检测平菇中吲哚乙酸含量的方法
专利汇可以提供检测平菇中吲哚乙酸含量的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，利用预冻的80% 冰 甲醇提取平菇样品中的吲哚乙酸，利用三氯化 铁 的无机 酸溶液 作为显色液，采用分光光度计测定样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量。本发明利用在-20℃预冻12h以上的80%冰甲醇（甲醇: 水 =4:1）作为提取 溶剂 ，能够有效提取平菇中的吲哚乙酸。本发明利用吲哚乙酸在高氯酸环境中与三价铁离子生成红色络合物的原理，采用分光光度计法测定平菇中吲哚乙酸在530nm处的吸光值，该方法不仅操作简单、成本低，还具有较高的灵敏度和检测 精度 ，还能够同批次检测多个平菇样品中的吲哚乙酸含量，分析速度快，为研究吲哚乙酸对平菇生长发育机制的影响提供技术 基础 。，下面是检测平菇中吲哚乙酸含量的方法专利的具体信息内容。
1.一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：采用分光光度计测定平菇样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量，具体包括以下步骤：
第一步，称取平菇样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入3～10mL预冻的80%冰甲醇，研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇将平菇浆液定容，离心分离，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；
第二步，称取吲哚乙酸于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，然后用蒸馏水定容，混匀，得到吲哚乙酸贮备液；将吲哚乙酸贮备液稀释得到不同浓度的吲哚乙酸标准溶液；
第三步，移取第二步稀释得到的各吲哚乙酸标准溶液于不同的反应管内，以等体积的蒸馏水作为空白，然后向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入显色液，混匀，恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定吲哚乙酸标准液的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线；
第四步，移取第一步中的样品提取液于反应管内，以与样品提取液等体积的蒸馏水为空白，向样品提取液和空白中分别加入显色液，遮光恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定平菇样品的吸光值，根据第三步中绘制的吲哚乙酸标准曲线计算得到样品提取液中吲哚乙酸的浓度，再利用下述公式计算平菇样品中吲哚乙酸的含量：
平菇样品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V1）÷（W×V2）；
其中，A为第四步中参加显色反应的菌丝提取液中吲哚乙酸的浓度，μg/mL；V1为平菇样品提取液的总体积，mL；W为平菇样品的重量，g；V2为第四步中参加显色反应的样品提取液体积，mL。
2.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第二步中吲哚乙酸贮备液的浓度为100μg/mL，所述吲哚乙酸标准液的浓度梯度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL和25μg/mL。
3.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第三步和第四步中的显色液均由浓度为0.5M的FeCl3和35%高氯酸按照1:50的体积比配制而成。
4.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第一步中的具体离心方法如下：将定容后的平菇浆液于4℃、5000r/min条件下离心10min，弃沉淀，再将上清液再于4℃、5000r/min条件离心10min，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液。
5.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第一步中
80%冰甲醇的预冻温度为-20℃。
检测平菇中吲哚乙酸含量的方法
技术领域
背景技术
发明内容
第一步，称取平菇样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入3～10mL预冻的80%冰甲醇，研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇将平菇浆液定容，离心分离，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；
第二步，称取吲哚乙酸于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，然后用蒸馏水定容，混匀，得到吲哚乙酸贮备液；将吲哚乙酸贮备液稀释得到不同浓度的吲哚乙酸标准溶液；
第三步，移取第二步稀释得到的各吲哚乙酸标准溶液于不同的反应管内，以等体积的蒸馏水作为空白，然后向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入显色液，混匀，恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定吲哚乙酸标准液的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线；
第四步，移取第一步中的样品提取液于反应管内，以与样品提取液等体积的蒸馏水为空白，向样品提取液和空白中分别加入显色液，遮光恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定平菇样品的吸光值，根据第三步中绘制的吲哚乙酸标准曲线计算得到样品提取液中吲哚乙酸的浓度，再利用下述公式计算平菇样品中吲哚乙酸的含量，
平菇样品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V1）÷（W×V2）；
其中，A为第四步中参加显色反应的菌丝提取液中吲哚乙酸的浓度，μg/mL；V1为平菇样品提取液的总体积，mL；W为平菇样品的重量，g；V2为第四步中参加显色反应的样品提取液体积，mL。
具体实施方式
第二步，将10mg吲哚乙酸置于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，混匀，得到浓度为100μg/mL的吲哚乙酸贮备液；
依次移取不同体积的吲哚乙酸贮备液于八个容量瓶内，分别用蒸馏水稀释，得到浓度依次为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL和25μg/mL的吲哚乙酸标准溶液，备用；
第三步，分别移取2mL第二步中的吲哚乙酸标准溶液于反应管内，移取2mL蒸馏水于反应管内作为空白（即CK），向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入4mL的显色液，混匀，于40℃恒温显色反应30min，用分光光度计测定每个吲哚乙酸标准液在530nm处的吸光值，测定时将空白清零，读取吲哚乙酸标准液的吸光值，具体见表1；
表1 吲哚乙酸标准液的吸光值
然后以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线如图1所示，其标准曲线具体为：y = 0.0413χ - 0.0028（相关性系数R2=0.999），其中y为吸光值，χ为吲哚乙酸的浓度；
第四步，分别移取2mL第一步中的样品提取液于反应管内，以2mL蒸馏水为空白样，向样品提取液和空白样中分别加入4mL的显色液，于40℃恒温反应30min，使样品提取液中的吲哚乙酸在高氯酸条件下与三氯化铁发生显色反应生成红色络合物；
然后以空白样为对照，用分光光度计测定吸光值，测定时将空白样的吸光值调为零，读取各样品在530nm处的吸光值，根据第三步中绘制得到的吲哚乙酸标准曲线计算得到每个样品中参加反应的提取液中吲哚乙酸含量，然后根据下述公式计算各样品中吲哚乙酸的含量，结果见表2；
其中，平菇样品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V1）÷（W×V2）；
其中，A为第四步中参加显色反应的菌丝提取液中吲哚乙酸的浓度，μg/mL；V1为平菇样品提取液的总体积，mL；W为平菇样品的重量，g；V2为第四步中参加显色反应的样品提取液体积，mL；
表2 平菇P99在不同生长发育阶段的吲哚乙酸含量
由上可知，本发明的检测方法简单、高效，可同时检测多个样品，每批次样品（40个样品）的检测时间可控制在2小时以内，分析速度快，灵敏度高。
第二步，同实施例1；
第三步，同实施例1；
第四步，将每个样品的提取液平行处理三个显色反应，具体步骤同实施例1，然后空白样为对照，利用分光光度计测定每个样品的吸光值，并根据第三步中绘制得到的吲哚乙酸标准曲线计算各样品中吲哚乙酸的浓度，根据实施例1第四步中的公式计算得到各样品中吲哚乙酸的含量，结果见表3。
33.5910μg/g，样品Ⅲ中吲哚乙酸的含量为33.5910μg/g，三个平行样品中吲哚乙酸的含量仅仅相差0.08μg/g左右，表明本发明的检测方法具有很好的重复性，可靠性高，可用于检测平菇中吲哚乙酸的含量，为研究吲哚乙酸对平菇生长发育机制的影响提供技术基础，同时也为吲哚乙酸对其它食用菌（如香菇、草菇、金针菇等）生长发育机制的研究提供技术参考。
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