胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法
阅读：1发布：2021-07-04
专利汇可以提供胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 生物 医学材料技术领域，具体为胶原基复配非离子型多糖构建全天然复合 水 凝胶的制备方法。将非离子型多糖溶液 温度 保持在4～25℃，在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入非离子型多糖溶液；保持在4℃，将反应所得 混合液 低速离心、浓缩、调节pH值至7～11，再于15～37℃恒温0.5～10h制得胶原‑非离子型多糖复合水凝胶，于去离子水中浸洗后再于生物交联剂溶液中振摇、浸洗。本发明提供的方法，实现了在温和条件下制备得到以胶原和KGM非离子型多糖为主要成分的胶原‑非离子型多糖复合水凝胶，保持了复合水凝胶中具有三螺旋分子结构的 胶原蛋白 的生物活性，拓展了胶原‑非离子型多糖 复合体 系只局限于膜材料的研究和应用。，下面是胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法专利的具体信息内容。
1.胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下过程：
（1）以4℃的pH2 5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为2 20mg/mL；
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（2）以4 100℃的去离子水配制质量百分比为0.1 10%的非离子型多糖溶液；所述的非~ ~
离子型多糖溶液的pH值调节到7 11；所述的非离子型多糖为魔芋葡甘聚糖、淀粉、普鲁兰多~
糖、刺槐豆胶中的至少一种；
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（4）反应结束后，保持在4℃，将反应所得混合液低速离心、浓缩，对浓缩物调节pH值至7
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（5）将浓缩物于15 37℃恒温保持0.5 10 h，制得胶原-非离子型多糖复合水凝胶；
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子水中反复浸洗，除去未反应的生物交联剂。
胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法
技术领域
背景技术
[0002] 胶原蛋白(Collagen)广泛地存在于动物骨、腱、软骨和皮肤及其他结缔组织中，是细胞外基质的主要成分，约占动物体胶原纤维固体物的85％，占体内蛋白质总量的25％～30％。胶原蛋白具有低抗原性、可生物降解性、生物相容性、细胞适应性和细胞增殖作用以及促进血小板凝聚等优异的生物学性能，目前作为生物医学材料得到了广泛的研究和应用。
[0003] 魔芋葡甘聚糖(konjacglucomannan，KGM)是魔芋块茎中所含的储备性多糖，是由葡萄糖和甘露糖主要以β-1,4糖甙键连接起来的中性非离子型高分子多糖，是继淀粉和纤维素之后，一种具有应用前景的丰富的可再生天然高分子资源。KGM具有特别的物理化学性质，例如很高的黏度，良好吸水、保湿、成膜、增稠性和胶凝性；同时，KGM具有良好的生物降解性、生物相容性和一定的生物活性，具有抗肿瘤、抑制高血糖、高血脂、糖尿病、肥胖症和抑制大肠癌变等作用。KGM的凝胶具有促进伤口愈合、止血和缓释药物等功能。这些性质与功能使KGM作为生物材料在生物医学领域具有非常广泛的应用前景。
[0005] 而基于各取所长的优势互补原理，目前，KGM作为生物医学材料的应用也主要是与其他类别的生物大分子或合成高分子相复合而得到复合膜材料或复合水凝胶材料，或者再与仿生无机矿物成分例如羟基磷灰石相复合而得到含有包括KGM在内的两种有机大分子的有机-无机复合凝胶材料。
[0006] 在兼顾改善材料力学性能的条件下，从优良的生物相容性和生物降解性出发，更倾向于生物大分子之间的共混复合。因此，以蛋白质类的胶原和多糖类的KGM为主要成分的二元或三元复合材料也得到广泛研究。
[0007] KGM作为生物材料的主要应用形式是制备膜类和凝胶类复合支架材料。与KGM等非离子型多糖复配制备复合支架材料的大分子分为天然生物大分子类和人工合成高分子类。天然生物大分子又分为蛋白质类和多糖类。
[0008] KGM与蛋白类大分子的复合主要与胶原复合为主，复合形式主要为膜。这种以KGM和胶原为主要成分的复合膜制备方法中，主要是基于KGM在高温(60～90℃)和高pH值条件下发生凝胶化反应，最终得到的膜是结合有胶原分子的KGM凝胶膜[景森，陈庆华，潘兴华，张峰，董会.胶原蛋白/葡甘聚糖共混膜的制备及性能表征.中国组织工程研究与临床康复,2008,12(10):1885-1888；王碧,王坤余,但卫华,张廷有,叶勇.葡甘聚糖-胶原蛋白-壳聚糖共混膜.生物医学工程学杂志,2006,23(1)∶102～106]。这类方法中的长时间高热高碱条件会导致胶原蛋白分子的变性，从而会使胶原分子失去本身的生物活性。这是该类方法对于保持蛋白类生物大分子的生物活性方面所存在的关键性不足。
[0009] 也有KGM与大豆蛋白相复配成膜或成凝胶的，但所用的大豆蛋白是已经发生了变性的。该复合凝胶的形成机理是KGM分子与变性大豆蛋白的伸展分子链间形成的氢键增强产生的协同增效作用[丁金龙,孙远明，乐学义.魔芋胶与大豆分离蛋白相互作用研究,中国粮油学报,2003,18(3):65-69]。有以KGM、大豆分离蛋白(SPI)和胶原蛋白为主要原料，配以甘油、单甘脂等其他物质研制成复合眼贴膜，虽然该膜制备过程所用的pH值属弱碱范围，但仍然是在高温(75℃和45℃)条件下完成各成分的复合和膜的干燥的[潘廷跳，张俊明，潘振华，苏晨帆，庞杰.复含眼贴膜的研制.日用化学品科学,2012,35(3):31-35]。这样的温度足以使胶原分子变性失活。
[0010] 也有将KGM与其他多糖类大分子，如卡拉胶、黄原胶以及普鲁兰多糖(Pullulan,PULL)等共混以制备复合凝胶支架材料。但KGM与卡拉胶或黄原胶类别多糖的共混复合凝胶的生成原理是基于卡拉胶分子或黄原胶分子在高温作用下(分别不低于74℃和42℃)从有序态转变为无规线团态后与KGM分子链发生绞合而生成凝胶网络骨架；而由于普鲁兰多糖是粘度低不具有凝胶性的多糖，其与KGM的复合凝胶的制备则需要依赖于90℃高温的碱热处理以实现KGM分子的热不可逆凝胶化以形成KGM-PULL复合凝胶[何东保,彭学东,詹东风.卡拉胶与魔芋葡甘聚糖协同相互作用及其凝胶化的研究.高分子材料科学与工程，2001，17(2)：28-30；何东保,杨朝云，詹东风,黄原胶与魔芋胶协同相互作用及其凝胶化的研究.武汉大学学报(自然科学版)，1998，44(2)：198-200；寇丹丹，兰润，叶伟建,薛丽华，魏雪琴，庞杰.魔芋葡甘聚糖/普鲁兰多糖半互穿网络水凝胶弹性及其微观形貌研究.西南大学学报(自然科学版).2014,36(4):205-212]。以上方法中的高温高碱的严苛条件显然是不适于胶原等蛋白质类的生物活性大分子的复合的。
[0011] 在KGM与透明质酸(hyaluronic acid,HA)的共混复合中，将二者的溶液混合搅拌均匀，然后通过冷冻干燥成型而得到多孔的海绵状支架[Takayuki Kondo1,Tetsuya Shinozaki1,Hiroyuki Oku,Shoji Takigami and Kenji Takagishi.Konjacglucomannan-based hydrogel with hyaluronic acid as a candidate for a novel scaffold for chondrocyte culture.J Tissue EngRegenMed.2009,3:361–367]。该制备方法是将KGM和HA的混合溶胶直接进行冻干赋形，两种大分子均没有发生实质的凝胶化转变而形成稳定的网络骨架。
[0012] 除了与天然生物大分子复配，KGM也与人工合成高分子相结合以制得力学性能更稳定的杂混水凝胶。例如以KGM为原料，以N，N-二亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，以丙烯酸为单体，在引发剂过硫酸钾或硝酸铈铵存在下引发聚合反应制备得到的KGM/N，N-二亚甲基双丙烯酰胺水凝胶或KGM/聚丙烯酸水凝胶[王雅立,魔芋葡甘聚糖/N，N-二亚甲基双丙烯酰胺水凝胶的溶胀行为研究.安徽农学通报,2015，21(14):26-46；陈立贵，王忠，付蕾，等.魔芋葡甘聚糖/聚丙烯酸水凝胶的溶胀动力学及性能影响因素.安徽农业科学，2007，35(29):9134-9135]。但这类复合水凝胶的主要不足之处在于，反应过程中引入的化学合成交联剂、引发剂以及人工聚合高分子导致了水凝胶的生物相容性远不及天然生物大分子材料；其生物可降解性也较大程度地降低或不易降解。
[0013] 现有技术一的技术方案：分别配制2％壳聚糖溶液、1％魔芋葡甘聚糖水溶液，将两种溶液与适宜浓度的胶原蛋白溶液按一定比例于45℃热水浴中充分混合,减压脱泡后倒入成膜模具中,真空干燥成膜。然后用适宜浓度的NaOH溶液处理，再用蒸馏水反复洗涤、晾干。[王碧,王坤余,但卫华,张廷有,叶勇.葡甘聚糖-胶原蛋白-壳聚糖共混膜.生物医学工程学杂志,2006,23(1)∶102～106]
[0014] 以魔芋葡甘聚糖，胶原蛋白为主要原料，以甘油为添加剂，加入1mL氨水调节pH值为10～12，在100mL蒸馏水中制得不同配比的混合液，搅拌45min、静置15min左右，减压脱泡后倒入成膜模具中，在60℃下干燥8～9h即可成膜。[景森，陈庆华，潘兴华，张峰，董会.胶原蛋白/葡甘聚糖共混膜的制备及性能表征.中国组织工程研究与临床康复,2008,12(10):1885-1888]
[0015] 分别配制相同浓度的KGM和SPI溶液，并且等体积混合，在75℃下迅速搅拌10min，待二者充分混合后分别加入胶原蛋白、甘油及单甘酯搅拌至均匀，并用碳酸氢钠调节pH至8左右，充分搅拌，去除气泡，45℃下干燥2h，揭膜即得复合眼贴膜基膜。[潘廷跳，张俊明，潘振华，苏晨帆，庞杰.复含眼贴膜的研制.日用化学品科学,2012,35(3):31-35][0016] 以现有技术一为代表的涉及以KGM和胶原为主要复配成分的制备方法都是以制备共混膜材料为目的，即制备“膜”形态的复合材料。
[0017] 由于KGM在高温高碱条件下会发生热不可逆凝胶化反应，技术一在制备以KGM和胶原为主要成分的共混膜的过程中，通常会使用远高于生理温度的高温(最低有用45℃，一般在60℃以上)和高碱的条件以实现KGM的热不可逆凝胶化，从而进一步增强共混膜的力学性能。然而这样的高温高碱条件会使液态环境中的胶原分子结构发生改变，从而导致胶原大部分或全部变性而失去本身的生物活性。
[0018] 胶原分子的生物活性即生物学功能表现在：能诱导细胞的增殖、分化和迁移；能于体外再次重组形成与天然胶原纤维相似的有序纤维结构；诱导纤维粘连素、氨基多糖和生长因子；有好的凝血性能；低免疫原性等等。胶原分子的这些生物活性与其分子的三螺旋结构密切相关。因此，作为生物医学材料，保持胶原分子本身的三螺旋结构不被破坏以保留其具有的生物活性是实际应用中人们所期望达到的要求，是至关重要的。
[0019] 现有技术二，步骤一，共滴定法制备纳米羟基磷灰石(HAP)/胶原复合粉体：
[0020] 把一定量的磷酸溶液和胶原蛋白一起加入到盛有蒸馏水的烧杯中并置于磁力搅拌器上搅拌均匀，同时按羟基磷灰石的化学计量比称取Ca(OH)2粉末加入到盛有蒸馏水的烧杯中磁力搅匀至上清液。把饱和Ca(OH)2溶液与胶原蛋白磷酸溶液同时滴入另一磁力搅拌的烧杯中，通过控制滴速来调节pH值及反应时间，反应温度为室温(25℃左右)。饱和Ca(OH)2溶液滴完后加入氨水调节pH值为10.0，反应结束后继续搅拌12h，此时pH值降为7.0左右。然后放入冷藏箱中陈化10天左右，用抽滤机抽除大部分水后置入冷藏冷冻柜中进行冷冻，然后再置于真空冷冻干燥机中干燥，最后将制得的粉末经过400目筛过筛。
[0021] 步骤二，溶胶凝胶法及冷冻干燥法制备纳米HAP/胶原/KGM多孔骨支架：
[0022] 量取少量的氨水滴入蒸馏水中，按一定比例加入纳米羟基磷灰石/胶原纳米粉和KGM粉并快速搅拌，形成粘稠状冻胶，静置一段时间后置于70℃水浴中胶凝24h。取出凝胶块置入盛有蒸馏水的烧杯中，再置于70℃水浴锅中进行脱碱，直到pH值为7.0后脱碱完成。将试样放入30℃水浴中恒温1h后置入一定温度的低温冷冻箱中深冷冻24h，取出冻胶置入真空冷冻干燥机中干燥，制得复合多孔骨支架。[黄明华，陈寰贝，陈庆华，陶世刚，谌强国，颜廷亭.纳米羟基磷灰石/胶原/魔芋葡甘聚糖多孔骨支架研究.人工晶体学报.2015,44(7):1961-1967]
[0023] 该方法先利用共滴定法在胶原蛋白存在下合成羟基磷灰石，经过冻干后得到纳米羟基磷灰石/胶原复合粉体，再将该复合粉体和KGM在碱性条件下混合均匀后再于70℃高温下处理以得到KGM的凝胶体。与技术一相似，该制备过程仍然需要高温碱性条件以实现KGM的凝胶固化，因而难以保持其中的重要成分胶原分子的生物活性。
发明内容
[0024] 针对上述技术问题，本发明提供一种胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，突破目前胶原与KGM的复配方式只局限于膜材料的现状，实现以胶原和KGM为主要成分的蛋白-多糖医用复合水凝胶材料的制备；在胶原与KGM的复配以及由此所得复合体系的凝胶固化过程中，实现胶原分子的生物活性得以很好保持，结构不被破坏而变性。特别在以KGM为代表的非离子型多糖大分子对胶原基复合水凝胶力学性能的改善提高的基础上，结合天然生物交联剂的交联作用，实现胶原基复合水凝胶力学性能的增强。
[0025] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0026] 以4℃的pH2～5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为2～20mg/mL；
[0027] 以4～100℃的去离子水配制质量百分比为0.1～10％的非离子型多糖溶液；
[0028] 将非离子型多糖溶液温度保持在4～25℃，在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入非离子型多糖溶液，搅拌反应10～120min；
[0029] 反应结束后，保持在4℃，将反应所得混合液低速离心、浓缩；
[0030] 浓缩结束后，保持在4℃，对浓缩物调节pH值至7～11；
[0031] 将浓缩物于15～37℃恒温保持0.5～10h，制得胶原-非离子型多糖复合水凝胶；
[0032] 将胶原-非离子型多糖复合水凝胶置于去离子水中浸洗2～8次，除去其中残留的盐分；
[0033] 将清洗后的胶原-非离子型多糖复合水凝胶置于浓度为1～20mg/ml的生物交联剂溶液中，于15～37℃下恒温振摇1～72h，然后于去离子水中反复浸洗，除去未反应的生物交联剂。
[0034] 或者，胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0035] 以4℃的pH2～5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为2～20mg/ml；
[0036] 以4～100℃的去离子水配制质量百分比为0.1～10％的非离子型多糖溶液，将多糖溶液的pH值调节到7～11；
[0037] 将非离子型多糖溶液温度保持在4～25℃，在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入多糖溶液，搅拌反应10～120min，调节混合体系的pH值到6～10；
[0038] 反应结束后，保持在4℃，将反应所得混合液低速离心、浓缩；
[0039] 浓缩结束后，将浓缩物于15～37℃恒温0.5～10h，制得胶原-非离子型多糖复合水凝胶；
[0040] 将胶原-非离子型多糖复合水凝胶置于去离子水中浸洗2～8次以除去其中残留的盐分；
[0041] 将胶原-非离子型多糖复合水凝胶置于浓度为1～20mg/ml的生物交联剂溶液中，于15～37℃下恒温振摇1～72h，然后于去离子水中反复浸洗，除去未反应的生物交联剂。
[0042] 所述的非离子型多糖为魔芋葡甘聚糖(KGM)、淀粉、普鲁兰多糖、刺槐豆胶中的至少一种。
[0043] 所述的生物交联剂为原花青素或京尼平。
[0044] 本发明提供的胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，保持了较为完整的天然三螺旋结构的胶原分子具有生物活性，而具有生物活性的胶原分子在接近生理条件(温度，pH)的温和环境下，能够自发地重现机体内胶原分子的1/4错位排列聚集组装行为，生成由胶原分子自组装而成的纳米纤维三维网络结构，即形成胶原水凝胶。本发明依据胶原分子的这一天然属性，在温和条件下进行胶原与非离子型多糖的共混复合后，通过胶原分子自组装生成胶原水凝胶网络骨架来实现胶原-非离子型多糖共混体系的固化，从而制备得到胶原-非离子型多糖复合水凝胶。因此，本发明的技术方案实现了以下有益效果：
[0045] (1)在温和条件下，实现了以胶原和KGM等非离子型多糖为主要成分的胶原-非离子型多糖复合水凝胶的制备。拓展了胶原-非离子型多糖复合体系只局限于膜材料的研究和应用。
[0046] (2)由于胶原-非离子型多糖复合水凝胶的制备条件均为温和条件，避免了高温环境，复合水凝胶中的胶原分子的生物活性得到很好保护，保持了胶原-非离子型多糖复合水凝胶作为生物医学材料的优势。
[0047] (3)由于KGM等非离子型多糖分子与胶原分子有良好的相容性，并且非离子型多糖的平均分子量远远大于胶原分子量，在胶原分子自组装成纤维网络的过程中，穿插缠绕于胶原分子之间的屈曲态的非离子型多糖分子也会被结合在所生成的胶原纤维中，进而绞结在三维的纤维网络之中，形成有效的物理交联效应，因而相对于纯胶原水凝胶较差的力学性能，非离子型多糖与胶原相复配就有效地提高了复合水凝胶的机械力学性能。
[0048] (4)在以KGM为代表的非离子型多糖大分子对胶原基全天然复合水凝胶力学性能改善提高的基础上，结合天然生物交联剂的交联作用，进一步增强胶原基全天然复合水凝胶的力学性能。
具体实施方式
[0049] 结合实施例说明本发明的具体实施方式。
[0050] 实施例1
[0051] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0052] 以pH3的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为6mg/mL。以温度为10℃的去离子水配制质量百分比为0.6％的KGM溶液。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入KGM溶液，搅拌反应20min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至11。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于37℃恒温4h制得胶原-KGM复合水凝胶。将胶原-KGM复合水凝胶置于去离子水中浸洗6次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-KGM复合水凝胶置于浓度为5mg/ml的原花青素溶液中，于37℃下恒温振摇48h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的原花青素小分子。
[0053] 实施例2
[0054] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0055] 以pH5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为3mg/mL。以温度为4℃的去离子水配制质量百分比为0.8％的KGM溶液。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入KGM溶液，搅拌反应40min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至10。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于32℃恒温2h制得胶原-KGM复合水凝胶。将胶原-KGM复合水凝胶置于去离子水中浸洗4次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-KGM复合水凝胶置于浓度为1mg/ml的京尼平溶液中，于25℃下恒温振摇72h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的京尼平分子。
[0056] 实施例3
[0057] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0058] 以pH2.5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为5mg/mL。以温度为4℃的去离子水配制质量百分比为1％的KGM溶液，将KGM溶液的pH值调节到11。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入KGM溶液，搅拌反应120min，调节混合体系的pH值到7.5。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于15℃恒温10h制得胶原-KGM复合水凝胶。将胶原-KGM复合水凝胶置于去离子水中浸洗3次以除去其中残留的盐分。将胶原-KGM复合水凝胶置于浓度为15mg/ml的原花青素溶液中，于30℃下恒温振摇5h，然后于去离子水中反复浸洗以去除未反应的原花青素小分子。
[0059] 实施例4
[0060] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0061] 以pH5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为2mg/mL。以温度为15℃的去离子水配制质量百分比为1.5％的KGM溶液，将KGM溶液的pH值调节到11。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入KGM溶液，搅拌反应60min，调节混合体系的pH值到9。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于35℃恒温0.5h制得胶原-KGM复合水凝胶。将胶原-KGM复合水凝胶置于去离子水中浸洗3次以除去其中残留的盐分。将胶原-KGM复合水凝胶置于浓度为20mg/ml的京尼平溶液中，于25℃下恒温振摇1h，然后于去离子水中反复浸洗以去除未反应的京尼平分子。
[0062] 实施例5
[0063] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0064] 以pH4的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为18mg/mL。以温度为90℃的去离子水配制质量百分比为0.1％的淀粉溶液，待溶液温度降至15℃，调节其pH值至9。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入淀粉溶液，搅拌反应90min，调节混合体系的pH值到8。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于37℃恒温2h制得胶原-淀粉复合水凝胶。将胶原-淀粉复合水凝胶置于去离子水中浸洗3次以除去其中残留的盐分。将胶原-KGM复合水凝胶置于浓度为8mg/ml的原花青素溶液中，于35℃下恒温振摇12h，然后于去离子水中反复浸洗以去除未反应的原花青素小分子。
[0065] 实施例6
[0066] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0067] 以pH3的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为10mg/mL。以温度为100℃的去离子水配制质量百分比为8％的淀粉溶液，待溶液温度降至20℃，调节其pH值至11。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入淀粉溶液，搅拌反应120min，调节混合体系的pH值到7。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于30℃恒温5h制得胶原-淀粉复合水凝胶。将胶原-淀粉复合水凝胶置于去离子水中浸洗2次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-淀粉复合水凝胶置于浓度为1mg/ml的京尼平溶液中，于25℃下恒温振摇36h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的京尼平分子。
[0068] 实施例7
[0069] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0070] 以pH5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为15mg/mL。以温度为95℃的去离子水配制质量百分比为2％的淀粉溶液，将溶液温度降至10℃。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入淀粉溶液，搅拌反应100min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至9。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于18℃恒温2h制得胶原-淀粉复合水凝胶。将胶原-淀粉复合水凝胶置于去离子水中浸洗5次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-淀粉复合水凝胶置于浓度为10mg/ml的原花青素溶液中，于20℃下恒温振摇48h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的原花青素分子。
[0071] 实施例8
[0072] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0073] 以pH4的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为12mg/mL。以温度为80℃的去离子水配制质量百分比为5％的淀粉溶液。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入淀粉溶液，搅拌反应120min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至10。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于23℃恒温3h制得胶原-淀粉复合水凝胶。将胶原-淀粉复合水凝胶置于去离子水中浸洗8次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-淀粉复合水凝胶置于浓度为15mg/ml的京尼平溶液中，于37℃下恒温振摇1h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的京尼平分子。
[0074] 实施例9
[0075] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0076] 以pH2.5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为20mg/mL。以温度为10℃的去离子水配制质量百分比为3％的普鲁兰多糖溶液，将溶液的pH值调节到9。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入普鲁兰多糖溶液，搅拌反应40min，调节混合体系的pH值到7.5。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于37℃恒温6h制得胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶。将胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于去离子水中浸洗3次以除去其中残留的盐分。再将胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于浓度为20mg/ml的原花青素溶液中，于20℃下恒温振摇30h，然后于去离子水中反复浸洗以去除未反应的原花青素小分子。
[0077] 实施例10
[0078] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0079] 以pH3的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为7mg/mL。以温度为15℃的去离子水配制质量百分比为10％的普鲁兰多糖溶液，将溶液的pH值调节到11。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入普鲁兰多糖溶液，搅拌反应20min，调节混合体系的pH值到8。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于15℃恒温5h制得胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶。将胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于去离子水中浸洗4次以除去其中残留的盐分。再将胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于浓度为10mg/ml的京尼平溶液中，于28℃下恒温振摇16h，然后于去离子水中反复浸洗以去除未反应的京尼平分子。
[0080] 实施例11
[0081] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0082] 以pH5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为4mg/mL。以温度为40℃的去离子水配制质量百分比为7％的普鲁兰多糖溶液，将溶液温度降至10℃。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入普鲁兰多糖溶液，搅拌反应80min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至9。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于32℃恒温0.5h制得胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶。将胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于去离子水中浸洗6次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于浓度为5mg/ml的原花青素溶液中，于37℃下恒温振摇8h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的原花青素分子。
[0083] 实施例12
[0084] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0085] 以pH4的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为12mg/mL。以温度为30℃的去离子水配制质量百分比为0.5％的普鲁兰多糖溶液，将溶液温度降至4℃。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入普鲁兰多糖溶液，搅拌反应100min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至7。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于35℃恒温3h制得胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶。将胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于去离子水中浸洗3次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-普鲁兰多糖复合水凝胶置于浓度为8mg/ml的京尼平溶液中，于30℃下恒温振摇20h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的京尼平分子。
[0086] 实施例13
[0087] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0088] 以pH3的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为18mg/mL。以温度为85℃的去离子水配制质量百分比为0.1％的刺槐豆胶溶液，将溶液温度降至4℃，将其pH值调节到9。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入刺槐豆胶溶液，搅拌反应50min，调节混合体系的pH值到7.0。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于37℃恒温2h制得胶原-刺槐豆胶复合水凝胶。将胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于去离子水中浸洗4次以除去其中残留的盐分。再将胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于浓度为10mg/ml的原花青素溶液中，于25℃下恒温振摇12h，然后于去离子水中反复浸洗以去除未反应的原花青素小分子。
[0089] 实施例14
[0090] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0091] 以pH2.5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为11mg/mL。以温度为75℃的去离子水配制质量百分比为1％的刺槐豆胶溶液，将溶液温度降至15℃，将其pH值调节到10。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入刺槐豆胶溶液，搅拌反应70min，调节混合体系的pH值到7.5。将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。以上操作温度均保持在4℃。浓缩结束后，将浓缩物于30℃恒温5h制得胶原-刺槐豆胶复合水凝胶。将胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于去离子水中浸洗2次以除去其中残留的盐分。再将胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于浓度为5mg/ml的京尼平溶液中，于30℃下恒温振摇40h，然后于去离子水中反复浸洗以去除未反应的京尼平分子。
[0092] 实施例15
[0093] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0094] 以pH5的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为7mg/mL。以温度为80℃的去离子水配制质量百分比为3％的刺槐豆胶溶液，将溶液温度降至10℃。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入刺槐豆胶溶液，搅拌反应90min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至8。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于25℃恒温5h制得胶原-刺槐豆胶复合水凝胶。将胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于去离子水中浸洗6次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于浓度为1mg/ml的原花青素溶液中，于37℃下恒温振摇60h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的原花青素分子。
[0095] 实施例16
[0096] 胶原基复配非离子型多糖构建复合水凝胶的制备方法，包括以下过程：
[0097] 以pH4的醋酸配制胶原溶液，胶原浓度为3mg/mL。以温度为95℃的去离子水配制质量百分比为5％的刺槐豆胶溶液，将溶液温度降至25℃。在搅拌条件下，向胶原溶液中缓缓加入刺槐豆胶溶液，搅拌反应110min，将反应所得混合液低速离心后进行浓缩。浓缩结束后，对浓缩物调节pH值至6.5。以上操作温度均保持在4℃。之后将浓缩物于35℃恒温8h制得胶原-刺槐豆胶复合水凝胶。将胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于去离子水中浸洗8次以除去其中残留的盐分。将清洗后的胶原-刺槐豆胶复合水凝胶置于浓度为15mg/ml的京尼平溶液中，于18℃下恒温振摇30h，然后于去离子水中反复浸洗以除去未反应的京尼平分子。
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