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腮腺炎病毒IgM抗体金标检测 试剂盒及检测方法

阅读：997发布：2021-05-29

专利汇可以提供腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒及检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供一种腮腺炎病毒IgM 抗体金标检测试剂盒及检测方法，试剂盒包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。能够简化人体呼吸道疾病血清样本中腮腺炎病毒的检测流程。利用该种检测试剂盒检测腮腺炎病毒IgM抗体，不对任何实验仪器、环境或者操作人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。，下面是腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒及检测方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，其特征在于，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；其中，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜、所述吸水滤纸依次设置在所述反应支持物上；所述样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。
2.根据权利要求1所述的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，其特征在于，所述吸水滤纸长度为20.0mm，所述吸水滤纸与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为
1.5mm。
3.根据权利要求1所述的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金垫的长度为7.0mm，所述胶体金垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为
1.5mm。
4.根据权利要求1所述的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起的重叠长度为3.0mm。
5.根据权利要求1所述的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金垫为含有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体的胶体金垫。
6.根据权利要求1所述的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近所述胶体金垫的一侧并含有腮腺炎病毒核衣壳蛋白可溶性S抗原，所述质控条带设置于远离所述胶体金垫的一侧并含有羊抗鼠IgG多克隆抗体。
7.根据权利要求1所述的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，其特征在于，所述反应支持物为塑料。
8.一种应用腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒进行腮腺炎病毒检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将待检样本用稀释液处理；其中，所述待检样本为血清；
(2)将稀释好的样本滴加至腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒的样品垫上；样本将依次沿着反应支持物上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动；
(3)若所述样本中含有腮腺炎病毒IgM抗体，则腮腺炎病毒中的IgM抗体在经过所述胶体金垫的过程中，与所述胶体金垫标记的抗人IgM单克隆抗体特异性结合形成复合物；所述复合物在经过所述硝酸纤维素膜的过程中，依次与核衣壳蛋白可溶性S抗原以及羊抗鼠IgG多克隆抗体特异性结合；则检测条带处出现红色或紫红色，样本为阳性；
若所述样本中不含有腮腺炎病毒IgM抗体，则检测条带处未出现红色或紫红色，样本为阴性：
(4)如果质控条带处出现红色或紫红色，则表明实验结果有效；如果质控条带处未出现红色或紫红色，则表明胶体金失效或者实验操作有误，实验结果无效。
9.根据权利要求8所述的腮腺炎病毒IgM抗体检测的方法，其特征在于，步骤(1)中，使用0.01M 磷酸盐缓冲液作为样品稀释液，稀释待检样本。

说明书全文

腮腺炎病毒IgM抗体金标检测 试剂盒及检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒及检测方法。

背景技术

[0002] 流行性腮腺炎属于我国法定的丙类传染病，它是由腮腺炎病毒所致的一种急性呼吸道传染病，传染性强，主要症状有发热、畏寒、食欲不佳、恶心、呕吐、全身不适等，可引起的全身性感染疾病，患者多表现腮腺肿痛，体温可达39℃以上。流行性腮腺炎主要是通过直接接触、飞沫、唾液传播。以冬、春季常见，儿童对腮腺炎病毒易感。

[0003] 腮腺炎病毒属副黏病毒科腮腺炎病毒属，病毒呈圆形，直径为90-600nm，基因为负链RNA，腮腺炎病毒复制起始于病毒核衣壳被释放至宿主细胞的细胞质，随后转录形成所有病毒复制所需的蛋白，病毒基因组开始复制，装配出芽形成新的病毒颗粒，只有完整的核衣壳才能作为病毒转录、复制和病毒扩增的模板。腮腺炎病毒基因大小为15384bp，由7个转录单位组成，基因表达蛋白顺序为核蛋白(N),磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、小疏水蛋白(SH)、血凝素-神经氨酸蛋白(HN)、大蛋白(L)。世界卫生组织公布MuV仅有一个血清型，12个基因型。NP蛋白是病毒核衣壳的主要结构蛋白，又称S抗原，主要在急性期被检测到，可通过其进行免疫反应的检测。

[0004] 目前，该项目检测主要应用的检测方法为：直接电镜法(EM)、培养法、免疫电镜法(IEM)、放射免疫法(RIA)、免疫荧光实验、间接血凝试验、酶联免疫法(ELISA)、杂交技术和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法进行检测。但是，这些检测方法均需要依赖相应的仪器设备、并需要使用液体试剂等，不便于实地检测，而且试剂的保存温度和使用也受到限制，也不便于快速简便的得到实验结果。

[0005] 因而，目前需要一种能够早期、快速、简便、可靠地诊断腮腺炎病毒的方法。

发明内容

[0006] 为解决上述技术问题，本发明提供一种腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒及检测方法。

[0007] 本发明采用的技术方案如下：

[0008] 本发明提供一种腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸和反应支持物；其中，所述样品垫、所述胶体金垫、所述硝酸纤维素膜、所述吸水滤纸依次设置在所述反应支持物上；所述样品垫设置在所述反应支持物的底端，所述样品垫的顶端压住所述胶体金垫的底端并与之粘贴，所述胶体金垫的顶端压住所述硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，所述硝酸纤维素膜的顶端被所述吸水滤纸的底端压住并与之粘贴。

[0009] 优选的，所述吸水滤纸长度为20.0mm，所述吸水滤纸与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。

[0010] 优选的，所述胶体金垫的长度为7.0mm，所述胶体金垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。

[0011] 优选的，所述样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起的重叠长度为3.0mm。

[0012] 优选的，所述胶体金垫为含有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体的胶体金垫。

[0013] 优选的，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近所述胶体金垫的一侧并含有腮腺炎病毒核衣壳蛋白可溶性S抗原，所述质控条带设置于远离所述胶体金垫的一侧并含有羊抗鼠IgG多克隆抗体。

[0014] 优选的，所述反应支持物为塑料。

[0015] 本发明提供一种应用腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒进行腮腺炎病毒检测的方法，包括以下步骤：

[0016] (1)将待检样本用稀释液处理；其中，所述待检样本为血清；

[0017] (2)将稀释好的样本滴加至腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒的样品垫上；样本将依次沿着反应支持物上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动；

[0018] (3)若所述样本中含有腮腺炎病毒IgM抗体，则腮腺炎病毒中的IgM抗体在经过所述胶体金垫的过程中，与所述胶体金垫标记的抗人IgM单克隆抗体特异性结合形成复合物；所述复合物在经过所述硝酸纤维素膜的过程中，依次与腮腺炎病毒核衣壳蛋白可溶性S抗原以及羊抗鼠IgG多克隆抗体特异性结合；则检测条带处出现红色或紫红色，样本为阳性；

[0019] 若所述样本中不含有腮腺炎病毒IgM抗体，则检测条带处未出现红色或紫红色，样本为阴性：

[0020] (4)如果质控条带处出现红色或紫红色，则表明实验结果有效；如果质控条带处未出现红色或紫红色，则表明胶体金失效或者实验操作有误，实验结果无效。

[0021] 优选的，步骤(1)中，使用0.01M 磷酸盐缓冲液作为样品稀释液，稀释待检样本。

[0022] 本发明的有益效果如下：

[0023] 本发明提供的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，能够简化腮腺炎病毒的检测流程。利用该种检测试剂盒检测腮腺炎病毒IgM抗体，不对任何实验仪器、环境或者操作人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。

[0024] 本发明提供的检测方法操作简单方便、不依赖较高实验室条件、用于快速检测腮腺炎病毒IgM抗体，进而实现快速简便的辅助诊断呼吸道传播相关疾病的病因。附图说明

[0025] 图1是本发明的一个检测试剂盒的正面示意图；

[0026] 图2是本发明的一个检测试剂盒的侧面示意图；

[0027] 图3是本发明的一个检测试剂盒检测结果阳性示意图；

[0028] 图4是本发明的一个检测试剂盒检测结果阴性示意图；

[0029] 图5是本发明的一个检测试剂盒结果无效示意图；

[0030] 图6是本发明的一个检测试剂盒结果无效示意图。

[0031] 其中：1、吸水滤纸；2、硝酸纤维素膜；3、胶体金垫；4、样品垫；5、反应支持物；T、检测条带；C、质控条带。

具体实施方式

[0032] 以下结合附图对本发明进行详细说明：

[0033] 本发明实施方式为针对腮腺炎病毒IgM抗体的具体检测方式，其他亚型的检测方法，在制得合适的抗原后均可以按照以下思路得到检测方法。

[0034] 本发明提供的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒由吸水滤纸(1)、硝酸纤维素膜(2)、胶体金垫(3)、样品垫(4)和反应支持物(5)组成。其中，反应支持物可以为塑料胶板。吸水滤纸可以防止样本在硝酸纤维素膜的一端堆积，从而导致后续的样本无法继续前行，进而能够使反应充分。硝酸纤维素膜(2)包括含有腮腺炎病毒核衣壳蛋白可溶性S抗原的检测条带T以及含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控条带C。胶体金垫(3)含有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体。包被检测条带T和质控条带C的硝酸纤维素膜(2)粘贴在反应支持物(5)上。

[0035] 具体的，样品垫设置在反应支持物的底端，样品垫的顶端压住胶体金垫的底端并与之粘贴，样品垫的长度为20.0mm，所述样品垫与所述胶体金垫重叠粘贴在一起的重叠长度为3.0mm。

[0036] 胶体金垫的顶端压住硝酸纤维素膜的底端并与之粘贴，胶体金垫的长度为7.0mm，所述胶体金垫与所述硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。

[0037] 硝酸纤维素膜的顶端被吸水滤纸的底端压住并与之粘贴，吸水滤纸长度为20.0mm，吸水滤纸与硝酸纤维素膜重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。

[0038] 在检测条带T的方向上硝酸纤维素膜的边缘距离反应支持物边缘34.0mm，在质控条带C的方向上硝酸纤维素膜的边缘距离反应支持物的边缘20.0mm。

[0039] 为了能够达到检测腮腺炎病毒IgM抗体的目的，需要选用合适的稀释液配方，本实例中使用的是0.01M磷酸盐缓冲液作为样品处理液。

[0040] 将50～100μl的待检样品处理液直接滴加至检测试剂盒样品垫，此时样品将依次沿着反应支持物(5)上的各个附着物向吸水滤纸的方向移动，15分钟内读取实验结果。

[0041] 如果待检血清样本中含有的腮腺炎病毒IgM抗体时，则与检测试剂盒上的胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体特异性结合形成复合物，而后继续前行，与包被在硝酸纤维素膜(2)上的腮腺炎病毒核衣壳蛋白可溶性S抗原发生特异性结合，在检测条带处出现红色或者紫红色，即检测线，表明待检样品中含有腮腺炎病毒IgM抗体，为阳性，参照图3。

[0042] 如果待检样本中含有的不含有腮腺炎病毒IgM抗体，就不能形成足量复合物，检测条带处也就不能出现红色或紫红色，为阴性，参照图4。

[0043] 无论样本中是否含有腮腺炎病毒IgM抗体，上述胶体金标记的单克隆抗体都会继续前行至质控条带并与此处包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，形成红色或者紫红色条带，即为质控线。如果在检测中此条带不出现，则证明胶体金失效或者操作有失误，结果无效，需要重新检测，参照图5和图6。

[0044] 本发明提供的腮腺炎病毒IgM抗体金标检测试剂盒，能够简化血清样本中腮腺炎病毒IgM抗体的检测流程。利用该种检测试剂盒检测腮腺炎病毒IgM抗体，不对任何实验仪器、环境或者操作人员具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短、易于判读；另外，不需要特殊的仪器设备，不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验。

[0045] 本发明提供的检测方法操作简单方便、不依赖较高实验室条件、用于快速检测腮腺炎病毒IgM抗体，进而实现快速简便的辅助诊断呼吸道传播相关疾病的病因。

[0046] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视本发明的保护范围。

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