[0006] 下面罗列检索到的
现有技术及文献资料,以备正文引用:[1]RUGGE M, CORREA P, DIXON M F, et al. Gastric mucosal atrophy:
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[0007] 本发明的第一目的在于提供一种调节萎缩性胃炎免疫功能的物质;第二目的在于提供所述的调节萎缩性胃炎免疫功能的物质的制剂;第三目的在于提供所述的调节萎缩性胃炎免疫功能的物质的应用。
[0017] 本发明所述的调节萎缩性胃炎免疫功能的物质为新川芎内酯、齐墩果酸、白术内酯Ⅰ、桉油精、异鼠李素和黄连碱中的一种或几种。其中,新川芎内酯和黄连碱可促进CD40表达,齐墩果酸、白术内酯I、异鼠李素用于促进CD55表达,齐墩果酸、白术内酯I、异鼠李素、桉油精用于促进CD44表达,新川芎内酯和黄连碱用于促进TRAF6表达,从而激活T淋巴细胞、引起分泌免疫球蛋白分泌,增强细胞免疫和体液免疫,改善萎缩性胃炎伴免疫功能低下。
[0021] 本发明所述的调节萎缩性胃炎免疫功能的物质的制剂为所述的调节萎缩性胃炎免疫功能的物质中加入药学上可接受的辅料制备的片剂、胶囊剂、丸剂、针剂、缓释剂、控释剂、粉剂或口服液体制剂。
[0023] 针对摩罗丹治疗萎缩性胃炎伴免疫功能低下药效物质基础不清楚的问题,本发明通过对摩罗丹所含化合物进行靶标预测和生物功能富集分析,阐释摩罗丹治疗萎缩性胃炎的网络调节机制。进一步,通过实验验证了摩罗丹治疗萎缩性胃炎伴免疫功能低下的药效物质。
[0028] 3.摩罗丹成分的生物功能富集分析为了评价摩罗丹成分和萎缩性胃炎相关生物功能之间的关系,发明人使用Fisher精确检验度量步骤2预测的摩罗丹成分靶标谱和萎缩性胃炎相关生物功能的显著性水平并筛选出和显著的生物功能(P<0.05)。进一步地,基于发明人前期研究建立的、由细胞增殖、分化、凋亡、DNA损伤及其修复、免疫-代谢平衡等构成的生物功能模块网络中,本发明将摩罗丹成分显著富集的生物功能映射到该生物功能网络中,发现摩罗丹成分显著富集的生物功能主要分布在细胞增殖、分化、凋亡、DNA损伤、免疫、代谢、消化生物功能模块,这样就构成了摩罗丹成分干预的生物功能模块网络,进一步地识别出摩罗丹调节萎缩性胃炎相关免疫生物功能模块的成分。
[0029] 针对免疫、细胞凋亡、细胞增殖三个关键生物功能模块,发明人分别构建了该免疫(图3)、细胞凋亡(图4)、细胞增殖(图5)生物功能模块的化合物-分子网络。其中,化合物选取的规则为:(1)中国药典2015年版一部中标明的含量测定成分;(2)文献报道的中药含量较多的成分或中药发挥药效的主要成分;(3)预测靶标能够和至少一个前述我们分析出的摩罗丹整体靶标相关生物功能/信号通路显著富集的成分;(4)wQED≥0.3,具有良好的成药性。分子的选取规则为:(1)能够表征该生物功能模块变化的分子;(2)在至少一个化合物的预测可药靶标谱的前100位的分子。
[0031] 从ChEMBL数据库和文献收集摩罗丹所含成分对人源细胞系的活性信息,选择公共数据中活性较好(IC50或IG50的中位数<100μM))的成分作为HTS2实验候选成分,进而考虑采购货源、纯度等,最后选择了6个摩罗丹成分作为HTS2实验成分。实验化合物信息(包括所属药材、购买公司、纯度等)如表2所示。每个成分设置一个HTS2实验浓度。以公共数据中的成分活性(IC50或IG50)的中位数作为成分实验初始设定浓度。
[0032] HTS2实验检测一组从OMIM数据库、KEGG数据库等搜集得到的,以及利用疾病相关基因预测算法CIPHER计算得到的与炎症和炎癌转化相关的基因,这些基因参与免疫、细胞凋亡、细胞增殖等生物功能,并包括若干管家基因。测定实验组和对照组CD40、CD44、CD55、TRAF6等基因的表达量,作为评价萎缩性胃炎免疫功能的客观指标。
[0033] 同时,测定BAX、BAD、CASP3的表达水平,作为免疫功能低下细胞凋亡的检测指标。BAX是与BCL-2同源的水溶性相关蛋白,是BCL-2基因家族中细胞凋亡促进基因,BAX的过度表达可拮抗BCL-2的保护效应而使细胞趋于死亡。目前多和BCL-2一起用于肿瘤的研究。BAX 基因是人体最主要的凋亡基因,属于Bcl-2 基因家族,编码的BAX 蛋白可与Bcl-2 形成异二聚体,对Bcl-2 产生阻抑作用。研究发现BAX/Bcl-2 两蛋白之间的比例关系是决定对细胞凋亡(Apoptosis)抑制作用强弱的关键因素,因此认为,BAX 是极重要的促细胞凋亡(Apoptosis)基因之一 。BAX 的表达更为广泛,它可出现在肝细胞、肾小管上皮细胞、呼吸系上皮细胞和支气管平滑肌、血管平滑肌细胞中。CASP 3是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶,也是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分。
[0034] 测定CDK2、CDK4、CDK6 、CCND1的表达水平,作为免疫功能低下细胞增殖的检测指标。CDK,即周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases)是与细胞周期进程相对应的一套Ser/Thr激酶系统。各种CDK沿细胞周期时相交替活化,磷酸化相应底物,使细胞周期事件有条不紊地进行下去。周期蛋白依赖性蛋白激酶,是一组丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,CDK通过对丝氨酸/苏氨酸蛋白的化学作用驱动细胞周期, 和周期蛋白cyclin协同作用,是细胞周期调控中的重要因子。CDK可以和cyclin结合形成异二聚体,其中CDK为催化亚基,cyclin为调节亚基,不同的cyclin—CDK复合物,通过CDK活性,催化不同底物磷酸化,而实现对细胞周期不同时相的推进和转化作用。CDK的活性依赖于其正调节亚基cyclin的顺序性表达和其负调节亚基CKI(cyclin dependent kinase inhibitor,CDK抑制因子)的浓度。同时,CDK的活性还受到磷酸化和去磷酸化,以及癌基因和抑癌基因的调节。CDK家族有CDK 1-8等8种,每种CDK结合不同类型的cyclin形成复合物,调节细胞从G1期过渡到S期或G2期过渡到M期以及退出M期的进程。
[0038] 同时,实验还验证了摩罗丹部分化合物可以促进免疫功能低下状态下的细胞凋亡相关分子表达,黄连碱可促进BAX、BAD、CASP3表达(图7)。另外,实验结果显示摩罗丹中部分化合物可抑制免疫功能低下状态下的细胞周期及细胞增殖功能相关分子表达,白术内酯I、齐墩果酸、异鼠李素、桉油精可抑制CDK2、CDK4表达(图8), 白术内酯I、齐墩果酸、异鼠李素可抑制CDK6、CCND1表达(图8)。