技术领域
[0001] 本
发明属于宠物
生物制品技术领域，具体涉及一种猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液制备方法。
背景技术
[0002] 猫泛白细胞减少症，是猫的一种急性高度
接触性传染病。潜伏期2-9天，临床症状与年龄及病毒毒
力有关，幼猫多呈急性发病，体温升高40℃以上，呕吐严重会突然死亡。6个月以上的猫多呈亚急性临床，发热至40℃左右，1-2天后降到常温，3-4天后体温再次升高，即双相热型。病猫精神不振，厌食，顽固性呕吐，呕吐物呈黄绿色，
口腔及眼，鼻有粘性分泌物，
粪便粘稠样，后期带血，严重脱
水，贫血。
[0003] 卵黄抗体具有性质稳定、特异性强、制备成本低、口服安全等优点在
家禽、
家畜传染病的防治中已得到广泛的应用，但在宠物中由于保存期短，长途运输不方便等因素导致其应用较为被动，鉴于此，本发明从保护液的
角度，帮助卵黄抗体解决
现有技术的一些弊端。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于提供一种猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液，该制剂成本经济，可以保障抗体
质量稳定，使用方便，无生物毒性，有利于环境卫生及
食品安全。
[0005] 为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
[0006] 一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液包括的组分及其重量份数比分别为：魔芋胶20-40份；
马齿苋黄
酮20-30份；
蔗糖10-30份；乳酸菌5-10份；
磷酸缓冲液800-1000份。
[0007] 一种如
权利要求1所述的一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该制备方法的步骤如下：
[0008] 一、保护液的制备
[0009] (1)按照重量配比分别称取魔芋胶、马齿苋黄酮和蔗糖用加入磷酸缓冲液，搅拌溶解，然后100-120℃高温高湿灭菌10min，得溶液A；
[0010] (2)按照重量配比将乳酸菌配成菌液B，至2-8℃保存备用；
[0011] (3)将溶液A与菌液混合均匀，分装后1ml/份，经
真空冷冻保存。
[0012] 二、猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
[0013] 1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症
疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括
基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
[0014] 2、清洗消毒步骤二-1中所得高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
[0015] 3、对步骤二-2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌0.5～1.5小时，室温放置2～6小时后，以4200～5500r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％
硫酸酯葡聚糖，搅拌10-20分钟，用孔径5μm和1μm的筒式
滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空
纤维超滤柱进行浓缩3～4倍后再用NaOH调整PH值为6.8～7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
[0016] 三、猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液的应用
[0017] 1、将步骤二-3所述抗体滤液与步骤一得到的保护液在无菌条件下按体积比1:1混合均匀，即用于猫泛白细胞减少症的卵黄抗体保护液。
[0018] 本发明的优点及有益效果在于：
[0019] 1.本发明提供了一种方法简单，成本经济，保障抗体质量稳定，使用方便，无生物毒性，有利于环境卫生及食品安全的保护液。
[0020] 2.本发明制备的保护液具有魔芋胶内含高膳食纤维，可以促进消化，马齿苋黄酮可以抗菌抗
肿瘤，避免猫泛白细胞减少症引起的继发感染。
具体实施方式
[0021] 本发明通过以下
实施例进一步详述。需要说明的是：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
[0022] 本发明所涉及的魔芋胶、马齿苋黄酮、蔗糖、乳酸菌、磷酸缓冲液均可以从市场买到。
[0023] 实施例1
[0024] 一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液包括的组分及其重量份数比分别为：魔芋胶20g、马齿苋黄酮20g、蔗糖10g、乳酸菌5g、磷酸缓冲液800g。
[0025] 一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液制备方法的步骤如下：
[0026] 一、保护液的制备
[0027] (1)按照重量分别称取魔芋胶、马齿苋黄酮和蔗糖用加入磷酸缓冲液，搅拌溶解，然后105℃高温高湿灭菌10min，得溶液A；
[0028] (2)按照重量配比将乳酸菌配成菌液B，至2-8℃保存备用；
[0029] (3)将溶液A与菌液混合均匀，分装后1ml/份，经真空冷冻保存。
[0030] 二、猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
[0031] 1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
[0032] 2、清洗消毒高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
[0033] 3、对步骤2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌0.55小时，室温放置2小时后，以4200r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌10分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩3倍后再用NaOH调整PH值为6.8，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
[0034] 三、猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液的应用
[0035] 1、将步骤二-3所述抗体滤液与步骤一得到的保护液在无菌条件下按体积比1:1混合均匀，即用于猫泛白细胞减少症的卵黄抗体保护液。
[0036] 实施例2
[0037] 一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液包括的组分及其重量份数比分别为：魔芋胶40g、马齿苋黄酮30g、蔗糖30g、乳酸菌10g、磷酸缓冲液1000g。
[0038] 一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液制备方法的步骤如下：
[0039] 一、保护液的制备
[0040] (1)按照重量分别称取魔芋胶、马齿苋黄酮和蔗糖用加入磷酸缓冲液，搅拌溶解，然后120℃高温高湿灭菌10min，得溶液A；
[0041] (2)按照重量配比将乳酸菌配成菌液B，至2-8℃保存备用；
[0042] (3)将溶液A与菌液混合均匀，分装后1ml/份，经真空冷冻保存。
[0043] 二、猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
[0044] 1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
[0045] 2、清洗消毒高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
[0046] 3、对步骤2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌1.5小时，室温放置6小时后，以5500r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌20分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩4倍后再用NaOH调整PH值为7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
[0047] 三、猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液的应用
[0048] 1、将步骤二-3所述抗体滤液与步骤一得到的保护液在无菌条件下按体积比1:1混合均匀，即用于猫泛白细胞减少症的卵黄抗体保护液。
[0049] 实施例3
[0050] 猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
[0051] 1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
[0052] 2、清洗消毒高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
[0053] 3、对步骤2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌1.5小时，室温放置6小时后，以5500r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌20分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩4倍后再用NaOH调整PH值为7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
[0054] 临床试验
[0055] 1、试验方法及处理
[0056] 本发明的使用方法：
[0057] 1组：按实施例1制得含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液；
[0058] 2组：按实施例2制得含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液；
[0059] 3组：按实施例3制得猫泛白细胞减少症卵黄抗体。
[0060] 2、试验分组及处理
[0061] 2018年于青岛某宠物医院3只确诊猫泛白细胞减少症的家猫，用药后观察10天，试验结果如下表1。
[0062] 表1本发明效果试验
[0063]
[0064] 试验二
[0065] 1、实验分组及处理
[0066] 1组：按实施例1制得含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液；
[0067] 2组：按实施例3制得猫泛白细胞减少症卵黄抗体。
[0068] 3组：市售猫泛白细胞减少症卵黄抗体。
[0069] 将上述三种液体各两瓶，1ml/瓶，分为两组，一组保存于2-8℃，二组保存于20-25℃,分别于6个月和12个月测抗体效价，结果如表2
[0070] 表2本发明保存期效果试验
[0071]
[0072] 结论6
[0073] 根据表1本发明在协助猫泛白细胞减少症卵黄抗体
治疗猫泛白细胞减少症方面效果显著；从表2的保存期抗体效价消减情况来看，有保存液的泛白细胞减少症卵黄抗体的室温下12个月效价还可以维持在1:256。
