技术领域
[0001] 本
发明涉及一种以磷脂和黏多糖衍
生物为基质，生物相容的
有机溶剂为溶剂，适用于广泛药物的原位相变网状凝胶缓释系统，属于医药技术领域。
背景技术
[0002]
水溶性化学药物对人类健康具有突出的、不可替代的重要作用，其具有物化性质明确，体内溶出快，吸收快，消除快的特点，故疗效维持时间较短。一些低渗透性的
水溶性分子药物，由于其渗透性差，导致其组织亲和
力较差。脂溶性药物
给药后的血药浓度存在明显的峰值和谷值，使其毒
副作用较大且药效降低，对于慢性病，需要持续的注射或静脉滴注来保证药物的疗效，加重了患者的身体、心理和经济负担。因此，通过缓释制剂能够使药物缓慢地释放，得到平稳的血药浓度，降低峰谷值是减毒增效，增加患者用药依从性的关键。因此人们希望开发出一种可注射的缓释给药系统。
[0003] 目前已上市的注射用缓释给药系统主要是PLGA（聚乳酸-羟基乙酸共聚物）微球。在诸多的药物缓释制剂中，注射用利培
酮缓释微球是研究最为成功的品种之一。利培酮是
治疗精神病的药物之一，长效利培酮微球注射液（long-acting risperidone microshere，简称“利培酮微球”），商品名恒德（Consta）由美国杨森公司研发生产，2003年在美国和欧洲相继上市，2006年进入中国市场，可缓释7周。绿叶制药研发的用于治疗
精神分裂症的利培酮缓释微球肌肉注射制剂（LY3004），已在172名美国患者中完成3项关键性的I期临床试验，仅需每两周注射一次，使用方便。尽管PLGA微球具有较好的缓释作用，但是其制备工艺复杂、载药量低、制备过程中使用的
有机溶剂在制剂中有残留，另外其降解过程中产生的乳酸和羟基乙酸会引起
注射部位pH值的下降，从而引起
炎症反应。以上的缺点限制了PLGA微球的应用。
[0004] 囊泡型磷脂凝胶（VPG）是一种半固体的磷脂分散系统，可以包封水溶性、脂溶性、两亲性的药物。
专利CN102697741A开发了一种奥沙利铂囊泡型磷脂凝胶注射剂，由奥沙利铂、大豆卵磷脂、胆固醇、PEG和
葡萄糖按特定的重量比制备而成，提高了制剂的
稳定性，但是，由结果可知，该制剂在延长药物释放时间和抑制突释方面没有明显的优势，释放时间较短。且其在储存过程中易出现的沉降聚集等问题，影响制剂的稳定性，不利于制剂的保存和运输。
[0005] 本实验室开发了一种以高浓度磷脂为主要基质，并添加小部分
植物油的原位相变凝胶缓释制剂（CN102526753A）和一种以磷脂和司盘为基质，
乙醇为溶剂，适用于药物的原位相变凝胶缓释系统（CN107049932A）。前者具有
生物相容性好、缓释作用显著、体内降解性好等优点，应用于蛋白多肽类药物具有好的缓释效果，如
醋酸奥曲肽在大鼠、兔子和狗体内可以平稳缓释一个月左右，药物突释很少，优于市售的醋酸奥曲肽微球（MX Wang,et al. Pharmacokinetic and pharmacodynamic study of a phospholipid-based phase separation gel for once a month administration of octreotide, Journal of Controlled Release 230 (2016) 45–56）；醋酸
艾塞那肽磷脂凝胶几乎没有突释，在大鼠体内缓释长达一个月，能够保持20多天稳定的降血糖效果（M Hu, et al. Long-Acting Phospholipid Gel of Exenatide for Long-TermTherapy of Type II Diabetes, Pharm Res 33 (2016):1318–1326）。后者应用于包载部分脂溶性化学药物时，也有较好的缓释效果和较小的突释，如依匹哌唑、2,4-二硝基
苯酚磷脂凝胶等能在动物体内持续释放半个多月（GF Wei,et al. Sustained-release mitochondrial protonophore reverses
nonalcoholic fatty liver disease in rats, International Journal of
Pharmaceutics 530 (2017) 230–238）以上。但是，我们在研究中也发现，对于不少化学药物采用该类磷脂凝胶制剂包载，效果不够理想，虽然也有一定的缓释作用，但缓释时间只能持续几天，无法维持长时间的有效血药浓度，且突释情况比较严重。首先，部分水溶性强的药物作用时间短，推测原因可能是因为人体
皮下组织为水性环境，水溶性药物包载在小分子凝胶系统中，缺乏屏障，很容易通过体液扩散出来。其次，部分脂溶性强的药物与磷脂相容性好，在磷脂载体中容易渗透、扩散而释放，导致释药速率明显加快，缓释时间持续相对较短，突释较多，对一些治疗窗窄的药物，可能会引起安全性问题。
[0006] 因此，对于广泛的化学药物，需要探寻一种适用范围广、突释较小、缓释时间长的药物载体来解决其注射用长效缓释问题。
发明内容
[0007] 本发明的目的是克服
现有技术存在的
缺陷，提供一种适用范围广，不但能使水溶性药物注射后长时间缓释，也能适用于脂溶性药物的原位凝胶缓释系统。该原位凝胶缓释系统能够显著减少药物的突释。
[0008] 在研究中意外地发现，高浓度的磷脂与黏多糖衍生物的混合物在生物相容的有机溶剂中可形成流动的可注射液体。当该混合物注入水中时，能够迅速地自发形成具有网状的凝胶制剂。根据此性质，
发明人设想，将药物溶解或分散在含磷脂和黏多糖衍生物的溶液中，注入体内后，由于体内水分的含量比较高，磷脂和黏多糖衍生物会在注射部位自发形成半固体网状的凝胶，同时随着溶剂的渗出，该混合物进一步
固化，成为药物释放的载体和屏障，有效控制药物的释放。
[0009] 根据上述的意外发现，发明人由此以伊维菌素为模型药物，制备了含10%黏多糖衍生物和60%磷脂的乙醇溶液，给大鼠皮下注射0.6 ml后，药物可平稳释放30天以上。在相同的给药剂量下，Cmax原药≈2857.43 μg/mL，Cmax高浓度磷脂凝胶（按照专利CN102526753A制备）≈703.28 μg/mL，Cmax黏多糖衍生物磷脂凝胶≈514.86 μg/mL，且原药组只能释放5天，普通磷脂凝胶可释放15天，黏多糖衍生物凝胶可释放30天以上。毒性实验结果表明，磷脂黏多糖衍生物凝胶能有效降低高剂量乙醇扩散的毒副作用。因而，对于治疗窗窄的药物，该制剂能有效地降低其毒副作用。
[0010] 根据上述研究，我们惊奇地发现磷脂黏多糖衍生物网状凝胶缓释制剂能够明显地减少药物突释并延长释放时间。我们认为我们制备的新型凝胶缓释系统相较传统的凝胶制剂可减少突释并能缓释更长时间。我们选择水溶性药物
盐酸阿霉素和脂溶性药物依匹哌唑等为模型药物进行了进一步的研究，结果发现盐酸阿霉素和依匹哌唑等药物的凝胶制剂均能一直处于较平稳的释放状态，几乎没有突释现象。
[0011] 黏多糖衍生物是一种长链大分子黏多糖与脂肪胺或
脂肪酸连接形成的两亲性衍生物，具有较好的生物相容性和
生物可降解性。发明人发现，在
处方中加入部分黏多糖衍生物，该凝胶制剂遇水后，即刻固化，并具有明显的网状结构。一方面可以缩短磷脂凝胶的固化时间；另一方面，在体内外释放试验中对脂溶性化学药物和水溶性化学药物均具有很好的缓释效果。从而拓展了该类磷脂凝胶制剂的应用，对广泛药物的缓释应用提供了可能。
[0012] 本发明的目的之一，是提供一种适用于药物的网状凝胶缓释系统。
[0013] 本发明的目的之一，是提供一种能显著减少药物突释的网状凝胶缓释系统。本发明的目的之一，是提供一种包含磷脂、黏多糖衍生物的网状凝胶缓释系统。
[0014] 在具体的实施方式中，上述能显著减少药物突释的网状凝胶缓释系统还可以添加适量的注射用油，减少有机溶剂用量。
[0015] 在具体的实施方式中，上述能显著减少药物突释的网状凝胶缓释系统还含有生物相容的有机溶剂。
[0016] 本发明的目的之一，是提供一种包含磷脂、黏多糖衍生物、药物活性成分制备成的高浓度磷脂黏多糖衍生物缓释制剂，即本发明所述的原位注射相变凝胶缓释系统或原位注射相变凝胶缓释制剂。
[0017] 本发明的目的之一，是提供一种缓释效果好，有效减少药物突释，高浓度磷脂含量、易于注射的含有
生物活性成分的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂。
[0018] 适用于本发明的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂中的黏多糖衍生物，包括但不限于
硫酸软骨素-脂肪胺耦合物、透明质酸-脂肪胺耦合物、肝素-脂肪胺耦合物、硫酸
皮肤素-脂肪胺耦合物、硫酸乙酰肝素-脂肪胺、硫酸
角质素-脂肪胺和壳聚糖-脂肪酸中一种或多种的组合，优选软骨素硬脂胺耦合物。
[0019] 适用于本发明的黏多糖衍生物的脂肪胺或脂肪酸取代度为1-50%，黏多糖衍生物的分子量范围为10-20,000 kDa。
[0020] 适用于本发明的高浓度磷脂黏多糖衍生物缓释制剂中的磷脂，包括但不限于天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂中一种或多种的组合。
[0021] 所述天然磷脂，包括但不限于蛋黄卵磷脂、大豆磷脂或其组合等。
[0022] 所述半合成磷脂，包括但不限于氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂或其组合等。
[0023] 所述合成磷脂，包括但不限于二棕酰磷脂酰乙醇胺、二棕酰磷脂酸、二棕酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕酰磷脂酰胆
碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱中的一种或多种的组合等。
[0024] 在具体的实施方案中，本发明优选磷脂为大豆磷脂S100。
[0025] 进一步，本发明所述的凝胶缓释制剂还可包含注射用油。
[0026] 所述注射用油，包括但不限于
大豆油、玉米油、麻油、茶油、鱼油、中链脂肪酸甘油酯、
棉籽油、油酸乙酯及上述物质的组合。
[0027] 在具体的实施方案中，本发明所述的磷脂缓释制剂，基于制剂的重量份计，包含磷脂含量30 80份，黏多糖衍生物含量1 20份。~ ~
[0028] 适用于制备本发明所述的磷脂缓释制剂的药物活性成分，包括但不限于抗癌药类、抗炎药类、止痛药类、抗感染药类、抗糖尿病药类、免疫调节药类、抗
高血压药类、抗
癫痫类、抗抑郁药类、抗精神病药类、抗肥胖药类、
尿路病类、强心药类。
[0029] 适用于本发明的药物活性成分包括但不限于以下：依匹哌唑，奥氮平，维思通，璜达肝癸钠，吗啡，曲
马多，羟考酮，芬太尼，利多卡因，杜冷丁，
硝酸异山梨酯，戊四硝酯，单硝酸异山梨酯，普
萘诺尔，纳多诺尔，吲哚诺尔，阿替诺尔，美托诺尔，阿普诺尔，醋丁诺尔，硝苯地平，维拉帕米，地尔硫卓，谱尼拉明，哌可昔林，苄普地尔，尼可地尔，吗多明，地拉卓，曲美他嗪，硫酸奎尼丁，丙吡啶，盐酸美西律，盐酸胺碘酮，
洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，阿伐他汀，西立伐他汀，血脂康，考来烯胺，考来替泊，普罗布考，吉非贝齐，阿司匹林，奥扎格雷，噻氯匹定，氯吡格雷，利多格雷，替罗非班，华法林，双香豆素，醋硝香豆素，七叶内酯，当归内酯，黄芪甲苷，人参皂苷，葡萄内酯，呋喃香豆素 ，吡喃香豆素，北美芹素，红厚壳内酯，双七叶内酯，水飞蓟宾，葛根素，
芦丁，橙皮苷，
儿茶素，香叶苷，灯盏花素，槲皮素，白黎芦醇，立可定，卡托普利，依那普利，赖诺普利，苯那普利，福辛普利，雷米普利，喹那普利，培吲普利，西拉普利，群多普利，阿拉普利，地拉普利，氯沙坦，厄贝沙坦，坎地沙坦，硝苯地平，
氨氯地平，非洛地平，尼群地平，拉西地平，尼莫地平，尼卡地平，尼索地平，伊拉地平，地尔硫卓，维拉帕米，普萘诺尔，美托诺尔，钠多诺尔，吲哚诺尔，阿替诺尔，美托诺尔，阿普诺尔，醋丁诺尔，比索诺尔，倍他诺尔，哌唑嗪，特拉唑嗪，多沙唑嗪，由马唑嗪，拉贝诺尔，卡位诺尔，可乐定，甲基多巴，莫索尼定，利舍平，胍乙啶，肼屈嗪，硝普钠，盐酸多奈哌齐，卡巴拉汀，石杉碱甲，美曲膦酯，他克林，加兰他敏，吡拉西坦、阿米三嗦、甲磺酸双氢麦角汀、己酮可可碱、尼麦角林，维生素E褪黑素、姜黄素、去
铁敏、艾地苯醌、甲磺酸替拉扎特，雌二醇，乙炔雌二醇，雌酮，炔雌醇，尼尔雌醇，戊酸雌二醇，苯
甲酸雌二醇，雄烯二醇、甲睾酮、睾酮、睾酮十一酸酯，己烯雌酚，己烯雌酚丙酸酯，已烯雌酌
磷酸酯，环戊丙酸雌二醇，大豆素，醋酸甲羟孕酮，醋酸甲地孕酮 ，醋酸氯地孕酮，孕二烯酮，炔诺酮，地索高诺酮，巳酸孕酮，左炔诺孕酮，醋酸炔诺酮，庚酸炔诺酮，双酯炔诺醇，醋炔醚，地诺孕酮，屈螺酮，烯诺孕酮，诺美孕酮，由美孕酮，苯海拉明，苄达明，异丙嗪，曲吡那敏，氯苯那敏，布克立嗪，苯茚胺，赛庚啶，氯马斯汀，氮卓斯汀，阿司咪唑，氯雷他定，西替利嗪，咪唑斯汀，特非那丁，非索非那丁，乙氟利嗪，地氯雷他定，依巴斯汀，异丙嗪，非尼拉敏，澳苯那敏，托普帕敏，吡咯他敏，由谱利啶，阿伐斯汀，西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁，尼扎替丁，罗莎替丁，酮替芬，色甘酸钠，环磷酰胺，异环磷酰胺，卡莫司汀，洛莫司汀，司莫司汀，达卡巴嗪，丙卡巴嗪，替莫唑胺，苯丁酸氮芥，美法仑，铂类配合物（如
顺铂，卡铂，奥沙利铂等），甲氨蝶岭，氟尿嘧啶，替加氟，巯嘌呤 ，喷司他丁， 阿糖胞苷，吉西他滨，长春碱，长春新碱 ，长春瑞滨 ，长春地辛，紫杉醇，多西他赛，高三尖杉酯碱，三尖杉酯碱，喜树碱，羟喜树碱，托普替康 ，伊立替康 ，依托泊苷，替尼泊苷，放线菌素D，丝裂霉素，博来霉素，柔红霉素，氯霉素，多柔比星，伊达比星，阿柔比星，米托蒽醌，表柔比星，普卡霉素，肾上腺皮质
激素，雄激素，氟他胺 ，雌激素，他莫西芬，依西美坦 ，维A酸，伊马替尼，吉非替尼，埃罗替尼，沙利度胺，雷利度胺，阿司匹林，水杨酸镁，水杨酸胆碱，水杨酰胺，双水杨酯，二氟尼柳，吲哚美辛（消炎痛），舒林酸，对乙酰氨基酚（扑热息痛），氨基比林，羟布宗，保泰松，甲芬那酸，氯芬那酸 ，双氯芬酸，布洛芬，萘普生，氟比咯芬，非诺洛芬，酮洛芬，吡罗昔康，美洛昔康，尼美舒利，罗非昔布，塞来昔布，秋水仙碱，丙磺舒，别嘌呤，磺吡酮，苯溴马隆，地西泮，阿昔洛韦，毛果芸香碱，拉坦前列素，曲伏前列素，比马前列素，乌诺前列酮，盐酸左卡巴斯汀，富马酸酮替芬，噻吗洛尔，倍他洛尔，卡替洛尔，左布诺洛尔，多佐胺，布林唑胺，肾上腺素，地匹福林，溴莫尼定，胰岛素、胰高血糖素 、α-干扰素、β-干扰素、白细胞介素、促红细胞生成素（EPO）、促性腺激素、粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子（GM-GSF）、组织型纤溶酶原激活剂、链激酶、细胞生长因子、凝血因子、前列腺素、抗凝血酶、水蛭素、组氨瑞林、生长激素释放肽-2 、生长激素释放肽-6、西曲瑞克、比伐卢定、精氨酸加压素、赖氨酸加压素、去氨加压素、戈那瑞林、亮丙瑞林、德舍瑞林、布舍瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林、阿拉瑞林、舍莫瑞林、那法瑞林、黄体瑞林、夫替瑞林、海沙瑞林、奥曲肽、艾塞那肽、人胰高血糖素样肽-1、生长激素、生长抑素、齐考诺肽、胸腺肽al 、辛卡利特、胸腺五肽、阿巴瑞克、阿肽地尔、亮氨酸脑啡肽、甲硫脑啡肽、替可克肽、促性腺激素释放激素、促甲状腺激素释放激素、 生长激素释放激素（GHRH）、生长激素抑制素（ GHIH ）、促黑色素细胞抑制激素（MRIH）、促黑色素细胞释放激素（MRH）、促皮质素释放激素（CRH）、胰泌素、P物质、神经降压肽、人脑利钠肽、
心房利钠肽、血管紧张肽I、血管紧张肽 II 、血管紧张肽III、睡眠肽、记忆增强肽、强啡肽、内啡肽、血管紧张素、恩夫韦地、CJC-1295、依降
钙素、胸腺肽β4、加压素、糅酸加压素、苯赖加压素、
鸟氨酸加压素、美拉诺坦II、脾脏五肽、普兰林肽、伐普肽、促皮质素、丝赖促皮质18肽、甘精促皮质18肽、锌促皮质24 肽、促皮质24肽、促皮质25肽、促皮质28肽、血管活性肠肽、脑钠尿肽、缓激肽、孤啡肽、
门冬酰胺酶或上述药物的药学上可接受的盐的一种或多种组合。
[0030] 进一步的，上述化学药物可以为其药学上可接受的盐形式，包括但不限于盐酸盐、
硫酸盐、醋酸盐、水杨酸盐、磺酸盐、枸橼酸盐等多种药学上可用的盐形式。
[0031] 本发明所述的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂，以重量份计，包含药物活性成分0.01~20份，磷脂含量30 80份，黏多糖衍生物含量1 20份。所述缓释制剂还可包含注射用油，以~ ~
重量份计，所述磷脂黏多糖衍生物缓释制剂含有注射用油5 40份。
~
[0032] 所述缓释制剂还包含生物相容的有机溶剂，以重量份计，所述磷脂黏多糖衍生物缓释制剂含有生物相容的有机溶剂7 30份。所述的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂，以重量份~计，包含药物活性成分0.01 20份，磷脂含量30 80份，黏多糖衍生物含量1 20份，生物相~ ~ ~
容的有机溶剂7 30份。所述生物相容的有机溶剂的浓度范围为50 100%（v/v）。
~ ~
[0033] 进一步地，按照重量份计，包含磷脂30 80份，黏多糖衍生物1 20份，优选3 ~ ~ ~10份。
[0034] 其中，所述生物相容的有机溶剂可选自无水乙醇、乙醇溶液、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、正戊烷、异戊烷、新戊烷、正己烷、甲酸甲酯、乙酸乙酯、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、甲酰胺中的一种或多种，所述乙醇溶液优选为乙醇-水溶液、乙醇-二甲基亚砜溶液、乙醇-N,N-二甲基甲酰胺溶液、乙醇-甲酰胺溶液、乙醇-正己烷、乙醇-生理盐水溶液、乙醇-
磷酸盐缓冲液溶液、乙醇
碳酸盐缓冲溶液、乙醇-
琥珀酸盐缓冲溶液、乙醇-枸橼酸盐缓冲溶液、乙醇-乳酸盐缓冲溶液中的一种或多种，其中乙醇的浓度可以是50% 100%（v/v）。~
[0035] 本发明的以磷脂黏多糖衍生物为基质的原位注射相变凝胶缓释系统是一种新颖的剂型，药物活性成分可以溶解在磷脂黏多糖衍生物-生物相容的有机溶剂中，成为流动性良好的液体，注入体内后，磷脂和黏多糖衍生物能够立即形成包裹药物活性成分的半固体网状凝胶，具有良好的缓释效果。
[0036] 药物活性成分也可以以微粒形式分散在磷脂黏多糖衍生物-生物相容的有机溶剂中，只要能保持制剂通针性即可。
[0037] 可以将药物活性成分和空白的磷脂黏多糖衍生物基质分别保存，临用前溶解或分散均匀后给药。
[0038] 在具体的实施方案中，本发明原位凝胶制剂的制备方法可以包括以下步骤：（1） 取药物活性成分溶于适量的生物相容的有机溶剂中，微孔滤
膜过滤除菌，形成药物溶液；
（2） 在无菌条件下取磷脂和黏多糖衍生物与步骤（1）中的药物溶液混合，搅拌使混合均匀，静置片刻以除去制剂中的气泡，分装，密封，即得。
[0039] 在具体的实施方案中，本发明的原位凝胶制剂的制备方法可以包括以下步骤：（1）在无菌的条件下，取药物活性成分通过药剂学上常见的结晶或
粉碎方式，制备药物微粒。
[0040] （2）在无菌条件下取磷脂、黏多糖衍生物与生物相容的有机溶剂混合，搅拌使混合均匀；（3）在无菌条件下将步骤（1）的药物微粒与步骤（2）中制备的载体溶液混合均匀，静置片刻以除去制剂中的气泡，分装，密封，即得。
[0041] 本发明所述的原位注射相变凝胶缓释制剂可以用于注射给药，优选皮下给药；也可以用于外用给药等其他给药形式。
[0042] 本发明所述的原位注射相变凝胶缓释制剂也可以用于修复和扩充软和/或硬组织。
[0043] 本发明通过创造性的研究，以磷脂黏多糖衍生物和乙醇溶液等作为主要原料，采用伊维菌素、盐酸阿霉素、依匹哌唑等为模型药物，制备成磷脂黏多糖衍生物缓释制剂。所得制剂流动性良好，容易注射给药，动物体内实验证明其具有良好的缓释效果。通过考察磷脂黏多糖衍生物缓释制剂对注射部位的刺激性，其结果显示该制剂具有较好的生物相容性，对给药部位的刺激性较小。
[0044] 因此本发明可以普遍实现各种药物缓释的同时，很好地解决了现有药物原位凝胶制剂突释性强的技术问题，具有良好的应用前景。
[0045] 发明益处磷脂黏多糖衍生物缓释制剂含有能够与水完全互溶的少量生物相容的有机溶剂，注射入体内后，磷脂和黏多糖衍生物混合物能够立即固化，大分子黏多糖衍生物形成束缚小分子磷脂的网状结构，生物相容的有机溶剂能够快速地扩散到体液，使凝胶制剂进一步固化，成为药物缓释的载体，控制药物的释放。动物体内实验证明该制剂确实具有良好的缓释效果，突释效应较小甚至没有突释。磷脂黏多糖衍生物缓释制剂具有流动性好、易于注射给药等优点。另外还可以根据所要包载药物的溶解性选择合适的溶剂或溶剂组合来溶解药物，以制得均匀透明的稳定制剂。药物也可以微粒形式均匀分散在制剂当中。此外，磷脂黏多糖衍生物缓释制剂中不含有水分或水分含量较低，且制剂中含有生物相容的有机溶剂，可以有效抑制
微生物的生长，有利于制剂的储存，从而扩大了磷脂黏多糖衍生物制剂的应用范围。
附图说明
[0046] 图1为磷脂黏多糖衍生物缓释制剂胶凝前后对比图。
[0047] 图2为伊维菌素的不同处方磷脂黏多糖衍生物网状缓释制剂透射电镜图。
[0048] 图3为伊维菌素的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂、高浓度磷脂缓释制剂和溶液组的体外释放曲线。
[0049] 图4为皮下注射伊维菌素的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂、高浓度磷脂缓释制剂和溶液组的药时曲线。
[0050] 图5为伊维菌素的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂的皮肤刺激性外观观察。
[0051] 图6为伊维菌素的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂的皮肤刺激性切片H&E
染色图。
[0052] 图7为盐酸阿霉素的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂、高浓度磷脂缓释制剂和溶液组的药时曲线。
[0053] 图8为依匹哌唑的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂和高浓度磷脂缓释制剂的药时曲线。
具体实施方式
[0054] 以下
实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是本发明范围的限制。下面参考实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。
[0055] 实施例1取伊维菌素100 mg，溶于2.0 g乙醇中，经0.22 μm微孔滤膜过滤得到药物溶液，然后在无菌条件下，加入注射级的大豆磷脂S100 6.0 g、注射级中链脂肪酸甘油酯 1.0 g和硫酸软骨素十八胺耦合物1.0 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至S100混合均匀，得到含有大量气泡的液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0056] 实施例2在无菌条件下，取适量的盐酸阿霉素于研钵中
研磨粉碎，得到盐酸阿霉素粉末。取1.5 g无水乙醇、注射级的蛋黄磷脂E80 6.5 g、硫酸软骨素十八胺耦合物0.5 g、大豆油1.5 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至混合均匀，在无菌条件下取盐酸阿霉素粉末20 mg与上述液体混合均匀，得到含有大量气泡的液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0057] 实施例3在无菌条件下，取适量的依匹哌唑于研钵中研磨粉碎，得到依匹哌唑粉末。取无水乙醇
1.5 g，透明质酸十六胺耦合物1.0 g和注射级的大豆磷脂S100 7.5 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体。在无菌条件下取依匹哌唑粉末200 mg与上述液体混合均匀，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0058] 实施例4取茶碱100 mg，溶于3.0 g的80%（v/v）乙醇-pH 7.6磷酸缓冲液中，得到药物溶液，0.22 μm微孔滤膜过滤，然后在无菌条件下，加入注射级的氢化蛋黄磷脂 4.0 g和透明质酸十八胺 2.0 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至氢化蛋黄磷脂混合均匀，得到含有大量气泡的液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0059] 实施例5取地塞米松10.0 mg，溶于1.7 g的无水乙醇中，得到药物溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，然后在无菌条件下，加入注射级的二棕酰磷脂酰乙醇胺6.0 g 、肝素十八胺耦合物1.3 g和中链脂肪酸甘油酯1 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至二棕酰磷脂酰乙醇胺混合均匀，得到含有大量气泡的液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0060] 实施例6取阿司匹林100 mg，溶于2.0 g的80%（v/v）乙醇-pH 7.6磷酸缓冲液中，得到药物溶液，
0.22 μm微孔滤膜过滤，然后在无菌条件下，加入注射级的蛋黄卵磷脂E80 6.0 g和壳聚糖十二酸耦合物1.9 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至E80混合均匀，得到含有大量气泡的液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0061] 实施例7取西咪替丁200 mg，溶于2.8g的90%（v/v）乙醇-pH7.6磷酸缓冲液中，得到药物溶液，
0.22 μm微孔滤膜过滤，然后在无菌条件下，加入注射级的二棕酰磷脂酰乙醇胺6.0 g和透明质酸十四胺耦合物 1.0 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至二棕酰磷脂酰乙醇胺混合均匀，得到含有大量气泡的液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0062] 实施例8取盐酸多奈哌齐40 mg，溶于2.5 g的70%（v/v）乙醇-正己烷中，得到药物溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，然后在无菌条件下，加入注射级的氢化大豆磷脂 6.0g和透明质酸十八胺耦合物 1.5 g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至氢化大豆磷脂混合均匀，得到含有大量气泡的液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0063] 实施例9在无菌条件下，取适量的利培酮于研钵中研磨粉碎，得到利培酮粉末。取无水乙醇溶液
2.0 g和透明质酸十六胺耦合物 1.5 g，氢化蛋黄磷脂 5.5 g，玉米油1 g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至氢化蛋黄磷脂混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体。在无菌条件下取利培酮粉末150 mg与上述液体混合均匀，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0064] 实施例10取卡托普利200 mg，溶于1.5 g 90%（v/v）乙醇-水溶液中，得到药物溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，在无菌条件下加入注射级蛋黄卵磷脂E80 6.5 g和硫酸软骨素十四胺耦合物
2.0 g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至E80混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0065] 实施例11取地西泮100mg，溶于2.0 g的75%（v/v）乙醇-水中，得到药物溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，在无菌条件下加入注射级二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱 5.5 g、硫酸软骨素十八胺耦合物
1.5 g和鱼油1.0 g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体，静止至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0066] 实施例12取异丙嗪80mg，溶于2.0 g的70%（v/v）乙醇-水中，得到药物溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，在无菌条件下加入大豆磷脂S100 6.5 g、茶油1.0 g和肝素十四胺耦合物 0.5g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至S100混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体，静止至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0067] 实施例13取阿柔比星70 mg，溶于2.0 g的80%（v/v）乙醇-水中，得到药物溶液，0.22 μm微孔滤膜过滤，在无菌条件下加入蛋黄卵磷脂E80 6.5 g和肝素十六胺耦合物1.5 g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至E80混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体，静止至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0068] 实施例14取卡莫司汀90 mg，溶于2.5 g的80%（v/v）乙醇-水中，得到药物溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，在无菌条件下加入二油酰磷脂酰乙醇胺5.5 g和乙酰肝素十八胺耦合物 2.0 g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至二油酰磷脂酰乙醇胺混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体，静止至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0069] 实施例15取利培酮40 mg，溶于3.0 g异丙醇中，得药物溶液，0.22 μm微孔滤膜过滤，在无菌条件下加入蛋黄卵磷脂E80 4.0 g，茶油1.0 g和肝素十六胺耦合物2.0 g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至E80混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体，静止至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0070] 实施例16取己烯雌酚100 mg，溶于3.0 g的正己烷，得到药物溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，在无菌条件下加入大豆磷脂4.5 g、玉米油1.0 g和肝素十四胺耦合物 1.5g，无菌条件下磁力搅拌约0.5 h，至均匀很合，得到含有大量气泡的乳黄色液体，静止至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0071] 实施例17在无菌条件下，取适量的水飞蓟宾于研钵中研磨粉碎，得到水飞蓟宾粉末。取无水乙醇
2.0 g、透明质酸十八胺耦合物1.0 g、注射级的大豆磷脂S100 4.0 g和中链脂肪酸甘油酯
1.0 g，无菌条件下磁力搅拌约1 h，至混合均匀，得到含有大量气泡的乳黄色液体。在无菌条件下取水飞蓟宾粉末2.0 g与上述液体混合均匀，静置至气泡完全消失，分装，密封，即得。
[0072] 实验例1按照实施例1的制备方法制备样品进行下列试验，将实施例1处方中的大豆磷脂（实施例1）换成蛋黄磷脂（试验例1），氢化蛋黄卵磷脂（试验例2），二棕酰磷脂酰乙醇胺（试验例3）和不含磷脂（试验例4，用中链脂肪酸甘油酯替代磷脂，制备方法同实施例1）。同时设计原药溶液组，将50 mg药物溶解于5 mL 50%丙二醇磷酸盐缓冲液（pH = 7.6），制备与实施例1相同浓度的溶液（试验例5）。
[0073] 将200 220g的SD大鼠随机分为五组，每组5只，按照伊维菌素50 mg/kg的剂量皮下~注射给药（实施例1，试验例1，试验例2，试验例3，试验例4和试验例5），在预定的时间点，通过大鼠眼眶取血，置于肝素钠抗凝的试管中，样品经处理后，LC-MS/MS进样检测血药浓度，结果如下表所示：
结果：从上表中可以看出，磷脂的种类对药物大的缓释影响不大，都可以有效地抑制伊维菌素的突释作用。
[0074] 实施例2按照实施例1的制备方法制备样品进行下列试验，将实施例1处方中的中链脂肪酸甘油酯去掉或者换成大豆油、玉米油、麻油和茶油。同时设计原药溶液组，将50 mg药物溶解于5 mL 50%丙二醇磷酸盐缓冲液（pH = 7.6），制备与实施例1相同浓度的溶液。
[0075] 将200 220g的SD大鼠随机分为五组，每组5只，按照伊维菌素50 mg/kg的剂量皮下~注射给药（实施例1，试验例1，试验例2，试验例3，试验例4和试验例5），在预定的时间点，通过大鼠眼眶取血，置于肝素钠抗凝的试管中，样品经处理后，LC-MS/MS进样检测血药浓度，结果如下表所示：
结果：从上表中可以看出，凝胶中是否加入注射用油和加入油的种类对抑制伊维菌素的突释作用影响不大。
[0076] 实验例3 按照实施例1的制备方法制备样品进行下列试验，将实施例1处方中的硫酸软骨素-十八胺耦合物调整为0.5 g（试验例1）和0.1 g（试验例2）。同时设计高浓度磷脂凝胶（试验例
3，按照专利CN102526753A制备）和原药溶液组（试验例4，将100 mg药物溶解于10 mL丙二醇-磷酸盐缓冲液（pH = 7.6），制备与实施例1相同浓度的溶液）。并设置磷脂黏多糖凝胶作为对照（试验例5，按照实施例1的制备方法进行制备，仅将硫酸软骨素-十八胺耦合物换成硫酸软骨素）。
[0077] 高浓度磷脂凝胶缓释制剂（专利CN102526753A）的处方如下：将200 220g的SD大鼠随机分为五组，每组6只，按照伊维菌素50 mg/kg的剂量皮下注射~
给药（实施例1，试验例1，试验例2，试验例3、试验例4和试验例5），在预定的时间点，通过大鼠眼眶取血，置于肝素钠抗凝的试管中，样品经处理后，LC-MS/MS进样检测血药浓度，结果如下表所示：
结果：从上表中可以看出，磷脂凝胶中加入黏多糖衍生物显著优于加入未修饰的黏多糖，同时显著优于高浓度磷脂凝胶，可以有效地抑制活性药物的突释作用。
[0078] 实验例4按照实施例1的制备方法进行下列试验，将实施例1处方中的硫酸软骨素-十八胺耦合物调整为0.5 g（试验例1）和0.1 g（试验例2）。同时设计高浓度磷脂凝胶组（试验例3）。考察黏多糖衍生物含量对制剂的外观的影响并通过黏度仪测定黏度。
[0079] 结果如下表：结果：随着黏多糖衍生物添加量的增加，凝胶溶液的
粘度稍有增加，但流动性仍然满足注射要求。
[0080] 实验例5制备不同比例的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂，进行局部刺激性实验，考察无水乙醇的用量对注射部位的刺激性，包括红肿、溃烂等现象。
[0081] 结果如下表：表一：
表二：
表三：
表四：
结果：制剂中的乙醇对给药部位的呈现出轻微可逆的刺激性。但存在黏多糖衍生物的制剂可有效缓解刺激性，这可能与黏多糖可消除炎症的活性有关。
[0082] 实验例6（1）磷脂黏多糖衍生物凝胶相变过程
将实施例1的产品注入实验动物皮下，30分钟后取出，结果见图1，其中，注射前为图1中的溶液态，注射后为半固体凝胶态。可见，磷脂黏多糖衍生物凝胶从乳黄色透明液体变成球状半固体状态，说明磷脂黏多糖衍生物凝胶注射到皮下后乙醇扩散后会发生相变过程。
[0083] （2）磷脂黏多糖衍生物凝胶表面特性将实施例1（IVM-MG-3，伊维菌素网状凝胶3），实验例3中的试验例1（IVM-MG-2，伊维菌素网状凝胶2）、试验例2（IVM-MG-1，伊维菌素网状凝胶1）和试验例3（IVM-PG，伊维菌素高浓度磷脂凝胶）的产品注入实验动物皮下30分钟后取出，进行扫描电镜观察，结果见图2：随着黏多糖衍生含量的增加，制剂表面结节增多，网状结构更加明显，说明黏多糖衍生物能使磷脂凝胶具有网状屏障。
[0084] （3）体外释放结果将实施例1（IVM-MG-3，伊维菌素网状凝胶3），实验例3中的试验例1（IVM-MG-2，伊维菌素网状凝胶2）、试验例2 （IVM-MG-1，伊维菌素网状凝胶1），试验例3（IVM-PG，伊维菌素高浓度磷脂凝胶）和试验例4（IVM-Sol，实验例3中试验例4）的产品分别装在
透析袋中，然后放置在5 ml 30% 乙醇/PBS缓冲溶液中（pH=7.4），在恒温
振荡器（37 °C，100 rmp）中进行体外释放试验。在设定时间点取出5 ml的缓冲液，并加入等体积的新鲜乙醇/PBS缓冲液，计算药物的累计释放率。结果见图3：磷脂黏多糖衍生物凝胶组具有抑制突释的特性，且随着黏多糖衍生含量的增加缓释效果更显著。
[0085] （4）体内药动学结果将实施例1，实验例3中的试验例1、试验例2、试验例3和试验例4的产品注射到雄性SD大鼠皮下，定时取血，采用高效液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）测定
血浆中伊维菌素的含量，考察其缓释效果。
[0086] 将200 220g的SD大鼠随机分为五组，溶液组(IVM-Sol，实验例3中试验例4)、高浓~度磷脂凝胶组（IVM-PG，实验例3中的试验例3，按照专利CN102526753A制备）、网状凝胶1（IVM-MG-1，实验例3中的试验例2），网状凝胶2（IVM-MG-2，实验例3中的试验例1）、网状凝胶
3（IVM-MG-3，实施例1），每组6只，按照50 mg/kg的剂量皮下注射给药，在预定的时间点，通过大鼠眼眶取血，置于肝素钠抗凝的试管中，样品经处理后，LC-MS/MS进样检测血药浓度。
[0087] 各组制剂的药动学参数如下：结果显示，磷脂黏多糖衍生物网状凝胶的缓释能力明显高于高浓度磷脂凝胶和溶液，且随着黏多糖衍生物含量的提高，缓释时间更长，主要表现为Cmax降低，t1/2延长。如图4所示：包载伊维菌素的高浓度磷脂原位相变凝胶缓释制剂突释较为严重，缓释效果不好，而本发明的磷脂黏多糖衍生物网状凝胶制剂能够明显地改善药物的突释情况。
[0088] （5）皮肤毒性结果将实施例1的产品注射到雄性SD大鼠皮下，30天 后观察注射部位皮肤内外的形态，结果如图5所示：大鼠皮肤内外均匀未处理大鼠的正常皮肤外观结果一样。
[0089] 将实施例1（IVM-MG-3，伊维菌素网状凝胶3），实验例3中的试验例1（IVM-MG-2，伊维菌素网状凝胶2）、试验例2 （IVM-MG-1，伊维菌素网状凝胶1）和试验例3（IVM-PG，伊维菌素高浓度磷脂凝胶）各取1 ml注射至大鼠皮下，并设置溶液组(IVM-Sol，实验例3中试验例4)作为对照，一个月后取出皮肤组织进行H&E染色观察，结果如图6所示，网状凝胶制剂能够明显地降低其副作用，这是由于该制剂具有很好的缓释和抑制突释的能力，与溶液组相比，该制剂能够明显地降低乙醇扩散引起的刺激反应，从而提高其安全性。
[0090] 实验例7体内药动学结果
将实施例2的产品注射到雄性SD大鼠皮下，定时取血，采用高效液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）测定血浆中盐酸阿霉素的含量，考察其缓释效果。
[0091] 将200 220g的SD大鼠随机分为两组，每组6只，按照磷脂壳聚糖十四酸凝胶组（80 ~mg/kg，制备按照实施例2，仅将实施例2中软骨素十八胺换成壳聚糖十四酸）、高浓度磷脂凝胶组（80 mg/kg，按照专利CN102526753A制备，将实验例3中试验例3高浓度磷脂凝胶组的伊维菌素换成200 mg盐酸阿霉素）进行皮下注射给药，在预定的时间点，通过大鼠眼眶取血，置于肝素钠抗凝的试管中，样品经处理后，LC-MS/MS进样检测血药浓度，结果显示，磷脂壳聚糖十四酸凝胶组的缓释能力明显高于高浓度磷脂凝胶和溶液组，主要表现为t1/2延长，盐酸阿霉素能维持较高的有效血药浓度。如图7所示：包载水溶性药物盐酸阿霉素的高浓度磷脂原位相变凝胶缓释效果不好，而本发明的磷脂壳聚糖十四酸凝胶制剂能够明显的改善药物的突释情况，缓释效果较好。
[0092] 各组制剂的药动学参数如下：实验例8
将实施例3的产品注射到雄性SD大鼠皮下，定时取血，采用高效液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）测定血浆中依匹哌唑的含量，与高浓度磷脂凝胶进行比较。
[0093] 将200 220g的SD大鼠随机分为两组，每组6只，按照磷脂透明质酸十六胺凝胶组~（50 mg/kg，按实施例3进行制备 ）和高浓度磷脂凝胶（50 mg/kg，按照实验例3中试验例3高浓度磷脂凝胶组制备，仅将伊维菌素换成200 mg依匹哌唑）的剂量皮下注射给药，在预定的时间点，通过大鼠眼眶取血，置于肝素钠抗凝的试管中，样品经处理后，LC-MS/MS进样检测血药浓度，结果显示，磷脂透明质酸十六胺凝胶组的缓释能力明显高于高浓度磷脂凝胶，主要表现为t1/2延长，依匹哌唑能维持较高的有效血药浓度。如图8所示，虽然高浓度磷脂凝胶可以持续缓释25天，但本发明的磷脂黏多糖衍生物凝胶制剂几乎没有药物的突释，缓释效果更好，可以持续缓释45天。
[0094] 实验例9磷脂黏多糖衍生物缓释制剂对其他药物的缓释特性。
[0095] 采用动物体内实验考察其他药物抑制突释的效果。将下表中药物按照实施例1（表1）、实施例3（表2）和实施例6（表3）处方量及制备方法，仅是替换活性药物制备制剂，得到的其他药物的磷脂黏多糖衍生物缓释制剂和原药溶液（每种药物视具体溶解性而定，用注射用水、乙醇或DMSO配置）注射到雄性SD大鼠皮下，定时取血，采用高效液相色谱-质谱法（LC-MS/MS）测定血浆中各其他药物的Cmax，考察其抑制突释的效果。结果如下表所示：
表1：
表2：
表3：
结果表明，本发明的磷脂黏多糖衍生物网状凝胶制剂能够明显地改善药物的突释情
况。
[0096] 综上所述，磷脂黏多糖衍生物原位相变凝胶可以显著地抑制药物突释，延长缓释时间，降低药物的毒性，并且具有良好的生物相容性。
