含冻干的活乳酸菌的食用组合物

本发明涉及一种含有冻干的活的原生性(probiotic)细菌的食用组合物，涉及所述组合物作为食料添加剂的应用，以及一种由两种容器所组成的套具，其分别含有食料和欲在使用之时加入所述食料中的所述组合物。

我们知道，某些细细菌类被看作是“原生性”的，其中，当在肠道菌丛中以新鲜和存活的形式存在时，它们就对人类有机体发挥有效功能。

例如，某些原生性细菌(如对酸奶具特异性的乳酸菌，即保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus))能刺激免疫系统，产生抗致病性微生物的拮抗效应，改善乳糖消化，表现出脂解活性使脂肪更容易消化，降低胆固醇的原生质值，保护肠黏膜以确保营养物质的吸收，生产对某些肿瘤具活性作用的多糖，并降低某些能催化前致癌物向致癌物转化的产酶微生物的存活能力。

其它一些原生性细菌也可以产生上述某些有益效应和/或以协同方式来产生这些效应并另外产生其它有益效应，  它们是双歧杆菌(Bilfidobacteria)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和屎链球菌(Streptococcus faecium)。

例如，双歧杆菌除了能刺激免疫系统之外，还能降低血液中氨和胆固醇的含量，促进矿物质的吸收并具有对致病细菌和腐败细菌的竞争排斥作用。此外，据认为双歧杆菌还发挥着抗结肠癌的预防作用，其中这些细菌[特别是两歧双歧杆菌属(Bifidobacter ium bifidum)]可以降低这些酶把原致癌物转变为致癌物的活性。嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌也可发挥上述作用。

由于上述某些原生性细菌的作用，B族维生素、叶酸和抗氧化剂的合成则体现着更有益的效应。

上述原生性细菌仅有一些具有肠道菌丛的内生起源。另外，肠道菌丛可以减少，变成非平衡性的或被去除掉，不仅是在受过抗生素处理或其它治疗或患肠道炎症的个体中是这样，而且也见于明显健康的个体中。除此之外，例如我们知道双歧杆菌在肠道中的浓度随年龄而下降，其会引起致病菌和腐败菌浓度的上升。

重要的还有，不仅是不具内生来源的原生性细菌应该引入肠道菌丛中，而且以新鲜和存活形式所存在的不同原生性细菌也应该确保存在于肠道菌丛中，该原生性细菌应具有适宜的浓度并保持不同种类之间的适宜比例，这样它们就可以在彼此间实施协同和平衡的作用，以利于宿主的健康。

人们提出了一些含有原生性细菌的药用组合物，既可以降低肠道菌丛的不平衡，也可以用来预防或治疗某些疾病。不过，正是因为它们是药用组合物的原因，它们仅仅只能偶尔及短时间地加以使用，因而不能解决持久和长期性增加、补充和平衡肠道菌丛的问题。

为了解决上述问题并考虑到近年来部分消费者对食料需求的增长(即除了要具有营养价值，而且还要对健康具有积极作用)，因而本申请人提出了一个新问题。

本申请人尤其提出了使用含有消费者(不管是健康还是患病的)更易于接触和更为常见的新鲜原生性细菌的食料，来达到增加、补充和平衡肠道菌丛的目的，这样做会带来日常生活和预防疾病方面的益处。

本申请人特别提出了将含有不同的新鲜原生性细菌混合物的组合物推向食物市场的问题，其可以新鲜和存活的形式到达肠道，在菌丛中滞留下来并生长，因而对人类健康发挥重要的有益作用。

本申请人所考虑的另一个问题是配制含有原生性细菌混合物的组合物，混合物是考虑到细菌种类及其比例而选择的，以协同方式来发挥其有益的功能。

本发明解决了上述及其它问题，其目的在于一种含有下述组分的食用组合物：(A)一种冻干活细菌的混合物，含有：选自短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和两歧双歧杆菌的至少两种细菌，选自嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌和干酪乳杆菌的至少两种细菌；

(B)一种或多种寡糖；所述组分(A)的含量为4-20重量份，所述组分(B)的含量为5-22重量份。

为制备构成组分(A)的细菌混合物制剂，可以使用上述种类的已知菌株。使用下列菌株可获得特别有益的结果：-短双歧杆菌：LMGP-17501-婴儿双歧杆菌：LMGP-17502-长双歧杆菌：LMGP-17500-两歧双歧杆菌：LMGP-17499-嗜酸乳杆菌：LMGP-17503-嗜热链球菌：LMGP-17225-保加利亚乳杆菌：LMGP-17224-干酪乳杆菌：LMGP-17504-植物乳杆菌：ATCC 8014-屎链球菌：I-1671所标“LMGP-”的菌株保藏于Gent大学的BCCM/LMG保藏所，Ledeganokstraat 36，B-9000 Gent，比利时。

菌株ATCC 8014保藏于美国典型培养物保藏所。菌株I-1671保藏于CNCM-Collection Nationale de Cultures de Microorganismes-InstitutPasteur。

如果使用以CFU/g(CFU为菌落形成单位)所表示的高浓度培养物可得到特别有益的结果，使用下列浓度则更好：-短双歧杆菌：至少50×109CFU/g，更优选为100-150×109CFU/g-婴儿双歧杆菌：至少50×109CFU/g，更优选为10-150×109CFU/g-长双歧杆菌：至少50×109CFU/g，更优选为100-150×109CFU/g-两歧双歧杆菌：至少50×109CFU/g，更优选为100-150×109CFU/g-嗜酸乳杆菌：至少100×109CFU/g，更优选为150-250×109CFU/g-嗜热链球菌：至少50×109CFU/g，更优选为100-150×109CFU/g-保加利亚乳杆菌：至少5×109CFU/g，更优选为10-50×109CFU/g-干酪乳杆菌：至少10×109CFU/g，更优选为30-50×109CFU/g

-植物乳杆菌：至少100×109CFU/g，更优选为150-250×109CFU/g-屎链球菌：至少50×109CFU/g，更优选为100-150×109CFU/g上述浓度的培养物可商购自Centro Sperimentale del Latte S.p.A-Strada per Merlino，3-ZELO BUON PERSICO(Lodi)，意大利。

在本发明的组合物中，构成组分(A)的细菌总浓度优选至少为50×109CFU/g组分(A)，更优选至少为100×109CFU/g。

一种双歧杆菌和另一种双歧杆菌的重量比优选为0.75∶1-1∶1.25，更优选约为1∶1。如果嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌同时存在的话，前者和后者的重量比优选为1∶1-10∶1，更优选为5∶1-8∶1。实际中可计划将通常用于酸奶生产的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌二者的混合物加以使用。

在某些具体实例中，本发明组合物中的组分(A)包括：-选自短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌和两歧双歧杆菌的至少3种细菌，或者-选自嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和屎链球菌中的至少3种细菌，或者-选自短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌和两歧双歧杆菌的至少3种细菌和选自嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和屎链球菌中的至少3种细菌。

在某些实例中，本发明的组合物优选含有婴儿双歧杆菌，因为这样该组合物就具有非常广的作用范围，对成年人和孩子都有益。

优选的组合物为这样的组合物，其中组分(A)的构成为：-选自短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌和两歧双歧杆菌的2或多种细菌，5-23wt％，优选为7-14wt％；-5-24wt％的嗜酸乳杆菌，优选为8-14wt％；-32-70wt％的嗜热链球菌和/或保加利亚乳杆菌，优选为40-62wt％；-选自干酪乳杆菌、植物乳杆菌和屎链球菌中的至少一种细菌，0-40wt％，优选为13-37wt％。

另一种优选的组合物为这样的组合物，其中组分(A)的构成为：-选自短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌和两歧双歧杆菌的2或多种细菌，7-23wt％，优选为10-21wt％；-8-24wt％的嗜酸乳杆菌，优选为10-21wt％；-35-70wt％的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的混合物，优选为45-65wt％。

本发明的组合物将多种不同的原生性细菌结合在一起，并以协同的方式利用了它们的全部特性。例如，我们发现，酸奶的乳酸菌的存在(嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌)对于达到改善其它细菌的生存能力及提高其生长的目的是极为有用的，例如对于双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌。另外，酸奶的乳酸菌可以水解已存在于有机体中并与本发明组合物组分(B)一同引入的寡糖，释放出对于促进双歧杆菌及其它有益菌生长十分有用的糖类。

本发明组合物的组分(B)由一种或多种寡糖组成。

适宜的寡糖诸如：寡果糖、半乳糖-寡糖、乳蔗糖、palatinose-寡糖、糖基-蔗糖、麦芽-寡糖、异麦芽寡糖、环糊精、龙胆-寡糖、大豆寡糖和木寡糖。使用寡果糖可获得特别有利的结果。

尤其适宜的寡糖是菊粉和菊粉寡果糖。所述产物的实例是产自比利时ORAFTI S.A公司的菊粉和菊粉寡果糖，市场名称分别为RaftlineTM和RaftiloseTM。

本发明组合物的组分(B)解决了使组分(A)中不同细菌保持良好存活状态以沿消化道到达结肠的问题，并有助于肠道中这些细菌的选择和滞留(这是其中已存在局部微生物菌丛的环境)。

寡糖不被降解(或仅部分降解)，沿消化道直到结肠不被吸收或代谢，我们发现其构成了特别适宜于组分(A)中原生性细菌存活和发育的一种载体和基质。因此，组分(B)中的寡糖可以被称做“前生性”化合物。

依据本发明，将组分(A)中的原生性细菌同组分(B)中的寡糖结合起来，通过改变不同细菌比例以有利于大多数原生性细菌来促使组合物中肠道菌丛的变更。例如，有许多寡糖可被双歧杆菌优先用作碳源和能源，因此它们可促进双歧杆菌的选择性发育。

对双歧杆菌发育的所述正面影响尤其是由菊粉造成的。此外，双歧杆菌可使菊粉代谢，从而产生出有助于满足人能量需要的挥发性脂肪酸。这些脂肪酸还可以影响脂类代谢(造成胆固醇值的降低)和葡萄糖代谢(引起葡萄糖耐受性提高)。

本发明的组合物优选含有5-12重量份的组分(A)和8-15重量份的组分(B)。

本发明的组合物还可以含有由糖或人造增甜剂所组成的组分(C)。组合物中的任选糖含量优选为2-35重量份，更优选为5-30重量份。人造增甜剂可以是天冬甜素、糖精、双氧噁噻嗪，或者天冬甜素与双氧噁噻嗪的组合。

此外，本发明的组合物还可以含有组分(D)，由天然产物的粉末、颗粒或纤维形式的分散剂所构成。组分(D)的任选含量优选为40-80重量份，更优选为45-75重量份。

组分(D)可用于提高组合物的器官感觉特征和/或增加其营养性，其中它由含维生素和矿物质盐的天然产物构成。例如，组分(D)可由粉末、颗粒或纤维状产物构成，选自谷类、麦芽汁(与可可和蛋任意组合)、人参、巧克力、香草和蔬菜汁、榛子和/或核桃和/或杏仁和/或颗粒状的小杏仁饼。

在选择可能的人造增甜剂(C)和分散剂(D)方面，应注意不包括那些毒性的或对组分(A)中细菌有抑制作用的产物。

本发明的组合物还已计划加入到液体、奶油状或糊状食料中，以达到获得高原生性值的食物。

本发明的组合物可以加入其中的食料为乳奶业的产品(奶、奶类产品、奶衍生物)和基于(或衍生自)植物产物的产品(特别是水果)。

本发明人特别发现，本发明的组合物最好在消费者使用之时直接加入到所述食料中，而并不由生产者在生产食料的过程中或包装时加入。

因此，本发明的另一个目的是本发明的组合物作为液体、奶油状或糊状食料的添加剂的应用，所述食料为牛奶、基于或衍生自牛奶的产物、基于或衍生自植物产物的产物，所述添加过程在使用食料之时加入。

加入到食料中的组合物，其优选比例要达到每100g食料0.1-3.0g的组分(A)，更优选为0.2-1.0g，最优选为0.4-0.7g。经过添加，在最终食料中原生性细菌的总浓度能达到每100g食料600×109CFU。

例如，本发明的组合物可以加入奶类、酸奶(天然类型或补充过水果的)、另一种类型的发酵乳、奶类甜食(如巧克力、咖啡或香草)、奶类饮料或乳清类饮料或富含水果的渗透剂、果汁(如杏、桃、梨、苹果、越橘、热带水果)、番茄汁、胡萝卜汁、茶(天然茶或精制茶)或蔬菜汁类饮料。

本发明的组合物是十分有用的，因为它既可以加入不含原生性细菌的食料中(达到给这些产物原生性值的目的)，也可加入已含某些原生性细菌的食料中(达到提高和/或完善其原生性值的目的)。

尤其有益的是添加在如牛奶、奶类或其衍生产物的食料中。实际上，组分(A)中的某些细菌是乳酸菌，因此它们可以在这些类型的食料中发现其天然环境。此外，在某些诸如酸奶和发酵乳的产物中，组分(A)中的细菌被引入了已含有同类细菌的环境之中。

如上所述，本发明的组合物优选在使用食料之时进行添加。实际上，如果该组合物必须在食料生产期间或其进行包装时添加，本组合物中的许多细菌就不能在食料保藏期间保持着新鲜和存活的形式。这种腐败因所采用的具体细菌种类、食物类型和保藏条件而在不同的程度上发生。另一方面，某些种类的细菌也可以生长并比其他细菌占优势。其结果是，在食料利用之时的原生性细菌总量及其比例就会不同于最初加入食料中的组合物的细菌。换句话说，使用之时的食料就无法保证会含有所需含量及比例的全部原生性细菌。

此外，如果本发明的组合物在食料进入市场之前进行添加，某些细菌就会引起发酵作用，导致酸性的形成或增加。这样，某些食料从器官感受的角度看就无法让人接受。这种情况不仅会在甜食和果汁(它们具有中性pH)中出现，而且也会在过于酸味的酸奶中出现。在使用食料之时用本组合物进行添加，消费者就不会感觉有任何酸味，因为所摄取的细菌一旦在肠道中滞留下来就又获得了存活能力，在那里它们以选择性方式进行生长。

还应该注意的是，双歧杆菌作为本发明的组合物中必不可少的组分，在酸性环境中很难存活下来。因此，由于所述发酵作用所引起的酸性，双歧杆菌的含量在食料保藏期间会大量降低，首先是在那些本身稍带酸性的产物实例中(如酸奶)。

本发明的组合物可以通过在高度卫生条件下进行包装来加以保存，放在任何可使其避免接触空气及湿度和(如可能的)避免直接光照的容器中，温度为普通家用电冰箱的温度(即2-8℃)，保存时间可长达1年。在保存期间，直到使用之时，组合物中新鲜细菌的数量和比例保持不变。

本发明的组合物可独立于其所掺混的食料而进入市场。不过，本发明人设想了一种新型商品，可用来解决促进、提高和传播有益于有机体利益的食料消费的问题以及对某些疾病的防治。这种新型商品也是本发明的另一个目的，其由包括下列物品的套具所构成：-一个含有液体、乳油状或糊状食料的容器X，所述食料为牛奶、奶类产物、奶类衍生物、基于或衍生自植物产物的产物，-一个含有本发明组合物的容器Y，这两个容器都是封闭的，在使用所述食料之时可开启，容器Y用来在使用之时以内含的组合物来补充所述食料。

内含于容器Y中的本发明组合物优选含有每100g容器X内含食料0.1-3.0g的组分(A)(即冻干的新鲜细菌的混合物)，更优选为0.2-1.0g，最优选为0.4-0.7g。

内含于容器X中的食料具体实例同上所述，可参考对本发明组合物的应用。

上述套具必须保存于内含在容器Y中的组合物的保藏温度下，奶类新鲜产物时间为30-40天，耐贮藏食料为4-6个月。一旦购到了所述套具，可保藏于普通家用电冰箱中，可在内含于容器X中食料到期日前的任何时刻进行使用，方法是在欲消费食料之时开启两个容器并加以掺混。

如果碰巧该套具保藏到食料到期日之后，那么使用内含于容器Y中的原生性细菌混合物就要将其在使用之时同任意的液体、奶油状或糊状食料进行掺混，例如甚至同水进行掺混。

如上所述可清楚地看出，使用本发明的组合物和套具是简便易行、方式灵活和非常有益处的，因为它通过使肠道菌丛的功能正常化并加以提高而促进了人类有机体的利益。另外，使用该组合物可促进维生素和蛋白质的合成，推进消化过程，防止致病菌的的集群和生长，刺激免疫反应及有助于胆固醇含量的降低。

下列实施例用来阐述本发明的某些具体实例，但并不限制其范围。

实施例在下列实施例中所使用的细菌菌株和新鲜细菌的各种冻干培养物浓度为：-短双歧杆菌：LMGP-17501；浓度130×109CFU/g-婴儿双歧杆菌：LMGP-17502；浓度130×109CFU/g-长双歧杆菌：LMGP-17500；浓度130×109CFU/g-两歧双歧杆菌：LMGP-17499；浓度400×109CFU/g-嗜酸乳杆菌：LMGP-17503；浓度200×109CFU/g-嗜热链球菌：LMGP-17225；浓度130×109CFU/g-保加利亚乳杆菌：LMGP-17224；浓度30×109CFU/g-干酪乳杆菌：LMGP-17504；浓度40×109CFU/g-植物乳杆菌：ATCC 8014；浓度200×109CFU/g-屎链球菌：I-1671；浓度130×109CFU/g实施例1配制一种混合物(本发明组合物的组分A)，其包括：-比例为1∶1∶1的短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌的混合物，20wt％-20wt％的嗜酸乳杆菌-由比例为5∶1的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的混合物所构成的酸奶培养物，60wt％。

所述组分(A)中的细菌总浓度约为134×109CFU/g。

然后配制一种组合物，其含有40wt％的所述组分A和60wt％的菊粉(组分B)，由比利时ORAFTI S.A.公司生产，市场名称RaftlineTM。

在所述的组合物中，细菌总浓度因组分(A)而约为54×109CFU/g组合物。

其后，配制出30剂量的所述组合物，每剂量重1.5g，将其封闭在密封的容器中，在普通家用电冰箱中保存。在同一电冰箱中还保存着10个包装的125g奶类或奶衍生产物(即3个天然酸奶、4个补充过水果的酸奶、1个巧克力甜食、1个咖啡甜食、1个香草甜食)以及10个包装的不同饮料(即葡萄、橘子、杏、桃、梨、越橘和热带水果汁、一种茶和一种桃茶)。

20天之后，将10个包装的奶类或奶衍生产物以及10个剂量的本发明所述组合物从电冰箱中取出，消费之前立刻在10个包装的每种产物中补充1个剂量的组合物。

经过短时间搅拌后，品尝不同的产物；其味道均非常可口和新鲜，未注意到有味道差别和品尝后的异常现象。经掺混后的产物总体结构立刻就适于使用。

经搅拌之后，每个包装的125g产物中的不同细菌总浓度(未计入可能已存在于产物本身中的细菌)约为每100g产物中64×109CFU。

再经过20天之后，将10个包装的不同饮料以及10个剂量的本发明所述组合物从电冰箱中取出。开启10个包装的饮料，向10个玻璃杯中各倒入150g饮料。使用之前，在每个玻璃杯中的饮料内立刻分别加入1剂量的组合物。经补充之后，饮料中的不同细菌的总浓度约为每100g饮料中53.6×109CFU。

经过短时间搅拌后，品尝各种饮料；其味道均非常可口和新鲜，未注意到有味道差别和品尝后的异常现象。经掺混后的产物总体结构立刻就适于使用。

再经过60天之后，将剩下的10剂量的所述组合物从电冰箱中取出，利用特殊的培养基方法，通过测定每种细菌的总细菌计数来对其含量进行分析：在所有的剂量中，细菌的浓度及其存活能力保持不变。

实施例2配制一种混合物(本发明组合物的组分A)，其包括：-比例为1∶1∶1的短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌的混合物，8.2wt％-10.2wt％的嗜酸乳杆菌-由比例为8∶1的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的混合物所构成的酸奶培养物，55.9wt％-25.7wt％的干酪乳杆菌。

所述组分(A)中的细菌总浓度约为108×109CFU/g。

然后配制一种组合物，其包括：

-6wt％的所述组分A-10wt％的如实施例1中所用的相同菊粉(组分B)-10wt％的糖(组分C)-74wt％的粉末型谷物(组分D)在所述的组合物中，细菌总浓度因组分(A)而约为6.5×109CFU/g组合物。

其后，配制出30剂量的所述组合物，每剂量重10g，将其封闭在密封的容器中，在普通家用电冰箱中保存。同时保存的还有10个包装的奶类或奶衍生产物(与实施例1中同类型)以及10个包装的饮料(与实施例1中同类型)。

下列实验的样式同实施例1。

经搅拌之后，在每个包装的奶类或奶衍生产物和每杯饮料中的各种细菌总浓度(未计入已存在于产物本身中的细菌)分别约为每100g产物中52×109CFU和每100g饮料中43.3×109CFU。

在这个实例中，曾经添加过10g剂量的本发明组合物的各种产物和饮料的特性似乎是最优秀的。考虑到剩下的没有使用并且还留在电冰箱中的其它10个剂量的组合物的性质，结论是同样的。

实施例3利用同样的细菌混合物(组分A)和下列相同的实验样式来重复实施例2。

其区别仅仅在于，在本实例中本发明的组合物含有：-6wt％的实施例2的组分A-10wt％的如实施例1中所用的相同菊粉(组分B)-34wt％的糖(组分C)-50wt％的麦芽汁(组分D)在这个实例中，曾经添加过10g剂量本发明组合物的各种产物和饮料的特性似乎是最优秀的。考虑到剩下的没有使用并且还留在电冰箱中的其它10个剂量组合物的性质，结论是同样的。

实施例4利用下列相同的实验样式来重复实施例3。

其区别仅仅在于，在本实例中细菌混合物(组分A)含有：-比例为1∶1∶1∶1的短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌和两歧双歧杆菌的混合物，8.5wt％-10.2wt％的嗜酸乳杆菌-由比例为7∶1的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌混合物所构成的酸奶培养物，46.0wt％-20.4wt％的干酪乳杆菌-比例为1∶1的植物乳杆菌和屎链球菌的混合物，14.9wt％。

在这个实例中，曾经添加过10g剂量的本发明组合物的各种产物和饮料的特性似乎是最优秀的。考虑到剩下的没有使用并且还留在电冰箱中的其它10个剂量组合物的性质，结论是同样的。

实施例5-8利用相同的实验样式来重复实施例1、2、3和4，其区别仅仅在于，组合物中的组分B由比利时ORAFTI S.A.公司生产的寡果糖所构成，市场名称RaftiloseTM。

在这些实施例中，曾经添加过本发明组合物的各种产物和饮料的特性似乎是最优秀的。考虑到没有使用并且还留在电冰箱中的组合物的性质，结论是同样的。

实施例9-16利用相同的实验样式来重复实施例1-8，其区别仅仅在于，将不同类型的3种奶类包装保存在电冰箱中，10天之后在使用之时于其中加入本发明的组合物。曾经添加过本发明组合物的各种奶类的特性似乎是最优秀的。