7.1.107)；以及神经酰胺激酶(EC
2.7.1.138)。II组还包含核糖激酶样家族(2,722个序列)。这些酶包括：葡萄糖激酶(EC
2.7.1.2)；己酮糖激酶(EC 2.7.1.3)；果糖激酶(EC 2.7.1.4)；6-磷酸果糖激酶(EC
2.7.1.11)；核糖激酶(EC 2.7.1.15)；腺苷激酶(EC 2.7.1.20)；吡哆醛激酶(EC
2.7.1.35)；2-脱氢-3-脱氧葡糖酸激酶(EC 2.7.1.45)；羟甲基嘧啶激酶(EC 2.7.1.49)；羟乙基噻唑激酶(EC 2.7.1.50)；I-磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.56)；肌苷激酶(EC 2.7.1.73)；
5-脱氢-2-脱氧葡糖酸激酶(EC 2.7.1.92)；塔格糖-6-磷酸激酶(EC 2.7.1.144)；ADP依赖性磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.146)；ADP依赖性葡萄糖激酶(EC 2.7.1.147)；以及磷酸甲基嘧啶激酶(EC 2.7.4.7)。II组还包含硫胺素焦磷酸激酶家族(175个序列)，其包括硫胺素焦磷酸激酶(EC 2.7.6.2)。II组还包含甘油酸激酶家族(107个序列)，其包括甘油酸激酶(EC
2.7.1.31)。
2.7.1.105)；脱氧鸟苷激酶(EC 2.7.1.113)；四酰基二糖4′-激酶(EC 2.7.1.130)；脱氧核苷激酶(EC 2.7.1.145)；腺苷酰钴啉醇酰胺激酶(EC 2.7.1.156)；多磷酸激酶(EC
2.7.4.1)；磷酸甲羟戊酸激酶(EC 2.7.4.2)；腺苷酸激酶(EC 2.7.4.3)；核苷-磷酸激酶(EC
2.7.4.4)；鸟苷酸激酶(EC 2.7.4.8)；胸苷酸激酶(EC 2.7.4.9)；核苷-三磷酸-腺苷酸激酶(EC 2.7.4.10)；(脱氧)核苷-磷酸激酶(EC 2.7.4.13)；胞苷酸激酶(EC 2.7.4.14)；以及尿苷酸激酶(EC 2.7.4.22)。II组还包含磷酸烯醇丙酮酸羧激酶家族(815个序列)。这些酶包括蛋白激酶(HPr激酶/磷酸酶)(EC 2.7.1.37)；磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(GTP)(EC
4.1.1.32)；以及磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(ATP)(EC 4.1.1.49)。II组还包含磷酸甘油酸激酶(1,351个序列)家族。这些酶包括磷酸甘油酸激酶(EC 2.7.2.3)和磷酸甘油酸激酶(GTP)(EC 2.7.2.10)。II组还包含天冬氨酸激酶家族(2,171个序列)。这些酶包括氨基甲酸激酶(EC 2.7.2.2)；天冬氨酸激酶(EC 2.7.2.4)；乙酰谷氨酸激酶(EC 2.7.2.81)；谷氨酸5-激酶(EC 2.7.2.1)以及尿苷酸激酶(EC 2.7.4)。II组还包含磷酸果糖激酶样激酶家族(1,998个序列)。这些酶包括6-磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.11)；NAD(+)激酶(EC 2.7.1.23)；I-磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.56)；二磷酸-果糖-6-磷酸I-磷酸转移酶(EC 2.7.1.90)；二氢鞘氨醇激酶(EC 2.7.1.91)；二酰基甘油激酶(EC 2.7.1.107)；以及神经酰胺激酶(EC
2.7.1.138)。II组还包含核糖激酶样家族(2,722个序列)。这些酶包括：葡萄糖激酶(EC
2.7.1.2)；己酮糖激酶(EC 2.7.1.3)；果糖激酶(EC 2.7.1.4)；6-磷酸果糖激酶(EC
2.7.1.11)；核糖激酶(EC 2.7.1.15)；腺苷激酶(EC 2.7.1.20)；吡哆醛激酶(EC
2.7.1.35)；2-脱氢-3-脱氧葡糖酸激酶(EC 2.7.1.45)；羟甲基嘧啶激酶(EC 2.7.1.49)；羟乙基噻唑激酶(EC 2.7.1.50)；I-磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.56)；肌苷激酶(EC 2.7.1.73)；
5-脱氢-2-脱氧葡糖酸激酶(EC 2.7.1.92)；塔格糖-6-磷酸激酶(EC 2.7.1.144)；ADP依赖性磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.146)；ADP依赖性葡萄糖激酶(EC 2.7.1.147)；以及磷酸甲基嘧啶激酶(EC 2.7.4.7)。II组还包含硫胺素焦磷酸激酶家族(175个序列)，其包括硫胺素焦磷酸激酶(EC 2.7.6.2)。II组还包含甘油酸激酶家族(107个序列)，其包括甘油酸激酶(EC
2.7.1.31)。
[0055] III组激酶(10,973个序列)包含铁氧化还原蛋白样折叠激酶。III组还包含核苷-二磷酸激酶家族(923个序列)。这些酶包括核苷-二磷酸激酶(EC 2.7.4.6)。III组还包含HPPK激酶家族(609个序列)。这些酶包括2-氨基-4-羟基-6-羟甲基二氢喋啶焦磷酸激酶(EC 2.7.6.3)。III组还包含胍基激酶家族(324个序列)。这些酶包括胍基乙酸激酶(EC
2.7.3.1)；肌酸激酶(EC 2.7.3.2)；精氨酸激酶(EC 2.7.3.3)；以及胍乙基磷酸丝氨酸(lombricine)激酶(EC 2.7.3.5)。III组还包含组氨酸激酶家族(9,117个序列)。这些酶包括蛋白激酶(组氨酸激酶)(EC 2.7.1.37)；[丙酮酸脱氢酶(硫辛酰胺)]激酶(EC
2.7.1.99)；以及[3-甲基-2-氧基丁酸脱氢酶(硫辛酰胺)]激酶(EC 2.7.1.115)。
2.7.3.1)；肌酸激酶(EC 2.7.3.2)；精氨酸激酶(EC 2.7.3.3)；以及胍乙基磷酸丝氨酸(lombricine)激酶(EC 2.7.3.5)。III组还包含组氨酸激酶家族(9,117个序列)。这些酶包括蛋白激酶(组氨酸激酶)(EC 2.7.1.37)；[丙酮酸脱氢酶(硫辛酰胺)]激酶(EC
2.7.1.99)；以及[3-甲基-2-氧基丁酸脱氢酶(硫辛酰胺)]激酶(EC 2.7.1.115)。
[0056] IV组激酶(2,768个序列)并入核糖核酸酶H样激酶。这些酶包括己糖激酶(EC 2.7.1.1)；葡萄糖激酶(EC 2.7.1.2；果糖激酶(EC 2.7.1.4)；鼠李树胶糖激素(EC
2.7.1.5)；甘露糖激酶(EC 2.7.1.7)；葡糖酸激酶(EC 2.7.1.12)；L-核酮糖激酶(EC
2.7.1.16)；木酮糖激酶(EC 2.7.1.17)；赤藓糖醇激酶(EC 2.7.1.27)；甘油激酶(EC
2.7.1.30)；泛酸激酶(EC 2.7.1.33)；D-核酮糖激酶(EC 2.7.1.47)；L-岩藻酮糖激酶(EC
2.7.1.51)；L-木酮糖激酶(EC 2.7.1.53)；阿洛糖激酶(EC 2.7.1.55)；2-脱氢-3-脱氧半乳糖激酶(EC 2.7.1.58)；N-乙酰葡糖胺激酶(EC 2.7.1.59)；N-酰基甘露糖胺激酶(EC
2.7.1.60)；多磷酸-葡萄糖磷酸转移酶(EC 2.7.1.63)；β-葡糖苷激酶(EC 2.7.1.85)；乙酸激酶(EC 2.7.2.1)；丁酸激酶(EC 2.7.2.7)；支链脂肪酸激酶(EC 2.7.2.14)；以及丙酸激酶(EC 2.7.2.15)。
2.7.1.5)；甘露糖激酶(EC 2.7.1.7)；葡糖酸激酶(EC 2.7.1.12)；L-核酮糖激酶(EC
2.7.1.16)；木酮糖激酶(EC 2.7.1.17)；赤藓糖醇激酶(EC 2.7.1.27)；甘油激酶(EC
2.7.1.30)；泛酸激酶(EC 2.7.1.33)；D-核酮糖激酶(EC 2.7.1.47)；L-岩藻酮糖激酶(EC
2.7.1.51)；L-木酮糖激酶(EC 2.7.1.53)；阿洛糖激酶(EC 2.7.1.55)；2-脱氢-3-脱氧半乳糖激酶(EC 2.7.1.58)；N-乙酰葡糖胺激酶(EC 2.7.1.59)；N-酰基甘露糖胺激酶(EC
2.7.1.60)；多磷酸-葡萄糖磷酸转移酶(EC 2.7.1.63)；β-葡糖苷激酶(EC 2.7.1.85)；乙酸激酶(EC 2.7.2.1)；丁酸激酶(EC 2.7.2.7)；支链脂肪酸激酶(EC 2.7.2.14)；以及丙酸激酶(EC 2.7.2.15)。
[0057] V组激酶(1,119个序列)并入TIMβ-barrel激酶。这些酶包括丙酮酸激酶(EC 2.7.1.40)。
[0058] VI组激酶(885个序列)并入GHMP激酶。这些酶包括半乳糖激酶(EC 2.7.1.6)；甲羟戊酸激酶(EC 2.7.1.36)；高丝氨酸激酶(EC 2.7.1.39)；L-阿拉伯糖激酶(EC 2.7.1.46)；岩藻糖激酶(EC 2.7.1.52)；莽草酸激酶(EC 2.7.1.71)；4-(胞苷5′-二-磷酸基)-2-C-甲基-D-赤藓糖醇激酶(EC 2.7.1.148)；以及磷酸甲羟戊酸激酶(EC 2.7.4.2)。
[0059] VII组激酶(1,843个序列)并入AIR合成酶样激酶。这些酶包括硫胺素-磷酸激酶(EC 2.7.4.16)和硒化物水二激酶(EC 2.7.9.3)。
[0060] VIII组激酶(565个序列)并入核黄素激酶(565个序列)。这些酶包括核黄素激酶(EC2.7.1.26)。
[0061] IX组激酶(197个序列)并入二羟基丙酮激酶。这些酶包括甘油酮激酶(EC 2.7.1.29)。
[0062] X组激酶(148个序列)并入推定甘油酸激酶。这些酶包括甘油酸激酶(EC 2.7.1.31)。
[0063] XI组激酶(446个序列)并入多磷酸激酶。这些酶包括多磷酸激酶(EC 2.7.4.1)。
[0064] XII组激酶(263个序列)并入整合膜激酶。XII组包含多萜醇激酶家族。这些酶包括多萜醇激酶(EC 2.7.1.108)。XII组还包含十一萜醇激酶家族。这些酶包括十一萜醇激酶(EC2.7.1.66)。
[0065] 激酶在许多细胞代谢和信号传导途径中起不可缺少的作用，并且是在结构、生物化学和细胞水平下的研究最多的酶之一。尽管事实上所有激酶都使用相同的磷酸供体(在大多数情况下，ATP)并且催化显然相同的磷酰基转移反应，但它们在其结构折叠和底物识别机制中显示显著多样性。这可能主要是由于其底物的结构和特性的不同性质。
[0066] 有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)-活化的蛋白激酶(MK2和MK3)
[0067] 已经定义了在有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)下游的不同组的MAPK活化的蛋白激酶(MAP-KAPK)。这些酶将信号转导至不是MAPK的直接底物的靶蛋白且因此用于将具有MAPK级联的磷酸化依赖性信号传导传递至不同的细胞功能。这些组中的一个由三种MAPK APK形成：MK2、MK3(也称为3pK)和MK5(也称为PRAK)。有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(也称为“MAPKAPK2”、“MAPK AP-K2”、“MK2”)是丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶家族的激酶。MK2与MK3高度同源(大约75％氨基酸同一性)。MK2和MK3的激酶结构域与核糖体S6激酶(RSK)同种型的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)、磷酸化酶b激酶和C末端激酶结构域(CTKD)最相似(大约35％至40％同一性)。MK2基因编码370个氨基酸(MK2A)和400个氨基酸(MK2B)的两种选择性剪接的转录物。MK3基因编码一种382个氨基酸的转录物。MK2-和MK3蛋白是高度同源的，而MK2A具有较短的C-末端区域。MK2B的C-末端含有功能性二分核定位序列(NLS)(Lys-Lys-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Lys-Arg-Arg-Lys-Lys；SEQ ID NO：21)，其不存在于较短的MK2A同种型中，从而表明选择性剪接决定MK2同种型的细胞定位。MK3具有类似的核定位序列。在MK2B和MK3两者中发现的核定位序列涵盖D结构域(Leu-Leu-Lys-Arg-Arg-Lys-Lys；SEQ ID NO：22)，其显示介导MK2B和MK3与p38α和p38β的特异性相互作用。MK2B和MK3还具有位于NLS和D结构域N-末端的功能性核输出信号(NES)。MK2B中的NES足以在刺激后触发核输出(一种可被来普霉素B抑制的过程)。MK2和MK3中的催化结构域N-末端的序列是富含脯氨酸的，并且含有一个(MK3)或两个(MK2)推定Src同源性3(SH3)结构域结合位点，对于MK2，所述研究已经显示在体外介导与c-Abl的SH3结构域的结合。最近研究表明，此结构域参与MK2介导的细胞迁移。
[0068] MK2B和MK3主要位于休眠细胞的细胞核中，而MK2A存在于细胞质中。MK2B和MK3两者均在应激刺激时经由染色体区域维持蛋白(CRM1)依赖性机制迅速输出至细胞质。MK2B的核输出似乎是由激酶活化介导的，因为激酶的活化环内Thr334的磷酸化模拟突变增强了MK2B的细胞质定位。不受理论限制，认为MK2B和MK3可包含组成型活性核定位信号(NLS)和磷酸化调控的核输出信号(NES)。
[0069] MK2和MK3似乎普遍表达，其中在心脏、肺、肾、生殖器官(乳腺和睾丸)、皮肤和骨骼肌组织以及免疫相关细胞如白血细胞/白细胞和树突状细胞中的相对表达增加。
[0070] MK2和MK3活性的活化
[0071] p38α和p38β的各种活化剂有效刺激MK2和MK3活性。p38介导四个脯氨酸定向位点上MK2的体外和体内磷酸化：Thr25、Thr222、Ser272和Thr334。在这些位点中，仅Thr25在MK3中不是保守的。不受理论限制，虽然磷酸化Thr25的功能是未知的，但其在两个SH3结构域结合位点之间的位置表明它可调控蛋白质-蛋白质相互作用。MK2中的Thr222(MK3中的Thr201)位于激酶结构域的活化环中，并且已被证明对于MK2和MK3激酶活性是必需的。MK2中的Thr334(MK3中的Thr313)位于催化结构域的C-末端并且对于激酶活性是必需的。MK2的晶体结构已经得到解析，并且不受理论限制，表明Thr334磷酸化可充当MK2核输入和输出的转换。Thr334的磷酸化也可减弱或中断MK2的C末端与催化结构域的结合，从而暴露NES并促进核输出。
[0072] 研究已经表明，虽然p38能够活化细胞核中的MK2和MK3，但是实验证据表明MK2和MK3的活化和核输出通过磷酸化依赖性构象转换(其也决定p38稳定化和定位)偶联，并且p38本身的细胞位置通过MK2和可能的MK3控制。另外的研究已表明，在MK2的磷酸化和活化之后，细胞核p38以与MK2的复合物中的形式被输出至细胞质。p38与MK2之间的相互作用对于p38稳定可能是重要的，因为研究表明p38水平在MK2缺陷型细胞中较低，并且催化失活的MK2蛋白的表达恢复p38水平。
[0073] 底物和功能
[0074] MK2与MK3共享许多底物。两种酶具有相当的底物偏好并且使具有相似动力学常数的肽底物磷酸化。发现通过MK2有效磷酸化所需的最小序列是Hyd-Xaa-Arg-Xaa-Xaa-pSer/pThr(SEQ ID NO：22)，其中Hyd是大的疏水性残基。
[0075] 累积证据表明，MK2使各种蛋白质磷酸化，所述蛋白质包括但不限于5-脂氧合酶(ALOX5)、细胞分裂周期25同源物B(CDC25B)、细胞分裂周期25同源物C(CDC25C)、胚胎致死异常视觉果蝇样1(ELAVL1)、核不均一核糖核蛋白A0(HNRNPA0)、热休克因子蛋白1(HSF1)、热休克蛋白β-1(HSPB1)、角蛋白18(KRT18)、角蛋白20(KRT20)、LIM结构域激酶1(LIMK1)、淋巴细胞特异性蛋白1(LSP1)、聚腺苷酸结合蛋白1(PABPC1)、多聚腺苷酸特异性核糖核酸酶(PARN)、CAMP特异性3’，5’-环状磷酸二酯酶4A(PDE4A)、含RCSD结构域的蛋白1(RCSD1)、核糖体蛋白S6激酶(90kDa)多肽3(RPS6KA3)、TGF-β活化激酶1/MAP3K7结合蛋白3(TAB3)和三重四脯氨酸(TTP/ZFP36)。
[0076] 热休克蛋白β-1(也称为HSPB1或HSP27)是普遍存在于正常细胞中的应激诱导型细胞溶质蛋白，并且是小型热休克蛋白家族的成员。HSPB1的合成是由热休克和其他环境或病理生理应激引起的，如UV辐射、缺氧和缺血。除了其在耐热性中的推定作用外，HSPB1参与暴露于应激条件的细胞的存活和恢复。
[0077] 实验证据支持p38在调控细胞因子生物合成和细胞迁移中的作用。小鼠中mk2基因的靶向缺失表明，虽然p38介导许多类似激酶的活化，但是MK2似乎是负责这些p38依赖性生物过程的关键激酶。MK2的损失导致(i)脂多糖(LPS)诱导的细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和γ干扰素(IFN-γ)的合成的缺陷，和(ii)小鼠胚胎成纤维细胞、平滑肌细胞和嗜中性粒细胞迁移的变化。
[0078] 与MK2在炎症和免疫应答中的作用一致，MK2缺陷型小鼠显示对单核细胞增多性李斯特氏菌感染的易感性增加和局灶性缺血后炎症介导的神经元死亡减少。由于p38蛋白的水平在MK2缺陷型细胞中也显著降低，所以有必要区分这些表型是否仅是由于MK2的损失所致。为了实现这一点，使MK2突变体在MK2缺陷型细胞中表达，并且结果表明MK2的催化活性对于恢复p38水平是不必要的，但是是调控细胞因子生物合成所需的。
[0079] MK2的敲除或敲低研究提供强有力的支持：活化的MK2通过使与IL-6mRNA的富含AU的3′非翻译区相互作用的蛋白质磷酸化来增强IL-6mRNA的稳定性。具体地说，已经显示MK2主要负责hnRNPA0的磷酸化，hnRNPA0是稳定IL-6RNA的mRNA结合蛋白。此外，研究多种炎性疾病的若干另外研究还发现，促炎性细胞因子(如IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-8)的水平在来自患有稳定慢性阻塞性肺病(COPD)患者或吸烟者的肺泡巨噬细胞中的诱导痰增加(Keatings V.等人，Am J Resp Crit Care Med，1996，153：530-534；Lim，S.等人，J Respir Crit Care Med，2000，162：1355-1360)。
[0080] mRNA翻译的调控。
[0081] 使用MK2敲除小鼠或MK2缺陷型细胞的先前研究已经表明，MK2通过增加其mRNA的翻译速率来增加炎性细胞因子(包括TNF-α、IL-1和IL-6)的产生。在MK2缺陷型小鼠中不能检测到TNF-α的转录、加工和脱落的显著降低。已知p38途径在调控mRNA稳定性中起重要作用，并且MK2代表p38介导这种功能所凭借的可能靶标。使用MK2缺陷型小鼠的研究表明，MK2的催化活性对于其对细胞因子产生和迁移的作用是必需的，从而表明，不受理论限制，MK2使参与mRNA稳定性的靶标磷酸化。与这一点一致，已经显示MK2结合核不均一核糖核蛋白(hnRNP)A0、三重四脯氨酸(TTP)、多聚腺苷酸-结合蛋白PABP1以及HuR和/或使其磷酸化，HuR是RNA结合蛋白的ELAV(黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中的胚胎致死性异常视觉)家族的普遍表达的成员。已知这些底物与3′非翻译区中的含有富含AU的元件的mRNA结合或共纯化，从而表明MK2可调控富含AU的mRNA(如TNF-α)的稳定性。目前尚不清楚MK3是否起类似作用，但MK2缺陷型成纤维细胞的LPS处理完全消除了hnRNP A0磷酸化，从而表明MK3不能补偿MK2的损失。
[0082] MK3与MK2一起参与真核延伸因子2(eEF2)激酶的磷酸化。eEF2激酶使eEF2磷酸化并失活。eEF2活性对翻译过程中mRNA的延伸至关重要，并且Thr56上eEF2的磷酸化导致mRNA翻译的终止。Ser377上的eEF2激酶的MK2和MK3磷酸化表明这些酶可调节eEF2激酶活性且由此调控mRNA翻译延伸。
[0083] 通过MK2和MK3进行的转录调控
[0084] 与许多MK类似，细胞核MK2有助于cAMP反应元件结合(CREB)、活化转录因子-1(ATF-1)、血清反应因子(SRF)和转录因子ER81的磷酸化。野生型和MK2缺陷型细胞的比较揭示，MK2是由应激诱导的主要SRF激酶，从而表明MK2在应激介导的立即早期反应中的作用。MK2和MK3两者均与体内基本螺旋-环-螺旋转录因子E47相互作用，并在体外使E47磷酸化。
发现E47的MK2介导的磷酸化抑制E47的转录活性，并由此抑制E47依赖性基因表达，从而表明MK2和MK3可调控组织特异性基因表达和细胞分化。
发现E47的MK2介导的磷酸化抑制E47的转录活性，并由此抑制E47依赖性基因表达，从而表明MK2和MK3可调控组织特异性基因表达和细胞分化。
[0085] MK2和MK3的其他靶标
[0086] 还已经鉴定了反映几种生物过程中MK2和MK3的多种功能的几种其他MK2和MK3底物。支架蛋白14-3-3ζ是生理MK2底物。研究表明14-3-3ζ与细胞信号传导途径的许多组分相互作用，包括蛋白激酶、磷酸酶和转录因子。另外的研究已经显示，Ser58上MK2介导的14-3-3ζ的磷酸化影响其结合活性，从而表明MK2可能影响通常通过14-3-3ζ调控的几种信号传导分子的调节。
[0087] 另外的研究已经表明，MK2还与Ser77上的七成员Arp2和Arp3复合物(p16-Arc)的p16亚基相互作用并使其磷酸化。p16-Arc在调控肌动蛋白细胞骨架方面起作用，从而表明MK2可能参与这一过程。进一步的研究已经表明，小热休克蛋白HSPB1、淋巴细胞特异性蛋白质LSP-1和波形蛋白被MK2磷酸化。HSPB1形成大的低聚物，所述低聚物可充当分子伴侣并保护细胞免受热休克和氧化应激。在磷酸化后，HSPB1失去其形成大的低聚物的能力，并且不能阻断肌动蛋白聚合，从而表明HSPB1的MK2介导的磷酸化起着旨在调控肌动蛋白动力学的稳态功能，否则肌动蛋白动力学将在应激过程中不稳定。还显示MK3在体外和体内使HSPB1磷酸化，但其在应激条件期间的作用尚未阐明。
[0088] 还显示HSPB1在体外和体内结合聚泛素链且结合26S蛋白酶体。泛素-蛋白酶体途径通过降解其主要抑制剂IκB-α(IκB-α)而参与转录因子NF-κB(NF-κB)的活化，并且显示HSPB1的过度表达增加NF-κB(NF-κB)核重新定位、DNA结合以及由依托泊苷、TNF-α和白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的转录活性。此外，先前研究已经表明，HSPB1在应激条件下有利于泛素化蛋白质如磷酸化IκB-α(IκB-α)的降解；并且HSPB1的这种功能通过增强NF-κB(NF-κB)活性来解释其抗凋亡特性(Parcellier，A.等人，Mol Cell Biol，23(16)：5790-5802，2003)。
[0089] MK2和MK3也可使5-脂氧合酶磷酸化。5-脂氧合酶催化炎症介质白三烯的形成中的初始步骤。酪氨酸羟化酶、糖原合酶和Akt也显示被MK2磷酸化。
[0090] MK2使Ser1210上的肿瘤抑制蛋白马铃薯球蛋白(tuberin)磷酸化，从而形成14-3-3ζ的停泊位点。马铃薯球蛋白和错构瘤蛋白(hamartin)通常形成功能性复合物，所述功能性复合物通过拮抗mTOR依赖性信号传导来负调控细胞生长，从而表明p38介导的MK2的活化可通过增加14-3-3ζ与马铃薯球蛋白的结合来调控细胞生长。
[0091] 累积证据已经表明，p38MAPK途径与信号转导蛋白和转录活化因子3(STAT3)介导的信号转导之间的相互串扰(reciprocal crosstalk)形成了在脂多糖(LPS)激发模型中连续活化的临界轴(critical axis)。已经表明，此轴的平衡活化对于诱导和传播炎性巨噬细胞反应以及对消退期的控制是必要的，其主要由IL-10和持续STAT3活化驱动(Bode，J.等人，Cellular Signalling，24：1185-1194，2012)。此外，另一项研究表明MK2通过中和MK3对LPS诱导的p65和IRF3介导的信号传导的负调控作用来控制LPS诱导型IFNβ基因表达和随后的IFNβ介导的STAT3的活化。在mk2/3敲除巨噬细胞中，IFNβ依赖性STAT3活化独立于IL-10发生，因为与IFNβ相反，在mk2/3敲除巨噬细胞中另外缺失MK3后，受损的IL-10表达不能恢复(Ehlting，C.等人，J.Biol.Chem.，285(27)：24113-24124)。
[0092] 激酶抑制
[0093] 真核蛋白激酶构成通过其催化结构域相关的最大同源蛋白质超家族之一。大多数相关的蛋白激酶对丝氨酸/苏氨酸或酪氨酸磷酸化具有特异性。蛋白激酶在对细胞外刺激的细胞反应中起着不可或缺的作用。因此，蛋白激酶的刺激被认为是信号转导系统中最常见的活化机制之一。已知许多底物通过多种蛋白激酶进行磷酸化，并且已经公开了大量关于各种蛋白激酶的催化结构域的一级序列的信息。这些序列共享参与ATP结合、催化和结构完整性的维持的大量残基。大多数蛋白激酶具有良好保守的30-32kDa催化结构域。
[0094] 研究已经尝试鉴定并利用蛋白激酶的调控元素。这些调控元素包括抑制剂、抗体和阻断肽。
[0095] 抑制剂
[0096] 酶抑制剂是与酶结合、从而降低酶活性的分子。抑制剂的结合可阻止底物进入酶的活性位点和/或阻碍酶催化其反应(如在针对激酶的ATP结合位点的抑制剂中)。抑制剂结合是可逆或不可逆的。不可逆的抑制剂通常与酶反应并且化学地改变所述酶(例如，通过修饰酶活性所需的关键氨基酸残基)，以使得其不再能够催化其反应。相比之下，可逆的抑制剂非共价结合，并且取决于这些抑制剂是否与酶、酶-底物复合物或二者结合而产生不同类型的抑制作用。
[0097] 酶抑制剂通常通过其特异性和效力来评估。如在上下文中使用的术语“特异性”是指抑制剂的选择性连接或其与其他蛋白质的结合的缺乏。如本文所用的术语“效力”是指抑制剂的解离常数，其指示抑制酶所需的抑制剂的浓度。
[0098] 已经研究了蛋白激酶的抑制剂用作蛋白激酶活性调控的工具。已研究了抑制剂用于例如细胞周期蛋白依赖性(Cdk)激酶、MAP激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶、Src家族蛋白酪氨酸激酶、酪氨酸激酶、钙调蛋白(CaM)激酶、酪蛋白激酶、检查点激酶(Chk1)、糖原合酶激酶3(GSK-3)、c-Jun N-末端激酶(JNK)、有丝分裂原活化蛋白激酶1(MEK)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、蛋白激酶A、Akt(蛋白激酶B)、蛋白激酶C、蛋白激酶G、蛋白酪氨酸激酶、Raf激酶和Rho激酶。
[0099] 小分子MK2抑制剂
[0100] 虽然已经设计了以相对于其他激酶至少适度的选择性靶向MK2的单独抑制剂，但是难以产生具有良好溶解度和渗透性的化合物。因此，存在相对较少已经进入体内临床前研究的生物化学上有效的MK2抑制剂(Edmunds，J.和Talanian，MAPKAP Kinase 2(MK2)as a Target for Anti-inflammatory Drug Discovery.Levin，J and Laufer，S(编辑)，RSC Drug Discovery Series第26期，第158-175页，the Royal Society ofChemistry，2012；以引用的方式整体并入)。
[0101] 大多数公开的MK2抑制剂是如通过晶体学或生物化学研究揭示的经典I型抑制剂。因此，它们结合激酶的ATP位点并因此与细胞内ATP(估计浓度为1mM-5mM)竞争以抑制激酶的磷酸化和活化。此类小分子MK2抑制剂的代表性实例包括但不限于，
[0102]
[0103]
[0104] 阻断肽
[0105] 肽是由两个或更多个氨基酸的链组成的化合物，其中链中的一个氨基酸的羧基通过肽键连接至另一个氨基酸的氨基。肽已被尤其用于蛋白质结构和功能的研究。合成肽可尤其用作探针以观察蛋白质-肽相互作用发生的位置。抑制性肽可尤其用于临床研究以检查肽对蛋白激酶、癌蛋白和其他病症的抑制的作用。
[0106] 已经研究了几种阻断肽的用途。例如，细胞外信号调控激酶(ERK)(一种MAPK蛋白激酶)对于细胞增殖和分化是至关重要的。MAPK的活化需要级联机制，其中MAPK被上游MAPKK(MEK)磷酸化，所述上游MAPKK(MEK)然后进而被第三激酶MAPKKK(MEKK)磷酸化。ERK抑制肽通过结合ERK而充当MEK诱饵。
[0107] 合成肽autocamtide-2相关抑制肽(AIP)是Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的高度特异性和有效的抑制剂。AIP是不可磷酸化的autocamtide-2类似物，其是CaMKII的高选择性肽底物。AIP以100nM的IC50抑制CaMKII(IC50是获得50％抑制所需的抑制剂的浓度)。AIP抑制相对于syntide-2(CaMKII肽底物)和ATP是非竞争性的，但相对于autocamtide-2是竞争性的。抑制不受Ca2+/钙调蛋白的存在或不存在的影响。CaMKII活性被AIP(1μM)完全抑制，而PKA、PKC和CaMKIV不受影响。
[0108] 细胞分裂蛋白激酶5(Cdk5)抑制肽(CIP)是另一种阻断肽。当Cdk5与p25缔合时，Cdk5使阿尔茨海默氏病特异性磷酸化表位处的微管蛋白tau磷酸化。p25是截短的活化因子，其在暴露于淀粉样蛋白β肽后由生理Cdk5活化因子p35产生。在用CIP进行神经元感染后，CIP选择性地抑制p25/Cdk5活性并遏制皮质神经元中的异常tau磷酸化。由CIP表现的特异性的原因尚未完全了解。
[0109] 已经研究了另外的阻断肽用于抑制细胞外调控激酶2(ERK2)、ERK3、p38/HOG1、蛋白激酶C、酪蛋白激酶II、Ca2+/钙调蛋白激酶IV、酪蛋白激酶II、Cdk4、Cdk5、DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)、丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶PAK3、磷酸肌醇(PI)-3激酶、PI-5激酶、PSTAIRE(cdk高度保守序列)、核糖体S6激酶、GSK-4、生发中心激酶(GCK)、SAPK(应激活化蛋白激酶)、SEK1(应激信号传导激酶)和粘着斑激酶(FAK)。
[0110] 蛋白质底物竞争性抑制剂
[0111] 迄今开发的大多数蛋白激酶抑制剂是ATP竞争剂。这种类型的分子竞争激酶的ATP结合位点，并且由于其特异性的严重限制而经常显示脱靶效应。这些抑制剂的低特异性是由于ATP结合位点在多种蛋白激酶之间高度保守的事实所致。另一方面，非ATP竞争性抑制剂如底物竞争性抑制剂预期更具特异性，因为底物结合位点在各种蛋白激酶之间具有一定程度的变异性。
[0112] 虽然底物竞争性抑制剂通常在体外与靶酶具有较弱结合相互作用，但是研究已经显示化学修饰可改善底物抑制剂的特异性亲和力和体内功效(Eldar-Finkelman，H.等人，Biochim，Biophys.Acta，1804(3)：598-603，2010)。此外，在许多情况下，底物竞争性抑制剂在细胞中表现出比无细胞条件中更好的功效(van Es，J.等人，Curr.Opin.Gent.Dev.13：28-33，2003)。
[0113] 为了增强蛋白激酶抑制的特异性和效力，还已经开发了双底物抑制剂。由各自靶向双底物酶的不同结合位点的两个缀合片段组成的双底物抑制剂形成一组特殊的蛋白激酶抑制剂，所述抑制剂模拟两种天然底物/配体并且同时与给定激酶的两个区域缔合。当与单位点抑制剂相比时，双底物抑制剂的主要优点是它们与靶酶产生更多相互作用的能力，这可导致缀合物的亲和力和选择性的改善。双底物抑制剂的实例包括但不限于核苷酸-肽缀合物、腺苷衍生物-肽缀合物、以及肽与有效ATP竞争性抑制剂的缀合物。
[0114] 蛋白质转导结构域(PTD)/细胞渗透性蛋白质(CPP)
[0115] 质膜对于将大分子引入细胞中提出强大屏障。为了使几乎所有治疗剂发挥其作用，必须穿过至少一个细胞膜。传统的小分子药物开发依赖于具有调节蛋白质功能的能力的膜可渗透分子的机会发现。虽然小分子仍然是主要治疗范式(therapeutic paradigm)，但是这些分子中的许多遭受特异性的缺乏、副作用和毒性。可使用基于分子、细胞和结构数据的合理药物设计来产生具有远远优于小分子的蛋白质调节功能的蛋白质调节功能的信息丰富的大分子。然而，对于大多数尺寸大于500Da的分子，质膜是不可渗透的。因此，细胞穿透肽(如转录反式活化因子(Tat)的基本结构域)跨越细胞膜并在体内传递大分子运输物质的能力可极大促进治疗性蛋白质、肽和核酸的合理设计。
[0116] 蛋白质转导结构域(PTD)是能够穿透哺乳动物细胞的质膜并跨越所述膜转运许多类型和分子量的化合物的一类肽。这些化合物包括效应分子，如蛋白质、DNA、缀合肽、寡核苷酸和小颗粒如脂质体。当PTD与其他蛋白质化学连接或融合时，所得融合肽仍然能够进入细胞。虽然转导的确切机制是未知的，但这些蛋白质的内化不被认为是受体介导的或转运蛋白介导的。PTD通常长度是10-16个氨基酸，并且可根据其组成(例如像富含精氨酸和/或赖氨酸的肽)分组。
[0117] 能够将效应分子转运至细胞中的PTD的使用在药物设计中变得越来越具有吸引力，因为它们促进运输物质分子的细胞摄取。根据其序列，通常分类为两亲性(意味着具有极性端和非极性端两者)或阳离子(意味着含有带净正电荷的原子或与其相关)的这些细胞穿透肽提供大分子的非侵入性递送技术。PTD通常被称为“特洛伊肽(Trojan peptide)”、“膜易位序列”或“细胞渗透性蛋白质”(CPP)。PTD也可用于辅助新型HSPB1激酶抑制剂穿透细胞膜。(参见例如，美国专利8,536,303和美国专利号8,741,849，其各自的内容以引用的方式整体并入本文)。
[0118] 含有病毒PTD的蛋白质
[0119] 描述为具有转导性质的第一种蛋白质为病毒来源。这些蛋白质仍然是PTD作用的最普遍接受的模型。HIV-1转录反式活化因子(Tat)和HSV-1VP 22蛋白是最佳表征的含有病毒PTD的蛋白质。
[0120] Tat(HIV-1反式活化因子基因产物)是86个氨基酸的多肽，其充当整合的HIV-1基因组的强大转录因子。Tat作用于病毒基因组，从而刺激潜伏感染细胞中的病毒复制。Tat蛋白的易位性质使其能够活化休眠的感染细胞，并且它可通过调控许多细胞基因(包括细胞因子)来参与未感染细胞的引发以用于随后感染。Tat的最小PTD是9个氨基酸的蛋白质序列RKKRRQRRR(TAT49-57；SEQ ID NO：20)。使用更长Tat片段的研究证明成功转导达120kDa的融合蛋白。已经证明添加多个Tat-PTD以及合成Tat衍生物来介导膜易位。含有Tat PTD的融合蛋白已被用作涉及癌症的实验中、将死亡蛋白转运至细胞中以及神经变性病症的疾病模型的治疗部分。
[0121] 随着研究人员试图了解转导背后的生物学，转导肽渗透细胞膜的机制近年来受到相当关注。据早期报道，通过非内吞作用机制发生的Tat转导在很大程度上被误认为人为的，但是其他细胞穿透肽可通过直接膜破坏被摄取。Tat和其他PTD的转导通过巨胞饮作用(一种特殊形式的内吞作用)发生的最近发现在这些肽的研究中产生了新的范式。对转导机制的了解增强有助于提高转导效率，从而达到临床成功的最终目标(Snyder E.和Dowdy，S.，Pharm Res.，21(3)：389-393，2004)。
[0122] Tat介导的蛋白质转导的当前模型是多步骤方法，其涉及Tat与细胞表面的结合、巨胞饮作用的刺激、Tat和运输物质摄取至大分子体中以及内体逃逸至细胞质中。与细胞表面结合的第一步骤被认为是通过细胞表面上普遍存在的聚糖链。通过Tat刺激巨胞饮作用通过可包括与细胞表面蛋白的结合的未知机制发生，或可通过蛋白聚糖或糖脂发生。通过巨胞饮作用(由所有细胞类型使用的一种形式的流体相内吞作用)是Tat和聚精氨酸转导所需的。Tat转导中的最终步骤从巨胞饮小体逃逸到细胞质中；这一过程很可能取决于内体的pH下降，所述pH下降连同其他因素有助于通过Tat扰动膜和Tat及其运输物质(即肽、蛋白质或药物等)释放至细胞质(Snyder E.和Dowdy，S.，Pharm Res.，21(3)：389-393，2004)。
[0123] VP22是HSV-1壳皮蛋白，其是HSV病毒粒子的结构部分。VP22能够进行受体独立易位并积累在细胞核中。VP22的这种性质将蛋白质分类为含有PTD的肽。包含全长VP22的融合蛋白已经跨质膜有效易位。
[0124] 具有细胞间易位性质的同源异型蛋白
[0125] 同源异型蛋白是参与形态学过程的高度保守的反式活化转录因子。它们通过60个氨基酸的特定序列与DNA结合。DNA结合同源异型结构域是同源异型蛋白中的最高度保守的序列。已经将几种同源异型蛋白描述为表现出PTD样活性；它们能够在无细胞类型特异性的情况下以不依赖能量和不依赖内吞作用的方式跨细胞膜有效易位。
[0126] 触角足蛋白(Antp)是能够跨细胞膜易位的反式活化因子；能够易位的最小序列是对应于蛋白质同源异型结构域(HD)的第三螺旋的16个氨基酸的肽。此螺旋的内化在4℃下发生，从而表明此过程不是内吞作用依赖性的。作为与AntpHD的融合蛋白产生的达100个氨基酸的肽穿透细胞膜。
[0127] 能够易位的其他同源异型结构域包括Fushi tarazu(Ftz)和Engrailed(En)同源异型结构域。许多同源异型结构域共享高度保守的第三螺旋。
[0128] 人PTD
[0129] 人PTD可在引入至人患者中后避免潜在免疫原性问题。具有PTD序列的肽包括：Hoxa-5、Hox-A4、Hox-B5、Hox-B6、Hox-B7、HOX-D3、GAX、MOX-2和FtzPTD。这些蛋白质都共享在AntpPTD中发现的序列。其他PTD包括胰岛-1、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF)和来自卡波西成纤维细胞生长因子或成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)信号肽的疏水序列，其能够进行不依赖于能量、受体和内吞作用的易位。未确认的PTD包括成纤维细胞生长因子(FGF)家族的成员。FGF是调控多种细胞的增殖和分化的多肽生长因子。若干出版物报道，碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)表现出与VP-22、Tat和同源异型结构域相似的非常规内化。
还据报道，在低至4℃的温度下，酸性FGF(FGF-1)易位细胞膜。然而，关于负责融合蛋白的内化或易位性质的结构域不存在确切证据(Beerens，A.等人，Curr Gene Ther.，3(5)：486-
494，2003)。
还据报道，在低至4℃的温度下，酸性FGF(FGF-1)易位细胞膜。然而，关于负责融合蛋白的内化或易位性质的结构域不存在确切证据(Beerens，A.等人，Curr Gene Ther.，3(5)：486-
494，2003)。
[0130] 合成PTD
[0131] 已经合成了几种肽以试图产生更有效的PTD并且阐明PTD跨细胞膜转运蛋白质的机制。这些合成PTD中的许多是基于现有和详尽记载的肽，而其他则针对其碱性残基和/或正电荷进行选择，碱性残基和/或正电荷被认为是PTD功能所必需的。这些合成PTD中的一些显示出比现有PTD更好的易位性质(Beerens，A.等人，Curr Gene Ther.，3(5)：486-494，2003)。示例性Tat衍生的合成PTD包括例如但不限于，WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)；
WLRRIKA(SEQ ID NO：13)；YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)；WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)；
FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)；KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)；以及HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)。
WLRRIKA(SEQ ID NO：13)；YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)；WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)；
FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)；KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)；以及HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)。
[0132] 包含融合至MK2抑制剂肽治疗结构域(TD)的PTD的组合物
[0133] 已经合成了与合成PTD融合的几种MK2抑制剂肽(TD)，并且已经研究了包含这些融合多肽的组合物的用途。这些多肽包括但不限于，YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1；MMI-0100)、YARAAARQARAKALNRQLGVA(SEQ ID NO：19；MMI-0200)、FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3；MMI-0300)、KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4；MMI-0400)、HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)、YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)、以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)。体外和体内研究两者已经显示，这些多肽可适用于治疗各种疾病、病症和病状。这些包括但不限于，增生和赘生物(美国专利号8,536,303和8,741,849)、炎性病症(美国申请号12/634,476和美国申请号13/934,933)、粘连(美国申请号12/582516)、由于血管痉挛(neospasm)所致的血管移植失败(美国申请号13/114,872)、改善神经突外生长(美国申请号12,844,815)、皮肤瘢痕形成(美国申请号13/829,876)、冠状动脉旁路血管移植失败(美国申请号13/700,087)以及间质性肺病和肺纤维化(美国申请号13/445,759)。
[0134] 肽组合物对制剂科学家提出了许多特殊挑战(R.W.Payne和M.C.Manning，“Peptide formulation：challenges and strategies，”Innovations in Pharmaceutical Technology，64-68(2009))。首先，由于肽不具有可螯合反应性基团的球状结构，所以肽中的几乎所有残基的侧链是完全溶剂暴露的，并且可通过水解反应(例如氧化和脱酰胺)展示化学降解。第二，水溶液中的构象可能与结合至受体时发现的结构几乎没有相似性。第三，许多肽在非常低的浓度下倾向于是单体的，但是随着浓度增加可自组装，并且表现得好似处于高度缔合状态，但是这些结构太短暂或不定而不能提供长期稳定性的任何增加。第四，肽自缔合的倾向与其物理不稳定性有关，这意味着它们形成聚集体的可能性。此外，存在于肽制剂中的赋形剂可化学降解、在制造过程中与各种表面相互作用、与容器或封闭件相互作用或与肽本身相互作用，从而不利地影响制剂的临界性质(Lars Hovgaard，和Sven Frokjaer，“Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins，第2版，CRC Press(2012)第212-213页)。
[0135] TrkB在NSCLC中高度表达
[0136] 癌细胞的侵袭中的异常调控与其转移潜力密切相关。(Zhang，S.等人，“TrkB is highly expressed in NSCLC and mediates BDNF-induced activation of Pyk2signaling and the invasion of A549cells，”BMC Cancer 2010，10：43)。原肌球蛋白相关激酶B(TrkB)(Trk家族的一种成员)充当受体酪氨酸激酶并且被认为有助于肿瘤转移。同上。脑源性神经营养因子(BDNF)(与TrkB结合的主要配体)导致成神经细胞瘤中各种细胞活性(如细胞分化、细胞凋亡和侵袭)的调控。同上。TrkB在各种原发性人肿瘤(包括成神经细胞瘤和卵巢癌)中上调。同上。增强的TrkB信号传导以锚定依赖性方式促进细胞存活。同上。当通过BDNF活化时，TrkB导致下游信号传导分子(如磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt))的活化，其诱导凋亡和转移的差异性调控。同上。
[0137] 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)是广泛表达的非受体酪氨酸激酶，其将来自受体酪氨酸激酶和细胞内信号传导分子的信号整合在如细胞分化、增殖和迁移的此类基本细胞过程中。同上。Pyk2响应于各种细胞外信号而迅速酪氨酸磷酸化，并且活化的Pyk2信号传导以锚定依赖性方式促进细胞存活和迁移。同上。Pyk2的酪氨酸402(Tyr402)充当Pyk2活性和功能所必需的主要自身磷酸化位点。同上。Tyr402的高活性在具有更具侵袭性和转移性表型的肿瘤细胞中发现。同上。
[0138] 在NSCLC中已经报道了TrkB的高表达，特别是与淋巴结转移和TNM分期相关。同上。TrkB-siRNA中断BDNF促进的Pyk2和细胞外调控激酶(ERK)活化和肺腺癌A549细胞的侵袭。
同上。此外，Pyk2-siRNA抑制BDNF相关的ERK磷酸化和细胞侵袭。同上。研究者将这些数据考虑为TrkB/Pyk2/ERK信号传导介导BDNF诱导的A549细胞侵袭的证据，并且表明抑制TrkB可为NSCLC中的转移的抑制疗法提供有用的靶标。同上。
同上。此外，Pyk2-siRNA抑制BDNF相关的ERK磷酸化和细胞侵袭。同上。研究者将这些数据考虑为TrkB/Pyk2/ERK信号传导介导BDNF诱导的A549细胞侵袭的证据，并且表明抑制TrkB可为NSCLC中的转移的抑制疗法提供有用的靶标。同上。
[0139] 所描述的发明提供了一种使用基于细胞穿透肽的MK2抑制剂治疗非小细胞肺癌的方法，所述方法可有效克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性并减缓包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌实体肿瘤的进展。
[0140] 发明概述
[0141] 根据一个方面，所描述的发明提供一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌(NSCLC)实体肿瘤的药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，并且其中所述治疗量有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自表1中所列的组的激酶的激酶活性并减少癌细胞增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性、减缓所述肿瘤细胞群体的进展或其组合。
[0142] 根据另一方面，所描述的发明提供一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌实体肿瘤的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，其中治疗量的所述多肽有效抑制所述肿瘤细胞群体的激酶活性、减少癌细胞增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导癌细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性、减缓所述肿瘤细胞群体的进展或其组合。
[0143] 根据另一方面，所描述的发明提供一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤的系统，所述系统包括：(a)药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，并且其中治疗量可有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自表1中所列的组的激酶的激酶活性并减少所述肿瘤细胞群体的增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性、减缓所述肿瘤细胞群体的进展或其组合；以及(b)用于肺部递送的吸入装置。
[0144] 根据一个实施方案，肿瘤选自由以下组成的组：原发性肿瘤、继发性肿瘤、复发性肿瘤、难治性肿瘤以及其组合。根据另一个实施方案，原发性肿瘤选自由以下组成的组：鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌以及其组合。根据另一个实施方案，继发性肿瘤是转移性肿瘤。根据另一个实施方案，转移性肿瘤选自由以下组成的组：肾上腺转移性肿瘤、骨转移性肿瘤、肝转移性肿瘤、脑转移性肿瘤以及其组合。
[0145] 根据一些实施方案，施用步骤在气管内(例如，通过吸入)、胃肠外、静脉内或腹膜内发生。根据一些实施方案，施用步骤通过肺部施用发生。
[0146] 根据一个实施方案，药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。根据另一个实施方案，另外的治疗剂是选自由以下组成的组的化学治疗剂：Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、二马来酸阿法替尼、爱宁达(培美曲塞二钠)、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、色瑞替尼、顺铂、克唑替尼、Cyramza(雷莫芦单抗)、多西他赛、盐酸埃罗替尼、Folex PFS(甲氨蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(二马来酸阿法替尼(Afatinib Dmaleate))、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸氮芥、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、Mustargen(盐酸氮芥)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、铂尔定(卡铂)、培美曲塞二钠、顺氯氨铂(顺铂)、顺氯氨铂-AQ(顺铂)、雷莫芦单抗、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、紫杉酚(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、酒石酸长春瑞滨、赛可瑞(克唑替尼)、Zykadia(色瑞替尼)、卡铂-紫杉酚、吉西他滨-顺铂以及其组合。根据另一个实施方案，另外的治疗剂是选自由以下组成的组的糖皮质激素：泼尼松、布地奈德、糠酸莫米松、丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松以及其组合。根据另一个实施方案，另外的治疗剂是选自由以下组成的组的支气管扩张剂：白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、短效β2激动剂和长效β2激动剂以及其组合。根据另一个实施方案，另外的治疗剂是镇痛剂。根据另一个实施方案，另外的治疗剂是抗感染剂。
[0147] 根据一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)。根据另一个实施方案，多肽
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。根据另一个实施方案，多肽
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。根据另一个实施方案，多肽
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列
HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。根据另一个实施方案，多肽
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。根据另一个实施方案，多肽
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列
HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
[0148] 根据一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物的治疗结构域(TD)由为细胞穿透肽(CPP)的第一多肽与为治疗结构域(TD)的第二多肽可操作地连接的融合制成，是序列与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有基本同一性的多肽。根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽。根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽。根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
[0149] 根据一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽是选自由以下组成的组的功能上等效于YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)的细胞穿透肽：具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)、WLRRIKA(SEQ ID NO：13)、YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)、WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)、FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)、KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)以及HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽，并且所述第二多肽具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
[0150] 根据一个实施方案，载体选自由以下组成的组：控制释放载体、延迟释放载体、持续释放载体和长期释放载体。
[0152] 根据一个实施方案，药物组合物经由吸入装置施用。根据另一个实施方案，吸入装置是雾化器。根据另一个实施方案，吸入装置是计量剂量吸入器(MDI)。根据另一个实施方案，吸入装置是干粉吸入器(DPI)。根据另一个实施方案，吸入装置是干粉雾化器。
[0154] 图1示出喷雾干燥的纯胰岛素的递送性能。
[0155] 图2示出通过安德森级联冲击取样(Anderson Cascade Impaction，ACI)测定的喷雾干燥的胰岛素的粒度分布。
[0156] 图3示出微剂量干粉吸入器(DPI)对比两种市售的“被动式”干粉吸入器(DPI)的效率和流速比较。
[0157] 图4示出喷雾干燥的纯肽的流速独立性。
[0158] 图5示出喷雾干燥的肽(不是胰岛素)的代表性显微照片。
[0159] 图6示出喷雾干燥的肽(不是胰岛素)的粒度分布。
[0160] 图7示出通过下一代冲击器(NGI)测定的微粉化/乳糖共混物组合的粒度分布。
[0161] 图8示出微粉化小分子(长效蕈毒碱剂(LAMA)/乳糖共混物)的递送性能。
[0162] 发明详述
[0163] 所描述的发明提供一种用于治疗有需要的受试者的非小细胞肺癌的组合物和方法，所述方法包括施用治疗量的组合物，所述组合物包含具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(MMI-0100；SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物。
[0164] 术语
[0165] 如本文所用的术语“添加”是指一个或多个碱基或一个或多个氨基酸插入序列中。
[0166] 如本文所用的术语“施用”是指分派(dispensing)、供应、应用、给与、分配(apportioning)或贡献。术语“施用(administering)”或“施用(administration)”可互换使用并且包括体内施用，以及离体直接施用至组织。一般来说，组合物可经口服、经颊、胃肠外、局部、通过吸入或吹入(即，通过口或通过鼻)或以含有常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂和媒介物(根据需要)的剂量单位制剂经直肠全身施用，或者可通过诸如但不限于注射、植入、移植、局部应用或胃肠外的方式局部施用。另外的施用可例如静脉内、心包、口服、经由植入物、经粘膜、经皮、局部、肌内、皮下、腹膜内、鞘内、淋巴内、病灶内或硬膜外进行。施用可例如一次、多次、和/或在一个或多个延长时间段内进行。
[0167] 如本文所用的术语“辅助治疗”是指与主要治疗一起使用的另一种治疗。
[0168] 如本文所用的术语“气道”是指空气进入和离开身体的通道。肺气道包括在呼吸期间空气穿过的呼吸道的那些部分。
[0169] 如本文所用的术语“气道阻塞”是指气流的任何异常减少。气道阻力可发生在从上呼吸道至终末支气管的气道中的任何地方。
[0170] 如本文所用的术语“肺泡(alveolus)”或“肺泡(alveoli)”是指具有中空腔形式的解剖结构。在肺中发现，肺泡是呼吸部位的与血液气体交换的球形露出。肺泡含有一些胶原和弹性纤维。在吸入时弹性纤维允许肺泡在充满空气时伸展。弹性纤维然后在呼出时回弹以便排出富含二氧化碳的空气。
[0171] 术语“氨基酸残基”或“氨基酸”或“残基”可互换使用来指并入蛋白质、多肽或肽中的氨基酸，包括但不限于天然存在的氨基酸和天然氨基酸的已知类似物，所述类似物可以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用。氨基酸可以是L-或D-氨基酸。氨基酸可被合成氨基酸替代，所述合成氨基酸被改变以增加肽的半衰期、增加肽的效力或增加肽的生物利用度。
[0172] 主要在本文中使用氨基酸的单字母名称。如本领域技术人员所熟知的，此类单字母名称如下：
[0173] A是丙氨酸；C是半胱氨酸；D是天冬氨酸；E是谷氨酸；F是苯丙氨酸；G是甘氨酸；H是组氨酸；I是异亮氨酸；K是赖氨酸；L是亮氨酸；M是甲硫氨酸；N是天冬酰胺；P是脯氨酸；Q是谷氨酰胺；R是精氨酸；S是丝氨酸；T是苏氨酸；V是缬氨酸；W是色氨酸；并且Y是酪氨酸。
[0174] 以下代表为彼此的保守取代的氨基酸组：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；以及6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
[0175] 术语“细胞凋亡”或“程序性细胞死亡”是指有助于生物体内稳态的高度调控和活性过程，所述过程包括导致各种形态学变化的一系列生物化学事件，包括起泡、对细胞膜的改变(如膜不对称性和附着的损失)、细胞收缩、细胞核断裂、染色质凝聚和染色体DNA断裂，而不损害生物体。
[0176] 凋亡细胞死亡是由许多不同的因素诱导的，并且涉及许多信号传导途径，一些依赖于半胱天冬酶蛋白酶(一类半胱氨酸蛋白酶)并且其他与半胱天冬酶无关。它可被许多不同的细胞刺激触发，所述细胞刺激包括细胞表面受体、对应激的线粒体反应和细胞毒性T细胞，从而导致细胞凋亡信号传导途径的活化。
[0177] 参与细胞凋亡的半胱天冬酶在蛋白水解级联中传递细胞凋亡信号，其中半胱天冬酶裂解并活化其他半胱天冬酶，所述其他半胱天冬酶然后降解导致细胞死亡的其他细胞靶标。在级联上端的半胱天冬酶包括半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9。半胱天冬酶-8是参与对具有如Fas的死亡结构域(DD)的受体的反应的初始半胱天冬酶。
[0178] TNF受体家族中的受体与细胞凋亡的诱导以及炎性信号传导相关。Fas受体(CD95)通过在其他细胞的表面上表达的Fas配体介导细胞凋亡信号传导。Fas-FasL相互作用在免疫系统中起重要作用，并且缺乏这种系统导致自身免疫，从而表明Fas介导的细胞凋亡除去自身反应性淋巴细胞。Fas信号传导也参与免疫监测，以除去转化的细胞和病毒感染的细胞。Fas与另一细胞上的低聚化FasL的结合通过称为死亡结构域(DD)的细胞质结构域活化细胞凋亡信号传导，所述死亡结构域与包括FAF、FADD和DAX的信号传导接头蛋白相互作用以活化半胱天冬酶蛋白水解级联。半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-10首先被活化以随后裂解并活化下游半胱天冬酶和导致细胞死亡的各种细胞底物。
[0179] 线粒体通过将线粒体蛋白质释放至细胞质中来参与细胞凋亡信号传导途径。细胞色素c(电子传递中的一种关键蛋白质)响应于细胞凋亡信号从线粒体中释放，并活化Apaf-1(一种从线粒体释放的蛋白酶)。活化的Apaf-1活化半胱天冬酶-9和半胱天冬酶途径的其余部分。Smac/DIABLO从线粒体中释放并抑制通常与半胱天冬酶-9相互作用的IAP蛋白以抑制细胞凋亡。由于家族成员形成进入线粒体膜的复合物，从而调控细胞色素c和其他蛋白质的释放，所以通过Bcl-2家族蛋白质调控细胞凋亡发生。引起细胞凋亡的TNF家族受体直接活化半胱天冬酶级联，但也可活化Bid(一种Bcl-2家族成员)，其活化线粒体介导的细胞凋亡。Bax(另一个Bcl-2家族成员)被此途径活化以定位至线粒体膜并增加其渗透性，从而释放细胞色素c和其他线粒体蛋白质。Bcl-2和Bcl-xL防止孔形成，从而阻断细胞凋亡。像细胞色素c一样，AIF(细胞凋亡诱导因子)是在线粒体中发现的通过细胞凋亡刺激从线粒体释放的蛋白质。虽然细胞色素C与半胱天冬酶依赖性细胞凋亡信号传导相关，但AIF释放刺激半胱天冬酶依赖性细胞凋亡，从而移入细胞核，在细胞核中其结合DNA。通过AIF结合DNA可能通过募集核酸酶刺激染色质凝聚和DNA断裂。
[0180] 线粒体应激途径开始于从线粒体释放细胞色素c，所述细胞色素c然后与Apaf-1相互作用，从而导致半胱天冬酶-9的自身裂解和活化。半胱天冬酶-3、-6和-7是被上游蛋白酶活化并本身用于裂解细胞靶标的下游半胱天冬酶。
[0181] 通过细胞毒性T细胞释放的颗粒酶B和穿孔素蛋白诱导靶细胞的细胞凋亡，从而形成跨膜孔并可能通过半胱天冬酶的裂解触发细胞凋亡，但是已经提出了颗粒酶B介导的细胞凋亡的半胱天冬酶非依赖性机制。
[0182] 通过由细胞凋亡信号传导途径活化的多种核酸酶使核基因组断裂以产生核小体梯(nucleosomal ladder)是细胞凋亡特有的细胞反应。参与细胞凋亡的一种核酸酶是DNA断裂因子(DFF)，其是一种半胱天冬酶活化的DNA酶(CAD)。DFF/CAD通过经由细胞凋亡期间的半胱天冬酶蛋白酶裂解其相关抑制剂ICAD而活化。DFF/CAD与染色质组分(如拓扑异构酶II和组蛋白H1)相互作用，以凝聚染色质结构并可能将CAD募集至染色质。另一种细胞凋亡活化蛋白酶是核酸内切酶G(EndoG)。EndoG在核基因组中编码，但在正常细胞中定位至线粒体。EndoG可在线粒体基因组的复制以及细胞凋亡中起作用。细胞凋亡信号传导导致EndoG从线粒体释放。EndoG和DFF/CAD途径是独立的，因为EndoG途径仍然在缺乏DFF的细胞中发生。
[0183] 缺氧以及缺氧、随后再氧合可触发细胞色素c释放和细胞凋亡。糖原合酶激酶(GSK-3)(在大多数细胞类型中普遍表达的丝氨酸-苏氨酸激酶)由于活化线粒体细胞死亡途径的许多刺激而似乎介导或增强细胞凋亡。Loberg，RD，等人，J.Biol.Chem.277(44)：41667-673(2002)。它已被证明诱导半胱天冬酶3活化并活化促凋亡肿瘤抑制基因p53。还已经提出，GSK-3促进促凋亡Bcl-2家族成员Bax的活化和易位，Bax在聚集和线粒体定位时诱导细胞色素c释放。Akt是GSK-3的关键调节因子，并且GSK-3的磷酸化和失活可介导Akt的一些抗细胞凋亡作用。
[0184] 如本文所用的术语“身体状况评分”或“BCS”是指用于评估健康并建立其中体重不是可行监测工具的成年动物的终点的非侵入性方法，如在动物肿瘤模型、动物腹水产生和动物怀孕的情况下，或对于年轻生长中动物。BCS通过每只动物的频繁视觉和手动检查来确定。评分BC1＝小鼠消瘦：骨骼结构非常明显，很少或没有肉体覆盖，椎骨明显分段。评分BC2＝小鼠肥育不足：脊柱分段明显，背侧骨盆骨易于触及。评分BC3＝小鼠状况良好：椎骨和背侧骨盆不明显，在轻微压力下可触及。得分BC4＝小鼠过肥：脊柱是连续的柱，椎骨仅在坚实压力下可触及。得分BC5＝小鼠是肥胖的：小鼠光滑且笨重，骨结构在肉体和皮下脂肪下消失。
[0185] 如本文所用的术语“支气管肺泡灌洗”或“BAL”是指其中支气管镜穿过口或鼻进入肺并且将流体喷射至肺的一小部分中且然后回收以用于检查的医学程序。通常进行BAL来诊断肺病。BAL通常用于诊断具有免疫系统问题的人中的感染、使用呼吸机的人中的肺炎、一些类型的肺癌和肺瘢痕形成(间质性肺病)。BAL是用于对上皮内衬液(ELF)的组分进行采样和用于确定肺气道的蛋白质组成的最常见方式，并且经常在免疫学研究中用作对肺中的细胞或病原体水平采样的手段。
[0186] 如本文所用的术语“癌症”或“恶性肿瘤”是指其中异常细胞不受控制地分裂并可侵入附近组织的疾病。癌细胞也可通过血液和淋巴系统扩散至其他身体部位。
[0187] 如本文所用的术语“载体”和“药物载体”是指用于将一种或多种活性剂递送至受试者的药学上可接受的惰性剂或媒介物，并且通常被称为“赋形剂”。(药物)载体必须具有足够高的纯度和足够低的毒性，以使其适合施用至正被治疗的受试者。(药物)载体还应维持活性剂(例如所描述发明的多肽)的稳定性和生物利用度。(药物)载体可以是液体或固体，并且当与活性剂和给定组合物的其他组分组合时，参考计划的施用方式进行选择以提供所需的体积、稠度等。(药物)载体可以是但不限于，粘合剂(例如，预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素等)；填充剂(例如，乳糖和其他糖类、微晶纤维素、果胶、明胶、硫酸钙、乙基纤维素、聚丙烯酸酯、磷酸氢钙等)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石、二氧化硅、胶体二氧化硅、硬脂酸、金属硬脂酸盐、氢化植物油、玉米淀粉、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠等)；崩解剂(例如，淀粉、淀粉羟乙酸钠等)；或润湿剂(例如，月桂基硫酸钠等)。用于所描述的发明的组合物的其他合适的(药物)载体包括但不限于水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。用于胃肠外施用所描述的发明的多肽的组合物可包含(药物)载体，如无菌水溶液、常用溶剂如醇中的非水溶液、或多肽在液体油基中的溶液。
[0188] 术语“细胞”在本文中用于指活生物体的结构和功能单位，并且是被分类为活的生物体的最小单位。
[0189] 如本文所用的术语“细胞系”是指经历转化并可在培养中无限传代的永生化细胞。
[0190] 如本文所用的术语“细胞穿透肽”(也称为“CPP”、“蛋白质转导结构域”、“PTD”、“特洛伊肽”、“膜易位序列”和“细胞渗透性蛋白质”)是指通常能够穿透哺乳动物细胞的质膜的一类肽。它还涉及与肽YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)或其功能区段具有基本同一性的肽、肽区段、或其变体或衍生物，并且涉及功能上等效于SEQ ID NO：11的肽、肽区段、或其变体或衍生物。CPP通常长度为10-16个氨基酸，并且能够跨哺乳动物细胞转运多种类型和分子量的化合物。此类化合物包括但不限于效应分子，如蛋白质、DNA、缀合肽、寡核苷酸和小颗粒如脂质体。与其他蛋白质化学连接或融合的CPP(“融合蛋白”)仍然能够穿透质膜并进入细胞。
[0191] 如本文所用的术语“化学抗性”是指对多种结构和功能不同的药剂具有抗性的细胞表型的发展。肿瘤可在化学疗法之前具有内在抗性，或者在治疗期间可通过对化学疗法初始敏感的肿瘤来获得抗性。药物抗性是涉及多种相关或独立机制的多因素现象。所涉及机制的异质表达可表征相同类型的肿瘤或同一肿瘤的细胞，并且可至少部分地反映肿瘤进展。可促成细胞抗性的示例性机制包括：参与降低细胞内药物浓度的防御因子的表达增加；药物-靶标相互作用的改变；细胞反应的变化，特别是细胞修复DNA损伤或耐受应激条件的能力增加、以及细胞凋亡途径的缺陷。
[0192] 如本文所用的术语“化学敏感的”、“化学敏感性”或“化学敏感性肿瘤”是指对化学疗法或化学治疗剂有反应的肿瘤。化学敏感性肿瘤的特征包括但不限于肿瘤细胞群体的增殖减少、肿瘤大小减小、肿瘤负荷降低、肿瘤细胞死亡以及肿瘤细胞群体的进展减缓/受到抑制
[0193] 如本文所用的术语“化学治疗剂”是指适用于治疗或控制疾病的化学物质。
[0194] 如本文所用的术语“化学疗法”是指用一种或多种化学治疗剂治疗的过程。
[0195] 术语“化疗方案”(“组合化学疗法”)是指使用多于一种药物进行化学疗法以从多于一种药物的不同毒性中获益。组合癌症疗法的原理是不同的药物通过不同的细胞毒性机制起作用；由于它们具有不同的剂量限制性不良作用，因此它们可以全剂量一起给与。
[0196] 如本文所用的术语“病状”是指各种健康状态，并且意在包括由任何潜在机制、障碍或损伤引起的病症或疾病。
[0197] 如本文所用的术语“接触”及其所有语法形式是指触摸或直接或局部邻近的状态或条件。
[0198] 如本文所用的术语“控制释放”是指任何含药物的制剂，其中调控从制剂中释放药物的方式和概况。这是指立即释放和非立即释放制剂，其中非立即释放制剂包括但不限于持续释放和延迟释放制剂。
[0199] 术语“细胞因子”(其是指由对其他细胞具有多种作用的细胞分泌的可溶性小蛋白质物质)通常用于指许多信号传导分子，包括但不限于淋巴因子、白细胞介素和趋化因子。细胞因子介导许多重要的生理功能，包括生长、发育、伤口愈合和免疫应答。它们通过结合位于细胞膜(允许不同的信号转导级联从细胞中开始)中的其细胞特异性受体而起作用，这最终将导致靶细胞的生物化学和表型变化。一般来说，细胞因子可局部作用，但是已经发现一些具有全身免疫调节作用，具有多效自分泌、旁分泌和类似于激素的内分泌作用。它们包括I型细胞因子，其涵盖许多白介素以及几种造血生长因子；II型细胞因子，包括干扰素和白细胞介素-10；肿瘤坏死因子(“TNF”)相关分子，包括TNF-α和淋巴毒素；免疫球蛋白超家族成员，包括白细胞介素1(“IL-1”)；以及趋化因子，所述趋化因子是在各种免疫和炎症功能中起关键作用的分子家族。相同的细胞因子可取决于细胞的状态而对细胞具有不同的作用。细胞因子通常调控其他细胞因子的表达并触发其他细胞因子的级联。
[0200] 术语“延迟释放”在本文中以其常规意义用于指药物制剂，其中在施用制剂与从其释放药物之间存在时间延迟。“延迟释放”可能或可能不涉及在延长的时间段内逐渐释放药物，并且因此可能或可能不是“持续释放”。
[0201] 如本文所用的术语“衍生物”是指可在一个或多个步骤中由具有类似结构的另一种化合物产生的化合物。肽或化合物的“衍生物”或“多种衍生物”保留至少一定程度的所述肽或化合物的所需功能。因此，“衍生物”的替代术语可以是“功能衍生物”。衍生物可包括肽的化学修饰，如烷基化、酰化、氨甲酰化、碘化或衍生肽的任何修饰。此类衍生化分子包括例如，其中游离氨基已被衍生化以形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基、苄氧羰基、叔丁氧基羰基、氯乙酰基或缩甲醛基的那些分子。游离羧基可被衍生化以形成盐、酯、酰胺或酰肼。游离羟基可被衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。组氨酸的咪唑氮可被衍生化以形成N-im-苄基组氨酸。还包括为衍生物或类似物的是包含二十个标准氨基酸的一种或多种天然存在的氨基酸衍生物的那些肽，例如4-羟基脯氨酸、5-羟赖氨酸、3-甲基组氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸或羧基谷氨酸，并且可包括不通过肽键连接的氨基酸。此类肽衍生物可在肽合成期间并入，或者肽可通过熟知的化学修饰方法进行修饰(参见例如，Glazer等人，Chemical Modification of Proteins，Selected Methods and Analytical Procedures，Elsevier Biomedical Press，New York(1975))。
[0202] 如本文所用的术语“疾病”或“病症”是指健康受损或功能异常的状况而不管原因(是遗传、环境、饮食、感染、由于创伤还是其他原因)。
[0203] 如本文所用的术语“结构域”是指具有特征性三级结构和功能的蛋白质的区域，并且是指一起构成通过折叠其线性肽链而形成的其三级结构的蛋白质的任何三维亚基。如本文所用的术语“治疗结构域”(也称为“TD”)是指与肽KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)或其区段具有基本同一性的肽、肽区段、或其变体或衍生物。治疗结构域本身通常不能穿透哺乳动物细胞的质膜。一旦在细胞内部，治疗结构域可抑制特定组激酶的激酶活性。
[0204] 如本文所用的术语“干粉吸入器”或“DPI”是指类似于计量剂量吸入器的装置，但是其中药物呈粉末形式。患者呼出充分气息，将嘴唇放在喉舌周围，并且然后迅速吸入粉末。干粉吸入器不需要在计量剂量吸入器情况下所需的定时和协调。
[0205] 如本文所用的术语“有效量”是指实现所需生物作用所需或足够的量。
[0206] 如本文所用的术语“内源性”是指从内部生长或起源，或源自内在的。
[0207] 如本文所用的术语“内皮”是指内衬血管的内表面、从而在内腔中的循环血液与血管壁的剩余部分之间形成界面的细胞薄层。内皮细胞将内衬从心脏至最小毛细管的整个循环系统。这些细胞减少血液流动的湍流，从而允许流体被泵送更远。
[0208] 如本文所用的术语“嗜酸性粒细胞(eosinophils)”或“嗜酸性粒细胞(eosinophil granulocyte)”是指负责对抗多细胞寄生虫和脊椎动物中的某些感染的白细胞。它们是在迁移至血液中之前在骨髓中造血期间发育的粒细胞。与肥大细胞一起，它们也控制与过敏症和哮喘相关的机制。在活化后，嗜酸性粒细胞发挥各种功能，包括(1)阳离子颗粒蛋白质的产生及其通过脱粒释放，(2)活性氧物质如超氧化物、过氧化物和次溴酸盐(次溴酸，其优先通过嗜酸性粒细胞过氧化物酶产生)的产生，(3)脂质介质如来自白三烯和前列腺素家族的类二十烷酸的产生，(4)生长因子如转化生长因子(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)和血小板源性生长因子(PDGF)的产生，以及(5)细胞因子如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-13和TNF-α的产生。
[0209] 如本文所用的术语“上皮”是指由内衬整个身体的结构的空腔和表面的细胞组成的组织。上皮的基底表面位于结缔组织下方，并且所述两个层由基底膜分开。
[0210] 如本文所用的术语“外渗”是指血细胞组分从毛细血管移动至它们周围的组织(血细胞渗出)。在恶性癌症转移的情况下，它是指离开毛细血管并进入器官的癌细胞。
[0211] 如本文所用的术语“渗出”是指来自循环系统的流体穿过血管壁进入病灶或炎症区域的过程。血液渗出物含有一些或全部血浆蛋白质、白细胞、血小板和红细胞。
[0212] 术语“功能等效物”或“功能上等效的”在本文中可互换使用来指具有相似或相同作用或用途的物质、分子、多核苷酸、蛋白质、肽或多肽。功能上等效于多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽例如可具有与SEQ ID NO：1的表达多肽基本相似或相同的生物活性(例如抑制活性、动力学参数、盐抑制、辅因子依赖性活性和/或功能单位大小)。
[0213] 功能上等效于YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽的实例包括但不限于，具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)的多肽、具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)的多肽、具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)的多肽、具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)的多肽、以及具有氨基酸序列HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)的多肽。
[0214] 在本发明中描述的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)肽包括融合蛋白，其中细胞穿透肽(CPP；YARAAARQARA；SEQ ID NO：11)可操作地连接至治疗结构域(KALARQLGVAA；SEQ ID NO：2)以便增强治疗功效。
[0215] 功能上等效于多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的治疗结构域(TD；KALARQLGVAA；SEQ ID NO：2)的多肽的实例包括但不限于，具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽、具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽、和具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
[0216] 功能上等效于多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的细胞穿透肽(CPP；YARAAARQARA；SEQ ID NO：11)的多肽的实例包括但不限于，具有氨基酸序列
WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽、具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽、具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽、具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽、具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽、具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽、以及具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽、具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽、具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽、具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽、具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽、具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽、以及具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
[0217] 如本文所用的术语“融合蛋白”是指出于产生具有源自原始蛋白质或多肽中的每种的功能性质的单一多肽或蛋白质的目的，通过组合多个蛋白质结构域或多肽而构建的蛋白质或多肽。融合蛋白的产生可通过经由重组DNA技术可操作地连接或连接编码每个蛋白质结构域或多肽的两个不同的核苷酸序列、从而产生编码所需融合蛋白的新的多核苷酸序列来实现。或者，可通过化学连接所需的蛋白质结构域来产生融合蛋白。
[0218] 如本文所用的术语“生长”是指变得更大、更长或更多，或者大小、数量或体积增加的过程。
[0219] 如本文所用的术语“炎症”是指血管化组织通过其对损伤做出反应的生理过程。参见例如，FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY，第4版，William E.Paul，编辑Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia(1999)第1051-1053页，其以引用的方式并入本文。在炎症过程中，参与解毒和修复的细胞通过炎性介质动员至受损部位。炎症的特征通常在于炎症部位处白细胞，特别是嗜中性粒细胞(多形核细胞)的强烈浸润。这些细胞通过在血管壁处或在未受损组织中释放有毒物质来促进组织损伤。传统上，炎症已被分为急性反应和慢性反应。
[0220] 如本文所用的术语“急性炎症”是指对急性损伤的快速、短期(数分钟至数天)的相对均匀的反应，其特征在于流体、血浆蛋白质和嗜中性白细胞的积聚。引起急性炎症的有害物质的实例包括但不限于，病原体(例如，细菌、病毒、寄生虫)，来自外源性(例如，石棉)或内源性(例如，尿酸盐晶体、免疫复合物)来源的异物，以及物理(例如，烧伤)或化学(例如，腐蚀剂)物质。
[0221] 如本文所用的术语“慢性炎症”是指具有较长持续时间并具有模糊和不确定终止的炎症。当急性炎症通过初始炎性因子的不完全清除(例如，吸烟)或由于在同一位置发生的多个急性事件而持续存在时，慢性炎症取而代之。包括淋巴细胞和巨噬细胞的流入以及成纤维细胞生长的慢性炎症可导致长时间或反复炎症活动部位的组织瘢痕形成。
[0222] 如本文所用的术语“炎症介质”是指炎症和免疫过程的分子介质。这些可溶性、可扩散分子在组织损伤和感染部位以及更远的部位局部起作用。一些炎症介质通过炎症过程活化，而其他炎症介质响应于急性炎症或其他可溶性炎症介质而合成和/或从细胞来源释放；而其他介质表现出抗炎性质。炎症反应的炎症介质的实例包括但不限于，血浆蛋白酶、补体、激肽、凝血和纤维蛋白溶解蛋白、脂质介质、前列腺素、白三烯、血小板活化因子(PAF)、肽、激素(包括类固醇激素，如糖皮质激素)和胺类(包括但不限于组胺、血清素和神经肽)、以及促炎性细胞因子(包括但不限于白细胞介素-1-β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IF-γ)、白细胞介素-12(IL-12)和白细胞介素-17(IL-17))。
[0223] 在促炎性介质中，已知IL-1、IL-6和TNF-α在急性期反应中活化肝细胞以合成活化补体的急性期蛋白质。补体是与病原体相互作用以将它们标记用于被吞噬细胞破坏的血浆蛋白质系统。补体蛋白可被病原体直接活化，或通过病原体结合的抗体间接活化，从而导致在病原体表面上发生并产生具有各种效应功能的活性组分的反应级联。IL-1、IL-6和TNF-α还活化骨髓内皮以动员嗜中性粒细胞，并且充当内源性热原，从而升高体温，这有助于从身体消除感染。细胞因子的主要作用是作用于下丘脑，从而改变身体的温度调控；并且作用于肌肉和脂肪细胞，从而刺激肌肉和脂肪细胞的分解代谢以升高体温。在高温下，细菌和病毒复制减少，同时适应性免疫系统更有效地运作。
[0224] 如本文所用的术语“吸入”是指用呼吸吸入含有药物的蒸汽的行为。
[0225] 如本文所用的术语“吸入递送装置”是指从液体或干粉气雾剂制剂产生小液滴或气雾剂并且用于通过口施用以便实现例如呈溶液、粉末等形式的药物的肺部施用的机器/设备或部件。吸入递送装置的实例包括但不限于雾化器、计量剂量吸入器和干粉吸入器(DPI)。
[0226] 术语“抑制(inhibiting)”、“抑制(inhibit)”或“抑制(inhibition)”在本文中用于指减少过程的量或速率、完全停止所述过程或降低、限制或阻止其作用或功能。抑制可包括物质的量、速率、作用功能或过程减少或降低至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、或至少99％。
[0227] 如本文所用的术语“抑制剂”是指结合第一分子、从而降低第一分子活性的第二分子。酶抑制剂是与酶结合、从而降低酶活性的分子。抑制剂的结合可阻止底物进入酶的活性位点和/或阻碍所述酶催化其反应。抑制剂结合是可逆或不可逆的。不可逆的抑制剂通常与酶反应并且化学地改变所述酶，例如，通过修饰酶活性所需的关键氨基酸残基。相比之下，可逆的抑制剂非共价结合，并且取决于这些抑制剂是否与酶、酶-底物复合物或二者结合而产生不同类型的抑制作用。酶抑制剂通常通过其特异性和效力来评估。
[0228] 如本文所用的术语“损伤”是指由外部试剂或力(其可以是物理的或化学的)引起的对身体的结构或功能的损害或伤害。
[0229] 如本文所用的术语“吹入”是指在压力下将空气、气体或粉末递送至身体的空腔或腔室的行为。例如，鼻吹入涉及在压力下通过鼻递送空气、气体或粉末的行为。
[0230] 如本文所用的术语“白细胞介素(IL)”是指来自一类同源相关蛋白的细胞因子，所述蛋白质最早被观察到由白细胞分泌并作用于白细胞。自其之后已经发现白细胞介素由各种各样的体细胞产生。白细胞介素调控细胞生长、分化和运动性，并刺激免疫应答如炎症。白细胞介素的实例包括白介素-1(IL-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-12(IL-12)和白细胞介素-17(IL-17)。
[0231] 如本文所用的术语“侵入”或“侵入性”是指恶性细胞中包括穿透周围组织并移动通过周围组织的过程。
[0232] 术语“分离的”在本文中用于指诸如但不限于核酸、肽、多肽或蛋白质的物质，其(1)基本上或实质上不含如在其天然存在的环境中发现的通常与其伴随或与其相互作用的组分。术语“基本上不含”或“实质上不含”在本文中用于指相当或显著不含或超过约95％不含或超过约99％不含此类组分。分离的物质任选地包括在其自然环境中未发现与其一起的物质；或(2)如果物质处于其天然环境中，则所述物质已通过有意人为介入合成地(非天然地)改变为组合物和/或已被放置在细胞中的对于在所述环境中发现的物质不是天然的位置(例如，基因组或亚细胞器)处。产生合成物质的改变可在其天然状态内或从其天然状态移除时对所述物质进行。例如，如果天然存在的核酸被改变或者如果它通过在其所来源的细胞内进行的人为干预从已经改变的DNA转录，则所述天然存在的核酸变成分离的核酸。参见例如，Compounds and Methods for Site Directed Mutagenesis in Eukaryotic Cells，Kmiec，美国专利号5,565,350；In Vivo Homologous Sequence Targeting in Eukaryotic Cells；Zarling等人，PCT/US93/03868，其各自以引用的方式整体并入本文。同样地，如果天然存在的核酸(例如，启动子)通过非天然存在的方式被引入至对于所述核酸不是天然的基因组的基因座，则所述天然存在的核酸变得分离。如本文所定义的“分离”的核酸也被称为“异源”核酸。
[0233] 如本文所用的术语“卡普兰迈耶曲线”或“卡普兰迈耶存活曲线”是指当考虑许多小时间间隔中的时间时在给定时间长度内存活的临床研究受试者的概率的曲线。卡普兰迈耶曲线假定：(i)在任何时间，被删除(即，失去)的受试者与继续被追踪的受试者具有相同的存活前景；(ii)对于研究中早期和晚期招募的受试者，存活概率是相同的；以及(iii)事件(例如，死亡在指定的时间)发生。事件的发生概率在某个时间点计算，其中连续概率乘以任何较早计算的概率以得到最终估计。任何特定时间的存活概率被计算为存活的受试者的数量除以处于风险中的受试者的数量。已经死亡、退出或已从研究中删除的受试者不被计数为处于风险中。
[0234] 如本文所用的术语“激酶”是指将磷酸基团从高能供体分子转移至特定靶分子或底物的一种类型的酶。高能供体基团可包括但不限于ATP。
[0235] 如本文所用的术语“白细胞”或“白血细胞(WBC)”是指一种类型的免疫细胞。大多数白细胞在骨髓中制成，并且在血液和淋巴组织中发现。白细胞有助于身体对抗感染和其他疾病。粒细胞、单核细胞和淋巴细胞是白细胞。
[0236] 如本文所用，术语“长期”释放是指治疗水平的活性成分递送至少7天，并且可能达约30至约60天。通常使用诸如“长效”、“持续释放”或“控制释放”的术语来描述例如像在本领域中用于向受试者实现生物活性剂的长期或延长的释放或生物利用度的制剂、剂型、装置或其他类型的技术；它可指向总体循环或受试者或受试者中的局部作用部位(包括(但不限于)细胞、组织、器官、关节、区域等)提供生物活性剂的长期或延长的释放或生物利用度的技术。此外，这些术语可指用于拉长或延长生物活性剂从制剂或剂型的释放的技术，或者它们可指用于延长或拉长生物活性剂至受试者的生物利用度或药物动力学或作用的持续时间的技术，或者它们可指用于延长或拉长由制剂引发的药效动力学作用的技术。“长效制剂”、“持续释放制剂”或“控制释放制剂”(等)是用于向受试者提供生物活性剂的长效释放的药物制剂、剂型或其他技术。
[0237] 术语“肺间质(lung interstitium)”或“肺间质(pulmonary interstitium)”在本文中可互换使用来指位于肺中的空腔上皮与胸膜间皮之间的区域。基质蛋白、胶原和弹性蛋白的纤维是肺间质的主要组分。这些纤维的主要功能是形成在通气期间维持结构完整性的机械支架。
[0238] 如本文所用的术语“淋巴细胞”是指在防御身体抵抗疾病中起重要作用的小白血细胞(白细胞)。存在两种主要类型的淋巴细胞：B细胞和T细胞。B细胞产生攻击细菌和毒素的抗体，而在T细胞已经被病毒取而代之或已经变得癌性时，T细胞本身会攻击体细胞。淋巴细胞分泌调节许多其他类型的细胞的功能活性的产物(淋巴因子)，并且通常存在于慢性炎症部位。
[0239] 如本文所用的术语“巨噬细胞”是指围绕并杀灭微生物、除去死细胞并刺激其他免疫系统细胞的作用的一种类型的白细胞。在消化病原体之后，巨噬细胞向相应的辅助T细胞呈递病原体的抗原(一种分子，最通常是在病原体的表面上发现的由免疫系统用于鉴别的蛋白质)。通过将其整合至细胞膜中并将其显示连接至MHC II类分子来进行呈递，尽管在其表面上具有抗原，但是向其他白细胞表明巨噬细胞不是病原体。最终，抗原呈递导致连接至病原体的抗原的抗体的产生，从而使得它们更容易使巨噬细胞与其细胞膜和吞噬细胞粘附。
[0240] 术语“标志物”和“细胞表面标志物”在本文中可互换使用来指受体、受体的组合或在细胞表面上发现的抗原决定簇或表位，所述标志物允许一种细胞类型与其他种类的细胞区分开。具有选择性地结合或粘附至其他信号传导分子的能力的特化蛋白质受体(标志物)覆盖身体中每个细胞的表面。细胞使用这些受体和结合它们的分子作为与其他细胞通信并在体内执行其正常功能的方式。细胞分选技术是基于细胞生物标志物，其中细胞表面标志物可用于阳性选择或阴性选择，即用于包含或排除细胞群体。
[0241] 如本文所用的术语“最大耐受剂量”是指药物的不会产生不可接受的毒性的最高剂量。
[0242] 如本文所用的术语“中值存活期”是指在其之后50％的患有特定病状的个体仍然存活50％并且50％已经死亡的时间。例如，6个月的中值存活期表示在6个月后，50％的非小细胞肺癌患者将会活着，并且50％的人将会逝世。中值存活期通常用于描述当平均存活率相对较短(如对于肺癌而言)时病状的预后(即，存活的机会)。当对药物或治疗进行评估以确定药物或治疗是否将延长寿命时，中值存活期也用于临床研究中。
[0243] 如本文所用的术语“间充质细胞”或“间质”是指源自所有三个胚层的细胞，所述细胞可发育成结缔组织、骨、软骨、淋巴系统和循环系统。
[0244] 如本文所用的术语“计量剂量吸入器”、“MDI”或“吹入器”是指使用推进剂来将特定量的药物(“计量剂量”)递送至患者肺部的加压的手持式装置。如本文所用的术语“推进剂”是指用于通常通过气体压力通过会聚、扩散喷嘴排出物质的材料。压力可来自压缩气体或通过化学反应产生的气体。排气材料可以是气体、液体、等离子体，或在化学反应之前可以是固体、液体或凝胶。用于加压计量剂量吸入器的推进剂是液化气体，传统上是氯氟烃(CFC)，并且越来越多的是氢氟烷烃(HFA)。合适的推进剂包括例如，氯氟烃(CFC)，如三氯氟甲烷(也称为推进剂11)、二氯二氟甲烷(也称为推进剂12)和1，2-二氯-1，1，2，2-四氟乙烷(也称为推进剂114)；氢氯氟烃；氢氟烃(HFC)，如1，1，1，2-四氟乙烷(也称为推进剂134a，HFC-134a或HFA-134a)和1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(也称为推进剂227，HFC-227或HFA-227)；二氧化碳；二甲醚；丁烷；丙烷，或其混合物。在其他实施方案中，推进剂包括氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃或其混合物。在其他实施方案中，使用氢氟烃作为推进剂。在其他实施方案中，使用HFC-227和/或HFC-134a作为推进剂。
[0245] 如本文所用的术语“迁移”是指细胞群体从一个地方移动至另一个地方。
[0246] 如本文所用的术语“MK2激酶”或“MK2”是指有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(也称为“MAPKAPK2”、“MAPKAP-K2”、“MK2”)，其是丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶家族的成员。
[0247] 如本文所用的术语“调节”是指调控、改变、适应或调节至某一量度或比例。
[0248] 如本文所用的术语“单核细胞”是指在骨髓中制成并行进穿过血液至身体中它变成巨噬细胞的组织的一种类型的免疫细胞。单核细胞是一种类型的白细胞和一种类型的吞噬细胞。
[0249] 如本文所用的术语“雾化器”是指用于以吸入肺部的雾的形式施用液体药物的装置。
[0250] 如本文所用的术语“嗜中性粒细胞”或“多形核嗜中性粒细胞(PMN)”是指哺乳动物中最丰富类型的白细胞，其形成先天性免疫系统的重要部分。它们与嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞一起形成多形核细胞家族(PMN)的一部分。嗜中性粒细胞通常在血流中发现。在炎症的起始(急性)期，特别是由于细菌感染和一些癌症，嗜中性粒细胞是炎性细胞向炎症部位迁移的首要反应者之一。它们在称为趋化性的过程中按照化学信号如白细胞介素-8(IL-8)和C5a迁移通过血管，然后通过间质组织，趋化性是游动细胞或部分沿着化学浓度梯度朝向它认为有吸引力环境条件和/或远离其发现排斥的周围环境的定向运动。
[0251] 如本文所用的术语“非小细胞肺癌”是指针对癌症中发现的细胞种类以及通过显微镜观察到的细胞的样子而命名的一组肺癌。它是最常见的肺癌类型。非小细胞肺癌的三种主要类型是鳞状细胞癌、大细胞癌和腺癌。如本文所用的术语“鳞状细胞癌”是指在鳞状细胞中开始的非小细胞肺癌，其是在形成呼吸道的内衬的组织中发现的薄的扁平细胞。鳞状细胞癌在肺的靠近支气管的中心中发现。术语“大细胞癌”是指在通过显微镜观察时细胞是大的并且看起来异常的肺癌。大细胞癌可发生在肺的任何部位，并且倾向于比其他两种类型更快生长和扩散。如本文所用的术语“腺癌”是指在腺(分泌)细胞中开始的癌症；腺癌在肺的外部区域中发现。如本文所用的术语“原位腺癌”是指在腺组织中发现异常细胞的病状，其可能变成癌症并扩散至附近的正常组织。
[0252] 如本文所用的术语“正常健康对照受试者”是指没有气道或肺组织疾病的症状或其他临床证据的受试者。
[0253] 术语“核酸”在本文用于指处于单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并且除非另外限制，否则涵盖具有天然核苷酸的基本性质的已知类似物，因为所述类似物以与天然存在的核苷酸相似的方式杂交至单链核酸(例如肽核酸)。
[0254] 术语“核苷酸”在本文中用于指由杂环碱基、糖和一个或多个磷酸基组成的化学化合物。在最常见的核苷酸中，碱基是嘌呤或嘧啶的衍生物，并且糖是戊糖脱氧核糖或核糖。核苷酸是核酸的单体，其中三个或更多个键合在一起以便形成核酸。核苷酸是RNA、DNA和几种辅因子的结构单元，所述辅因子包括但不限于CoA、FAD、DMN、NAD和NADP。嘌呤包括腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)；嘧啶包括胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)。
[0255] 在本文中使用以下术语来描述两个或更多个核酸或多核苷酸之间的序列关系：(a)“参考序列”，(b)“比较窗”，(c)“序列同一性”，(d)“序列同一性百分比”，以及(e)“基本同一性”。
[0256] (a)术语“参考序列”是指用作序列比较的基础的序列。参考序列可以是指定序列的子集或全部；例如，作为全长cDNA或基因序列的区段，或完整cDNA或基因序列。
[0257] (b)术语“比较窗”是指多核苷酸序列的连续且指定的区段，其中可将所述多核苷酸序列与参考序列进行比较，并且其中为了两个序列的最佳比对，所述多核苷酸序列的在比较窗中的部分相较于所述参考序列(其不包含添加或缺失)可包含添加或缺失(即，空位)。一般来说，比较窗的长度是至少20个连续的核苷酸，并且任选地可以是长度为至少30个连续核苷酸、长度为至少40个连续核苷酸、长度为至少50个连续核苷酸、长度为至少100个连续核苷酸或更长。本领域的技术人员应了解，为了避免由于在多核苷酸序列中包含空位而导致与参考序列的高相似性，通常引入空位罚分并将其从匹配数目中扣除。
[0258] 用于比较的序列比对的方法是本领域中熟知的。用于比较的序列的最佳比对可通过以下来进行：Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2：482(1981)的局部同源性算法；Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：443(1970)的同源性比对算法；Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.85：2444(1988)的相似性搜索法；这些算法的计算机实施，包括但不限于Intelligenetics，Mountain View，Calif.的PC/基因程序中的CLUSTAL；威斯康辛遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group(GCG)，
575Science Dr.，Madison，Wis.，USA；CLUSTAL程序由Higgins和Sharp，Gene 73：237-244(1988)；Higgins和Sharp，CABIOS 5：151-153(1989)；Corpet，等人，Nucleic Acids Research 16：10881-90(1988)；Huang，等人，Computer Applications in the Biosciences，8：155-65(1992)以及Pearson，等人，Methods in Molecular Biology，24：
307-331(1994)充分描述。可用于数据库相似性搜索的BLAST程序家族包括：用于核苷酸查询序列对核苷酸数据库序列的BLASTN；用于核苷酸查询序列对蛋白质数据库序列的BLASTX；用于蛋白质查询序列对蛋白质数据库序列的BLASTP；用于蛋白质查询序列对核苷酸数据库序列的TBLASTN；以及用于核苷酸查询序列对核苷酸数据库序列的TBLASTX。参见Current Protocols in Molecular Biology，第19章，Ausubel等人编著，Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York(1995)。
575Science Dr.，Madison，Wis.，USA；CLUSTAL程序由Higgins和Sharp，Gene 73：237-244(1988)；Higgins和Sharp，CABIOS 5：151-153(1989)；Corpet，等人，Nucleic Acids Research 16：10881-90(1988)；Huang，等人，Computer Applications in the Biosciences，8：155-65(1992)以及Pearson，等人，Methods in Molecular Biology，24：
307-331(1994)充分描述。可用于数据库相似性搜索的BLAST程序家族包括：用于核苷酸查询序列对核苷酸数据库序列的BLASTN；用于核苷酸查询序列对蛋白质数据库序列的BLASTX；用于蛋白质查询序列对蛋白质数据库序列的BLASTP；用于蛋白质查询序列对核苷酸数据库序列的TBLASTN；以及用于核苷酸查询序列对核苷酸数据库序列的TBLASTX。参见Current Protocols in Molecular Biology，第19章，Ausubel等人编著，Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York(1995)。
[0259] 除非另外说明，否则本文提供的序列同一性/相似性值是指使用BLAST 2.0程序包、使用默认参数所获得的值。Altschul等人，Nucleic Acids Res.25：3389-3402(1997)。用于执行BLAST分析的软件可例如通过国家生物技术信息中心公开获得。这种算法包括首先通过鉴定查询序列中长度为W的短字来鉴定高评分序列对(HSP)，所述短字在与数据库序列中具有相同长度的字比对时匹配或满足某些正值的阈值分数T。T被称为邻近字分数阈值(Altschul等人，同上)。这些初始邻域字命中作为种子启动搜索，用以寻找含有它们的较长HSP。只要累积比对分数可增加，那么字命中则在两个方向上沿每个序列延伸。对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励分数；总是＞0)和N(错配残基的罚分；总是＜0)来计算累积分数。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积分数。当：累积的比对分数从它的最大达到值降低了数量X；由于累积一个或多个负得分的残基比对使累积分数趋于0或0以下；或者到达任一序列的末端时，停止这些字命中在每个方向上的延伸。BLAST算法的参数W、T、以及X决定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对核苷酸序列来说)使用字长(W)为11、期望值(E)为10、截止值(cutoff)为100、M＝5、N＝-4、以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用字长(W)为3、期望值(E)为10、以及BLOSUM62评分矩阵作为默认值(参见Henikoff&Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915)。
[0260] 除计算序列同一性百分比之外，BLAST算法还进行两个序列之间的相似性统计分析(参见，例如，Karlin&Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5787(1993))。由BLAST算法提供的相似性的一种量度是最小总和概率(P(N))，其提供两个核苷酸序列或氨基酸序列之间的将偶然发生匹配的概率的指示。BLAST搜索假定蛋白质可被建模为随机序列。然而，许多实际蛋白质包括非随机序列区，它们可以是同聚序列段(homopolymeric tract)、短周期重复序列或富含一种或多种氨基酸的区域。此类低复杂性区域可在不相关的蛋白质之间比对，即使蛋白质的其他区域完全不同。许多低复杂性过滤程序可用来减少此类低复杂性比对。例如，可单独或组合使用SEG(Wooten和Federhen，Comput.Chem.，17：149-163(1993))以及XNU(Claverie和States，Comput.Chem.，17：191-201(1993))低复杂性过滤。
[0261] (c)在两个核酸或多肽序列的背景下，术语“序列同一性”或“同一性”在本文用于指当在指定比较窗上进行比对以获得最大对应时，两个序列中相同的残基。当关于蛋白质使用序列同一性百分比时，应认识到不相同的残基位置通常因保守氨基酸取代而不同，即其中氨基酸残基被具有相似化学特性(例如，电荷或疏水性)的其他氨基酸残基取代，且因此不改变分子的功能特性。当序列在保守取代方面不同时，可向上调整序列同一性百分比以校正取代的保守性质。因这类保守取代而不同的序列被称为具有“序列相似性”或“相似性”。用于做出这种调整的方法是本领域的技术人员熟知的。通常这涉及将保守取代评分为部分而不是完全错配，从而提高序列同一性百分比。因此，例如，在相同氨基酸被给予分数1并且非保守性取代被给予分数零的情况下，保守性取代被给与零与1之间的分数。例如根据Meyers和Miller，Computer Applic.Biol.Sci.，4：11-17(1988)的算法来计算保守性取代的评分，例如，如在程序PC/GENE(Intelligenetics，Mountain View，Calif.，USA)中所实施的。
[0262] (d)术语“序列同一性百分比”在本文中用于指通过在比较窗上比较两个最佳比对的序列所确定的值，其中比较窗中的多核苷酸序列的部分可相较于参考序列(其不包含添加或缺失)包含添加或缺失(即空位)以用于两个序列的最佳比对。通过如下方法计算该百分比：确定两个序列中的相同核酸碱基或氨基酸残基所在的位置数以产生匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗中的总位置数并且将结果乘以100而产生序列一致性百分比。
[0263] (e)术语多核苷酸序列的“基本同一性”是指使用所描述的比对程序中的一种并使用标准参数，多核苷酸包含与参考序列相比具有至少70％序列同一性、至少80％序列同一性、至少90％序列同一性和至少95％序列同一性的序列。本领域的技术人员将认识到，可通过考虑密码子简并性、氨基酸相似性、阅读框定位等适当地调整这些值，以便确定由两个核苷酸序列编码的蛋白质的相应同一性。出于这些目的，氨基酸序列的基本同一性通常是指至少60％或至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的序列同一性。核苷酸序列基本上相同的另一个指示是两个分子在严格条件下是否彼此杂交。然而，如果它们编码的多肽基本上相同，则在严格条件下不能彼此杂交的核酸仍然是基本上相同的。例如，当使用遗传密码允许的最大密码子简并性而生成核酸的拷贝时，可发生这种情况。两个核酸序列基本上相同的一个指示是，第一核酸所编码的多肽与由第二核酸编码的多肽发生免疫交叉反应。
[0264] 如本文所用的短语“可操作地连接”是指这样的键联，其中两个或更多个蛋白质结构域或多肽经由重组DNA技术或化学反应连接或组合，以使得所得到的融合蛋白的每个蛋白质结构域或多肽保留其原始功能。例如，通过将细胞穿透肽(SEQ ID NO：11)与治疗结构域(SEQ ID NO：2)可操作地连接来构建SEQ ID NO：1，从而产生具有SEQ ID NO：11的细胞穿透功能和SEQ ID NO：2的激酶抑制剂功能的融合肽。
[0265] 如本文所用的术语“结果”是指可测量的具体结果或作用。结果的非限制性实例包括疼痛减轻、肿瘤大小减小和疾病改善。
[0266] 如本文所用的术语“总体存活”或“OS”是指从疾病如癌症的诊断日期或治疗开始，被诊断患有所述疾病的患者仍然存活的时间长度。
[0267] 如本文所用的术语“实质”是指构成与结缔组织或血管形成对比的器官的主要部分的动物组织。术语“实质的”是指涉及器官的实质。
[0268] 如本文所用的术语“胃肠外”是指通过注射引入体内(即，通过注射施用)，包括例如皮下(即，皮肤下注射)、肌内(即，注射至肌肉中)、静脉内(即，注射至静脉中)、鞘内(即，注射至脊髓周围的空间中或脑的蛛网膜下)、胸骨内注射或输注技术，并且包括腹膜内注射或输注至体腔(例如腹膜)中。胃肠外施用的组合物使用针，例如外科手术针或其他身体进入装置进行递送。如本文所用的术语“外科手术针”是指适于将流体(即，能够流动)组合物递送至选定解剖结构中的任何进入装置。可注射制剂，如无菌可注射水性或油性混悬液可根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。
[0269] 如本文所用的术语“微粒”是指悬浮在气体或液体中的固体或液体物质的细颗粒。
[0270] 如本文所用的术语“颗粒”是指如本文所述的组合物包含于其中或其上的极小成分(例如，飞颗粒(femoparticule)(10-15m)、皮颗粒(10-12)、纳米颗粒(10-9m)、微颗粒(10-6m)、毫米颗粒(10-3m))。颗粒可具有任何级数的释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放等，以及其任何组合。除治疗剂外，颗粒还可包含药学和药物领域中常规使用的那些材料中的任一种，包括但不限于可侵蚀的、不可侵蚀的、可生物降解的或不可生物降解的材料或其组合。
[0271] 如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指通常可用于施用其中本发明的分离多肽将保持稳定和生物可利用的药物的任何基本上无毒的载体。药学上可接受的载体必须具有足够高的纯度和足够低的毒性，以使其适合施用至所治疗的哺乳动物。它还应该维持活性剂的稳定性和生物利用度。药学上可接受的载体可以是液体或固体，并且当与活性剂和给定组合物的其他组分组合时，参考计划的施用方式进行选择以提供所需的体积、稠度等。
[0272] 术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断的范围内，适合用于与人和低等动物的组织接触而无不适当的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。
[0273] 术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用来指氨基酸残基的聚合物。此术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学类似物；以及天然存在的氨基酸聚合物。天然存在的氨基酸的此类类似物的基本性质是，当并入蛋白质种时，所述蛋白质对针对相同蛋白质引发的但完全由天然存在的氨基酸组成的抗体具有特异性反应性。
[0274] 术语“多肽”和“蛋白质”也在本文中以其最广泛的意义来指亚单位氨基酸、氨基酸类似物或肽模拟物的序列。亚单位通过肽键连接，除非另有说明。本文所述的多肽可化学合成或重组表达。所描述发明的多肽也可化学合成。使用熟知的固相、液相技术或肽缩合技术或其任何组合制备的合成多肽可包含天然氨基酸和非天然氨基酸。用于肽合成的氨基酸可以是标准Boc(N-α-氨基保护的N-α-叔丁氧基羰基)氨基酸树脂，使用Merrifield(1963，J.Am.Chem.Soc.85：2149-2154)的原始固相程序的标准脱保护、中和、偶联和洗涤方案，或Carpino和Han(1972，J.Org.Chem.37：3403-3409)首先描述的碱不稳定的N-α-氨基保护的9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)氨基酸。Fmoc和Boc N-α-氨基保护的氨基酸两者均可从Sigma，Cambridge Research Biochemical或本领域的技术人员熟悉的其他化学公司获得。此外，多肽可用本领域的技术人员熟悉的其他N-α-保护基团合成。固相肽合成可通过本领域的技术人员熟悉的技术来完成，并且例如提供在Stewart和Young，1984，Solid Phase Synthesis，第二版，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill.；Fields和Noble，1990，Int.J.Pept.Protein Res.35：161-214中，或使用自动合成仪来完成。本发明的多肽可包含D-氨基酸(其在体内对L-氨基酸特异性蛋白酶具有抗性)、D-和L-氨基酸的组合以及各种“设计”氨基酸(例如，β-甲基氨基酸、C-α-甲基氨基酸和N-α-甲基氨基酸等)，以赋予特定性质。合成氨基酸包括鸟氨酸取代赖氨酸，以及正亮氨酸取代亮氨酸或异亮氨酸。此外，多肽可具有拟肽键，如酯键，以制备具有新型性质的肽。例如，可产生并入还原肽键的肽，即R1-CH2-NH-R2，其中R1和R2是氨基酸残基或序列。还原的肽键可作为二肽亚单元被引入。这种多肽对蛋白酶活性将具有抗性，并且将在体内具有延长的半衰期。因此，这些术语还适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学类似物；以及天然存在的氨基酸聚合物。天然存在的氨基酸的此类类似物的基本性质是，当并入蛋白质种时，所述蛋白质对针对相同蛋白质引发的但完全由天然存在的氨基酸组成的抗体具有特异性反应性。
[0275] 术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”还包括修饰，包括但不限于糖基化、脂质连接、硫酸化、谷氨酸残基的γ-羧化、羟基化和ADP-核糖基化。众所周知且如上所述，将认识到多肽可能不是完全线性的。例如，多肽可由于泛素化而是支链的，并且它们可以是环状的，有或无支化(通常是由于翻译后事件)，包括天然加工事件和由人工操作引起的不是天然发生的事件。环状、支链和支链环状多肽也可通过非翻译天然过程和完全合成方法合成。在一些实施方案中，肽具有任何长度或大小。
[0276] 术语“原发性肿瘤”或“原发性癌症”可互换使用来指体内的原始或第一肿瘤。来自原发性癌症的癌细胞可扩散至身体的其他部位并形成新的或继发性肿瘤。这被称为转移。继发性肿瘤与原发性癌症是相同类型的癌症。
[0277] 如本文所用的术语“酶原(proenzyme/zymogen)”是指无活性的酶前体。酶原需要生物化学变化(如揭示活性位点的水解反应，或改变构型以揭示活性位点)来使其成为活性酶。生物化学变化通常发生在溶酶体中，其中前体酶的特定部分被裂解以使其活化。在活化后释放的氨基酸链被称为活化肽。
[0278] 如本文所用的术语“进展”是指当疾病(如癌症)变得恶化或者在体内扩散时的过程。
[0279] 如本文所用的术语“无进展生存期”或PFS是指在疾病(如癌症)的治疗期间和之后患者伴随所述疾病生活但所述疾病不会恶化的时间长度。
[0280] 如本文所用的术语“增殖”是指通过将单细胞连续分裂成相同的子代细胞来扩增细胞群体。
[0281] 如本文所用的术语“肺间质”是指肺的气囊周围的组织和空间。
[0282] 如本文所用的术语“肺泡”是指具有中空空腔形式的解剖结构。肺泡位于肺的呼吸区，在肺泡管和心房的远端终止处，从而形成呼吸道的终点。肺泡是与血液交换气体的呼吸部位的球形露出，并且仅在哺乳动物肺中发现。肺泡膜是气体交换表面。血液从身体的其余部分携带二氧化碳以释放到肺泡中，并且肺泡中的氧被肺泡血管中的血液吸收以被运送至体内的所有细胞。肺泡含有一些胶原和弹性纤维。在吸气时弹性纤维允许肺泡在充满空气时伸展。弹性纤维然后在呼气时回弹以便排出富含二氧化碳的空气。在肺泡壁中存在三种主要的肺泡细胞类型，(1)形成肺泡壁的结构的鳞状肺泡细胞，(2)分泌肺表面活性剂以降低水的表面张力并允许膜分离、从而增加交换气体的能力的大肺泡细胞，(3)破坏外来病原体如细菌的巨噬细胞。
[0283] 如本文所用的术语“复发性癌症”或“复发”通常在不能检测到癌症的时间段之后复发(回来)。癌症可回到与原始(原发性)肿瘤相同的位置或回到身体中的另一位置。
[0284] 如本文所用的术语“减少(reduce)”或“减少(reducing)”是指处于发展病症风险的个体的病症的度、强度、程度、大小、量、密度、数量或发生的减少、降低、减弱、限制或消除。
[0285] 如本文所用的术语“难治性”是指对治疗无反应的癌症。
[0287] 如本文所用的术语实体肿瘤中的反应评估标准(或“RECIST”)是指用于测量癌症患者对治疗的反应程度的标准方式。它是基于肿瘤是缩小、保持不变还是变大。为了使用RECIST，必须存在可在x射线、CT扫描或MRI扫描中测量的至少一种肿瘤。患者可具有的反应的类型是完全反应(CR)、部分反应(PR)、进行性疾病(PD)和稳定疾病(SD)。
[0288] 如本文所用的术语“体征”是指在体检期间或从实验室检查发现的显示患者可能患有病状或疾病的某物。
[0289] 术语“相似”可与术语类似、可比较或像互换使用，意指具有共同性状或特征。
[0290] 如本文所用的术语“溶液”是指两种或更多种物质的均匀混合物。其通常但不一定是液体。在溶液中，溶质(或溶解的物质)的分子均匀地分布在溶剂的那些分子中。
[0291] 术语“可溶的”和“溶解度”是指易于溶解在特定流体(溶剂)中的性质。术语“不溶的”是指材料的在特定溶剂中具有最小或有限溶解度的性质。在溶液中，溶质(或溶解的物质)的分子均匀地分布在溶剂的那些分子中。
[0292] 如本文所用的术语“应力纤维”是指细胞中由肌动蛋白丝、交联蛋白质(将两个或更多个细丝结合在一起的蛋白质)和肌球蛋白II马达组成的高阶结构。肌动蛋白是一种球状蛋白(约43kDa)，其聚合并形成有序的细丝结构，所述结构具有彼此缠绕的两个原丝，以形成还称为“微丝”的单一“肌动蛋白丝”。应力纤维中的肌球蛋白马达移动，肌动蛋白丝滑过彼此，因此所述纤维可收缩。为了收缩以产生力，纤维必须锚定至某物。应力纤维可锚定至细胞膜，并且经常发生这种锚定的位点也连接至细胞外部的结构(基质或一些其他基底)。这些连接部位被称为粘着斑。许多蛋白质需要适当的粘着斑产生和维持。抵靠这些固定的外部基底的收缩是允许由肌球蛋白马达产生的力和细丝生长以及重排移动并重塑细胞的收缩。
[0293] 术语“受试者”或“个体”或“患者”可互换使用来指哺乳动物来源的动物物种的成员，包括但不限于小鼠、大鼠、猫、山羊、绵羊、马、仓鼠、雪貂、鸭嘴兽、猪、狗、豚鼠、兔和灵长类动物，例如像猴、猿或人。
[0294] 如本文所用的短语“需要这种治疗的受试者”是指患有疾病、病症、病状或病理过程的患者。在一些实施方案中，术语“需要这种治疗的受试者”也用于指(i)将被施用本发明的至少一种多肽的患者；(ii)正在接受本发明的至少一种多肽的患者；或(iii)已经接受本发明的至少一种多肽的患者，除非短语的上下文和使用另外指示。
[0295] 如本文所用的术语“基本抑制”、“基本上抑制”等是指抑制至少50％、抑制至少55％、抑制至少60％、抑制至少65％、抑制至少70％、抑制至少75％、抑制至少80％、抑制至少85％、抑制至少90％、抑制至少95％或抑制至少99％。
[0296] 术语“取代”在本文中用于指将DNA序列中的一个或多个碱基交换为另外一个或多个碱基的情况。取代可以是同义取代或非同义取代。如本文所用，“同义取代”是指一个碱基被编码蛋白质的基因的外显子中的另一个碱基取代，以使得产生的氨基酸序列不被修饰。如本文所用的术语“非同义取代”是指一个碱基被编码蛋白质的基因的外显子中的另一个碱基取代，以使得产生的氨基酸序列被修饰。
[0297] 如本文所用的术语“存活率”是指在疾病(例如癌症)下存活特定时间量的个体的百分比。例如，如果特定癌症的5年存活率是34％，则这意味着最初被诊断患有所述癌症的100个体中有34人将在5年后仍然存活。
[0298] 如本文所用的术语“混悬液”是指分散体(混合物)，其中细碎物质与另一种物质组合，其中前者被如此精细分散和混合以使得其不会迅速沉降。在日常生活中，最常见的混悬液是液体中的固体的混悬液。
[0299] 术语“持续释放”(也称为“延长释放”)在本文中以其常规意义用于指在延长的时间段内提供药物的逐渐释放并且可在延长的时间段内产生药物的基本恒定水平的药物制剂。
[0300] 如本文所用的术语“症状”是指体征或疾病或病状。术语“症状管理”、“姑息治疗”和“支持治疗”在本文中可互换使用来指所给予来改善患有严重或危及生命的疾病的患者的生活质量(QOL)的治疗。
[0301] 术语活性剂的“治疗量”、“有效量”或“药学有效量”可互换使用来指足以提供预期治疗益处的量。例如，所描述发明的激酶抑制组合物的“治疗量”包括但不限于足以减少癌细胞增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导癌细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性或其组合的量。所述术语还涵盖足以抑制或减轻非小细胞肺癌患者的至少一种症状的量，其中所述症状包括但不限于，胸痛、咳嗽、咳血、疲劳、食欲不振、未经过努力的体重减轻、呼吸浅短、气喘、反复感染如支气管炎和肺炎、骨痛(例如，在背部或臀部中)、神经系统变化(例如，头痛、手臂或腿部的虚弱或麻木、眩晕、平衡问题、癫痫)、皮肤和眼睛泛黄(即，黄疸)、身体表面附近的肿块、同一眼睛中具有较小瞳孔的一只眼睑下垂或无力和面部同侧上出汗减少或不出汗(霍纳综合征)、面部、颈部、手臂和上胸部肿胀(常伴有蓝红色皮肤颜色(上腔静脉综合征))、肾脏保留水分从而导致疲劳、食欲不振、肌肉无力、痉挛、恶心、呕吐、烦躁不安和混乱(不适当抗利尿激素综合征)、肾上腺分泌皮质醇从而导致体重增加、容易瘀伤乏力、嗜睡和液体潴留(库欣综合征)、臀部周围肌肉无力(Lanbert-Eaton综合征)、手臂和腿部运动的平衡丧失和不稳定(副肿瘤性小脑变性)、高血钙水平(高钙血症)、某些骨骼(例如指尖骨)的过度生长、血凝块、以及男性中的过度乳房生长(男子女性型乳房)。
[0302] 可根据所描述的发明使用的活性剂的有效量通常在通常约0.001mg/kg体重至约10g/kg体重的范围内。然而，剂量水平是基于各种因素，包括损伤的类型，患者的年龄、体重、性别、医学病状、病状的严重程度、施用途径和频率、以及所使用的特定活性剂。因此，剂量方案可广泛变化，但可由医师使用标准方法常规确定。
[0303] 术语“治疗(treat)”或“治疗(treating)”包括消除、基本上抑制、减缓或逆转疾病、病状或病症的进展，基本上改善病状的临床或美学症状，基本上预防出现疾病、病状或病症的临床或美学症状，以及防止有害或烦人的症状。治疗进一步是指实现以下中的一项或多项：(a)降低病症的严重程度；(b)限制所治疗病症所特有的症状的发展；(c)限制所治疗病症所特有的症状的恶化；(d)限制先前患有病症的患者的病症的复发；以及(e)限制先前无病症症状的患者的症状复发。
[0304] 如本文所用的术语“肿瘤”是指涉及数量或大小方面的异常细胞生长(增殖)的具有侵入或扩散至身体其他部位(转移)的潜力的疾病。
[0305] 术语“肿瘤负荷(tumor burden)”或“肿瘤负荷(tumor load)”在本文中可互换地用于指癌细胞的数量、肿瘤的大小或体内癌症的量。
[0306] 如本文所用的术语“肿瘤坏死因子”是指由白血细胞响应于抗原或感染而产生的细胞因子，其诱导肿瘤细胞的坏死(死亡)并具有广泛的促炎作用。肿瘤坏死因子也是多功能细胞因子，其对脂质代谢、凝血、胰岛素抗性以及内衬血管的内皮细胞的功能具有作用。
[0307] 术语“变体”、“突变体”和“衍生物”在本文中用于指与参考核苷酸或多肽序列具有基本同一性的核苷酸或多肽序列。序列中的差异可以是序列或结构中天然或设计的变化的结果。在特定核酸序列的正常复制或天然复制过程期间可发生自然变化。设计的变化可出于特定目的专门设计并引入序列中。可使用各种诱变技术在体外进行此类具体改变。特异性产生的这类序列变体可被称为原始序列的“突变体”或“衍生物”。
[0308] 技术人员同样可产生具有单个或多个氨基酸取代、缺失、添加或置换但在功能上等效于SEQ ID NO：1的多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽变体。这些变体可尤其包括：(a)其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸取代的变体；(b)其中添加一个或多个氨基酸的变体；(c)其中至少一个氨基酸包含取代基的变体；(d)其中来自一种物种的氨基酸残基在保守或非保守位置上被另一物种中的相应残基取代的变体；以及(d)其中靶蛋白与另一个肽或多肽如融合配偶体、蛋白质标签或其他化学部分融合的变体，其可赋予靶蛋白有用的性质，例如抗体的表位。用于获得此类变体的包括但不限于遗传(抑制、缺失、突变等)、化学和酶技术的技术是本领域的技术人员已知的。如本文所用，术语“突变”是指生物体的基因或染色体内的DNA序列的变化，所述变化导致产生在亲本类型中未发现的新特征或性状，或这种变化通过编码基因的DNA的核苷酸序列的改变或通过染色体的物理排列的变化在染色体中发生的过程。三种突变机制包括取代(一个碱基对交换为另一个碱基对)、添加(将一个或多个碱基插入序列)和缺失(丢失一个或多个碱基对)。
[0309] 如本文所用的术语“媒介物”是指促进与其混合的药物或其他材料的使用的物质。
[0310] I.组合物：用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的体征或症状的治疗性肽
[0311] 根据一个方面，所描述的发明提供一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌(NSCLC)实体肿瘤的药物组合物，
[0312] 其中所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，并且其中所述治疗量可有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自表1中所列的组的激酶的激酶活性并减少癌细胞增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性或其组合。
[0313] 根据一个实施方案，肿瘤是原发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是继发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是复发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是化学疗法难治的肿瘤。
[0314] 根据一些实施方案，原发性肿瘤是鳞状细胞癌、腺癌或大细胞癌。
[0315] 根据一些实施方案，继发性肿瘤或转移部位是肺组织、肾上腺组织、骨组织、肝组织或脑组织中的一种或多种。
[0316] 根据一些实施方案，癌细胞死亡可包括但不限于细胞凋亡。
[0317] 根据一些实施方案，体内MMI抑制剂的抑制概况取决于剂量、施用途径以及对抑制剂有反应的细胞类型。
[0318] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制所述激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制所述激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制所述激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制所述激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制所述激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制所述激酶的至少95％的激酶活性。
[0319] 根据一些实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2激酶)的激酶活性。根据一些其他实施方案，所述药物组合物抑制MK2激酶的至少50％的激酶活性。根据一些其他实施方案，所述药物组合物抑制MK2激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK2激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK2激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK2激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK2激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK2激酶的至少95％的激酶活性。
[0320] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3激酶)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制MK3激酶的至少95％的激酶活性。
[0321] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物进一步抑制Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少95％的激酶活性。
[0322] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物进一步抑制BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物进一步抑制BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物进一步抑制BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物进一步抑制BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少75％的激酶活性。
[0323] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的激酶活性。
[0324] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性。
[0325] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0326] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性，有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0327] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0328] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性。
[0329] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性。
[0330] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。
[0331] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0332] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性。
[0333] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。
[0334] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0335] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性，有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0336] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制至少一种选自MK2、MK3、CaMKI、TrkB的组的激酶的激酶活性，而不基本上抑制一种或多种来自本文表1中所列的剩余组的其他选定激酶的活性。
[0337] 根据一些实施方案，体内MMI抑制剂的抑制概况取决于剂量、施用途径以及对抑制剂有反应的细胞类型。
[0338] 根据此类实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于50％的激酶活性。根据这种实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于40％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于20％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于15％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于10％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于5％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的激酶活性。
[0339] 根据前一段落的实施方案，所述一种或多种未被基本上抑制的其他选定激酶是选自以下的组的激酶：Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII，包括其亚基CaMKIIδ)、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PIM-1)、细胞肉瘤(c-SRC)、脾酪氨酸激酶(SYK)、C-src酪氨酸激酶(CSK)以及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)。
[0340] 根据一些实施方案，所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。
[0341] 根据一些此类实施方案，另外的治疗剂是化学治疗剂。化学治疗剂的实例包括但不限于，Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、二马来酸阿法替尼、爱宁达(培美曲塞二钠)、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、色瑞替尼、顺铂、克唑替尼、Cyramza(雷莫芦单抗)、多西他赛、盐酸埃罗替尼、Folex PFS(甲氨蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(二马来酸阿法替尼)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸氮芥、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、Mustargen(盐酸氮芥)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、铂尔定(卡铂)、培美曲塞二钠、顺氯氨铂(顺铂)、顺氯氨铂-AQ(顺铂)、雷莫芦单抗、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、紫杉酚(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、酒石酸长春瑞滨、赛可瑞(克唑替尼)、Zykadia(色瑞替尼)、卡铂-紫杉酚以及吉西他滨-顺铂。
[0342] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是镇痛剂。根据一些实施方案，镇痛剂通过提高疼痛阈值来缓解疼痛，而不会干扰意识或改变其他感觉模式。根据一些此类实施方案，镇痛剂是非阿片类镇痛药。“非阿片类镇痛药”是减轻疼痛但不是阿片类镇痛药的天然或合成物质。非阿片类镇痛药的实例包括但不限于依托度酸、吲哚美辛、舒林酸、托美丁、萘丁美酮、吡罗昔康、醋氨酚、非诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、萘普生钠、奥沙普秦、阿司匹林、三水杨酸胆碱镁、二氟尼柳、甲氯芬那酸、甲芬那酸和保泰松。根据一些其他实施方案，镇痛药是阿片类镇痛药。“阿片类镇痛药”、“阿片类药物”或“麻醉性镇痛药”是与中枢神经系统中的阿片受体结合、从而产生激动剂作用的天然或合成物质。阿片类镇痛药的实例包括但不限于可待因、芬太尼、氢吗啡酮、左啡诺、哌替啶、美沙酮、吗啡、羟考酮、羟吗啡酮、丙氧芬、丁丙诺啡、布托啡诺、地佐辛、纳布啡和喷他佐辛。
[0343] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是抗感染剂。根据另一个实施方案，抗感染剂是抗生素剂。如本文所用的术语“抗生素剂”是指主要用于治疗感染性疾病的具有抑制细菌和其他微生物的生长或破坏细菌和其他微生物的能力的一组化学物质中的任一种。抗生素剂的实例包括但不限于，青霉素G；甲氧西林；萘夫西林；苯唑西林；氯唑西林；双氯西林；氨苄西林；阿莫西林；替卡西林；羧苄西林；美洛西林；阿洛西林；哌拉西林；亚胺培南；氨曲南；头孢噻吩；头孢克洛；头孢西丁；头孢呋辛；头孢尼西；头孢美唑；头孢替坦；头孢丙烯；氯碳头孢；头孢他美；头孢哌酮；头孢噻肟；头孢唑肟；头孢曲松钠；头孢他啶；头孢吡肟；头孢克肟；头孢泊肟；头孢磺啶；氟罗沙星；萘啶酸；诺氟沙星；环丙沙星；氧氟沙星；依诺沙星；洛美沙星；西诺沙星；多西环素；米诺环素；四环素；阿米卡星；庆大霉素；卡那霉素；奈替米星；妥布霉素；链霉素；阿奇霉素；克拉霉素；红霉素；依托红霉素；琥乙红霉素；葡庚糖酸红霉素；
乳糖酸红霉素；硬脂酸红霉素；万古霉素；替考拉宁；氯霉素；克林霉素；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲噁唑；呋喃妥因；利福平；莫匹罗星；甲硝唑；头孢氨苄；罗红霉素；阿莫西林克拉维酸组合物(Co-amoxiclavuanate)；哌拉西林与他唑巴坦的组合；以及其各种盐、酸、碱和其他衍生物。抗菌抗生素剂包括但不限于青霉素类、头孢菌素类、碳头孢烯类、头霉素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、糖肽类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类。
乳糖酸红霉素；硬脂酸红霉素；万古霉素；替考拉宁；氯霉素；克林霉素；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲噁唑；呋喃妥因；利福平；莫匹罗星；甲硝唑；头孢氨苄；罗红霉素；阿莫西林克拉维酸组合物(Co-amoxiclavuanate)；哌拉西林与他唑巴坦的组合；以及其各种盐、酸、碱和其他衍生物。抗菌抗生素剂包括但不限于青霉素类、头孢菌素类、碳头孢烯类、头霉素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、糖肽类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类。
[0344] 根据一些其他实施方案，另外的治疗剂包括支气管扩张剂，包括但不限于白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、β2-激动剂或其组合。
[0345] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包含皮质类固醇，包括但不限于泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松或其组合。
[0346] 根据一些其他实施方案，另外的治疗剂包括支气管扩张剂，包括但不限于白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、β2-激动剂或其组合。
[0347] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括皮质类固醇，包括但不限于泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松或其组合。
[0348] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是抗炎剂。
[0349] 根据另一个实施方案，抗炎剂是非类固醇抗炎剂。也可使用非类固醇抗炎剂的混合物。
[0350] 根据另一个实施方案，非类固醇抗炎剂包括转化生长因子-β3(TGF-β3)、抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)剂或其组合。
[0351] 根据另一个实施方案，抗炎剂是类固醇抗炎剂。根据另一个实施方案，类固醇抗炎剂包括至少一种选自由以下组成的组的皮质类固醇：泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松以及其组合。
[0352] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括甲基黄嘌呤。
[0353] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂。
[0354] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是至少一种嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，包括但不限于ICI 200355、ONO-5046、MR-889、L-694，458、CE-1037、GW-311616、TEI-8362、ONO-6818、AE-3763、FK-706、ICI-200，880、ZD-0892、ZD-8321以及其组合。
[0355] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括至少一种磷酸二酯酶抑制剂，包括但不限于磷酸二酯酶4抑制剂。磷酸二酯酶4抑制剂的实例包括但不限于，罗氟司特、西洛司特或其组合。
[0356] 根据一些实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有基本序列同一性。
[0357] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少70％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少80％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少90％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％序列同一性。
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％序列同一性。
[0358] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)。
[0359] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)。
[0360] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。
[0361] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。
[0362] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
[0363] 根据一些其他实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽具有氨基酸序列YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)，并且所述第二多肽包含序列与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有基本同一性的治疗结构域。
[0364] 根据一些此类实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少70％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少80％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少90％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少95％序列同一性。
[0365] 根据一些实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽。
[0366] 根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽。
[0367] 根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
[0368] 根据一些其他实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽包含功能上等效于YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)的细胞穿透肽，并且所述第二多肽具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)。
[0369] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽。根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽。
根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。
根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。
根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
[0370] 根据另一个方面，所描述的发明还提供一种分离的核酸，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少70％氨基酸序列同一性的蛋白 质序 列。根据 一 些实 施方 案 ，所 述分 离的 核 酸 编码 与氨 基酸 序 列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少80％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。根据一些其他实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少90％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。根据一些其他实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。
[0371] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.00001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.0001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.01mg/kg体重至约
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.1mg/kg(或100μg/kg)体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约1mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约10mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约2mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约3mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约4mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约5mg/kg体重至约
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约60mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约70mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约80mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约90mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约90mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
80mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约70mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约60mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约50mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
40mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约30mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约20mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.01mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.0001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.00001mg/kg体重的量。
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.1mg/kg(或100μg/kg)体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约1mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约10mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约2mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约3mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约4mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约5mg/kg体重至约
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约60mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约70mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约80mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约90mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约90mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
80mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约70mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约60mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约50mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
40mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约30mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约20mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.01mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.0001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.00001mg/kg体重的量。
[0372] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至25μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至2μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在2μg/kg/天至3μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在3μg/kg/天至4μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在4μg/kg/天至5μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在5μg/kg/天至6μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在6μg/kg/天至7μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在7μg/kg/天至8μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在8μg/kg/天至9μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在9μg/kg/天至10μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至5μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在5μg/kg/天至10μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在10μg/kg/天至15μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在15μg/kg/天至20μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在25μg/kg/天至30μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在30μg/kg/天至35μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在35μg/kg/天至40μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在40μg/kg/天至45μg/kg/天的范围内。
根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在45μg/kg/天至50μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在50μg/kg/天至55μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在55μg/kg/天至60μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在60μg/kg/天至65μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在65μg/kg/天至70μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在70μg/kg/天至75μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在80μg/kg/天至
85μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在85μg/kg/天至90μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在90μg/kg/天至95μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在95μg/kg/天至100μg/kg/天的范围内。
根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在45μg/kg/天至50μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在50μg/kg/天至55μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在55μg/kg/天至60μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在60μg/kg/天至65μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在65μg/kg/天至70μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在70μg/kg/天至75μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在80μg/kg/天至
85μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在85μg/kg/天至90μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在90μg/kg/天至95μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在95μg/kg/天至100μg/kg/天的范围内。
[0373] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是1μg/kg/天。
[0374] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是2μg/kg/天。
[0375] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是5μg/kg/天。
[0376] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是10μg/kg/天。
[0377] 根据一些实施方案，本发明的多肽包含D-氨基酸(其在体内对L-氨基酸特异性蛋白酶具有抗性)、D-和L-氨基酸的组合以及各种“设计”氨基酸(例如，β-甲基氨基酸、C-α-甲基氨基酸和N-α-甲基氨基酸等)，以赋予特定性质。合成氨基酸取代的实例包括鸟氨酸取代赖氨酸，以及正亮氨酸取代亮氨酸或异亮氨酸。
[0378] 根据一些实施方案，多肽可连接至其他化合物以促进体内半衰期增加，如聚乙二醇或葡聚糖。如本领域的技术人员所理解的，此类键联可以是共价的或非共价的。根据一些其他实施方案，多肽可包封在胶束中，如由聚(乙二醇)-嵌段-聚(聚丙二醇)或聚(乙二醇)-嵌段-聚丙交酯制成的胶束。根据一些其他实施方案，多肽可包封在由可降解聚酯组成的可降解纳米颗粒或微颗粒中，所述聚酯包括但不限于聚乳酸、聚乙交酯和聚己酸内酯。
[0379] 根据另一个实施方案，多肽可以固体形式(包括颗粒剂、粉末或栓剂)或以液体形式(例如，溶液、混悬液或乳液)制备。
[0380] 根据另一个实施方案，所描述发明的组合物可呈用于通过吸入或吹入(分别通过口或通过鼻)递送的可分散干粉的形式。干粉组合物可通过本领域中已知的方法如冷冻干燥和喷射研磨来制备，如国际专利公布号WO 91/16038中所公开，以及如美国专利号6,921,527中所公开，其公开内容以引用的方式并入。将所描述发明的组合物以足以向受试者提供单位剂量治疗的量置于合适的剂量容器内。剂量容器是安装在合适的吸入装置内以允许干粉组合物通过分散至气流中雾化以形成气雾剂且然后将如此产生的气雾剂捕获在连接有口腔件的腔室中以用于由需要治疗的受试者随后吸入的一种剂量容器。这种剂量容器包括封闭本领域中已知的组合物的任何容器(如明胶或塑料胶囊)，其具有允许将气流(例如空气)引导至容器中以分散干粉组合物的可移除部分。此类容器由在美国专利号4,227,522；
美国专利号4,192,309；以及美国专利号4,105,027中所示的那些例示。合适的容器还包括与Glaxo的 Rotohaler品牌粉末吸入器或Fison的 品牌粉末吸入器
结合使用的那些容器。提供优异防潮层的另一种合适的单位剂量容器由铝箔层压塑料形成。将基于药物的粉末按重量计或按体积计填充至可成形箔中的凹部中并用覆盖箔-层压塑料气密密封。用于与粉末吸入装置一起使用的这种容器在美国专利号4,778,054中进行了描述，并且与Glaxo的 一起使用(美国专利号4,627,432；4,811,731；以及5,
035,237)。所有这些参考文献以引用的方式整体并入本文。
美国专利号4,192,309；以及美国专利号4,105,027中所示的那些例示。合适的容器还包括与Glaxo的 Rotohaler品牌粉末吸入器或Fison的 品牌粉末吸入器
结合使用的那些容器。提供优异防潮层的另一种合适的单位剂量容器由铝箔层压塑料形成。将基于药物的粉末按重量计或按体积计填充至可成形箔中的凹部中并用覆盖箔-层压塑料气密密封。用于与粉末吸入装置一起使用的这种容器在美国专利号4,778,054中进行了描述，并且与Glaxo的 一起使用(美国专利号4,627,432；4,811,731；以及5,
035,237)。所有这些参考文献以引用的方式整体并入本文。
[0381] 根据另一个实施方案，所描述发明的组合物的载体包括释放剂，如持续释放或延迟释放载体。在此类实施方案中，载体可以是能够持续或延迟释放多肽以提供更有效的施用，例如产生多肽的较不频繁和/或减少的剂量、提高处理简易性以及延长或延迟对所治疗、预防或促进的疾病、病症、病状、综合征等的作用的任何物质。此类载体的非限制性实例包括天然和合成聚合物的脂质体、微海绵、微球或微胶囊等。脂质体可由各种磷脂形成，所述磷脂包括但不限于胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
[0382] 用于合成和制备小肽的方法是本领域中熟知的，并且例如在美国专利号5,352,461；5,503,852；6,071,497；6,331,318；6,428,771和美国公布号20060040953中公开。美国专利号6,444,226和6,652,885描述了在水性混悬液中制备和提供二酮哌嗪的微颗粒，向所述混悬液中加入活性剂的溶液以使活性剂与颗粒结合。这些专利进一步描述了通过冷冻干燥除去液体介质以产生包含活性剂的微颗粒的方法。改变这种混悬液的溶剂条件以促进活性剂与颗粒的结合公开于美国申请号60/717,524；11/532,063；和11/532,065；美国专利号
6,440,463；以及美国申请号11/210,709和11/208,087中。这些专利和专利申请中的每一个以引用的方式并入本文。
6,440,463；以及美国申请号11/210,709和11/208,087中。这些专利和专利申请中的每一个以引用的方式并入本文。
[0383] 根据一些实施方案，可通过如在例如美国申请号11/678,046(以引用的方式并入本文)中公开的喷雾干燥的方法来干燥本发明的MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)及其功能等效物。
[0384] 根据另一个实施方案，本发明的多肽可以各种溶液应用。合适的制剂是无菌的，溶解足够量的多肽，并且对所提出的应用无害。例如，所描述发明的组合物可被配制为水性混悬液，其中活性成分与适于制造水性混悬液的赋形剂混合。
[0385] 此类赋形剂包括但不限于，助悬剂(例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶以及阿拉伯树胶)；分散剂或润湿剂，包括天然存在的磷脂(例如，卵磷脂)，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七元环氧乙基十六醇)，或环氧乙烷与源于脂肪酸和己糖醇的部分酯的缩合产物(如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与源于脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的缩合产物(例如，聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。
[0386] 所描述发明的组合物还可通过将活性成分悬浮在植物油(例如，花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中或矿物油(例如，液体石蜡)中来配制为油性混悬液。油性混悬液可含有增稠剂(例如，蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇)。
[0387] 所描述发明的组合物还可配制成适于通过加入水制备水性混悬液的可分散粉末和颗粒的形式。此类粉末和颗粒中的活性成分与分散剂或润湿剂、助悬剂以及一种或多种防腐剂混合提供。合适的分散剂或润湿剂和助悬剂通过上文已经提及的那些例示。还可存在另外的赋形剂。
[0388] 根据一些实施方案，干粉通过喷雾干燥方法产生。
[0389] 根据一些其他实施方案，干粉通过微粉化产生
[0391] 根据另一个实施方案，干粉包含具有约2微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。
[0392] 根据另一个实施方案，药物组合物被包装在吸入装置中，所述吸入装置包括，例如但不限于雾化器、计量剂量吸入器(MDI)和干粉吸入器(DPI)。
[0393] 根据一些其他实施方案，药物组合物是用于使用雾化器进行雾化递送的液体。根据一些此类实施方案，药物组合物的流速是至少0.3ml/分钟，并且药物组合物作为2mm颗粒递送，分布至最深的肺泡中。
[0394] 所描述发明的组合物也可呈乳液形式。乳液是通过组合两种不混溶的液体载体制备的两相系统，其中一种液体载体在另一种液体载体中均匀分布，并且由直径等于或大于最大胶体颗粒的直径的小球组成。小球大小是关键的并且必须使得系统达到最大稳定性。通常，除非并入第三种物质(乳化剂)，否则将不会发生两相的分离。因此，基础乳液含有至少三种组分，两种不混溶的液体载体和乳化剂，以及活性成分。大多数乳液将水相并入非水相中(或反之亦然)。然而，有可能制备基本上非水性的乳液，例如非水性不混溶系统甘油和橄榄油的阴离子型和阳离子型表面活性剂。因此，本发明的组合物可呈水包油乳液的形式。
油相可以是植物油(例如，橄榄油或花生油)或矿物油(例如，液体石蜡)或其混合物。适合的乳化剂可以是例如，天然存在的树胶，如阿拉伯树胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂以及源自脂肪酸和己糖醇酐的酯类或偏酯(例如，脱水山梨糖醇单油酸酯)；以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。
油相可以是植物油(例如，橄榄油或花生油)或矿物油(例如，液体石蜡)或其混合物。适合的乳化剂可以是例如，天然存在的树胶，如阿拉伯树胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂以及源自脂肪酸和己糖醇酐的酯类或偏酯(例如，脱水山梨糖醇单油酸酯)；以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。
[0395] 所描述发明的组合物也可与或不与甘露醇一起配制。
[0396] 根据一些实施方案，所描述发明的多肽是化学合成的。使用熟知的固相、液相技术或肽缩合技术或其任何组合制备的这种合成多肽可包含天然氨基酸和非天然氨基酸。用于肽合成的氨基酸可以是标准Boc(N-α-氨基保护的N-α-叔丁氧基羰基)氨基酸树脂，使用Merrifield(1963，J.Am.Chem.Soc.85：2149-2154)的原始固相程序的标准脱保护、中和、偶联和洗涤方案，或Carpino和Han(1972，J.Org.Chem.37：3403-3409)首先描述的碱不稳定的N-α-氨基保护的9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)氨基酸。Fmoc和Boc N-α-氨基保护的氨基酸两者均可从Sigma，Cambridge Research Biochemical或本领域的技术人员熟悉的其他化学公司获得。此外，多肽可用本领域的技术人员熟悉的其他N-α-保护基团合成。固相肽合成可通过本领域的技术人员熟悉的技术来完成，并且例如提供在Stewart和Young，1984，Solid Phase Synthesis，第二版，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill.；Fields和Noble，1990，Int.J.Pept.Protein Res.35：161-214中，或使用自动合成仪来完成，所述文献各自以引用的方式整体并入本文。
[0397] II.用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的方法
[0398] 根据另一方面，所描述的发明提供一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌实体肿瘤的方法，所述方法包括：
[0399] 向受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，
[0400] 其中治疗量有效抑制所述肿瘤细胞群体的激酶活性、减少所述肿瘤细胞群体的增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡或其组合。
[0401] 根据一些实施方案，治疗量可有效减缓包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌实体肿瘤的进展。
[0402] 根据一个实施方案，肿瘤是原发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是继发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是复发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是化学疗法难治的肿瘤。
[0403] 根据一些实施方案，原发性肿瘤是鳞状细胞癌、腺癌或大细胞癌。
[0404] 根据一些实施方案，继发性肿瘤或转移部位是肺组织、肾上腺组织、骨组织、肝组织或脑组织中的一种或多种。
[0405] 根据一些实施方案，癌细胞死亡可包括但不限于细胞凋亡。
[0406] 根据一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2激酶)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少95％的激酶活性。
[0407] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3激酶)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少95％的激酶活性。
[0408] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少95％的激酶活性。
[0409] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0410] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少75％的激酶活性。
[0411] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的激酶活性。
[0412] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性。
[0413] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0414] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性，有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0415] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0416] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性。
[0417] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性。
[0418] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。
[0419] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0420] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性。
[0421] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。
[0422] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0423] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性，有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0424] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的至少一种选自MK2、MK3、CaMKI、TrkB的组的激酶的激酶活性，而不基本上抑制所述肿瘤细胞群体中的一种或多种来自本文表1中所列的剩余组的其他选定激酶的活性。
[0425] 根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自本文表1中所列的组的激酶的激酶活性。
[0426] 根据另一个实施方案，这种抑制可例如有效减少所述肿瘤细胞群体的增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡或其组合。
[0427] 根据另一个实施方案，所述方法可有效减缓包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌实体肿瘤的进展。
[0428] 根据另一个实施方案，肿瘤细胞死亡可包括但不限于细胞凋亡。
[0429] 根据一些实施方案，体内MMI抑制剂的抑制概况取决于剂量、施用途径以及对抑制剂有反应的细胞类型。
[0430] 根据此类实施方案，所述方法有效抑制其他选定激酶的少于50％的激酶活性。根据此类实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶的少于65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶的少于50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶的少于40％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶的少于20％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶的少于15％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶的少于10％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效抑制所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶的少于5％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述方法有效增加所述肿瘤细胞群体中的其他选定激酶中的一种或多种的激酶活性。根据前一段落的实施方案，所述未被基本上抑制的其他选定激酶中的一种或多种选自以下的组：Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII，包括其亚基CaMKII6)、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PIM-1)、细胞肉瘤(c-SRC)、脾酪氨酸激酶(SYK)、C-src酪氨酸激酶(CSK)以及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)。
[0431] 根据一些实施方案，所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。
[0432] 根据一些此类实施方案，另外的治疗剂是化学治疗剂。化学治疗剂的实例包括但不限于，Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、二马来酸阿法替尼、爱宁达(培美曲塞二钠)、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、色瑞替尼、顺铂、克唑替尼、Cyramza(雷莫芦单抗)、多西他赛、盐酸埃罗替尼、Folex PFS(甲氨蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(二马来酸阿法替尼)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸氮芥、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、Mustargen(盐酸氮芥)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、铂尔定(卡铂)、培美曲塞二钠、顺氯氨铂(顺铂)、顺氯氨铂-AQ(顺铂)、雷莫芦单抗、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、紫杉酚(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、酒石酸长春瑞滨、赛可瑞(克唑替尼)、Zykadia(色瑞替尼)、卡铂-紫杉酚以及吉西他滨-顺铂。
[0433] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是镇痛剂。根据一些实施方案，镇痛剂通过提高疼痛阈值来缓解疼痛，而不会干扰意识或改变其他感觉模式。根据一些此类实施方案，镇痛剂是非阿片类镇痛药。“非阿片类镇痛药”是减轻疼痛但不是阿片类镇痛药的天然或合成物质。非阿片类镇痛药的实例包括但不限于依托度酸、吲哚美辛、舒林酸、托美丁、萘丁美酮、吡罗昔康、醋氨酚、非诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、萘普生钠、奥沙普秦、阿司匹林、三水杨酸胆碱镁、二氟尼柳、甲氯芬那酸、甲芬那酸和保泰松。根据一些其他实施方案，镇痛药是阿片类镇痛药。“阿片类镇痛药”、“阿片类药物”或“麻醉性镇痛药”是与中枢神经系统中的阿片受体结合、从而产生激动剂作用的天然或合成物质。阿片类镇痛药的实例包括但不限于可待因、芬太尼、氢吗啡酮、左啡诺、哌替啶、美沙酮、吗啡、羟考酮、羟吗啡酮、丙氧芬、丁丙诺啡、布托啡诺、地佐辛、纳布啡和喷他佐辛。
[0434] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是抗感染剂。根据另一个实施方案，抗感染剂是抗生素剂。如本文所用的术语“抗生素剂”是指主要用于治疗感染性疾病的具有抑制细菌和其他微生物的生长或破坏细菌和其他微生物的能力的一组化学物质中的任一种。抗生素剂的实例包括但不限于，青霉素G；甲氧西林；萘夫西林；苯唑西林；氯唑西林；双氯西林；氨苄西林；阿莫西林；替卡西林；羧苄西林；美洛西林；阿洛西林；哌拉西林；亚胺培南；氨曲南；头孢噻吩；头孢克洛；头孢西丁；头孢呋辛；头孢尼西；头孢美唑；头孢替坦；头孢丙烯；氯碳头孢；头孢他美；头孢哌酮；头孢噻肟；头孢唑肟；头孢曲松钠；头孢他啶；头孢吡肟；头孢克肟；头孢泊肟；头孢磺啶；氟罗沙星；萘啶酸；诺氟沙星；环丙沙星；氧氟沙星；依诺沙星；洛美沙星；西诺沙星；多西环素；米诺环素；四环素；阿米卡星；庆大霉素；卡那霉素；奈替米星；妥布霉素；链霉素；阿奇霉素；克拉霉素；红霉素；依托红霉素；琥乙红霉素；葡庚糖酸红霉素；
乳糖酸红霉素；硬脂酸红霉素；万古霉素；替考拉宁；氯霉素；克林霉素；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲噁唑；呋喃妥因；利福平；莫匹罗星；甲硝唑；头孢氨苄；罗红霉素；阿莫西林克拉维酸组合物(Co-amoxiclavuanate)；哌拉西林与他唑巴坦的组合；以及其各种盐、酸、碱和其他衍生物。抗菌抗生素剂包括但不限于青霉素类、头孢菌素类、碳头孢烯类、头霉素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、糖肽类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类。
乳糖酸红霉素；硬脂酸红霉素；万古霉素；替考拉宁；氯霉素；克林霉素；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲噁唑；呋喃妥因；利福平；莫匹罗星；甲硝唑；头孢氨苄；罗红霉素；阿莫西林克拉维酸组合物(Co-amoxiclavuanate)；哌拉西林与他唑巴坦的组合；以及其各种盐、酸、碱和其他衍生物。抗菌抗生素剂包括但不限于青霉素类、头孢菌素类、碳头孢烯类、头霉素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、糖肽类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类。
[0435] 根据一些其他实施方案，另外的治疗剂包括支气管扩张剂，包括但不限于白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、β2-激动剂或其组合。
[0436] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括皮质类固醇，包括但不限于泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松或其组合。
[0437] 根据一些其他实施方案，另外的治疗剂包括支气管扩张剂，包括但不限于白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、β2-激动剂或其组合。
[0438] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括皮质类固醇，包括但不限于泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松或其组合。
[0439] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是抗炎剂。
[0440] 根据另一个实施方案，抗炎剂是非类固醇抗炎剂。也可使用非类固醇抗炎剂的混合物，以及这些药剂的皮肤病学上可接受的盐和酯。例如，依托芬那酯(一种氟芬那酸衍生物)对于局部应用特别有用。
[0441] 根据另一个实施方案，其中非类固醇抗炎剂包括转化生长因子-β3(TGF-β3)、抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)剂或其组合。
[0442] 根据另一个实施方案，抗炎剂是类固醇抗炎剂。根据另一个实施方案，类固醇抗炎剂包括至少一种选自由以下组成的组的皮质类固醇：泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松以及其组合。
[0443] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括甲基黄嘌呤。
[0444] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂。
[0445] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是至少一种嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，包括但不限于ICI 200355、ONO-5046、MR-889、L-694，458、CE-1037、GW-311616、TEI-8362、ONO-6818、AE-3763、FK-706、ICI-200，880、ZD-0892、ZD-8321以及其组合。
[0446] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括至少一种磷酸二酯酶抑制剂，包括但不限于磷酸二酯酶4抑制剂。磷酸二酯酶4抑制剂的实例包括但不限于，罗氟司特、西洛司特或其组合。
[0447] 根据一些实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有基本序列同一性。
[0448] 根据一些此类实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少70％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少80％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少90％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％序列同一性。
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％序列同一性。
[0449] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)。
[0450] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)。
[0451] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。
[0452] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。
[0453] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
[0454] 根据一些其他实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽具有氨基酸序列YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)，并且所述第二多肽包含序列与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有基本同一性的治疗结构域。
[0455] 根据另一个实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少70％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少80％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少90％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少95％序列同一性。
[0456] 根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽。
[0457] 根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽。
[0458] 根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
[0459] 根据一些实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽包含功能上等效于YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)的细胞穿透肽，并且所述第二多肽具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)，并且所述药物组合物抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性。
[0460] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽。
[0461] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽。
[0462] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽。
[0463] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽。
[0464] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽。根据一些此类实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。根据一些此类实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
[0465] 根据另一个方面，所描述的发明还提供一种分离的核酸，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少70％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。
[0466] 根 据一些 此类 实施 方案 ，所 述分离 的核 酸编 码与 氨基 酸序 列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少80％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。根据一些其他实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少90％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。根据一些其他实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。
[0467] 根据另一个实施方案，施用步骤通过肺部递送发生。根据一些实施方案，施用步骤可经口服、经颊、胃肠外、局部、通过吸入、通过吹入或经直肠全身进行，或可通过诸如但不限于注射、植入、移植、局部应用或胃肠外的方式局部进行。另外的施用可例如静脉内、经粘膜、经皮、肌肉内、皮下、气管内(包括通过肺部吸入)、腹膜内、鞘内、淋巴内、病灶内或硬膜外进行。施用可例如作为单独的单位剂量或以包含多个单位剂量的多种药物和/或物质的治疗方案的形式一次、多次和/或在一个或多个延长的时间段内进行。
[0468] 根据一些其他实施方案，施用步骤作为单剂量一次发生。根据一些其他实施方案，在一段时间内作为多个剂量进行施用步骤。根据一些此类实施方案，所述时间段是一天、一周、一个月、一个月、一年或其倍数。根据一些实施方案，施用步骤每天进行持续至少一周的时期。根据一些实施方案，施用步骤每周进行持续至少一个月的时期。根据一些实施方案，施用步骤每月进行持续至少两个月的时期。根据另一个实施方案，施用步骤在至少一年的时期内重复进行。根据另一个实施方案，施用步骤至少每月一次进行。根据另一个实施方案，施用步骤至少每周一次进行。根据另一个实施方案，施用步骤至少每天一次进行。
[0469] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗量经由吸入装置施用。可用于施用药物组合物的吸入装置的实例包括但不限于雾化器、计量剂量吸入器(MDI)、干粉吸入器(DPI)和干粉雾化器。
[0470] 根据另一个实施方案，干粉包含具有1至5微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。根据另一个实施方案，干粉包含具有约2微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。
[0471] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.00001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.0001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.01mg/kg体重至约
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.1mg/kg(或100μg/kg)体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约1mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约10mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约2mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约3mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约4mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约5mg/kg体重至约
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约60mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约70mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约80mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约90mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约90mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
80mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约70mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约60mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约50mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
40mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约30mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约20mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.01mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.0001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.00001mg/kg体重的量。
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.1mg/kg(或100μg/kg)体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约1mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约10mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约2mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约3mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约4mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约5mg/kg体重至约
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约60mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约70mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约80mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约90mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约90mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
80mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约70mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约60mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约50mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
40mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约30mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约20mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约
0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约
0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.01mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.0001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.00001mg/kg体重的量。
[0472] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至25μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至2μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在2μg/kg/天至3μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在3μg/kg/天至4μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在4μg/kg/天至5μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在5μg/kg/天至6μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在6μg/kg/天至7μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在7μg/kg/天至8μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在8μg/kg/天至9μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在9μg/kg/天至10μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至5μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在5μg/kg/天至10μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在10μg/kg/天至15μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在15μg/kg/天至20μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在25μg/kg/天至30μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在30μg/kg/天至35μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在35μg/kg/天至40μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在40μg/kg/天至45μg/kg/天的范围内。
根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在45μg/kg/天至50μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在50μg/kg/天至55μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在55μg/kg/天至60μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在60μg/kg/天至65μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在65μg/kg/天至70μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在70μg/kg/天至75μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在80μg/kg/天至
85μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在85μg/kg/天至90μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在90μg/kg/天至95μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在95μg/kg/天至100μg/kg/天的范围内。
根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在45μg/kg/天至50μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在50μg/kg/天至55μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在55μg/kg/天至60μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在60μg/kg/天至65μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在65μg/kg/天至70μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在70μg/kg/天至75μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在80μg/kg/天至
85μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在85μg/kg/天至90μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在90μg/kg/天至95μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在95μg/kg/天至100μg/kg/天的范围内。
[0473] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是1μg/kg/天。
[0474] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是2μg/kg/天。
[0475] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是5μg/kg/天。
[0476] 根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量是10μg/kg/天。
[0477] 根据另一个实施方案，所述治疗还包括辅助疗法。根据一些此类实施方案，辅助疗法包括肿瘤的外科手术切除、放射疗法或可扩张金属支架的插入中的一种或多种。
[0478] III.用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的体征或症状的系统
[0479] 根据另一方面，所描述的发明提供一种用于治疗包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤的系统，所述系统包括
[0480] (a)药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗量的具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的多肽或其功能等效物和其药学上可接受的载体，并且其中治疗量可有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自表1中所列的组的激酶的激酶活性并减少所述肿瘤细胞群体的增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡、克服肿瘤化学抗性、增强肿瘤化学敏感性或其组合，
[0481] 以及
[0482] (b)用于肺部递送的吸入装置。
[0483] 根据一个实施方案，肿瘤是原发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是继发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是复发性肿瘤。根据另一个实施方案，肿瘤是化学疗法难治的肿瘤。
[0484] 根据一些实施方案，原发性肿瘤是鳞状细胞癌、腺癌或大细胞癌。
[0485] 根据一些实施方案，继发性肿瘤或转移部位是肺组织、肾上腺组织、骨组织、肝组织或脑组织中的一种或多种。
[0486] 根据另一个实施方案，肿瘤细胞死亡可包括但不限于细胞凋亡。
[0487] 根据另一个实施方案，药学上可接受的载体包括但不限于控制释放载体、延迟释放载体、持续释放载体和长期释放载体。
[0488] 根据另一个实施方案，吸入装置是雾化器。
[0489] 根据另一个实施方案，吸入装置是计量剂量吸入器(MDI)。
[0490] 根据另一个实施方案，吸入装置是干粉吸入器(DPI)。
[0491] 根据另一个实施方案，吸入装置是干粉雾化器。
[0492] 根据另一个实施方案，药物组合物呈干粉形式。
[0493] 根据另一个实施方案，干粉包含具有1至5微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。
[0494] 根据另一个实施方案，干粉包含具有约2微米的质量中值空气动力学直径(MMAD)的微颗粒。
[0495] 根据一些实施方案，所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。
[0496] 根据一些此类实施方案，另外的治疗剂是化学治疗剂。化学治疗剂的实例包括但不限于，Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、二马来酸阿法替尼、爱宁达(培美曲塞二钠)、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、色瑞替尼、顺铂、克唑替尼、Cyramza(雷莫芦单抗)、多西他赛、盐酸埃罗替尼、Folex PFS(甲氨蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(二马来酸阿法替尼)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸氮芥、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、Mustargen(盐酸氮芥)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、铂尔定(卡铂)、培美曲塞二钠、顺氯氨铂(顺铂)、顺氯氨铂-AQ(顺铂)、雷莫芦单抗、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、紫杉酚(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、酒石酸长春瑞滨、赛可瑞(克唑替尼)、Zykadia(色瑞替尼)、卡铂-紫杉酚以及吉西他滨-顺铂。
[0497] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是镇痛剂。根据一些实施方案，镇痛剂通过提高疼痛阈值来缓解疼痛，而不会干扰意识或改变其他感觉模式。根据一些此类实施方案，镇痛剂是非阿片类镇痛药。“非阿片类镇痛药”是减轻疼痛但不是阿片类镇痛药的天然或合成物质。非阿片类镇痛药的实例包括但不限于依托度酸、吲哚美辛、舒林酸、托美丁、萘丁美酮、吡罗昔康、醋氨酚、非诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、萘普生钠、奥沙普秦、阿司匹林、三水杨酸胆碱镁、二氟尼柳、甲氯芬那酸、甲芬那酸和保泰松。根据一些其他实施方案，镇痛药是阿片类镇痛药。“阿片类镇痛药”、“阿片类药物”或“麻醉性镇痛药”是与中枢神经系统中的阿片受体结合、从而产生激动剂作用的天然或合成物质。阿片类镇痛药的实例包括但不限于可待因、芬太尼、氢吗啡酮、左啡诺、哌替啶、美沙酮、吗啡、羟考酮、羟吗啡酮、丙氧芬、丁丙诺啡、布托啡诺、地佐辛、纳布啡和喷他佐辛。
[0498] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是抗感染剂。根据另一个实施方案，抗感染剂是抗生素剂。如本文所用的术语“抗生素剂”是指主要用于治疗感染性疾病的具有抑制细菌和其他微生物的生长或破坏细菌和其他微生物的能力的一组化学物质中的任一种。抗生素剂的实例包括但不限于，青霉素G；甲氧西林；萘夫西林；苯唑西林；氯唑西林；双氯西林；氨苄西林；阿莫西林；替卡西林；羧苄西林；美洛西林；阿洛西林；哌拉西林；亚胺培南；氨曲南；头孢噻吩；头孢克洛；头孢西丁；头孢呋辛；头孢尼西；头孢美唑；头孢替坦；头孢丙烯；氯碳头孢；头孢他美；头孢哌酮；头孢噻肟；头孢唑肟；头孢曲松钠；头孢他啶；头孢吡肟；头孢克肟；头孢泊肟；头孢磺啶；氟罗沙星；萘啶酸；诺氟沙星；环丙沙星；氧氟沙星；依诺沙星；洛美沙星；西诺沙星；多西环素；米诺环素；四环素；阿米卡星；庆大霉素；卡那霉素；奈替米星；妥布霉素；链霉素；阿奇霉素；克拉霉素；红霉素；依托红霉素；琥乙红霉素；葡庚糖酸红霉素；
乳糖酸红霉素；硬脂酸红霉素；万古霉素；替考拉宁；氯霉素；克林霉素；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲噁唑；呋喃妥因；利福平；莫匹罗星；甲硝唑；头孢氨苄；罗红霉素；阿莫西林克拉维酸组合物(Co-amoxiclavuanate)；哌拉西林与他唑巴坦的组合；以及其各种盐、酸、碱和其他衍生物。抗菌抗生素剂包括但不限于青霉素类、头孢菌素类、碳头孢烯类、头霉素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、糖肽类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类。
乳糖酸红霉素；硬脂酸红霉素；万古霉素；替考拉宁；氯霉素；克林霉素；甲氧苄氨嘧啶；磺胺甲噁唑；呋喃妥因；利福平；莫匹罗星；甲硝唑；头孢氨苄；罗红霉素；阿莫西林克拉维酸组合物(Co-amoxiclavuanate)；哌拉西林与他唑巴坦的组合；以及其各种盐、酸、碱和其他衍生物。抗菌抗生素剂包括但不限于青霉素类、头孢菌素类、碳头孢烯类、头霉素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、糖肽类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类。
[0499] 根据一些其他实施方案，另外的治疗剂包括支气管扩张剂，包括但不限于白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、β2-激动剂或其组合。
[0500] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括皮质类固醇，包括但不限于泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松或其组合。
[0501] 根据一些其他实施方案，另外的治疗剂包括支气管扩张剂，包括但不限于白三烯调节剂、抗胆碱能支气管扩张剂、β2-激动剂或其组合。
[0502] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括皮质类固醇，包括但不限于泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松或其组合。
[0503] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是抗炎剂。
[0504] 根据另一个实施方案，抗炎剂是非类固醇抗炎剂。也可使用非类固醇抗炎剂的混合物，以及这些药剂的皮肤病学上可接受的盐和酯。例如，依托芬那酯(一种氟芬那酸衍生物)对于局部应用特别有用。
[0505] 根据另一个实施方案，其中非类固醇抗炎剂包括转化生长因子-β3(TGF-β3)、抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)剂或其组合。
[0506] 根据另一个实施方案，抗炎剂是类固醇抗炎剂。根据另一个实施方案，类固醇抗炎剂包括至少一种选自由以下组成的组的皮质类固醇：泼尼松、布地奈德、莫米松、倍氯米松以及其组合。
[0507] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括甲基黄嘌呤。
[0508] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂。
[0509] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂是至少一种嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，包括但不限于ICI 200355、ONO-5046、MR-889、L-694，438、CE-1037、GW-311616、TEI-8362、ONO-6818、AE-3763、FK-706、ICI-200，880、ZD-0892、ZD-8321以及其组合。
[0510] 根据另一个实施方案，另外的治疗剂包括至少一种磷酸二酯酶抑制剂，包括但不限于磷酸二酯酶4抑制剂。磷酸二酯酶4抑制剂的实例包括但不限于，罗氟司特、西洛司特或其组合。
[0511] 根据另一个实施方案，所述药物组合物抑制选自本文表1中所列的组的激酶的激酶活性。
[0512] 根据另一个实施方案，所述抑制可有效减缓包含肿瘤细胞群体的非小细胞肺癌实体肿瘤的进展。
[0513] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少95％的激酶活性
[0514] 根据一些实施方案，体内MMI抑制剂的抑制概况取决于剂量、施用途径以及对抑制剂有反应的细胞类型。
[0515] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的所述激酶的至少95％的激酶活性。
[0516] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2激酶)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK2激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制MK2激酶v的至少95％的激酶活性。
[0517] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3激酶)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少80％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的MK3激酶的至少95％的激酶活性。
[0518] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效
2+
抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca /钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少80％的激
2+
酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca /钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少95％的激酶活性。
2+
抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca /钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少75％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少80％的激
2+
酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca /钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少85％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少90％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少95％的激酶活性。
[0519] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少70％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少75％的激酶活性。
[0520] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的激酶活性。
[0521] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性。
[0522] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性和BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0523] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性，有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0524] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的激酶活性。
[0525] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性。
[0526] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性。
[0527] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。
[0528] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0529] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性。
[0530] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性。
[0531] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性和BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0532] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)的至少65％的激酶活性，有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)的至少65％的激酶活性，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI)的至少65％的激酶活性，以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB)的至少65％的激酶活性。
[0533] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的至少一种选自MK2、MK3、CaMKI、TrkB的组的激酶的激酶活性，而不基本上抑制所述肿瘤细胞群体中的一种或多种来自本文表1中所列的剩余组的其他选定激酶的活性。
[0534] 根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制所述肿瘤细胞群体中的选自本文表1中所列的组的激酶的激酶活性。
[0535] 根据另一个实施方案，这种抑制可例如有效减少所述肿瘤细胞群体的增殖、减小肿瘤大小、降低肿瘤负荷、诱导肿瘤细胞死亡或其组合。
[0536] 根据一些实施方案，体内MMI抑制剂的抑制概况取决于剂量、施用途径以及对抑制剂有反应的细胞类型。
[0537] 根据这种实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于50％的激酶活性。根据这种实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于65％的激酶活性。根据这种实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于50％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于40％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于20％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于15％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于10％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效抑制其他选定激酶的少于5％的激酶活性。根据另一个实施方案，所述药物组合物有效增加其他选定激酶的激酶活性。
[0538] 根据前一段落的实施方案，所述未被基本上抑制的一种或多种其他选定激酶选自以下的组：Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII，包括其亚基CaMKIIδ)、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PIM-1)、细胞肉瘤(c-SRC)、脾酪氨酸激酶(SYK)、C-src酪氨酸激酶(CSK)以及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)。
[0539] 根据一些实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有基本序列同一性。
[0540] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少70％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少80％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少90％序列同一性。根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物与氨基酸序列
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％序列同一性。
YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％序列同一性。
[0541] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3)。
[0542] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4)。
[0543] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLAVA(SEQ ID NO：5)。
[0544] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVA(SEQ ID NO：6)。
[0545] 根据另一个实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物具有氨基酸序列HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7)。
[0546] 根据一些其他实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽具有氨基酸序列YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)，并且所述第二多肽包含序列与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有基本同一性的治疗结构域。
[0547] 根据一些此类实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少70％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少80％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少90％序列同一性。根据一些其他实施方案，第二多肽与氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)具有至少95％序列同一性。
[0548] 根据一些实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLAVA(SEQ ID NO：8)的多肽。
[0549] 根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVA(SEQ ID NO：9)的多肽。
[0550] 根据另一个实施方案，第二多肽是具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：10)的多肽。
[0551] 根据一些其他实施方案，多肽YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)的功能等效物是包含可操作地连接至第二多肽的第一多肽的融合蛋白，其中所述第一多肽包含功能上等效于YARAAARQARA(SEQ ID NO：11)的细胞穿透肽，并且所述第二多肽具有氨基酸序列KALARQLGVAA(SEQ ID NO：2)。
[0552] 根据另一实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA(SEQ ID NO：12)的多肽。
[0553] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKA(SEQ ID NO：13)的多肽。
[0554] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：14)的多肽。
[0555] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRI(SEQ ID NO：15)的多肽。
[0556] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列FAKLAARLYR(SEQ ID NO：16)的多肽。
[0557] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR(SEQ ID NO：17)的多肽。
[0558] 根据另一个实施方案，第一多肽是具有氨基酸序列HRRIKAWLKKI(SEQ ID NO：18)的多肽。
[0559] 根据另一个方面，所描述的发明还提供一种分离的核酸，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少70％氨基酸序列同一性的蛋白 质序列。根据一些此类实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少80％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。
根据一些此类实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少90％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。根据一些此类实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。
根据一些此类实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少90％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。根据一些此类实施方案，所述分离的核酸编码与氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1)具有至少95％氨基酸序列同一性的蛋白质序列。
[0560] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.00001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.0001mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.01mg/kg体重至约
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.1mg/kg(100μg/kg)体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约1mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约10mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约2mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约3mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约4mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约5mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约60mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约
70mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约80mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约90mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约90mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约80mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约70mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约60mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约50mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约40mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约30mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约20mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.01mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.0001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.00001mg/kg体重的量。
10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约0.1mg/kg(100μg/kg)体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约1mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约10mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约2mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约3mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约4mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约5mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约60mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约
70mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约80mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制肽的治疗量是约90mg/kg体重至约100mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约90mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约80mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约70mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约60mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约50mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约40mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约30mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约20mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约10mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.1mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.01mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.0001mg/kg体重的量。根据另一个实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗量是约0.000001mg/kg体重至约0.00001mg/kg体重的量。
[0561] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至25μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至2μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在2μg/kg/天至3μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在3μg/kg/天至4μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在4μg/kg/天至5μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在5μg/kg/天至6μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在6μg/kg/天至7μg/kg/天的范围内。
[0562] 根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在7μg/kg/天至8μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在8μg/kg/天至9μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在9μg/kg/天至10μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在1μg/kg/天至5μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在5μg/kg/天至10μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在10μg/kg/天至15μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在15μg/kg/天至20μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在25μg/kg/天至30μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在30μg/kg/天至35μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在35μg/kg/天至40μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在40μg/kg/天至45μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在45μg/kg/天至50μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在50μg/kg/天至55μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在55μg/kg/天至60μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在60μg/kg/天至65μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在65μg/kg/天至70μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在70μg/kg/天至75μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在80μg/kg/天至85μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在85μg/kg/天至90μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在90μg/kg/天至95μg/kg/天的范围内。根据一些其他实施方案，药物组合物的治疗性抑制剂肽的治疗剂量在95μg/kg/天至100μg/kg/天的范围内。
[0563] 根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗剂量是1μg/kg/天。
[0564] 根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗剂量是2μg/kg/天。
[0565] 根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗剂量是5μg/kg/天。
[0566] 根据另一个实施方案，治疗性抑制剂肽的治疗剂量是10μg/kg/天。
[0567] 在本申请中，除非另有说明，否则所使用的技术可在若干熟知的参考文献中找到，如：Molecular Cloning：A Laboratory Manual(Sambrook，等人，1989，Cold Spring Harbor Laboratory Press)；Gene Expression Technology(Methods in Enzymology，第185卷，由D.Goeddel编辑，1991.Academic Press，San Diego，CA)；“Guide to Protein Purification”in Methods in Enzymology(M.P.Deutshcer，编辑，(1990)Academic Press，Inc.)；PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications(Innis，等人
1990.Academic Press，San Diego，CA)；Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique，第2版(R.I.Freshney.1987.Liss，Inc.New York，NY)；以及Gene Transfer and Expression Protocols，第109-128页，编辑E.J.Murray，The Humana Press Inc.，Clifton，N.J.)，所述参考文献全部以引用的方式并入本文。
1990.Academic Press，San Diego，CA)；Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique，第2版(R.I.Freshney.1987.Liss，Inc.New York，NY)；以及Gene Transfer and Expression Protocols，第109-128页，编辑E.J.Murray，The Humana Press Inc.，Clifton，N.J.)，所述参考文献全部以引用的方式并入本文。
[0568] 除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域中的普通技术人员通常所理解的相同含义。虽然与本文所描述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料也可用于所描述发明的实践或测试中，但现在描述优选的方法和材料。本文提及的所有出版物以引用的方式并入本文以便公开并描述与所引用的出版物有关的方法和/或材料。
[0569] 在提供一定范围的值的情况下，应理解除非上下文另外清楚地规定，否则本发明内涵盖所述范围的上限与下限之间的各插入值(至下限单位的十分之一)和在所陈述的范围中的任何其他陈述值或插入值。本发明内还涵盖可独立地包括于这些较小范围中的这些较小范围的上限和下限，从属于所陈述的范围中的任何具体排除的限值。当所述范围包括一个或两个限值时，排除那些所包括的限值之一或两者的范围也包括在本发明中。
[0571] 本文所论述的公布以引用的方式整体并入本文，并且仅在本申请的提交日期之前为其公开而提供。本文中的任何内容均不应被理解为承认由于先前发明而使所描述的发明无权享有这种公布的优先权。此外，所提供的出版日期可不同于实际出版日期，其可能需要单独证实。
[0572] 本领域的技术人员应理解，可在不脱离本发明的真实精神和范围下进行各种变化且可取代等效物。此外，可进行许多修改以使特定情况、材料、物质组成、方法、一个或多个方法步骤适于所描述发明的目标、精神和范围。所有此类修改均意图在所附权利要求的范围内。实施例
[0573] 提出以下实施例以便向本领域的普通技术人员提供如何制备和使用所描述发明的完全公开和说明，并且不意图限制本发明人看待其发明的范围，也不意图表示以下实验是进行的全部或仅有的实验。虽然已尽力确保所用数字(例如量、温度等)的准确性，但仍应考虑一些实验误差和偏差。除非另外指出，否则份是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度并且压力是大气压或接近大气压。
[0574] I.材料和方法
[0575] MMI-0100制剂
[0576] MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEO ID NO：1)的干粉制剂
[0577] MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)，冻干的(American Peptide，Inc.，Sunnyvale CA)批号100429，制造日期2010年6月29日，500mg。
[0578] 喷雾干燥的纯MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)，5％w/w固体(Bend Research，Bend OR)批号BREC 00708-003A，制造日期2012年7月27日，1g。
[0579] 喷雾干燥的纯MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)，1％w/w固体(Bend Research，Bend OR)批号BREC 00708-003B，制造日期2012年7月27日，1g。
[0580] 喷雾干燥的80/20MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)/海藻糖(Santa Cruz Biotechnology，Inc.Dallas TX)，1％w/w固体(Bend Research，Bend OR)批号BREC 00708-011C，制造日期w/c 2012年9月10日，500mg。
[0581] 喷雾干燥的92.5/7.5MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)/海藻糖(Santa Cruz Biotechnology，Inc.Dallas TX)，1％w/w固体(Bend Research，Bend OR)批号BREC 00708-011F，制造日期w/c 2012年9月10日，500mg。
[0582] MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEO ID NO：1)的雾化器制剂
[0583] 制剂A：7mg/mL；将1.8g的冻干肽称量到含有200mL的0.9％盐水的容量瓶中。
[0584] 制剂B：0.7mg/mL；将0.18g的冻干肽称量到含有200mL的0.9％盐水的容量瓶中。
[0585] MMI-0100(YARAAARQARAKALAROLGVAA；SEO ID NO：1)的纳米-聚合复合物制剂[0586] 细胞穿透MK2抑制肽的合成
[0587] MK2抑制肽(MK2i)MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)在PS3肽合成仪(Protein Technologies，Inc.Tucson，AZ)上使用标准Fmoc化学合成。在所有肽合成中使用N-甲基吡咯烷酮(NMP，Fischer Scientific)作为溶剂。在N-甲基吗啉存在下，使用HCTU(1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-5氯-1H-苯并三唑鎓(1-)，3-氧化物六氟磷酸酯)作为活化剂(Chempep，Wellington，FL)。所有氨基酸都是双偶联的，以便使产量和纯度最大。将肽在三氟乙酸(TFA)/苯酚/H2O/三异丙基硅烷(88/5/5/2)中裂解/脱保护。然后在配备有延伸流动试剂盒、Waters 2489 UV/可见光检测器和phenomenex Luna C18(2)AXIA填充柱(100A，250x 21.2mm，5微米)的Waters 1525二元HPLC泵上通过反相HPLC进一步纯化所述肽。A)HPLC级具有0.05％甲酸的水和B)HPLC级乙腈用作流动相，并且使用90％A至90％B梯度在25分钟内(16mL/分钟)纯化肽。用旋转蒸发器从纯化的级分中除去乙腈，并且然后将纯化的级分冻干。通过电喷雾电离质谱法(ESI-MS)在Waters Synapt ESI-MS上验证肽纯度。
[0588] 单体和聚合物合成
[0589] 除非另有说明，否则所有试剂均购自Sigma并具有分析级。使用丙基丙二酸二乙酯(Alfa Aesar)作为前体，根据Ferrito等人(Macromolecular Syntheses 11，59-62(1992))概述的程序合成2-丙基丙烯酸。如Convertine等人所描述(J.Control Release 133，221-229(2009))合成了4-氰基-4-(乙基硫烷基硫代羰基)硫烷基戊酸(ECT)链转移剂(CTA)。使用2，2′-偶氮-双-异丁酰腈(AIBN)作为自由基引发剂，在70℃下在氮气氛下，大批进行聚(丙基丙烯酸)(PPAA)均聚物的可逆加成-断裂链转移(RAFT)聚合持续48小时。使反应混合物通过三次冷冻-真空-解冻循环，并在聚合前用氮气吹扫30分钟。链转移剂(CTA)与AIBN的摩尔比是1比1，并且单体与CTA的比率被设定为使得将在100％转化率下实现190的聚合度。
在聚合后，将所得聚合物溶解于二甲基甲酰胺(DMF)中，并且沉淀至乙醚中5次，之后在真空中干燥过夜。使用AIBN作为自由基引发剂，聚(丙烯酸)(PAA)均聚物的RAFT聚合在氮气氛下在70℃在蒸馏二噁烷中进行18小时。在聚合之前用氮气吹扫反应混合物30分钟。CTA与AIBN的摩尔比是5比1，并且单体与CTA的比率被设定为使得将在100％转化率下实现150的聚合度。在聚合后，将所得聚合物溶解于二噁烷中，并且沉淀至乙醚中5次，之后在真空中干燥过夜。使用凝胶渗透色谱法(GPC，Agilent)来测定PPAA和PAA均聚物的分子量和多分散性(Mw/Mn，PDI)，使用在60℃下含有0.1％LiBr的HPLC级DMF作为流动相。分子量计算使用ASTRA V软件(Wyatt Technology)进行，并且是基于实验确定的通过聚合物穿过折射率检测器的离线注入测定的dn/dc值(计算的PPAA dn/dc＝0.087mL/g，计算的PAA dn/dc＝0.09mL/g)。
在聚合后，将所得聚合物溶解于二甲基甲酰胺(DMF)中，并且沉淀至乙醚中5次，之后在真空中干燥过夜。使用AIBN作为自由基引发剂，聚(丙烯酸)(PAA)均聚物的RAFT聚合在氮气氛下在70℃在蒸馏二噁烷中进行18小时。在聚合之前用氮气吹扫反应混合物30分钟。CTA与AIBN的摩尔比是5比1，并且单体与CTA的比率被设定为使得将在100％转化率下实现150的聚合度。在聚合后，将所得聚合物溶解于二噁烷中，并且沉淀至乙醚中5次，之后在真空中干燥过夜。使用凝胶渗透色谱法(GPC，Agilent)来测定PPAA和PAA均聚物的分子量和多分散性(Mw/Mn，PDI)，使用在60℃下含有0.1％LiBr的HPLC级DMF作为流动相。分子量计算使用ASTRA V软件(Wyatt Technology)进行，并且是基于实验确定的通过聚合物穿过折射率检测器的离线注入测定的dn/dc值(计算的PPAA dn/dc＝0.087mL/g，计算的PAA dn/dc＝0.09mL/g)。
[0590] MMI-0100纳米-聚合复合物(MK2i-NP)合成和表征
[0591] 将PPAA溶解于1M NaOH中并稀释至磷酸盐缓冲液(pH 8)中以获得储备溶液。将纯化的MMI-0100肽溶解于磷酸盐缓冲液(pH 8)中。将MMI-0100肽和PPAA聚合物在[NH3+]∶[COO-]＝10∶1至1∶10的电荷比(CR)范围下混合以形成MK2i-NP。将所得聚合复合物通过0.45μm聚四氟乙烯(PTFE)过滤器进行注射器过滤，并且在具有可重复使用的浸细胞试剂盒的Malvem Zetasizer Nano-ZS(Malvem Instruments Ltd.，Worcestershire，U.K.)上表征流体动力学直径和ζ-电位。
[0592] 辐射测量IC50测定
[0593] 从半对数稀释的10点曲线估计IC50值。将肽提供在二甲亚砜(DMSO)中。具体地说，将人重组MK2(h)(5-10mU)与50mM 3-甘油磷酸钠(pH＝7.5)、0.1mM EGTA、30μM的底物肽(KKLNRTLSVA；SEQ ID NO：21)、10mM乙酸镁以及90uMγ-33P-ATP(最终体积为25μL)一起在室温下孵育40分钟。然后，用3％磷酸终止反应。将10μL的此混合物点样到P30过滤垫上，并用75mM磷酸洗涤3次持续5分钟，且用甲醇洗涤一次。最后，将膜干燥并使用闪烁计数器。选择在ATP的表观Km的15μM内的ATP浓度，因为Hayess和Benndorf(Biochem Pharmacol，1997，53(9)：1239-47)表明其原始抑制剂肽(即，KKKALNRQLGVAA；SEQ ID NO：22)的机制不与ATP结合竞争。
[0594] 除了测定MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)的IC50值外，使用Millipore的IC50Profiler Express服务(Millipore，Billerica，MA)测试了针对266种人激酶的抑制活性。
[0595] 对于特异性分析，使用溶解于二甲亚砜(DMSO)中的各自100μM的MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)、MMI-0200(YARAAARQARAKALNRQLGVA；SEQ ID NO：19)、MMI-0300(FAKLAARLYRKALARQLGVAA；SEQ ID NO：3)、MMI-0400(KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA；SEQ ID NO：4)以及MMI-0500(HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA；SEQ ID NO：7)。每个激酶活性测量重复进行两次。
[0596] 细胞系
[0597] 所有NSCLC(NCI-H520、A549、NCI-H1993、NCI-H460和NCI-H1299)细胞系可从美国组织和细胞保藏中心(American Tissue and Cell Collection)(ATCC)获得。这些细胞代表不同的病理亚型(例如鳞状、腺癌、癌)。还代表了各种分子特征，包括野生型p53(A549，H460)、减少或缺失的p53(H520，H1299)、野生型KRAS(H1299)、突变型KRAS(A549，H460)、野生型EGFR(A549)、突变型EGFR(H1993，H460)和扩增的c-met(H1993)。所有细胞可在潮湿组织培养孵育箱中在37℃下在5％CO2中在具有10％胎牛血清(FBS)、1mM丙酮酸钠和10mM HEPES的RPMI 1640(Cellgro)中培养。可使用MycoAlert支原体检测试剂盒(Lonza，Rockland，ME)针对支原体污染对细胞进行常规测试。
[0598] II.结果
[0599] 实施例1.MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)的IC50和特异性[0600] 使用Millipore的IC50Profiler Express服务测定了在下文鉴别的MK2抑制剂肽的IC50(半最大抑制浓度)值。这种定量测定测量了抑制50％给定生物过程或过程的组分(即酶、细胞或细胞受体)所需的抑制剂的量[IC50]。具体地说，在这些测定中，如果激酶不被抑制剂肽抑制，则将带正电荷的底物用来自ATP的放射性标记的磷酸基团磷酸化。然后将带正电荷的底物吸引至带负电荷的滤膜，用闪烁计数器定量，并与100％活性对照进行比较。
[0601] 选择在ATP的表观Km的15μM以内的ATP浓度，因为接近Km的ATP浓度可允许激酶具有相同的相对磷酸化活性量。具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1(MMI-0100)的多肽的IC50被测定为22μM。
[0602] 除了测定MMI-0100的IC50外，通过在Millipore激酶特征测定服务中检查可用于测试的所有266种人激酶的活性而评估了MK2抑制肽的特异性(表1)。对于分析，测定了被MMI-0100(YARAAARQARAKALARQLGVAA；SEQ ID NO：1)；MMI-0200(YARAAARQARAKALNRQLGVA；SEQ ID NO：19)；MMI-0300(FAKLAARLYRKALARQLGVAA；SEQ ID NO：3)；MMI-0400
(KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA；SEQ ID NO：4)；以及MMI-0500(HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA；SEQ ID NO：7)抑制超过65％的激酶。
(KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA；SEQ ID NO：4)；以及MMI-0500(HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA；SEQ ID NO：7)抑制超过65％的激酶。
[0603] 如表1中所示，在100μM下，MK2抑制肽MMI-0100(SEQ ID NO：1)；MMI-0200(SEQ ID NO：19)；MMI-0300(SEQ ID NO：3)；MMI-0400(SEQ ID NO：4)；以及MMI-0500(SEQ ID NO：5)抑制一组特定激酶，并且显示非常有限的脱靶激酶抑制。更具体地说，MK2抑制性肽MMI-0100(SEQ ID NO：1)；MMI-0200(SEQ ID NO：19)；MMI-0300(SEQ ID NO：3)；MMI-0400(SEQ ID NO：4)；以及MMI-0500(SEQ ID NO：5)在体外抑制有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MK2)、有丝分裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶3(MK3)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶I(CaMKI，丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶)以及BDNF/NT-3生长因子受体(TrkB，酪氨酸激酶)的超过65％的激酶活性。
[0604] 表1.激酶特征测定
[0605]
[0606]
[0607]
[0608]
[0609]
[0610]
[0611]
[0612] 实施例2.MK2抑制剂肽对NSCLC细胞增殖的抑制
[0613] 可使用细胞增殖测定来测定MK2抑制剂肽对NSCLC细胞增殖的抑制。例如，可将NCI-H520、A549、NCI-H1993、NCI-H460和NCI-H1299细胞(ATCC)接种在96孔板中并培养过夜。可使细胞培养物暴露于各种浓度的YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1；MMI-0100)、YARAAARQARAKALNRQLGVA(SEQ ID NO：19；MMI-0200)、FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3；MMI-0300)、KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4；MMI-0400)、HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)、YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)持续指定治疗间隔时间。NSCLC细胞的增殖可通过溴化3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑鎓(MTT)测定(Life Technologies，Grand Island，NY)来测定。简言之，对于粘附细胞，移除培养基并用100μL新鲜培养基更换。对于非粘附细胞，将微孔板离心以使NSCLC细胞沉淀，移除培养基并用100μL新鲜培养基更换。加入MTT染料(2mg/ml)，并将细胞在37℃下孵育4小时。
接下来，除去培养基，并将得到的甲臜晶体溶解于DMSO(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)中5分钟。在540nm下在分光光度计中读取微孔板。可使用GraphPad Prism 5.01版(GraphPad Software Inc，La Jolla，CA)产生剂量反应曲线。可使用CalcuSyn(Biosoft，Great Shelford，Cambridge，UK)计算IC50值。
接下来，除去培养基，并将得到的甲臜晶体溶解于DMSO(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)中5分钟。在540nm下在分光光度计中读取微孔板。可使用GraphPad Prism 5.01版(GraphPad Software Inc，La Jolla，CA)产生剂量反应曲线。可使用CalcuSyn(Biosoft，Great Shelford，Cambridge，UK)计算IC50值。
[0614] 实施例3.MK2抑制剂肽的细胞毒性
[0615] 可测定MK2抑制剂肽对NSCLC细胞的细胞毒性作用。例如，可将NCI-H520、A549、NCI-H1993、NCI-H460和NCI-H1299细胞(ATCC)接种在6孔板中并培养过夜。NSCLC细胞培养物可不经处理或用预定IC50剂量的YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1；MMI-0100)、YARAAARQARAKALNRQLGVA(SEQ ID NO：19；MMI-0200)、FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3；MMI-0300)、KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4；MMI-0400)、
HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)、YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)、以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)处理并孵育
48、72或96小时。在每个时间点后，可收集含有任何非粘附细胞的培养基。可使用胰蛋白酶(Life Technologies，Grand Island，NY)分离粘附细胞，将所述粘附细胞悬浮在培养基中并通过手动移液解聚。所有收集的NSCLC细胞可与台盼蓝染料(Life Technologies)混合。
可使用血细胞计数器对不包括染料的活细胞和染色成蓝色的死细胞进行计数。
HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)、YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)、以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)处理并孵育
48、72或96小时。在每个时间点后，可收集含有任何非粘附细胞的培养基。可使用胰蛋白酶(Life Technologies，Grand Island，NY)分离粘附细胞，将所述粘附细胞悬浮在培养基中并通过手动移液解聚。所有收集的NSCLC细胞可与台盼蓝染料(Life Technologies)混合。
可使用血细胞计数器对不包括染料的活细胞和染色成蓝色的死细胞进行计数。
[0616] 实施例4.MK2抑制剂肽对NSCLC细胞的细胞凋亡
[0617] 半胱天冬酶的活化是细胞凋亡早期阶段的独特特征。可进行半胱天冬酶活性的微板测定以测定MK2抑制剂肽对NSCLC细胞的细胞凋亡。例如，可将NCI-H520、A549、NCI-H1993、NCI-H460和NCI-H1299细胞(ATCC)接种在96孔板中并培养过夜。NSCLC细胞培养物可不经处理或用预定IC50剂量的YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1；MMI-0100)、YARAAARQARAKALNRQLGVA(SEQ ID NO：19；MMI-0200)、FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3；MMI-0300)、KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4；MMI-0400)、
HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)、YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)、以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)处理并孵育
48、72或96小时。在每个时间点后，可将CellEventTM半胱天冬酶-3/7绿色检测试剂(Life Technologies)以介于2-8μM之间的最终浓度添加至每个孔并在37℃下孵育30分钟。在孵育后，可使用具有能够检测502/530nm激发/发射最大值的滤波器组的带有荧光检测的酶标仪(例如，Gemini XPS酶标仪，Molecular Devices，Sunnyvale，CA)对细胞进行成像。
HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)、YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)、以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)处理并孵育
48、72或96小时。在每个时间点后，可将CellEventTM半胱天冬酶-3/7绿色检测试剂(Life Technologies)以介于2-8μM之间的最终浓度添加至每个孔并在37℃下孵育30分钟。在孵育后，可使用具有能够检测502/530nm激发/发射最大值的滤波器组的带有荧光检测的酶标仪(例如，Gemini XPS酶标仪，Molecular Devices，Sunnyvale，CA)对细胞进行成像。
[0618] 实施例5.通过MK2抑制剂肽体内处理NSCLC细胞
[0619] 原位肺肿瘤植入可用于评估MK2抑制剂肽对非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤的作用。例如，四至六周龄雌性Sprague Dawley裸小鼠(Harlan Laboratories)可用于建立原位肺肿瘤，如Peng等人(Nanomedicine.2014Oct；10(7)：1497-1506)所描述。简言之，在将小鼠麻醉后，在左肺上方的背侧上制造5mm切口。分离脂肪和肌肉以使肺运动可视化。将悬浮在40μL PBS/基质胶(BD Biosciences)中的500万(5x106)个A549人肺腺癌上皮细胞(ATCC)以3mm深度直接注射至左肺实质中(第0天)。将小鼠随机分为8组：未处理的对照组；YARAAARQARAKALARQLGVAA(SEQ ID NO：1；MMI-0100)组；YARAAARQARAKALNRQLGVA(SEQ ID NO：19；MMI-0200)组；FAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：3；MMI-0300)组；
KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4；MMI-0400)组；HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)组；YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)组；以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)组。处理在第16天以静脉内(IV)注射开始，治疗方案是每7天每日一次持续6个剂量(Q7d x6)。当身体状况评分(BCS)为2或更低时，或在研究期间的任何时间达到20％的总重量损失时，将小鼠杀死。
KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(SEQ ID NO：4；MMI-0400)组；HRRIKAWLKKIKALARQLGVAA(SEQ ID NO：7；MMI-0500)组；YARAAARDARAKALNRQLAVAA(SEQ ID NO：23；MMI-0600)组；以及YARAAARQARAKALNRQLAVA(SEQ ID NO：24；MMI-0600-2)组。处理在第16天以静脉内(IV)注射开始，治疗方案是每7天每日一次持续6个剂量(Q7d x6)。当身体状况评分(BCS)为2或更低时，或在研究期间的任何时间达到20％的总重量损失时，将小鼠杀死。
[0620] 可通过中值存活时间评估治疗功效。治疗功效也可通过大体成像进行评估。例如，可收获肺，并且可在处理组之间以及处理组与未处理对照组之间比较实体肿瘤结节的存在、不存在或大小。
[0621] 实施例6.MK2抑制剂对Kras和Kras/p53驱动的肺癌的影响的测定
[0622] 可使用鼠模型来进行体内研究以了解MK2抑制剂对Kras、Kras/p53和Kras/Lkb1驱动的鼠肺癌的影响。可在用(i)安慰剂；(ii)顺铂；(iii)MK2抑制剂；或(iv)顺铂+MK2抑制剂两(2)周短期处理后检查全身性MK2抑制对Kras、Kras/p53和Kras/Lkb1肺癌中的免疫细胞的影响。
[0623] 通过MRI筛选确定的具有肺癌的每种基因型(Kras和Kras/p53)的三(3)至五(5)只小鼠可用以上列出的相应药剂((i)安慰剂；(ii)顺铂；(iii)MK2抑制剂；或(iv)顺铂+MK2抑制剂)处理两(2)周。可从这些小鼠获得支气管肺泡灌洗液(BALF)以用于细胞因子分析(例如，IL-6、TGFb1、PGRN、VEGF、GMCSG和CCL2)。可从这些小鼠中分离肺肿瘤结节，并处理成单细胞悬浮液。接下来，可通过FACS针对癌上皮细胞和各种免疫细胞群体(例如，巨噬细胞、NK、Treg、B细胞等)对悬浮液进行分选。
[0624] 实施例7.功效研究
[0625] 如果发现MK2抑制剂在两(2)周后对再活化免疫系统和缩小肿瘤大小具有显著影响，则可进行长期功效研究。
[0626] 可用以上列出的相应药剂((i)安慰剂；(ii)顺铂；(iii)MK2抑制剂；或(iv)顺铂+MK2抑制剂)长期处理具有肺癌的每种基因型(Kras和Kras/p53)的十(10)至十五(15)只小鼠。可通过MRI对小鼠连续成像以记录反应和肿瘤进展。可测量反应深度、反应持续时间、反应率、无进展存活期和总存活期。在研究的终点，可使来自不同组的小鼠安乐死，并收集其BALF和肿瘤结节以便确定原发性和获得性抗性的机制。
[0627] 虽然所描述的发明已经参考其特定实施方案进行了描述，但是本领域技术人员应理解，可在不脱离本发明的真实精神和范围下进行各种变化且可取代等效物。此外，可进行许多修改以使特定情况、材料、物质组成、方法、一个或多个方法步骤适于所描述发明的目标精神和范围。所有此类修改均意图在所附权利要求的范围内。
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