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新的治疗剂传递系统

阅读：327发布：2022-06-21

专利汇可以提供新的治疗剂传递系统专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且描述了包含气体前体填充的包含 治疗 剂的微球体的治疗剂传递系统。也提供了使用这些微球体于治疗剂传递应用中的方法。包括其中包囊对比剂或药物的气体前体填充的治疗剂传递系统是优选的。也公开了制备这些脂质体的方法和设备，以及这些脂质体在治疗剂传递应用中的方法。，下面是新的治疗剂传递系统专利的具体信息内容。

1.一种靶定位治疗剂传递系统，包括温度活化的气体前 体填充的微球体，其中所述的气体前体填充的微球体包括治 疗化合物。
2.权利要求1的靶定位治疗剂传递系统，其中微球体包 括选自以下物质的气体前体：氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟 丙烷，全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯， 溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟— 2—丁炔，全氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3— 丁二烯，八氟环戊烯，六氟丙酮，异丙基乙炔，丙二烯，四氟丙 二烯，三氟化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯— 2—氟—1，3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3— 丁二烯，丁二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁 烯，2—丁烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟— 1—丁烯，全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲 基—1—丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯— 1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁 炔，2—溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，环丁烷，甲基环丁烷，八氟 环丁烷，全氟环丁烯，3—氯环戊烯，环丙烷，1，2—二甲基环 丙烷，1，1—二甲基—环丙烷，乙基环丙烷，甲基环丙烷，丁二 炔，3—乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二 甲胺，六氟二甲胺，二甲基乙胺，双(二甲基膦)胺，2，3—二甲 基—2—降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧 戊环—2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙 烷，1，1，2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷， 1，1—二氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二 氟乙烷，1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟 乙烷，1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷， 氯乙烷，一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一 硝基五氟乙烷，一亚硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙 基乙烯基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯， 1，2—二氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫 基三氟甲烷，二氟亚硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三 氟溴甲烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟 氯甲烷，二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟 甲烷，二氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟 碘甲烷，三氟硝基甲烷，三氟亚硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟 甲烷，三氟甲烷，三氟甲基亚磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲 基异丙基醚，乳酸甲酯，亚硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚， 氖，新戊烷，氮，一氧化二氮，2—羟基—1，2，3—十九烷酸三 甲酯，1—壬烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷， 4—氨基—4—甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(顺式)，2— 戊烯(反式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯邻苯二 甲酸，2，3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷， 1，2—环氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷， 七氟—1—硝基丙烷，七氟—1—亚硝基丙烷，全氟丙烷，丙 烯，1，1，1，2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙 烯(反式)，2—氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3— 三氟丙炔，3—氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4 —二氨基甲苯，三氟乙腈，三氟甲基过氧化物，三氟甲基硫化 物，六氟化钨，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
3.根据权利要求1的治疗剂传递系统，包括由选自下列 物质组成的类脂：脂肪酸类；溶血类脂类；卵磷脂(磷脂酰胆 碱)；二油酰基卵磷脂；二肉豆蔻酰基卵磷脂；二(十五酰基) 卵磷脂；二月桂酰基卵磷脂；二油酰基卵磷脂；二棕榈酰基卵 磷脂；二硬脂酰基卵磷脂；磷脂酰乙醇胺；二油酰基磷脂酰乙 醇胺；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神经)鞘脂 类；(神经)鞘磷脂；糖脂(glycolipids)；神经节苷脂GM1；神 经节苷脂GM2；糖脂类(glucolipids)；硫苷脂类；糖基鞘脂 类；磷脂酸；棕榈酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如 聚乙二醇，几丁质，透明质酸或聚乙烯吡咯烷酮的类脂类；含 磺酰化单—，双—，寡—或多糖类的类脂类；胆甾醇；胆甾醇 硫酸酯；胆甾醇半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；连接醚和酯 的脂肪酸的类脂类，聚合类脂类，二乙酰基磷酸酯，硬脂酰 胺，心磷脂，具有短链长为6—8个碳原子脂肪酸的磷脂类， 具有不对称酰基链的合成磷脂类，6—(5—胆甾烯—3β—基 氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油 酯，6—(5—胆甾烯—3β—基氧)己基—6—氨基—6—脱氧— 1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—胆甾烯—3β—基 氧己基—6—氨基—6—脱氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露 糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基) 十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基) 甲氨基)十八酰基]—2—氨基棕榈酸；胆甾烯基—4′—三甲 铵丁酸盐；N—琥珀酰基二油酰基磷脂酰乙醇胺；1，2—二油 酰基—sn—甘油；1，2—二棕榈酰基—sn—3—琥珀酰基甘 油；1，3—二棕榈酰基—2—琥珀酰基甘油；1—十六烷基—2 —棕榈酰基甘油磷(酸)乙醇胺；棕榈酰基高半胱氨酸；和/或 它们的组合；月桂基三甲基溴化铵，十六烷基三甲基溴化铵， 肉豆蔻基三甲基溴化铵，烷基二甲基苄基氯化铵，苄基二甲 基十二烷基溴化铵，苄基二甲基十六烷基溴化铵，苄基二甲 基十四烷基溴化铵，十六烷基二甲基乙基溴化铵，或十六烷 基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，全 氟dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁铵以及 进一步包括含由共价键键合聚合物的类脂。
4.根据权利要求3的治疗剂传递系统，其中所述的聚合 物的分子量在400到200,000之间。
5.根据权利要求3的治疗剂传递系统，其中所述的聚合 物的分子量在1,000到20,000之间。
6.根据权利要求3的治疗剂传递系统,其中所述的聚合 物的分子量在2,000到8,000之间。
7.根据权利要求3的治疗剂传递系统，其中含由共价键 键合聚合物的类脂由式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX组成，其中的X为醇基团，Y为OH或烷基以及n为 0到10,000。
8.根据权利要求3的治疗剂传递系统，其中所述的聚合 物选自聚乙二醇，聚乙烯吡咯咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
9.根据权利要求3的治疗剂传递系统，其中所述聚合物 为聚乙二醇。
10.根据权利要求3的治疗剂传递系统，其中所述的类 脂的摩尔数占约1％到约20％。
11.根据权利要求1的治疗剂传递系统，包括盐水，甘油 和丙二醇组成的混合类脂溶剂系统。
12.根据权利要求1的治疗剂传递系统，脂肪酸类；溶血 类脂类；卵磷脂(磷脂酰胆碱)；二油酰基卵磷脂；二肉豆蔻酰 基卵磷脂；二(十五酰基)卵磷脂；二月桂酰基卵磷脂；二油酰 基卵磷脂；二棕榈酰基卵磷脂；二硬脂酰基卵磷脂；磷脂酰乙 醇胺；二油酰基磷脂酰乙醇胺；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰甘油； 磷脂酰肌醇；(神经)鞘脂类；(神经)鞘磷脂；糖脂(glycol- ipids)；神经节苷脂GM1；神经节苷脂GM2；糖脂类(glucol- ipids)；硫苷脂类；糖基鞘脂类；磷脂酸；棕榈酸；硬脂酸；花生 四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，几丁质，透明质酸或聚 乙烯吡咯烷酮的类脂类；含磺酰化单—，双—，寡—或多糖类 的类脂类；胆甾醇；胆甾醇硫酸酯；胆甾醇半琥珀酸酯；生育 酚半琥珀酸酯；连接醚和酯的脂肪酸的类脂类，聚合类脂类， 二乙酰基磷酸酯，硬脂酰胺，心磷脂，具有短链长为6—8个 碳原子脂肪酸的磷脂类，具有不对称酰基链的合成磷脂类，6 —(5—胆甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖 苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—胆甾烯—3β—基氧)己基 —6—氨基—6—脱氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6 —(5—胆甾烯—3β—基氧己基—6—氨基—6—脱氧—1—硫 代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3 —基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香 豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酰基]—2—氨基棕榈酸；胆 甾烯基—4′—三甲铵丁酸盐；N—琥珀酰基二油酰基磷脂酰 乙醇胺；1，2—二油酰基—sn—甘油；1，2—二棕榈酰基—sn —3—琥珀酰基甘油；1，3—二棕榈酰基—2—琥珀酰基甘油； 1—十六烷基—2—棕榈酰基甘油磷(酸)乙醇胺；棕榈酰基高 半胱氨酸；和/或它们的组合；月桂基三甲基溴化铵，十六烷 基三甲基溴化铵，肉豆蔻基三甲基溴化铵，烷基二甲基苄基 氯化铵，苄基二甲基十二烷基溴化铵，苄基二甲基十六烷基 溴化铵，苄基二甲基十四烷基溴化铵，十六烷基二甲基乙基 溴化铵，或十六烷基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基 溴，全氟萘烷，鎓dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全 氟三丁铵以及进一步包括含净负电荷的类脂。
13.根据权利要求12的治疗剂传递系统，其中所述的含 净负电荷类脂包括磷脂酸和磷脂酰甘油。
14.根据权利要求12的治疗剂传递系统，其中所述的含 净负电荷的类脂包括磷脂酸。
15.根据权利要求12的治疗剂传递系统，其中所述的含 净电荷的类脂摩尔数约占1％到20％。
16.根据权利要求1的治疗剂传递系统，进一步包括一 种或多种粘性活性化合物。
17.根据权利要求16的治疗剂传递系统，其中所述的粘 性活性化合物选自醇类，聚醇类，丙二醇，甘油，山梨醇，纤维 素，甲基纤维素，黄原胶，羟甲基纤维素，碳水化合物类，磷 酸化的碳水化合物类，以及磺化碳水化合物类。
18.根据权利要求1的治疗剂传递系统，进一步包括一 种或多种选自下列组成的乳化剂：阿拉伯胶，胆甾醇，二乙醇 胺，单硬脂酸甘油酯，羊毛脂醇类，卵磷脂，单甘油酯，双甘油 酯，单乙醇胺，油酸，油醇，poloxamer，硬脂酸—50—聚氧乙 烯酯，聚烃氧基—35—caster油，聚烃氧基—10—油基醚，聚 烃氧基—20—十六烷基硬脂酰基醚，硬脂酸—40—聚烃氧基 酯，聚山梨酸酯20，聚山梨酸酯40，聚山梨酸酯60，聚山梨 酸酯80，二乙酸丙二醇酯，单硬脂酸丙二醇酯，月桂基硫酸 钠，硬脂酸钠，脱水山梨醇单硬脂酸，trolamine，乳化蜡。
19.根据权利要求1的治疗剂传递系统，进一步包括选 自下列组成的悬浮剂：阿拉伯胶，琼脂，藻酸，单硬脂酸铝，膨 润土，糖糊，聚羧乙烯934P，羧甲基纤维素，钙和钠以及钠 12，鹿角胶，纤维素，糊精，明胶，瓜尔胶，羟乙基纤维素，羧丙 基甲基纤维素，硅酸镁铝，甲基纤维素，果胶，聚环氧乙烷，聚 乙烯醇，聚乙烯吡咯酮，藻酸丙二醇酯，二氧化硅，藻酸钠，黄 蓍胶，黄原胶。
20.根据权利要求1的治疗剂传递系统，进一步包括选 自下列组成的载体(赋形剂)：杏仁油，王米油，棉籽油，油酸 乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，棕檬酸异丙酯，矿物油，肉豆蔻醇，辛 基十二醇，橄榄油，花生油，桃仁油芝麻油，豆油，以及角鲨 烯。
21.根据权利要求1的治疗剂传递系统，包括一种或多 种聚合物微粒类脂。
22.根据权利要求21的治疗剂传递系统，其中所述的聚 合物具有约500到约150,000,000的分子量。
23.根据权利要求21的治疗剂传递系统，其中所述的聚 合物为蛋白质。
24.根据权利要求21的治疗剂传递系统，其中所述的聚 合物为合成聚合物。
25.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述的气 体前体是在体内由温度活化的。
26.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述的气 体前体具有约37℃的活化温度。
27.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述的气 体前体具有-150℃到80℃的活化温度。
28.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述的气 体前体具有-125℃到70℃的活化温度。
29.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述的气 体前体具有-100℃到70℃的活化温度。
30.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中微球体包 括相转变温度大于约20℃的物质。
31.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中微球体的 外直径小于约100μm。
32.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中微球体的 外直径小于约10μm。
33.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中治疗化合 物包括遗传物质。
34.根据权利要求33的治疗剂传递系统，其中遗传物质 为脱氧核糖核酸。
35.根据权利要求33的治疗剂传递系统，其中遗传物质 为核糖核酸。
36.根据权利要求33的治疗剂传递系统，包括反义核糖 核酸或反义脱氧核糖核酸。
37.根据权利要求33的治疗剂传递系统，其中微球体进 一步包括阳离子类脂物质。
38.根据权利要求37的治疗剂传递系统，其中阳离子类 脂包括N—[1—(2，3—二油酰氧基)丙基]—N，N，N—三甲 基氯化铵。
39.根据权利要求1的治疗剂传递系统，包括类脂，选自 二硬脂酰基卵磷脂，二棕榈酰基卵磷酯和蛋卵磷酯。
40.根据权利要求33的治疗剂传递系统，其中治疗化合 物包括编码选自下列基因的至少一部分的脱氧核糖核酸：人 类主要组织兼容基因，营养障碍，Cystic Fibrosis跨膜传导 调节因子，白介素—2和肿瘤坏死因子。
41.根据权利要求33的治疗剂传递系统，其中治疗化合 物包括能够键合至少一部分编码Ras脱氧核糖核酸的反义 低核苷酸。
42.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中治疗化合 物包括单克隆抗体。
43.根据权利要求42的治疗剂传递系统，其中单克隆抗 体能够结合黑素瘤抗原。
44.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中微球体包 括气体填充的脂质体，在其内部基本上无水，但其中包埋治 疗化合物。
45.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中微球体包 括由真空干燥气体滴注法制备的气体填充的脂质体，在其中 包埋治疗化合物。
46.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中微球体包 括由振荡气体前体滴注法通过凝胶态制备的填充气体前体 的脂质体。
47.将治疗化合物控制传递到患者区域的方法，包括：
(i)以包含治疗化合物的温度活化的填充气体前体的微 球体对患者给药；
(ii)用能量监测微球体以确定液态到气态的相转变，以 及监测微球体在病区的存在；
(iii)用能量破裂微球体在病区释放治疗化合物的能量 破裂微球体。
48.根据权利要求47的方法，其中所述的能量选自超 声，微波，射频能，导磁振荡能，以及光能。
49.根据权利要求48的方法，其中超声能包括连续波超 声能。
50.根据权利要求48的方法，其中所述的超声能选自调 幅和调频脉冲。
51.根据权利要求48的方法，其中所述的超声能作为选 自PRICH脉冲和CHIRP脉冲的脉冲应用。
52.根据权利要求48的方法，其中所述的光能选自激光 和红外能。
53.根据权利要求47的方法，其中所述的能量从外部对 患者施用。
54.根据权利要求47的方法，其中所述的能量以内诊镜 形式应用于患者。
55.根据权利要求47的方法，其中微球体经静脉内给 药。
56.根据权利要求47的方法，其中微球体包括由选自下 列物质组成的类脂：脂肪酸类；溶血类脂类；卵磷脂(磷脂酰 胆碱)；二油酰基卵磷脂；二肉豆蔻酰基卵磷脂；二(十五酰 基)卵磷脂；二月桂酰基卵磷脂；二油酰基卵磷脂；二棕榈酰 基卵磷脂；二硬脂酰基卵磷脂；磷脂酰乙醇胺；二油酰基磷脂 酰乙醇胺；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神经) 鞘脂类；(神经)鞘磷脂；糖脂(glycolipids)；神经节苷脂 GM1；神经节苷脂GM2；糖脂类(glucolipids)；硫苷脂类；糖 基鞘脂类；磷脂酸；棕榈酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚 合物如聚乙二醇，几丁质，透明质酸或聚乙烯吡咯烷酮的类 脂类；含磺酰化单—，双—，寡—或多糖类的类脂类；胆甾醇； 胆甾醇硫酸酯；胆甾醇半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；连接 醚和酯的脂肪酸的类脂类，聚合类脂类，二乙酰基磷酸酯，硬 脂酰胺，心磷脂，具有短链长为6—8个碳原子脂肪酸的磷脂 类，具有不对称酰基链的合成磷脂类，6—(5—胆甾烯—3β— 基氧)—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘 油酯，6—(5—胆甾烯—3β—基氧)己基—6—氨基—6—脱氧 —1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷，6—(5—胆甾烯—3β— 基氧己基—6—氨基—6—脱氧—1—硫代—α—D—吡喃甘 露糖苷，12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨 基)十八酸；N—[12—(((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰 基)甲氨基)十八酰基]—2—氨基棕榈酸；胆甾烯基—4′—三 甲铵丁酸盐；N—琥珀酰基二油酰基磷脂酰乙醇胺；1，2—二 油酰基—sn—甘油；1，2—二棕榈酰基—sn—3—琥珀酰基甘 油；1，3—二棕榈酰基—2—琥珀酰基甘油；1—十六烷基—2 —棕榈酰基甘油磷(酸)乙醇胺；棕榈酰基高半胱氨酸；和/或 它们的组合；月桂基三甲基溴化铵，十六烷基三甲基溴化铵， 肉豆蔻基三甲基溴化铵，烷基二甲基苄基氯化铵，苄基二甲 基十二烷基溴化铵，苄基二甲基十六烷基溴化铵，苄基二甲 基十四烷基溴化铵，十六烷基二甲基乙基溴化铵，或十六烷 基溴化吡啶鎓五氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，鎓 dodecalin，全氟辛基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁铵。
57.根据权利要求47的方法，其中微球体用选自下列组 成的气体填充：氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁 烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷， 八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全 氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八 氟环戊烯，六氟丙酮，异丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟 化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1， 3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁 二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁 烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯， 全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1— 丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1， 4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2— 溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，环丁烷，甲基环丁烷，八氟环丁 烷，全氟环丁烯，3—氯环戊烯，环丙烷，1，2—二甲基环丙烷， 1，1—二甲基—环丙烷，乙基环丙烷，甲基环丙烷，丁二炔，3 —乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺， 六氟二甲胺，二甲基乙胺，双(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2 —降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊环— 2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1， 2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二 氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1 —氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1— 氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷， 一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五 氟乙烷，一亚硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯 基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二 氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟 甲烷，二氟亚硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲 烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷， 二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二 氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷， 三氟硝基甲烷，三氟亚硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三 氟甲烷，三氟甲基亚磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基异丙基 醚，乳酸甲酯，亚硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷， 氮，一氧化二氮，2—羟基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬 烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4 —甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(顺式)，2—戊烯(反 式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯邻苯二甲酸，2， 3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—环 氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1 —硝基丙烷，七氟—1—亚硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1， 2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2 —氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3 —氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲 苯，三氟乙腈，三氟甲基过氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化 钨，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
58.根据权利要求47的方法，其中微球体以全氟丁烷填 充。
59.根据权利要求47的方法，其中所述的微球体包括含 共价键键合聚合物的类脂。
60.根据权利要求59的方法，其中所述的聚合物的分子 量为400到200,000。
61.根据权利要求59的方法，其中所述的聚合物的分子 量为1,000到20,000。
62.根据权利要求59的方法，其中所述的聚合物分子量 为2,000到8,000。
63.根据权利要求59的方法，其中所述的含共价键键合 聚合物的类脂包括式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX化合物，其中X为醇基团，Y为OH或烷基，n为零 到10,000。
64.根据权利要求59的方法，其中所述的聚合物选自聚 乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
65.根据权利要求59的方法，其中所述的聚合物为聚乙 二醇。
66.根据权利要求59的方法，其中所述的类脂的摩尔数 约占1％到20％。
67.根据权利要求47的方法，包括盐水，甘醇和丙二醇 组成的混合类脂溶剂系统。
68.根据权利要求47的方法，包括负电荷类脂。
69.根据权利要求68的方法，其中所述的负电荷类脂包 括磷脂酸和磷脂酰甘油。
70.根据权利要求68的方法，其中所述的负电荷类脂包 括磷脂酸。
71.根据权利要求68的方法，其中所述的负电荷类脂的 摩尔数约占1％到20％。
72.根据权利要求47的方法，其中所述的微球体在体内 活化。
73.根据权利要求47的方法，其中所述的微球体悬浮于 水溶性介质中贮存。
74.根据权利要求47的方法，其中微球体具有约2dB 到约20dB的反射(率)。
75.根据权利要求47的方法，其中微球体包括气体填充 的脂质体，在其内部基本上无水，但其中包囊治疗化合物。
76.根据权利要求47的方法，其中微球体包括由振荡气 体前体滴注法通过凝胶态制备的气体前体填充的脂质体。
77.制备包括温度活化的气体前体填充的脂质体的靶定 位治疗剂传递系统的方法，所述方法包括在气体前体存在 下，低于类脂凝胶态向液晶态相转变的温度以及低于气体前 体活化温度的温度下，振荡含类脂和治疗化合物的水溶液的 步骤。
78.根据权利要求77的方法，其中所述的方法在气体前 体的活化温度下进行。
79.根据权利要求77的方法，其中振荡步骤包括涡旋。
80.根据权利要求77的方法，进一步包括过滤和热消毒 (杀菌)所述类脂溶液的步骤。
81.根据权利要求77的方法，进一步包括通过至少一个 选定孔径的滤器压出气体前体填充的脂质体的步骤。
82.根据权利要求81的方法，其中孔经约为10μm或更 小。
83.根据权利要求77的方法，进一步包括水合干燥的类 脂形成类脂水溶液。
84.制备包括气体前体填充脂质体的靶定位治疗剂传递 系统的方法，所述方法包括步骤：在气体前体存在下，在低于 类脂凝胶态向液晶态相转变的温度下振荡类脂的水溶液，形 成气体前体填充的脂质体；以及向所述的脂质体中加入治疗 化合物。
85.根据权利要求84的方法，其中所述的方法在气体前 体的活化温度下进行。
86.根据权利要求84的方法，其中振荡步骤包括涡旋。
87.根据权利要求84的方法，进一步包括过滤和加热灭 菌所述类脂水溶液。
88.根据权利要求84的方法，进一步包括通过至少一个 选定孔径的滤器压出脂质体。
89.根据权利要求88的方法，其中孔径约10μm或更 小。
90.根据权利要求84的方法，进一步包括水合干燥的类 脂以形成类脂水溶液。
91.制备包含气体前体填充的脂质体的靶定位治疗剂传 递系统的方法，所述方法包括在气体前体存在下，振荡含类 脂和治疗化合物的水溶液的步骤；以及分离所得的治疗用气 体前体填充的脂质体。
92.制备包含气体前体填充的脂质体的靶定位治疗剂传 递系统的方法，所述方法包括步骤：在气体前体存在下，低于 类脂的凝胶态向液晶态相转变的温度下，振荡含类脂的水溶 液，形成气体前体填充的脂质体；加入治疗化合物；以及分离 治疗用的所得气体前体填充脂质体。
93.制备含气体前体填充的脂质体微球体的方法，包括 步骤：
a)将含类脂和治疗化合物的水溶液引入容器中；
b)将气体前体引入容器中；
c)在气体前体存在下振荡所述的类脂水溶液，以将至少 部分所述的气体前体滴注入所述的水溶液中，所述振荡是在 充分的强度和时间内进行以在上述水溶液上面产生含气体 前体填充的脂质体泡沫；以及
d)从所述的容器中提取至少部分所述的含气体前体填 充的脂质体泡沫。
94.根据权利要求93的方法，进一步包括冷却所述水溶 液的步骤。
95.根据权利要求94的方法，其中冷却所述水溶液的步 骤包括在低于所述水溶液中的所述类脂凝胶态向液晶态相 转变的温度下，冷却所述水溶液。
96.根据权利要求93的方法，进一步包括加压所述容器 的步骤。
97.根据权利要求93的方法，进一步包括筛分所述气体 前体填充的脂质体的步骤。
98.根据权利要求97的方法，其中筛分所述气体前体充 的脂质体的步骤包括控制从所述容器中提取的所述气体前 体填充的脂质体的大小。
99.根据权利要求97的方法，其中通过滤器提取所述气 体前体填充的脂质体来控制从所述容器中提取的所述气体 前体填充的脂质体的大小。
100.根据权利要求97的方法，其中通过在所述的容器 内设定一个提取所述气体前体填充的脂质体的位置，来控制 从所述容器中提取的所述气体前体填充的脂质体的大小。
101.根据权利要求97的方法，其中通过在从所述容器 提取所述气体前体填充的脂质体步骤中，调节容器内提取所 述气体前体填充的脂质体的位置，来控制从所述容器中提取 所述气体前体填充的脂质体的大小。
102.根据权利要求97的方法，其中筛分所述气体前体 填充的脂质体步骤包括经滤器压出所述提取的气体前体填 充的脂质体。
103.根据权利要求97的方法，其中筛分所述气体前体 填充的脂质体的步骤包括控制所述振荡的强度。
104.根据权利要求93的方法，进一步包括将从所述容 器中提取的所述气体前体填充的脂质体流入注射器而不进 一步处理的步骤。
105.根据权利要求93的方法，其中振荡所述水溶液的 步骤包括以每分钟至少60次的频率振荡的步骤。
106.根据权利要求93的方法，其中振荡所述水溶液的 步骤包括涡旋所述水溶液的步骤。
107.根据权利要求93的方法，其中振荡所述水溶液的 步骤包括振荡述容器。
108.根据权利要求93的方法，其中振荡所述水溶液的 步骤包括在小于约30分钟内以足够的强度振荡所述水溶液 以产生所述的含气体前体填充的脂质体泡沫。
109.根据权利要求93的方法，其中振荡所述水溶液的 步骤包括控制基于检测所述含气体前体填充的脂质体泡沫 所进行的所述振荡的时间的步骤。
110.根据权利要求109的方法，其中控制基于检测所述 含气体前体的脂质体泡沫所进行的所述振荡步骤包括振荡 至预确定体积的所述泡沫被检测到为止。
111.根据权利要求93的方法，其中所述方法在气体前 体的活化温度下进行。
112.制备含气体填充的脂质体治疗剂的设备，包括：
a)容器；
b)将由类脂和治疗化合物组成的水溶液引入所述容器 的装置；
c)将气体前体引入所述容器的装置；
d)在所述容器中将所述气体前体滴注入所述溶液中的 装置，由此在所述容器中产生含气体前体填充的脂质体的泡 沫。
113.根据权利要求112的设备，其中引入类脂水溶液的 装置包括引入干燥类脂的装置，引入治疗化合物的装置，以 及将水溶性介质引入所述容器的装置。
114.根据权利要求112的设备，其中所述的滴注所述气 体前体入所述水溶液的装置包括振荡所述水溶液的装置。
115.根据权利要求112的设备，其中所述振荡所述水溶 液的装置包括振荡所述容器的装置。
116.根据权利要求112的设备，其中所述振荡所述水溶 液的装置包括涡旋所述水溶液的装置。
117.根据权利要求112的设备，进一步包括冷却所述水 溶液的装置。
118.根据权利要求112的设备，进一步包括从所述容器 中提取所述泡沫的装置。
119.根据权利要求112的设备，其中从所述容器提取所 述泡沫的装置包括调节垂直位置的装置，此位置为从所述容 器提取所述泡沫的位置。
120.根据权利要求112的设备，进一步包括将所述提取 的气体前体填充的脂质体流经滤器装配的装置。
121.根据权利要求120的设备，其中所述的滤器装配包 括占据预先确定分开距离的第一级和第二级滤器。
122.根据权利要求112的设备，进一步包括筛分所述气 体前体填充的脂质体的装置。
123.根据权利要求112的设备，进一步包括与所述容器 流体连接的滤器。
124.根据权利要求112的设备，进一步包括加压所述容 器的装置。
125.根据权利要求112的设备，进一步包括将所述容器 中产生的所述气体前体填充的脂质体流入注射器而基本上 不进一步处理的装置。
126.根据权利要求112的设备，进一步包括调节温度的 装置。
127.根据权利要求126的设备，其中所述温度调节至 37℃。
128.由经真空干燥气体滴注方法制备的气体填充的脂 质体组成的且其中包囊药物的药物传递系统，其中所述气体 由气体前体提供。
129.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述脂质 体由选自下述类脂物质组成：脂肪酸类，溶血类脂类，二棕榈 酰卵磷脂，二硬脂酰卵磷脂，卵磷脂，磷脂酸，(神经)鞘脂类， 胆甾醇，硫酸胆甾醇酯，半琥珀酸胆甾醇酯，生育酚半琥珀酸 酯，磷脂酰基乙醇胺，磷脂酰基肌醇，糖基鞘脂类，糖脂类 (glucolipids)，糖脂类(glycolipids)硫苷脂，含磺化单—，双 —，寡—或多糖类脂类，含醚和酯连接脂肪酸的类脂类，以及 聚合物类脂类。
130.根据权利要求128的药物传递系统，其中气体前体 选自：氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊 烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷， 1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全 氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊烯， 六氟丙酮，异丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2 —丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二 烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1 —氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲 基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2 —丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3 —炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4— 六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁 醛，硫化羰，丁烯腈，环丁烷，甲基环丁烷，八氟环丁烷，全氟 环丁烯，3—氯环戊烯，环丙烷，1，2—二甲基环丙烷，1，1—二 甲基—环丙烷，乙基环丙烷，甲基环丙烷，丁二炔，3—乙基— 3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲 胺，二甲基乙胺，双(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片 烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊环—2—酮，4 —甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四 氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷， 1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯— 1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1， 1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五 氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷， 一亚硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1 —二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯， 甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二 氟亚硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟 硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯 甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷， 二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝 基甲烷，三氟亚硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷， 三氟甲基亚磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基异丙基醚，乳酸 甲酯，亚硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧 化二氮，2—羟基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3— 炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基 —2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(顺式)，2—戊烯(反式)，3—溴 —1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯邻苯二甲酸，2，3，6—三甲 基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—环氧丙烷，2，2 —二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷， 七氟—1—亚硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟 —2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3 —氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯， 六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙 腈，三氟甲基过氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化钨，乙烯乙 炔，乙烯醚，以及氙。
131.根据权利要求128的药物传递系统，其中微球体以 全氟丁烷填充。
132.根据权利要求128的药物传递系统，使一步包括含 共价键键合的类脂。
133.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述聚合 物的分子量在400到200,000。
134.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述聚合 物的分子量在1,000到20,000。
135.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述聚合 物的分子量在2,000到8,000。
136.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述的含 共价键键合聚合物的类脂包括式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX化合物，其中X为醇基，Y为OH或烷基， n为0到10,000。
137.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述聚合 物选自：聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
138.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述聚合 物为聚乙二醇。
139.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述类脂 的摩尔数约占1％到约20％。
140.根据权利要求132的药物传递系统，其中所述类脂 包括盐水，甘油和丙二醇的混合溶剂系统。
141.根据权利要求132的药物传递系统，包括负电荷类 脂。
142.根据权利要求141的药物传递系统，其中所述负电 荷类脂包括磷脂酸和磷脂酰基甘油。
143.根据权利要求141的药物传递系统，其中所述负电 荷类脂包括磷脂酸。
144.根据权利要求141的药物传递系统，其中所述负电 荷类脂摩尔数占约1％到约20％。
145.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述脂质 体在体内活化。
146.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述脂质 体包括选自下列组成的类脂：
脂肪酸类；溶血类脂类；卵磷脂(磷脂酰胆碱)；二油酰基 卵磷脂；二肉豆蔻酰基卵磷脂；二(十五酰基)卵磷脂；二月桂 酰基卵磷脂；二油酰基卵磷脂；二棕榈酰基卵磷脂；二硬脂酰 基卵磷脂；磷脂酰乙醇胺；二油酰基磷脂酰乙醇胺；磷脂酰丝 氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神经)鞘脂类；(神经)鞘磷 脂；糖脂(g1ycolipids)；神经节苷脂GM1；神经节苷脂GM2； 糖脂类(g1ucolipids)；硫苷脂类；糖基鞘脂类；磷脂酸；棕榈 酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，几丁 质，透明质酸或聚乙烯吡咯烷酮的类脂类；含磺酰化单—，双 —，寡—或多糖类的类脂类；胆甾醇；胆甾醇硫酸酯；胆甾醇 半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；连接醚和酯的脂肪酸的类 脂类，聚合类脂类，二乙酰基磷酸酯，硬脂酰胺，心磷脂，具有 短链长为6—8个碳原子脂肪酸的磷脂类，具有不对称酰基 链的合成磷脂类，6—(5—胆甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β —D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—胆甾烯 —3β—基氧)己基—6—氨基—6—脱氧—1—硫代—β—D— 吡喃半乳糖苷，6—(5—胆甾烯—3β—基氧己基—6—氨基— 6—脱氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二 乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12— (((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酰基] —2—氨基棕榈酸；胆甾烯基—4′—三甲铵丁酸盐；N—琥珀 酰基二油酰基磷脂酰乙醇胺；1，2—二油酰基—sn—甘油；1， 2—二棕榈酰基—sn—3—琥珀酰基甘油；1，3—二棕榈酰基 —2—琥珀酰基甘油；1—十六烷基—2—棕榈酰基甘油磷 (酸)乙醇胺；棕榈酰基高半胱氨酸；和/或它们的组合；月桂 基三甲基溴化铵，十六烷基三甲基溴化铵，肉豆蔻基三甲基 溴化铵，烷基二甲基苄基氯化铵，苄基二甲基十二烷基溴化 铵，苄基二甲基十六烷基溴化铵，苄基二甲基十四烷基溴化 铵，十六烷基二甲基乙基溴化铵，或十六烷基溴化吡啶鎓五 氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，鎓dodecalin，全氟辛 基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁铵。
147.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述的脂 质体由选自下列气体填充：1—氟丁烷，2—甲基丁烷，2—甲 基—1—丁烯，2—甲基—2—丁烯，2—甲基—1—丁烯—3— 炔，以及3—甲基—1—丁烯。
148.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述的脂 质体由1—氟丁烷填充。
149.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述的脂 质体悬浮于水溶介质中贮存。
150.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述脂质 体干燥贮存。
151.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述脂质 体具有至少三周的稳定性。
152.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述的脂 质体具有至少约2dB的反射率。
153.根据权利要求128的药物传递系统，其中所述的脂 质体具有约2dB到约20dB的反射率。
154.由在其内部基本上无水且在其中包囊药物的气体 填充脂质体组成的药物传递系统，其中所述气体由气体前体 提供。
155.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述脂质 体包括选自下述物质的类脂物质：脂肪酸，溶血类脂类，二棕 榈酰基卵磷脂，二硬脂酰基卵磷脂，卵磷脂，磷脂酸，鞘脂类， 胆甾醇，胆甾醇半琥珀酸酯，生育酚半琥珀酸酯，磷脂酰基乙 醇胺，磷脂酰基肌醇，糖基类脂类(glucolipids)，糖基类脂类 (glycolipids)，硫苷脂类，含磺化单—，双—，寡—或多糖的 类脂类，与醚和酯链连脂肪酸的类脂类，以及聚合类脂类。
156.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述脂质 体包括选自下列物质组成的类脂：
脂肪酸类；溶血类脂类；卵磷脂(磷脂酰胆碱)；二油酰基 卵磷脂；二肉豆蔻酰基卵磷脂；二(十五酰基)卵磷脂；二月桂 酰基卵磷脂；二油酰基卵磷脂；二棕榈酰基卵磷脂；二硬脂酰 基卵磷脂；磷脂酰乙醇胺；二油酰基磷脂酰乙醇胺；磷脂酰丝 氨酸；磷脂酰甘油；磷脂酰肌醇；(神经)鞘脂类；(神经)鞘磷 脂；糖脂(glycolipids)；神经节苷脂GM1；神经节苷脂GM2； 糖脂类(g1ucolipids)；硫苷脂类；糖基鞘脂类；磷脂酸；棕榈 酸；硬脂酸；花生四烯酸；油酸；含聚合物如聚乙二醇，几丁 质，透明质酸或聚乙烯吡咯烷酮的类脂类；含磺酰化单—，双 —，寡—或多糖类的类脂类；胆甾醇；胆甾醇硫酸酯；胆甾醇 半琥珀酸酯；生育酚半琥珀酸酯；连接醚和酯的脂肪酸的类 脂类，聚合类脂类，二乙酰基磷酸酯，硬脂酰胺，心磷脂，具有 短链长为6—8个碳原子脂肪酸的磷脂类，具有不对称酰基 链的合成磷脂类，6—(5—胆甾烯—3β—基氧)—1—硫代—β —D—吡喃半乳糖苷，二半乳糖基二甘油酯，6—(5—胆甾烯 —3β—基氧)己基—6—氨基—6—脱氧—1—硫代—β—D— 吡喃半乳糖苷，6—(5—胆甾烯—3β—基氧己基—6—氨基— 6—脱氧—1—硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7′—二 乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酸；N—[12— (((7′—二乙氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酰基] —2—氨基棕榈酸；胆甾烯基—4′—三甲铵丁酸盐；N—琥珀 酰基二油酰基磷脂酰乙醇胺；1，2—二油酰基—sn—甘油；1， 2—二棕榈酰基—sn—3—琥珀酰基甘油；1，3—二棕榈酰基 —2—琥珀酰基甘油；1—十六烷基—2—棕榈酰基甘油磷 (酸)乙醇胺；棕榈酰基高半胱氨酸；和/或它们的组合；月桂 基三甲基溴化铵，十六烷基三甲基溴化铵，肉豆蔻基三甲基 溴化铵，烷基二甲基苄基氯化铵，苄基二甲基十二烷基溴化 铵，苄基二甲基十六烷基溴化铵，苄基二甲基十四烷基溴化 铵，十六烷基二甲基乙基溴化铵，或十六烷基溴化吡啶鎓五 氟十八烷基碘，全氟辛基溴，全氟萘烷，鎓dodecalin，全氟辛 基碘，全氟三丙胺，和全氟三丁铵。
157.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述脂质 体由选自下述物质的气体填充：1—氟丁烷，2—甲基丁烷，2 —甲基—1—丁烯，2—甲基—2—丁烯，2—甲基—1—丁烯— 3—炔，以及3—甲基—1—丁炔。
158.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述的脂 质体以1—氟丁烷填充。
159.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述的脂 质体悬浮于水溶性介质中贮存。
160.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述脂质 体干燥贮存。
161.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述的脂 质体具有贮存期限稳定性至少约三周。
162.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述的脂 质体具有至少的2dB的反射率。
163.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述的脂 质体具有约2dB到约20dB的反射率。
164.根据权利要求154的药物传递系统，其中气体前体 选自下列物质：氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁 烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷， 八氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全 氟戊烯，全氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八 氟环戊烯，六氟丙酮，异丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟 化硼，1，2—丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1， 3—丁二烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁 二烯，1—氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁 烯，2—甲基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯， 全氟—2—丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1— 丁烯—3—炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1， 4，4，4—六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2— 溴—丁醛，硫化羰，丁烯腈，环丁烷，甲基环丁烷，八氟环丁 烷，全氟环丁烯，3—氯环戊烯，环丙烷，1，2—二甲基环丙烷， 1，1—二甲基—环丙烷，乙基环丙烷，甲基环丙烷，丁二炔，3 —乙基—3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺， 六氟二甲胺，二甲基乙胺，双(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2 —降冰片烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊环— 2—酮，4—甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1， 2，2—四氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二 氯乙烷，1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1 —氯—1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1— 氯—1，1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷， 一氟五氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五 氟乙烷，一亚硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯 基醚，1，1—二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二 氟乙烯，甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟 甲烷，二氟亚硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲 烷，二氟硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷， 二氟氯甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二 氟甲烷，二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷， 三氟硝基甲烷，三氟亚硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三 氟甲烷，三氟甲基亚磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基异丙基 醚，乳酸甲酯，亚硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷， 氮，一氧化二氮，2—羟基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬 烯—3—炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4 —甲基—2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(顺式)，2—戊烯(反 式)，3—溴—1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯邻苯二甲酸，2， 3，6—三甲基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—环 氧丙烷，2，2—二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1 —硝基丙烷，七氟—1—亚硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1， 2，3，3—六氟—2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2 —氯丙烯，3—氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3 —氟苯乙烯，六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲 苯，三氟乙腈，三氟甲基过氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化 钨，乙烯乙炔，乙烯醚，以及氙。
165.根据权利要求154的药物传递系统，其中微球体用 全氟丁烷填充。
166.根据权利要求154的药物传递系统，进一步包括由 共价键键合聚合物的类脂。
167.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述聚合 物的分子量为400到200,000。
168.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述聚合 物的分子量为1,000到20,000。
169.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述聚合 物的分子量为2,000到8,000。
170.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述含共 价键键合聚合物的类脂包括式XCHY—(CH2)n—O—(CH2)n—YCHX化合物，其中X为醇基，Y为OH或烷基， n为0到10,000。
171.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述的聚 合物选自聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇和聚丙二醇。
172.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述聚合 物为聚乙二醇。
173.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述类脂 的摩尔数占约1％到约20％。
174.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述类脂 包括由盐水，甘油和丙二醇组成的混合溶剂系统。
175.根据权利要求166的药物传递系统，包括负电荷类 脂。
176.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述负电 荷类脂包括磷脂酸和磷脂酰基甘油。
177.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述负电 荷类脂包括磷脂酸。
178.根据权利要求166的药物传递系统，其中所述负电 荷类脂的摩尔数占约1％到约20％。
179.根据权利要求154的药物传递系统，其中所述脂质 体在体内活化。
180.制备药物传递系统的方法，包括下列步骤：
(i)将已在其中包囊药物的脂质体置于负压下；
(ii)在所述负压下温育所述脂质体足够的时间以从所 述脂质体上除去几乎所有水；以及
(iii)滴注气体入所述脂质体中直到达到环境压力，其中 所述气体由气体前体提供。
181.根据权利要求180的方法，进一步包括使所述脂质 体先于步骤(i)和在步骤(i)进行时冷却至约—10℃到约— 20℃，使所述的脂质体在步骤(ii)进行时热至约10℃到约 20℃，以及使所述的脂质体在步骤(iii)进行时热至环境温 度。
182.根据权利要求180的方法，其中所述负压在约 700mmHg到约760mmHg，施加约24到约72小时。
183.根据权利要求180的方法，其中所述的气体在约4 到约8小时期间滴注入所述脂质体中。
184.根据权利要求180的方法，其中所述气体选自：
氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊 烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷， 1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全 氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊烯， 六氟丙酮，异丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2 —丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二 烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1 —氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲 基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2 —丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3 —炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4— 六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁 醛，硫化羰，丁烯腈，环丁烷，甲基环丁烷，八氟环丁烷，全氟 环丁烯，3—氯环戊烯，环丙烷，1，2—二甲基环丙烷，1，1—二 甲基—环丙烷，乙基环丙烷，甲基环丙烷，丁二炔，3—乙基— 3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲 胺，二甲基乙胺，双(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片 烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊环—2—酮，4 —甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四 氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷， 1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯— 1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1， 1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五 氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷， 一亚硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1 —二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯， 甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二 氟亚硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟 硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯 甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷， 二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝 基甲烷，三氟亚硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷， 三氟甲基亚磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基异丙基醚，乳酸 甲酯，亚硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧 化二氮，2—羟基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3— 炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基 —2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(顺式)，2—戊烯(反式)，3—溴 —1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯邻苯二甲酸，2，3，6—三甲 基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—环氧丙烷，2，2 —二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷， 七氟—1—亚硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟 —2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3 —氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯， 六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙 腈，三氟甲基过氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化钨，乙烯乙 炔，乙烯醚，以及氙。
185.根据权利要求180的方法，其中所述气体为1—氟 丁烷。
186.根据权利要求180的方法，进一步包括，在步骤 (iii)后，通过至少一个选定孔径的滤器压出脂质体。
187.制备药物传递系统的方法，包括下列步骤：
(i)将已在其中包囊药物的脂质体冷却到约-10℃到约 -20℃；
(ii)将所述脂质体置于约700mmHg到约760mmHg的 负压下；
(iii)在所述负压下将所述脂质体温育约24到约72以 除去所述脂质体中几乎全部水，同时将所述脂质体热至约 10℃到约20℃；以及
(iv)在约4到约8小时的期间内滴注气体入所述的脂 质体中，直至达到环境压力，同时将所述脂质体热至环境温 度，其中所述气体由气体前体提供。
188.根据权利要求187的方法，其中所述气体选自：
氟，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊 烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷， 1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烯，全 氟丁烯，八氟—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊烯， 六氟丙酮，异丙基乙炔，丙二烯，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2 —丁二烯，1，3—丁二烯，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二 烯，2—甲基—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，丁二烯，1 —氟丁烷，2—甲基丁烷，十氟丁烷，1—丁烯，2—丁烯，2—甲 基—1—丁烯，3—甲基—1—丁烯，全氟—1—丁烯，全氟—2 —丁烯，4—苯基—3—丁烯—2—酮，2—甲基—1—丁烯—3 —炔，硝酸丁酯，1—丁炔，2—丁炔，2—氯—1，1，1，4，4，4— 六氟丁炔，3—甲基—1—丁炔，全氟—2—丁炔，2—溴—丁 醛，硫化羰，丁烯腈，环丁烷，甲基环丁烷，八氟环丁烷，全氟 环丁烯，3—氯环戊烯，环丙烷，1，2—二甲基环丙烷，1，1—二 甲基—环丙烷，乙基环丙烷，甲基环丙烷，丁二炔，3—乙基— 3—甲基二氮丙啶，1，1，1—三氟偶氮乙烷，二甲胺，六氟二甲 胺，二甲基乙胺，双(二甲基膦)胺，2，3—二甲基—2—降冰片 烷，全氟二甲胺，氯化二甲氧鎓，1，3—二氧戊环—2—酮，4 —甲基—1，1，2—四氟乙烷，1，1，1—三氟乙烷，1，1，2，2—四 氟乙烷，1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷，1，1—二氯乙烷， 1，1—二氯—1，2，2，2—四氟乙烷，1，2—二氟乙烷，1—氯— 1，1，2，2，2—五氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，1—氯—1， 1，2，2—四氟乙烷，2—氯—1，1—二氟乙烷，氯乙烷，一氟五 氟乙烷，二氯三氟乙烷，氟乙烷，六氟乙烷，一硝基五氟乙烷， 一亚硝基五氟乙烷，全氟乙烷，全氟乙胺，乙基乙烯基醚，1，1 —二氯乙烯，1，1—二氯—1，2—二氟乙烯，1，2—二氟乙烯， 甲烷，三氟甲磺酰氯，三氟甲磺酰氟，五氟硫基三氟甲烷，二 氟亚硝基溴甲烷，氟溴甲烷，氯氟溴甲烷，三氟溴甲烷，二氟 硝基氯甲烷，二硝基氯甲烷，氟氯甲烷，三氟氯甲烷，二氟氯 甲烷，二氟二溴甲烷，二氟二氯甲烷，二氯氟甲烷，二氟甲烷， 二氟碘甲烷，乙硅烷氧基甲烷，氟甲烷，三氟碘甲烷，三氟硝 基甲烷，三氟亚硝基甲烷，四氟甲烷，三氯氟甲烷，三氟甲烷， 三氟甲基亚磺酰氯，2—甲基丁烷，甲醚，甲基异丙基醚，乳酸 甲酯，亚硝酸甲酯，二甲硫，甲基乙烯醚，氖，新戊烷，氮，一氧 化二氮，2—羟基—1，2，3—十九烷酸三甲酯，1—壬烯—3— 炔，氧，1，4—戊二烯，正戊烷，全氟戊烷，4—氨基—4—甲基 —2—戊酮，1—戊烯，2—戊烯(顺式)，2—戊烯(反式)，3—溴 —1—戊烯，全氟—1—戊烯，四氯邻苯二甲酸，2，3，6—三甲 基哌啶，丙烷，1，1，1，2，2，3—六氟丙烷，1，2—环氧丙烷，2，2 —二氟丙烷，2—氨基丙烷，2—氯丙烷，七氟—1—硝基丙烷， 七氟—1—亚硝基丙烷，全氟丙烷，丙烯，1，1，1，2，3，3—六氟 —2，3—二氯丙烷，1—氯丙烯，氯丙烯(反式)，2—氯丙烯，3 —氟丙烯，全氟丙烯，丙炔，3，3，3—三氟丙炔，3—氟苯乙烯， 六氟化硫，十氟化二硫(S2F10)，2，4—二氨基甲苯，三氟乙 腈，三氟甲基过氧化物，三氟甲基硫化物，六氟化钨，乙烯乙 炔，乙烯醚，以及氙。
189.根据权利要求187的方法，其中所述的气体为1— 氟丁烷。
190.根据权利要求187的方法，进一步包括，在步骤 (iv)经过至少一个选定孔径的滤器压出所述脂质体。
191.制备药物传递系统的设备，包括：
(i)含在其中已包囊药物的脂质体的容器；
(ii)冷却容器中脂质体的装置；
(iii)对容器施加负压以从容器中的脂质体中吸出水的 装置；
(iv)连接容器和负压装置的导管，导管引导水流；
(v)收集导管中流水的装置；
(vi)将气体引入容器中脂质体的装置；和
(vii)调节容器温度的装置。
192.根据权利要求191的设备，其中负压装置为真空 泵。
193.根据权利要求191的设备，进一步包括冷却容器中 脂质体的装置。
194.根据权利要求191的设备，其中冷却装置中有将容 器中脂质体冷到约—10℃到约—20℃的装置。
195.根据权利要求191的设备，其中冷却装置包括冷 浴。
196.根据权利要求191的设备，其中进一步包括收集导 管中水流的装置。
197.根据权利要求191的设备，其中收集装置为一阱。
198.根据权利要求191的设备，进一步包括冷却阱的装 置。
199.根据权利要求198的设备，其中阱包括方便流体流 经其中的第一和第二构件，构件相互流体连结，且和导管相 连，第二构件螺旋安置在第一构件周围，所述阱包括冷却装 置，其中冷却装置包括至少包裹一部分第一和第二构件的冰 浴。
200.控制药物传递到患者体内区域的方法，包括：
(a)对患者以药物传递系统给药，所述系统通过真空干 燥气体滴注方法制备，且已在其中包囊药物，其中所述气体 由气体前体提供；
(b)用超声监测脂质体以确定气体前体从液体到气体 的相转变，以及确定所述脂质体在所述区域的存在；以及
(c)用超声破裂脂质体，释放药物于所述区域。
201.根据权利要求200的方法，其中药物在患者的左心 区域传递。
202.用权利要求180方法制备的产品。
203.用权利要求187方法制备的产品。
204.用下列步骤组成的方法制备的药物传递系统：
(i)将已在其中包囊药物的脂质体置于负压下；
(ii)在负压下以足够的时间培养所述脂质体移去所述 脂质体中几乎所有水；以及
(iii)将气体滴注入所述脂质中直至达到环境压力，其中 所述气体由气体前体提供。
205.根据204的方法，其中所述方法在气体前体的活化 温度下进行。
206.显影局部缺血和病变组织的方法，包括：
(a)对患者的靶位以包括气体填充的、已包囊药物于其 中的微球体的药物传递系统给药，其中所述气体由具有约为 体温活化温度的气体前体提供；
(b)用能量监测微球体以确定其于所述靶位的累积和 气体前体从液体向气体的相转变，以及确定所述微球体于所 述区域的存在；以及
(c)用能量破裂微球体来释放药物于所述区域。
207.对局部缺血和病变组织给药的方法，包括对患者靶 位以由已包囊一种或多种药物于其中的气体填充的微球体 组成的药物传递系统给药，其中所述的气体由具有约是体温 的活性温度的气体前体提供。
208.根据权利要求207的方法，其中所述药物传递系统 由传递到靶位的能量活化。
209.高温时非侵入测量温度的方法，包括：
(a)对患者的靶位以包括气体填充的具有在其中已包囊 药物的微球体的药物传递系统给药，其中所述气体由具有体 温或高于体温的活化温度的气体前体提供；
(b)用能量监测微球体以确定微球体于所述靶位的累 积和气体前体从液体到气体的相转变，由此确定在所选温度 下所述微球体的活化。
210.根据权利要求95的方法，进一步包括加压容器的 步骤。
211.根据权利要求117的设备，其中冷却所述水溶液的 装置包括在低于所述水溶液中所述类脂凝胶态向液晶态相 转变温度下；冷却所述水溶液。
212.根据权利要求211的设备，进一步包括加压所述容 器的装置。
213.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述微球 体包括共价键合于聚乙二醇的二棕榈酰基卵磷脂，二棕榈酰 基磷脂酸，以及二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺。
214.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述的微 球体包括选自下列物质的类脂：二棕榈酰基卵磷脂，二棕榈 酰基磷脂酸，二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺，以及聚乙二醇。
215.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述微球 体包括至少一种二棕榈酰基类脂。
216.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述治疗 剂选自：碳水化合物类，肽类，糖类，糖基类脂类，植物凝血素 类，糖基共轭物类(glycoconjugates)，所述的治疗剂结合入 所述微球体的表面。
217.根据权利要求1的治疗剂传递系统，其中所述治疗 剂结合入所述微球体表面是通过将所述治疗剂连接到磷脂 上来实现的。
218.根据权利要求42的治疗剂传递系统，其中所述单 克隆抗体结合入所述微球体表面是通过将所述治疗剂连接 到磷脂上来实现的。
219.根据权利要求93的方法，其中所述容器是注射器 针筒，所述注射器也至少由一个滤器和针头组成；所述提取 步骤包括通过经所述滤器从所述针筒中压出所述脂质体来 筛分所述气体填充的脂质体。
220.根据权利要求93的方法，其中所述容器是注射器 的针筒。
221.根据权利要求220的方法，其中所述注射器也包括 至少一个滤器和针头；所述提取步骤包括经所述滤器压出所 述脂质体筛分所述气体填充的脂质体。
222.根据权利要求98的方法，包括将所述脂质体吸入 注射器，所述注射器包括针筒，至少一个滤器和针头；由此所 述滤器经将所述脂质体吸入所述针筒来筛分所述脂质体。
223.根据权利要求93的方法，包括将所述脂质体压进 注射器针筒，所述注射器也包括至少一个滤器和针头；由此 所述滤器通过从所述注射器中压出所述脂质体筛分所述脂 质体。
224.根据权利要求93的方法，其中所述提取的步骤包 括将所述含气体填充脂质体的泡沫吸进注射器，所述注射器 包括针筒，至少一个滤器，和针头；由此筛分所述脂质体。
225.根据权利要求118的设备，其中所述容器为注射 针筒，所述注射器也至少包含一个滤器和针头；所述提取装 置包括经所述滤器从所述针筒中压出所述充气脂质体，其中 的所述滤器装在所述注射器上，它位于针筒和针头之间，由 此筛分所述脂质体。
226.根据权利要求118的设备，其中所述容器为注射器 的针筒。
227.根据权利要求226的设备，其中所述注射器包括针 筒，至少一个滤器，和针头；所述提取装置包括通过所述针筒 经所述滤器压出所述脂质体而筛分所述充气脂质体。
228.根据权利要求112的设备，其中所述容器为注射器 的针筒，所述注射器也包括至少一个滤器和针头；此处所述 滤器是在将所述脂质体吸进所述针筒时筛分所述脂质体的 装置。
229.根据权利要求118的设备，其中所述容器是注射器 的针筒，所述注射器也包括至少一个滤器和针头；其中所述 滤器是在将所述脂质体从所述针筒中压出时筛分所述脂质 体的装置。
230.根据权利要求118的设备，其中所述提取装置包括 将所述含充气脂质体的泡沫吸进注射器，所述注射器包括针 筒，至少一个滤器和针头；由此筛分所述脂质体。
231.根据权利要求1的靶定位治疗剂传递系统，其中所 述治疗剂的位置选择在所述微球体之内，连结于所述微球体 之外，以及包埋于所述微球体的所述壁间。
232.根据权利要求84的方法，其中所述治疗剂位于所 述微球体内部。
233.根据权利要求84的方法，其中所述治疗剂连结于 所述微球体之外。
234.根据权利要求84的方法，其中所述微球体包括内 腔和壁，所述治疗剂包埋于所述脂质体的所述壁内。
235.靶定位治疗剂传递设备，包括具有针筒，滤器装配， 和针头的注射器，所述滤器装配置在所述针筒和所述针头之 间，以及包括至少一个滤器，所述针筒包含由温度活化气体 前体填充的微球体组成的靶定位治疗剂传递系统，其中所述 的气体前体填充的微球体包括治疗化合物。
236.根据权利要求235的设备，其中所述滤器装配为阶 式滤器装配，包括具有针对针头侧和针对针筒侧的第一级滤 器，第二级滤器，分别位于所述第一级滤器的所述针对针头 侧和所述针筒侧的第一和第二金属网盘，在所述第二金属网 盘和所述第二滤器间的O形环，以及其中所述的第二级滤 器置于所述第一级滤器的针筒侧约150μm。
237.根据权利要求236的设备，所述第一级滤器与第二 级滤器有微孔，所述第二级滤器具有微孔径约10μm，所述 第一级滤器的微孔径约为8μm。
238.根据权利要求235的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔具有约30nm到约20微米的大小。
239.根据权利要求235的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔具有约8μm的大小。
240.根据权利要求235的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔具有约0.22μm的大小。
241.根据权利要求229的设备，具有第一级滤器及第二 级滤器，所述第一级滤器和第二级滤器具有微孔，所述第二 级滤器具有约10μm的微孔，而第一级滤器具有约8μm的 微孔。
242.根据权利要求229的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔具有约30nm到约20微米的大小。
243.根据权利要求229的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔有约8μm的大小。
244.根据权利要求229的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔具有约0.22μm的大小。
245.根据权利要求230的设备，所述第一级滤器和第二 级滤器具有微孔，所述第二级滤器具有约10μm的微孔，所 述第一级滤器具有约8μm的微孔。
246.根据权利要求230的设备，具有第一级滤器和第二 级滤器，所述微孔具有约30nm到约20微米的大小。
247.根据权利要求230的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔具有约8μm的大小。
248.根据权利要求230的设备，其中所述滤器具有微 孔，所述微孔具有约0.22μm的大小。
249.根据权利要求47的方法，其中所述的微球体经喷 雾器给药。
250.根据权利要求249的方法，其中所述微球体靶定位 于肺部。
251.根据权利要求250的方法，其中所述治疗剂为反义 ras/p53。
252.权利要求77的方法在高于环境压力下操作。
253.权利要求84的方法在高于环境压力下操作。
254.权利要求91的方法在高于环境压力下操作。
255.权利要求92的方法在高于环境压力下操作。
256.包括充气微球体的药物传递系统，其中所述充气微 球体包括治疗化合物和氟化气体。
257.根据权利要求256的药物传递系统，其中所述的氟 化气体选自氟气，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化 硼，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二 烯，1—氟丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟— 1，3—丁二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟— 2—丁烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔； 八氟环丁烷；全氟环丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全 氟戊烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟 二甲胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2— 四氟乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1， 2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五 氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙 烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷； 氟乙烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亚硝基五氟乙烷；全氟乙 烷；全氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯； 三氟甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亚硝 基溴甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亚硝基 氯甲烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷； 二氟二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷； 三氟碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亚硝基甲烷；四氟甲烷；三 氯氟甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亚磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1 —戊烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1 —硝基丙烷；七氟—1—亚硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3 —六氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三 氟丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三 氟甲基过氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化钨，五氟碘化十八 烷，全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟 三丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷， 1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全 氟丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊 烯。
258.根据权利要求257的药物传递系统，其中所述的 氟化气体选自氟气，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁 烷，全氟戊烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全 氟环丁烷，八氟环戊烯，十二氟戊烷，以及八氟环丁烷。
259.根据权利要求258的药物传递系统，其中所述的氟 化气体选自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟 环丁烷，以及六氟化硫。
260.根据权利要求259的药物传递系统，其中所述的氟 化气体选自全氟丙烷，全氟环丁烷，以及全氟丁烷。
261.根据权利要求260的药物传递系统，其中所述的气 体为全氟丙烷。
262.根据权利要求256的药物传递系统，其中所述的氟 化气体为全氟化碳气体。
263.根据权利要求263的药物传递系统，其中所述的全 氟化碳气体选自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷， 以及全氟环丁烷。
264.根据权利要求263的药物传递系统，其中所述的全 氟化碳气体选自全氟丙烷，全氟环丁烷，以及全氟丁烷。
265.根据权利要求264的药物传递系统，其中所述的全 氟化碳气体为全氟丙烷。
266.制备包含充气脂质体的药物传递系统的方法，所述 方法包括在氟化气体存在下，在类脂的凝胶态向液晶态相转 变的温度下，振荡包含类脂和治疗化合物的水溶液的步骤。
267.根据权利要求267的方法，其中所述的氟化气体选 自：氟气，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2， 3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟 丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁 二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁 烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟 环丁烷；全氟环丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊 烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲 胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟 乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2， 2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙 烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2 —氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙 烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亚硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全 氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟 甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亚硝基溴 甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亚硝基氯甲 烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟 二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟 碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亚硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟 甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亚磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊 烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝 基丙烷；七氟—1—亚硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六 氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙 炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲 基过氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化钨，五氟碘化十八烷， 全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三 丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1， 1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟 丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊烯。
268.根据权利要求267的方法，其中所述的氟化气体选 自氟气，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊 烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟环丁烷， 八氟环戊烯，十二氟戊烷，以及八氟环丁烷。
269.根据权利要求268的方法，其中的所述氟化气体选 自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟环丁烷，以 及六氟化硫。
270.根据权利要求269的方法，其中所述的氟化气体选 自全氟丙烷，全氟环丁烷，以及全氟丁烷。
271.根据权利要求266的方法，其中所述的氟化气体为 全氟丙烷。
272.根据权利要求271的方法，其中所述的氟化气体为 全氟化碳气体。
273.根据权利要求272的方法，其中所述的全氟化碳气 体选自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丁烷，以及全氟环丁烷。
274.根据权利要求273的方法，其中所述的全氟化碳气 体选自全氟丙烷，全氟环丁烷，和全氟丁烷。
275.根据权利要求274的方法，其中所述的全氟化碳气 体为全氟丙烷。
276.制备由充气脂质体组成的靶定位的治疗剂传递系 统的方法，所述方法包括步骤：在氟化气体的存在下，在类脂 的凝胶态向液晶态相转变温度下，振荡含类脂水溶液，以形 成充气脂质体；以及向所述脂质体中加入治疗化合物。
277.根据权利要求276的方法，其中所述氟化气体选自 氟气，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2，3— 三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟丁 烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二 烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁烯；2 —氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟环丁 烷；全氟环丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷； 全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲胺； 1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟乙 烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2，2 —四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙 烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2 —氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙 烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亚硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全 氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟 甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亚硝基溴 甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亚硝基氯甲 烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟 二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟 碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亚硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟 甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亚磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊 烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝 基丙烷；七氟—1—亚硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六 氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙 炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲 基过氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化钨，五氟碘化十八烷， 全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三 丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1， 1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟 丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊烯。
278.根据权利要求277的方法，其中所述的氟化气体选 自氟气，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊 烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟环丁烷， 全氟环戊烯，十二氟戊烷，以及八氟环丁烷。
279.根据权利要求278的方法，其中所述的氟化气体选 自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟环丁烷，以 及六氟化硫。
280.根据权利要求279的方法，其中所述的氟化气体选 自全氟丙烷，全氟环丁烷，以及全氟丁烷。
281.根据权利要求280的方法，其中所述的氟化气体为 全氟丙烷。
282.根据权利要求281的方法，其中所述的氟化气体为 全氟化碳气体。
283.根据权利要求276的方法，其中所述全氟化碳气体 选自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，以及全氟环 丁烷。
284.根据权利要求283的方法，其中所述的全氟化碳气 体选自全氟丙烷，全氟环丁烷，如全氟丁烷。
285.根据权利要求284的方法，其中所述的全氟化碳气 为全氟丙烷。
286.制备含充气脂质体的靶定位治疗剂传递系统的方 法，所述方法包括在氟化气体的存在下，振荡含类脂和治疗 化合物的水溶液，以及分离所产生的充气脂质体治疗用的步 骤。
287.根据权利要求286的方法，其中所述的氟化气体选 自氟气，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2，3 —三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟 丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁 二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁 烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟 环丁烷；全氟环丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊 烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲 胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟 乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2， 2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙 烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2 —氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙 烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亚硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全 氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟 甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亚硝基溴 甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亚硝基氯甲 烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟 二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟 碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亚硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟 甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亚磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊 烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝 基丙烷；七氟—1—亚硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六 氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙 炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲 基过氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化钨，五氟碘化十八烷， 全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三 丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1， 1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟 丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊烯。
288.根据权利要求287的方法，其中所述的氟化气体选 自氟气，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊 烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟环丁烷， 八氟环戊烯，十二氟戊烷，以及全氟环丁烷。
289.根据权利要求288的方法，其中所述的氟化气体选 自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟环丁烷，以 及六氟化硫。
290.根据权利要求289的方法，其中所述的氟化气体选 自全氟丙烷，全氟环丁烷，以及全氟丁烷。
291.根据权利要求290的方法，其中所述的氟化气体为 全氟丙烷。
292.根据权利要求286的方法，其中所述的氟化气体为 全氟化碳气体。
293.根据权利要求292的方法，其中所述的全氟化碳气 体选自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，以及全氟 环丁烷。
294.根据权利要求293的方法其中所述的全氟化碳气 体选自全氟丙烷，全氟环丁烷，以及全氟丁烷。
295.根据权利要求294的方法，其中所述的全氟化碳气 体为全氟丙烷。
296.制备含充气脂质体的靶定位治疗剂传递系统的方 法，所述方法包括步骤，在氟化气体存在下，在低于类脂凝 胶态向液晶态相转变的温度下，振荡含类脂水溶液以形成充 气脂质体；加入治疗化合物；分离所得的充气脂质体供治疗 用。
297.根据权利要求296的方法，其中所述氟化气体包 括：氟气，1—氟丁烷，六氟丙酮，四氟丙二烯，三氟化硼，1，2， 3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁二烯，1—氟 丁烷，1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯，六氟—1，3—丁 二烯；1—氟丁烷；十氟丁烷；全氟—1—丁烯；全氟—2—丁 烯；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔，全氟—2—丁炔；八氟 环丁烷；全氟环丁烯；全氟乙烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊 烷；全氟己烷；1，1，1—三氟重氮乙烷；六氟二甲胺；全氟二甲 胺；1，1，1，2—四氟乙烷；1，1，1—三氟乙烷；1，1，2，2—四氟 乙烷；1，1，2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯—1，2，2， 2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，2—五氟乙 烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟乙烷；2 —氯—1，1—二氟乙烷；氯代全氟乙烷；二氟三氟乙烷；氟乙 烷；六氟乙烷；硝基五氟乙烷；亚硝基五氟乙烷；全氟乙烷；全 氟乙胺；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；三氟 甲磺酰氯；三氟甲磺酰氟；五氟硫代三氟甲烷；二氟亚硝基溴 甲烷；氟溴甲烷；氟氯溴甲烷；三氟溴甲烷；二氟亚硝基氯甲 烷；氟氯甲烷；三氟氯甲烷；二氟氯甲烷；二氟二溴甲烷；二氟 二氯甲烷；氟二氯甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；氟甲烷；三氟 碘甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亚硝基甲烷；四氟甲烷；三氯氟 甲烷；三氟甲烷；三氟甲基亚磺酰氯；全氟戊烷；全氟—1—戊 烷；1，1，1，2，2，3—六氟丙烷；2，2—二氟丙烷；七氟—1—硝 基丙烷；七氟—1—亚硝基丙烷；全氟丙烷；1，1，1，2，3，3—六 氟—2，3—二氯丙烷；3—氟丙烯；全氟丙烯；3，3，3—三氟丙 炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫；三氟乙腈；三氟甲 基过氧化物；三氟甲基硫化物；六氟化钨，五氟碘化十八烷， 全氟辛基溴，全氟萘烷全氟dodcealin，全氟辛基碘，全氟三 丙胺，以及全氟三丁胺，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1， 1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟 丁烷，八氟2—2—丁烯，六氟—1，3—丁二烯，八氟环戊烯。
298.根据权利要求297的方法，其中所述的氟化气体选 自氟气，全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟戊 烷，全氟己烷，六氟化硫，六氟丙烯，八氟丙烷，全氟环丁烷， 八氟环戊烯，十二氟戊烷，以及八氟环丁烷。
299.根据权利要求298的方法，其中所述的氟化气体选 全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，全氟环丁烷，以及 六氟化硫。
300.根据权利要求299的方法，其中所述的硫化气体选 自全氟丙烷，全氟环丁烷，以及全氟丁烷。
301.根据权利要求300的方法，其中所述的氟化气体是 全氟丙烷。
302.根据权利要求296的方法，其中所述的氟化气体是 全氟化碳气体。
303.根据权利要求302的方法，其中所述的氟化碳气体 选自全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷，以及全氟环 丁烷。
304.根据权利要求303的方法，其中所述的全氟化碳气 体选自全氟丙烷，全氟环丁烷以及全氟丁烷。
305.根据权利要求304的方法，其中所述的全氟化碳气 体为全氟丙烷。

说明书全文

                  相关申请

本申请是下列两件共同未决与相关申请的美国专利申 请的部分继续，它们都于1992年11月30日提出申请，申请 号各为08/159,687和08/159,674。并且这两件申请是 1993年6月11日登记的共同未决申请U.S.076,250的部 分接续，而申请号为076,250的美国申请则系在1991年6 月18日登记的，共同未决申请U.S.716,899和717,084的 部分接续，这两件申请相应地是1990年8月20日登记的申 请号为569,828的美国专利申请的部分接续，而这个申请相 应地又是1989年12月22日登记的申请号为455,707的美 国申请的部分接续。所有这些申请均可并入本发明作为参 考。

                  发明背景 发明领域

本发明涉及治疗剂传递系统，更具体地说，涉及含有含 治疗化合物的微球体的气体前体，本发明进一步涉及采用这 样的微球体作为治疗剂传递系统的方法。 发明背景

由于药物毒性问题，靶向性药物传递方式就显得格外重 要。特定的治疗剂传递方法有可能降低毒副作用，降低所需 要的剂量，并能降低病人治病所需的费用。本发明的目的在 于满足治疗剂传递中这样和/或那样的重要需求。

在动物和人类疾病的检查和诊断中已采用了多种成像 技术，而X射线是在诊断成像中首先使用的。通过这种技术 得到的影像反映了被照射物体的电子密度。多年来，已采用 对比试剂，如钡或碘，来减弱或遮挡X射线，据知是有一定 危险的并且电离经辐射的多种有害作用是积累的。

另一种重要的成像技术是核磁共振成像(MRI)，但是 这一技术有很多缺陷，例如费用问题和MRI扫描器的切面 扫描使得它是静止的，不能进行移动检查。此外，很多医疗 中心还不具备MRI。

在核医学中采用的放射性核素又提供了一种成像技术 。应用这种技术时，放射性核素如锝标记化合物被注入病人 体内同伽玛相机可以得到影像。但是，核医学技术具有立体 拆分不好和使动物或病人遭受到有害辐射影响的缺陷。而 且，放射性核素的处理和运输也是问题。

超声波提供了另一种诊断成像技术，不同于核医学和X 射线的是，它并不使病人暴露于电离化辐射的有害作用之下 。而且，不象核磁共振成像，超声波相对比较便宜且可以进行 移动检查。在应用超声波技术时，通过转换器将声音传入病 人或动物体内。当声波通过身体传播时，它们会遇到组织和 液体的界面，根据体内组织和体液的声学性质，可部分或完 全反射或吸收超声波。当声波被界面反射时，它们被转换器 中的接受器发现并且形成一个影像，体内组织和体液的声学 性质决定了所成影像的对比。

近来在超声波技术方面已取得了进展，但是，尽管有各 种技术上的改进，超声波技术在许多方面仍是一种不够完善 的工具，特别是有关肝，脾，肾，心脏和血管疾病的成像和检 查，以及对血流的测量，而要检查和测量这些区域的能力取 决于欲测组织或液体和周围组织或液体间声学性质的差异 。结果是需要寻求一种可增强欲测组织或液体和周围组织或 液体间声学性质差异的对比试剂以提供超声波成像和疾病 检查的能力。

超声波成像的原理指导着研究者寻求一种气体对比试 剂。声学性质或声阻抗的变化多数是在密度或声阻抗差别 较大的不同物质的界面产生特别是在固体，液体和气体的容 面。当超声波遇到这样的界面时，声阻抗的变化导致更强的 反射并且在超声波成像中产生更强的信号。影响声音反射 效果的另外一个因素是反射界面的弹性。反射界面的弹性 越大，声音反射的效率越高。某些物质如气泡具有高弹性界 面。因此，作为前述原理的结果，研究者们集中研究在气泡 基础上的或含气体单位的超声波对比试剂以及制备它们的 有效方法。

Ryan等在美国专利4,544,545中公开了具有化学改良 的胆固醇涂层的磷脂脂质体。该胆固醇涂层可为单层或双层 。含有示踪物、治疗或细胞毒性剂的含水介质被置于脂质体 中。脂质体直径0.001微米到10微米，是通过搅拌和超声 振动制备的。

D’Arrigo在美国专利4,684,479和5,215,680中指出 了一种液包气乳化液以及从表面活性剂混合物中制备这种 乳化液的方法。美国专利4,684,479公开了通过在空气振 荡表面活性剂在液体介质中的溶液而制备脂质体的方法。 美国专利5,215,680指出了大批量的制备微气泡涂布的类 脂的方法，包括在空气中振荡表面活性剂在液体介质中的溶 液或其它气体混合物，并过滤灭菌所得溶液。

WO80/02365公开了含有被压缩在可凝胶膜中的惰性 气体，如氮气或二氧化碳的微气泡的制备。脂质体可在低温 下保存，可在对人体使用前或使用之时升温。W082/01642 描述了微气泡前体和其制备方法。微气泡是通过在液体中 溶解固体物质形成的，产生了充气空隙，这里气体是指1.) 在固体前体聚集体微粒间空隙中产生的气体，2.)吸附在前 体颗粒表面的气体，3.)前体颗粒内部结构整体，4.)当前体 与液体发生化学反应时产生的气体，以及5.)溶于液体中并 且当前体溶解被释放出来的气体。

此外，Feinstein在美国专利4,718,433和4,77,958中 指出了清蛋白涂布的微气泡可应用于超声波。

Widder在美国专利4,572,203和4,844,822中公开了 一种超声成像的方法和微气泡型成像剂。

Quay在W093/05819中描述了可形成含有根据已知 的物理常数的标准而特别选定的气体的微气泡的试剂的应 用，已知的物理常数包括1)气泡的大小，2)气体密度，3)气 体在周围介质中的溶解度，和4)气体进入介质的困难程度。

Kaufman等在美国专利5,171,755中公开了含有高氟 化有机化合物的乳液，不具备足够表面活性或水溶性的油以 及表面活性剂。Kaufman等也告知在医学上应用这个乳液 的方法。

研究工作的另一个重要方面是在靶向性药物传递方面 。在现有技术中，可将遗传物质引入，例如活细胞中，的方法 和物质是有限的和无效的。目前为止已发现了几种不同的 机理可将遗传物质传递到活细胞中。这些机理包括技术例 如磷酸钙沉淀和电穿孔，载体如阳离子聚合物和充水脂质体 。这些方法的体内都是相对无效的，并且在细胞培养转染方 面的应用也是有限的。这些方法无一有利于遗传物质向靶 细胞的局部释放，传递和整合。

需要对于治疗剂如遗传物质的更好的传递方式来治疗 和动物的大量疾病。人们在给遗传疾病定性和理解蛋白质 转录方面已取得了很大进展，但在将遗传物质传递到细胞中 以治疗人和动物疾病的方面取得的进步相对是很小的。

主要的困难就是从细胞外空间向细胞内空间传递遗传 物质，甚至是将遗传物质有效定位在选定细胞膜的表面。在 体内已尝试了各种技术但无很大的成功。例如，已采用病毒 如腺病毒和反转录病毒作为载体向细胞传递遗传物质。使 用的是完整的病毒，但可被置于病毒被膜内的遗传物质的 量是有限的，而且可能由于活病毒导致有害的相互作用。可 以分离出病毒被膜的必要成份并用于向选定的细胞传递遗 传物质。但是，在体内传递载体不仅要识别特定的细胞，而 且它也必须被传递到这些细胞。尽管在病毒载体方面作了 大量的工作，但开发一种成功的在体内可传递遗传物质的靶 向病毒调节的载体是困难的。

常规的，在细胞培养中采用含液体脂质体向细胞中传递 遗传物质，但对于体内遗传物质的细胞传递而言，这是相当 无效的。例如，阳离子脂质体转染技术在体内不是很有效的 。需要开发更有效的方式以改善治疗剂如对比试剂和遗传物 质的细胞传递。

尽管已取得了进展，但现有技术还没有解决超声波对比 试剂发展中存在的许多问题。气体可从稳定的乳液式颗粒 涂层中扩散出来并使产品失效。在目前为止所开发的所有 的用于超声波的气基对比介质中，微球体相对是较大的，例 如在2—7微米间，这为加强超声对比提供了足够强的逆向 散射。这些颗粒的大小使得它们很难排出可能的污染物，这 些污染物是从注射液如细菌中得来的并在注射过程中传给 病人的。近年来发展的充气微球体在体内是很不稳定的并 且不能保持足够长时间以提供理想的对比加强效果。

本发明的目的是为了满足以前的，以及其它在超声成像 对比试剂领域和使治疗剂有效靶定位传递的载体领域的重 要需求。本发明是为了提供更好和更安全的用于超声波诊 断和遗传物质传递的对比试剂。

                本发明概述

本发明提供了利用充气微球体，在专一位点释放治疗剂 的治疗剂传递系统。微球体含有可由于温度而被激活的气 体前体，它在特定的温度下被激活变成气体。一旦这种微球 体进入病人体内，治疗化合物则通过声能，微波能，磁能或高 热的作用被定向到特异性组织上，它们指向靶区域并使微球 体破裂，释放出治疗化合物。

更具体地说，本发明提供了靶向性治疗剂传递系统，该 系统含有含治疗化合物的可被温度激活的充气体前体微球 体。

本发明还提供了使治疗化合物受控传递到病人病灶区 的方法，该方法包括：(1)向病人施用含治疗化合物的可被温 度激活的充气体前体—微球体；(2)使用超声波监控微球体 以确定气体前体从液体变成气体的相转变以及确定在病灶 区微球体的存在；以及(3)使用超声破裂微球体而使治疗化 合物在病灶区释放出来。

此外，本发明还提供了适合在对比试剂传递中作用的及 可用作药物传递剂的，可由于温度激活的充气体前体脂质体 的制备方法和所用设备。本发明优选的方法提供了下述优 点，例如，制备含有治疗化合物，可由于温度激活的气体前体 —填充的微球体的过程的简单性和可能的费用节省。

可由于温度而被激活的，气体前体填充的脂质体在用作 对比试剂和药物载体方面是特别有用的。不同于现有技术 中内含液体，仅适用于密封水溶性药物的脂质体，本发明的 可由于温度激活的充气体前体脂质体在密封亲脂药物方面 是特别有用的。而且，药物的亲脂衍生物也很容易加入类脂 层中，例如，金属茂二卤化物的烷基化衍生物。参考Kuo 等，J.Am.Chem.Soc.1991，113，9027—9045。

本发明的优点之一确信包括通过微球体内的气体前体 吸收超声波能量，这是在特定的转变温度下使液气前体转变 成气体而进行的，而微球体的破裂造成膜流动性局部增加， 因而可以增加治疗化合物的细胞摄取量。

本发明的各种特点及优点将在下列附图中更详细解释 并描述如下。

                附图的概述

附图1表示含有治疗化合物的充气体前体脂质体，该治 疗化合物嵌在类脂微球体壁间，以及当施加超声波时治疗剂 的后续释放。

附图2表示含有治疗化合物的充气体前体脂质体，该治 疗化合物在脂质体微球体壁的内层且暴露在充气体前体的 内腔中，以及当施加超声波时治疗剂的后续释放。

附图3表示含有治疗化合物的充气体前体脂质体，该治 疗化合物嵌在脂质体微球体壁的外层且暴露在充气体前体 的内腔中，以及当施加超声波时治疗剂的后续释放。

附图4表示含有治疗化合物的充气体前体脂质体，该治 疗化合物嵌在脂质体微球体壁的内层和外层，并暴露在充满 气体前体的内腔和外环境中，以及当施加超声波时治疗剂的 后续释放。

附图5图解说明了含有连接于脂质体内腔的治疗化合 物的充气体前体脂质体微球，以及当施加超声波时治疗剂的 后续释放。

附图6图解说明了含有连接在脂质体外壁的治疗化合 物的充气体前体脂质体微球，以及当施加超声波时治疗剂的 后续释放。

附图7图解说明了含有治疗化合物的充气体前体脂质 体微球体，其中治疗化合物如负电性药物(A)或正电性药物 是连接在脂质体微球的内外壁上，以及当施加超声波时治疗 剂的后续释放。

附图8图解说明了含有包裹在充气体前体内腔中的治 疗化合物的充气体前体脂质体微球，以及当施加超声波时治 疗剂的后续释放。

附图9为制备本发明含治疗剂的充气体前体脂质体微 球体的优选设备的切面示意图部分为简图。

附图10为表示过滤和/或分配本发明含治疗剂的充气 体前体脂质体微球体的优选设备。

附图11画出了过滤和/或分配本发明含治疗剂的充气 体前体脂质体微球体的优选设备。

附图12为附图11设备的部分展示图。

附图13给出了其内部基本上无水且其中未密封有任何 药物的充气脂质体的dB反射，其中所述脂质体通过真空干 燥气体滴注法制备。数据是在TM5200型成像扫描仪(A- coustic Imaging，Phoenix，Arizona)上利用7.5兆赫转换器 扫描得到并通过采用系统测试软件测量反射比而产生。在 各试验之前，采用已知声阻抗的模拟来校准这个系统。

附图14给出了制备含药物的，真空干燥气体滴注的脂 质体的优选设备，并且通过真空干燥气体滴注法制备的含药 物的充气脂质体的内部基本无水存在。

附图15为显微摄影照片，该照片展示了本发明充气体 前体类脂体在过滤前(A)和过滤之后(B)的大小。

附图16图解说明了本发明的充气体前体脂质体在过滤 之前(A)和过滤之后(B)大小分布。

附图17为脂质体悬浮液通过过滤器压出之前(A)和之 后(B)的显微摄影。

附图18为在过滤和压热类脂悬浮液后形成的充气体前 体脂质体的显微摄影。所述显微摄影摄于过滤筛分充气体 前体类脂体之前(A)和之后(B)。

附图19图解说明了在由温度激活之前的可被温度激活 的充气体前体脂质体。这个脂质体具有多层膜。

附图20图解说明了温度激活的充液气前体脂质体在经 历了温度激活的液态向气态的转化之后，产生了多层膜和脂 质体直径的增大。

              本发明的详细描述

本发明提供了靶向性药物传递系统，该系统是由含治疗 化合物的可由温度激活的充气体前体微球体组成。微球体 被定义为具有内空间且相对形状为球形的结构。根据需要， 治疗化合物可被嵌入在微球体球壁内，也可密封在微球体内 和/或连接在微球体上。本申请中所用的与治疗化合物的位 置有关的术语″连接″或其同义词是指治疗化合物通过某些 方式连接在微球体的内部和/或外部，如通过共价或离子键， 或其它化学或电化学连接或相互作用的方式连接，例如，如 上所示的附图5，6和7所述。本申请中所用的与治疗化合 物的位置有关的术语″密封″或其同义词是指治疗化合物位 于微球体的内腔中，例如如上附图8所示。所用的与治疗化 合物位置有关的术语″嵌入″或其同义词表示治疗化合物位 于微球体壁之内，例如如上附图1，2，3，和4所示。术语″含 有治疗药物″表示所有不同类型的治疗化合物在微球体中的 位置。因此，治疗化合物可以变化地被定位，例如包裹在充 气体前体微球体的内腔内，定位在充气体前体微球体的气体 和内壁之间，结合在充气体前体微球的外表面和/或啮合在 微球体结构本身之内。本专业人员一旦了解国本申请的公 开内容还应理解当微球体包含类脂时，其壁可以含有多于一 个类脂双层。

本发明微球可以在体外或体内用于靶向性治疗药物传 递。优选的是有超声波作用时每个单一微球能释放出基本 上所有治疗化合物。术语″基本上所有″是指至少的80％，优 选至少90％，最优选约100％。在某些方案中，所有治疗化 合物从全部微球体中的释出是快速的；而在其它方案中，释 放则是逐步的。本专业人员一旦了解本申请的内容应当理 解：优选的释放速率将随治疗化合物结合的类型而改变。在 一些优选的方案中，例如治疗化合物封装在微球体内，因此 当微球体破裂时几乎所有治疗化合物能从微球体内快速释 出。进一步，本专业人员掌握了本申请公开内容之后还应理 解通过改变施加的超声波的频率和作用时间可以得到需要 的治疗化合物的释出速率。

因此，如上所述，被传递的治疗化合物可以封装包裹在 充气微球体之内，这些化合物可以是各种治疗化合物；可以 溶合在充气微球体的表面，如用负电DNA涂层在阳离子类 脂上或将正电药物涂在阴离子类脂上，和/或嵌入在充气微 球体的壁内，这种药物化合物如亲脂治疗剂。微球体可以以 包含有治疗剂的微球体形式制得，或者微球体以不包含治疗 剂的形式制得治疗药物在使用之前加到充气体前体微球体 中。对于后一种情况，治疗化合物可入通过倒入加到含有充 气体前体微球体的水溶性介质中，并振荡以使用治疗剂涂布 微球。

这里所用的″可由于温度活化的气体前体″是指可在选 定的活化或转化温度下由液态转变成气态的化合物。活化 或转化温度等术语是指气体前体的沸点，即在该温度下气体 前体由液体向气体的相转变发生。可用的气体前体是指其 气体的沸点在约-100℃到70℃之间的。活化温度对每种气 体前体来说都是特定的。这个概念正如图19和20说明的 那样。活化温度约为37℃或人的体温对本发明气体前体而 言是优选的。因此，液体气体前体应在37℃活化变成气体。 但是在本发明方法中应用气体前体时它也可处于液体或气 体状态。合适的可由于温度激活的气体前体对于本领域熟 练技术人员而言都是熟知的，例如乙酸甲酯，它是一种在人 体组织或生理温度或体温下是液体的化合物。正如本领域 熟练技术人员已认识到的，这样的化合物可在施用之前活 化，或者以乙酸甲酯的情况而言，也可在注入病人体内时活 化。即使是在施用前才置于适当的温度下，由处在液态或气 态的气体前体制备的微球体比起废弃的其中有密封气体的 微球体来说，也是一个更加稳定的整体。因此其中密封有由 温度激活的气体前体的微球体具备更长的货架寿命(Shelf life)，所得的含气体前体的微球体在体内很容易被检测出 来，这是由于它们与周围身体结构和器官相比具有较低的密 度。此外，正如这一领域熟练技术人员可以认识到的，这样 的温度敏感的由气体形成的微球体可用体内温度的指示剂 。

本发明的一个优选的方案中，在环境温度或室温下，在 施用给病人的时候，气体前体由液相转化成气相。根据气体 前体的类型，在I.V.注射前对比介质可冰冻保存和也可保 持冷却，例如通过保温注射器保存。注射时，由于最大的超 声波增强，气体前体随之膨胀。

气体前体的选择是在进入病人或动物体内时，在使用 前，在保存或制备过程中，使得气体能够在靶组织或靶液体 处就地形成(例如在施加超声波，微波，磁能或光能(如激光 或红外)时)。温度激活的充气体前体微球体的制备是在低 于气体前体沸点的温度下进行的。此时，气体前体被封在微 球中使得在制备过程中并不发生相转化，不同的是，充气体 前体微球体是由液态气体前体制备的。相转化可在任何时 候发生，这是由于允许温度超过前体的沸点温度。

对于低沸点气体前体，可采用冷却到低温的微观强化流 态剂装置将液体前体乳化。利用液体形式前体时，在液体介 质中使用溶剂也可以降低沸点。另外，运用集中的高超声波 能可得约70℃的上限温度。

作为本发明优选的实施方案，在体内通过温度调节相转 化使得气体前体变成气体，气体前体也可用于制备稳定的对 比介质并在进入病人体内之前转变成气态，其中气体是由前 体得到的。这方面的制备包括在生产过程中将气体前体导 入微球体。

气体前体可用来制备稳定的充气微球体，该充气微球是 在使用前预先生成的。在本发明的这种形式中，是在低于各 气体前体液—气相转化温度的条件下，将气体前体加到含悬 浮和/或稳定介质的容器中。随着温度随后升高，在气体前 体和液体溶液间形成乳液，而气体前体则经历了由液态向气 态的转化。作为加热和气体形成的结果，气体取代了液体悬 浮液上端部位的空气从而形成充气类脂球，该球中封闭着从 气体前体转化来的气体，环境气体(如空气)，或共同残余气 体或环境气体。相转化可用于对比介质的理想混合及稳定 化。例如，气体前体如全氟丁烷可能封闭在脂质体中，而当 温度上升到超过3℃(全氟丁烷沸点)时，产生脂质体封闭的 全氟丁烷气体。在一个另外的实例中，气体前体氟丁烷可被 悬浮在含乳化剂和稳定剂的含水悬浮液中并在常用涡旋器 中旋转，乳化剂和稳定剂如甘油或丙二醇。涡旋是在足够低 温度下进行的使得气体前体为液体，并在样品温度升至超过 由液态向气态的相转化温度后继续进行。在这个过程中，在 微滴乳化作用下前体被化成气体。在适当的稳定剂存在上， 产生极其稳定的充气脂质体。

类似地，室温下为液体的全氟戊烷也可被封闭在类脂中 。室温下将少量(0.76—1.52uL)液体全氟戊烷前体加到类 脂溶液(如82摩尔％二棕榈酰磷脂酰胆碱，8摩尔％二棕榈 磷脂酰乙醇胺—PEG500和10摩尔％二棕榈酰磷脂酸)的 80体积％的盐水和10体积％丙二醇的溶液中并振荡。随后 悬浮液温度上升超过相转化温度(例如超过30℃)激发了全 戊烷气体前体由液态向气态的转化。产生泡沫并得到充气 脂质体。制得的充气脂质体的平均大小通常超过20微米， 正如在Wig—L—BugTM上通过涡旋或振荡制得的那样。过 滤脂质体而单孔8微米的过滤器已足以除去99％的大小超 过10微米的颗粒。由于脂质体是有弹性和易变形的。过滤 后它们变成了更小的类脂涂布的脂质体。当脂质体冷却到 室温或更低温度时，残余的全氟戊烷气体前体回到液态，结 果是将全氟戊烷毫微颗粒封闭在脂质体中。温度回升时(如 注射入体内时)可形成适当大小的脂质体。

这里介绍封闭全氟戊烷气体前体的另一种方法。将少 量(0.76—1.54μL)全氟戊烷加到上述类脂的含水溶液中， 并使用一种不同的搅拌方法。使物质置于微观强化流态剂 (Microfludics，Newton，MA)中并于20℃16000psi条件下 使它通过调整压力和通过量，可相应调节脂质体的大小，从 而得到封闭有平均大小为约直径5nm的全氟戊烷毫微颗粒 的各平均直径约为100nm的小脂质体。温度调节的气体转 化(例如注入体内时)之后随着膨胀，每个这一大小的毫微颗 粒都可产生出直径略小于10微米的脂质体。在这种情况 下，所得的脂质体可用类脂部分涂布且所得脂质体的大小是 可控制的。在制备过程中，可有几种方法除去残余的全氟戊 烷。首先，液体全氟戊烷的密度大并沉入底部，而封闭有毫 微颗粒或微颗粒的脂质则趋向于留在悬浮液中。其次，可温 热悬浮液；较大的未被封闭的微颗粒比全氟戊烷的毫微颗粒 形成更大的脂质体，而这些更大的脂质体将更快地上升容器 上部而被除去。一个非常实际的方法就是采用过滤，这是在 注入病人体内过程中一个协调的方法。

可用微胶粒制品(Micelluar formulation)取代脂质体 (封闭有全氟戊烷毫微颗粒的类脂双层结构)。微胶粒制品 为类脂的适当混合物，例如花生油与胆酸钠，胆固醇和丙三 醇混合(任选与部分聚乙二醇基(PEGlated)类脂混合)。微 观强化流态化过程可用来制备气体前体微观蜂窝状形式和 用来制备乳液的毫微颗粒或微粒，其中每个颗粒封闭的全氟 戊烷毫微颗粒的平均直径约50nm上下。

当在低于气体前体相转化温度下操作时可采用超声处 理。在这种情况下，气体前体可通过超声处理而被乳化使得 液体前体的毫微颗粒分散在悬浮介质中(如分散在磷脂悬浮 液中并以微毫颗粒形式被封闭在脂质体中)。

因此，在制备过程中，贮藏时或使用前，可选择本发明的 气体前体在体内生成充气脂质体或设计现场制备脂质体。 已知在液气体前体中液体的量，则可确定变成气态时脂质体 的大小。

作为本发明的另一方面的实施方案，通过使气体前体由 液态转化成含水乳液并保持已知颗粒大小，且一旦向气态转 化完成，则可根据理想气体定律估计微气泡大小的最高值。 理想气体定律假定气体立即形成且在新形成的微气泡中没 有气体由于扩散到液体中而损失(自然界通常是含水的)。 因此，从乳液已知的液体体积，的确可预测出气体脂质体大 小的上限。

根据本发明，含所述颗粒大小含类脂气体前体的液滴的 乳液可被制备，使得达到特定温度时，如达到气体前体的沸 点时液滴将膨胀形成所述大小的气体脂质体。所述大小是 指实际大小的上限。由于诸如气体向溶液的扩散，气体在大 气中的损失以及压力加大等因素的影响，使得理想气体定律 不能完全符合。

理想气体定律以及由液态向气态转化时增加的气体体 积的计算方程如下

理想气体定律：PV＝nRT

其中：

P＝压力/大气压

V＝体积/升

n＝气体摩尔数

T＝温度/K

R＝理想气体常数＝22.4L大气压·度-1·摩尔-1

根据液体乳液中液体体积，密度和温度，液体前体的数 量(如摩尔数)以及液体前体的体积气体体积，可以推测计算 出来，即当前体转化成气体时所膨胀成的脂质体的体积也可 以已知了，假定立即膨胀成气体脂质体并忽略膨胀过程中扩 散，则计算出的体积将反映气体脂质体的大小的上限。

因此，前体液滴靠在乳液液体状态中的前体的稳定性而 成为球形，前体液滴的体积由以下公式求得

体积(球)＝4/3πr3

其中，r＝球半径

因此，一旦该体积得知，并已知在所需温度下液体的浓 度，则液滴中气体前体的液体数量可以求得。更准确地说， 可以应用以下公式：V气体＝4/3π(r气体)3根据理想气体定 律，

PV＝nRT

替换得，

V气体＝nRT/P气体

或，

(A)n＝4/3[π(r气体)3]P/RT

数量n＝4/3[π(r气体)3]P/RT*MWn

转化回液体体积

(B)V液＝[4/3[π(r气体)3]P/RT]*MWn/D]

其中D＝前体密度

求液体液滴的直径，

(C)直径/2＝[3/4π[4/3[π(r气体)3]P/RT]*MWn/ D]1/3推导出

直径＝2[(r气体)3]P/RT]*MWn/D]]1/3

为更进一步体现所述发明，根据其体积和特定半径，适 当大小的滤器能使气体前体液滴形成适当直径的球。

一个代表性的气体前体可用来形成确定大小的微球体， 如10微米直径。本例中，由于是在人体血流中形成的，所以 典型的温度是37℃或310°K。在一个大气压下用公式(A)， 7.54×10-17摩尔的气体前体需用来形成一个10微米直径 微球体的体积。

用上述计算出的气体前体的数量，并使用1—氟丁烷， 其分子量为76.11，沸点为32.5℃，密度为20℃下6.7789克 /毫升，可进一步计算出5.74×10-15克的该前体需用来形成 一个10微米的微球体。根据浓度和公式(B)可进一步推断， 8.47×10-16毫升的液体前体需用来形成一个具有10微米 上限的微球体。

最后，运用公式(C)，需要生成一个具有0.0272微米半 径或0.0544直径的类脂滴的乳液用来形成具有10微米上 限的气体前体充成的微球体。

使用适当大小的滤器可方便地生成具有这种大小的乳 液，此外，当滤器的大小是以来形成确定大小的气体前体液 滴时，该大小也足以滤除任何可能的细菌污染，所以可用来 作为无菌过滤。

本发明的此实施方案可运用于所有温度激活的气体前 体。事实上，溶剂系统的冰点降低允许气体前体在0℃以下 进行液体到气体的相变，溶剂系统可被选用来提供一种气体 前体悬浮的介质。例如，20％的丙二醇溶于缓冲盐水中表现 出的冰点比水本身的冰点有很大的降低，通过增加的丙二醇 的量或加入诸如氯化钠的物质可进一步降低冰点。

也可以用物理的方法来选择适当的溶剂体系。当物质， 固体或液体，这里称作溶质，溶解在溶剂中，如水缓冲液，冰 点的降低程度依赖于溶液的组成。所以根据Wall的定义， 冰点的降低可表述为：

InXa＝In(1—Xb)＝ΔHfus/R(1/T0—1/T)

其中：

Xa＝溶剂的摩尔数

Xb＝溶质的摩尔数

ΔHfus＝溶剂的熔化热

T0＝正常溶剂的冰点

正常溶剂的冰点可产生。如果Xb小于Xa，则上述公式 须改写：

Xb＝ΔHfus/R[T＝T0/T0T]≈ΔHfusΔT/RT02

上述公式假设温度改变ΔT相对于T2是小的上述公式 在假设溶质的浓度以每千克溶剂摩尔数时可表达为重量摩 尔浓度m。所以

Xb＝m/[m＋1000/ma]≈mMa/1000

其中：

Ma＝溶剂的分子量

m＝溶质的每1000克摩尔数的重量摩尔浓度。

因此，替换Xb系数：

ΔT＝[MaRT02/1000ΔHfus]m

或ΔT＝Kfn，其中

Kf＝MaRT02/1000ΔHfus

Kf是摩尔的冰点等于在一个大气压下水的每单位摩尔 的浓度1.86度。上述公式可运用于准确确定所述本发明中 填充气体前体的微球体溶液的摩尔冰点。

因此，可运用上述公式估计冰点的降低以及确定适当的 液体或固体溶质浓度来降低溶剂的冰点至适当的值。

准备活化气体前体填充脂质体的温度的方法包括：涡旋 本发明的充气体前体脂质体的含水悬浮液，这一方法的变化 包括任意地加热气体前体和类脂的含水悬浮液，任意地给悬 浮液的容器中通气，任意地振荡或使得气体前体脂质体同时 形成并冷却充气体前体脂质体悬浮液，可任意地加入高压灭 菌作为第一步骤(在约100℃至约130℃温度下)，作为过滤 取代了高压灭菌的需要；任意地通过约0.22μm的滤器压出 气体前体的含水悬浮液和类脂，过滤可在体内施用所得脂质 体时进行，这时所用的滤器在约0.22μm大小；

微乳化法是指通过振荡或涡旋转乳化本发明充气体前 体脂质体的含水悬浮液，并于患者给药前加热生成微球体； 以及

通过加热，和/或振荡在类脂悬浮液中形成气体前体，这 里密度较小的充气体前体微球体通过膨胀浮到溶液的上面 并取代了容器中其它的微球体，且使容器释放出空气。

在应用振荡气体滴注之前，采用冷冻干燥除去类脂中的 水和有机物。可采用干燥—气体滴注法从脂质体中除去水 。通过温热后在干燥脂质体(即预先干燥)中预先封入气体前 体，可使得气体前体膨胀而充满脂质体。在将其置入真空 后，气体前体也可用于填充干燥脂质体由于干燥脂质体是在 低于凝胶态向液晶态的转化温度之下保存的，可以气态气体 前体缓慢填充干燥室，例如，在3℃(全氟丁烷的沸点)和 40℃(类脂的相转移温度)之间用全氟丁烷填充由二棕榈酰 磷酰胆碱(DPPC)组成的干燥脂质体。此时，在约4℃到约 5℃间填充类脂体是优选的。

充气体前体微球体可与临床技术手段如超声波，微波辐 射或电磁能结合，以实现前体由液体向气体的转变，从而体 内调节定位的药物传递。通过选择沸点超过37℃的气体前 体，可形成具有长血中半衰期的为稳定毫微颗粒的充气体前 体微球体，或者，将其定位于预作用组织。然后，所需的超声 波，微波或电磁能集中作用在靶组织上并使得气体前体转化 成气体。在这个过程中，随着微球体在体内膨胀体积超过一 倍，加合在气体毫微颗粒的涂布或稳定化乳液中的药物和生 物活性物质被释放出来。适当的气体前体的一个好的实例 为2—甲基—2—丁烯，其沸点为38.6℃。另外，这些气体前 体在溶解更加亲水的药物方面是特别有效的，例如蒽环类抗 菌素，它们在水基制剂中是很难溶解的。

正如本领域熟练技术人员所认识到的那样，可利用微乳 化法，例如从温度激活的气体前体得到的充气脂质体的稳定 化作用，生产大量稳定性提高的气体微球体产品。

通过选择适当的溶剂体系和气体前体以及稳定剂，可以 得到比以前产品有改善的微球体产品，可选择溶剂体系为气 体前体悬浮液提供配体介质。实例之一，混入缓冲盐水的 20％丙二醇表现出的冰点比水本身的冰点有很大降低。通 过增加丙二醇的量或加入诸如氯化钠的物质，可进一步降低 冰点。溶剂体系冰点降低的重要性在于使得我们可以应用 在0℃以下发生气态向液态转化的气体前体。

应用这些气体前体的一个另外的优点在于它们在体内 比非前体气体如空气和氮气稳定，这是因为由前体产生的气 体在含水介质中通常比空气或氮气不易扩散和溶解，而所得 的对比试剂通常比传统的气体或非前体对比试剂稳定。

本发明可用由温度激化的气体前体。表I中列出了在接 近正常体温(37℃)时发生液态向气态相转化的气体前体的 实例以及形成大小为10微米的微球体所需的乳化液滴的大 小。该表是由可生成具有所述大小的温度激活的含气体前 体脂质体的气体前体组成的。列此表并非以任何方式限制 本发明，而只是指出本发明可能的气体前体。

                                     表I

                 气体前体的物理特性以及可形成10μm微球体的乳化 液滴的直径     化合物  分子量   沸点   (℃)    密度 可制备10微米微球体的 乳化液滴的直径(μm)     全氟戊烷   288.04   57.73   1.7326     2.9     1—氟丁烷   76.11   32.5   6.7789     1.2     2—甲基丁烷   72.15   27.8   0.6201     2.6     2—甲基—1—丁烯   70.13   31.2   0.6504     2.5     2—甲基—2—丁烯   70.13    8.6   0.6623     2.5  2—甲基—1—丁烯—3—炔   66.10   34.0   0.6801     2.4     3—甲基—1—丁炔   68.12   29.5   0.6660     2.5     八氟环丁烷   200.4   -5.8   1.48     2.8     十氟丁烷   238.04   -2   1.517     3.0     六氟乙烷   138.01   -78.1   1.607     2.7     十二氟戊烷   288.05   29.5   1.664     2.9     八氟—2—丁烯   200.04   1.2   1.5297     2.8     全氟环丁烷   200.04   -5.8   1.48     2.8     八氟环戊烷   212.05   27   1.58     2.7     全氟环丁烯   162   5   1.602     2.5     全氟甲烷   88.00   -129   3.034     3.3     全氟乙烷   138.01   -79   1.590     1.0     全氟丁烷   238.03   3.96   1.6484     2.8

来源：Chemical Rubber Company Handbook of Chem- istry and Physics Robert C.West and David R.Lide，eds. CRC Press，Inc.Boca Raton，Florida(1989—1990)。

无论如何，气体前体的实例并不限于表I。实际上，在针 对大量不同的应用时几乎可以使用任何液体，只要它们处在 适当的活化温度时能够发生向气态的相转移。可用的气体 前体实例包括下述，但绝不局限于这些；六氟丙酮；异丙基乙 炔；丙二烯；四氟代丙二烯；三氟化硼；1，2—丁二烯；1，3—丁 二烯；1，3—丁二烯；1，2，3—三氯—2—氟—1，3—丁二烯；2 —甲基—1，3—丁二烯；六氟代1，3—丁二烯；丁二炔；1—氟 —丁烷；2—甲基丁烷；十氟代丁烷；1—丁烯；2—丁烯；2—甲 基—1—丁烯；3—甲基—1—丁烯；全氟代—1—丁烯；全氟代 —1—丁烯；全氟代—2—丁烯；1，4—苯基—3—丁烯—2— 酮；2—甲基—1—丁烯—3—炔；硝酸丁酯；1—丁炔；2—丁 炔；2—氯—1，1，1，4，4，4—六氟丁炔；3—甲基—1—丁炔；全 氟代—2—丁炔；2—溴丁醛；羰基硫化物；丁烯腈；环丁烷；甲 基环丁烷；八氟环丁烷；全氟环丁烯；3—氯环戊烯；全氟乙 烷；全氟丙烷；全氟丁烷；全氟戊烷；全氟己烷；环丙烷；1，2— 二甲基环丙烷；1，1—二甲基环丙烷；1，2—二甲基环丙烷；乙 基环丙烷；甲基环丙烷；联乙炔；3—乙基—3—甲基二吖丙 啶；1，1，1—三氟重氮乙烷；二甲胺；六氟代二甲胺；二甲基乙 基胺；二(二甲膦)胺；2，3—二甲基降冰片烷；全氟代二甲基 胺；二甲基氧氯化物；1，3—二氧戊环—2—酮；全氟化碳如 但并不局限于此4—甲基—1，1，1，2—四氟代乙烷；但并不 局限于此；1，1，1—三氟代乙烷；1，1，2，2—四氟代乙烷；1，1， 2—三氯—1，2，2—三氟乙烷；1，1—二氯乙烷；1，1—二氯— 1，2，2，2—四氟乙烷；1，2—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2，3— 五氟乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；1—氯—1，1，2，2—四氟 乙烷；2—氯—1，1—二氟乙烷；氯乙烷；氯代五氟乙烷；二氯 三氟乙烷；氟乙烷；六氟乙烷；硝基—五氟乙烷；亚硝基五氟 乙烷；全氟代乙烷；全氟代乙胺；乙基乙烯基醚；1，1—二氯乙 烯；1，1—二氯—1，2—二氟乙烯；1，2—二氟乙烯；甲烷；三氟 化甲磺酰氯；三氟化甲磺酰氟；三氟化(五氟化硫代)甲烷；溴 化二氟化亚硝基甲烷；溴化氟化甲烷；三氟化溴化甲烷；硝基 二氟化氯化甲烷；二硝基氯化甲烷；氟化氯甲烷；三氟化氯化 甲烷；二氟化氯化甲烷；二氟二溴甲烷；二氟二氯甲烷；氟化 二氯化甲烷；二氟甲烷；碘二氟甲烷；二硅烷醇甲烷；氟化甲 烷；碘化甲烷；三氟化碘化甲烷；三氟硝基甲烷；三氟亚硝基 甲烷；四氟甲烷；氟化三氯甲烷；三氟甲烷；三氟化甲亚硫酰 氯；2—甲基丁烷；甲醚；甲基异丙基醚；乳酸甲酯；亚硝酸甲 酯；甲基硫化物；甲基乙烯基醚；氖；新戊烷；氮气(N2)；一氧 化二氮；1，2，3—十九碳烷三—羰酸—2—羟基三甲基酯；1— 十九碳烯—3—炔；氧气(O2)；1，4—戊二烯；正戊烷；全氟戊 烷；4—氨基—4—甲基—2—戊酮；1—戊烯(顺)；2—戊烯 (反)；3—溴代—1—戊烯；全氟化1—戊烯；四氯代邻苯二甲 酸；2，3，6—三甲基哌啶；丙烷；1，1，1，2，2，3—六氟代丙烷； 1，2—环氧丙烷；2，2—二氟丙烷；2—氨基丙烷；2—氯丙烷；1 —硝基七氟丙烷；1—亚硝基氟代丙烷；全氟丙烷；丙烯；2，3 —二氯—1，1，1，2，3，3—六氟丙烷；1—氯丙烯；氯代丙烯 (反)；2—氯代丙烯；3—氟代丙烯；全氟代丙烯；丙炔；3，3，3 —三氟代丙炔；3—氟苯乙烯；六氟化硫；十氟化二硫 (S2F10)；2，4—二氨基甲苯；三氟乙腈；三氟甲基过氧化物； 三氟甲基硫化物；六氟化钨；乙烯基乙炔；乙烯基醚；氩气；氮 气；空气和其它环境气体。

本发明优选的气体全氟化碳为氟气，全氟甲烷，全氟乙 烷；全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷；更优选的为全氟乙烷，全 氟戊烷，全氟丙烷和全氟丁烷；最优选的为全氟戊烷，全氟丙 烷全氟丁烷它们作为惰性较大的全氟化气体且毒性较小。

上述的气体在体内比非前体气体如空气和氮气稳定，这 是因为从气体前体得到的气体在含水介质中比空气或氮气 更不易扩散和溶解，因此所得的治疗剂传递系统通常比常规 的气体或非前体基对比试剂更加稳定。

这里所述″充气的″是指具有内腔的微球体，该内腔至少 有10％气体，优选至少有约25％气体；较优选有至少约 50％气体，更优选至少有约75％气体，最优选至少有约90％ 气体。本专业人员在掌握了本申请内容之后应当理解也可 以使用气体前体，随后活化形成气体。

各种生物可容性气体均可用于本发明的充气微球体内 。这类气体包括空气氢气，氮气，二氧化碳，氧气，氩气，氟，氖 气，氖气，氦气，或任何所有这些气体的组合。其它适宜气体 对于掌握了本申请内容的专业人员而言是显而易见的。

本发明的微球体优选由不透性材料组成。不透性材料 是指在典型的贮藏条件下或在超声波诱发释放发生之前的 使用过程中不允许基本量微球囊内含物渗出的材料。典型 的贮藏条件例如为4℃维持48小时未脱气的0.9NaCl水溶 性溶液。所用的与不透性有关的术语″基本量″被定义为大 于约50％内含物，内含物既包括气体前体也包括治疗剂。贮 藏期间优选不超过约25％的气体，气体前体和治疗剂被释 放，更优选不超过10％的气体，气体前体和治疗剂被释放， 最优选不超过约1％的气体，气体前体和治疗剂被释放。贮 藏温度优选为低于形成微球体的材料的相变温度和低于气 体前体活化温度。但是气体前体也在制备和贮藏过程中活 化。

至少已部分发现充气脂质体的气体不透性与其凝胶态 至液晶态的相变温度有关。″凝胶态至液晶态的相变温度″ 是指类脂双层从凝胶态转变成液晶态的温度。例可参见 Chapman等，J Biol，Chem.1974，249，2512—2521。一般认 为凝胶态至液晶态的相变温度越高，在给定温度下则脂质体 的气体不透性越好。参见下表II和Derek Marsh，CRC Handbook of Lipid Bilayers(CRC Press，Boca Raton，FL 1990)，P139，给出了饱和二酰基Sn—甘油基—3—胆碱磷酸 的主链熔点转变。然而，还值得注意的是从由具有较低凝胶 态至液晶态相变温度的类脂组成的充气体前体脂质体中释 出治疗化合物一般只用较低能量。

当所用类脂的凝胶态向液晶态的相转化温度高于室温 度时，可调整容器的温度，例如，提供冷却机制以冷却含类脂 溶液的容器。

因为各种气体前体(如全氟丁烷)比其它气体，如空气， 更不易溶解和扩散，当被封闭在脂质体中时它们往往更加稳 定，即使脂质体是由液晶态的类脂组成的情况下也是这样。 如由液晶态类脂如鸡旦磷脂酰胆碱构成的小的脂质体可用 于封闭全氟代丁烷的毫微颗粒。例如，直径在约30nm至约 50nm的类脂载体可用来封闭平均直径约25nm的全氟代丁 烷的毫微颗粒。温度活化转化之后，充前体脂质体将产生直 径约10微米的微球体。在这种情况下，类脂通过小的类脂 体限定了微球体的大小，类脂也可稳定所得的微球体。在这 种情况下，在生成封闭前体的脂质体方面，某些技术手段如 微乳化仍用是优选的。在封闭有气体前体的小脂质体乳液 的制备方面，微观强化流态(Microfiudics，Newton，MA)是 十分有用的。

                    表II 饱二酰基—Sn—甘油基—胆碱磷酸主链从凝胶态向液晶态 转化的相转化温度     #酰基链上的碳原子     主要相转化温度(℃)     1，2—(12∶0)     —1.0     1，2—(13∶0)     13.7     1，2—(14∶0)     23.5     1，2—(15∶0)     34.5     1，2—(16∶0)     41.4     1，2—(17∶0)     48.2     1，2—(18∶0)     55.1     1，2—(19∶0)     61.8     1，2—(20∶0)     64.5     1，2—(21∶0)     71.1     1，2—(22∶0)     74.0     1，2(23∶0)     79.5     1，2—(24∶0)     80.1

各种类脂的凝胶态到液晶态的相变温度对本专业人员 而言显然是显而易见的，并且这些温度如Gregoriadis编辑 的Liposone Technology，Vo1.I，1—18(CPC Press，1984)中 被描述。

在某些优选方案中，形成微球体的材料的相变温度大于 欲给药病人的体内温度。例如，相变温度大于37℃的微球体 优选用于人类给用。一般而言，优选相变温度大于约20℃的 微球体。

在优选的方案中，本发明微球体是稳定的，稳定性被定 义为从微球体形成至施加超声波作用的时间内的抗破裂性 。根据稳定性可选择如类脂类材料制造微球体。例如，由 DSPC(二硬脂酰磷脂酰胆碱)组成的充气体前体脂质体比 由DPPC(二棕榈酰磷脂酰胆碱)组成的充气体前体脂质体 更加稳定，并且这两种脂质体也比卵磷脂酯酰胆碱(EPC)组 成的充气体前体脂质体更稳定。优选从形成至施加超声波 作用，这段时间内微球体的破裂不超过50％，较优选微球体 的破裂不超过约25％，更优选微球体的破裂不超过10％，最 优选不超过1％微球体。

此外，已发现可采用与聚乙二醇聚合物共价连接的类脂 稳定本发明的充气体前体脂质体，这一共价连接的类脂通常 被称为PEG化的类脂。已发现向任何脂质体膜内加入至少 少量带负电荷的类脂，或带净负电荷的类脂，尽管这是非必 要的但有助于得到无相互融合破裂倾向的脂质体。″至少少 量″是指总类脂量的约1到10摩尔百分比。适宜的负电脂 质对本专业人员是十分显然的，包括例如磷酯酰丝氨酸和脂 肪酸。具有最优选的施加共振频率超声波作用时的破裂能 力，回声能力和稳定性的脂质体是由二棕榈酰磷脂酰胆碱制 成的脂质体。

进一步，本发明微球体最好在脉管系统内要足够稳定以 便它们经受起再循环。充气体前体微球体可被涂层以使网 状内皮系统的吸入降至最低程度。有用的涂渍物包括例如 神经节苷脂，葡糖醛酸酯，半乳糖酸酯，guluronate，聚乙烯 醇，葡聚糖，淀粉，磷酸化和磺酸化的单—，二—，三—，寡— 和多糖类以及清蛋白。出于如避免被免疫系统识别的目的， 也可将微球体涂层。

在优选方案中，由于微球体的不透性，在它们到达需要 治疗患者的内部病区和施加超声波作用之前，至少约50％， 优选至少约75％，较优选至少约90％且最优选约100％的 微球体内治疗药物和气体内含物仍保留在微球体内。

另外，用于构成微球体的物质应当是生物相容的，生物 相容物质被定义为在所给用的量下它们对病人是无毒的，优 选不会产生疾病，最优选是无害的。

用于构成微球体的物质还优选为挠性的。在本申请中 充气体前体微球体的挠性被定义为结构改变其形状以通过 大小小于微球体的孔洞的能力。由于类脂膜的挠性，它们有 能力在压力作用下改变直径和硬度，因而，可非进入性的通 过反射的超声波信号测量体内的压力。

由于脂质体非常适合用于截留气体，因此它们构成了本 发明的优选方案。另外，由于它们的生物相容性以及容易接 纳亲脂性治疗化合物的能力，故优选充气体前体微球体，其 中所述治疗化合物在脂质体破裂之后很容易穿过细胞膜。 掌握了本申请内容的专业技术人员将会认识到根据预期用 途可选择特殊的类脂。

当由水合多层类脂悬浮液而不是由大的单层膜载体或 干燥类脂制备时，从气体前体得到的充气类脂球的产率会提 高。由类脂悬浮液制备的充气微球体在其最终产品中未水 合类脂的量减少了。未水合类脂是以大小不同的不定形团 出现的并且不是所期望的。多层类脂悬浮液可以高压灭菌 作为最终的灭菌步骤而对充气体前体微球体的制备没有损 害。高压灭菌不改变类脂颗粒的大小且不减弱类脂悬浮液 封闭气体前体或气体的能力。可用类脂悬浮液填充无菌瓶 或注射器，然后在现场通过高压灭菌消毒。可在立即使用之 前，通过手工搅拌在无菌容器中现场高压灭菌之后将气体注 入类脂悬浮液中，例如通过旋转，高压密封法或其它机械搅 拌，如振动床。

假如微球体的循环半衰期足够大，则当微球体进入人体 内时一般会通过靶组织。通过使声波诱导的破裂聚集在所 选择的欲处理组织上，治疗药物将在靶组织上局部释放，作 为靶向性的另一帮助，也可将抗体，碳水化合物，肽，糖肽，糖 脂，凝集素，复合糖及合成和天然聚合物掺合到微球体表面 内，聚合物但不局限于聚乙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯 基醇，它们可通过烷基化，酰基化掺合到微球体的表面上。 磷酯如二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)，二棕榈酰磷脂酰乙 醇胺(DPPE)或二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)的甾醇基 或其衍生的端基也可掺合到微球体的表面之内。

当类脂物质用于制备微球体时，例如，形成脂质体各种 类脂均可在微球体的建造中应用。可在脂质体制备中应用 的物质包括任何本专业人员已知的适合脂质体制备的物质 或它们的组合。所用的类脂可以是天然的或合成的。选择 特定的类脂以便优选适合血清最好稳定性和理想性质如短 血浆半衰期与长血浆半衰期的比值。

充气脂质体中的类脂可以是单层双层型或多层双层型， 优选多层型。

用于形成脂质体微球体的类脂包括但不局限于：类脂如 脂肪酸，溶血类脂类，具有饱和和不饱和类脂的磷脂酰胆碱， 它包括二油酰磷脂酰胆碱；二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱；二(十五 烷酰)磷脂酰胆碱；二月桂酰磷脂胆碱；磷脂酰乙醇胺类如二 油酰磷脂酰乙醇胺；磷脂酰丝氨酸，磷脂酰甘油；磷脂酰肌 醇；神经鞘脂类如神经鞘磷脂；糖基类脂如神经节苷脂GMl 和GM2；糖脂；硫苷脂；糖神经鞘脂；磷脂酸；棕榈酸；硬脂 酸；花生四烯酸；油酸；载有聚合物的类脂，所述聚合物如聚 乙二醇，几丁质，透明质酸或聚乙烯吡咯烷酮；载有磺化的单 —，二—，寡—或聚糖的类脂；胆甾醇；胆甾醇硫酸酯以及胆 甾醇半琥珀酸酯；维生素E半琥珀酸酯，含有通过醚和酯连 结的脂肪酸的类脂，聚合类脂，二乙酰基磷酸酯，十八烷胺 (stearylamine)，心磷脂，含有链长为6—8个碳原子的短链 脂肪酸的磷脂，具有不对称酰基链的合成磷脂(如一条为6 碳原子酰基链而另一条为12碳原子酰基链的组成磷脂)，6 —(5—胆甾烯—3β—基氧基)—1—硫代—β—D—吡喃半乳 糖苷，二半乳糖二甘油酯，6—(5—胆甾烯—3β—基氧基)己 基—6—氨基—6—脱氧—1—硫代—β—D—吡喃半乳糖苷， 6—(5—胆甾烯—3β—基氧基)己基—6—氨基—6—脱氧—1 —硫代—α—D—吡喃甘露糖苷，12—(((7’—二乙氨基香豆 素—3—基)羰基)甲氨基)—十八烷酸；N—[12—(((7’—二 乙基氨基香豆素—3—基)羰基)甲氨基)十八酰基]—2—氨 基棕榈酸；4’—三甲铵基丁酸胆甾烯酯；N—琥珀酰二油酰 磷脂酰乙醇胺；1，2—二油酰—Sn—甘油；1，2—二棕榈酰— Sn—3—琥珀酰甘油；1，3—二棕榈酰—2—琥珀酰甘油；1— 十六烷基—2—棕榈酰甘油磷酰乙醇胺以及棕榈酰高半胱氨 酸，和/或它们的结合。脂质体可以单层或双层形式生成，可 有或没有涂层。

具有亲水聚合物如聚乙二醇(PEG)的类脂，PEG包括 但不限于PEG2000MW，PEG5000MW和PEG8000MW， 在改善充气体前体类脂体的稳定性和大小分布方面是特别 有用的。不同摩尔比的PEG化的类脂如具有PEG5000的 二棕榈酰磷酯酰乙醇胺，也是有用的；8摩尔百分比DPPE 是优选的。对封闭所体前体特别有用的一个优选的产品含有 83摩尔百分比DPPC，8摩尔百分比的DPPE— PEG5000MW和5摩尔百分比的二棕榈酰磷脂酸。

另外，用于生成混合体系的化合物的实例包括(但绝不 仅限于)月桂基三甲基溴化铵(十二烷基一)，鲸蜡基三甲基 溴化铵(十六烷基—)，肉豆蔻基三甲基溴化铵(十四烷基 —)，烷基二甲基苄基氯化铵(烷基＝C12，C14，C16)，苄基二 甲基十二烷基溴/氯化铵，苄基二甲基十六烷基溴/氯化铵， 苄基二甲基十四烷基溴/氯化铵，鲸蜡基二甲基乙基溴/氯化 铵，或鲸蜡基溴/氯化吡啶。其它全氟化碳如五氟十八基 碘，全氟辛基溴(PEOB)，全氟萘烷，全氟十二氢化萘，全氟 辛基碘，全氟三丙基胺，和全氟三丁基胺。可以用现有技术中 已知方法和美国专利4,865,836所述将全氟化碳夹在脂质 体或稳定于乳液中，在悬浮液体积没有明显改变的情况下上 述脂类悬浮液的实例也可以通过高压釜灭菌，将本发明优选 产品混入作为混合溶剂体系的脂类，该本系为正常盐水∶丙 三醇∶丙二醇为8∶1∶1或9∶1∶1比例。

如果需要，阴离子或阳离子脂类都可以用于连结阴离子 或阳离子药物。阳离子脂类可以用于将DNA和RNA类似 物连结到填充气体前体的微球体表面内或表面上。各种阳离 子脂类如DOTM A，N—[1—(2，3—二油酰氧基)丙基]— N，N，N—三甲基氯化铵；DOTAP，1，2—二油酰氧基—3— (三甲基氨)丙烷；和DOTB，1，2—二油酰—3—(4′—三甲基 氨)丁酰基—sn丙三醇均可以使用。总之，在脂质体中阳离 子脂类与非阳离子脂类的摩尔数之比可以是，如比，1∶ 1000，1∶100，优选在2∶1到1∶10之间，更优选的是1∶1 到1∶2.5之间，最优选的是1∶1(阳离子脂类与非阳离子 脂类摩尔量之比，例如，DPPC)。当阳离子脂类用于构成微 球体时，大量脂类可以由非阳离子脂类组成。该非阳离子脂 类优选二棕榈酰卵磷脂，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺或二油酰膦 脂酰乙醇胺。代替上述阳离子脂类，带有阳离子聚合物如多 熔素或聚精氨酸的脂类也可以用于构成微球体以及给微球 体外部提供治疗的束缚负电荷如遗传材料。以阴离子脂类为 例，它可以(但不限于)由十二烷基硫酸钠，硬脂酸，棕榈酸， 磷脂酸和胆甾醇硫酸酯。

其它有用的脂类或其结合剂对本领域技术人员是显而 易见的，它保持本发明精神并且属于本发明范围。例如，对于 体内靶向性可使用含烃脂类，如美国专利4,310,505所述， 该公开全文在此引作参考。

最优选的脂类为磷脂，优选DPPC和DSPC，最优选 DPPC。

可以用于产生填充气体前体的微球体的饱和和不饱和 脂肪酸优选包括(但不限于)具有12—22个直链或支链形式 的碳原子的分子。也可以用由类异戊二烯单元组成和/或含 异戊二烯基的烃基。可用的饱和脂肪酸的实例包括(但不限 于)月桂酸，肉豆蔻酸，棕榈酸和硬脂酸。可用的不饱和脂肪 酸的实例包括(但不限于)异月桂酸，异肉豆蔻酸，异棕榈酸， 异硬脂酸，类异戊二烯和含异戊二烯基的基团。

通常，用于制成含治疗剂传输系统的气体前体包括一种 或多种乳化或稳定剂。这些乳化/稳定剂的目的有两个。一 是这些制剂可以帮助维持填充气体前体的微球体的大小。正 如上面所说，这些微球体的大小通常会影响最终充气微球体 的大小。二是乳化剂和稳定剂可以用来包裹或稳定从前体得 到的微球体。含对比剂微球体的稳定化对使自然条件下对比 作用最大化是显著的。虽然微球体的稳定化是优选的，但并 非绝对需要的，因为从气体前体得到的充气微球体比空气稳 定，所以它们仍被用来增强对比，例如，它们通过继周边静脉 注射之后的肺循环，即使没有特别被一个或多个包衣或乳化 剂稳定。然而，优选一种或多种包衣或稳定剂作为灵活的稳 定材料。由于这些稳定化包衣更脆，压力改变时更容易破碎， 例如，通过心脏和动脉时，所以由清蛋白或蛋白质稳定气体 微球体没有多大效果。由于用这些化合物稳定的微球体更灵 活而且适于压力变化，所以用脂族化合物制备的脂质体是优 选的。

类脂或填充气体前体的脂质体的溶液可以，比如，通过 添加多种粘度调节剂来稳定，包括(但不限于)碳水化合物和 它们的磷酸和磺酸衍生物：聚类醚，优选分子量在400— 8000之间的；二—和三羟基烷和它们的聚合物，优选分子量 在800—8000之间的。丙三醇丙二醇，聚乙二醇，聚乙烯吡咯 烷和聚乙烯醇在本发明中也可以用作稳定剂。多孔或半固体 粒子如羟基磷灰石，金属氧化物和凝胶共沉淀物，例如，透明 质酸和钙可以用于制成一个中心或核心以稳定气体前体。当 然，固体粒子如石灰石，沸石和其它粒子一般被认为不适宜 用于注射到血管内(空间)，然而，它们对于形成捕获气体前 体的核心和作为有效的胃肠对比剂如对MRI或计算X线 体层照相术的功能是相当有用的。

乳化剂和/或溶解剂也可以与类脂和脂质体一起使用。 这些制剂包括(但不限于)阿拉伯胶，胆甾醇，二乙醇胺，单硬 脂酸甘油酯，羊毛酯醇，卵磷脂，单—和二—甘油酸，单—乙 醇胺，油酸，油醇，poloxamer，花生油，棕榈酸，硬脂酸聚氧 乙烯50，聚烃氧基35蓖麻油，聚烃氧基10油醚，聚烃氧基 20cetostearyl醚，硬脂酸40聚烃氧基酯，聚山梨酸酯20，聚 山梨酸酯40，聚山梨酸酯60，聚山梨酸酯80，丙二醇二乙酸 酯，丙二醇单硬脂酸酯，月桂基硫酸钠，硬脂酸钠，脱水山梨 醇单月桂酸酯，脱水山梨醇单油酸酯，脱水山梨醇单棕榈酸 酯，脱水山梨醇单硬脂酸酯，硬脂酸，三乙醇胺(trolamine) 和乳化蜡。所有用全氟脂肪酸作类脂组分的类脂类代替发现 于植物或动物原始类脂类的饱和或不饱和烃脂肪酸都可以 使用。可以同类脂或脂质体溶液一起使用的悬浮和/或粘度 增加剂包括(但不限于)阿拉伯胶，琼脂，藻酸，单硬脂酸铝， 膨润土，岩浆，carbomer 934P，羟甲基纤维素，钙和钠和钠 12，角叉菜胶，纤维素，糊精，明胶，瓜耳树胶，羟乙基纤维素， 羟丙基甲基纤维素，硅酸铝镁，甲基纤维素，果胶，聚环氧乙 烷，聚乙烯醇，聚烯吡酮，丙二醇藻酸酯，二氧化硅，藻酸钠， 黄蓍胶和黄原胶。

各种治疗剂中的任何一种都可以包封微球体。这里所用 的治疗剂是指对患者具有有益效果的制剂。这里所用的术语 治疗剂与对比剂和药物是同义词。

可以相信，某些前体的毫微粒和乳液对局部缺血和病变 组织的累积有特效。这些前体可以用来通过超声波探查局部 缺血和病变组织，也可以将药物传递到这些组织。依靠装有 包含气体前体的乳液或毫微粒的药物，然后所说药物可以被 传递到病变组织。例如，六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八 氟丙烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟 戊烷，全氟丁烷，1，1—二氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁 炔，全氟戊烷，全氟丁烷，八氟—2—丁烯或六氟丁—1，3—二 烯或八氟环戊烯等乳液(27℃)可用于传递药物如强心苷，血 管生成因子和作用于血管的化合物到心肌的局部缺血区域。 类似地，上述前体的乳液也可以用于传递反意DNA或化学 治疗剂到肿瘤。假定温度，pH值和氧密度的微小变化对某 些前体的累积，特别是在病变和局部缺血组织的沉积都有影 响。这此前体可用作传播载体或在超声方法中传递药物。

合适的治疗剂包括(但不限于)顺磁气体如大气，它含有 微量氧17，或顺磁离子如Mn+2，Gd+2，Fe+3，以及超磁粒子 (铁酸盐，氧化铁Fe3O4)，并因此可以用作磁响应成像 (MRI)，不透射线金属离子如碘，钡，溴或鸟的磁化率对比 剂，或用作X射线对比剂，四极矩核子气体适于用作磁响应 对比剂，抗肿瘤剂如铂化合物(例如，螺铂，顺铂和碳铂)，氨 甲嘌呤，氟尿嘧啶，亚德里亚霉素，丝裂霉素，柄型菌素，博莱 霉素，阿糖胞苷，阿糖腺嘌，呤巯基多熔素，长春新碱，白血福 恩，瘤可宁，米尔法兰(例如，PAM，L—PAM或苯丙氨酸氮 芥)，巯基嘌呤，邻对滴滴滴，盐酸甲基苄肼更生霉素(放线菌 素D)，盐酸柔毛霉素，盐酸阿霉素，紫杉酚，丝裂霉素，皱褶 霉素(光神霉素)，氨基导眠能，雌氮芥磷酸钠，氟硝丁酰胺， 亮丙瑞林乙酸盐，乙酸孕甾酮，柠檬酸三苯氧胺，睾内酯，腈 环氧雄烷，胺苯吖啶(m—MASA)，天冬酰胺酶(L—天冬酰 胺酶)，Erwina天冬酰胺酶，鬼臼乙叉甙(VP—16)，干扰素α —2a，干扰素α—2b，鬼臼噻吩甙(VM—26)，硫酸长春花碱 (VLB)，硫酸长春新碱，争光霉素，硫酸争光霉素，氨甲嘌 呤，阿霉素，阿拉伯糖苷，羟基脲，甲基苄肼，和氮烯咪胺；有 丝分裂抑制剂如鬼臼乙叉甙和长春花碱，射线药剂如放射性 碘和磷制品；激素如孕激素，雌激素和抗雌激素；抗蠕虫，抗 疟疾和抗结结核药物；生物制品如免疫血清，抗毒素和抗蛇 毒血清；狂犬病预防制品；菌苗；病毒疫苗；氨基糖苷；呼吸制 品如黄嘌呤衍生物茶碱和按茶碱；甲状腺剂如碘制品和抗甲 状腺剂；心血管制品包括螯合剂和汞利尿剂和强心糖苷；胰 高血糖素；血液制品如肠外铁，氯化血红素，血卟啉及其衍生 物；生物相应改良剂如胞壁酰二肽，胞壁酰三肽，微生物细胞 壁成分，淋巴因子(例如，细菌内素素如脂多糖，巨噬细胞活 性因子)，亚单位细菌(如分支杆菌属，棒状杆菌属)，合成二 肽N—乙酰基—胞壁酰基—L—丙氨酰基—D—异谷氨酰 胺；抗霉菌剂如酮哌恶咪唑，制霉菌素，灰黄霉素，氟胞嘧啶 (5—fc)，双氯苯咪唑，两性霉素B，蓖麻毒蛋白，环孢霉素和 β—内酰胺抗生素(例如，sulfazecin)；激素如生长激素，黑素 细刺激素，雌二醇，二丙酸氯地米松，倍他米松，乙酸倍他米 松和倍他米松磷酸钠，维他米松(vetamethasone)磷酸二钠， 维他米松磷酸钠，乙酸可的松，地塞米松，乙酸地塞米松，地 塞米松磷酸钠，9—去氟肤轻松，氧化可的松，乙酸氧化可的 松，氢化可的松环戊丙酸酯，氢化可的松磷酸钠，氢化可的松 琥珀酸钠，甲基强的松龙，乙酸甲基强的松龙，甲基强的松龙 琥珀酸钠，乙酸对氟米松，强的松龙，乙酸强的松龙，强的松 龙磷酸钠，强的松龙叔丁乙酯，强的松，去炎松，丙炎松，双醋 去炎松，乙酸丙炎松，乙酸氟氢可的松，催产素，加压素，和它 们的衍生物；维生素如维生素B12neinoic酸，维生素A和衍 生物如棕榈酸维生素A，以及α—生育酚；肽如超氧化锰歧 化酶；酶如碱性磷醇酶；抗过敏剂如amelexanox；阻凝剂如 苯丙香豆素和肝素；循环药物如荼心安；代谢增强剂如谷胱 甘肽；抗结核药如对—环水杨酸，异烟肼，卷曲霉素硫酸环丝 氨酸，乙胺丁醇盐酸乙硫异烟胺，吡嗪酰胺，利福平和硫酸链 霉素；抗病毒药物如无环鸟苷，金刚烷胺叠氮胸苷(AZT， DDI，膦甲酸，或叠氮胸苷)，三唑核苷和阿糖腺苷一水合物 (阿糖腺苷，ara—A)；抗绞痛药如硫氮卓酮，硝苯吡啶，戊脉 安，四硝赤醇，硝异梨醇，硝酸甘油(三硝酸甘油酯)和硝酸戊 四醇酯；抗凝药如苯丙香豆素，肝素；抗生素如氨苯砜，氯霉 素，新霉素，头孢氯，头孢羟氨苄，头孢氨苄，头孢环己烯红霉 素，氨林可霉素，林可霉素，羟氨苄青霉素，氨苄青霉素，氨苄 青霉素碳酯，羧苄青霉素，双氯青霉素，环青霉素，pi- cloxacillin，缩酮氨苄青霉素，甲氧苯青霉素，乙氧萘青霉素， 苯唑青霉素，青霉素包括青霉素G和青霉素V，羧噻吩青霉 素利福平和四环素；消炎药如二氟苯水杨酸，异丁苯丙酸(布 洛芬)，消炎痛，甲氮灭酸酯，甲灭酸，甲氧萘丙酸，羟基保泰 松，保泰松，吡氧噻嗪，苏灵大，甲苯酰吡酸，阿司匹林和水杨 酸酯；抗原生动物药如氯喹，羟基氯喹，甲硝哒唑，奎宁和锑 酸葡胺；抗风湿药如青霉胺；麻醉药如复方樟脑酊；鸦片制剂 如可待因，海洛因，美沙酮，吗啡和鸦片；强心甙如去乙酰毛 花甙C，洋地黄毒甙，异羟洋地黄毒甙(地高辛)，洋地黄甙和 洋地黄；神经肌肉组断药如atracurium mesylate，三乙碘化 加拉明，溴化己勿铵，碘甲筒箭毒，溴化双哌雄双酯，氯化琥 珀胆碱，氯化筒箭毒碱和维库溴铵；镇静药(催眠药)如异戊 巴比妥，异戊巴比妥钠，烯丙异丙巴比妥，仲丁巴比妥钠，水 合氯醛，乙氯戊烯炔醇，炔己蚁胺，盐酸氟胺安定，导眠能，盐 酸甲氧异丁嗪，甲乙哌啶酮，盐酸咪唑二氮卓，副醛，戊巴比 妥，戊巴比妥钠，苯巴比妥钠，司可巴比妥钠，另丁烯丙巴比 妥，羟基安定和三唑苯二氮卓；局部麻醉剂如盐酸丁哌卡因， 盐酸氯普鲁卡因，盐酸衣铁卡因，盐酸利多卡因，盐酸甲哌卡 因，盐酸普鲁卡因和盐酸丁卡因；全身麻醉剂如达派啶醇，甲 苄咪酯，带达哌啶醇的芬太尼柠檬酸酯，盐酸氯胺酮，甲己炔 巴比妥钠和硫喷妥钠；以及放射性粒子或离子如锶，碘化铼 和钇。

在某种优选条件下，该治疗剂是单克隆抗体，如具有与 黑瘤抗原连接能力的单克隆抗体。

其它优选的治疗剂包括基因物质如天然的或原始合成 的核酸，RNA和DNA，包括重组体RNA和DNA以及反义 RNA和DNA。可用的基因特质的类型包括，比如，载在表达 矢量如质粒，噬菌粒，粘粒，酵母人工染色体(YACs)上的基 因，以及缺陷或“援助者”病毒，抗基因核酸，单和双链RNA 和DNA以及它们的类似物，如寡脱氧核苷酸硫代磷酸酯和 二硫代磷酸酯。另外，基因物质例如可以与蛋白质或其它聚 合物合并。

可以使用的采用本发明微球体的基因治疗剂的实例包 括至少HLA基因治疗剂的实例包括至少HLA基因部分编 码的DNA，至少营养不良部分编码的DNA，至少CFTR部 分编码的DNA，至少IL—2部分编码的DNA，至少TNF部 分编码的DNA，具有连接至少Ras部分编码的DNA能力 的抗过敏寡核苷酸。

某些蛋白质编码DNA可以用于治疗多种不同疾病。例 如，腺苷脱氨酶可以用来治疗ADA缺乏症；肿瘤坏死素和/ 或白细胞介素—2可用于治疗晚期癌症；HDL受体可用于 治疗肝病；胸苷激酶可用于治疗孵巢癌，脑瘤或HIV传染； HLA—B7可用于治疗恶性黑瘤；内白细胞素—2可用于治 疗成神经细胞瘤，恶性黑瘤或肾癌；内白细胞素—4可用于 治疗癌症；HIV env可用于治疗HIV传染；反义ras/p53可 用于治疗肺癌；因子VIII可用于治疗血友病B。例如，参见 Science258，744—746，1992。

如果需要，采用微球体的可用的治疗剂不止一种。例如， 一个微球体可含有不止一种治疗剂或含不同治疗剂的微球 体结合使用。例如，有结合黑瘤抗原能力的单克隆抗体和至 少IL—2部分编码的寡核苷酸可同时给药。这里所用短语 “至少…部分”表示不必用寡核苷酸代表的全部基因，只要被 代表的基因部分提供对基因表达式有效的阻碍。

类似地，药物前体可以包封入微球体，并包括在术语治 疗剂的范围内，如这里所用的。现有技术中药物前体是众所 周知的，它们包括非活性药物前体，当置于高温，代谢酶，所 蚀和/或压力下时，在氧或其它存在下，或从微球体释放出来 时，形成活性药物。这种药物前体可用本发明方法活化，采用 超声波将其气蚀，加热，加压和/或从微球体释放作用在含药 物前体的微球体上。合物的药物前体对本领域技术人员是明 显的，例如，Sinkula et al.，J.Pharm.Sci.1975，64，181—210 上所述，该文献全文在此引作参考。

例如，药物前体可包含活性药物的非活性形式，其中的 药物前体上存在使药物非活性和/或赋予其溶解性或它性质 的化学基团。这种形式的药物前体通常是非活性的，但经过 加热，气蚀，加压和/或周围环境中酶的作用或其它情况，上 述化学基团将从药物前体裂解，产生活性药物。这样的药物 前体在现有技术中已充分描述，而且它们包含很多种与化学 基团连接的药物，连接是通过键如短、中或长链脂族碳酸酯， 有机磷酸、焦磷酸、硫酸半酯，酰胺，氨基酸，偶氮键，氨基甲 酸酯，磷酰胺，葡糖苷酸酯，N—乙酰基葡糖氨和β—葡糖苷。

带有母体分子和可逆改性体或键的药物的实例如下：带 有缩酮的铃兰毒甙，带有烷基酯的妥因，带有甘油或丙氨酸 酯的氨甲酸氯酚甘油醚酯，带有咖啡因复合物的扑热息痛， 带有甘油或丙氨酸酯的氨甲酸氯酚甘油醚酯，带有咖啡因复 合物的扑热息痛，带有THAM盐的乙酰水杨酸，带有乙酰 氨基苯基酯的乙酰水杨酸，带有硫酸酯的烯丙基吗啡酮，带 有甲酯的15—甲基前列腺素F2a，带有聚乙二醇的普鲁卡 因，带有烷基酯的红霉素，带有烷基酯或磷酸酯的氯林可霉 素，带有甜菜碱盐的四环素，头孢菌素包括带有环—取代的 酰氧苄基酯的7—酰胺基头孢菌素，带有苯基丙酸癸酸酯的 诺龙，带有烯醇醚乙缩醛的雌二醇，带有乙酸乙酯的甲基强 的松龙，带有正乙酰基氨基葡糖苷葡糖苷酸酯(三甲基甲硅 烷基)醚，带有21—磷酸酯的氢化可的松或强的松龙或地塞 米松。

药物前体也可以设计为可逆药物衍生物并用作改性剂 以促进药物传递到特定部位组织。影响传递到特定部位组织 并促进治疗效果的带有母体分子和可逆改性体或键的药物 包括带有卤代烷基亚硝基脲的异氰酸酯，带有丙酸酯的睾 酮，带有二烷基酯的甲氨嘌呤(3，5′—二氯甲氨嘌呤)，带有 5′—酰化物的胞嘧啶阿糖苷，带有氨基甲基四环素的氮芥， 带有胆甾醇或雌二醇或去氢表雄酮酯的氮芥，以及带有偶氮 苯的氮芥。

正如本领域技术人员所知，为改性所给治疗剂而用的特 殊化学基团可以选来影响进入微球体膜或内部空间的比例。 所选连接化学基团与治疗剂的键可以选来得到所需的代谢 率，例如，在从填充气体前体的微球体中释放出来之后，在血 清酯酶存在下，在酯键情况下水解。另外，特殊化学基团可以 选来影响用于带有本发明微球体的填充气体前体药物治疗 剂的生物分布，例如用于卵巢腺癌的带有环磷酰胺的N，N —双(2—氯乙基)—二氨基磷酸。

另外，填充气体前体的微球体中的药物前体可设计成含 有可逆衍生物，该衍生物可用作活性期间的改性剂以提供、 延长或储存活性效果。例如，烟酸用葡聚糖和羧甲基葡聚糖 酯修饰，链霉素用藻酸盐，二氢链霉素用双羟萘酸盐，阿糖胞 苷(ara—C)用5′—金刚烷酸酯，阿糖腺苷(ara—A)用5—棕 榈酸酯和5′—苯甲酸酯，两性霉素B用甲酯，睾酮用17—β —烷基酯，雌二醇用甲酸酯，前列腺素用2—(4—咪唑基)乙 胺盐，多巴胺用氨基酸酰胺，氯霉素用单—或双(三甲基甲硅 烷基)醚，以及环氯胍用双羟萘酸盐。在此情形下，长效药物 的存储库或罐可以在体内从微球体中的充有气体前体的前 体药物内释放出来。

另外，一般热不稳定化合物可用于生成无毒团的化合 物。优选带有高温分解的偶氮键，过氧化物和二硫键的化合 物。对于这种形式的药物前体，含有偶氮，过氧和二硫键的化 合物通过气蚀和/或由高能超声波相互作用产生的热量活 化，充有气体前体的微球体从此处截留的药物前体产生自由 基串。许多药物或化学品可构成这些药物前体，如偶氮化合 物，如果两个氮原子之间的键可以在体内产生自由基产物， 则这些化合物的一般结果是R—N＝N—R，其中R是烃链。

可用于产生自由基产物的药物或化合物的实例包括含 偶氮化合物如偶氮苯，2，2′—偶氮双异丁腈，偶氮二甲酰胺， 石蕊精，氮霉素，氯唑噻磺胺，偶氮磺酰胺，氧化偶氮苯， aztreonam，苏丹III，柯衣定磺胺，柯衣定磺酰胺和抑氮磺胺 吡啶，含二硫键的化合物如双苯硫酮，硫胺二硫化物，硫藤黄 菌素，二硫四甲秋兰姆，含过氧化物的化合物如过氧化氢和 苯甲酰基过氧化物，2，2′—偶氮二异丁腈，2，2′—偶氮二(2 —氨基丙烷)二盐酸盐，和2，2′—偶氮二(2，4—二甲基戊 腈)。

用氧气填充的气体前体填充的微球体气蚀后将产生充 足的自由基。而且，过渡系列的金属离子，尤其是锰，铁和铜 可增加由氧生成的反应性中间体的形成率。通过将金属离子 包裹在微球体内可增加体内自由基的形成。这些金属离子可 以游离盐，如EDTA，DTPA，DOTA或去铁胺的复合物，或 金属离子氧化物的形式掺入微球体。另外，衍生的金属离复 合物可连接到脂类头的基团上，或亲脂离子复合物可以掺 入，例如，脂类双层中。当暴露于热刺激时，例如气蚀，这些金 属离子将增加反应性氧中间体的形成率。而且，放射性致敏 剂如甲硝哒唑和醚醇硝唑可掺入充有气体前体的微球体由 热刺激产生自由基。

通过例举的所用药物前体的方法，酰化的化学基团可以 通过在体内血清中酶的作用使酯键轻易地裂解而将其连接 到药物上。酰化的药物前体被掺入本发明充有气体前体的微 球体内。除烃和取代的烃烷基外，衍生物也可以由卤取代基 或全卤取代基如全氟烷基组成。当充有气体前体的微球体被 来自超声波的声脉冲冲击时，被微球体包裹的药物前体将暴 露于血清。酯键将在血清中被酯酶裂解而后产生药物。

类似地，超声波不仅被用于破裂充有气体前体的微球 体，还被用于引起热效率，该热效率可以增加化学裂解率和 活性药物从药物前体的释放。

微球体可以设计成在微球体内外两侧治疗剂呈对称或 不对称分布。

治疗剂特定的化学结构可被选择或修饰达到所需的溶 解性，从而使该治疗剂既可以被包裹在微球体内部充气体前 体的空间内，也可以附在微球体上或网(enmeshed)在微球 体内。表面连接的治疗剂可带有一个或多个酰基链，这样的 话，在当微球体被冲击或通过气蚀破裂时，酰化的治疗剂将 离开表面和/或将从酰基链化学基团断裂。类似地，其它治疗 剂可与在结构上为芳香族的或甾醇的疏水基团配制，掺入微 球体表面。

除类脂外，其它可用于形成微球体的物质包括，例如，蛋 白质如清蛋白，合成肽如聚谷氨酸，半乳糖、葡糖和其它己糖 的直链和支链低聚物和聚合物，以及从磷酰化和磺酰化戊糖 和己糖和糖醇衍生的聚合物。也可用碳水化合物聚合物如藻 酸，葡聚酸，淀粉和HETA淀粉。其它天然聚合物如透明质 酸也可以使用。合成聚合物如聚乙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮， 聚交酯，聚乙烯亚胺(直链和支链)，聚紫罗烯或聚亚氨基羧 酸也可以使用。

当被微球体包裹的治疗剂带负电荷时，如基因物质，阳 离子脂类或带阳离子基团的全氟烷基化基团可用于连接带 负电荷治疗剂。例如，可用阳离子类两亲性全氟烷基化联吡 啶，如Garelli和Vierling，Biochem，Biophys，Acta，1992， 1127—48中所述，该文献全文在此引作参考。

总之，带负电荷治疗剂如基因物质可被连接到混合胶束 成分如带阳离子类脂的非阳离子类脂的亲水性首基，例如 DOTMA或十八烷基胺或取代烷基如三甲十八烷基胺。有 用的混合胶束化合物包括(但不限于)：月桂基三甲基溴化铵 (十二烷基—)，鲸蜡基三甲基溴化铵(十六烷基—)，肉豆蔻 基三甲基溴化铵(十四烷基—)，烷基二甲基苄基氯化铵(烷 基＝C12，C14，C16)，苄基二甲基十二烷基溴/氯化铵，苄基二 甲基十六烷基溴/氯化铵，苄基二甲基十四烷基溴/氯化铵， 鲸蜡基二甲基乙基溴/氯化铵，或溴/氯化鲸蜡基吡啶鎓。

如果需要，含脂质体治疗剂的大小可用多种方法调节， 包括挤压，过滤，声化，均化，用引入液体不混溶鞘中的液体 芯的层状流，加压挤过固定大小的孔，以及类似的方法，以调 节产生的脂质体的生物分布和间隙。上述以及其它技术已在 文献中讨论，例如，

U.S.Patent No.4,728,578；U.K.Patent Application GB2193095 A；U.S.Patent No.4,728,575；U.S.Patent No.4,737,323；International Application PCT/US85/ 01161；Mayer et al.，Biochimica et Biophysica Acta，Vol. 858，pp.161—168(1986)；Hope et al.，Biochimica et Bio- physica Acta，Vol.812，pp.55—65(1985)；U.S.Patent No.4,533,254；Mayhew et al.，Methods in Enzymology， Vol.149，pp.64—77(1987)；Mayhew et al.，Biochimica et Biophysica Acta，Vol755，pp.169—74(1984)；Cheng et al， Investigative Radiology，Vol.22，pp.47—55(1987)；PCT/ US89/05040，U.S.Patent No.4,162,282；U.S.Patent No. 4,310,505；U.S.Patent No.4,921,706；and Liposome Technology，Gregoriadis，G.，ed.，Vol.I，pp.29—31，51— 67 and 79—108(CRC Press Inc.，Boca Raton，FL1984).

上述专利，公开物和专利申请公开的全部在此引作参考 。

选择过滤器孔径是为了筛分和除去潜在的污染。过滤器 孔径可以在10nm—20μm之间，优选在30nm—10μm之间， 更优选在100nm—8μm之间，最优选的为0.22μm。两个或 多个过滤器可联成一串以使过滤效率最大。构成过滤器的有 用材料包括聚合物如聚硫酸酯，聚碳酸酯和聚偏二氯乙烯。 除此之外，玻璃，陶瓷和金属过滤器均可以使用。另外，金属 丝，聚合物或陶瓷筛也可以使用。也可以使用滤纸，或将其作 为制作过程或通过顺序过滤给药期间的一部分来实现。

充有气体前体的微球体可以在通过过滤过程的最后一 步被筛分。阶级过滤器包括两个或多个串联过滤器，比如， 10μm，接着是8μm，以增加产率。结果是得到具有高效率超 声波成像和药物传递的稳定的，均匀大小的高产率充有气体 前体的微球体。

利用理想气体定律的原理，微球体从液相到气相稳定膨 胀，该微球体小到可以在通过顺序过滤器后注射，并在体内 提供必要的对比度。事实上，知道了微球体直径从液体到气 体转换时膨胀的变化，滤器体系可以设计成使微粒或乳液通 过注射/过滤过程筛分。完成从液相到气相的转换之后，形成 适当大小的充气微球体。知道气体前体必要的体积和稳定化 材料对液滴有效直径的贡献，然后利用理想气体定律，就可 以计算用于筛分前体液的最佳过滤器直径。反之，可以得到 所需直径的微球体。

充有气体前体的微球体可以通过过滤器压出这种简单 方法筛出。过滤器孔径控制着最终充有气体前体的微球体的 尺寸分布。通过使用两个或多个阶式或叠摞的过滤器，例如， 10μm，接着8μm当在气体前体的相转换温度以上的温度进 行压出时，可以产生以7—9μm为中心的很窄范围尺寸分布 的充有气体前体的微球体。过滤后，这些类脂包衣微球体保 持24小时以上的稳定，甚至可达一年或更长时间。当悬浮液 在使用之前从灭菌瓶中除去时，过滤步骤可以并入过滤装 配，甚至更优选地可以在使用期间将过滤装配并入其注射 器。本方法可用不同尺寸的滤器施行，以得到不同尺寸的微 球体。

本发明微球体的尺寸将取决于其用途。由于微球体尺寸 影响生物分布。不同尺寸的微球体可选来用于不同的目的。 对于较小微球体，超声波共振频率一般比较大微球体高。

例如，对血管内应用，优选的尺寸范围是平均外径在约 30nm—约10μm之间，优选的平均外径为约5μm。

对于血管内应用更特别的是微球体平均外径优选为约 10μm或以下，更优选小于约7μm，更优选不小于5nm。优选 地，微球体平均外径不小于30nm。

为了将治疗剂传递到器官如肝和从正常组织区分肿瘤， 优选平均外径在30nm—约100nm的较小微球体。

对于组织如肾和肺栓塞，优选平均外径小于约200μm 的微球体。

对于鼻内，直肠内或局部给药，优选平均外径小于约 100μm的微球体。

大微球体，例如，大小在1—10μm之间的微球体，一般 被限定在血管内空间直到它们被管内衬细胞元素如内衬毛 细窦状隙的巨噬细胞和Kuppfer细胞所清除。为了通过远 离窦状隙的细胞，可以使用较小微球体，例如，直径小于约 1μm，比如小于约300nm的微球体。

在优选的方案中，微球体是单独使用，而不是，例如，包 含在基体中使用。

通常，本发明治疗剂传递系统是以水悬浮液形式给药， 如在水或盐水溶液(例如，磷酸缓冲盐水)中。优选地，水是经 灭菌的。还有，尽管如果需要盐水溶液可以是低渗的(例如， 约0.3—0.5％NaCl)，但仍优选盐水溶液是等渗盐水溶液。 如果需要，溶液也可以是缓冲溶液，使得pH范围在约5—7. 4之内。所得充有气体前体类脂球在室温储存一年或一年以 上仍保持稳定。另外，优选葡萄糖包含在介质中。其它可用 于充有气体前体的脂质体给药的溶液包括(但不限于)杏仁 油，玉米油，棉籽油，油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，棕榈酸异丙 酯，矿物油，肉豆蔻醇，辛基—十二烷醇，橄榄油，花生油，桃 仁油，芝麻油，大豆油，角鲨烯，油酸肉豆蔻酯，油酸鲸蜡酯， 棕榈酸肉豆蔻酯，以及酯化到烷基链脂肪酸(C＝2—22)的 其它饱和和不饱和烷基链醇(C＝2—22)。

对于使用前的储存，本发明微球体可以悬浮在水溶液如 盐水溶液(例如，磷酸缓冲盐水溶液)或水中，优选的储藏温 度在约2—10℃之间，优选约4℃。优选地，水是经灭菌的。最 优选地，尽管如果需要盐水溶液可以是低渗的(例如，约0.3 —0.5％Nacl)，但仍将微球体储藏在等渗盐水溶液中。溶液 也可以是缓冲溶液，便得pH范围在约5—7.4之内。用于存 储介质的适当缓冲剂包括(但不限于)乙酸，柠檬酸，磷酸和 碳酸氢盐。

抑菌剂也可以包含在微球体内以防止存储时细菌降解。 合适的抑菌剂包括(但不限于)杀藻铵，氯苄乙胺，苯甲酸，苄 醇，尼泊金丁醇，氯化鲸蜡基吡啶鎓，氯丁醇，氯甲苯酚， 尼泊金甲酯，苯酚，苯甲酸钾，山梨酸钾，苯甲酸钠和山梨酸。 在充有气体前体的脂质体中可以包含一种或多种抗氧化剂 防止脂类氧化。合适的抗氧化剂包括生育酚，抗坏血酸和抗 坏血酸基棕榈酸酯。

控制将治疗化合物传递到患者病区的方法包括下列步 骤：

(i)给患者施用含有治疗化合物的充有气体前体微球 体；

(ii)用超声波监视微球体以探测气体前体的液态到气 态的相转变和确定病区内微球体的存在；以及

(iii)用超声波破裂微球体，在病区内释放治疗化合物。

用本发明的充有气体前体的微球体，超声波能量与气体 相互作用，破裂微球体，并允许治疗剂如基因物质被释放和 传递到细胞内。当声能遇到组织或流体介质内的气体界面 时，声能到热能和动能的局部转化被大大加强。治疗物质从 微球体中释放出来并迅速地传入细胞。尽管不想受任何特殊 操作理论的束缚，但仍相信在细胞位置产生的热能和动能将 促进细胞对治疗剂的吸收。

微球体的给药途径取决于其用途。正如本领域技术人员 能认识的，本发明治疗剂传递系统的给药以多种方式进行， 如血管内，淋巴内，肠胃外，皮下，肌内，鼻内，直肠内，腹膜 内，间质，经喷雾器进入气道，高压，口服，表皮，或肿瘤内，采 用多种药剂形式。一种优选的药途径是血管内的。对于血管 内使用，治疗剂传递系统一般是静脉注射，但也可以动脉注 射。本发明微球体也可以间质注射或进入任何体腔。

本发明用超声波从微球体传递治疗剂，对具有良好透声 窗(用于超声波能量传输)的组织来说是再好不过的了。这是 对体内大多数组织如肌肉，心脏，肝脏和大部分其它生命结 构的情况。对于大脑，为了使超声波能量直接通过颅骨，外科 窗是必要的。

给药的有用剂量和给药方式依赖于要治疗的动物的年 龄，重量和类型，以及要使用的特定治疗剂。典型地，剂量从 低水平开始，然后逐渐增加直到达到所需的治疗效果。

尽管对于定位药物传递的活化，超声能是优选的，但是 在某些情况下可以利用其它形式的能量。例如，当不能得到 好的声窗例如肺时，可利用微波射频能。例如，可使用它在 被加热的身体某个区域中引起气体前体进行相转变并从微 球体表面释放药物。例如，包裹入2—甲基—2—丁烯的微球 体和化疗剂可通过用微波或超声波在约38.5℃(仅高于体 温2℃)使局部超温被活化。在磁诱导中，用振荡磁场加热。 这可通过外部磁场(即：患者外部磁铁)和插入患者体内(如 肿瘤内)的强磁性探针实现。作为在肿瘤内流过血管的微球 体由于磁场振荡它们将遇到某个区域的热量。气体前体此 时形成气体。破裂微球体并且释放药物。本发明特别新的 方面是可以制备磁性微球体。这可通过在微球体中使用磁 性材料来实现，例如在微球体中加入氧化铁以及气体前体和 治疗剂。当微球体遇到附近的磁场，磁性颗粒吸收来自于振 荡磁场的能量并将其转化为热量。这又将液体气体前体就 地转化为气体并释放出微球体中的物质。在某些情况下，光 能用于微球体的定向药物传递。一般地，对于进入体内组织 的深度，光比声或射频效率低，但是在某些应用中，这种进入 水平是足够的。例如对于传递药物到皮肤，一般可局部使用 填充气体前体的微球体然后使用太阳灯使其到达皮肤。也 可以使用静脉注射微球体并通过在靶定位皮肤上使用适当 能量的照射光到达皮肤。据信红外光能与全氟碳基气体前 体一起使用引起光活化是特别有效的。对窥镜应用(例如治 疗结肠粘膜表面)光能也是相当有用的。

用气体前体微球体进行定位药物传递的优选方法是使 能量到达靶组织并且使治疗剂从气体前体微球体中释放。 最优选的能量是超声波。然而，在某些情况下，气体前体微 球体对于其本身局部传递药物是非常有效的。据信在接近 体温下经过液体到气体相转变的气体前体在局部缺血和疾 病组织中的累积是特别有效的。这种假定来自于用常规空 气填充的脂质体进行的实验。当实验动物输入100％氧气 时，例如猪或狗，脂质体流失非常快。在接近体温(例如 37℃)经过相转变的气体前体将在疾病或局部缺血组织中积 累。肿瘤经常是局部缺血的，因为它将影响心肌，大脑和其 它组织区。这时气体前体可被用于进行局部药物传递。为此 目的，特别优选的是在温度介于25℃和约40℃间经过液体 到气体转变的前体。通过将治疗剂和具有气体前体的微球 体结合，这种微球体包入例如，全氟戊烷，2—甲基—1—丁烯 —3，甲基乳酸酯或溴氯氟甲烷，则治疗剂可有选择性地被传 递到局部缺血组织。可任意将超声波或其它能量用到局部 缺血组织以有利于药物传递。

对于体外应用，如细胞培养应用，可将填充气体前体的 微球体加到培养液的细胞中然后培养。然后将声能应用到 含有细胞和微球体的培养介质中。

可使用本发明控制治疗剂传递到患者的区域，其中对患 者以含有本发明微球体的治疗剂给药，用超声波监测微球体 以确定在某个区域存在的微球体，然后用超声波破坏微球体 以在某个区域释放治疗剂。

患者可以是任何类型的动物，但是优选脊椎动物，更优 选哺乳动物，最优选人。对于患者的区域，意指整个患者或 患者的某个特别区域或部分。例如，用本发明方法，在患者 心脏或患者血管(即静脉或动脉系统)中治疗剂的传递是有 效的。本发明也特别用于传递治疗剂到患者左心室。用治 疗剂传递不易到达的区域。治疗剂也可容易地被传递到患 者的肝，脾和肾区，以及其它区域。

另外，本发明特别用于传递治疗剂到患者的肺。例如本 发明的填充气体前体的微球体比常规填充液体的脂质体(它 通常储存在中间邻近气道中而不是到达肺的外周)轻。据信 本发明的填充气体前体的微球体可以改进治疗化合物到肺 外周，包括末端气道和肺泡的传递。对于在肺中的应用，例 如，可通过喷雾法使用填充气体前体的微球体。

在应用如靶肺(含有脂类)，治疗剂可释放在聚集具有脂 衬靶组织的填充气体前体脂微球体上。另外，在给药后没有 使用超声波这种填充气体前体脂微球体可能破裂。因此，在 上述给药类型中不需使用超声波释放治疗剂。

此外，本发明填充气体前体的微球体特别适用于在水介 质中或暴露在氧气和/或空气中可以降解的治疗剂。例如。 对于使用不稳定治疗化合物，可以用惰性气体如氮气或氩气 填充微球体。另外，可用惰性气体填充含气体前体的微球体 并常常包封住不稳定治疗剂用于病人的某个区域，该区域通 常引治疗剂暴露在空气中，如在皮肤和眼睛的应用。

填充气体前体的微球体也特别适用于经过皮肤传递， 如斑传递系统。使用破裂超声波可以增加治疗化合物的经 皮肤传递。此外，机械可用来监视和调节治疗剂的传递。例 如，诊断超声波可于视觉监测填充气体微球体的破裂和调节 治疗的释放和/或水听器用于检测破裂填充气体前体的微球 体的声音和调节治疗剂的传递。

用超声波在峰共振频率，微球体回波和破裂微球体的能 力使得治疗剂在患者的某个区域控制传递，即根据给药予患 者经监测微球体在所需区域的存在来监测微球体并且用超 声波破坏微球体以在某个区域释放治疗剂。

从气体前体制备的充气微胶体用诊断超声波是高效的 。它们有大量气体，以便它们具有高反射性并且是优良的超 声波对抗剂。可用高能超声波，优选是连续波，约100毫瓦， 释放药物，来自于Aerosomes生物活性和遗传的物质，进行 加强超声波高温治疗和用于内成腔组织破坏和药物活化。

本发明微球体优选具有反射性大于2dB，优选介于4dB 和20dB之间。在这个范围内，较大微球体，较高浓度微球体 和/或当使用高超声频率时将显示最大反射性。

优选地，本发明微球体的峰共振频率介于约0.5mHz 和10mHz间。当然，在某种程度上，本发明填充气体微球体 的峰共频率将依据微球体的直径，弹性或柔韧而变化，较大 和较高弹性或柔韧性的微球体比较小和较低弹性或韧性的 微球体共振频率低。

在将微球体给药予患者或已经到达某个区域后，用一定 频率的超声波破裂含有治疗剂的本发明的微球体并使其到 达需治疗的患者的某个区域是极其容易的。特别地，我们已 经意外发现当使用在含治疗剂的填充气体前体微球体相应 的峰共振频率时，该微球体将破裂并释放其中的成分。

峰共振频率可在体内或体外测定，但优选体内，即将微 球体暴露于超声波中，收到反射共振频率信号并且用常规方 法分析收到的信号谱以确定这种峰。如此确定的峰对应于 峰共振频率(或有时称作二次谐频)。

当暴露于较高强度(瓦数)和持续(时间)的非峰共振频 超声波中时，填充气体前体的微球体也将。然而，这种较高 的能将导致大大增加不需要的热量，通过调节这种能量频率 以匹配峰共振频率，破裂效率和治疗剂的释放将被改进，通 常不发生明显的组织热变(一般升温不超过约2℃以上)，并 且所需要总的能量少。因此，在不必要时使用峰共振频率超 声波是最优选的。

任何各种类型的诊断超声波成像仪器在本发明的实施 中都可以使用，对于本发明方法，仪器的具体类型和型号没 有限制。对于用超声波进行高热治疗而设计的仪器也是适 合的，例如在U.S.专利4,620,546，4,658,828和4,586, 512，中所述的那些仪器，因此，这些公开内容在这里全部引 作参考。优选地，这种仪器使用共振频率(RF)谱分析器。也 可以在外部使用或安装变频探针。通常，在开始用低强度和 短持续时间的超声波，然后，优选地在峰共振频率，增加强 度，时间和/或共振频率直到微球体破裂。

由于应用的各种原理对于本领域普通技术人员是显而 易见的，作为一般性指导，以前曾公开过，但是对填充气体前 体微胶体的平均外径约1.5至10微米，则峰共振频率一般 约为1—10兆赫。通过调节中心靶组织(例如肿瘤)的焦距 带，在快速超声波下可以看到填充气体前体微胶体，因为它 们在靶组织中积累，用7.5兆赫曲阵变频作为例子，调节传 递至变频器使其达到最大并且在靶组织中调节焦距带，立体 峰瞬时平均(SPTA)；功率在水中将最大，约为5.31mW/ cm2。该功率将引起一些治疗剂从填充气体前体微球体中释 放，但是用更大功率将有更多的释放。

将变频器切换到多普勒状态，可以得到更大的功率输 出，从相同的变频器高至2.5W/cm2。机器在多普勒状态操 作，可将动力传递到靶组织内部选定焦距带并且可使填充气 体前体微球体释放其治疗剂。选择变频器匹配填充气体微 球体的共振频率将使这种治疗剂释放方法更有效。

对于较大直径的填充气体微球体，例如平均外径大于3 微米，低频率的变频器在完成药物释放方面更有效。例如， 3.5mHz的较低频率变频器(20mm，曲阵型)可被选择用于 对应于填充气体前体微球体的共振频率。用这种变频器 101.6mW/cm2可被传递到焦点，切换到多普勒状态将输出 功率(SPTA)增加至1.02W/cm2。

为了用气蚀现象释放和/或活化填充气体前体微球体内 的药物/药物前体，可使用较低频率的能量，气蚀在较低频率 更有效。用较高电压(高达300V)驱动0.757mHz变频器， 填充气体微球体溶液的气蚀将在约5.2大气压的临界值发 生。

表III给出了从常规仪器如Piconics Inc.(Tyrasboro， MA)的诊断超声波传递到组织的能量范围，Protascan为一 般目的扫描仪，具有接收器脉冲器1966型号6611，Picker (Cleveland，OH)Echoview 8L Scanner包括80C System 或Medisonics(Mountain view，CA)Model D—9 Ver- satone Bidirectional Doppler。一般地，这些用于脉冲重复的 能量范围可用于监测充气微球体但不足以破裂本发明的填 充气体前体微球体。

                      表III*

            由诊断仪产生的功率和强度* 脉冲重复速率     (Hz) 总超声波功率输出     P(mW) 变频器面上的平均 强度IID(W/m2)     520     4.2     32     676     9.4     71     806     6.8     24     1000     14.4     51     1538     2.4     8.5

*从Carson et al.，Ultrasound in Med.&Biol. 1978.3，341—350，得到的值，该文献在此引作参考。

对于填充气体微球体的活化，较高能量超声波(如普通 用于治疗超声仪器的)是优选的。一般地，根据要被超声波 加热的组织面积，治疗超声仪使用多达50％—100％占空因 数。具有较大量肌肉君(即背部，股部)和较多血管组织如心 脏需要较大占空因数，例如100％。

在用于监测填充气体前体微球的位置的诊断超声波中， 使用一种或几种声波脉冲而且该仪器在脉冲间暂停以接受 反射的声波信号。在诊断超声波中所用有限值脉冲限制了 被传递到成像组织的有效能量。

在治疗超声波中，连续波超声波被用于传递更高能量。 在使用本发明微球体中，声能可以是脉冲的，但是连续波超 声波是优选的。如果用脉冲，声波将优选一次回声到长度为 至少8并且优选至少20进行脉冲。

固定频率或调节频率超声波都可以使用。固定频率的 定义为在所有时间内声波的频率为常数。调节频率为在所 有时间时声波频率是变化的，例如从高到低(PRICH)或从 低到高(CHIRR)。例如具有声能10mHz起始频率的 PRICH脉冲通过增加功率1—5W使其扫描至1MHz。聚焦 频率调节高能超声波将增加微球体内气体膨胀并且破裂以 提供治疗剂的局部传递。

所用声波频率可从约0.025至100mHz变化。频率范围 介于约0.75至3mHz是优选的而且频率介于约1至2mhz 是最优选的。通常所用治疗频率约3—7mHz也可以使用。 对于很小的微球体，例如直径低于0.5微米，较高的声波频 率是优选的，因为这些较小的微球体在较高声波频率时更有 效地吸收声能。当使用很高频率时，如高于10mHz，一般声 能将有限深度地穿透到流体和组织，外部使用对于皮肤和其 它表面组织是优选的，但是对于深层结构，通过间隙式探针 或血管内超声波导管的声能应用是优选的。

在最优方案中，本发明提供新的脂质体对比剂和药物传 递系统。

一旦公开本发明，各种含填充气体前体治疗剂的微球体 的制备方法对于本专业熟练技术人员是显而易见的。优选 制备微球体的方法将在下面关于优选脂质体治疗剂传递系 统中讨论。

具体地，在一个优选方案中，制备本发明含温度活化填 充气体前体脂质体的靶定位治疗剂传递系统的方法包括在 活化气体前体温度下，在低于类脂凝胶态向液晶态相转变温 度下和低于活化填充气体前体脂质体形成温度活化填充气 体前体的温度下，振荡含类脂的水溶液，并加入治疗化合物 的步骤。在另一个优选方案中，含有本发明温度活化填充气 体前体脂质体的靶定位治疗剂传递系统的制备方法包括在 温度活化气体前体存在下，在低于类脂凝胶态向液晶态相转 变温度下和低于气体前体活化温度下，荡包括脂类和治疗化 合物的水溶液的步骤。在其它方案中，制备含有本发明温度 活化填充气体前体脂质体的靶定位治疗剂传送系统方法包 括在温度活化气体前体存在下，振荡包括脂类和治疗化合物 的水溶液，和分离治疗使用的所得填充气体前体脂质体的步 骤。由前述方法制备的脂质体在此是指由胶状振荡气体前 体滴注法制备的并含有治疗化合物的温度活化的填充气体 前体脂质体，或含治疗剂的胶状振荡温度活化的气体前体滴 注的脂质体。

制备本发明微球体方法为在或接近气体前体活化温度 进行，以便形成充气脂质体。在该方案中，制备含本发明充 气微球体的靶定位治疗剂传递系统方法包括在气体存在下， 在低于类脂凝胶态向液晶态相转变温度和低于形成充气脂 质体的气体前体的活化温度下，振荡含类脂的水溶液，并且 加入治疗化合物的步骤。在另一个优选方案中制备含有本 发明充气脂质体的靶定位治疗剂传递系统方法包括在气体 存在下，在低于类脂凝胶向液晶相转化温度下，振荡包括脂 类和治疗化合物的水溶液步骤。在其它方案中，制备含充气 脂质体的靶定位治疗剂传递系统方法包括在气体存在下，振 摇包括类脂和治疗化合物的水溶液，并且分离所得治疗用充 气脂质体的步骤。由前述方法制备的脂质体在此是指凝胶 态振荡气体滴注法制备的并含有治疗化合物的充气脂质体， 或含治疗剂凝胶态振荡气体滴注的脂质体。

因此，本发明优选方法是在温度活化气体前体存在下振 荡包括脂类和治疗化合物的水溶。此处所用振荡意指振动水 溶液以使气体从周围环境进入水溶液的运动。因此，在形成 充气脂质体或填充气体前体脂质体的温度时进行振荡是优 选的。任何类型的振动水溶液并导致气体引入的运动都可 用于振荡。振荡必须有足够的力度使在一段时间后形成泡沫 。优选地振荡有足够力量使短时间，如30分钟，优选20分钟 内，更优选10分钟内形成泡沫。振荡可以是旋动(如涡旋) 从一侧到另一侧或上下的运动。而且可以结合不同类型的 运动。振荡也可以振荡装有类脂水溶液的容器，或振荡容器 内的水溶液而不振荡容器本身。而且振荡可以是手动或机 器操作的。可用的机器振荡器包括，例如，振荡台如VWR Scientific(Ceffitos，CA)振荡台和机器涂料混合器，以及其 它已知的机器。产生振摇的其它方法包括高速高压下气体 散发作用。应该理解，优选地，用大体积水溶液，总力量应相 应地增加。剧烈振荡意指至少每分钟60次振荡运动，并且 是优选的。剧烈振荡的例子为至少每分钟1000涡旋，上更 优选的。每分钟1800涡旋是最优选的。

填充气体前体脂质体的形成可根据振荡时在水溶液顶 部泡沫的存在进行检测。泡沫的形成与水溶液体积的减少 相关联，优选地，最终泡沫体积至少约为最初类脂水溶液体 积的2倍，更优选地，最终泡沫体积至少约为最初水溶液体 积的3倍，再优选地，最终泡沫体积至少约为最初水溶液体 积的4倍，最优选地，所有类脂水溶液转化为泡沫。

所需振荡时间可通过检测泡沫的形成来确定。例如，在 50ml离心管中的10ml类脂溶液可被涡旋约15—20分钟或 直到填充气体前体脂质体的粘度变得足够稠以使在旋转时 它不再附于侧壁上。此时，泡沫使含填充气体前体的脂质体 溶液升至30—35ml。

需要形成优选的泡沫水平的类脂浓度将依据所用类脂 类型变化。而且一旦公开本发明，本专业熟练技术人员很容 易确定。例如，在优选方案中，根据本发明方法用于形成填 充气体前体脂质体的1，2—二棕榈酰基—磷脂酰胆碱(DP- PC)的浓度约为20mg/ml至30mg/ml盐水溶液。用在优选 方案中的二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)的浓度约为5mg/ ml至10mg/ml盐水溶液。

具体地，浓度为20Mg/ml至30mg/ml的DPPC经振荡 产生总悬浮液和捕获气体体积比单独悬浮液体积大4倍。 浓度为10mg/ml的DSP经振荡后产生总体积中不含任何 液体悬浮体积并且全部为泡沫。

一旦公开本发明，本专业熟练技术人员将类理解到可将 类脂或脂质体先处理随后用于本发明方法。例如，可将类脂 水合然后冻干，并通过冷冻或解冻循环或简单水合的方法。 在优选的方案中，在形成填充气体前脂质体之前将类脂水合 然后冻干或水合，然后通过冷冻和解冻循环然后冻干的方法 。

根据本发明方法，所用气体可由局部周围大气提供。局 部周围大气可以是密封在容器内的空气，或在非密封容器 中，可以是外部环境。另外，在本发明优选方案中，气体或气 体前体可被注入或加入到含有类脂水溶液或其本身为类脂 水溶液中以提供非空气的气体。将不比空气重的气体加到 密封容器中，当气体比空气重时，可被加到密封或非密封容 器中。另外，本发明包括与气体前体一起的共夹入空气和/ 或其它气体。

前述本发明的优选方法优选地在低于所用类脂凝胶态 向液晶态相变温度的温度下进行。”凝胶态向液晶态相变温 度″意指类脂双层将从凝胶态向液晶态转化的温度。参见， 例如，Chapman et al.J.Biol.Chem.1974，249，2512— 2521。各种类脂的胶凝态向液晶态相变温度对于熟悉本专业 的人员将是容易知道的，并且描述在，例如，Gregoriaclis， ed.，Liposome Technology，Vol.I，1—18(CRC Press， 1984)和Derek Marsh，CRC Handbook of Lipid Bilayers (CRC Press，Boca Raton，FL1990)，P139中。也参见前面 的表II。当所用类脂的凝胶态向液晶态相变温度高于室温 时容器的温度可被，例如，通过用致冷机冷却装有类脂溶液 的容器而调节。

本发明的方法优选也在低于气体前体的液相的转变温 度下进行。见上述表I。上述其它气体前体的活化或转变温 度对本领域技术人员是显而易见的，而且描述如于：Chemi- cal Rubber Company Handbook of Chemistry and Physics Robert C.Weast and David R.Lide，es.CRC Press，Inc. Boca Raton，Florida.(1989—199)。或者，制备本发明微球 体的方法也可在或接近气体前体的活化温度下进行，以形成 充气脂质体。

一般地，充水脂质体在高于类脂的凝胶态向液晶态相变 温度的温度下常规形成，因为它们更柔韧因而以液晶态用于 生物体系中。参见例如，Szoka and Papahadjopoulos，Proc. Natl.Acad.Sci.1978，75，4194—4198。相反，根据本发明方 法的优选方案制备的脂质体主要是充气的，它产生更大的柔 韧性因为气体更易压缩并比水溶液更顺从。因此温度活化 的填充气体前体的脂质体当在低于类脂相变温度形成时可 被用于生物体系，尽管凝胶相更具刚性。

优选的用凝胶态振荡气体滴注法生产含治疗剂填充气 体前体类脂体的的设备示于附图9中。类脂和含水介质的混 合物在气体滴注方法中被剧烈搅动，无论是分批还是连续加 料来产生填充气体前体脂质体。对于附图9，干燥的类脂51 从类脂供应管50通过导管59以连续流或间歇团被加到混 合器66中。如果用分批工艺，混合器66可包含相对较小的 容器如注射器，试管，瓶子或圆底烧瓶，或大容器。如果用连 续进料工艺，混合器优选地是大容器，如大桶。该设备是可 以调节的以便在气体前体相变温度时产生充气脂质体，因此 在低于相变温度时产生填充气体前体脂质体。如下所示设 备中，制备微球体的方法是在低于相变温度下进行的。然而 该方法也可在相变温度下进行以产生充气微球体。

可加入治疗化合物，例如在气体滴注工艺之前。对附 图9，治疗化合物41从治疗化合物供应器40通过导管42加 到混合器66中。另外，治疗化合物可在气体滴注工艺之后 加入，如脂质体的外层用治疗化合物包裹。

除了类脂51和治疗化合物41外，还需要通过导管61 向容器66中加入来自水介质供应容器52的水介质53如盐 水溶液。类脂51和水介质53一起形成类脂水溶液74。另 外，干燥的类脂51被引入混合容器66之前可被水合以便类 脂被导入水溶液中。在用于制备脂质体的优选方法中，首先 加入溶液74以便溶液仅占混合容器66的一部分容量。此 外，在连续方法中，应控制加入溶液74的速率和除去所产生 的填充气体前体脂质体的速率以确保类脂溶液74的体积不 超过混合容器66容积的预定百分比。

通过直接向类脂溶液74中引入高速加压气体前体喷射 来进行振荡。另外，可通过机械地振荡水溶液，手动或机动， 来进行振荡。这种机械振荡可通过振动混合容器66或直接 振动水溶液74而不振动混合容器本身来完成。如图9所 示，在优选方案中，机械振荡器75被连接在混合容器66上 。振荡应具有足够强度，如图9所示以便在一段时间后，在水 溶液74的顶部形成包含有填充气体前体脂质体的泡沫73 控制泡沫73的形成可用控制振荡时间的方法进行；即不是 振荡预定时间，而应继续振荡直到产生预定体积的泡沫。

上述设备中应包含控制温度的装置以便该设备可以保 持在一个制备脂质体的方法温度。例如，在优选方案中，制备 脂质体方法在低于气体前体沸点温度下进行。在优选方案 中，液体气体前体填充在脂质体的内部空间。或者，该设备 可保持在约液体至气体前体的气体转化温度，以便气体包含 在脂质体中。此外，通过制备脂质体方法可调节该设备的温 度，以便气体前体是液体，然而，气体被加到所得脂质体中。 在该方案中，设备的温度在制备脂质体期间被调节，以便该 方法在低于相变温度时开始并且被调节至约脂质体相变温 度。

在制备填充气体前体脂质体的设备的优选方案中，其中 所用类脂具有低于室温的凝胶态向液晶态相转变温度，提供 了冷却类脂水溶液74的装置。在该方案中，如图9所示，可 利用在混合容器66周围配置外套管64以在容器周围形成 环形管进行冷却。如图9所示，冷却液体63分别通过外套 管入口和出口62和63被推动流过该环形管。通过调节冷 却液体63的温度和流速，可将类脂水溶液74的温度保持在 所需温度。

如图9所示，气体前体55与水溶液74一起被导入混合 容器66中。通过使用未密封的混合容器可引入空气以使水 溶液连续地暴露在环境空气中。在分批工艺中，通过密封混 合容器66可引入固定量的现场环境空气。如果用比空气重 的气体前体，容器不必密封。然而，引入不比空气重的气体 前体则需要密封混合容器，例如，如图9所示，使用盖65气 体前体55可在混合容器66中被加压，例如，如图9所示，经 过导管57将混合容器与加压气体供应罐54相连接。

振荡完毕后，从混合容器66中提取含填充气体前体脂 质体的泡沫。如图10所示，将注射器100的针头102插入泡 沫73中经抽出活塞106将预定量的泡沫抽到针筒104中即 可进行提取。如下进一步讨论的，可利用针头102末端放入 泡沫73中的位置来控制所提取填充气体前体脂质体的大 小。

或者，如图9所示，也可通过将提取管67插入混合容器 66中来进行提取，如前所述。如果混合容器66被加压如前 讨论的，则可利用气体55的压力来推动填充气体前体脂质 体70经过导管77从混合容器66中流的提取器76中。在混 合容器66未被加压的情况下，如图9所示，可通过管道78 将提取容器76与真空源58如真空泵相连接以产生足够的 负压将泡沫73吸入提取容器76中。从提取容器76，将填充 气体前体脂质体77引入到管形瓶82中，其中它们可被送到 最终的使用者。经加压的气体源56可与容器76连接以帮 助排放填充气体前体脂质体。因为负压可导致填充气体前 体脂质体大小的增加，因此正压对于除去填充气体前体脂质 体是优选的。

为了获得大小基本均一的填充气体前体脂质体，优选进 行过滤。在某些优选方案中，过滤装配含有一个以上过滤 器，优选地，如图12所示，过滤器相互之间并不紧密相连。 过滤前，填充气体前体类脂体大小范围在约1微米至大于 60微米之间(图15A和16A)。通过单一过滤器过滤后，填 充气体前体脂质体一般小于10微米但仍保留有大小为25 微米的颗粒。通过两个过滤器(用10微米接着8微米过滤 器)过滤后几乎所有脂质体都小于10微米，大多数为5至7 微米(图15B和图16B)。

如图9所示，过滤可通过如下方法进行，即将过滤元件 72直接与提取管67的末端相结合以便仅低于预定大小的 填充气体前体类脂体可从混合容器66中提取出来。另外， 如图9所示，或除了提取管过滤器72外，将过滤器80和导 管79相连以使填充气体前体脂质体77从提取器76中进入 管形瓶82中，以完成填充气体前体脂质体的大小筛分。如图 12所示，过滤器80可含有阶式的过滤器装配124。如图12 所示，阶式过滤装配124包含两个连续过滤器116和120， 过滤器120装配在过滤器116上游。在优选方案中，上游的 过滤器120是“NUCLEPORE”10μm过滤器而下游过滤器 116是“NUCLEPORE”8μm滤器。优选在过滤器116的任 一侧安装两个0.15mm的金属制筛盘。在一个优选方案中， 过滤器116和120通过TeflonTMO—形环，118隔开，最小距 离为150μm。

除过滤外，也可利用填充气体前体脂质体依据大小的浮 力来进行大小的筛分。有利的是填充气体前体脂质体的密度 小于水，因此可浮在混合容器66的顶部。由于最大的脂质体 其密度最小，它们会最快浮在顶层。最小的脂质体通常最后 升至顶层并且非填充气体前体脂质体部分将沉在底部。这 种现象可有利于用差异浮迭法从混合容器66中除去填充气 体前体脂质体以将其进行大小筛分。因此将提取管67在混 合容器66中垂直位置进行调节可以控制所提取填充气体脂 质体的大小。提取管越高则提取的填充气体前体微球体越 大。而且，间歇地或连续地在混合容器66调节提取管67垂 直位置，在不断发展的基础上控制填充气体前体脂质体的大 小。通过结合装置68可使这种提取方便，此装置为连接在 提取管67的与穿过管72配合的穿过环71，它可将提取管 67在提取容器66中的垂直位置精确调节。

凝胶态振荡气体前体滴注方法本身也可用于改进填充 气体前体类脂基的微球体的大小筛分。通常振荡能量的强度 越大，所得填充气体前体脂质体越小。

本发明也包括制备含治疗剂温度活化的填充气体前体 脂质体(被分送至最终使用)者的新方法。一旦形成了填充 气体前体脂质体，则不能在引起破裂的温度下加热灭菌。因 此，必须用灭菌成分形成填充气体前体脂质体并且尽可能少 地进行随后的操作以避免污染的危险。根据本发明可达到 此目的，例如，如图10所示，通过振荡前将含类脂和水溶液 的混合容器灭菌，并通过提取容器76将混合容器66中的填 充气体前体脂质体77直接传递到灭菌注射器100的针筒 104中而不需进一步处理；即不同后续灭菌。装满填充气体 前体脂质体77和经适当的外封包装的注射器100可被分送 至最终使用者。此后，该产品不需要进一步的操作以将填充 气体前体脂质体用于患者，除去从包装中取出针筒和从针头 102中到去外套(未标出)并将针头插入患者体内或导液管 中。而且，当注射器柱塞106压入针筒104时产生的压力将 会导致最大的填充气体前体脂质体破裂，因此，不用过滤即 可得到一定的大小筛分。当进入患者体内时，在前体相变温 度，填充气体前体脂质体变成充气类脂体。而且，该方法可 在前体的相变温度时进行以便将充气脂质体用于患者。

如图10所示，在使用时需要过滤填充气体前体脂质体， 例如用于未经过滤即从提取容器76中取出来或需要进一步 过滤，注射器100可装配其自身过滤器108。这将产生筛分 的填充气体前体脂质体，即当注射填充气体前体脂质体时， 通过柱塞106的作用使填充气体前体脂质体从过滤器108 中挤压出来。因此，填充气体前体脂质体可被在一步中按大 小筛分并注射到患者体内。

为了在注射器套筒中使用一个或两个过滤器，带有套筒 的非标准注射器是必要的。如图3所示，这种装有过滤器的 套筒直径约为1cm至2cm长约1.0cm至3.0cm，内径约0. 8cm，以便装有过滤器。将过滤器装于套筒中余下较大的空 间是为使微球体通过套筒时尚有足够的表面积以减小需要 施于注射器柱塞上的压力。以这种方式，微球体将不会受到 作用于注射器上的巨大压力，该压力将引起微球体破裂。

如图11所示，阶式滤器套110可被直接安装在注射器 112上，因而在使用时可进行过滤。如图12所示，滤器套110 包括前述的阶式滤器装配124，它被结合在具有阻螺纹的下 层凸缘122和具有阱螺纹的凹形槽114之间。下层凸缘122 装配Lure锁使其容易固定到注射器112上，上层凹槽114 装配针头102。

在优选方案中，将类脂溶液压出通过滤器并将该类脂溶 液在振荡前加压灭菌。当气体前体填充脂质体形成，可按上 文所述将其过滤以筛分大小。形成气体前体填充脂质体前的 这些步骤的优点是，例如，减少未水合的类脂的量，并因此显 著提高气体前体填充脂质体的产量，以及提供了方便患者使 用的灭菌气体前体填充脂质体。例如，在混合容器如小瓶或 注射器中注入过滤过的类脂悬浮液，然后通过如压热的方式 在混合容器中将其灭菌。通过振荡灭菌容器可将气体前体注 入类脂混悬液以形成气体前体填充脂质体。优选地，在灭菌 容器的适当位置装配滤器，以使气体前体填充脂质体在接触 患者前通过滤器。

该优选方法的第一步，即将类脂溶液压出通过滤器，可 分散干燥类脂和暴露更大的水合面积，从而减少未水合类脂 的量。优选地。滤器微孔大约为0.1—5μm，更优选地，0.1— 4μm，还更优选地，0.1—2μm，最优选地，约为1μm。如图17 所示，当类脂悬浮液被过滤时(图17B)，与未经预先过滤的 类脂悬浮液(图17A)相比未水合类脂的量降低。未水合的脂 质体表现为大小不一的无定形团块，是不需要的。

第二步，灭菌，提供了可方便患者使用的药物组合物。优 选地，灭菌可通过热，优选在至少约100℃的温度下压热该 溶液，更优选在给100℃到约130℃，还优选在110℃到 130℃，还更优选在约120℃到130℃，最优选在约130℃压 热来完成。优选地，加热至少约1分钟，更优选地约1到30 分钟，还更优选约10到20分钟，最优选约15分钟。

只要不是通过在可导致气体前体填充脂质体破裂的温 度下加热而灭菌，灭菌过程可优选地在气体前体填充脂质体 形成之后进行。例如可在气体前体填充脂质体形成前后使用 L线照射。

在水介质中乳化之前通过0.22μm或更小的滤器可实 现气体前体的灭菌。这可通过将其灭菌过滤使其直接进入含 有预定定量经相同灭菌和填充灭菌液的载体的管形瓶而容 易地实现。

图18说明了在130℃压热15分钟，接着涡旋10分钟后 成功地形成气体前体填充脂质体的能力。进一步，在压出和 灭菌步骤之后，振荡步骤得到了无水类脂相很少到没有残存 的气体前体填充类脂体。图18A表示压热后过滤前产生的 气体前体填充脂质体，因而许多气体前体填充脂质体大于 10μm。图18B表示通过10μm“NUCLEPORE”滤器过滤后 得到的气体前体填充脂质体，其大小均在10μm左右。

本发明在某些实施方案特指包括由真空干燥气体滴注 方法制备的，其中包囊治疗剂(含有对比剂或药物)的气体前 体填充脂质体的治疗剂传递系统，这样的脂质体在此有时被 作为含治疗剂的真空干燥滴注气体的脂质体。本发明也进一 步特指包括在其内部基本上不含液体的含有治疗剂充气脂 质体的治疗剂传递系统。该方法在气体前体的相转变温度下 进行，其中的气体是由气体前体提供的。在相转变温度下，液 态的前体变成气体而被注入脂质体中。

本发明的脂质体的制备方法包括：(1)将包含治疗剂的 脂质体置于负压下；(2)在负压下将该脂质体温育足够的时 间以基本上从类脂体中除去所有的水；以及(3)将选定的气 体滴注入该脂质体中直至达到环境气压。上述步骤使用的 方法在本申请中被称为制备含药物脂质体真空干燥气体滴 注法。

本申请还提供了使用真空干燥气体滴注法制备本发明 脂质体的设备，所述设备包括：(1)其中包含治疗剂的脂质体 的容器；(2)给该容器提供负压以从其中的脂质体中除水的 装置；(3)连接负压装置与容器的导管，该导管引导上述水的 流动；以及(4)引导气体进入容器中脂质体的装置。

用于制备以真空干燥气体滴注法制得的本发明气休填 充的脂质体以及在其内部基本上不含水的充气脂质体的真 空干燥气体滴注法意指下列方法。首先，按照该方法，将含药 物的脂质体置于负压(即，减压或真空条件下)。接着，在负压 下将脂质体温育足够的时间以从脂质体中除去基本上全部 的水，因此得到基本上无水的脂质体。这里使用的短语，如除 去基本上全部的水，和基本上无水的脂质体，指至少除去 90％的水，优选至少除去95％的水，最优选除去约100％水 的脂质体。尽管除去了水但分子量较高的治疗剂被保留下 来，并被包裹在脂质体中。最后，通过向脂质体提供气体使其 达到环境气压而完成该选择性气体向脂质体的注入，因而得 到本发明含治疗剂的真空干燥气体滴注脂质体的，而本发明 包含治疗剂的气体填充脂质体在其内部基本上避免了水的 存在，。这里使用的短语，其内部基本上避免了水的存在，指 在其内部至少除去90％的水，优选至少除去95％的水，最优 选除去约100％的水的脂质体。

意外地，按照本发明的方法制备的含治疗剂的脂质体具 有许意外而有利的特性。本发明的脂质体对超声波具有强烈 的回波发生特性，使用峰共振频率的超声波(以及其他足够 的强度和持续时间的振动频率)可使其破裂，它对压力很稳 定，和/或通常可长期保存，不论干燥保存或悬浮于液体介质 中。该气体前体填充脂质体必具有如下优点，例如，稳定的粒 度大小，低毒性和膜柔韧性。可以相信气体前体填充脂质体 的膜有助于这些脂质体在如肿瘤组织的积累或将这些组织 靶定位。该脂质体另一个令人意外的功能是在真空干燥气体 滴注过程中它可填充气体并可恢复其原来的圆形而不是不 可逆地破裂成杯形。

脂质体的回波发生性和脂质体在所用超声波的峰共振 频率下破裂的能力使通过在对患者给药后监测脂质体而测 定液态前体向气体的转变，脂质体在治疗部位的存在，并使 用超声波在该部位破裂脂质体以释放治疗剂，而达到治疗剂 对患者某部位的控制传递。优选地，本发明脂质体具有的反 射率大于2dB，优选从4dB到20dB。在此范围内，本发明脂 质体的最大反射率来自较大的脂质体，较高的脂质体浓度和 /或使用较高的超声波频率。图13图示了未包裹任何药物 的，按真空干燥气体滴注法制备的，其内部基本上不含水的 充气脂质体的dB反射率。优选地，本发明脂质体在约0. 5mHz到约10mHz之间具有峰共振频率。当然，本发明气体 前体填充脂质体和充气脂质体的峰共振频率随其直径以及， 在某种程度上，随脂质体弹性而变化，较大及弹性较强的脂 质体比较小弹性较强的脂质体具有较低的共振频率。

本发明脂质体的稳定性也具有非常实用的重要性。本发 明类脂体比通过加压或其它技术的已知方法制备的常规的 液体的，含水的，和/或充气的脂质体具有更高的储藏稳定 性。例如，在形成72小时后，常规制备的含气体的脂质体通 常基本上不含气体，气体已从脂质体中渗出和/或脂质体已 经破裂和/或融化，随之导致了反射性的丧失。相反，本发明 含治疗剂的气体前体填充脂质体的储存寿命期限超过约三 周，优选地储存期限大于约四周，更优选地储存期限大于五 周，还更优选地储存期限大于约三个月，通常储存期限甚至 更长，如超过六个月，十二个月，甚至两年。

该脂质体另外一个令人意外的功能是在真空干燥气体 注入过程中，它可填充气体并与恢复其原来的圆形，而不是 如在先技术所可能导致的将其破裂成杯形结构。见，例如， Crowe et al.，Archives of Biochemistry and Biophysics， Vol，220，99—477—484(1983)；Fukada et al.，J.Am. Chem.Soc.，Vol.，108，pp，2321—2327(1986)；Regem et al.，J.A m.Chem.Soc.，Vol.102，Pp.6638—6640 (1980).

由本发明真空干燥气体注入法制备的含治疗剂的脂质 体也可按本领域技术人员熟知的任何常规脂质体制备技术 来制备。尽管可使用各种不同的技术，但优选通过微乳化技 术来制备含有治疗剂的脂质体。然后使用本发明真空干燥气 体滴注法将按常规方法制备的脂质体制备成本发明的含治 疗剂的脂质体。

可在使用本发明真空干燥注入法制备脂质体的过程中 使用的原料包括本领域技术人员熟悉的适用于脂质体结构 的任何材料或其组合。

在气体注入前可使用任何本领域技术人员熟悉的常规 脂质体制备技术来制备脂质体。这些技术包括冷冻—融化， 以及超声处理，螯合剂透析，匀浆，溶剂浸制，微乳化，自然形 成，溶剂蒸发，French pressure cell technique，，受控洗涤剂 透析及其它技术，各项技术都包括在含所需治疗剂的溶液中 制备各种形式的脂质体。这样可使该治疗剂被包裹，绊缠或 吸附在所得脂质体中。两者挑一地，可使用PH梯度技术将 治疗剂填充进脂质体，如本领域技术人员所知，该技术特别 适用于特殊PH下的蛋白盐或脱蛋白盐治疗剂，见，例如，， Madden et a1.，Cehmistry and Physics of Lipids，1990，53， 37—46，所有公开文献在此作为整体收编为参考文献。

对于真空干燥气体注入法所用的含治疗剂的脂质体的 制备，按一般工具书的方法，例如，可通过将二棕榈酰磷脂酰 胆碱(二棕榈酰卵磷脂)类脂悬浮于含有欲包裹的药物的磷 酸盐缓冲的盐水或水中，并将类脂加热到约50℃，一个此二 棕榈酰磷脂酰胆碱类脂从凝胶态转向液态所需的温度410 略高的温度，以形成含治疗剂的二棕榈酰磷脂酰胆碱脂质 体。

脂质体溶液保持50℃时，用手工轻轻地将脂质体混合， 可制备大小均匀地分布在2微米左右的多层微囊。然后将温 度降至室温，而脂质体保持完整。如果需要，可将二棕榈酰磷 脂酰胆碱脂质体挤压使其通过限定大小的聚碳酸酯滤器，使 脂质体的大小更均匀地分布。用于该方法的设备为装有保温 筒的挤压设备(Extruder DeviceTM，Lipex Biomembrances， Vancouver，Canada)，这样可使挤压在高于类脂胶态向液 晶态转变的相转变温度下方便地完成。

对于在水性介质中不易溶解的亲脂性治疗剂可在形成 脂质体前将其与类脂本身结合。例如，两性霉素可与无水类 脂(例如。氯纺中的摩尔双为8∶2的蛋磷脂和胆固醇并与类 脂混合)一起被悬浮。然后蒸发氯纺(注意，基它合适的有机 溶剂也可被使用，如乙醇或乙醚)并将含亲脂性治疗剂混合 物的无水类脂再悬浮于如无菌水或生理盐水的水性介质中。 可用该方法将各种亲脂性药物如皮质类固醇结合进脂质体 膜内。然后将所得脂质体干燥，进行上述的真空气体滴注法。

两者挑一地，并按通常的指导方法，常规的冷冻一融化 步骤可被用来制备寡层或单层二棕榈酰磷脂酰胆碱脂质体。 冷冻—融化步骤之后，可对该脂质体进行上述的挤压步骤。

然后，将如此制得的含治疗剂的脂质体进行本发明的真 空干燥气体滴注过程，产生本发明含治疗剂的真空干燥气 体滴注脂质体，以及在其内部基本上不含水的含治疗剂温度 活化的气体前体填充的脂质体。按照本发明的方法，将含治 疗剂的脂质体置于合适的容器使该脂质体处于负压下(即， 减压或真空条件下)，将负压保持足够的时间，以基本上除去 脂质体中的所有的水，结果得到实际上无水的类脂体。正如 本领域技术人员所知，按本发明装备后，各种不同的负压都 可被使用这是从脂质体中除去基本上所有水的重要参数。一 般地，将至少约700mmHg，优选从约700mmHg到 760mmHg的负压(表压)保持约24到72小时，以从脂质体 中除去基本上所有的水。根据本文的公开内容，其它适当的 压力和持续时间对本领域技术人员来说是显而易见的。

最后，对脂质体提供经选择的气体，以使气体注入脂质 体，直到压力达到环境压力，结果得到本发明含有药物的真 空干燥气体注入的脂质体，以及在内部基本上不含水的含药 物的气体前体填充类脂体。优选地，气体注入应缓慢进行，即 注入时间至少为约4小时，最优选约4到8小时。

可使用各种生物相容的气体。这样的气体包括空气，氮 气，二氧化碳，氧气，氩气，氯气，氖气，氦气或它们的任意及 全部组合。其它合适的气体为本领域技术人员所显而易见， 气体的选择仅受欲使用的脂质体的限制。除这里公开的气体 前体之外，也可将该前体与其它气体共同截留。例如，在含周 围气体(如空气)的密闭环境中气体前体向气体转变过程中， 两种气体可以混合，在微球体的搅拌和形成过程中，微球体 所包含的气体导致了两种或多种气体的混合物，这取决于被 混合气体的密度。

制备脂质体的上述方法在下文中指的是真空干燥气体 注入法。

如果需要，在对脂质体抽负压前可将该脂质体冷却，而 这种冷却是优选的。优选地，在对脂质体抽负压前，将脂质体 冷却到0℃以下，更优选约-10℃到-20℃之间，最优选- 10℃。达到所需负压时脂质体温度优选地升到0℃以上，更 优选约10℃到20℃之间，最优选10℃，直到实际上所有的 水都已从脂质体中除去，撤去负压，使温度恢复至室温。

如果将脂质体的温度冷却到0℃以下，那么用在冷冻保 护剂存在下开始制备的脂质体进行真空干燥气体注入过程， 或者在进行本发明的真空干燥气体注入法之前加入冷冻保 护剂都是优选的。这样的冷冻保护剂，不必强制性地加入，有 助于低温下保持脂质体膜的完整，并也增强膜的极限稳定 性，优选的冷冻保护剂为海藻糖，甘油，聚乙二醇(特别是分 子量为400的聚乙二醇)，棉子糖，蔗糖和山梨醇，特别优选 海藻糖和聚乙二醇。

令人惊奇地发现，本发明脂质体对压力的变化具有高度 的稳定性。由于这种情况，可在需要时，在真空干燥及气体滴 注后将脂质体压出通过限定孔径大小的滤器，得到相对均匀 的限定孔径大小的脂质体。

本发明另一方面也提供了用于制备本发明含治疗剂的 真空干燥气体滴注的脂质体以及含治疗剂的在其内部基本 上不含水的充气脂质体的设备。特别地，图14显示了真空干 燥脂质体并将气体注入干燥的脂质体的优选设备。该设备包 括装含治疗剂的脂质体19的容器8。如果需要，该设备包括 装有干冰17，包围容器8的冰浴5。冰浴5和干冰17使脂质 体被冷却至0℃以下。真空泵1，通过导管15连接到容器8 以提供持续的负压，在优选实施方案中，泵1可提供至少约 700mmHg的负压。优选约700mmHg至760mmHg的负压 (表压)。压力计6连接在导管15上监测提供给容器8的负 压。

为了防止从脂质体中除去的水进入泵1，一系列的阱被 连到导管15以帮助收集从脂质体吸出的水(和水蒸汽，统称 为水)。在优选的实施方案中，两个阱被应用。第一个阱优选 地包括置于配有带干冰17的冰浴4中的烧瓶7。第二个阱 优选地包括被管16螺旋环绕的柱3。柱3的顶端连接导管 15而底端连接管16。管16的另一端连接导管15。如图14 所示。带干冰17的冰浴2包围着柱3和管16。如果需要，干 冰17可用液氮，液化空气或其他低温物质代替，冰浴2和4 有助于收集水并将从脂质体中吸出的水蒸汽冷凝收集在阱 内。在本发明优选的实施方案中，冰阱2和4各保持在低于 约-70℃的温度下。

管塞14装在容器8的上游导管15中以将选定的气体 从气瓶18导入容器8并进入脂质体19中。

该设备也包含控制温度的装置以便该设备可保持在适 于制备脂质体的温度。例如，在优选的实施方案中，脂质体的 制备在低于气体前体的沸点下完成。在优选的实施方案中， 液态的气体前体填充到脂质体内部空间。两者挑一地，该设 备可将温度保持在气体前体由液态向气态的转变温度，以使 气体包含在脂质体中。进一步，在类脂体制备过程中，可调节 该设备的温度以使气体前体作为液体开始，但是，作为气体 被结合进所得脂质体中。在此实施方案中，在脂质体制备过 程中设备的温度被调节，使开始时的温度低于相转变温度， 随后将温度调节到接近气体前体的相转变温度。

将含治疗剂的脂质体19置于本发明设备的容器8中。 在优选的实施方案中，使用干冰17将冰浴5中的脂质体的 温度降低至0℃以下，更优选在约-10℃到-20℃之间，最 优选-10℃。关闭管塞14和9，启动真空泵1。随后小心地 打开管塞10，11，12和13，使真空泵1对容器8抽真空。利用 压力计6测量压力，直到负压达到至少约700mmHg，优选 范围为约700mmHg到760mmHg(表压)之间。在优选的本 发明容器7的实施方案中，由使用干冰17的冰浴4冷却7 以及使用干冰17的冰浴2冷却的柱3和盘管16，共同或单 独地从脂质体中冷凝水蒸汽并收集液滴，以防止水和水蒸汽 进入真空泵1。在优选的本发明实施方案中，冰阱2和4的 温度各保持在约-70℃以下。所需的负压通常至少保持24 小时，以便从容器8中的脂质体19和容器3和7中的冰中 除去水及水蒸汽。系统的压力由压力计6来测量，通常保持 约24小时到72小时，在此时间内，基本上所有的水都已从 脂质体中除去。这时，慢慢关闭管塞10并关闭真空泵1。随 后，逐渐打开管塞14，使气体从气瓶18通过管塞14经导管 15慢慢地导入系统，使气体进入容器8中的含治疗剂的脂 质体19中。优选地，气体滴注的时间至少为约4小时，更优 选约4到8小时，直到系统的压力达到环境压力。

本发明含治疗剂真空干燥气体滴注的脂质体和含治疗 剂的充气脂质体基本上可避免液体进入其内部，具有作为治 疗剂传递载体的优越性。

根据本发明的方法制备的充气脂质体在某些方面，在物 理性质和功能方面，不同与现有技术中的脂质体。例如，本发 明的脂质体实际上避免了水进入其内部。确切地讲。现有技 术中的脂质体存在水介质。例如，Dodand’s illustrated Med- ical Dictionary，p946，27th ed.(W.B，Saunders Company， Philadelphia 1988)。进一步，本发明脂质体令人惊奇地对超 声波具有强烈的回波发生特性，在该脂质体峰值共振频率易 受超声波影响而破裂，并具有长的保存期限，特别有利于使 用该脂质体作为药物传递系统。

因此，本发明设计的控制向患者局部传递治疗剂的方法 包括：(1)对患者使用通过真空干燥气体滴注法制备的并在 其中密封着治疗剂的充气脂质体，和/或基本上在其内部避 免液体存在的并在其中密封着治疗剂的充气脂质体；(2)使 用超声波监测脂质体以确定气体前体从液态向气态的相转 变和测定该部位类脂体的存在；以及(3)使用超声波破裂脂 质体，使治疗剂在该部位释放。

除这里详述的用途外，本发明的脂质体还有各种不同的 用途。例如，包括作为超声波热增效剂和作为超声波反射对 比剂的用途。这些另外的用途和其它有关的物质均为1991 年6月18目的本申请人的专利申请，U.S.Serial No.716, 793和U.S.Serial No.717,084中被描述并作为权利要求 而提出，这里将其所公开的内容作为一个整体收编为参考文 献。

在下列实施例中将进一步描述本发明。实施例1和2为 描述含治疗剂的气体前体填充微球体的制备，试验和使用的 实际实施例。剩下所有实施例为预示性的。实施例3—21，描 述含治疗剂的气体前体填充微球体的制备，试验和使用。实 施例22—29说明在气体存在下通过振荡含类脂的水溶液而 制备的气体前体填充脂质体的制备和试验。实施例30—36 说明通过过滤和压热类脂悬浮液，接着振荡该类脂溶液而制 备的气体前体填充脂质体的制备及筛分。实施例37和38指 示了含温度活化的气体前体填充脂质体制备。下列实施例不 应被认为是所附权利要求的范围的限制。 实施例1

下面描述的方法说明治疗剂如DNA可被截留在充满 气体的微球体中。以及超声波可被用来从填充气体的微球体 中释放治疗剂。如下所示，在接受相同能量的超声波辐射后， 截留有水和DNA的类脂体不能释放该遗传物质。脂质体中 气体的存在使超声波能量得到更有效的捕获，所以可用来释 放治疗剂如遗传物质。

填充气体的微球体按下述合成：将纯的二棕榈酰磷脂胆 碱(DPPC)，异丙醇极性类脂类(Avanti Polar Lipids)，雪花 石膏，丙氯酸(Ala)悬浮于普通的盐水中，然后使用Extrud- er Device(Lipex Bionenbran V ancourer，Canada)在 800p.s.i通过2微米聚碳酸酯滤器(Nuclepore，Costar， Pleasanton，CA)压出五次，然后按U.S.Serial No.716， 89，filed 6/18/91所述将所得脂质体减压干燥，该文献作为 一个整体在此收编为参参文献。彻底干燥后，将干燥的脂质 体按U.S.Serial No.716,899所述，慢慢地填充氮气。与环 境压力平衡后，将所得脂质体悬浮于盐水中(0.9％NaCl)并 剧烈摇动。

通过Coulter Counter(Bedfordshire England)试验所 得充气脂质体的大小按Coulter Counter提供的参考手册所 述的校准程序校准仪器。将充气脂质体溶液用同中素II (Isoton II)稀释并放置在玻璃容器中，在Coulter Sampling Stand3档搅拌。

首先使用100um孔径管。用该孔径管将500毫升溶液 在各选择的大小范围试验一次，接着使用的是30μm孔径 管。用该管可将微球体筛分到约1μm，充气微球体的平均直 径可在其中检测。

将50毫升溶液试验一次，将微球体在各选择的大小范 围计数。于Coulter Counter model ZM和Coulter Counter Channelyzer256收集数据。准弹性光散射(QEL)和光显微 术也被使用。预定大小的乳液小球被用来校准目镜的栅格。 这些栅格以10×，40×，100×，400×和1000×的倍率被校 准。然后将充气微球体置于玻璃载片并在不同倍率下观察。 该技术不仅可以得到充气脂质体的大小，也可以得到类脂类 微粒的大小。

使用Acoustic Imaging Model5200临床超声波设备 (Acoustic Imaging Technologies Corp.Phoneix，AZ)和定 制的台面(bench top)设备的声波能扫描充气的脂质体。台 面声学实验室由Letroy 9410 Digital Oscilloscope(Lecroy Corporation Corporate Headquartes，Chestnut Ridge， NY)，Panametrics model 5052 PR Pulser/Receiver (Panametrics，Inc.，Waltham，Mass)，具有2.25，3.5，5. 0.7.5，和10.0MHz频率的Panametrics浸没式变送器 (Panametrics，Inc.，Waltham，Mass)，和Testech，Inc.的 校正系统(Testech，Inc.Exton，PA)组成一种参考标准， 系列模拟模型(Tissue minicking phantom)，被用于建立延 时补偿(time—gain compensation)(TGC)并以此方式得到 平均振幅。该系列模拟模型由Radiation Measurements， Inc。(Middleton，WI)制造。

如表III所示，在试验频率范围充气脂质体的反射率在 这些实验使用的最高能量脉冲声波下保持恒定。特别地，尽 管扫描持续60分钟，充气脂质体的dB反射率在4.5—8. 4mW范围的能量以及3.25mW/cm2的声波强度((acoustic Imaging AI5200临床超声波机可产生的脉冲声波的最高能 量)下保持恒定。

                  表III

            充气脂质体反射率     时间(分钟)     平均振幅(dB反射率)     0     -34.1     15     -36.0     30     -36.2     45     -36.8     60     -37.1

用Rich—Mar Therapeutic ultrasound apparatus mod- el RM—25(Rich—Mar corp.，Inola，Ok)提供的超声波能 (表IV)持续照射充气脂质体溶液。表IV显示了使用持续的 超声波产生的能量。结果发现持续的超声波能导致充气脂质 体内部的气体从脂质体逃逸，从而破裂脂质体。在5瓦特功 率及1MHz时完全破坏盐水溶液中的充气脂质体需要大约 20—30分钟。在10瓦特及1MHz时，完全破坏充气脂质体 大约需要5分钟。在提供高能量前后通过光显微术检测充气 脂质体，发现在照射后球形充气脂质体消失。

                 表IV

        持续超声波的功率和强度 超声波总功率输出P  (mv) 变换器屏上的平均强度     持续波     5000     9867     持续波     10000     19735

以系列实验试验充气微球体传递DNA的能力，按上述 由DPPC制备脂质体，只是在无水DPPC再悬浮时加入 iCC生理盐水中的，在7000bp质粒上的2μgDNA(pCHl0 ：pharmacia LKB，Biotechnoligy，Piscataway，NJ)然后按 上述制备充气脂质体。在充气脂质体再悬浮后，外面的未截 留的DNA可通过亲合色谱法除去。将充气脂质体和DNA 的悬浮液上柱(DNA specific Sephadex)用蠕动泵(Econop- ump，Bib—Rad Laboratories，Hercules，CA)洗脱。DNA 亲合基质结合并保留了未截留的DNA。充气微球体洗脱出 去。

也可按上述截留DNA的方法制备充水的脂质体。只是 省略了干燥气体滴注的步骤。未截留的DNA经层析而除 去。然后将充气脂质体按上述进行超声波扫描。含DNA的 充气脂质体对上述脉冲超声波具相似的回波反应，用上述持 续的超声波扫描后，微球体失去了其回波反应性。

用持续的超声波处理后通过碘化锭二聚物法检定游离 DNA(即，充气脂质体之外的DNA)并将其与含DNA的充 气类脂体(例如，未用持续的超声波处理)的对照组比较。

首先，将2ml充气微球体的等分试样加入一支试管中。 然后加入2mlPBS(磷酸盐缓冲盐水)并将该试管用帕拉胶 膜密封。使试管倒置数次，并放置约5分钟，接着分离微球 体，然后用巴斯德吸移管以从试管中除去底部水层。将此程 序重复三次以洗涤微球体。

接着，将2M1.05mg/ml DNA等分试样加入微球体中， 密封试管瓶倒置混合。放置约5分钟后，用巴斯德吸移管抽 提底部水层。然后加入2mlPBS等分试样并重复洗涤未束敷 的DNA。将此程序重复共五次，并将水层进行扫描分析。

然后用2M1PBS稀释微球体，使用超声波，直到观察不 到充气微球体的存在。

在使用超声波检测释放的DNA后，将14ml浓度为2× 10-5M的DMSO中的碘化锭二聚物(POPO—3碘化物， Molecular Probes，Inc.，Eugene，OR)。作为对照，将14ml 碘化锭加入单一的PBS，以及0.25μg/ml的PBS中的 DNA。

在Spex Flurolog 2 Spectrophotometer中使用534nm 的激发频率测量样品的荧光。记录558nm荧光发射，如下表 V所示。通过基于对照的由PBS中碘化锭二聚物组成的 PBS样品的推断，而测定各样品中的DNA量的百分比。

           表V

    样品     荧光(％DNA)     1次洗涤     58885(45％)     2次洗涤     40314(17％)     3次洗涤     33195(7％)     4次洗涤     30062(8％)     5次洗涤     34336(21％)     暴露于超声波的样品     43051(21％)     对照的纯PBS     28878     对照的PBS＋PNA     50563

洗涤过程可除去束敷的DNA。如表V所示，在五次洗 涤后，充气微球体仍含约21％的质粒DNA。

因为碘化锭二聚物的萤光无明显增强，未暴露在高能量 超声波下的含DNA的充气微球体保持了大量的其内部的 DNA。但是，持续的超声波照射后碘化锭的萤光显著增强显 示持续的超声波能导致了充气微球体的DNA的大量释放。 因此，在使用超声波前，DNA保留在微球体中。由于使用超 声波，截留的DNA被释放。 实施例2

通过含磷脂酸和含气体前体的脂质体结合DNA。将 7mM二硬脂酸—Sn—甘油基磷酸酯(DSPA)(Avanti Polar Lipids，Alabaster，AL)悬浮于生理盐水中，并在50℃涡旋。 将该物质冷却至室温，将40毫克pBA322质粒DNA(Inter- national Biotechnologies Inc.New Haven，CT)加入类脂 溶液中并轻轻摇动。在Beckman TJ—6 Centrifuge)中将该 溶液离心10分钟。使使用Hoefer TKO—100DNA Fluo- rometer(Hoeter，San Francisco，CA)检定DNA中的上层 清液和沉淀。由于其使用间介的染料，对DNA特征的 Hoechst 33258，检测双股DNA。令人惊奇地发现，用磷脂酸 制备的负电荷脂质体结合了DNA。作为对照，使用中性脂质 体化合物DPPC重复上述实验。DPPC脂质体中未检测到 DNA。使用由微球体中含87∶8∶5摩尔百分比的DPPC， DPPE—PEG500和DPPA的类脂混合物制备的充气脂质 体重复上述实验。发现含二棕榈酰磷脂碱的充气脂质体也结 合了DNA。 实施例3

将一种阳离子类脂，如DOTMA按1∶3体积摩尔比与 DPPC混合，混合物溶于氯仿并通过旋转蒸发除去氯仿。在 此无水的材料中加入水并使用Extruder Device(Lipex Biomembranes，Inc.，Vancourer，B，C)将此混合物压滤过 2μm滤器。然后按照申请于6/18/91的U.S.Serial No. 717,084的方法制备带正电荷的气体前体填充脂质体，该文 献作为整体在此收编为参考文献。

通过加PBS，盐水或其它合适的缓冲溶液(如HEPES 缓冲液)将所得的干燥的，带正电荷的气体前填充脂质体再 水合；一种涡旋器可被用于保证混合的均匀。加入DNA并 再次振荡混合物。由于DNA结合在阳离子气体前体填充脂 质体表面，所以通过过滤或选择性层析可除去未结合的 DNA。到阳离子类脂类被饱和为止，所有DNA实际上都结 合上去。选择性地，DNA可于在前的压滤步骤中被加入接 着进行上述步骤。

然后将所得的DNA涂渍的脂质体干燥并注入气体前 体产生含DNA的气体前填充脂质体。然后将所得脂质体暴 露于持续的超声波并通过对超声波的反射系数和吸收度试 验脂质体的破裂。

不论DNA被束敷在气体前体填充脂质体的里面还是 外面，都可用声波释放遗传物质。气体前体填充脂质体外部 的DNA的结合可允许微球体内部有更大的空间以填充气 体。由于有效地增大了直径，通常可更有效地使用超声波能 量从微球体中释放遗传物质。

可以相信，结合DNA的阳离子类脂类具有优越性，例 如，当声能使脂质体膜破裂时，疏水基帮助DNA进入细胞， 有助于通过细胞膜和亚细胞层。

上述阳离子类脂类有具有中和DNA负电荷及两亲性 的优点。当这些阳离子类脂类从脂质体中释放时，因为类脂 类为两亲的而细胞膜是可溶的，它们有助于促进DNA进入 细胞以及亚细胞层 实施例4

制备由1∶2摩尔比的DOTMA和DPPC组成的气体 前体脂质体并用编码HLA(主要的组织相容性复合体)基 因，HLA—B7的DNA涂渍。将涂渍DNA的脂质体静脉注 射给患软组织迁移性黑素瘤的患者。由于进入患者体内，气 体前体由液体转变为气体。将1.0兆赫的持续超声波照射该 软组织使HLA—B7DNA在肿瘤上累积。可以相信某些肿 瘤细胞将被HLA—B7基因传染，导致可刺激病人T细胞排 斥肿瘤的免疫反应。 实施例5

对碎片肿瘤基因的反义低聚核苷酸被截留在由聚乙二 醇二棕榈酰磷脂酰乙醇胺组成的脂质体内。将该脂质体静脉 注射给转移性结肠癌患者，由于进入病人体内，气体前体由 液体转变为气体。对转移瘤提供1.0兆赫的持续超声波能。

实施例6

按上述使用卵磷脂酸胆碱和DOTMA，氯化N—[1— (2，3—二油酰氧)丙基]—N，N，N—三乙基铵制备气体前体 填充脂质体，结合载有营养不良基因的YAC表达媒介物。 将该微粒体静脉注射给Duchenne’s Muscular Dystrophy (or Becker’s MD)患者。对患者肌肉组织提供1.0兆赫持续 的超声波能量，可使肌肉的力量和质量增加。

实施例7

将YAC表达媒介物上的CFTR(囊纤维化转移膜传导 调节因子)基因截留有1—氟丁烷气体前体摩尔比的阳离子 类脂类和DPPC组成的微球体的微胶粒制剂。给囊纤维化 患者静脉注射该微球体并提供超声波能量影响组织(例如， 肺，胰；等)。由于达到患者的体温，气体前体由液体转化为气 体。患者肺粘液蓄积减少，其它受影响的器官的功能也有提 高。 实施例8

给转移性肾癌患者注射含DNA编码白细胞介素—2 (IL—2)基因的阳离子微球体。监测前体由液体向气体的相 转为。用超声波扫描病人腹部癌瘤。如微球体在肿瘤部位蓄 积，来自肿瘤的反向散射及超声波反射的频谱谐波信号将有 增加。增强超声波能量，脉冲持续时间及脉冲重复频率直到 充气微球体频谱超声波信号从肿瘤上消失。通过小心地控制 能量，如用水听器检测，控制成腔。该处理的结果是：IL—2 基因转染了一些肿瘤细胞。随后T细胞淋巴细胞可对胞质 和浸润物反应，摧毁肿瘤。 实施例9

给转移肾癌患者注射传递DNA编码肿瘤坏死因子 (TNF)基因的的阳离子微球体。监测前体由液体向气的相 转变。用超声波扫描病人腹部肿瘤，微球体在肿瘤部位蓄积， 来自肿瘤的反向散射及超声波反射的频谱谐波信号将有增 加。增强超声波能量，脉冲持续时间及脉冲重复频率直互充 气微球体频谱超声波信号从肿瘤上消失。通过仔细地控制能 量，如用水听器检测，控制成腔，该处理的结果是TNF基因 转染了一些肿瘤细胞。随后肿瘤开始局部地产生TNF，并可 导致大量凝固性坏死。 实施10

用抗肿瘤的单克隆(monoclonal)抗体制备由二棕榈酰 磷脂酰胆碱和结合DNA的阳离子类脂类组成的微粒体。给 转移性黑素瘤患者静脉注射涂渍抗黑素瘤抗原的单克隆抗 体和含白细胞介素—2的微粒体。用诊断超声波扫描患者并 监测前体由液体向气体的转变。软组织中的肿瘤沉积物被充 气微球体反射为强光。当用诊断超声波检测这些结时，将超 声波能量增加到5瓦特并聚焦于含肿瘤的转移性沉积物。当 释放能量时，检测肿瘤的超声波图谱。当反射由微球体定位 的肿瘤的所有高频谱信号消失时，将超声波能量聚焦于具有 指示微粒体的声谱信号的新的肿瘤区。 实施例11。

按照上述合成具有三种类型的表面结反义DNA的阳 离子充气脂质体。反义DNA为基因编码c—myc，c—myb， 平滑肌生长因子，和肉皮细胞生长因子靶定位。将气体前体 填充脂质体以动脉内给药的形式传递到血管成型部位(an- gioplasty)。然后对血管成形部位提供5兆赫的持续超声波， 并检测气相的前体，可以相信由于微球体破裂而释放反义 RNA将改善内皮功能，减少凝固倾向。 实施例12

将二棕榈酰磷脂酰胆碱(1克)，悬浮于10ml含阿霉素 的磷酸盐缓冲的盐水中，将该混悬液加热至50℃，然后用手 在圆底烧瓶中回荡约30分钟。除去热源，将混悬液再回荡2 小时，回荡时使混悬液冷却至室温，以形成含药物的脂质体。

将制得的脂质体放入与图14相似的设备的容器中，冷 却至约10℃，然后对其抽真空。将脂质体的温度升至约 10℃。高真空被保持48小时。48小时后，在四小时内将由气 体前体提供的1—氟丁烷逐步注入该容器，4小时后，将压 力恢复到环境压力。结果得到含药物的真空干燥注入气体的 脂质体，该充气脂质体在其内部基本上避免了水的存在，然 后将该脂质体悬浮在10cc磷酸盐缓冲的盐水中，并涡旋10 分钟，然后在约4℃储存约三个月。 实施例13

为试验实施例11的脂质体的超声波回声，将250mg脂 质体样品悬浮于300cc非脱气的磷酸盐缓冲的盐水中。使用 Acoustic Imaging Model5200扫描仪(Acoustic Imaging， Phoenix，AZ)并应用测量dB反射率的系统试验软件，在体 外，于各个变化时间段内，用7.5MHz变换器扫描类脂。

在试验类脂前用已知声阻抗模型校准该系统，该脂质体 显示良好的dB反射率。 实施例14

将二棕榈酰磷脂酰胆碱(1克)和防冻海藻糖(Cry- oprorwctant trehalose)1克悬浮于10ml含两性霉素—B药 物的磷盐缓冲的盐水，将此混悬液加热到约50℃，然后用手 在圆烧瓶中回荡约30分钟，除去热源，将混悬液再回荡2小 时，回荡时使混悬液冷却至室温，以形成脂质体。

将制得的脂质体真空干燥并注入气体，大体上按实施例 11所示的步骤进行，得到含药物的真空干燥的注入气体的 脂质体，该脂质体在其内部基本上避免了水的存在。然后将 该脂质体悬浮在10cc磷酸盐缓冲的盐水中并涡旋，然后在 4℃储存约数星期。使用前，通过具有附加在中心轴上的滤器 的滤管注射器将充气脂质体压出10μm聚碳酸酯滤器(Nu- clepore，Costar，Pleasanton，CA)。

实施例15

基本上按照实施例12的步骤试验实施例13脂体的超 声波回声，该脂质体显示良好的dB反射率。 实施例16

将二棕榈酰磷脂酰胆碱(1克)悬浮于10ml含阿糖胞苷 药物的磷酸盐缓冲的盐水中，将该混悬浮加热到50℃，然后 用手在圆底烧瓶中回荡约30分钟，通过具有加热套筒的挤 压设备((extruder Device TM，Lipex Biomembranes，VAn- couver，Canada)将混悬浮液压出五个周期，挤压前可进行 或不进行常规的冻融处理，压出期间保持约50℃的温度。除 去热源.将混悬液再回荡2小时，回荡时使混悬液冷却至室 温，以形成脂质体。

基本上按照实施例11所示的步骤，将所制备的脂质体 真空干燥并滴注气体，得到含药物的真空干燥的滴注气体的 脂质体。该充气脂质体在其内部基本上避免了任何水的存 在。该脂质体然后悬浮在10cc磷酸盐缓冲的盐水中，在约 4℃储存数周。 实施例17

基本上按照实施例12的步骤试验实施例15的超声波 回声。该脂质体显示良好的DB反射率 实施例18

为了试验本发明含药物脂质体的稳定性，用手将实施例 11的脂质体混悬浮通过如图10所示的注射管中的10微米 聚碳酸酯滤器。压出处理后，按实施例12所述研究脂质体的 超声波回声。令人惊奇地，本发明脂质体在压出后仍基本上 保持其回波产生。 实施19

使用振子频率为3到7.5mHz的超声波扫描实施例11 的类脂体。结果显示，在超声波的高频，回波产生更迅速地减 弱，反映了相对高的共振频率以及与较高频率有关的较高能 量。 实施例20

给癌症患者静脉注射包含药物的真空干燥气体滴注脂 质体，该脂质体基本上避免了其内部的水，含于脂质体的药 物是阿霉素。静脉注射时通过自动程序对肿瘤进行超声波扫 描，并测定脂质体的共振频率，然后在脂质体峰共振频率将 超声波能量聚焦于肿瘤。超声波能量不足以导致明显的组织 热(即，无大于2℃的温度变化)，但该超声波能量足以导致 肿瘤部位的脂质体爆裂并释放阿霉素。这样，使用类脂体与 超声波完成了局部药物传递。 实施例21

给严重的局部真菌感染的病人静脉注射包含药物的真 空干燥滴注气体的脂质体的药物。该充气脂质体其本上避免 了基内部的水，以基本上与实施10所述相似的方式使用超 声波完成局部药物传递。含于脂质体的药物两性霉素—B被 有效地传递到感染部位。 实施例22

为了制备前体填充的脂质体，将50mg1，2—棕榈酰— Sn—甘油基—3—胆碱磷酸(MW：734.05，粉末，Lot No. 160pc—183)(Avanti—Polar lipids，Alabaster，AL)称重并 用5.0ml盐水(0.9％NaCl)或磷酸盐缓冲的盐水(0.8％Na-Cl， 0.8％KCl，0.115％磷酸二钠和0.002％磷酸一钾，PH 调节到7.4)，165μL1—氟丁烷，在离心管中水合。然后，将水 合混悬液置于涡旋机(Soientific Industries，Bohemia，NY) 中，在仪器6.5位振荡10分钟，然后记下12ml的总体积。盐 水溶液由5.0ml减少到约4ml。

然后通过光学显微镜测量经这种新方法制备的气体前 体填充微球体的大小。发现最大的脂质体约50到约60μm， 而最小的约8μm，平均大小范围为约15到约20μm。

然后通过10或12μm″NUCLEPORE″膜，使用Swin— Lok Filtration Products，Costar Corp.，Cambridge，NA) 和20cc注射器(Becton Dickinson&Co.，Rutherford，NJ) 过滤该气体前体填充的脂质体。滤膜为10或12μm″NU- CLEPORE″膜(Nuclepore Filtration Productsm Costar Corp.，Cambridge，MA)。将10.0μm滤器安装在Swin— Lok Filter Holder，并安全地将盖上紧。将脂质体溶液振荡 并经18号针(gauge needle)注入20cc注射器。大约12ml脂 质体溶液被置于注射器中，并将注射器拧到Swin—Lok Fil- ter Molder上。颠倒注射器和滤器支持物，以使较大的充气 脂质体囊升至顶部。慢慢地推上注射顺，以这种方式过滤充 气脂质体。

通过10.0um滤器压出充气脂质体的残存率(挤压过程 后保存的充气脂质体时)约为83—92％。压出前，泡沫状物 的体积约为12ml而水溶液的体积约为4ml。压出后，泡沫状 物的体积为10—11ml而水溶液的体积约为4ml。

再用光学显微镜检测压出后充气脂质体大小的分配。检 测范围为约25到约30μm的最大脂质体和约5μm的最小 脂质体。平均大小的范围为约8到约15um。

已发现过滤后，90％以上的充气脂质体小于15U m。 实施例23

将50mg1，2—二棕榈酰—Sn—甘油基—3—胆碱磷酸 (MW：723.05，粉末)(Avanti—Polar Lipids，Alabaster， AL)称重并放入离心管中，然后用5.0ml盐水溶液(0.9％ NaCl)水合该类脂。将该类脂在仪器6.5档涡旋10分钟。涡 旋后，将全部溶液在液氮中冷却。然后将样品放在冷冻干燥 器中冷冻干燥。样品在冷冻干燥器放置18小时。从冷冻干 燥器中取出干燥的类脂并在5ml盐水溶液中再水合，在6.5 档涡旋十分钟。将该溶液的少量样品移在载玻片上并在显微 镜下观察该溶液。然后测量充气脂质体的大小。检测到最大 的脂质体约60μm，而最小的约20μm，平均大小范围约30 到约40μm

实施例24

将50mg1，2—二棕榈酰—Sn—甘油基—3—胆碱磷酸 (MW734.05，粉末)(Avanti—Polar Lipids，Alabastar， AL.)称重并放入离心管中，以盘卷的方式将大约两英尺的 胶管(6.25in.内径)绕在圆锥形离心管上。然后用绝缘胶布 将胶管固定在离心管上。将胶管与恒温循环浴(NWR Scien- tific Model1131)连接，该浴的温度固定于60℃，循环水在 管内高速循环。在类脂溶液中放入温度计。测得温度在42℃ 和50℃之间，这是类脂的相转变温度。

将该类脂溶液在涡旋仪6.5档涡旋10分钟。显然，很少 类脂(相转变温度＝41℃)的泡沫未明显地形成充气脂质体。 光学显微镜中可明显地看到溶液中大量类脂微粒。在此温度 下形成的充气脂质体的数量比在低于相转变温度的温度下 形成的数量少3％。将该溶液放置15分钟至到溶液温度与 室温(25℃)平衡。然后将溶液涡旋10分钟。10分钟后，充气 脂质体明显地形成。 实施例25

将50mg1，2—二棕榈酰—Sn—甘油基—3—胆碱磷酸 (MW734.05，粉末)(Avanti—Polar Lipids，Alabastar，A1.) 称重并放入离心管中。然后用5.0ml的0.9％NaCl水合该 类脂。将类脂水溶液在涡旋器6.5档涡旋10分钟。涡旋后， 将全部溶液在液氮中冷却。然后将其在室温(25℃)的水浴中 融化。将冷冻熔化步骤重复八次。将水合的混悬液在涡旋仪 6.5档涡旋10分钟。然后按实施21所述方法检测充气脂质 体。

实施例26

准备两只离心管，各装有50mgDPPC，将1mol％(～0. 2mg of Duponol C lot No.2832)十二烷基硫酸钠，一种乳化 剂加入一只离心管中，在另一只离心管中加入10mol％(2. 0mg of Duponol C lot No.2832).在两只离心管中各加入 5ml 0.9％NaCl。将两只离心管都在液氮中冷却冷冻干燥大 约16小时。从冷冻干燥器中取出两个样品并各加5ml盐水 在6.5档将两离心管涡旋10分钟。

经测定，另1mol％十二烷基硫酸钠形成的最大的充气 脂质体约为75μm，而最小的约6μm。平均大小范围为约15 到40μm。加10mol％十二烷基硫酸钠形成的最大充气脂质 体约为90μm，而最小的约为6μm。平均大小的范围为约15 到约35μm。

含加入1mol％十二烷基硫酸钠形成的充气脂质体的溶 液的泡沫体积约为15ml。而水溶液体积约为3—4ml。含加 入10mol％十二烷基硫酸钠形成的充气脂质体的溶液的泡 沫的体积也约为15ml而水溶液的体积也约为3—4ml。 实施例27

这个实施例测定是否可用声能来制备充气脂质体。将 50mg类脂，1，2—二棕榈酰—Sn—甘油基—3—胆碱磷酸 (Avanti—Polar Lipids，Alabaster，A1)，称重并用5m10. 9％NaCl水合。使用Heat System Sonicator Ultrasonic Pro- cessor XL(Heat Systems，Inc.Farmigdale，NY)Model XL2020向该水溶液发射声能以代替涡旋。调节钮位于4的 声波发生器发射频率为20kHz连续声波。使用一个微嘴 (Micro tip)进行声波扫描10分钟。声波扫描后，在光学显微 镜下观察该溶液。充气脂质体已被制备。

接着除去微嘴，将其用超声波发生器的端套代替。制备 另一种溶液(每5ml盐水50mg类脂)并用该嘴进行声波扫 描。10分钟后在显微镜下观察溶液未发现充气脂质体。 实施例28

这个实施例测定是否有中止充气脂质体产生的类脂的 低浓度限度。将10mg1，2—二棕榈酰—Sn—甘油基—3—胆 碱磷酸(Avanti—Polar LIpids，Alabaster，Al)加入10ml盐 水溶液(0.9％NaCl)中。在6.5档将类脂/盐水溶液涡旋10 分钟。光学显微镜下观察溶液的筛分。测定的最大脂质体的 大小的范围为约30到约45μm而最小类脂体的大小为约 7μm。平均大小范围为约30到45μm。

显然，由于该充气脂质体更易破裂，因此它们比前述的 脂质体更易碎。因此，类脂的浓度显然是充气脂质体产生和 稳定性的一个因素。 实施例29

将未过滤的充气脂质体倒入50ml注射器中并通过串 联间距最小为150μm的，如图11和12所示的″NUCLE- PORE″10um滤器和8μm滤器。两者挑一地，例如，样品也 可通过相互紧密重迭的10μm和8μm滤器过滤。充气脂质 体在使流速为20ml/min的压力下通过滤器。然后，测量随 后过滤的充气脂质体以得到未过滤体积的80—90％中充气 类脂微球体的量。

以四种不同的方法筛分所得充气脂质体的以测量其大 小和分布。筛分是在Particle Sizing Systems Model770光 学筛分仪，与Universal Imaging制造的图形处理软件联接 的Zeiss Axiplan光学显微镜，和Coulter Counter(Coulter Electronics Limited，Luton Beds，England)上完成的。如 图15和图16所示，该充气脂质体的大小比未过滤的脂质体 更均匀地分布在8—10μm。因此，经过滤的充气脂质体具有 更均匀的大小。 实施例30

将250mgDPPC(二棕榈酰磷脂酰胆碱)和10m10.9％ NaCl加入一只50ml Falcon离心管(Becto Dickinson，Lin- coln Park，NJ)中并保持室温(大约20℃)。然后在氮气压力 下将混悬液挤压通过1μm″NULEEPORE″(Costar.Plea- sonton，CA)聚碳酸酯膜。将所得混悬液用Particlc Sizing Systems(Santa Barbara CA)Model370激光散射筛分仪筛 分。所有类脂微粒的平径外直径为1μm或小于1μm。另外 在18000p.s.i的压力下将相同量的DPPC混悬液通过Mi- crofluidicsTM(Microfluidics Corporation Newton，MA)微流 化器五次，将变得明亮的混悬液用Particle Sizing Systems (Santa Barbara，CA)Sub Particle Sizer Model310激光散 射筛分仪筛分，发现其大小的均小于1μm。已知流化的混悬 液的微粒大小可保持稳定达六个月。 实施例31

将100mgDSPC(二硬脂酰磷酯酰胆碱)和10ml0.9％ NaCl加入50ml Falcon离心管(becton—Dickinson，Lin- coln Park NJ)中。在300—800p.s.i.的氮气压下将混悬液压 出通过1um″NUCLEPORE″(Costar，Pleasanton，CA)聚 碳酸酯膜。将所得的混悬液用Particle Sizing Systems(San- ta Barbara，CA)Sub Micron Particle Sizer Model370激光 散射筛分仪筛分。发现所有微粒为1μm或更小。

另外，在18000p.s.i.的压力下将相同量的DPPC混悬 液通过MicrofluidicsTM(Microfludics Corporatic Newton， MA)微流化器五次。将变得明亮的混悬液用Sub Micron Paricle Sizer System Model370激光散射筛分仪筛分，发现 其大小均匀地小于1μm。

将实施例29和30的先筛的混悬液在Barnstead Model (57835)压热器(Barnstead/Thermolyen；Pubnqn IA)中 压热。与室温平衡后，灭菌的混悬液用于气体的注入。 实施例33

将预先被压出通过1μm滤器并压热二十分钟的10ml 25mg/ml 1，2，—二棕榈酰磷脂酰胆碱在0.9％NaCl中的溶 液加入Falcon 50ml离心管(Becton Dickins on Lincoln Park，NJ.)中。类脂混悬液与室温(大约20℃)平衡后，将此 液体在VWR Genie—2(120V.0.5amp，60Hz)Scientific In- dustries，Inc.Bohenia)涡旋10分钟，直到充气脂质体总体 积至少为原来类脂水溶液体积的二或三倍。瓶底的溶液几乎 完全没有无水类脂微粒，得到大量充气脂质体的泡沫。因此， 预先压热不影响类类脂体的能力。压热不改变脂质体的大 小，不降低类脂混悬液形成充气脂质体的能力。 实施例34

将预先被压出通过1um滤器并压热二十分钟的10ml 25mg/ml的1，2—二棕榈酰磷酰胆碱在0.9％NaCl中的溶 液加入Falcon 50ml离心管中(Becton—Dickinson，Lincoln NJ)。类脂混悬液与室温(大约50℃)平衡后。将离心管垂直 放入V WR Scientific Orbital振荡器(VWRScientific，Cer- riaos，CA)中。在300r.p.m档振荡30分钟，在振荡器台上 搅拌得到充气脂质体。 实施35

将预先被挤压通过1μm过滤器并压热二十分钟的 10ml 25mg/ml的1，2—二棕榈酰磷脂酰胆碱在0.9％NaC1中的溶液加入Falcon 50ml离心管(Becton—Dickinson， Lincoln Park，NJ)中，类脂混悬液与室温(大约20℃)平衡 后，将离心管固定在1加仑圆的家用喷涂器中，随后放在机 械喷涂混合器中作15分钟的旋转。涡旋混合后，取出离心 管，显然，充气脂质体已形成。 实话例36

将预先被压出通过1μm滤器并压热二十分钟的10ml 25mg/ml的1，2—二棕榈酰磷酰胆碱在0.9％NaCl中的溶 液加入FAlcon 50ml离心管中(Becton—Dickinson，Lin- coln Park，NJ)中。类脂类混悬液与室温(大约20℃)平衡后。 用手将离心管有力地振荡十分钟。振荡停止后，充气脂质体 形成。 实施例37

按实施例32所述由DPPC制备充气脂质体。将所得未 过滤的脂质体倒入50ml注射器并由″NUCLEPORE″ (costar，Pleasanton，CA)10μm滤器以150μm的间隔接着 8μm滤器的阶式过滤系统压出。另外，对分离的样品使用相 互邻叠的10um和8μm滤器装配。充气脂质体在使其过滤 速度为2.0ml/min的压力下通过滤器。过滤过的充气脂质 体的体积为未过滤的体积的80—90％。

以四种不同的方法筛分所得充气脂质体的测量其大小 分布。筛分是在Particle sizing Systems(Santa Barbara， CA)Model770光学筛分仪，与Universal Imaging(Univer- sal Imaging West Chester)制造的图形处理软件联接的 Zeiss Axiplan光学显微镜和Coulter Counter(Coulter Electronics Limited，Lnton，Beds，England，上完成的。如图 18所示，该充气脂质体的大小比未过滤的脂质体更一致地 分布在8—10μm。 实施38

本实施例包括可在体温为37℃或310°K的人体血液中 形成10微米直径的气体微球体的微球体的制备。在一大气 压下，填充10微米直径微球体的体积需要7.54×10-17摩尔 的气体前体。

分子量为76.11，沸点为32.5℃，20℃时密度为6.7789 克/mL的1—氟丁烷可被用作气体前体。填充10微米直径 的微球体需要5.74×10-15克该前体。根据1—氟丁烷的密 度，形成上限为10微米的微球体需要8.47×10－16mL的 液态前体。

制备上限为10微米的微球体需要半径为0.0272微米 或直径为0.0544微米的气体前体液滴的乳液。通过使用大 小适当的滤器可容易地达到这样的特定大小乳液。另外，由 于可以知道形成规定大小的气体前体液滴所需的滤器的大 小，那么该滤器也可除去可能的细菌污染物，因此，它也能被 用于灭菌过滤。

就产生10μm直径微球体所需的液态前体1—氟丁烷液 滴来说，多层稳定的脂质体层状结构可增加有效的大小为约 0.0544μm到约0.1344μm的微粒或液滴。这样大小的液滴 可容易地通过0.22μm滤器。体内的相转变后，多层形式的 气体前体填充微球体可变为单层或寡层微球体。由于双层涂 希而对最终允气脂质体大小影响最小。可选择类脂双层使类 脂从凝胶态向液晶态的相转变与气体前体的沸点相配。这 样，类脂层将更容易促进微球体膨胀。 实施例39

气体前体，1—氟丁烷，或被截留在脂质体中，当温度升 高时，得到脂质体中截留的氟丁烷气体。气体前体，1—氟丁 烷，可被悬浮于含有乳化剂和稳定剂如甘油或丙二醇的含水 混悬液中并在商品涡旋仪中涡旋。涡旋在保持气体前体为液 态的低温下开始并在可在越过由液态到气态的相转变温度 的温度下继续进行。这样，前体在微乳化过程中转变成气态。 在适当的稳定剂存在下，令人惊奇地得到了稳定的气体微球 体。 实施例40

用六氟化硫，六氟丙烯，溴氯氟甲烷，八氟丙烷，1，1—二 氯氟乙烷，六氟乙烷，六氟—2—丁炔，全氟戊烷，全氟丁烷， 八氟—2—丁烯或六氟丁—1，3—二烯或八氟环戊烯顺序代 替1—氟丁烷进行与实施例39相同的实验，都用于气体前 体填充脂质体的制备。

除这里显示和描述的以外的本发明的各种修进，对于本 领域技术人员来说，由上述是显而易见的。这样的修进也落 入附加的权利要求的范围。

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