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一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂及其制备方法和应用

阅读：879发布：2023-12-30

专利汇可以提供一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明属于医药技术领域，特别涉及一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂及其制备方法和应用。环酯肽类Gq蛋白抑制剂，具体为如下通式(I)所示。测试结果显示，作为一类结构新颖的选择性Gq蛋白抑制剂，与YM-254890及FR900359相比，本发明中的化合物具有合成较为简单且相对稳定的优点，大部分此类环酯肽类化合物具有一定的Gq抑制活性及选择性，具有开发成新型高效的Gq蛋白选择性抑制剂的潜力。，下面是一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂及其制备方法和应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为如通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯或溶剂化物：
其中，
n选自0、1、2；
Y选自O、S、Se、-CH2-、-NH-、-CONH-、-NHCO-、-COO-或-OOC-；
Z选自苄基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、直链烷基、胍基、磷酸基、萘基、喹啉基、苯并呋喃基或吲哚基。
2.根据权利要求1所述的环酯肽类Gq蛋白抑制剂，其特征在于：
所述Z中，杂芳基和杂环烷基分别含有1～3个选自N、O或S的杂原子。
3.根据权利要求1所述的环酯肽类Gq蛋白抑制剂，其特征在于：
所述Z被1～3个相同或不同的R取代；
R为氢、氟、氯、嗅、碘、羟基、硝基、氰基、三氟甲基、甲氧基和三氟甲氧基中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的环酯肽类Gq蛋白抑制剂，其特征在于：所述通式(I)所示的化合物具有I-1～I-33所示的结构：
5.一种制备权利要求1～4任一项所述环酯肽类Gq蛋白抑制剂的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
(1)将2-氯三苯甲基氯树脂、N-芴甲氧羰酰基-N-甲基-L-丙氨酸与N,N-二异丙基乙胺在DCM中混合后进行反应，反应完成后再加入哌啶/DMF混合溶液继续反应得到化合物(A)；
(2)将N-芴甲氧羰酰基-N-甲基-L-丙氨酸、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、三甲基吡啶溶于DMF后与步骤(1)所得化合物(A)后进行反应，反应完成再加入哌啶/DMF混合溶液继续反应得到化合物(B)；
(3)将化合物G、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐和三甲基吡啶溶于DMF后与步骤(2)所得化合物(B)混合反应，再加入哌啶，继续反应得到化合物(C)；其中化合物G结构通式如下：
化合物G
其中Z、Y、n均具有权利要求1中所述的含义；
(4)将化合物16、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐与三甲基吡啶溶于DMF后与加入步骤(3)所得化合物(C)混合反应，然后再加入苯硅烷、Pd(PPh3)4和DCM继续反应，得到化合物(D)；其中，化合物16的结构通式如下所示：
(5)将化合物25、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐和三甲基吡啶溶于DMF，然后与步骤(4)所得化合物(D)混合反应，得到化合物(E)，其中化合物25的结构式如下所示：
(6)将步骤(5)所得化合物(E)与三氟乙酸/三异丙基硅烷/二氯甲烷混合反应后，过滤并收集滤液，将滤液浓缩得到化合物(F)，即环酯肽链状前体；
(7)将步骤(6)所得化合物(F)溶于DMF后，与N,N-二异丙基乙胺和六氟磷酸苯并三唑-
1-基-氧基三吡咯烷基磷混合反应，得到如式(Ⅰ)所示的环酯肽类Gq蛋白抑制剂。
6.根据权利要求1～4任一项所述环酯肽类Gq蛋白抑制剂在制备抗肿瘤，抗血栓及抗哮喘药物中应用。
7.一种药用组合物，其包括权利要求1～4任一项所述的环酯肽类Gq蛋白抑制剂和至少一种药用辅料。

说明书全文

一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药技术领域，特别涉及一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] GPCR以及G蛋白在体内可通过介导多条信号转导通路从而控制人体内的一系列生理功能，如在癌症上，GPCR以及G蛋白就可通过复杂的信号通路网影响肿瘤的发展。GPCR接收神经递质、激素等胞外信息后，通过与G蛋白相互作用进而活化G蛋白，从而将外界信号传递至细胞内。由于G蛋白参与了一系列信号转导过程，因而找到一个合适的直接作用于G蛋白的激动剂或者抑制剂具有很大的研究价值。

[0003] YM-254890是目前已知的仅有的两个专一性抑制Gq蛋白的G蛋白抑制剂之一，因而YM-254890是一个研究G蛋白活化以及Gq蛋白介导的细胞反应的无价工具分子。YM-254890通过结合Gq蛋白的疏水空腔，稳定Gq蛋白结合GDP的非活性态构象，从而起到抑制Gq蛋白活化的作用。研究表明YM-254890具有广泛的生理活性，其可抑制由ADP诱导的血小板聚集，此外在小鼠模型中还具有抗血栓以及溶栓活性。2017年，Michaela Matthey等还将将YM-254890的结构类似物FR900359应用于阻塞性肺病研究方面。发现化合物FR900359可有效抑制小鼠和人的气道平滑肌细胞的Gq蛋白信号，此外，FR900359还可抑制支气管收缩反应，并在小鼠、猪以及人的气道组织内引发持续的呼吸道松弛。研究还发现健康的野生型小鼠吸入FR900359后会导致该化合物肺内局部浓度升高，可防止呼吸道收缩而不对血压以及心率等产生急性危害，此外在小鼠模型上还发现FR900359可防止呼吸道超敏反应。研究结果表明将FR900359可作为一种选择性的Gq蛋白抑制剂应用于体内呼吸道，在哮喘等肺部疾病中可能是实现支气管扩张的一种有效的治疗策略。然而，作为一种有效的Gq蛋白抑制剂，YM-
254890的合成较为困难，且脱氢丙氨酸结构的存在在很大程度上降低了该环酯肽的稳定性。

[0004] 基于此，本领域有必要开发新的选择性Gq蛋白抑制剂。

发明内容

[0005] 为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂。

[0006] 本发明另一目的在于提供上述环酯肽类Gq蛋白抑制剂的制备方法。

[0007] 本发明再一目的在于提供上述环酯肽类Gq蛋白抑制剂在制备抗肿瘤，抗血栓以及抗哮喘药物中应用。

[0008] 本发明的目的通过下述方案实现：

[0009] 一种环酯肽类Gq蛋白抑制剂，具体为如通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯或溶剂化物：

[0010]

[0011] 其中，

[0012] n选自0、1或2；

[0013] Y选自O、S、Se、-CH2-、-NH-、-CONH-、-NHCO-、-COO-或-OOC-；

[0014] Z选自苄基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、直链烷基、胍基、磷酸基、萘基、喹啉基、苯并呋喃基或吲哚基；优选地，所述杂芳基和杂环烷基可以独立含有1～3个选自N、O或S的杂原子；更优选地，Z可以被1～3个相同或不同的R取代；R为氢、氟、氯、嗅、碘、羟基、硝基、氰基、三氟甲基、甲氧基和三氟甲氧基中的至少一种。

[0015] 优选地，所述通式(I)所示的化合物具有I-1～I-33所示的结构：

[0016]

[0017]

[0018]

[0019] 一种上述环酯肽类Gq蛋白抑制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

[0020]

[0021] (1)将2-氯三苯甲基氯树脂(2-CTC resin)、N-芴甲氧羰酰基-N-甲基-L-丙氨酸(Fmoc-N-Me-Ala-OH)与N,N-二异丙基乙胺(DIEA)在DCM中混合后，再加入哌啶/DMF混合溶液继续反应得到化合物(A)；

[0022] (2)将N-芴甲氧羰酰基-L-丙氨酸(Fmoc-Ala-OH)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、三甲基吡啶(collidine)溶于DMF后与步骤(1)所得化合物(A)混合反应，再加入哌啶/DMF混合溶液继续反应得到化合物(B)；

[0023] (3)将化合物G、HATU和collidine溶于DMF后与步骤(2)所得化合物(B)混合反应，再加入哌啶，继续反应得到化合物(C)；其中所述化合物G结构通式如下：

[0024]

[0025] 其中Z、Y、n均具有通式(I)中所述的含义；

[0026] (4)将化合物16、HATU与collidine溶于DMF后与加入步骤(3)所得化合物(C)混合反应，然后再加入苯硅烷(PhSiH3)、Pd(PPh3)4和DCM继续反应，得到化合物(D)；

[0027] (5)将化合物25、HATU和collidine溶于DMF，然后与步骤(4)所得化合物(D)混合反应，得到化合物(E)；

[0028] (6)将步骤(5)所得化合物(E)与三氟乙酸/三异丙基硅烷/二氯甲烷(TFA/TIPS/DCM)混合反应后，过滤并收集滤液，将滤液浓缩得到化合物(F)，即环酯肽Ⅰ-1链状前体；

[0029] (7)将步骤(6)所得化合物(F)溶于DMF后，与DIEA和六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBop)混合反应，得到如式(Ⅰ)所示的环酯肽类Gq蛋白抑制剂。

[0030] 上述环酯肽类Gq蛋白抑制剂在制备抗肿瘤，抗血栓及抗哮喘药物中应用。

[0031] 本发明还提供了一种药用组合物，其包括上述环酯肽类Gq蛋白抑制剂和至少一种药用辅料。

[0032] 本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：

[0033] 本发明Gq蛋白抑制活性测试结果显示，大部分此类环酯肽类化合物具有一定的Gq抑制活性及选择性。作为一类结构新颖的选择性Gq蛋白抑制剂，与YM-254890及FR900359相比，本发明中的化合物具有合成较为简单且相对稳定的优点，具有开发成新型高效的Gq蛋白选择性抑制剂的潜力。

具体实施方式

[0034] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

[0035] 实施例中所用试剂如无特殊说明均可从市场常规购得。

[0036] 实施例中所述室温均为15～35℃。

[0037] 实施例1：I-1的合成

[0038]

[0039] 化合物6的制备

[0040]

[0041] 将化合物1(N-芴甲氧羰基-N-甲基O-叔丁基-L-丝氨酸)(1.00g,2.52mmol)溶二氯甲烷(DCM,10mL)中，加入三氟乙酸(TFA,3mL)，室温反应3h至完全，减压浓缩得到化合物2。将化合物2(850mg,2.48mmol)与NaHCO3(254mg,3.02mmol)溶于H2O(5mL)得溶液A，另将甲基三辛基氯化铵(aliquat336,1.12g,2.77mmol)与溴丙烯(Allyl-Br,0.46g,3.77mmol)溶于DCM(5mL)得溶液B，将溶液B加入溶液A中，室温反应过夜，然后补加Allyl-Br(0.15g,
1.26mmol)，室温继续反应24h，然后用DCM(重复三次3，每次使用10mL)对反应液进行萃取，合并有机相，再用饱和盐水洗涤后，通过无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，硅胶柱层析纯化得化合物3(740mg,收率77.2％)。再将化合物3(740mg,1.94mmol)与对甲苯磺酰氯(Ts-Cl，
1.85g,9.71mmol)溶于吡啶(3mL)，然后在0℃反应过夜后，用乙酸乙酯(EA,20mL)稀释，再依次用H2O(10mL)、饱和柠檬酸水溶液(重复2次，每次10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)、饱和盐水(10mL)洗涤，有机相通过无水Na2SO4干燥后，过滤，减压浓缩，经硅胶柱层析纯化得化合物4(428mg,收率41.2％)。将苯硒酚(PhSeOH 187mg,1.19mmol)溶于DMF(3mL)，降温至0℃得到反应液，再将NaOH(31.7mg,0.79mmol)溶于H2O(1mL)中并滴入反应液，在0℃反应5min，再将化合物4(425mg,0.79mmol)溶于丙酮(5mL)滴入反应液，在0℃反应3h后，用EA(50mL)稀释，依次用饱和NH4Cl水溶液(重复3次，每次20mL)、饱和盐水(20mL)洗涤，有机相使用无水Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩，硅胶柱层析纯化得化合物5(165mg,收率40.0％)。再将化合物
5(160mg,0.31mmol)与四(三苯基膦)钯[Pd(PPh3)4]置于反应瓶，避光并通氮气保护，加入无水四氢呋喃(THF,1.5mL)，另将吗啉(morpholine,28.1μL,0.32mmol)溶于无水THF(1.5mL)后缓慢滴入反应瓶中，室温反应30min至完全，EA(20mL)稀释，2M HCl水溶液(重复3次，每次
10mL)洗涤，有机相通过无水Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩，硅胶柱层析纯化得化合物6(110mg,74.4％)。

[0042] MS(ESI)calcd.for C25H23NO4Se+[M+H]+481.08,found 481.08。1H NMR(400MHz,CDCl3)(2:1旋转异构体比例，#代表含量较多的旋转异构体信号，*代表含量较少的旋转异构体信号)δ7.78–7.69(m,2H),7.61–7.43(m,4H),7.42–7.27(m,4H),7.24–7.18(m,3H),4.65#(dd,J＝10.4,4.4Hz,1H),4.54*(dd,J＝10.0,4.8Hz,1H),4.44-4 4.32(m,2H),4.25#(t,J＝7.2Hz,1H),4.10*(t,J＝6.0Hz,1H),3.52–3.43(m,1H),3.36–3.22(m,1H),2.89#(s,3H),2.83*(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ173.58,155.66,142.81,140.29,132.38,132.18,
128.21,126.71,126.54,126.07,124.10,118.97,66.98#,66.79*,46.13#,46.05*,31.94,
28.68,25.66。

[0043] 化合物16的制备

[0044]

[0045] 称取化合物7(3.01g,18.05mmol)溶于无水DMF(15mL)中，加入Cs2CO3(6.47g,19.86mmol)得到悬液，然后在室温搅拌10min，再将悬液冰浴至0℃，加入溴化苄(BnBr,
2.2mL,18.42mmol)，在0℃搅拌30min，然后室温搅拌反应2h至完全。将所得反应液用EA(100mL)稀释，然后过滤除去白色固体，将所得溶液依次用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)、水(重复2次，每次100mL)、饱和盐水(100mL)洗涤，所得有机相用无水Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩，然后通过硅胶柱层析纯化得化合物8(3.82g,83.1％)。将化合物8(3.31g,12.95mmol)与N-芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酸(Fmoc-Thr(tBu)-OH,6.18g,15.54mmol)溶于DCM(50mL)中，加入二环己基碳二亚胺(DCC,3.21g,15.54mmol)与4-二甲氨基吡啶(DMAP,
0.32g,2.59mmol)，室温搅拌6h至完全，过滤除去白色固体，然后将所得溶液减压浓缩，再通过硅胶柱层析纯化得化合物9(6.65g,81.1％)。将化合物9(3.22g,5.04mmol)溶于DCM(20mL)，加入二乙胺(8.0mL)，室温搅拌反应4h至完全，将所得反应液减压浓缩，然后通过硅胶柱层析得化合物10(1.80g，86.5％)。将化合物10(1.80g,4.36mmol)溶于DCM(15mL)中，冰浴，加入三乙胺(1.8mL,12.96mmol)，再滴加乙酰氯(600μL,8.44mmol)，冰浴反应20min，移至室温反应2h至完全，得到的反应液用饱和盐水洗涤，然后用无水Na2SO4干燥，过滤后，将所得溶液进行减压浓缩后，通过硅胶柱层析纯化得化合物11(1.30g,65.7％)。将化合物11(1.30g,2.86mmol)溶于DCM(10mL)，加入TFA(4mL)，室温搅拌反应2h至完全，将所得反应液减压浓缩，然后通过硅胶柱层析纯化得化合物12(0.95g,83.3％)。将化合物12(0.95g,
2.38mmol)溶于DCM(10mL)，加入N-[叔丁氧羰基]-N-甲基-O-甲基-L-苏氨酸(Boc-N-Me-Thr(Me)-OH,0.65g,2.62mmol)，DCC(0.59g,2.86mmol)以及DMAP(58mg,0.48mmol)，室温搅拌6h至完全，过滤除去白色固体，将所得溶液减压浓缩，然后通过硅胶柱层析纯化得化合物13(1.3g,86.7％)。将化合物13(1.3g,2.07mmol)溶于DCM(7mL)，加入TFA(3mL)，室温搅拌2h至反应完全，减压浓缩除去TFA及DCM，于残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)，DCM(3×
30mL)萃取，合并有机相，经饱和盐水洗涤后，依次经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，最后通过硅胶柱层析纯化得化合物14(0.80g,73.4％)。将化合物14(0.80g,1.51mmol)溶于甲醇(MeOH,10mL)，加入Pd/C(含Pd10％,50mg)，扎氢气球，进行三次气体交换，室温反应过夜至完全，将所得反应液过滤，减压浓缩得化合物15(700mg)；将化合物15(280mg,0.64mmol)溶于无水THF(6mL)中，冰浴，加入TEA(125μL,0.90mmol)，滴加氯甲酸烯丙酯(Alloc-Cl,43μL,
0.70mmol)，冰浴反应6h至完全，然后减压浓缩除去THF，加入10mL水，用1M HCl调节pH至2-
3，使用DCM萃取后，合并有机相，然后依次用饱和盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩后，使用硅胶柱层析纯化得化合物16(170mg,51％)

[0046] MS(ESI)calcd.for C25H35N2O10+[M+H]+＝523.23,found 523.23。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33–7.18(m,5H),6.16(d,J＝8.7Hz,1H),5.99–5.86(m,1H),5.69(d,J＝4.2Hz,1H)，5.37–5.20(m,3H),4.86(dd,J＝9.3,2.2Hz,1H),4.69(d,J＝4.9Hz,1H),4.63(d,J＝
5.5Hz,2H),3.92(dd,J＝12.0,6.1Hz,1H),3.26(s,3H),3.25–3.20(m,2H),3.06(s,3H),
2.12(s,3H),1.22(d,J＝6.4Hz,3H),1.16(d,J＝6.3Hz,3H)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ
171.14，169.88,167.93,167.43,156.89,134.98,131.48,128.49,127.44,125.98,116.52,
75.48,73.55,70.15,65.80,61.59,56.01,54.77,35.92,31.60,21.80,15.78,13.86。

[0047] 化合物25的制备

[0048]

[0049] 将(2S,3R)-(+)-2-氨基-3-羟基-4-甲基戊酸(3.01g,20.4mmol)与对甲苯磺酸(TsOH,3.86g,22.4mmol)溶于甲苯，加入苯甲醇(BnOH,10mL)，120℃回流反应过夜至反应完全，然后减压浓缩除去甲苯，将所得反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液，再通过DCM(重复三次，每次30mL)萃取，合并有机相，然后用饱和盐水洗涤以及无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩后，硅胶柱层析纯化得化合物17(3.46g,71％)。将化合物17(1.90g,8.0mmol)溶于DCM(20mL)，加入三乙胺(2.0mL，9.6mmol)以及二碳酸二叔丁酯[(Boc)2O,1.33mL,8.8mmol]，反应液室温搅拌反应4h至完全，减压浓缩除去过量三乙胺及DCM，然后通过硅胶柱层析得化合物18(2.57g,95.2％)。另将化合物17(2.21g,9.3mmol)溶于乙腈和水的混合溶液(MeCN/H2O,20mL,v/v＝1:1)，加入NaHCO3(1.56g,18.6mmol)以及芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(FmocOSu,2.44g,10.2mmol)，室温搅拌3.5h至完全，然后过滤除去白色固体，再经减压浓缩除去MeCN，然后将所得溶液中的水相用乙酸乙酯(重复三次，每次20mL)萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩，再用硅胶柱层析得化合物19(2.04g,48.1％)；将化合物19(1.7g,
3.7mmol)溶于DCM(15mL)中，冰浴加入(Boc)2O(0.94mL,4.1mmol)以及DMAP(45mg,
0.37mmol)，反应液室温搅拌反应5h，减压浓缩除去DCM，硅胶柱层析纯化即得化合物20(1.4g,67.6％)；再将化合物20(1.35g,2.42mmol)溶于MeOH(10mL)，加入Pt/C(含Pt10％,
150mg)，扎氢气球，进行三次气体交换，室温反应18h，过滤后减压浓缩，用硅胶柱层析纯化得化合物21(1.03g,3步收率91.2％)。将化合物18(312mg,1.0mmol)与化合物21(576mg,
1.2mmol)溶于DCM(6mL)中，加入DCC(250mg,1.2mmol)与DMAP(23mg,0.3mmol)，室温搅拌3h，过滤除去白色固体，减压浓缩，硅胶柱层析纯化得化合物22(544mg,74.6％)。再将化合物22(1.53g,2.0mmol)溶于DCM(10mL)，加入二乙胺(4mL)，室温搅拌反应4h，减压浓缩，通过硅胶柱层析得化合物23(660mg,58.0％)。将化合物23(510mg,0.95mmol)溶于DCM(5mL)，冰浴加入三乙胺(185μL,1.33mmol)，再滴加乙酰氯(AcCl,186μL,1.70mmol)，冰浴反应0.5h，移至室温再反应1h至完全，反应液用饱和盐水洗涤，有机相无水Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩后，通过硅胶柱层析得化合物24(510mg,96.1％)。再将化合物24(1.03g,1.7mmol)溶于MeOH(10mL)中，加入Pd/C(含Pd 10％,150mg)，扎氢气球进行三次气体交换，室温反应24h，过滤后减压浓缩，再用硅胶柱层析纯化即可得目标化合物白色泡沫状固体片段化合物25(740mg,收率82.0％)

[0050] MS(ESI)calcd.for C24H41N2O10+[M+H]+519.30，found 519.30。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.36(d，J＝9.4Hz,1H)，5.29(d,J＝9.6Hz,1H),5.16(d,J＝9.1Hz,1H),4.89(d,J＝7.3Hz,2H),4.65(d,J＝9.9Hz,1H),4.35(s,3H),2.07(s,3H),2.02–1.95(m,1H),1.92-1.87(m,1H),1.47(s,9H),1.46(s,9H),1.00(dd,J＝13.6,6.5Hz,6H),0.95(d,J＝6.5Hz,3H),
0.90(d,J＝6.6Hz,3H)。13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.64,171.83,169.44,155.83,152.82,
82.94,81.01,80.19,80.14,54.54,52.96,29.94,29.30,28.29,27.60,22.67,18.80,
18.68,18.17。

[0051] Ⅰ-1的固相合成

[0052] 2-氯三苯甲基氯(2-CTC,397mg,0.51mmol/g)树脂用DCM(4mL)溶胀15min，滤去DCM，加入Fmoc-N-Me-Ala-OH(260mg,0.80mmol)与N,N-二异丙基乙胺(DIEA,206mg,1.60mmol)及DCM(3mL)，室温反应2h，滤去反应液，依次用DCM/MeOH/DIEA(4mL,17:2:1,v/v),DCM(4mL),DMF(4mL)及DCM(4mL)各洗涤3次。再加入20(v/v)％的哌啶/DMF溶液(4mL)，反应10min，滤去反应液，使用DMF(4mL)洗涤三次，以上纯化操作重复一次得到化合物(A1)。再将Fmoc-Ala-OH(249mg,0.80mmol),2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU,304mg,0.80mmol)与三甲基吡啶(collidine,195mg,1.60mmol)溶于DMF(4mL)后，加入化合物(A1)反应2h，滤去反应液，DMF(4mL)洗涤三次，再加入20(v/v)％的哌啶/DMF溶液(4mL)，反应10min，滤去反应液，DMF(4mL)洗涤三次，以上纯化操作重复一次得到化合物(B1)。再将化合物6(385mg,0.80mmol),HATU(304mg,0.80mmol)与collidine(195mg,
1.60mmol)溶于DMF(4mL)中，加入化合物(B1)中反应24h，滤去反应液，DMF(4mL)洗涤三次，再加入20(v/v)％的哌啶/DMF溶液(4mL)，反应10min，滤去反应液，DMF(4mL)洗涤三次，以上操作重复一次。再将化合物16(418mg,0.80mmol),HATU(304mg,0.80mmol)与collidine(195mg,1.60mmol)溶于DMF(4mL)中，加入化合物(C1)中反应24h，滤去反应液，DMF(4mL)洗涤三次，再加入DCM(3mL)，Ar吹拂下加入苯硅烷(PhSiH3,216mg,2.0mmol)及Pd(PPh3)4(23mg,0.02mmol)，Ar吹拂下反应30min，滤去反应液，依次用DCM(4mL),DMF(4mL)及DCM(4mL)各洗涤3次。再将化合物25(156mg,0.30mmol),HATU(115mg,0.30mmol)与collidine(73mg,0.60mmol)溶于DMF(2mL)中，加入化合物(D1)中35℃反应24h，滤去反应液，DMF(4mL)洗涤三次，以上操作重复一次得化合物(E1)。向化合物(E1)中加入三氟乙酸/三异丙基硅烷/二氯甲烷TFA/TIPS/DCM(4mL,19/0.5/0.5,v/v)，室温反应1h，过滤并收集滤液，将沉淀物再用TFA(2mL)与DCM(2mL)各洗涤两次得到洗涤液，合并滤液与洗涤液，减压蒸馏浓缩得粗产物，通过制备型HPLC纯化得环酯肽Ⅰ-1链状前体即化合物(F1)4.0mg。最后将化合物(F1)(4.0mg,0.0035mmol)溶于无水DMF(4mL)中，加入DIEA(1.4mg,0.0105mmol)与六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷PyBop(1.8mg,0.0035mmol)，在室温下反应2h至完全，通过制备型HPLC纯化得环酯肽Ⅰ-1(0.06mg,白色粉状固体)。

[0053] MS(ESI)calcd.for C52H76N7O15Se+[M+H]+1118.46，found 1118.46。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝8.8Hz,1H),8.19-8.14(m,2H),7.86(d,J＝7.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.36-7.28(m,9H),7.14(dd,J＝7.1,2.4Hz,2H),5.69(d,J＝1.9Hz,1H),5.35(d,J＝9.3Hz,1H),5.30(dd,J＝6.4,1.9Hz,1H),5.13(d,J＝8.0Hz,1H),5.03(dd,J＝
9.8,3.8Hz,2H),4.99(d,J＝10.3Hz,1H),4.72(dd,J＝8.6,6.9Hz,1H),4.39(d,J＝10.0Hz,
1H),3.88(s,1H),3.81(d,J＝9.2Hz,2H),3.72(dd,J＝10.1,5.9Hz,1H),3.42(s,3H),3.22(dd,J＝13.2,9.8Hz,1H),3.01(s,3H),2.90(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),2.87(s,3H),2.64(s,
3H),2.23(d,J＝4.6Hz,2H),2.21(s,3H),2.12(s,3H),1.94-1.81(m,4H),1.75(d,J＝
7.5Hz,3H),1.44(d,J＝7.1Hz,3H),1.34(d,J＝6.3Hz,3H),1.08(d,J＝6.7Hz,3H),1.02(d,J＝6.7Hz,3H),0.99(d,J＝6.8Hz,3H),0.90(d,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ
175.1,174.9,173.0,171.6,170.7,170.5,168.2,168.0,166.4,163.8,141.1,134.8,
132.9,130.5,129.9,128.9,128.7,128.6,128.4,127.7,123.1,79.5,76.9,74.7,71.8,
71.1,65.4,57.1,55.6,55.2,55.0,48.1,46.2,40.1,38.9,37.2,33.8,30.7,30.0,29.1,
29.0,22.6,22.5,20.0,19.0,18.8,18.3,16.6,16.5,16.4,16.3,14.5,14.2.

[0054] 实施例2：I-2的合成

[0055] 本实施例与实施例1的不同之处在于，化合物1为N-芴甲氧羰基-N-甲基-L-高丝氨酸(2.01g,5mmol)。

[0056] 得环酯肽I-2(0.10mg,白色粉状固体)。MS(ESI)calcd.for C53H78N7O15Se+[M+H]+1132.47，found 1132.47。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝8.8Hz,1H),8.20-8.10(m,
2H),7.86(d,J＝7.0Hz,1H),7.77(d,J＝8.8Hz,1H),7.34-7.24(m,9H),7.13(dd,J＝7.1,
2.4Hz,2H),5.69(d,J＝1.9Hz,1H),5.35(d,J＝9.3Hz,1H),5.31(dd,J＝6.4,1.9Hz,1H),
5.13(d,J＝8.0Hz,1H),5.03(dd,J＝9.8,3.8Hz,2H),4.98(d,J＝10.3Hz,1H),4.72(dd,J＝
8.6,6.9Hz,1H),4.39(d,J＝10.0Hz,1H),3.89(s,1H),3.81(d,J＝9.2Hz,2H),3.73(dd,J＝
10.1,5.9Hz,1H),3.42(s,3H),3.22(dd,J＝13.2,9.8Hz,1H),3.00(s,3H),2.90(dd,J＝
13.2,5.2Hz,1H),2.89(s,3H),2.64(s,3H),2.24(d,J＝4.6Hz,2H),2.21(s,3H),2.12(s,
3H),1.94-1.81(m,6H),1.75(d,J＝7.5Hz,3H),1.44(d,J＝7.1Hz,3H),1.33(d,J＝6.3Hz,
3H),1.08(d,J＝6.7Hz,3H),1.02(d,J＝6.7Hz,3H),0.99(d,J＝6.8Hz,3H),0.91(d,J＝
6.8Hz,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ175.1,174.9,173.1,171.8,170.7,170.5,168.2,
168.1,166.4,163.8,141.2,134.8,132.8,130.5,129.9,128.9,128.7,128.7,128.4,
127.7,123.1,79.4,76.9,74.8,71.8,71.1,65.4,57.1,55.7,55.2,55.0,48.2,46.2,40.1,
38.9,37.3,33.8,30.7,30.0,29.1,29.0,24.5,22.6,22.4,20.0,19.0,18.8,18.3,16.7,
16.5,16.4,16.3,14.4,14.2.

[0057] 实施例3：I-3的合成

[0058] 本实施例与实施例1的不同之处在于，化合物6为N-芴甲氧羰基-N-甲基-O-苄基-L-丝氨酸(356mg,0.8mmol)。

[0059] 得环酯肽I-3(0.09mg,白色粉状固体)。MS(ESI)calcd.for C53H78N7O16+[M+H]+1
1068.55，found 1068.55。H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝8.8Hz,1H),8.19-8.14(m,
2H),7.87(d,J＝7.0Hz,1H),7.78(d,J＝8.8Hz,1H),7.36-7.28(m,9H),7.18-7.07(m,2H),
5.69(d,J＝1.9Hz,1H),5.35(d,J＝9.3Hz,1H),5.33-5.26(m,1H),5.14(d,J＝8.0Hz,1H),
5.07-4.96(m,3H),4.72(dd,J＝8.6,6.9Hz,1H),4.61(d,2H),4.39(d,J＝10.0Hz,1H),3.88(s,1H),3.81(d,J＝9.2Hz,2H),3.74-3.68(m,1H),3.42(s,3H),3.40-3.22(m,3H),3.02(s,
3H),2.90(dd,J＝13.2,5.2Hz,1H),2.88(s,3H),2.64(s,3H),2.23(d,J＝4.6Hz,2H),2.21(s,3H),2.12(s,3H),1.94-1.80(m,2H),1.75(d,J＝7.5Hz,3H),1.44(d,J＝7.1Hz,3H),
1.34(d,J＝6.3Hz,3H),1.08(d,J＝6.7Hz,3H),1.04-0.95(m,6H),0.90(d,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ175.1,174.8,173.0,171.6,170.6,170.5,168.2,168.1,166.4,
163.8,141.1,134.8,132.9,130.5,129.9,128.9,128.7,128.6,128.4,127.7,123.1,79.5,
76.8,74.7,72.2,71.8,71.0,67.3,65.4,57.1,55.6,55.3,55.0,48.1,46.2,40.2,38.9,
37.2,33.8,30.7,30.0,29.1,22.6,22.5,20.0,19.0,18.8,18.3,16.6,16.5,16.4,16.3,
14.5,14.2.

[0060] 实施例4：活性测试

[0061] (1)细胞培养：稳定表达M1毒蕈碱型受体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞CHO-k1(CHO-M1)购买自美国模式培养物集存库ATCC，CHO-M1细胞用加有10％(v/v)胎牛血清(FBS)、1％(v/v)青链霉素双抗以及0.25mg/mL G418的Ham’s F12培养基进行培养。所有细胞维持在37℃的潮湿环境中(95％空气及5％氧气)。

[0062] (2)将实施例1所得化合物Ⅰ-1配置成20mM的母液，用分析缓冲液(20mM羟乙基哌嗪乙磺酸，pH 7.4，1mM CaCl2,1mM MgCl2)稀释至50nM，平行三份加入384孔板(1μL/孔)。

[0063] (3)肌醇单磷酸(IP1)分析：使用非酶促细胞解离液将CHO-M1细胞从培养皿上解离下来，然后重新悬浮于加有0.2％牛血清白蛋白(BSA)的步骤(2)所示分析缓冲液，使细胞密度为每毫升含两百万个细胞。将化合物Ⅰ-1以及细胞(每孔一万个细胞)于384孔板中37℃孵育1h。孵育完成后，将卡巴胆碱溶于分析液并加入20mM LiCl。再将卡巴胆碱以最终浓度为3μM的浓度加入每孔中，于37℃孵育1h以及室温孵育15min。再使用IP1-Gq-kit(Cisbio)试剂盒检测IP1的含量。

[0064] (4)通过测定IP1的量来评价其对Gq蛋白抑制活性。

[0065] 结果显示，环酯肽Ⅰ-1抑制Gq蛋白的IC50为0.1-1μM，环酯肽Ⅰ-2及Ⅰ-3抑制Gq蛋白的IC50为1-10μM。

[0066] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

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