技术领域
[0001] 本
发明涉及一种液基薄层细胞保存液及其制备方法，属于
宫颈细胞病理检测技术领域。
背景技术
[0002] 液基细胞保存液是液基细胞学检测技术主要耗材。TCT技术已成为筛检
宫颈癌的最好推荐方法之一，为宫颈癌的早期诊断和
治疗提供了非常明确的诊断依据，作为宫颈病变的筛查方法，采用液基薄层细胞学检测技术对异常细胞的诊断正确率提高了13％，对鳞状上皮以上病变的检出率提高了65％，具有传统涂片无法比拟的优点。TCT技术中最为关键的
试剂是细胞保存液。目前，市场上常用40％-50％醇类作为保存液，但是醇类浓度大于50％可以固定流动性高的
蛋白质，但随即蛋白质就形成
沉积物，不能很好的转移到
载玻片，这给细胞学检查带来困扰，同时会导致细胞表面
变形。若小于20％细胞不能长时间固定保存，易导致细胞退化。
[0003] 广泛的推广应用显得尤为迫切和重要，因此开发出合适的宫颈脱落细胞保存液已迫在眉睫。由此，市场上出现了专
门用于脱落细胞保存的溶液，如美国新柏氏生产的保存液,该保存液是与其机器配套使用的试剂，但是临床价格昂贵，并且存在血细胞处理和细胞核缩小的
缺陷。为降低应用成本，更好的保存和处理细胞。本发明的目的，就是要提供一种即能够较好的保持细胞结构的
稳定性，又能保持PH值稳定，细胞不易成团结
块，便于病理检验的液基细胞保存液。
发明内容
[0004] 本发明针对上述问题，从而提供了一种即能够较好的保持细胞结构的稳定性，又能保持PH值稳定，细胞不易成团结块，便于病理检验的液基细胞保存液及其制备方法。
[0005] 具体的技术方案如下：
[0006] 一种液基薄层细胞保存液，其组成成分按
质量百分比计包括：
[0007] pH缓冲液5％-6.5％、螯合剂0.3％-0.5％、渗透压维持剂0.2％-0.8％、细胞
固定剂10％-26％、
防腐剂0.1-5％、溶血剂0.5-10％、
水溶性黏合剂1％-4％、超纯水66-80％。
[0008] 进一步的，pH缓冲液为
磷酸盐缓冲液或三羟甲基
氨基甲烷
盐酸缓冲液中的一种。
[0009] 进一步的，pH缓冲液为磷酸钠缓冲液，磷酸钠缓冲液是由磷酸二氢钠和二水磷酸氢钠混合后加超纯水稀释配制而成的。
[0010] 进一步的，pH缓冲液的pH值为6.8—7.4。
[0011] 进一步的，螯合剂为
乙二胺四乙酸二纳。
[0012] 进一步的，渗透压维持剂为
氯化钠、氯化
钙、
碳酸氢钠中的一种或多种的组合。
[0013] 进一步的，细胞固定剂为无水
乙醇、多聚甲
醛中的一种或多种的组合。
[0014] 进一步的，无水乙醇的纯度为99.9％。
[0015] 进一步的，防腐剂为苯
甲酸钠盐或
苯甲酸钾盐中的一种。
[0016] 进一步的，溶血剂为氰化高
铁、烷基三甲胺或
冰醋酸的一种。
[0018] 一种液基薄层细胞保存液的制备方法，其步骤如下：
[0019] 1)将配方量的pH缓冲液、螯合剂、渗透压维持剂、细胞固定剂、防腐剂、溶血剂溶解于超纯水中形成溶液a，其中，超纯水的用量为配方量超纯水质量的70％；
[0020] 2)向溶液a中加入配方量的水溶性黏合剂，搅拌均匀，得到溶液b；
[0021] 3)向溶液b中加入余量的超纯水，搅拌均匀。
[0022] 进一步的，步骤1)、步骤2)和步骤3)均在常温、湿度<90％RH的条件下进行。
[0023] 进一步的，细胞保存液可用于人体脱落细胞的处理。
[0024] 进一步的，细胞保存液可用于宫颈细胞、痰液、尿液或胸腹水的处理。
[0025] 在本发明的组成成分中，氯化钠和磷酸二氢钠组成的缓冲系统，可用于调节液基细胞保存液的pH，有利于稳定平衡细胞内、外的压
力；
[0026] 缓冲系统的调节机理为：当液基细胞保存液固定细胞时，pH值过高时，多余的
碱就会与磷酸二氢根离子形成磷酸氢根离子，降低溶液的pH值；当pH值过低时，磷酸氢根离子就会与酸中的氢离子形成磷酸二氢根离子，提高溶液的pH值，有助于保持溶液恒定的pH值，使细胞不会在细胞固定中因pH变化而破裂；
[0027] 综上，通过氯化钠和磷酸二氢钠的组合作用，将细胞置于液基细胞保存液后，细胞处于合理的渗透性状态，既不会大量吸水而破裂，也不会失去水分而收缩，能避免渗透压造成细胞膜、
细胞质膜和细胞核膜的破裂，从而避免细胞破裂，保持细胞的正常形态，进一步提高细胞检测结果的可靠性。
[0028] 宫颈粘液中正常的pH为7.0-8.2，偏弱碱性，但是病变后的宫颈粘液pH降低，变成酸性；在用液基薄层细胞保存液对宫颈粘液内的细胞进行保存时，使本
申请的液基薄层保存液pH在6-7之间，偏弱酸性，病变后酸性的宫颈粘液内脱落细胞进入弱酸性的液基薄层保存液中时，脱落细胞所处的环境pH不会变化较大，不会从酸性环境直接过渡到碱性环境，避免细胞在固定时pH发生较大变化而破裂，进一步提尚细胞固定的完整性和可靠性。
[0029] 本发明的有益效果为：
[0030] 本发明降低了应用成本，能够更好的保存和处理细胞；通过本发的保存液，即能够较好的保持细胞结构的稳定性，又能保持PH值稳定，细胞不易成团结块，便于病理检验。
具体实施方式
[0031] 为使本发明的技术方案更加清晰明确，下面对本发明进行进一步描述，任何对本发明技术方案的技术特征进行等价替换和常规推理得出的方案均落入本发明保护范围。
[0033] 本实施例的细胞保存液的组成成分按质量百分比计包括：
[0034] 磷酸钠缓冲液5.5％、乙二胺四乙酸二纳0.4％、氯化钠0.5％、无水乙醇14.2％、多聚甲醛2％、苯甲酸钠2％、冰醋酸1.2％、聚乙二醇2.2％、超纯水72％。
[0035] 其中：
[0036] 磷酸钠缓冲液是由磷酸二氢钠和二水磷酸氢钠混合后加超纯水稀释配制而成的；磷酸钠缓冲液的pH值为6.8—7.4。
[0037] 无水乙醇的纯度为99.9％。
[0038] 无水乙醇、氯化钠、乙二胺四乙酸二纳和冰醋酸均为分析纯试剂。
[0039] 本实施例所述的细胞保存液的制备方法为：
[0040] 1)将配方量的磷酸钠缓冲液、乙二胺四乙酸二纳、氯化钠、无水乙醇、多聚甲醛、苯甲酸钠和冰醋酸溶解于超纯水中形成溶液a，其中，超纯水的用量为配方量超纯水质量的70％；
[0041] 2)向溶液a中加入配方量的水溶性黏合剂，搅拌均匀，得到溶液b；
[0042] 3)向溶液b中加入余量的超纯水，搅拌均匀。
[0043] 步骤1)、步骤2)和步骤3)均在常温、湿度<90％RH的条件下进行。
[0044] 实施例二
[0045] 本实施例的细胞保存液的组成成分按质量百分比计包括：
[0046] 磷酸钠缓冲液5％、乙二胺四乙酸二纳0.3％、
氯化钙0.2％、无水乙醇12％、苯甲酸钠0.2％、烷基三甲胺5％、聚乙二醇3％、超纯水74.5％。
[0047] 其中：
[0048] 磷酸钠缓冲液是由磷酸二氢钠和二水磷酸氢钠混合后加超纯水稀释配制而成的；磷酸钠缓冲液的pH值为6.8—7.4。
[0049] 无水乙醇的纯度为99.9％。
[0050] 无水乙醇、氯化钠、乙二胺四乙酸二纳和冰醋酸均为分析纯试剂。
[0051] 本实施例所述的细胞保存液的制备方法为：
[0052] 1)将配方量的磷酸钠缓冲液、乙二胺四乙酸二纳、氯化钠、无水乙醇、多聚甲醛、苯甲酸钠和冰醋酸溶解于超纯水中形成溶液a，其中，超纯水的用量为配方量超纯水质量的70％；
[0053] 2)向溶液a中加入配方量的水溶性黏合剂，搅拌均匀，得到溶液b；
[0054] 3)向溶液b中加入余量的超纯水，搅拌均匀。
[0055] 步骤1)、步骤2)和步骤3)均在常温、湿度<90％RH的条件下进行。
[0056] 实施例三
[0057] 本实施例的细胞保存液的组成成分按质量百分比计包括：
[0058] 三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液6.5％、乙二胺四乙酸二纳0.5％、
碳酸氢钠0.8％、多聚甲醛15％、苯甲酸钠0.2％、冰醋酸2％、聚乙二醇1.5％、超纯水73.5％。
[0059] 其中：
[0060] 磷酸钠缓冲液是由磷酸二氢钠和二水磷酸氢钠混合后加超纯水稀释配制而成的；磷酸钠缓冲液的pH值为6.8—7.4。
[0061] 无水乙醇的纯度为99.9％。
[0062] 无水乙醇、氯化钠、乙二胺四乙酸二纳和冰醋酸均为分析纯试剂。
[0063] 本实施例所述的细胞保存液的制备方法为：
[0064] 1)将配方量的磷酸钠缓冲液、乙二胺四乙酸二纳、氯化钠、无水乙醇、多聚甲醛、苯甲酸钠和冰醋酸溶解于超纯水中形成溶液a，其中，超纯水的用量为配方量超纯水质量的70％；
[0065] 2)向溶液a中加入配方量的水溶性黏合剂，搅拌均匀，得到溶液b；
[0066] 3)向溶液b中加入余量的超纯水，搅拌均匀。
[0067] 步骤1)、步骤2)和步骤3)均在常温、湿度<90％RH的条件下进行。
[0068] 实施例四
[0069] 基于实施例一、实施例二和实施例三制备得到的细胞保存液，其所保存的细胞为宫颈脱落细胞，制片方法为选择性沉降法。
[0070] 综上所述，本发明的细胞保存液中各个组分合理配比，常温下保存更长，最长能达到2年；能充分溶解粘液和部分破坏红细胞；制片效果具有细胞分布非常均匀，细胞形态完好，胞浆与细胞核分界清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，可提供用于其他部位细胞学检查的专用液基保存液，充分保留了有诊断意义的细胞成分；配置成本较低，易于推广。
[0071] 以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉
本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围内。
