一种丙烯酰胺电化学快速检测方法
专利汇可以提供一种丙烯酰胺电化学快速检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，包括以下步骤：1)修饰 电极 的制备，在 石墨 电极表面加入壳聚糖、羧基化 碳 纳米管 后电化学沉积纳米金颗粒；2)往修饰电极加入丙烯酰胺多克隆 抗体 孵育一段时间、用缓冲液冲洗后，使用 酪蛋白 封闭未结合的活性位点；3)将待测的丙烯酰胺经巯基丙酸衍生后的产物丙烯酰胺-巯基丙酸滴加到修饰电极中孵育一段时间，用缓冲液冲洗；4)将修饰电极与铂电极、Ag/AgCl参比电极组成三电极体系，丙烯酰胺-巯基丙酸会引起体系 电流 变化，将电流变化值与标准曲线进行对比确定丙烯酰胺-巯基丙酸的浓度，进而确定丙烯酰胺的浓度。本发明具有快速、准确、高灵敏的特点。本发明还公开一种丙烯酰胺多克隆抗体的制备方法。，下面是一种丙烯酰胺电化学快速检测方法专利的具体信息内容。
1.一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，包括以下步骤：
1)修饰电极的制备，在石墨电极表面加入壳聚糖、羧基化碳纳米管后电化学沉积纳米金颗粒；
2)固定抗体，往修饰电极加入丙烯酰胺多克隆抗体孵育一段时间、用缓冲液冲洗后，使用酪蛋白封闭未结合的活性位点；
3)将待测的丙烯酰胺经巯基丙酸衍生后的产物丙烯酰胺-巯基丙酸滴加到经步骤2)处理后的修饰电极中孵育一段时间，用缓冲液冲洗修饰电极；
4)将经步骤3)处理后的修饰电极与铂电极、Ag/AgCl参比电极组成三电极体系，丙烯酰胺-巯基丙酸会引起体系电流变化，将电流变化值与标准曲线进行对比确定丙烯酰胺-巯基丙酸的浓度，进而确定丙烯酰胺的浓度。
2.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述在石墨电极表面加入壳聚糖、羧基化碳纳米管的步骤如下：
1)碳纳米管羧基化：取多壁碳纳米管在H2SO4：HNO3＝3:1混合溶液中超声一段时间，然后在70±5℃条件下磁力搅拌一段时间；用水反复冲洗至pH值为中性，产物经离心、透析后得到的羧基化碳纳米管，真空干燥；
2)石墨电极经不同粒径的微米级氧化铝、麂皮依次抛光至镜面，然后超声波清洗，氮气吹干；
3)将上述制备的羧基化碳纳米管超声分散到去离子水中，取一定体积的分散好的羧基化碳纳米管，并加入同等体积的、质量浓度为0.2％的壳聚糖；涡旋震荡混匀后，滴加该混合溶液3～5μL到经过预处理的石墨电极表面，烘干即可。
3.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述电化学沉积纳米金颗粒是在氯金酸中进行的，具体为：在5mL、0.5mM的氯金酸水溶液中，采用循环伏安法电沉积金纳米颗粒，扫描电位为-0.3～0.3V，扫描速度为50mV s-1，扫描10段。
4.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述丙烯酰胺多克隆抗体的制备方法如下：
1)抗原的制备：
a.半抗原的合成
将丙烯酰胺与3-巯基丙酸反应，使丙烯酰胺分子结构上的烯烃与3-巯基丙酸上的巯基发生反应形成间隔臂，从而获得丙烯酰胺半抗原；
b.免疫原的制备
将丙烯酰胺半抗原与卵清蛋白偶联得到免疫原；
2)抗体的制备
将上述制备的免疫原诱导动物产生丙烯酰胺多克隆抗体。
5.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述标准曲线根据预先确定浓度的丙烯酰胺-巯基丙酸溶液、实验确定相应电流变化值后绘制出。
6.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，在所述步骤
2)和所述步骤3)中，孵育条件为：37℃孵育1h。
7.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，所述缓冲液为0.01M、pH7.4的PBST缓冲液。
8.根据权利要求1所述的一种丙烯酰胺电化学快速检测方法，其特征在于，经步骤2)处理后的修饰电极置于4℃的冰箱中备用。
9.一种丙烯酰胺多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)抗原的制备：
a.半抗原的合成
将丙烯酰胺与3-巯基丙酸反应，使丙烯酰胺分子结构上的烯烃与3-巯基丙酸上的巯基发生反应形成间隔臂，从而获得丙烯酰胺半抗原；
b.免疫原的制备
将丙烯酰胺半抗原与卵清蛋白偶联得到免疫原；
2)抗体的制备
将上述制备的免疫原诱导动物产生丙烯酰胺多克隆抗体。
一种丙烯酰胺电化学快速检测方法
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