一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法
专利汇可以提供一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种包埋降解 微 生物 的PVA-SA复合固定化载体的制备方法：其特征是所述方法包括以下步骤：a)在无菌条件下，将降解微生物的菌悬液和灭菌处理的 复合材料 溶液混合；所述复合材料溶液中由95～105g/L的聚乙烯醇、9～11g/L的海藻酸钠，28～32g/L的SiO2，4.5～5.5g/L的CaCO3、5～7g/L的 活性炭 及余量的去离子 水 配制而成；b)在无菌环境下将步骤1)得到的均匀混合了菌悬液的复合材料溶液逐滴滴入交联剂中，硬化处理后得到固定化载体，所述的交联剂为饱和 硼 酸溶液 中溶解 质量 分数为1.8～2.2％的氯化 钙 固体并用氢 氧 化钠溶液调pH为6.1～6.3后得到。，下面是一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法：其特征是所述方法包括以下步骤：
a)在无菌条件下，将降解微生物的菌悬液和灭菌处理的复合材料溶液混合；所述复合材料溶液中由95～105g/L的聚乙烯醇、9～11g/L的海藻酸钠，28～32g/L的SiO2，4.5～
5.5g/L的CaCO3、5～7g/L的活性炭及余量的去离子水配制而成；
b)在无菌环境下将步骤1)得到的均匀混合了菌悬液的复合材料溶液逐滴滴入交联剂中，硬化处理后得到固定化载体，所述的交联剂为饱和硼酸溶液中溶解质量分数为1.8～
2.2％的氯化钙固体并用氢氧化钠溶液调pH为6.1～6.3后得到；
所述降解微生物采用以下方法筛选：
1)取样：从焦化废水处理装置中采集带有污泥的废水样品，所述废水样品中包括好氧处理装置出水和厌氧处理装置出水；
2)培养与转接：将样品加入含有苯酚、吡啶、喹啉的液体无机盐培养基中，于27～33℃条件下培养，用紫外扫描检测其降解效果，当扫描曲线降平的时候作为培养终点，以同样培养条件进行多次转接，取多次转接之后的上清液作为筛选得到的高效降解菌群的接种菌，所述液体无机盐培养基配比如下：NaCl 0.9～1.1g/L，NH4NO3 0.9～1.1g/L，K2HPO4 1.20～
1.8g/L，KH2PO4 0.4～0.6g/L，MgSO4·7H2O 0.15～0.25g/L，pH 7.0-7.2，苯酚10～100mg/L、吡啶10～100mg/L、喹啉10～100mg/L，以及余量的蒸馏水，以苯酚、吡啶、喹啉为唯一碳氮源；
3)分离纯化：采用LB固体培养基对步骤2)得到的降解菌群进行涂布分离、多次划线纯化，并保种。
2.如权利要求1所述的一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法，其特征是所述液体无机盐培养基的配比优选为NaCl 1.0g/L，NH4NO3 1.0g/L，K2HPO4 1.5g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，苯酚40～60mg/L、吡啶40～60mg/L、喹啉40～60mg/L，培养条件为将培养基置于三角瓶中，于30℃，180rpm条件下，进行培养。
3.如权利要求1或2所述的一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法，其特征是所述菌群主要包括数量比为95～105：25～30：210～230：55～65：90～100的赤红球菌(Rhodococcus ruber)、药用肉毒杆菌(Patulibacter medicamentivorans)、蝗科副球菌(Paracoccus acridae)、角膜松解微杆菌(Microbacterium keratanolyticum)和庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)。
4.如权利要求1所述的一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法，其特征是所述菌悬液的制备方法为：将接种菌转接在LB液体培养基中，30℃、180rmp环境培养
48h，得到种子液，将上述1mL种子液接种到100mL的LB培养基中，180r/min、30℃培养24h，
6000r/min、4℃离心10min，弃去上清，用无菌水吹打重悬，离心，弃上清，如此重复3次，将得到的菌体用无机盐溶液制备成OD600为2.0的菌悬液，所述无机盐溶液的无机盐含量为NaCl
1.0g/L，NH4NO3 1.0g/L，K2HPO4 1.5g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，1mL微量元素储备液/L，所述微量元素储备液的配比是KI 0.005g，MnSO4·4H2O 0.2g，CuSO4·2H2O
0.02g，ZnSO4·7H2O 0.2g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，H3BO3 0.008g，FeCl3·6H2O 0.1g，加水至
100mL；所述复合材料溶液中由100g/L的聚乙烯醇、10g/L的海藻酸钠，30g/L的二氧化硅，
5g/L的碳酸钙、6g/L的活性炭及余量的去离子水配制而成，所述交联剂由饱和硼酸溶液中溶解质量分数为2％的氯化钙固体并用0.5mol/L的氢氧化钠调pH为6.22后得到，所述硬化处理条件为在4℃条件下交联处理12～24h。
5.如权利要求4所述的一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法，其特征是所述菌悬液与复合材料溶液的体积比为18～22:100。
6.采用如权利要求1～5任一所述的一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法得到的固定化载体。
一种包埋降解微生物的PVA-SA复合固定化载体的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
1.20～1.8g/L，KH2PO4 0.4～0.6g/L，MgSO4·7H2O 0.15～0.25g/L，pH 7.0-7.2，苯酚10～
100mg/L、吡啶10～100mg/L、喹啉10～100mg/L，以及余量的蒸馏水，以苯酚、吡啶、喹啉为唯一碳氮源；
6g/L的活性炭及余量的去离子水配制而成，所述交联剂由饱和硼酸溶液中溶解质量分数为
2％的氯化钙固体并用0.5mol/L的氢氧化钠调pH为6.22后得到，所述硬化处理条件为在4℃条件下交联处理12～24h，所述菌悬液与复合材料溶液的体积比为5～30:100，优选18～22:
100。
具体实施方式
(Patulibacter medicamentivorans)、蝗科副球菌(Paracoccus acridae)、角膜松解微杆菌(Microbacterium keratanolyticum)、庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)。赤红球菌(Rhodococcus ruber)、药用肉毒杆菌(Patulibacter medicamentivorans)、蝗科副球菌(Paracoccus acridae)、角膜松解微杆菌(Microbacterium keratanolyticum)、庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)的数量比为100：27：218：58：96。
3gSiO2、0.5gCaCO3和0.5g活性炭，活性炭要少量多次、快速搅拌防止结块。在集热式恒温加热磁力搅拌器中边搅拌边90℃水浴溶解，水浴过程中不断加水使混合溶液体积不变。待聚乙烯醇和海藻酸钠全溶得到复合材料溶液。之后在高温高压灭菌锅内121℃灭菌30min。将菌悬液和复合材料溶液无菌条件下混匀。菌悬液与复合材料溶液的体积比为A：100。
3次直至没有白色溶液生成，成品固定化载体小球的直径范围为0.3～0.7cm。
A 5 10 20 30
完全降解时间/h 24 18 11 15
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