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一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法

阅读:816发布:2024-02-07

专利汇可以提供一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,属于食品资源的精深加工技术领域。本 发明 涉及一种利用 溶剂 萃取、柱层析联用技术来纯化制备高纯度的花青素。该方法的特点是:成本低廉、制备工艺简单、生产周期短、所用 试剂 安全无毒、提取纯度高、易于工业化生产等优点,对开发高附加值小叶女贞果产品具有重要意义。本发明制备出的花青素纯度为30%~35%的小叶女贞果花青素,营养安全、稳定、易于存储,在食品、医药、生化等领域有着广泛的应用前景。通过对小叶女贞果实中花青素产品的制备,提高对小叶女贞果实的充分利用,引起对小叶女贞果实纯化花青素技术的重视,从而促使变废置小叶女贞果实为宝,为实现其经济价值提供有 力 保障。,下面是一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法专利的具体信息内容。

1.一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,具体步骤如下:
(1)原料预处理:将新鲜或冷冻的小叶女贞果皮和果肉打浆,制得果浆;
(2)浸提液制备:向果浆中加入质量分数60%~80%的酸化乙醇溶液,果浆与酸化的乙醇溶液的质量比为1:5~8,进行提取,提取后将浸提液与果渣分离;再向所得的果渣中加入质量分数60%~80%的酸化的乙醇溶液,果渣与酸化的乙醇溶液的质量比为1:5~
8,进行提取,提取后将浸提液与果渣分离;合并两次浸提液;每次提取的温度为25~40℃,提取时间的为10~15小时;
(3)粗提液制备:将步骤 (2)得到的浸提液在温度45~55℃、真空
在-0.08~-0.1MPa条件下进行减压浓缩,减压浓缩比为5~10,回收乙醇,得小叶女贞果花青素粗提液;
(4)花青素萃取液制备:将步骤(3)得到的小叶女贞果花青素粗提液与乙酸乙脂按体积比1:1~3混合,充分振荡混匀后进行第一次萃取,收集下层溶液;再将下层水溶液与乙酸乙脂按体积比1:1~3混合,充分振荡混匀后进行第二次萃取,收集下层水溶液;每次萃取时间为2~4小时,萃取温度为25~30℃,萃取次数为2~4次,最后得花青素萃取液;通过萃取除去黄类、脂溶性的蛋白、多糖、色素等杂质;
(5)大孔树脂柱纯化:将步骤(4)中制得的小叶女贞果花青素萃取液加入到预处理后的大孔树脂柱内,除去糖类、蛋白类、弱极性的黄酮类,上样量为树脂体积的1/6~1/8;再用含0.001wt%~0.01wt%HCl的去离子水以0.5~1BV/h的流速洗脱柱子,用Molish反应不断检测流出液,直至还原糖全部洗脱出去为止;然后用酸化的质量分数25%~35%乙醇溶液以2~3BV/h的流速洗脱柱子,柱温保持在15~20℃,收集洗脱液,将洗脱液在温度
45~55℃、真空度在-0.08~-0.1MPa条件下减压浓缩,减压浓缩比是5~10,回收乙醇,真空冷冻干燥,制得纯度在30%~40%的小叶女贞果花青素。
2.如权利要求1所述的一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述的酸化的乙醇溶液为含有0.01%~0.1%盐酸或乙酸的乙醇溶液。
3.如权利要求1所述的一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述的分离可采用板框过滤器或浆渣分离机。
4.如权利要求1所述的一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,其特征在于:步骤(2)所述的减压可采用浓缩罐或旋转蒸发仪。
5.如权利要求1所述的一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,其特征在于:步骤(5)所述的酸化的乙醇溶液为含有0.001%~0.01%盐酸或乙酸的乙醇溶液。
6.如权利要求1所述的一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,其特征在于:步骤(5)中所述大孔树脂柱的预处理是用95%乙醇浸泡10-24h,再用95%乙醇洗至洗脱液加入水中不显浑浊,然后用水洗至无醇,上样。
7.如权利要求1所述的一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,其特征在于:步骤(5)中所述的大孔树脂柱为Amberlite XAD-7HP或AB-8,所用柱子的径高比为1:10~
1:15。

说明书全文

一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于食品资源的精深加工技术领域,具体涉及一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法。

背景技术

[0002] 随着人们生活平不断提高,也提高了对天然有机物质的追求。保护人体健康、防病治病的天然植物性来源的无毒无害的物质,越来越受人们的青睐。然而人工合成花青素,毒副作用较大,世界卫生组织已经禁止使用该物质。因此纯天然制备高纯度小叶女贞果花青素的方法迫在眉睫。
[0003] 小叶女贞(拉丁学名L.quihoui)又叫小白蜡,是被子植物,双子叶植物纲,木犀科女贞属的植物,是一种庭院中经常栽植的重要的观赏性的园艺灌木,主要生长在沟边,路旁,山坡和河边灌丛中,在全国各地都有广泛的分布,资源丰富。
[0004] 小叶女贞的果实,呈椭圆形,黑色,性凉,味苦,果实入药后可以治疗肝炎。其花白色,叶薄革质。根叶也都可以入药,具有清热解毒的功效,可治疗外伤、烫伤等症。它叶小、常绿,且耐修剪,生长迅速,是制作盆景的优良树种。且能够吸收多种有毒气体,是具有优良的抗污染能的树种。
[0005] 到目前为止,花青素的纯化方法主要有溶剂萃取法、铅盐沉淀法、柱层析法、膜分离法、高速逆流色谱法等方法。其中溶剂取法简单快速、但选择性不高,得到的花青素纯度比较低;铅盐沉淀法制得的花青素纯度较高,但铅离子的引入导致花青素产品的安全性较差,使其应用受到极大限制;柱层析法应用过程中,常用甲醇或丙为洗脱剂,且含有较多的有毒溶剂残留;高速逆流色谱法多用于花青素纯品的制备,其应用过程中多用正丁醇、异丙酮等有毒有机溶剂
[0006] 随着科研领域对绿色、纯天然花青素产品制备技术的不断改进,目前国内外对小叶女贞果实花青素纯化研究的相关专利或论文文献,几乎没有。

发明内容

[0007] 本发明采用了溶剂萃取法及层析法联用技术,在简化操作工艺及节约成本的基础上,制得了高纯度的花青素产品,且产品安全可靠,填补了小叶女贞果纯化花青素的技术空白。通过本发明,能够推动对小叶女贞果实的系统研究,能够深入的探索其潜在的药用价值,实现对小叶女贞果实的最大化的合理运用。
[0008] 本发明的目的在于提供一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,本发明所述的纯天然小叶女贞果花青素的制备方法,具体步骤如下:
[0009] (1)原料预处理:将新鲜或冷冻的小叶女贞果皮和果肉打浆,制得果浆;
[0010] (2)浸提液制备:向果浆中加入质量分数60%~80%的酸化乙醇溶液,果浆与酸化的乙醇溶液的质量比为1:5~8,进行提取,提取后将浸提液与果渣分离;再向所得的果渣中加入质量分数60%~80%的酸化的乙醇溶液,果渣与酸化的乙醇溶液的质量比为1:5~8,进行提取,提取后将浸提液与果渣分离;合并两次浸提液;每次提取的温度为25~40℃,提取时间的为10~15小时;
[0011] (3)粗提液制备:将步骤(2)得到的浸提液在温度45~55℃、真空度在-0.08~-0.1MPa条件下进行减压浓缩,减压浓缩比为5~10,回收乙醇,得小叶女贞果花青素粗提液;
[0012] (4)花青素萃取液制备:将步骤(3)得到的小叶女贞果花青素粗提液与乙酸乙脂按体积比1:1~3混合,充分振荡混匀后进行第一次萃取,收集下层水溶液;再将下层水溶液与乙酸乙脂按体积比1:1~3混合,充分振荡混匀后进行第二次萃取,收集下层水溶液;每次萃取时间为2~4小时,萃取温度为25~30℃,萃取次数为2~4次,最后得花青素萃取液;通过萃取除去黄酮类、脂溶性的蛋白、多糖、色素等杂质;
[0013] (5)大孔树脂柱纯化:将步骤(4)中制得的小叶女贞果花青素萃取液加入到预处理后的大孔树脂柱内,除去糖类、蛋白类、弱极性的黄酮类,上样量为树脂体积的1/6~1/8;再用含0.001wt%~0.01wt%HCl的去离子水以0.5~1BV/h的流速洗脱柱子,用Molish反应不断检测流出液,直至还原糖全部洗脱出去为止;然后用酸化的质量分数
25%~35%乙醇溶液以2~3BV/h的流速洗脱柱子,柱温保持在15~20℃,收集洗脱液,将洗脱液在温度45~55℃、真空度在-0.08~-0.1MPa条件下减压浓缩,减压浓缩比是5~
10,回收乙醇,真空冷冻干燥,制得纯度在30%~40%的小叶女贞果花青素。
[0014] 其中,步骤(2)所述的酸化的乙醇溶液为含有0.01wt%~0.1wt%盐酸或乙酸的乙醇溶液,步骤(5)所述的酸化的乙醇溶液为含有0.001%~0.01%盐酸或乙酸的乙醇溶液。
[0015] 优选地,步骤(2)中的分离可采用板框过滤器或浆渣分离机;
[0016] 优选地,步骤(3)中可采用浓缩罐或旋转蒸发仪进行减压。
[0017] 进一步地,大孔树脂柱的预处理是用质量分数95%乙醇浸泡10-24h,再用质量分数95%乙醇洗至洗脱液加入水中不显浑浊,然后用水洗至无醇,上样。
[0018] 更进一步地,步骤(5)中所述的大孔树脂柱为Amberlite XAD-7HP或AB-8,所用柱子的径高比为1:10~1:15。
[0019] 与现有的技术相比,本发明具有如下优点:
[0020] (1)本发明属女贞果资源的精深加工技术,采用废置女贞果实为原料,变废为宝,成本低廉,能促进小叶女贞果实高附加值成分的综合开发利用,提高经济价值,从而提高产品的竞争力。
[0021] (2)本发明运用了萃取及柱层析联用技术,操作工艺简单,参数条件温和,生产周期短,易于工业化生产。
[0022] (3)操作过程中采用的有机溶剂安全无毒、均可回收再利用,从而节约生产成本。
[0023] (4)制备出的小叶女贞果花青素产品中的花青素种类简单,易于开展深度纯化及功能活性研究。
[0024] (5)制备出的小叶女贞果花青素产品为纯天然绿色产品,保持了果实中原有花青素的种类及特性,能够满足生产保健食品如眼保健食品、预防心脑血管疾病食品等生产的原料需求,又能为高端药品、化妆品的生产提供优等的原材料。附图说明
[0025] 图1为本发明制得的纯度为35%的小叶女贞果花青素产品超高效液相色谱图。
[0026] 图中:1.矢车菊素-3-O-半乳糖苷、2.牵花素、3-O-半乳糖苷[0027] 从图中可以看出,矢车菊素-3-O-半乳糖苷的出峰时间在19.2min左右,牵牛花素、3-O-半乳糖苷的出峰时间在23.5min左右,说明女贞果花青素种类简单,易于分离单体,开展深度纯化及功能活性研究。

具体实施方式

[0028] 实施例1
[0029] (1)取校园内小叶女贞鲜果100g,将小叶女贞鲜果打浆,制得果浆,匀浆后与500mL
[0030] 含0.1wt%HCl的质量分数60%的乙醇溶液混合,25℃下闭光提取12小时后,提取后将浸提液与果渣分离;再向所得的果渣中加入500mL含0.1wt%HCl的质量分数60%的乙醇溶液混合,30℃下提取10小时,过滤,合并两次滤液,后在温度45℃、真空度在-0.08MPa条件下利用浓缩罐进行减压浓缩至50mL,回收乙醇,得女贞果花青浸提液;
[0031] (2)将上述小叶女贞果花青素粗提液与100mL的乙酸乙脂混合,充分振荡混匀后进行第一次萃取,收集下层水溶液;再将下层水溶液与乙酸乙脂按等体积混合,充分振荡混匀后进行第二次萃取,收集下层水溶液;每次萃取时间为2小时,萃取温度为25℃,萃取次数为3次,最后得花青素萃取液;通过萃取除去黄酮类、脂溶性的蛋白、多糖、色素等杂质;
[0032] (3)将15mL的花青素萃取液加入到径高比为1:15的Amberlite XAD-7HP树脂柱上,其中,大孔树脂柱是用质量分数95%乙醇浸泡10h,再用质量分数95%乙醇洗至洗脱液加入水中不显浑浊,然后用水洗至无醇,上样;上样量与柱填料的体积比例为1:6,先用含0.005wt%HCl的去离子以0.5BV/h的流速冲洗,用Molish反应不断检测流出液,直至还原糖全部洗脱出去为止,再用含0.005wt%HCl的质量分数30%的乙醇以3BV/h的流速洗柱,柱温保持在15℃,收集洗脱液,将洗脱液在温度45℃、真空度在-0.08MPa条件下减压浓缩,冷冻干燥,制得纯度35%的小叶女贞果花青素75mg;
[0033] 实施例2
[0034] (1)取栽培的小叶女贞冻果300g,将小叶女贞鲜果打浆,制得果浆,匀浆后与1500mL含0.05wt%HCl的质量分数70%的乙醇混合,30℃下闭光提取12小时后,提取后将浸提液与果渣分离;再向所得的果渣中加入500mL含0.1wt%HCl的质量分数60%的乙醇溶液混合,30℃下提取10小时,过滤,合并两次滤液,后在温度45℃、真空度在-0.08MPa条件下利用浓缩罐进行减压浓缩至200mL,回收乙醇,得女贞果花青素浸提液;
[0035] (2)将女贞果花青素粗提液与300mL的乙酸乙脂混合,萃取三次,每次的萃取时间为4小时,温度为25℃,回收乙酸乙脂,收集下层水溶液,得花青素萃取液;
[0036] (3)将15mL的花青素萃取液加入到径高比为1:10的AB-8大孔树脂柱上,其中,大孔树脂柱是用质量分数95%乙醇浸泡10h,再用质量分数95%乙醇洗至洗脱液加入水中不显浑浊,然后用水洗至无醇,上样;上样量与柱填料的比例为1:8,先用含0.005wt%HCl的去离子1BV/h的流速冲洗,用Molish反应不断检测流出液,直至还原糖全部洗脱出去为止,再用含0.005wt%HCl的质量分数25%的乙醇以2BV/h的流速洗柱,柱温保持在20℃,收集洗脱液,将洗脱液在温度45℃、真空度在-0.08MPa条件下减压浓缩,冷冻干燥,制得纯度35%的小叶女贞果花青素280mg。
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