一种苹果梨酵素及其制备方法和应用
阅读：584发布：2024-01-14
专利汇可以提供一种苹果梨酵素及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种苹果梨酵素及其制备方法和应用，属于 生物 发酵 技术领域。本发明通过接种 酵母 菌进行二次发酵，通过特定的发酵技术，使制备得到的酵素中酶活 力 在6200～6700U/100g，脂肪酶活性高。同时，本发明制备得到的苹果梨酵素中含有生物反应催化剂，影响着 机体 的各项生理机能，能够发挥抗 氧 化功效，有助于建立肠道菌群的平衡，具有生物体清道夫及抗氧化的功效。，下面是一种苹果梨酵素及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种苹果梨酵素的制备方法，包括如下步骤：
1)将苹果梨破碎打浆，得到苹果梨果浆；
2)调整所述步骤1)的苹果梨果浆的糖度至10～16°，得到调糖果浆；
3)向所述步骤2)的调糖果浆中接种酵母菌，在28～32℃条件下进行一次无氧发酵55～
65d，得到第一发酵物；
4)调整所述步骤3)的第一发酵物的糖度至10～20°，得到调糖发酵物；
5)将所述步骤4)的调糖发酵物在28～32℃条件下进行二次无氧发酵55～65d，得到苹果梨酵素。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，按重量百分比计，所述步骤3)中酵母菌的接种量为0.01％～0.02％。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中得到第一发酵物后还进行过滤，所述过滤用滤网的孔径为120目～350目。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中破碎打浆前加入亚硫酸钠；所述亚硫酸钠与苹果梨的质量比为6～8mg：1Kg。
5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中收集浆液后还进行灭菌；所述灭菌的温度为110～130℃；所述灭菌的时间为15～25min。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中二次无氧发酵结束后还包括将得到的酵素液与糊精和蔗糖混合，干燥，得到苹果梨酵素粉。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述发酵液、糊精和蔗糖的质量比为
80～90:8～12:4～6。
8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述干燥的方式为冷冻干燥；所述冷冻干燥的参数为在-42～-38℃预冻22～26h后，以1～2℃/h的速度梯度升温至9～11℃干燥34～38h，再在28～32℃条件下解吸干燥7～9h。
9.权利要求1～8任意一项方法制备的苹果梨酵素。
10.权利要求9所述苹果梨酵素在抗氧化和/或调节肠道菌群的保健品或食品中的应用。
一种苹果梨酵素及其制备方法和应用
技术领域
背景技术
[0002] 苹果梨是我国北方一大主栽抗寒梨品种,一般认为苹果梨应归属于白梨系统(P.breschneideri Rehd.)或者属于秋子梨(P.ussuriensis Maxim.)与砂梨(P.pyrifoliaNakai.)的自然杂交种。苹果梨果大，果心小，肉多、汁液丰富、果肉白色，质地脆，其水分达85.9％，总酸0.33％，还原糖8.33％，总糖9.69％，含丰富的VC及VB1、VB2等多种维生素和钙、磷、铁等成分，营养丰富，有润肺、消痰、止咳、降火、清心、利尿之功效，还能增进食欲、助消化，对体虚者颇益，有“北方梨之秀”的美誉。苹果梨在我国的栽培地区分布在东北、西北等地，资源非常丰富，果实产量很大，但存在着鲜果储存和外运的困难，有必要对其进行深加工。
[0003] 酵素是应用发酵技术得到的产物，也叫做植物综合活性酶，是“酶”的另一种说法，采用的原材料主要来源于植物、水果、菌菇、海产品等食材，无化学原料掺杂，适合长期食用，是发展前景广阔的保健食品原料，具有很大的开发价值。但是，就目前来讲，全世界对于酵素的认识和应用尚还处于萌芽阶段。酵素种类繁多，市场上的酵素产品良莠不齐。
发明内容
[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种苹果梨酵素及其制备方法和应用，使制备得到的酵素脂肪酶活性高。
[0005] 为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：
[0006] 本发明提供了一种苹果梨酵素的制备方法，包括如下步骤：
[0007] 1)将苹果梨破碎打浆，得到苹果梨果浆；
[0008] 2)调整所述步骤1)的苹果梨果浆的糖度至10～16°，得到调糖果浆；
[0010] 4)调整所述步骤3)的第一发酵物的糖度至10～20°，得到调糖发酵物；
[0011] 5)将所述步骤4)的调糖发酵物在28～32℃条件下进行二次无氧发酵55～65d，得到苹果梨酵素。
[0012] 优选的，按重量百分比计，所述步骤3)中酵母菌的接种量为0.01％～0.02％。
[0013] 优选的，所述步骤3)中得到第一发酵物后还进行过滤，所述过滤用滤网的孔径为120目～350目。
[0016] 优选的，所述步骤5)中二次无氧发酵结束后还包括将得到的酵素液与糊精和蔗糖混合，干燥，得到苹果梨酵素粉。
[0017] 优选的，所述发酵液、糊精和蔗糖的质量比为80～90:8～12:4～6。
[0018] 优选的，所述干燥的方式为冷冻干燥；所述冷冻干燥的参数为在-42～-38℃预冻22～26h后，以1～2℃/h的速度梯度升温至9～11℃干燥34～38h，再在28～32℃条件下解吸干燥7～9h。
[0019] 本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的苹果梨酵素。
[0020] 本发明提供了一种上述方案所述苹果梨酵素在抗氧化和/或调节肠道菌群的保健品或食品中的应用。
[0021] 本发明提供了一种苹果梨酵素的制备方法，通过接种酵母菌进行二次发酵，通过特定的发酵技术，使制备得到的酵素中含有高活性的脂肪酶。脂肪酶能够水解油脂中脂肪酸和甘油相连接的酯键，分解生物体中的脂肪，具有减肥美容的功效。实施例结果表明:采用本发明提供的方法使制备得到的酵素中脂肪酶的酶活力在6200～6700U/100g。
[0022] 同时，本发明制备得到的苹果梨酵素中含有生物反应催化剂，影响着机体的各项生理机能，能够发挥抗氧化功效，有助于建立肠道菌群的平衡，具有生物体清道夫及抗氧化2-
的功效。本发明实施例结果表明：本发明制备得到的苹果梨酵素对DPPH·、·OH、O ·清除率和浓度具有显著量效关系，在总抗过氧化自由基能力方面，ORAC为170～210μmol/g，高于常见蔬菜青花菜。
的功效。本发明实施例结果表明：本发明制备得到的苹果梨酵素对DPPH·、·OH、O ·清除率和浓度具有显著量效关系，在总抗过氧化自由基能力方面，ORAC为170～210μmol/g，高于常见蔬菜青花菜。
[0023] 同时本发明制备得到的苹果梨酵素中还含有维生素C含量、蛋白质、能量及碳水化合物，其中维生素C能够缓解白癜风、降低癌症发病率；蛋白质可以促进生长发育、增强体质及人体免疫能力等功效，同时还提供人体生命活动所需要的能量促进血液循环，呼吸，消化吸收等；碳水化合物作为人体最主要的功能物质的同时还能够发挥抗生酮、解毒和增强肠道功能的作用。
具体实施方式
[0024] 本发明提供了一种苹果梨酵素的制备方法，包括如下步骤：
[0025] 1)将苹果梨破碎打浆，得到苹果梨果浆；
[0026] 2)调整所述步骤1)的苹果梨果浆的糖度至10～16°，得到调糖果浆；
[0027] 3)将所述步骤2)的调糖果浆中接种酵母菌，在28～32℃条件下进行一次无氧发酵55～65d，得到第一发酵物；
[0028] 4)调整所述步骤3)的第一发酵物的糖度至10～20°，得到调糖发酵物；
[0029] 5)将所述步骤4)的调糖发酵物在28～32℃条件下进行二次无氧发酵55～65d，得到苹果梨酵素。
[0030] 本发明将苹果梨破碎打浆，得到苹果梨果浆。本发明中，所述苹果梨优选为成熟、无腐烂、无霉变、无病虫害的新鲜的苹果梨。本发明对所述苹果梨的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。本发明实施例中优选采用吉林省延边朝鲜族自治州地区采摘的苹果梨。本发明中，在破碎打浆前优选对苹果梨进行清洗、去皮、去核。本发明对所述清洗、去皮和去核的方式没有特殊的限定，采用本领域常规技术手段即可。本发明中，在所述破碎打浆前优选加入亚硫酸钠，以防止苹果梨褐变。本发明中，所述亚硫酸钠与苹果梨的质量比优选为6～8mg：1Kg，更优选为7mg：1Kg。本发明对所述亚硫酸钠的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中采用的亚硫酸钠购买自天津市科密欧化学试剂有限公司。本发明中，所述破碎打浆优选为采用打浆机进行。所述打浆时的转速优选为19000～21000r/min，更优选为，更优选为20000r/min。打浆后，本发明优选将果浆进行过滤，以便于去除果渣。所述过滤用滤网的孔径优选为120～350目，更优选为300目。得到苹果梨果浆后，本发明优选将所述苹果梨果浆进行灭菌，得到灭菌苹果梨果浆。所述灭菌时的温度优选为
110～130℃，更优选为120℃。所述灭菌的时间优选为15～25min，更优选为20min。
110～130℃，更优选为120℃。所述灭菌的时间优选为15～25min，更优选为20min。
[0031] 得到灭菌苹果梨果浆后，本发明调整所述灭菌苹果梨果浆的糖度至10～16°，得到调糖果浆。本发明中，优选待灭菌苹果梨果浆冷却至室温后再进行调糖。本发明对所述冷却的方式没有特殊限定。本发明中，所述调整果浆糖度的方式为添加蔗糖。本发明对所述蔗糖的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中所述蔗糖购买自广州福正东海食品有限公司：舒可曼牌白砂糖。本发明中，所述检测糖度的方式优选为采用糖度计进行测量。本发明中，调糖果浆的糖度优选为12～14°，更优选为13°。本发明调整苹果梨果浆糖度至10～16°有利于酵母菌细胞有氧呼吸进而大量繁殖(C6H12O6+O2→CO2+H2O+能量)，再进行无氧呼吸开始发酵(C6H12O6→C2H5OH+CO2+能量)。
[0032] 得到调糖果浆后，本发明将所述调糖果浆中接种酵母菌，在28～32℃条件下进行一次无氧发酵55～65d，得到第一发酵物。本发明中，按重量百分比计，所述接种的接种量优选为0.01％～0.02％，更优选为0.015％。本发明中，所述酵母菌在接种前优选进行活化。所述活化的方式优选为35℃温水下溶解，搅拌活化5分钟。本发明对所述酵母菌的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中购买自安琪酵母股份有限公司。本发明中，所述一次无氧发酵的温度优选为30℃。所述一次无氧发酵的时间优选为60d。本发明中，所述一次无氧发酵优选在顶部设置有单向通气阀的恒温发酵罐中进行，发酵前将发酵罐中的空气排尽，发酵液面控制在发酵罐最高液面50％以下。
[0033] 得到第一发酵物后，本发明调整所述第一发酵物的糖度至10～20°，得到调糖发酵物。本发明中，在调整第一发酵物的糖度前优选进行过滤，以便去除果肉残渣。所述过滤用筛网的孔径优选为250～350目，更优选为300目。本发明中，所述调糖发酵物的糖度优选为14～16°，更优选为15°。本发明调整第一发酵物中糖的质量浓度为10～20°有利于酵母菌细胞有氧呼吸进而大量繁殖(C6H12O6+O2→CO2+H2O+能量)，再进行无氧呼吸开始发酵(C6H12O6→C2H5OH+CO2+能量)。
[0034] 得到调糖发酵物后，本发明将所述调糖发酵物在28～32℃下条件下进行二次无氧发酵55～65d，得到苹果梨酵素。本发明中，所述二次无氧发酵的温度优选为30℃。所述二次无氧发酵的时间优选为60d。
[0035] 得到苹果梨酵素后，本发明优选将苹果梨酵素与糊精和蔗糖混合，干燥，得到酵素粉。本发明中，所述酵素、糊精和蔗糖的质量比优选为80～90:8～12:4～6，更优选17:2:1。本发明对所述糊精的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中采用的糊精购买自沈阳市华东试剂厂。本发明中，所述干燥的方式优选为冷冻干燥。所述冷冻干燥的参数为在-42～-38℃预冻22～26h后，以1～2℃/h的速度梯度升温至9～11℃干燥
34～38h，再在28～32℃条件下解吸干燥7～9h；更优选为在-40℃预冻24h后，再以1.5℃/h的速度梯度升温至10℃干燥36h，再在30℃条件下解吸干燥8h。
34～38h，再在28～32℃条件下解吸干燥7～9h；更优选为在-40℃预冻24h后，再以1.5℃/h的速度梯度升温至10℃干燥36h，再在30℃条件下解吸干燥8h。
[0036] 本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的苹果梨酵素。所述苹果梨酵素中含有脂肪酶、维生素C、蛋白质、碳水化合物和能量。所述脂肪酶的酶活力在6200～6700U/100g。
[0037] 本发明提供了一种上述方案所述苹果梨酵素在抗氧化和/或调节肠道菌群的保健品或食品中的应用。所述苹果梨酵素在抗氧化和/或调节肠道菌群的保健品中的添加量优选为3.5％～4.5％，更优选为4％。所述苹果梨酵素在抗氧化和/或调节肠道菌群的食品中的添加量优选为3％～5％，更优选为4％。
[0038] 为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0039] 实施例1
[0040] 称取苹果梨1000Kg，采用流水清洗后进行去皮、去核，将得到的去除果皮和果核的苹果梨中添加6g亚硫酸钠，以21000r/min的转速打浆2min后采用350目筛过滤，得到苹果梨果浆。将得到的苹果梨果浆在130℃下灭菌15min，得到灭菌苹果梨果浆。将得到的灭菌苹果梨果浆自然冷却至室温后加入蔗糖，调整苹果梨果浆中糖的质量浓度至16％，将调糖果浆转入顶部具有单向通气阀的发酵罐中(发酵罐中液面不超过最高液面50％)，按0.01％的接种量接种活化后的酵母菌，排尽发酵罐中空气，在32℃下密封发酵55d，得到第一发酵物。调整第一发酵物的糖度至20％后，在28℃下继续密封发酵65d，得到苹果梨酵素液，过350目筛后与糊精和蔗糖混合(酵素液、糊精和蔗糖的质量比为80:12:4)，得到酵素湿料。将得到的酵素湿料在-42℃预冻22h后，梯度升温至10℃干燥38h，再28℃解吸干燥9h，得到苹果梨酵素。
[0041] 实施例2
[0042] 称取苹果梨1000Kg，采用流水清洗后进行去皮、去核，将得到的去除果皮和果核的苹果梨中添加8g亚硫酸钠，以19000r/min的转速打浆5min后采用250目筛过滤，得到苹果梨果浆。将得到的苹果梨果浆在110℃下灭菌25min，得到灭菌苹果梨果浆。将得到的灭菌苹果梨果浆自然冷却至室温后加入蔗糖，调整苹果梨果浆中糖的质量浓度至10％，将调糖果浆转入顶部具有单向通气阀的发酵罐中(发酵罐中液面不超过最高液面50％)，按0.02％的接种量接种活化后的酵母菌，排尽发酵罐中空气，在28℃下密封发酵65d，得到第一发酵物。调整第一发酵物的糖度至10％后，在32℃下继续密封发酵55d，得到苹果梨酵素液，过300目筛后与糊精和蔗糖混合(酵素液、糊精和蔗糖的质量比为90:8:6)，得到酵素湿料。将得到的酵素湿料在-38℃预冻26h后，梯度升温至10℃干燥34h，再32℃解吸干燥7h，得到苹果梨酵素。
[0043] 实施例3
[0044] 称取苹果梨1000Kg，采用流水清洗后进行去皮、去核，将得到的去除果皮和果核的苹果梨中添加7g亚硫酸钠，以20000r/min的转速打浆3min后采用300目筛过滤，得到苹果梨果浆。将得到的苹果梨果浆在120℃下灭菌20min，得到灭菌苹果梨果浆。将得到的灭菌苹果梨果浆自然冷却至室温后加入蔗糖，调整苹果梨果浆中糖的质量浓度至13％，将调糖果浆转入顶部具有单向通气阀的发酵罐中(发酵罐中液面不超过最高液面50％)，按0.015％的接种量接种活化后的酵母菌，排尽发酵罐中空气，在30℃下密封发60d，得到第一发酵物。调整第一发酵物的糖度至15％后，在30℃下继续密封发酵60d，得到苹果梨酵素液，过300目筛后与糊精和蔗糖混合(酵素液、糊精和蔗糖的质量比为17:2:1)，得到酵素湿料。将得到的酵素湿料在-40℃预冻24h后，梯度升温至10℃干燥36h，再30℃解吸干燥8h，得到苹果梨酵素。
[0045] 实施例4
[0046] 分别对实施例1～3制备得到的苹果梨酵素进行脂肪酶酶活力、维生素C、蛋白质、碳水化合物和能量。具体操作方法如下：
[0047] 1采用动态滴定法测定脂肪酶的酶活力
[0048] 待测样品液的制备
[0050] 脂肪酶的酶活力测定
[0051] 参照《脂肪酶制剂》(GB/T 23535-2009)规定测定法中“电位滴定法(第一法)”进行测定和计算。
[0052] 采用上述方法分别检测实施例1～3制备得到的苹果梨酵素粉中脂肪酶的酶活力，具体结果如表1所示。
[0053] 表1不同苹果梨酵素中脂肪酶的酶活力
[0054] 实施例1 实施例2 实施例3
酶活力(U/100g) 6500 6200 6700
酶活力(U/100g) 6500 6200 6700
[0055] 由表1可以看出，本发明制备得到的苹果梨酵素中脂肪酶的酶活力在6200～6700U/100g。结果表明：本发明制备得到的苹果梨酵素中脂肪酶含量较多，酶活力较高，苹果梨酵素的制备方法准确可行。
[0056] 2采用滴定法测定维生素C的含量
[0057] 溶液的配制
[0059] 淀粉指示液：1g可溶性淀粉与5ml水成糊状，搅拌下入100ml水，煮沸后冷却。
[0060] 维生素C的测定
[0061] 精密称定苹果梨酵素粉0.5g，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.05mol/l)滴定，至溶液显蓝色并于30s不变(每1ml碘滴定液相当于8.806mg的维生素C)。
[0062] 采用上述方法分别检测实施例1～3制备得到的苹果梨酵素粉中维生素C的含量，具体结果如表2所示。
[0063] 表2不同苹果梨酵素中维生素C的含量
[0064] 实施例1 实施例2 实施例3
维生素C(mg/g) 17.612 16.731 18.492
维生素C(mg/g) 17.612 16.731 18.492
[0065] 由表2可以看出，本发明制备得到的苹果梨酵素中维生素C含量在16.731～18.492mg/g。结果表明：本发明制备得到的苹果梨酵素中含有一定量的维生素C。
[0066] 3分别取不同实施例制备的酵素样品12.0g，采用食品热量成分检测仪测定苹果梨酵素粉中蛋白质、能量及碳水化合物的含量，同时测定苹果梨酵素粉中辅料的成分含量，其检测结果差值即为有效成分含量。
[0067] 采用上述方法分别检测实施例1～3制备得到的苹果梨酵素粉中蛋白质、能量和碳水化合物的含量，具体结果如表3所示。
[0068] 表3不同苹果梨酵素样品每100g中蛋白质、能量和碳水化合物的含量
[0069] 温度(℃) 能量(kcal) 蛋白质(g) 碳水化合物(g)
实施例1 42.6 27 0.9 3.5
实施例2 42.3 21 0.6 3.6
实施例3 42.6 24 0.7 3.4
糊精 44.2 3 0.2 0
实施例1 42.6 27 0.9 3.5
实施例2 42.3 21 0.6 3.6
实施例3 42.6 24 0.7 3.4
糊精 44.2 3 0.2 0
[0070] 由表3可以看出，本发明制备得到的苹果梨酵素中蛋白会含量每100g在0.6～0.9g；能量含量每100g为21～27kcal；碳水化合物含量每100g在3.4～3.6g。结果表明：本发明制备得到的苹果梨酵素中含有营养物质蛋白质、能量、碳水化合物。
[0071] 实施例5
[0072] 本发明苹果梨酵素粉抗氧化作用研究
[0073] 通过对不同自由基[2,2′-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS+·)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)]清除能力的测定，以及铁离子还原/抗氧化能力(ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)和氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)的测定，评价苹果梨酵素粉体外抗氧化活性。
[0074] 1.ABTS+·清除率测定分别配制ABTS储备液(7.4mmol/L)、K2S2O8储备液(2.6mmol/L)、Trolox标准液(0.3mmol/L)，以及不同浓度的苹果梨酵素粉水溶液。取上述ABTS储备液0.2mL与K2S2O8储备液0.2mL混匀，于室温黑暗处存放12h，稀释40倍即为ABTS工作液，使其在734nm处的吸光度为0.7±0.02。取ABTS工作液0.8mL和样品0.2mL，混匀，振荡10s，静置
6min。以蒸馏水作为空白对照，以Trllox标准液作为阳性对照。ABTS+·清除率计算公式如下：
6min。以蒸馏水作为空白对照，以Trllox标准液作为阳性对照。ABTS+·清除率计算公式如下：
[0075] ABTS+·清除率＝[A734nm(0)-A734nm]/A734nm(0)×100％。式中：A734nm(0)为空白对照在734nm处的吸光度。
[0076] 根据上述测定方法分别检测实施例1～3制备得到的苹果梨酵素的ABTS+·清除率，测定结果显示，当苹果梨酵素粉水溶液浓度≥1.5mg/mL时，其ABTS+·清除率均高于80％。
[0077] 2.DPPH自由基清除率测定取1mL DPPH乙醇溶液(0.05mg/mL)，在519nm处测吸光度。取2mL上述DPPH溶液加入试管中，加入1mL不同浓度的样品液，混合，静置30min，测A519nm。以蒸馏水作为空白对照，以Trolox标准液作为阳性对照。DPPH自由基清除率计算公式如下：
[0078] DPPH自由基清除率＝[A519nm(0)-A519nm]/A519nm(0)×100％。式中：A519nm(0)为空白对照在519nm处的吸光度。
[0079] 根据上述测定方法分别测定实施例1～3制备得到的苹果梨酵素的DPPH自由基清除率，测定结果表明，当苹果梨酵素粉水溶液浓度达到1.1mg/mL时，DPPH自由基清除率达到最大值，实施例1～3的苹果梨酵素粉水溶液的EC50分别依次为3.7mg/mL、3.5mg/mL和3.6mg/mL。
[0080] 3.·OH清除率测定取9mmol/L FeSO4溶液、9mmol/L水杨酸溶液各1mL，加入不同浓度的样品溶液1mL与适量蒸馏水，最后加入1mL8.8mmol/LH2O2溶液后摇匀，37℃水浴加热15min，测其A593nm。空白对照溶液为纯水，参比溶液为不加双氧水的溶液。·OH清除率计算公式如下：
[0081] ·OH清除率＝{A593nm(0)-[A593nm(x)-A593nm(x0)]}/A593nm(0)×100％。
[0082] 式中：A593nm(0)为空白对照在593nm处的吸光度；A593nm(x0)为空白参比溶液在593nm处的吸光度；A593nm(x)为样品参比溶液在593nm处的吸光度。
[0083] 根据上述测定方法分别测定实施例1～3制备得到的苹果梨酵素对·OH清除率，测定结果表明，苹果梨酵素粉对·OH清除率具有浓度相关性，清除率随着浓度增大而增加，实施例1～3的苹果梨酵素粉水溶液的EC50分别依次为15.1mg/mL、15.0mg/mL和15.2mg/mL。
[0084] 4.O2-·清除率测定取适当体积(xμL)样品溶液加入到石英比色皿中，再加(2950-x)μLTris-HCL缓冲液(pH值7.4，浓度为0.05mol/L，含1mmol/LNa2EDTA)，再加50μL连苯三酚溶液(60mmol/L)，迅速涡旋混匀，开始计时，每隔30s读数1次(A325nm)，至300s时为止。空白2-
对照为Tris-HCL缓冲液。O ·清除率计算公式如下：
对照为Tris-HCL缓冲液。O ·清除率计算公式如下：
[0085] O2-·清除率＝[ΔA325nm(0)-ΔA325nm(sample)]/ΔA325nm(0)×100％。式中：ΔA325nm(0)为空白对照时在300s与0s时于325nm处吸光度的差值；ΔA325nm(sample)为样品在300s与0s时于325nm处吸光度的差值。
[0086] 根据上述测定方法分别测定实施例1～3制备得到的苹果梨酵素对O2-·清除率，测定结果表明，苹果梨酵素粉对O2-·清除率具有浓度相关性，清除率随着浓度增大而增加，实施例1～3的苹果梨酵素粉水溶液的EC50分别依次为1.5mg/mL、1.4mg/mL和1.6mg/mL。
[0087] 5.FRAP测定取0.3mL样品，加2.7mL预热至37℃的FRAP工作液，摇匀后放置10min，于593nm处测其吸光度，以蒸馏水为空白对照。根据所得A593nm，在标准曲线上求得相应FeSO4浓度，定义为FRAP值(单位μmol/g，以Trolox计)，其值越大，抗氧化活性越强。以Trolox作为阳性对照。
[0088] 根据上述测定方法分别测定实施例1～3制备得到的苹果梨酵素的FRAP，测定结果表明，实施例1～3的苹果梨酵素粉的FRAP分别依次为150μmol/g、152μmol/g和155μmol/g。
[0089] 6.ORAC测定取荧光素钠溶液(80nmol/L)100μL于96孔荧光板中，加入不同浓度样品溶液50μL振荡5min，37℃温育10min后迅速加入AAPH液(153mmol/L)50μL启动反应，每隔2min测定1次荧光值(记为Fn，激发波长485nm，发射波长535nm)。以Trolox作为阳性对照，计算ORAC值。
[0090] 根据上述测定方法分别测定实施例1～3制备得到的苹果梨酵素的ORAC，测定结果表明，实施例1～3的苹果梨酵素粉的ORAC分别依次为190μmol/g、192μmol/g和191μmol/g，高于常见蔬菜青花菜(总ORAC为168μmol/g)。
[0091] 上述研究结果表明，苹果梨酵素粉具有一定的体外抗氧化性，对DPPH·、·OH、2-
O ·清除率和浓度具有显著量效关系，在总抗过氧化自由基能力方面，ORAC为190～192μmol/g，高于常见蔬菜青花菜。
O ·清除率和浓度具有显著量效关系，在总抗过氧化自由基能力方面，ORAC为190～192μmol/g，高于常见蔬菜青花菜。
[0092] 实施例6
[0093] 苹果梨酵素粉调节肠道菌群功能评价
[0094] 根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)“调节肠道菌群功能检验方法”中规定的实验方法对本发明实施例3中的苹果梨酵素粉进行功能评价实验。
[0095] 1.实验动物
[0096] 选取体重范围在18～22g的雄性昆明小鼠40只，由延边大学实验动物中心提供。
[0097] 2.剂量分组及受试样品给予时间
[0098] 将小鼠随机分为4组，以人体推荐量的5倍、10倍、20倍为低、中、高剂量组，另设一个阴性对照组。受试样品给予时间14d。
[0099] 3.实验方法
[0100] 实验开始第1天给予受试样品前，无菌采取小鼠粪便0.1g，10倍系列稀释，分别接种在各培养基上。培养后，以菌落形态、革兰氏染色镜检、生化反应等鉴定计数菌落，计算出每g湿便中的菌数，取对数后进行统计处理。最后一次给予受试样品之后24h与实验前同样方式取直肠粪便，检测肠道菌群，方法同上。所用培养基、培养条件、稀释梯度及鉴定方法等见表4，培养后进行菌落计数，结果以每g粪便中菌落数的对数值表示。
[0101] 5.实验结果及判定
[0102] 计算活菌数(CFU)/g标本，选择菌落中适宜的稀释度，算出同一稀释度平均菌落数(X)，按公式CFU/g标本＝X×47×稀释倍数计算活菌数，然后将计算结果取对数。(X＝3滴适宜总数/3，47表示1mL可以滴47滴。)若表示为对数形式，将计算结果取对数。计数时选取平板菌落数在30～300个菌落数为宜，具体结果见表5。
[0103] 表4肠道菌群计数用培养基、培养条件及鉴定方法
[0104]
[0105] 表5实验前后各组小鼠肠道中的5种细菌数量(x±σ，n＝10)
[0106]
[0107]
[0108] 注:与对照组比较，#P＜0.05；与实验前比较，*P＜0.05
[0109] 由表5可以看出，实验前后自身及组间双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌的变化情况，结果表明中、高剂量组粪便中双歧杆菌和乳杆菌显著增加，产气荚膜梭菌不增加，肠杆菌、肠球菌无明显变化。因此，可以判定本受试样品苹果梨酵素粉动物实验结果阳性，表明本发明制备得到的苹果梨酵素能够改善胃肠道菌群。
[0110] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种提高酿酒酵母丁醇耐受能力的方法 | 2020-05-08 | 169 |
| 一种天然玫瑰酵素的生产方法 | 2020-05-08 | 616 |
| 啤酒制造装置及利用其的啤酒制造方法 | 2020-05-08 | 413 |
| 一种可生物降解吸油材料的制备 | 2020-05-08 | 284 |
| 一种具有缓解酒精性肝损伤功能的夹心饼干及其制备方法 | 2020-05-08 | 548 |
| 一种酵母发酵桶 | 2020-05-08 | 391 |
| 光酥饼生产线的冷冻面团二次发酵设备 | 2020-05-08 | 851 |
| 一种酵母液运输装置 | 2020-05-08 | 980 |
| 発酵コーヒーエキスの製造方法 | 2020-05-11 | 736 |
| LPS高含有組成物の製造方法 | 2020-05-11 | 29 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈