胆酸衍生物及其制备方法和用途
阅读：896发布：2024-02-25
专利汇可以提供胆酸衍生物及其制备方法和用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种胆酸衍 生物 及其制备方法和用途。本发明的胆酸衍生物结构如式I所示，其中，各取代基的定义如 说明书 和 权利要求 书中所述。本发明的胆酸衍生物具有FXR激动活性高、合成简单、原料易得等优点。，下面是胆酸衍生物及其制备方法和用途专利的具体信息内容。
1.一种式I化合物或其药学上可接受的盐：
式中，A环为5-10元芳环或5-10元杂芳环；
n为1、2、3或4；
m为0、1或2；
各个R1相同或不同，且各自独立地为氢、羟基、巯基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、-COOR’或-SO3R’；
R2和R3相同或不同，且各自独立地为H、-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；
各R’独立为氢或C1-C6烷基；
为单键或者双键；
X为CH2、NH、O、S或CH。
2.如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，A环为苯环、奈环、吡啶环、嘧啶环、吡咯环、噻吩环、呋喃环、吡唑环、吡嗪、或吡喃环。
3.如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式I化合物具有以下一个或多个特征：
(1)各个R1各自独立地为氢、氢、氟、氯、羟基、巯基、氰基、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基、异丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-SO3H或-SO3CH3；
(2)R2和R3相同或不同，且各自独立地为H或-COR’；
(3)各R’独立为氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基或异丁基。
4.如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式I所示化合物或其药学上可接受的盐选自下组：
5.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1-4任一项所述的式I化合物或其药学上可接受的盐；和
药学上可接受的载体。
6.如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含以下步骤：
其中
a)以奥贝胆酸(OCA)为起始原料，羟基酯化后得到通式2所示的化合物；
b)通式2所示的化合物在醋酸碘苯或者醋酸钯条件下脱羧生成通式3所示的化合物；
c)通式3所示的化合物经氧化获得通式4所示的化合物；
d)通式4所示的化合物与胺 发生还原胺化反应生成通式5所示的式I化合
物，
任选地，e)通式5所示的式I化合物为通式6所示的式I化合物；
其中，n、m、R1和A环的定义与权利要求1中的定义相同；
R2和R3相同或不同，且各自独立地为-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；
各R’独立为氢或C1-C6烷基。
7.如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含以下步骤：
f)通式4所示的化合物经还原获得通式7所示的化合物；
g)通式7所示的化合物在碱的作用下和甲烷磺酰氯生成通式8所示的化合物；
h)通式8所示的化合物在碱的作用下取代苯酚或者羟基化合物 反应生成通
式9所示的式I化合物；
任选地，i)通式9所示的式I化合物水解为通式10所示的式I化合物；
其中，n、m、R1和A环的定义与权利要求1中的定义相同；
R2和R3相同或不同，且各自独立地为-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；
各R’独立为氢或C1-C6烷基。
8.如权利要求1所述的式I所示化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含以下步骤：
j)通式4所示的化合物与磷叶立德试剂 反应生成通式11所示的式I化合物；
任选地，k)通式11所示的式I化合物经还原获得通式12所示的式I化合物；
任选地，l)通式12所示的式I化合物水解为通式13所示的式I化合物，
其中，n、m、R1和A环的定义与权利要求1中的定义相同；R2和R3相同或不同，且各自独立地为-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；各R’独立为氢或C1-C6烷基。
9.如权利要求1所述的式I所示化合物或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，(1)用于制备FXR激动剂；
(2)用于制备预防和/或治疗FXR相关疾病的药物；和或
(3)用于制备预防和/或治疗胆汁酸代谢、糖代谢、脂代谢、炎症、肝脏纤维化过程相关疾病的药物。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述FXR相关疾病选自：非酒精性脂肪肝(NASH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、胆结石、非酒精性肝硬化、胆汁淤积性肝病、高血脂症、高胆固醇血症、糖尿病。
胆酸衍生物及其制备方法和用途
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，涉及一类作为FXR激动剂的胆酸衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
[0002] 法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)是核受体超家族的一员。主要在肝脏和小肠中高表达。在体内被鹅去氧胆酸，胆汁酸等FXR天然配体激活后，可移至细胞核，与视黄醛X受体(retinoid X receptor,RXR)结合形成异源二聚体，在多种共激活因子的共同作用下与DNA上的FXR反应元件结合，调节靶基因的表达。FXR广泛地参与到胆汁酸、糖、脂代谢、炎症、肝脏纤维化等过程的调控。FXR被激动后可间接抑制CYP7A1的基因表达，从而抑制胆酸合成，以治疗原发性胆汁性肝硬化、抑制肝脏纤维化进程、非酒精性脂肪肝、糖尿病、高血脂症等。
[0003] 随着社会发展，代谢类疾病发病率越来越高，糖脂代谢导致的众多疾病成为危害健康的高发病。目前FXR激动剂作为新药上市数量较少，最近OCA作为FXR激动剂已被FDA批准上市治疗原发性胆汁性肝硬化，同时非酒精性脂肪肝的适应症也在进行临床研究。但是临床中接受OCA治疗患者会出现血清胆固醇升高、胰岛素抵抗等不良症状。
[0004] 本领域尚需对FXR激动剂进行进一步研究。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于提供一种胆酸衍生物及其药学上可接受的盐及其制备方法和用途。
[0006] 本发明的第一方面，提供一种式I化合物或其药学上可接受的盐：
[0007]
[0008] 式中，A环为5-10元芳环或5-10元杂芳环；
[0009] n为1、2、3或4；
[0010] m为0、1或2；
[0011] 各个R1相同或不同，且各自独立地为氢、羟基、巯基、氰基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、-COOR’或-SO3R’；
[0012] R2和R3相同或不同，且各自独立地为H、-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；
[0013] 各R’独立为氢或C1-C6烷基；
[0014] 为单键或者双键；
[0015] X为CH2、NH、O、S或CH。
[0016] 在另一优选例中，所述药学上可接受的盐是指与磷酸、硫酸、盐酸等无机酸，或醋酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸等有机酸，或天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成的盐，或与无机碱形成的盐，如钠、钾、钙、铝盐和铵盐。
[0017] 在另一优选例中，A环为苯环、奈环、吡啶环、嘧啶环、吡咯环、噻吩环、呋喃环、吡唑环、吡嗪、或吡喃环。
[0018] 在另一优选例中，所述式I化合物具有以下一个或多个特征：
[0019] (1)各个R1各自独立地为氢、氢、氟、氯、羟基、巯基、氰基、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基、异丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-SO3H或-SO3CH3；
[0020] (2)R2和R3相同或不同，且各自独立地为H或-COR’；
[0021] (3)各R’独立为氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基或异丁基。
[0022] 在另一优选例中，所述式I所示化合物或其药学上可接受的盐选自下组：
[0023]
[0024] 本发明的第二方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐；和
[0025] 药学上可接受的载体。
[0026] 本发明的第三方面，提供第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：
[0027]
[0028] 其中
[0029] a)以奥贝胆酸(OCA)为起始原料，羟基酯化后得到通式2所示的化合物；
[0030] b)通式2所示的化合物在醋酸碘苯或者醋酸钯条件下脱羧生成通式3所示的化合物；
[0031] c)通式3所示的化合物经氧化获得通式4所示的化合物；
[0032] d)通式4所示的化合物与胺 发生还原胺化反应生成通式5所示的式I化合物，
[0033] 任选地，e)通式5所示的式I化合物为通式6所示的式I化合物；
[0035] R2和R3相同或不同，且各自独立地为-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；
[0036] 各R’独立为氢或C1-C6烷基。
[0037] 本发明的第四方面，提供第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：
[0038]
[0039] f)通式4所示的化合物经还原获得通式7所示的化合物；
[0040] g)通式7所示的化合物在碱的作用下和甲烷磺酰氯生成通式8所示的化合物；
[0041] h)通式8所示的化合物在碱的作用下取代苯酚或者羟基化合物 反应生成通式9所示的式I化合物；
[0043] 其中，n、m、R1和A环的定义与权利要求1中的定义相同；
[0044] R2和R3相同或不同，且各自独立地为-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；
[0045] 各R’独立为氢或C1-C6烷基。
[0046] 本发明的第五方面，提供第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：
[0047]
[0049] 任选地，k)通式11所示的式I化合物经还原获得通式12所示的式I化合物；
[0050] 任选地，l)通式12所示的式I化合物水解为通式13所示的式I化合物，
[0051] 其中，n、m、R1和A环的定义与权利要求1中的定义相同；R2和R3相同或不同，且各自独立地为-COR’、C1-C6烷基、-COOR’；各R’独立为氢或C1-C6烷基。
[0052] 本发明的第六方面，提供第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的用途，(1)用于制备FXR激动剂；
[0053] (2)用于制备预防和/或治疗FXR相关疾病的药物；和或
[0054] (3)用于制备预防和/或治疗胆汁酸代谢、糖代谢、脂代谢、炎症、肝脏纤维化过程相关疾病的药物。
[0055] 在另一优选例中，所述FXR相关疾病选自：非酒精性脂肪肝(NASH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、胆结石、非酒精性肝硬化、胆汁淤积性肝病、高血脂症、高胆固醇血症、糖尿病。
[0056] 本发明的第七方面，提供一种预防和/或治疗FXR相关疾病的方法，包括向有此需要的对象施用第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
[0057] 本发明的胆酸衍生物，作为FXR激动剂，在分子水平和细胞水平对FXR均有较好的激动能力，能够预防和/或治疗FXR相关疾病，能够治疗原发性胆汁性肝硬化、抑制肝脏纤维化进程、非酒精性脂肪肝、糖尿病、高血脂症等代谢性疾病。
[0058] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
[0060] 术语
[0061] “C1-C6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链的饱和脂族烃基。包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
[0062] “C1-C6卤代烷基”是指C1-C6烷基被1、2、3、4或5个卤素原子(优选氟原子)取代，优选卤代的C1-3烷基。例如一氯乙基、二氯甲基、1，2－二氯乙基、一溴乙基、一氟乙基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基等。
[0063] “C1-C6烷氧基”指(C1-C6烷基)-O-。例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
[0064] “5-10元芳基”与“5-10元芳环”可互换使用，是指具有6-10个碳原子的芳香烃基，例如苯基、萘基等。
[0065] “卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0066] “5-10元杂芳环”与“5-10元杂芳基”可互换使用，是指具有5到10个环原子，优选5、6或8个环原子；环阵列中共享6、10或14个π电子；且除碳原子外还具有1到5个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫。
[0067] 所述“药学上可接受的盐”包括药学可接受的酸加成盐和药学可接受的碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其他副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和水杨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。“药学可接受的碱加成盐”，包括但不限于无机碱的盐如钠盐，钾盐，钙盐和镁盐等。包括但不限于有机碱的盐，比如铵盐，三乙胺盐，赖氨酸盐，精氨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
[0068] 制备方法
[0069] 本发明的胆汁酸衍生物或其药学上可接受的盐，能够通过如下三个反应流程制备。
[0070]
[0071] 反应流程式1
[0072]
[0073] 反应流程式2
[0074]
[0075] 反应流程式3
[0076] a)以奥贝胆酸(OCA)为起始原料，在强酸催化下，在甲酸或者乙酸溶液中反应羟基酯化后得到通式2所示的化合物；
[0077] b)通式2所示的化合物在醋酸碘苯或者醋酸钯条件下脱羧生成通式3所示的烯烃化合物；
[0078] c)然后将通式3所示的化合物在臭氧的作用下氧化为通式4所示的醛化合物；
[0079] d)通式4所示的化合物与胺 在还原剂还原下发生还原胺化反应生成通式5所示的化合物，
[0080] e)通式5所示的化合物在碱的作用下水解为通式6所示的化合物；
[0081] f)通式4所示的化合物在还原剂的作用下还原为通式7所示的羟基化合物；
[0082] g)通式7所示的化合物在碱的作用下和甲烷磺酰氯生成通式8所示的化合物；
[0083] h)通式8所示的化合物在碱的作用下取代苯酚或者羟基化合物 反应生成通式9所示的化合物；
[0084] i)通式9所示的化合物在碱的作用下水解为通式10所示的化合物；
[0085] j)通式4所示的化合物在碱的作用下与磷叶立德试剂 反应生成通式11所示的化合物；
[0086] k)通式11所示的化合物在钯碳或者镍的氢化作用下还原为通式12所示的化合物；
[0087] l)通式12所示的化合物在碱的作用下水解为通式13所示的化合物；
[0088] 其中，n、m、R1、R2、R3和A环的定义同前。
[0089] 步骤a)中的强酸选自硫酸、盐酸、高碘酸、高氯酸、高溴酸、甲磺酸、三氟甲磺酸；
[0090] 步骤d)中的还原剂选自硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠；
[0091] 步骤e)i)l)中的碱选自碳酸钠、碳酸钾、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠、乙醇钾；
[0092] 步骤f)中的还原剂选自硼氢化钠、四氢锂铝、硼烷；
[0093] 步骤g)h)中的碱选自三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、DBU、碳酸钠、碳酸钾、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠、乙醇钾；
[0094] 步骤j)中的碱选自叔丁醇钾、叔丁醇钠、丁基锂、LDA、甲醇钠、乙醇钠、乙醇钾。
[0095] 药物组合物
[0096] 本发明还提供了一种药物组合物，它包含安全有效量范围内的活性成分，以及药学上可接受的载体。
[0097] 本发明所述的“活性成分”是指本发明所述的式I化合物。
[0098] 本发明所述的“活性成分”和药物组合物用于预防和/或治疗FXR相关疾病的药物。。
[0099] “安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个药片。
[0100] “药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0101] 本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。
[0102] 用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。
[0103] 用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。
[0104] 本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物(如抗菌药)联合给药。
[0105] 使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0106] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件(如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件)或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
[0107] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0108] 制备实施例
[0109] 所用仪器及主要实验材料如下：
[0110] BrukerAM-400型和Varian Mercury plus-400型核磁共振仪，Agilent 6230型质谱仪，及200-300目柱层析硅胶(青岛海洋化工厂)，HSGF254TLC板(烟台市化工研究院)。
[0111] 线路1
[0112]
[0113] 实施例1：
[0114]
[0115] 5g奥贝胆酸(OCA)，20mL 88％的甲酸混合，搅拌溶解后，滴加4滴HClO4，升温至60℃,搅拌4小时后，停止加热，撤去油浴。当温度降至40℃时，滴加Ac2O，保持温度不高于40℃，直到有大量气泡产生(滴加了约10ml)。将上述体系倒入到200ml水中，EA萃取，大量水洗，干燥，浓缩的粗品1A,产率95％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),8.05(s,1H),5.20(s,1H),4.79–4.65(m,1H),2.40(m,1H),2.26(m,1H),0.98–0.89(m,9H),0.66(s,3H)；
[0116]
[0117] 3g化合物1A的甲苯溶液中(150mL)，加入370mg吡啶和240mg醋酸铜，搅拌10min.后，分批加入9.4g PhI(OAc)2,加热回流12h。加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，水洗。EA:PE＝1:10柱层析，得产物1B(58％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),8.06(d,J＝0.6Hz,1H),5.66(ddd,J＝17.1,10.1,8.5Hz,1H),5.21(s,1H),4.92(dd,J＝17.1,1.2Hz,1H),4.84(dd,J＝10.2,1.9Hz,1H),4.78–4.67(m,1H),1.05(d,J＝6.6Hz,3H),0.98(s,3H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H),0.70(s,3H)；
[0118]
[0119] 将1.5g化合物1B溶于20mL二氯甲烷/甲醇(10/1)溶液中,-78℃条件下通入臭氧反应至溶液变蓝，继续通臭氧0.5小时，用二甲硫醚淬灭反应，自然升至室温搅拌2小时后浓缩1
除去溶剂，柱层析得产物1C，产率80％。H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.49(d,J＝3.2Hz,1H),8.08(s,1H),7.97(s,1H),5.14(s,1H),4.70–4.58(m,1H),2.28(m,1H),1.05(d,J＝6.8Hz,4H),
0.90(s,3H),0.83(t,J＝7.4Hz,3H),0.64(s,3H)；
除去溶剂，柱层析得产物1C，产率80％。H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.49(d,J＝3.2Hz,1H),8.08(s,1H),7.97(s,1H),5.14(s,1H),4.70–4.58(m,1H),2.28(m,1H),1.05(d,J＝6.8Hz,4H),
0.90(s,3H),0.83(t,J＝7.4Hz,3H),0.64(s,3H)；
[0120]
[0121] 将80mg化合物1C以及3-氨基苯甲酸甲酯溶于2mL二氯甲烷中，加入20uL醋酸，室温搅拌0.5小时后加入40mg三乙酰氧基硼氢化钠，反应至原料完全转化，加水二氯甲烷萃取，干燥浓缩柱层析得产物1D，产率79％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),8.06(s,1H),7.35(d,J＝7.7Hz,1H),7.27–7.20(m,2H),6.77(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),5.22(s,1H),4.82–
4.69(m,1H),3.91(s,3H),3.24(dd,J＝12.3,3.0Hz,1H),2.84(dd,J＝12.2,8.3Hz,1H),
1.07(d,J＝6.6Hz,3H),0.98(s,3H),0.93(t,J＝7.4Hz,4H),0.71(s,3H)；
4.69(m,1H),3.91(s,3H),3.24(dd,J＝12.3,3.0Hz,1H),2.84(dd,J＝12.2,8.3Hz,1H),
1.07(d,J＝6.6Hz,3H),0.98(s,3H),0.93(t,J＝7.4Hz,4H),0.71(s,3H)；
[0122]
[0123] 将50mg化合物1D溶于2.5mL甲醇，1.5mL四氢呋喃以及0.5mL水的混合溶液中，加入200mg氢氧化锂室温反应至转化完全，浓缩除去大部分溶剂后，用1M稀盐酸调PH至强酸性，析出固体，过滤干燥得产物1，产率91％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.61(m,2H),7.33(m,1H),
7.21(s,1H),3.35(m,3H),3.62–3.22(m,1H),1.09(d,J＝6.2Hz,3H),0.84(m,7H),0.62(s,
3H).
7.21(s,1H),3.35(m,3H),3.62–3.22(m,1H),1.09(d,J＝6.2Hz,3H),0.84(m,7H),0.62(s,
3H).
[0124] 实施例2至实施例18的制备参考实施例1的操作，从中间体1C出发通过路线1制备得到，结果如下。
[0125]
[0126]
[0127]
[0128]
[0129]
[0130]
[0131]
[0132] 路线2
[0133]
[0134] 实施例19
[0135]
[0136] 将1g中间体1C溶于20mL二氯甲烷中，加入醋酸0.4mL，冰水浴下加入硼氢化钠0.2g，升至室温搅拌1小时，水洗二氯甲烷萃取，干燥、浓缩、柱层析的0.7g产物19A，收率
70％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(s,1H),7.98(s,1H),5.14(s,1H),4.73–4.59(m,1H),
3.57(dd,J＝10.5,3.2Hz,1H),3.35–3.26(m,1H),0.99(d,J＝6.6Hz,3H),0.90(s,3H),0.84(t,J＝7.4Hz,3H),0.62(s,3H).
70％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(s,1H),7.98(s,1H),5.14(s,1H),4.73–4.59(m,1H),
3.57(dd,J＝10.5,3.2Hz,1H),3.35–3.26(m,1H),0.99(d,J＝6.6Hz,3H),0.90(s,3H),0.84(t,J＝7.4Hz,3H),0.62(s,3H).
[0137]
[0138] 将0.5g化合物19A溶于10mL二氯甲烷，在冰水浴下加入0.3mL三乙胺后滴加0.1mL甲烷磺酰氯，滴完后升至室温反应2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取、干燥、浓缩、柱层析得0.52g产物19B，收率88％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),8.06(s,1H),5.23(s,1H),4.79–4.67(m,1H),4.20(dd,J＝9.3,3.1Hz,1H),4.00(dd,J＝9.3,6.6Hz,1H),3.02(s,3H),
1.12(d,J＝6.7Hz,3H),0.98(s,3H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H),0.70(s,3H)；
1.12(d,J＝6.7Hz,3H),0.98(s,3H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H),0.70(s,3H)；
[0139]
[0140] 将100mg化合物19B、100mg碳酸钾、10mg四丁基碘化铵以及30mg对羟基苯甲酸甲酯溶于无水乙腈中，60℃下反应18小时至原料完全转化，冷却至室温乙酸乙酯萃取、水洗、干燥、浓缩、柱层析得97mg化合物19C，收率87％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),8.05(s,1H),7.98(d,J＝8.9Hz,2H),6.89(d,J＝8.9Hz,2H),5.21(s,1H),4.78–4.67(m,1H),3.95(dd,J＝8.9,3.2Hz,1H),3.88(s,3H),3.72(dd,J＝8.8,7.3Hz,1H),1.14(d,J＝6.6Hz,3H),
0.97(s,3H),0.90(d,J＝7.4Hz,3H),0.72(s,3H).
0.97(s,3H),0.90(d,J＝7.4Hz,3H),0.72(s,3H).
[0141]
[0142] 将50mg化合物19C溶于2.5mL甲醇，1.5mL四氢呋喃以及0.5mL水的混合溶液中，加入200mg氢氧化锂室温反应至转化完全，浓缩除去大部分溶剂后，用1M稀盐酸调PH至强酸1
性，析出固体，过滤干燥得产物19，产率96％。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.86(d,J＝8.6Hz,
2H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),3.97–3.95(m,1H),3.75–3.71(s,1H),3.14(s,1H),1.08(d,J＝
6.2Hz,3H),0.86–0.80(m,6H),0.65(s,3H).
性，析出固体，过滤干燥得产物19，产率96％。H NMR(400MHz,DMSO)δ7.86(d,J＝8.6Hz,
2H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),3.97–3.95(m,1H),3.75–3.71(s,1H),3.14(s,1H),1.08(d,J＝
6.2Hz,3H),0.86–0.80(m,6H),0.65(s,3H).
[0143] 实施例20至实施例21的制备参考实施例19的操作，从中间体19B出发通过路线2制备得到，结果如下。
[0144]
[0145]
[0146] 路线3
[0147]
[0148] 实施例22
[0149]
[0150] 将300mg化合物1C，330mg 以及100mg叔丁醇钾溶于10mL二氯甲烷中，反应过夜，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取、水洗、干燥、浓缩、柱层析得化合物22A，收率89％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(s,1H),8.04(s,1H),7.99(s,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.34(t,J＝7.8Hz,1H),6.32(d,J＝15.8Hz,1H),6.13(dd,J＝15.8,8.8Hz,1H),5.19(s,1H),4.79–4.64(m,1H),3.92(s,3H),1.12(d,J＝6.6Hz,3H),0.97(s,
3H),0.90(t,J＝7.4Hz,4H),0.72(s,3H).
3H),0.90(t,J＝7.4Hz,4H),0.72(s,3H).
[0151]
[0152] 将50mg化合物22A溶于2.5mL甲醇，1.5mL四氢呋喃以及0.5mL水的混合溶液中，加入200mg氢氧化锂室温反应至转化完全，浓缩除去大部分溶剂后，用1M稀盐酸调PH至强酸性，析出固体，过滤干燥得产物22，产率95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.91(s,1H),7.76(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.41(t,J＝7.8Hz,1H),6.40(d,J＝15.8Hz,1H),6.21(dd,J＝15.8,8.8Hz,1H),4.30(s,1H),4.06(d,J＝4.8Hz,1H),3.50(s,1H),3.14(s,1H),1.11(d,J＝6.6Hz,3H),0.87–0.80(m,6H),0.68(s,3H).
[0153] 实施例23
[0154]
[0155] 将50mg化合物22溶于3mL甲醇中，氮气保护下加入5mg钯碳，氢气环境下反应3小时，原料反应完全，硅藻土过滤除去钯碳，溶剂浓缩得到产物23，收率定量。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.83–7.72(m,2H),7.51–7.34(m,2H),4.29(s,1H),4.03(d,J＝5.2Hz,1H),3.50(s,1H),3.13(s,1H),2.80–2.66(m,1H),1.01(d,J＝6.3Hz,3H),0.83–0.81(m,6H),0.60(s,
3H).
3H).
[0156] 实施例24
[0157] FXR分子水平活性测试方法
[0158] 利用重组GST-FXR融合蛋白，通过Perkin Elmer公司的AlphaScreen检测试剂测定FXR活性。该方法的反应是在384孔板中，反应总体积是15μL。蛋白、激动剂、辅调节因子、受体微珠和 供体微珠的混合液在包含：Tris-HCl 50mM(pH7.4)，50mM NaCl，BSA 0.1％，1mM DTT的缓冲液中进行反应，通过荧光检测仪Envision检测在570nm波长下的荧光信号强度反应FXR活性。EC50的值通过软件Graphpad Prism 5计算得到。
[0159] FXR细胞水平活性测试方法
[0160] 将FXR表达质粒和FXRE luciferase报告质粒以1:9的比例共转染至293T细胞后，以5*105/孔将被转染细胞接种于96孔平底微孔板(ViewPlate-96,White96-well Microplate with Clear Bottom，PerkinElmer)。培养细胞24h确保质粒表达，加入待测FXR受体激动剂；待测化合物作用18h后，使用luciferase kit(steady-Glo Luciferase Assay system)检测荧光强弱以反映化合物对FXR受体的激活效率。
[0161] 其中初筛时，待测化合物和阳性化合物奥贝胆酸(OCA)以10μM作用于细胞，分别测定待测化合物对阳性化合物的相对活性(相对活性＝(待测化合物信号强度-blank)/(阳性化合物信号强度-blank)*100％)，相对活性高于阳性化合物50％的化合物进入复筛，选择合适浓度区间，计算其剂量依赖关系，即EC50值。
[0162] 活性测试结果
[0163]
[0164]
[0165] 结论：测试结果表明本发明所述化合物在分子水平和细胞水平对FXR均有较好的激动能力(其中实施例16活性明显优于阳性对照)，能够作为FXR激动剂，预防和/或治疗FXR相关疾病，能够治疗原发性胆汁性肝硬化、抑制肝脏纤维化进程、非酒精性脂肪肝、糖尿病、高血脂症等代谢性疾病。
[0166] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
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