一种基于Cytb基因序列的和贝氏的分子鉴别方法
专利汇可以提供一种基于Cytb基因序列的和贝氏的分子鉴别方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种基于Cytb基因序列的 和贝氏 的分子 鉴别 方法。该方法包含以下步骤：分别提取 和贝氏基因组DNA；(2)PCR扩增 和贝氏 的细胞色素b基因Ctyb；(3)扩增产物纯化后，直接测序，的Cytb基因扩增产物如SEQ ID NO.1所示,贝氏 的Cytb基因扩增产物如SEQ ID NO.2所示；Cytb基因第27位点 碱 基是G的为 ，若该位点是A的为贝氏 。该方法可以快速、简便、准确、有效地鉴别和贝氏 ，结果 稳定性 好，重复率高，填补了目前国内分子 生物 学标准鉴别 和贝氏 的空白，也有利于开展 与贝氏 物种多样性和遗传多样性研究。，下面是一种基于Cytb基因序列的和贝氏的分子鉴别方法专利的具体信息内容。
1.一种 和贝氏 的分子鉴别方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)分别提取待鉴定的 和贝氏 基因组DNA；
(2)以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增 和贝氏 的细胞色素b基因Ctyb，PCR扩增上游引物为L14724：SEQ ID NO.1，下游引物为H15915：SEQ ID NO.2；
(3)扩增产物纯化后，直接测序，的Cytb基因扩增产物如SEQ ID NO.3所示,贝氏 的Cytb基因扩增产物如SEQ ID NO.4所示；Cytb基因第27位点碱基是G的为 若该位点是A的为贝氏
2.根据权利要求1所述的分子鉴别方法，其特征在于所述的PCR的反应体系为50μL：
100ng/μL的模板DNA 1μL，PCR缓冲液5μL，dNTP混合液4μL，每种dNTP 0.1mmol/L，10μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2.5IU的Taq酶；双蒸水36μL；所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl2，0.01％(g/100ml)明胶组成；PCR扩增反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸90s，经35个循环后再72℃延伸10min。
3.一种用于 和贝氏 的分子鉴别的引物对，其特征在于上游引物为L14724：SEQ ID NO.1，下游引物为H15915：SEQ ID NO.2。
4.权利要求3所述的引物对在分子遗传鉴别 和贝氏 中的应用。
5.权利要求3所述的引物对在制备 和贝氏 分子鉴别试剂中的应用。
6.一种 和贝氏 分子鉴别试剂，其特征在于包含权利要求3所述的引物对。
7.根据权利要求6所述的 和贝氏 分子鉴别试剂，其特征在于所述的 和贝氏 分子鉴别试剂还包括PCR缓冲液和dNTP混合液，所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，
0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl2，0.01％明胶组成。
一种基于Cytb基因序列的 和贝氏 的分子鉴别方法
技术领域
背景技术
发明内容
0.01％(g/100ml)明胶组成；PCR扩增反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性40s，55℃退火
40s，72℃延伸90s，经35个循环后再72℃延伸10min。
具体实施方式
200μL双蒸水溶解，紫外分光光度计测其OD值并稀释至100ng/μL，-20℃保存备用。
30mmol/L MgCl2，0.01％明胶)；dNTP混合液4μL(每种dNTP 0.1mmol/L)；上、下游引物(10μmol/L)各1μL，2μL Taq酶(2.5IU)；双蒸水36μL。扩增反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸90s，经35个循环后再72℃延伸10min。
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