一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法专利检索-植物植物学专利检索查询-专利查询网

一种 铁皮石斛组织培养的培养基组和方法

阅读：1034发布：2020-05-24

专利汇可以提供一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供了一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法，属于植物组织培养技术领域，所述培养基组包括愈伤组织培养基、出芽组织培养基、分丛组织培养基和生根组织培养基。本发明的培养基组能够满足铁皮石斛组织培养过程中不同的培养需求，且能够达到良好的培养效果。经过应用发现，采用本发明的愈伤组织培养基培养得到的铁皮石斛愈伤组织长势良好；采用本发明的出芽组织培养基得到的铁皮石斛出芽组织出芽总数多、增殖系数高；采用本发明的分丛组织培养基得到的铁皮石斛分丛组织出芽多、状态好；采用本发明的生根组织培养基得到的铁皮石斛生根组织出芽多、褐化株数少。，下面是一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种铁皮石斛组织培养的培养基组，包括愈伤组织培养基、出芽组织培养基、分丛组织培养基和生根组织培养基；
所述愈伤组织培养基包括第一愈伤组织培养基、第二愈伤组织培养基或第三愈伤组织培养基；
所述第一愈伤组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4mg/L、萘乙酸1mg/L；
所述第二愈伤组织培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5mg/L、萘乙酸1.5mg/L；
所述第三愈伤组织培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5～1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；
所述出芽组织培养基包括第一出芽组织培养基或第二出芽组织培养基；
所述第一出芽组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；
所述第二出芽组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.25mg/L；
所述分丛组织培养基包括第一分丛组织培养基或第二分丛组织培养基；
所述第一分丛组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4mg/L、萘乙酸1mg/L；
所述第二分丛组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；
所述生根组织培养基包括第一生根组织培养基或第二生根组织培养基；
所述第一生根组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：吲哚-3-丁酸1mg/L、萘乙酸1.5mg/L；
所述第二生根组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：吲哚-3-丁酸2mg/L、萘乙酸2.5mg/L。
2.一种利用权利要求1所述培养基组进行的铁皮石斛组织培养的方法，包括以下步骤：
1)以铁皮石斛的茎段为外植体，对外植体进行消毒；
2)根据需要，将消毒后的外植体接种于权利要求1所述培养基组的特定培养基，进行培养，得到铁皮石斛组织培养材料；
若需要培养获得铁皮石斛愈伤组织时，采用的特定培养基为愈伤组织培养基；
若需要培养获得铁皮石斛出芽组织时，采用的特定培养基为出芽组织培养基；
若需要培养获得铁皮石斛分丛组织时，采用的特定培养基为分丛组织培养基；
若需要培养获得铁皮石斛生根组织时，采用的特定培养基为生根组织培养基。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述茎段包括含有结节的茎段。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述茎段的长度为1～2cm。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述消毒的方式包括将外植体浸泡于升汞水溶液中进行消毒；所述升汞水溶液中升汞的质量分数为0.1％。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述浸泡的时间为6～7min。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述培养的温度为20～22℃，光照条件为：每天光照14h、黑暗8h。
8.根据权利要求2或7所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述培养的光照强度为3000～3500LUX，湿度为80％～85％。

说明书全文

一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法。

背景技术

[0002] 铁皮石斛(Dendrobium officinale)属于兰科铁皮石斛属，多数生长在海拔达1000米以上的山地半阴湿的岩石上，比较喜欢温暖湿润的环境，极其不耐寒，适宜在凉爽、潮湿、空气通畅的环境生长。

[0003] 因为铁皮石斛的种子特别小，没有种胚，自然条件下萌发率低(不足5％)并且要有兰菌存在的条件下才能萌发，繁殖率极低，且铁皮石斛的药理价值较高，人们大量采挖，铁皮石斛根本供不上人们的使用。

[0004] 为了保护这一濒危的名贵中药，国内外研究者们开展了铁皮石斛的组培快繁、种子萌发及菌根方面的繁殖研究。但是现有的研究内容一般局限于对快速繁殖的部分环节进行的优化和改进，难以满足工业化应用过程中不同生产需要的要求。因而，目前缺少一种系统、完整的铁皮石斛组织培养的技术体系，以满足工业生产过程中不同的生产需求。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法，该培养基组和培养方法应用于铁皮石斛组织培养时，能够满足工业生产过程中不同的生产需求。

[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

[0007] 本发明提供了一种铁皮石斛组织培养的培养基组，包括愈伤组织培养基、出芽组织培养基、分丛组织培养基和生根组织培养基；

[0008] 所述愈伤组织培养基包括第一愈伤组织培养基、第二愈伤组织培养基或第三愈伤组织培养基；

[0009] 所述第一愈伤组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤(6-BA)4mg/L、萘乙酸(NAA)1mg/L；

[0010] 所述第二愈伤组织培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5mg/L、萘乙酸1.5mg/L；

[0011] 所述第三愈伤组织培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5～1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；

[0012] 所述出芽组织培养基包括第一出芽组织培养基或第二出芽组织培养基；

[0013] 所述第一出芽组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；

[0014] 所述第二出芽组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.25mg/L；

[0015] 所述分丛组织培养基包括第一分丛组织培养基或第二分丛组织培养基；

[0016] 所述第一分丛组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4mg/L、萘乙酸1mg/L；

[0017] 所述第二分丛组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；

[0018] 所述生根组织培养基包括第一生根组织培养基或第二生根组织培养基；

[0019] 所述第一生根组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：吲哚-3-丁酸1mg/L、萘乙酸1.5mg/L；

[0020] 所述第二生根组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：吲哚-3-丁酸2mg/L、萘乙酸2.5mg/L。

[0021] 本发明还提供了一种利用上述方案所述培养基组进行的铁皮石斛组织培养的方法，包括以下步骤：

[0022] 1)以铁皮石斛的茎段为外植体，对外植体进行消毒；

[0023] 2)根据需要，将消毒后的外植体接种于上述方案所述培养基组的特定培养基，进行培养，得到铁皮石斛组织培养材料；

[0024] 若需要培养获得铁皮石斛愈伤组织时，采用的特定培养基为愈伤组织培养基；

[0025] 若需要培养获得铁皮石斛出芽组织时，采用的特定培养基为出芽组织培养基；

[0026] 若需要培养获得铁皮石斛分丛组织时，采用的特定培养基为分丛组织培养基；

[0027] 若需要培养获得铁皮石斛生根组织时，采用的特定培养基为生根组织培养基。

[0028] 优选的，步骤1)中所述茎段包括含有结节的茎段。

[0029] 优选的，步骤1)中所述茎段的长度为1～2cm。

[0030] 优选的，步骤1)中所述消毒的方式包括将外植体浸泡于升汞水溶液中进行消毒；所述升汞水溶液中升汞的质量分数为0.1％。

[0031] 优选的，所述浸泡的时间为6～7min。

[0032] 优选的，步骤2)中所述培养的温度为20～22℃，光照条件为：每天光照14h、黑暗8h。

[0033] 优选的，步骤2)中所述培养的光照强度为3000～3500LUX，湿度为80％～85％。

[0034] 本发明的有益效果：本发明提供了一种铁皮石斛组织培养的培养基组，包括愈伤组织培养基、出芽组织培养基、分丛组织培养基和生根组织培养基。本发明的培养基组能够满足铁皮石斛组织培养过程中不同的培养需求，且能够达到良好的培养效果。经过应用发现，采用本发明的愈伤组织培养基培养得到的铁皮石斛愈伤组织长势良好；采用本发明的出芽组织培养基得到的铁皮石斛出芽组织出芽总数多、增殖系数高；采用本发明的分丛组织培养基得到的铁皮石斛分丛组织出芽多、状态好；采用本发明的生根组织培养基得到的铁皮石斛生根组织出芽多、褐化株数少。

具体实施方式

[0035] 本发明提供了一种铁皮石斛组织培养的培养基组，包括愈伤组织培养基、出芽组织培养基、分丛组织培养基和生根组织培养基；

[0036] 所述愈伤组织培养基包括第一愈伤组织培养基、第二愈伤组织培养基或第三愈伤组织培养基；所述第一愈伤组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4mg/L、萘乙酸1mg/L；所述第二愈伤组织培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5mg/L、萘乙酸1.5mg/L；所述第三愈伤组织培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5～1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；

[0037] 所述出芽组织培养基包括第一出芽组织培养基或第二出芽组织培养基；所述第一出芽组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；所述第二出芽组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.25mg/L；

[0038] 所述分丛组织培养基包括第一分丛组织培养基或第二分丛组织培养基；所述第一分丛组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4mg/L、萘乙酸1mg/L；所述第二分丛组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；

[0039] 所述生根组织培养基包括第一生根组织培养基或第二生根组织培养基；所述第一生根组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：吲哚-3-丁酸1mg/L、萘乙酸1.5mg/L；所述第二生根组织培养基以MS为基础培养基，还包括以下质量浓度的组分：吲哚-3-丁酸2mg/L、萘乙酸2.5mg/L。

[0040] 采用本发明的愈伤组织培养基培养得到的铁皮石斛愈伤组织长势良好；采用本发明的出芽组织培养基得到的铁皮石斛出芽组织出芽总数多、增殖系数高；采用本发明的分丛组织培养基得到的铁皮石斛分丛组织出芽多、状态好；采用本发明的生根组织培养基得到的铁皮石斛生根组织出芽多、褐化株数少。

[0041] 本发明还提供了一种利用上述方案所述培养基组进行的铁皮石斛组织培养的方法，包括以下步骤：

[0042] 1)以铁皮石斛的茎段为外植体，对外植体进行消毒；

[0043] 2)根据需要，将消毒后的外植体接种于上述方案所述培养基组的特定培养基，进行培养，得到铁皮石斛组织培养材料；

[0044] 若需要培养获得铁皮石斛愈伤组织时，采用的特定培养基为愈伤组织培养基；所述愈伤组织培养基选自第一愈伤组织培养基、第二愈伤组织培养基和第三愈伤组织培养基中的一种；

[0045] 若需要培养获得铁皮石斛出芽组织时，采用的特定培养基为出芽组织培养基；所述出芽组织培养基为第一出芽组织培养基或第二出芽组织培养基

[0046] 若需要培养获得铁皮石斛分丛组织时，采用的特定培养基为分丛组织培养基；所述分丛组织培养基为第一分丛组织培养基或第二分丛组织培养基

[0047] 若需要培养获得铁皮石斛生根组织时，采用的特定培养基为生根组织培养基；所述生根组织培养基为第一生根组织培养基或第二生根组织培养基。

[0048] 本发明首先以铁皮石斛的茎段为外植体，对外植体进行消毒；所述茎段优选的包括含有结节的茎段，有结节的茎段上有部分的芽眼，更有利于愈伤组织和丛芽的分化；所述茎段的长度优选为1～2cm；所述铁皮石斛优选为乌江铁皮石斛；本发明所述铁皮石斛来源于常规市售；本发明具体实施过程中，所述铁皮石斛由贵州省林科院提供。

[0049] 本发明在消毒前，优选的还包括对外植体进行冲洗；所述冲洗采用的试剂优选为蒸馏水；所述冲洗的次数优选为2～3次。

[0050] 本发明中，所述消毒的方式优选的包括将外植体浸泡于升汞水溶液中进行消毒；所述升汞水溶液中升汞的质量分数优选为0.1％；所述浸泡的时间优选为6～7min，这一浸泡时间能够保证铁皮石斛组织培养过程中组织出芽、生长状态良好；所述浸泡过程中优选的伴随搅拌，搅拌可以使外植体更加充分接触消毒液，从而达到充分消毒的效果，本发明对所述搅拌的转速没有特殊限制。

[0051] 本发明在消毒后，优选的还包括对消毒后的外植体进行冲洗，以去除升汞水溶液；所述冲洗采用的试剂优选为蒸馏水；所述冲洗的次数优选为4～5次。

[0052] 对外植体进行消毒和冲洗后，本发明根据需要，将消毒和冲洗后的外植体接种于上述方案所述培养基组的特定培养基，进行培养，得到铁皮石斛组织培养材料；若需要培养获得铁皮石斛愈伤组织时，采用的特定培养基为愈伤组织培养基；若需要培养获得铁皮石斛出芽组织时，采用的特定培养基为出芽组织培养基；若需要培养获得铁皮石斛分丛组织时，采用的特定培养基为分丛组织培养基；若需要培养获得铁皮石斛生根组织时，采用的特定培养基为生根组织培养基。

[0053] 本发明中，所述接种过程中优选的采用经过高温高压灭菌的镊子夹取已消毒的外植体；所述接种的外植体的接种量优选为每个200mL的培养瓶内放置6个外植体；所述培养的温度优选为20～22℃，光照条件优选为：光照14h、黑暗8h，光照强度优选为3000～3500LUX，湿度优选为80％～85％。

[0054] 下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0055] 实施例1

[0056] 1、材料：乌江铁皮石斛，由贵州省林科院提供，以乌江铁皮石斛的茎段作为外植体。

[0057] 2、培养基：

[0058] 1-s2：以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4.0mg/L、萘乙酸1mg/L；

[0059] 1-s4：以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5.0mg/L、萘乙酸1.5mg/L；

[0060] 2-s1：以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；

[0061] 2-s2：以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1mg/L、萘乙酸0.1mg/L；

[0062] 2-s3：以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1mg/L、萘乙酸0.1mg/L。

[0063] 3、材料的预处理：以铁皮石斛的茎段作为外植体。将茎段剪成1～2厘米长的小段，用蒸馏水冲洗3次，备用。

[0064] 4、材料灭菌：将已经预处理好的外植体采用0.1％(体积分数)的升汞水溶液浸泡7min，期间不断搅拌的方式对外植体进行灭菌处理，之后倒出升汞并用无菌蒸馏水冲洗5次，倒尽无菌蒸馏水，备用。

[0065] 5、接种：将经过灭菌处理的外植体用经过高温高压灭菌的镊子夹取接种于培养瓶的培养基上，进行培养；所述培养的温度为22℃，光照条件为：每天光照14h、黑暗8h，光照强度为3500LUX，湿度为85％。

[0066] 接种时，穿白大褂，戴工作帽和口罩，不能说话或直接对着植物材料或培养容器口呼吸。打开包塞纸和瓶塞、瓶盖时注意不要污染瓶口。在近酒精灯火焰处打开培养瓶瓶口，并使培养瓶倾斜，以免微生物落入瓶内。瓶口可以在拔塞、开盖前灼烧灭菌，接种工作宜在近火焰处进行。手不能接触接种器械的前半部分(即直接接触植物材料的部分)，接种操作时(包括拧开或拧上培养瓶盖时)，培养瓶、试管或三角瓶宜水平放置或倾斜一定角度(45度以下)，避免直立放置而增大污染机会。应避免手从培养基、植物材料、接种器械上方经过。已消毒的植物材料接种时不慎掉在超净工作台上，不宜再用。接种期间如遇停电等事件使超净工作台停止运转，重新启动时应对接种器械及暴露的植物材料重新消毒。

[0067] 接种5天后，统计外植体的生长情况，具体实验结果见表1。

[0068] 表1乌江铁皮石斛茎作为外植体的生长情况

[0069] 编号瓶数染菌出芽数褐化(株) 愈伤外植体1-s2 4 2 13 0 1 15
1-s4 3 1 18 0 2 6
2-s1 4 4 0 0 4 0
2-s2 5 3 21 3 2 7
2-s3 2 0 9 2 8 6

[0070] 对比例1

[0071] 以乌江铁皮石斛的根作为外植体。根用蒸馏水冲洗3次，备用；其余同实施例1。接种5天后，统计外植体的生长情况，具体实验结果见表2。

[0072] 表2乌江铁皮石斛根作为外植体的生长情况

[0073]编号瓶数染菌出芽数褐化(株) 愈伤外植体
1-s2 1 0 0 0 0 18
1-s4 1 0 0 0 0 6
2-s1 2 0 0 0 0 23
2-s2 3 0 0 3 0 30
2-s3 5 0 0 2 0 54

[0074] 对比例2

[0075] 以乌江铁皮石斛的叶作为外植体。叶片用蒸馏水冲洗3次，然后剪切成1cm×1cm的正方形分备用；其余同实施例1。接种5天后，统计外植体的生长情况，具体实验结果见表3。

[0076] 表3乌江铁皮石斛叶作为外植体的生长情况

[0077]编号瓶数染菌出芽数褐化(瓶) 愈伤外植体
1-s2 2 1 0 1 0 5
1-s4 2 0 0 2 0 8
2-s1 2 0 0 2 0 9
2-s2 2 0 0 2 0 8
2-s3 1 0 0 1 0 5

[0078] 对比例3

[0079] 以乌江铁皮石斛的花作为外植体。花用蒸馏水冲洗3次，备用；其余同实施例1。接种5天后，统计外植体的生长情况，具体实验结果见表4。

[0080] 表1～表4对比可以看出，乌江铁皮石斛组织培养的最佳外植体是茎段，茎段的生长状态较好。

[0081] 表4乌江铁皮石斛花作为外植体的生长情况

[0082]

[0083]

[0084] 实施例2

[0085] 培养基以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤3.0mg/L、萘乙酸1mg/L；其余与实施例1相同。观察记录污染率，结果参见表5。

[0086] 对比例4

[0087] 材料灭菌步骤中，将已经预处理好的外植体(茎段)采用0.1％(体积分数)的升汞水溶液浸泡5min；其余与实施例2相同。观察记录污染率，结果参见表5。

[0088] 对比例5

[0089] 材料灭菌步骤中，将已经预处理好的外植体(茎段)采用0.1％(体积分数)的升汞水溶液浸泡9min；其余与实施例2相同。观察记录污染率，结果参见表5。

[0090] 表5不同消毒时间的污染率情况

[0091]

[0092] 实施例3

[0093] 培养基(1-s2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4.0mg/L、萘乙酸1mg/L；其余与实施例1相同。接种30天后，统计外植体愈伤组织的生长情况，结果参见表6。

[0094] 实施例4

[0095] 培养基(1-s4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5.0mg/L、萘乙酸1.5mg/L；其余与实施例3相同。

[0096] 实施例5

[0097] 培养基(2-s1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例3相同。

[0098] 实施例6

[0099] 培养基(2-s2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例3相同。

[0100] 实施例7

[0101] 培养基(2-s3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例3相同。

[0102] 对比例6

[0103] 培养基(1-s1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5.0mg/L、萘乙酸1.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0104] 对比例7

[0105] 培养基(1-s3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤3.0mg/L、萘乙酸1.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0106] 对比例8

[0107] 培养基(1-s5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5.0mg/L、萘乙酸0.5mg/L；其余与实施例3相同。

[0108] 对比例9

[0109] 培养基(2-s4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.5mg/L；其余与实施例3相同。

[0110] 对比例10

[0111] 培养基(2-s5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.3mg/L；其余与实施例3相同。

[0112] 对比例11

[0113] 培养基(3-s1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.2mg/L、KT(激动素)2.0mg/L、2,4-D 2.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0114] 对比例12

[0115] 培养基(3-s2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.5mg/L、KT 2.0mg/L、2,4-D 2.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0116] 对比例13

[0117] 培养基(3-s3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.2mg/L、KT 2.0mg/L、2,4-D 1.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0118] 对比例14

[0119] 培养基(3-s4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.2mg/L、KT 1.0mg/L、2,4-D 2.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0120] 对比例15

[0121] 培养基(3-s5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.5mg/L、KT 1.0mg/L、2,4-D 1.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0122] 表6实施例3～7和对比例6～15乌江铁皮石斛愈伤组织生长情况

[0123] 编号愈伤组织长势1-s1 愈伤组织长势一般
1-s2 愈伤组织长势良好
1-s3 愈伤组织长势一般
1-s4 愈伤组织长势良好
1-s5 愈伤组织长势一般
2-s1 愈伤组织长势良好
2-s2 愈伤组织长势良好
2-s3 愈伤组织长势良好
2-s4 愈伤组织长势一般
2-s5 愈伤组织长势一般
3-s1 愈伤组织长势一般
3-s2 愈伤组织长势一般
3-s3 愈伤组织长势一般
3-s4 愈伤组织长势一般
3-s5 愈伤组织长势一般

[0124] 实施例8

[0125] 培养基(2-s3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例1相同。接种30天后，统计外植体出芽组织的生长情况，结果参见表7。

[0126] 实施例9

[0127] 培养基(2-s5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.25mg/L；其余与实施例8相同。

[0128] 对比例16

[0129] 培养基(2-s1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例8相同。

[0130] 对比例17

[0131] 培养基(2-s2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例8相同。

[0132] 对比例18

[0133] 培养基(2-s4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.5mg/L；其余与实施例8相同。

[0134] 对比例19

[0135] 培养基(3-s1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.2mg/L、KT 2.0mg/L、2,4-D 2.0mg/L；其余与实施例8相同。

[0136] 对比例20

[0137] 培养基(3-s2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.5mg/L、KT 2.0mg/L、2,4-D 2.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0138] 对比例21

[0139] 培养基(3-s3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.2mg/L、KT 2.0mg/L、2,4-D 1.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0140] 对比例22

[0141] 培养基(3-s4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.2mg/L、KT 1.0mg/L、2,4-D 2.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0142] 对比例23

[0143] 培养基(3-s5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：萘乙酸0.5mg/L、KT 1.0mg/L、2,4-D 1.0mg/L；其余与实施例3相同。

[0144] 表7实施例8～9和对比例16～23的乌江铁皮石斛出芽组织生长情况

[0145]

[0146] 当6-苄氨基嘌呤的浓度为0.5mg/L时，萘乙酸的浓度在0.25mg/L时；或者当6-苄氨基嘌呤的浓度为1.5mg/L时，萘乙酸的浓度在0.1mg/L时，乌江铁皮石斛的出芽总数较多，其增值系数也比较大。

[0147] 实施例10

[0148] 培养基(1-s2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤4mg/L、萘乙酸1mg/L；其余与实施例1相同。接种30天后，统计外植体分丛组织的生长情况，结果参见表8。

[0149] 实施例11

[0150] 培养基(2-s1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例10相同。

[0151] 对比例24

[0152] 培养基(1-s1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5mg/L、萘乙酸1mg/L；其余与实施例10相同。

[0153] 对比例25

[0154] 培养基(1-s3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤3mg/L、萘乙酸1mg/L；其余与实施例10相同。

[0155] 对比例26

[0156] 培养基(1-s4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5mg/L、萘乙酸1.5mg/L；其余与实施例10相同。

[0157] 对比例27

[0158] 培养基(1-s5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤5mg/L、萘乙酸0.5mg/L；其余与实施例10相同。

[0159] 对比例28

[0160] 培养基(2-s2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例10相同。

[0161] 对比例29

[0162] 培养基(2-s3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.1mg/L；其余与实施例10相同。

[0163] 对比例30

[0164] 培养基(2-s4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.5mg/L；其余与实施例10相同。

[0165] 对比例31

[0166] 培养基(2-s5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.25mg/L；其余与实施例10相同。

[0167] 表8实施例10～11和对比例24～31的乌江铁皮石斛分丛组织生长情况[0168]

[0169]

[0170] 由表8可知，1-s2培养基培养效果最好，出芽数达到500株，且生长状态良好；其次是2-s1培养基，出芽数为400株。

[0171] 实施例12

[0172] 培养基(P3)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：吲哚-3-丁酸1.0mg/L、萘乙酸1.5mg/L；其余与实施例1相同。接种30天后，统计外植体生根组织的生长情况，结果参见表9。

[0173] 实施例13

[0174] 培养基(P5)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：吲哚-3-丁酸2.0mg/L、萘乙酸2.5mg/L；其余与实施例12相同。

[0175] 对比例32

[0176] 培养基(P1)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：吲哚-3-丁酸1.5mg/L、萘乙酸1.5mg/L；其余与实施例12相同。

[0177] 对比例33

[0178] 培养基(P2)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：吲哚-3-丁酸1.5mg/L、萘乙酸2.0mg/L；其余与实施例12相同。

[0179] 对比例34

[0180] 培养基(P4)以MS为基础培养基，还包括以下浓度的组分：吲哚-3-丁酸1.0mg/L、萘乙酸2.0mg/L；其余与实施例12相同。

[0181] 表9实施例12～13和对比例32～34的乌江铁皮石斛生根组织生长情况[0182]

[0183] 由表9可以看出，P3和P5出芽数最多，褐化株数较少。

[0184] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

标题	发布/更新时间	阅读量
一种适合反刍动物的蛋白肽钒螯合物的制备方法	2020-05-08	782
一种简便的植物根边缘细胞提取器	2020-05-11	87
杀真菌组合物	2020-05-08	488
乙烯利在促进白僵菌产孢中的应用	2020-05-08	642
增强的水飞蓟提取物的溶解性	2020-05-08	842
一种服装面料的漂染工艺	2020-05-08	333
一种高强度耐热型工业丝的制备方法	2020-05-08	778
测定平菇中吲哚乙酸氧化酶活性的方法	2020-05-08	292
碳-碳环合酶及其编码基因与应用	2020-05-08	730
一种保温防水绿化种植预制墙板屋顶面板及其制备方法	2020-05-08	74

一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法

一种铁皮石斛组织培养的培养基组和方法

技术领域

背景技术

发明内容

具体实施方式

该功能需要专业版企业版VIP权限，您可以：