发明领域

本发明总的涉及有机化学领域和抗增殖和促凋亡化合物。更具体的，本 发明涉及基于苯并二氢吡喃的化合物和衍生物及其类似物，及其作为细胞抗 增殖、促凋亡、免疫调节和抗病毒药剂的用途。

相关领域的描述

细胞增殖和细胞死亡(凋亡)的生物学是极端复杂的，涉及多种胞内信号传递 途径和多种相互作用的基因产物。癌细胞可显示多种细胞增殖正常调控的缺陷， 从而使它们的数量增加。另外，癌细胞显示与通过多步过程除去异常细胞(称作细 胞程序性死亡或凋亡)有关的机制的缺陷。因此，失控的细胞增殖和对引起死亡的 信号途径的抑制联合起来，使癌细胞同时具有生长和存活优势。

细胞数量是否增加由负作用和正作用的生长调节基因产物的表达平衡，以及 是否存在功能性细胞死亡信号传递途径决定。负作用的生长调节基因有助于封阻 在细胞循环中的细胞。正作用生长调节基因刺激细胞通过细胞循环前进。和凋亡 有关的基因可以是促凋亡或抗凋亡的，两者之间的动态平衡决定一个细胞是生存 还是死亡。

为了生存并增加其数量，癌细胞随时间经历了一系列突变事件，这些事件除 去调节控制，赋予它们即使在存在促凋亡信号的情况下，也能不受检查的生长并 存活的能力，并发展出允许它们逃避免疫应答防御系统的检查和清除的特性。癌 症可导致个体死亡，除非用手术切除或用药物有效治疗。

存在各式各样的病理性细胞增殖状况，对于它们需要新的治疗对策和药剂来 提供治疗的益处。这些病理状况可在几乎所有能异常细胞增殖或对细胞死亡信号 应答异常的细胞类型中发生。在显示病理性或异常生长和死亡特征的细胞类型中， 有(1)成纤维细胞，(2)血管内皮细胞，和(3)上皮细胞。因此，需要新颖方法，以 在个体的所有或几乎所有器官和组织系统中治疗局部或扩散的病理状况。

大多数癌症，不论它们是雄性专一性的，如前列腺或睾丸癌，或雌性专一性 的，如乳腺癌、卵巢癌或宫颈癌，或它们同样的影响雄性或雌性，如肝癌、皮肤 癌或肺癌，随时间产生越来越多的基因损伤和后随事件，并最终变得具有高度转 移性并难以治疗。已证明，手术摘除局部癌症仅在癌症未扩散超过原发性病变时 是有效的。一旦癌症已扩散到其它组织和器官，手术方法必须补充其它更专一性 的程序，来根除患病的或恶性的细胞。大部分常用的治疗患病的或恶性的细胞的 补充方法，如化疗或生物照射，不能局限于肿瘤细胞，并且虽然它们具有对恶性 细胞比例较大的破坏作用，还是常常在某些程度上影响正常细胞。

已用生育酚、生育三烯酚和维生素E的某些衍生物作为促凋亡药剂和DNA合 成抑制剂。结构上，维生素E是由苯并二氢吡喃醇头部和烷基侧链构成的。有8 种天然存在的维生素E主要形式：alpha(α)、beta(β)、gamma(γ)和delta(δ)生 育酚，和α、β、γ和δ生育三烯酚。生育酚和生育三烯酚不同在于，它们具有饱 和的植基侧链，而不是未饱和的异戊二烯基侧链。四种形式的生育酚和生育三烯 酚的不同在于苯并二氢吡喃醇头部上的甲基基团的数目(α有3个，β和γ有2个， 而δ有1个)。

RRR-α-生育酚琥珀酸酯是RRR-α-生育酚的衍生物，它的结构通过酯键被修 饰，在苯并二氢吡喃头部的6-位具有一个琥珀酰基部分而不是羟基部分。该RRR- α-生育酚的酯连接的琥珀酸部分具有维生素E影响触发凋亡和抑制DNA合成的生 物学作用的最强大形式。该维生素E形式诱导肿瘤细胞经历凋亡，同时对正常细 胞没有凋亡诱导作用。该维生素E形式作为抗癌药剂的最大优点是，许多癌细胞 低水平表达或不表达能切开琥珀酸部分的酯酶，而该酯酶将RRR-α-生育酚的琥珀 酸酯形式转换成游离RRR-α-生育酚形式。RRR-α-生育酚不显示强大的抗增殖作用 和凋亡触发生物活性。然而，酯连接的维生素E琥珀酸酯在体内是无效的，因为 宿主中的天然酯酶切去琥珀酸部分，形成无效的抗癌药剂RRR-α-生育酚。

现有技术的缺陷在于，缺乏在各种各样的病理生理状况下抑制不希望的或失 控的细胞增殖，而对正常细胞没有或几乎没有影响的有效方法。本发明填补了本 领域这一长期存在的需要。

发明简述

在本发明的一个实施例中，提供了一种化合物，具有结构式

其中X是氧、氮或硫；Y选自氧、氮和硫，其中当Y是氧或氮，n是1，当Y是 硫，n是0；R1选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧酸、羧酸酯(盐)、羧 酰胺、酯、硫代酰胺、硫羟酸酯、硫羟酸、糖、烷氧基-连接的糖、胺、磺酸酯(盐)、 硫酸酯(盐)、磷酸酯(盐)、醇、醚和腈；R2选自氢、甲基、苄基羧酸、苄基羧酸 酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R3选自氢、甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、 苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R4选自甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、苄基羧 酰胺、苄酯、糖和胺；和R5选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧基、酰 胺和酯；其中当Y是氮时，所述氮被R6取代，其中R6选自氢和甲基；其中当X是 氧时，R2是甲基，R3是甲基，R4是甲基而R5是植基，R1不是丁酸。

在本发明的另一个实施例中，提供了一种治疗细胞增殖疾病的方法，该方法 包括施给动物药物学上有效量的化合物，该化合物具有结构式：

其中X是氧、氮或硫；Y选自氧、氮和硫，其中当Y是氧或氮，n是1，当 Y是硫，n是0；R1选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧酸、羧酸酯(盐)、 羧酰胺、酯、硫代酰胺、硫羟酸酯、硫羟酸、糖、烷氧基-连接的糖、胺、磺酸酯 (盐)、硫酸酯(盐)、磷酸酯(盐)、醇、醚和腈；R2选自氢、甲基、苄基羧酸、苄 基羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R3选自氢、甲基、苄基羧酸、苄基 羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R4选自甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、 苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；和R5选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧 基、酰胺和酯；其中当Y是氮时，所述氮被R6取代，其中R6选自氢和甲基。

在本发明的另一个实施例中，提供了一种含有本文公开的化合物和一种药物 学上可接受的载体的药物组合物。

在本发明的另一个实施例中，提供了一种诱导细胞凋亡的方法，该方法包括 使所述细胞与药物学上有效量的本发明的化合物接触的步骤。

从下文为公开而提供对本发明的优选例的描述中将可明白本发明的其它方 面、特征、益处和优点。

附图简述

通过参考在附图中说明的某些实施例，其中获得、简要总结在详细的、更特 定的本发明描述可被理解的本发明的上述特征、优点和目的，以及其它将变得清 楚的方面。这些附图构成了本说明书的一部分。然而还要注意，附图说明了本发 明的优选例，因此不被看作是限制其范围。

图1显示了生育酚、生育三烯酚和其它基于苯并二氢吡喃的化合物的一般结 构。

图2显示了目前合成并测试过的一般基于生育酚的化合物1-29。

图3A、3B和3C显示在位置R1化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合 成方法。

图4显示在位置R2化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合成方法。

图5显示在位置R3和R4化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合成方 法。

图6显示在位置R5化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合成方法。

图7显示了完全消旋的1-氮杂-α-生育酚类似物的通用有机合成方法。图7A 显示了化合物31-38的合成流程，图7B显示了化合物39-43的合成流程。

图8显示了最大耐受剂量研究中非肿瘤Balb/c雌性小鼠在第11天和第23 天的平均体重。

图9显示了MDA MB-435人乳腺癌细胞(图9A)、DU-145人前列腺癌细胞(图9B) 和HT-29人结肠癌细胞(图9C)治疗后平均肿瘤重量百分数的比较。

发明详述

给出下列定义是为了更好的理解本文所公开的发明。未特别限定的任何术语 应视为本领域中术语的一般意义。

本文所用的术语“个体”指动物和人。

本文所用的术语“生物学抑制性的”或增殖细胞生长的“抑制”应包括部分 或全部生长抑制，还意味着包括细胞增殖或生长速率的下降。可通过评估试验物 质对组织培养物中恶性或异常增殖的靶细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长 的影响，或其它本领域一般技术人员已知的方法确定本发明组合物的生物抑制剂 剂量。

本文所用的术语“细胞程序性死亡或凋亡的诱导”应包括显示部分或全部细 胞死亡，且细胞显示确定的形态学和生物化学凋亡特征。可通过评估试验物质对 组织培养物中恶性的或异常增殖靶细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长的影 响，或其它本领域一般技术人员已知的方法确定本发明组合物的诱导凋亡的剂量。

本文所用的术语“细胞循环停滞的诱导”应包括由于处理的细胞被封阻在 G0/G1或G2/M细胞循环期的生长停滞。可通过评估试验物质对组织培养物中靶恶 性或异常增殖细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长的影响，或其它本领域一 般技术人员已知的方法确定本发明组合物的诱导细胞循环停滞的剂量。

本文所用的术语“细胞分化的诱导”应包括由于处理的细胞被诱导经历细胞 分化(该阶段不发生细胞增殖)的生长停滞。可通过评估试验物质对组织培养物中 恶性或异常增殖靶细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长的影响，或其它本领 域一般技术人员已知的方法确定本发明组合物的诱导细胞分化的剂量。

本发明提供生育酚、生育三烯酚和其它带或不带饱和植基或不饱和异戊二烯 基侧链的苯并二氢吡喃衍生物，及其类似物；例如其偶氮-和硫羟-类似物。利用 醚和数种其它化学键来将不同部分与生育酚生育三烯酚及其它苯并二氢吡喃衍生 物连接，可产生新的内用抗癌化合物。图1显示了本发明的新颖化合物的一般结 构，图2列出了优选化合物，而图3-7提供了其合成的可能途径。这些分子的新 颖特征包括：苯并二氢吡喃结构的位置R1-R5的化学官能化，植基和异戊二烯基侧 链的化学官能化，特别是基于生育酚和生育三烯酚的化合物(图1)。另外，显示 了苯并二氢吡喃环上的氧原子被杂原子取代(N或S)的化合物(图7)。特别优选的 化合物包括2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6- 基氧基)乙酸(1)、2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡 喃-6-基氧基)丙酸(2)、2，5，8-三甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢 吡喃-6-基氧基)乙酸(7)、2，7，8-三甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)乙酸(8)、2，8-二甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二 氢吡喃-6-基氧基)乙酸(9)、2-(N，N-(羧基甲基)-2(2，5，7，8-四甲基-(2R- (4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(12)、2，5，7，8-四甲基 -(2RS-(4RS，8RS，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(15)、 2，5，7，8-四甲基-2R-(2RS，6RS，10-三甲基十一烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸 (17)、3-(2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧 基)丙基-1-氯化铵(19)、2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并 二氢吡喃-3-烯-6-基氧基)乙酸(20)、2-(2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8，12-三甲基 十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)三乙基硫酸铵(21)、6-(2，5，7，8-四甲基-(2R- (4R，8，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃)乙酸(22)、2，5，7，8-四甲基-(2R-(十七 烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(25)、2，5，7，8-四甲基-2R-(4，8-二甲基-1，3，7 E:Z壬三烯)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(26)、和E，Z，RS，RS-(植基三甲基苯硫 酚-6-基氧基)乙酸(27)、1-氮杂-α-生育酚-6-基氧基-乙酸(39)、1-氮杂-α-生育 酚-6-基氧基-乙酸甲酯(40)、乙酸1-氮杂-N-甲基-α-生育酚-6-基氧基-甲酯 (41)、1-氮杂-N-甲基-α-生育酚-6-基氧基-乙酸(42)、6-(2，4-二硝基苯基偶氮 (2，5，7，8-四甲基-2-(4，8，12-三甲基十三烷基)-1，2，3，4-四氢喹啉(43)。

本发明药物动力学设计的化合物具有提高的治疗指数，并且是癌细胞生长的 强大抑制剂，即它们显示高抗肿瘤活性，而具有极小的副作用。由于在哺乳动物 中没有已知的醚酶，不能轻易降解这些化合物。这些化合物可用于治疗与过量细 胞增殖有关的癌症和疾病，以及由于细胞杀伤机制受抑制而导致的细胞大量积聚， 而且副作用非常小。本发明的化合物通过诱导凋亡和DNA合成停滞抑制癌细胞生 长。这些化合物对凋亡的诱导是通过活化TGF-β、应激激酶和Fas/Fas配体信号 传递途的活化来介导的。不排除其它途径，如神经酰胺产生的凋亡诱导。这些生 长抑制剂性能使化合物可用于治疗增殖性疾病，包括不同细胞类型和种系的癌症、 非肿瘤性过度增生疾病和与凋亡信号传递途径缺陷有关的疾病。本发明的几种化 合物同时是凋亡的强诱导物和代表不同细胞种系的肿瘤细胞DNA合成停滞的强抑 制剂。

说明了本发明的化合物在治疗癌症和其它涉及过量细胞增殖或细胞不能死亡 的疾病和病症中的治疗用途。以新颖衍生物(表1和2)的EC50浓度显示诱导人乳 腺癌细胞(MDA MB435，MDA MB 231，和MCF-7乳腺癌细胞)、人前列腺癌细胞(PC -3、DU-145和LnCaP)、人卵巢肿瘤细胞(C-170)、人宫颈癌肿瘤细胞(ME-180)、 人子宫内膜细胞(RL-95-2)、人淋巴样细胞(骨髓瘤，Raji，Ramos，Jurkat和HL -60)，结肠癌细胞(HT-29和DLD-1)和肺癌细胞(A-549)的凋亡。显示新的衍 生物不诱导正常人乳房表皮细胞(HMEC)和不死化，但是非肿瘤性的MCF-10A乳房 细胞的凋亡。

可用本发明的这些新化合物和方法治疗肿瘤病和非肿瘤病。肿瘤病的代表例 是卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、膀胱癌、肺癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、 睾丸癌、神经胶质瘤、纤维肉瘤、成视网膜细胞瘤、黑素瘤、软组织肉瘤、骨肉 瘤、结肠癌、肾癌、胰脏癌、基底细胞癌和鳞状细胞癌。非肿瘤疾病的代表例选 自牛皮癣、良性增生性皮肤病、鱼鳞癣、乳头瘤、视网膜变性、硬皮病和血管瘤。

本发明的化合物和方法可用于治疗由于所选细胞不能经历正常细胞程序性死 亡或凋亡发生的非肿瘤疾病。由于细胞不能死亡发生的疾病和病症的代表例是自 身免疫病。自身免疫病的特征是免疫细胞破坏自身细胞、组织和器官。一组代表 性的自身免疫病包括自身免疫甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、系统性红斑 狼疮、疱疹样皮炎、乳糜泻和类风湿性关节炎。本发明不限于自身免疫，还包括 所有具有免疫成分的病症，如与心血管空斑形成有关的炎症过程，或紫外线照射 引起的皮肤损伤。

可用本发明的化合物和方法治疗由于病毒感染引起的疾病和病症。由于病毒 感染引起的疾病和病症的代表例是人免疫缺陷病毒(HIV)。由于这些化合物作用于 胞内信号传递网络，它们能作用于任何类型的外部细胞信号，如细胞因子、病毒、 细菌、毒素、重金属等。

可用本发明的方法治疗任何动物。最优选的，本发明的方法可用于人。

一般为了实现药理性有效细胞杀伤和抗增殖效果，可以任何治疗有效的剂量 施用这些化合物及其类似物。优选以0.1mg/kg-约100mg/kg的剂量施用结构修饰 的生育酚和生育三烯酚和类似物。更优选的，以约1mg/kg-约10mg/kg的剂量施 用结构修饰的生育酚和生育三烯酚和类似物。

可通过外用、眼内、肠道外、口腔、鼻内、静脉内、肌肉内、皮下、或任何 其它合适途径施用本发明的组合物。施用的剂量视年龄、疾病的临床阶段和程度， 或个体的遗传因素、部位、重量、同时治疗(如存在)的种类，病理或恶性状况的 性质而定。可以胶囊、片剂，或溶液、悬液或酏剂等用于口服的形式，溶液、悬 液或乳剂等无菌液体形式使用本发明方法中所用的有效给药体系。对于外用，可 使用油膏、霜或喷剂。优选用任何惰性载体与合适的增溶剂，如盐水或磷酸缓冲 盐，或其它方法中化合物使用的本发明具有合适溶解性的载体，如乙醇、丙酮或 DMSO联用。

存在各种各样由于缺乏正常细胞死亡引起的病理性癌细胞和非癌细胞增殖情 况和细胞聚集，对于它们，本发明的组合物和方法将提供治疗益处。这些病理情 况可存在于几乎所有能异常细胞增殖或程序性细胞死亡机制有缺陷的细胞类型 中。在显示病理性或异常生长，或异常死亡的细胞类型中有(1)成纤维细胞，(2) 血管内皮细胞和(3)表皮细胞。可从上文看出，本发明的方法可用于在个体的所有 或几乎所有器官和组织系统中治疗局部或扩散的病理情况。

特别考虑，可用新的本发明基于苯并二氢吡喃的化合物及其衍生物制备药物 组合物。就此，药物组合物含有本发明的新颖化合物和药物学上可接受的载体。 本领域一般技术人员不需过分实验即可确定施用本发明的化合物和类似物的合适 剂量和途径。

因此，本发明针对设计和有效使用能专一性靶向癌细胞，并下调生长刺激信 号、或上调生长抑制信号、或下调存活信号和/或上调死亡信号的新颖药剂。更具 体的，本发明创造了激活生长抑制因子、触发死亡信号传递途径并抑制DNA合成 的新颖药剂，并确定了其特征。

给出下列例子，用于说明本发明的各种实施例，而不是为了以任何形式限制 本发明。

实施例1

有机合成方法

通过结构修饰苯并二氢吡喃环体系(图3-6)和杂原子取代(N或S)苯并二氢吡 喃环上的氧(图7A和7B)，能合成各种生育酚、生育三烯酚和其它带或不带饱和 植基或未饱和异戊二烯基侧链的苯并二氢吡喃衍生物及其类似物。结构变量R1、 R2、R3、R4、R5和X表示苯并二氢吡喃基上被修饰的基团，Y代表氧或苯并二氢吡 喃环上氧原子的杂原子取代(N或S)。用烷基化化学，可合成大量含有不同R1基 团的化合物，特别是当X是氧时。烷基化后，R1基团的进一步化学修饰能合成各 种各样的新颖化合物。溴化苯并二氢吡喃基的苄基的甲基提供了能改变R2、R3和 R4基团的中间物。改变基团R5也是可能的，尤其是当从商品可购得的6-羟基- 2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸开始时。当苯并二氢吡喃环上氧原子存在氮 的杂原子取代时，可以用作为氢或甲基的R6取代氮。将X改变为除了氧以外的基 团(在生育酚和生育三烯酚中X是氧)可使用钯化学(对于X＝CH2)和亲核芳族取代 (对于X＝N或S)实现。其它对苯并二氢吡喃结构的可能修饰包括：3-4位的不饱和 化；环缩小；产生5元呋喃基环。

使用的试剂可以是商品购得的，或根据已知方法制备的。通过蒸馏获得无水 CH2Cl2和THF。所用的所有其它溶剂是试剂级的。无水反应条件维持在烘箱干燥的 玻璃器皿中的微带正压的氩气气氛中。用从EM Science购得的230-400筛目二氧 化硅进行硅胶层析。在Varian Unity频谱仪上分别在300.132MHz和75.033MHz 频率获得常规1H-和13C-NMR。NMR谱参照TMS(0ppm)或CDCl3的同位素杂质峰(对 于1H和13C，分别是7.26和77.0ppm)。在德克萨斯大学奥斯丁分校的质谱中心进 行了高分辨电子轰击电离化质谱分析。

实施例2

新生育酚化合物的合成和表征

2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 乙酸(1)

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)处理R，R，R-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩 尔)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(1.2g， 30mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并 用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用 Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％ 乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和 盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干 燥48小时。产物1是蜡状的米色固体(0.50克，88％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH， 1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)， 2.07，2.14，2.16(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)， 4.34(s，2H，OCH3)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-，7a-，8a-CH3)， 19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4， 24.8(CH2)，28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.4，37.5，39.4， 40.0(CH2)，69.2(OCH2)，75.0(2-C)，117.8，123.2，125.4，127.3(芳基C)，147.0， 148.5(芳基C-O)，173.7(COOH)；HRMS(CI，m/z)：489.394374(M+H+，C31H53O4计算 值：489.394386)。用HMQC、DEPT-135和1H-NOSEY确认测定值。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 丙酸(2)

用合成1的相同方法，使用合适的溴烷酸合成了化合物2-6。

(产率89％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.09，2.14，2.19(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，2.85(t，J＝6.4Hz，2H，CH2COOH)， 3.96(t，J＝6.4Hz，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-，7a-， 8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)， 24.4，24.8(CH2)，28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，35.1，37.3，37.4， 37.5，39.4，40.0(CH2)，67.5(OCH2)，74.8(2-C)，117.5，122.9，125.8，127.8(芳 基C)，147.6，148.0(芳基C-O)，177.1(COOH)；HRMS(CI，m/z)： 503.408610(M+H+，C32H55O4计算值：503.410036)。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 丁酸(3)

(85％产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，26H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.14，2.17，2.21(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.62(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，2.72(t，J＝7.2Hz，2H，CH2COOH)， 3.74(t，J＝6.1Hz，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-，7a-， 8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.9(2a-CH3)， 24.4，24.8，25.3(CH2)，28.0(CH)，30.9，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3， 37.4，37.5，39.4，40.0(CH2)，71.3(OCH2)，74.8(2-C)，117.5，122.9，125.7， 127.7(芳基C)，147.8，147.9(芳基C-O)，178.9(COOH)；HRMS(CI，m/z)： 516.424374(M+H+，C33H57O4计算值：516.424386)。

2，5，7，8-四甲基-2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 戊酸(4)

(90％产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，28H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.09，2.14，2.18(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.49(t，J＝6.8Hz，2H，CH2COOH)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)， 3.68(t，J＝5.5Hz，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-，7a-， 8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0，21.4(CH2)，22.6，22.7(CH3)， 23.8(2a-CH3)，24.4，24.8(CH2)，28.0(CH)，30.0(CH2)，31.2(3-CH2)，32.7， 32.8(CH)，35.8，37.3，37.4，37.5，39.4，40.0(CH2)，72.2(OCH2)，74.9(2-C)， 117.8，123.2，125.4，127.3(芳基C)，147.6，148.3(芳基C-O)，178.7(COOH)； HRMS(CI，m/z)：530.433514(M+H+，C34H59O4计算值：530.433516)。

2，5，7，8-四甲基-2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 己酸(5)

(产率77％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，30H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.08，2.12，2.16(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.32(t，J＝6.5Hz，2H，CH2COOH)，2.57(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)， 3.64(t，J＝5.5Hz，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.8，11.9，12.7(5a-，7a-， 8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)， 24.4，24.6，24.8，25.7(CH2)，28.0(CH)，30.0(CH2)，31.3(3-CH2)，32.7， 32.8(CH)，34.0，37.3，37.3，37.4，39.3，40.0(CH2)，72.6(OCH2)，74.7(2-C)， 117.4，122.7，125.4，127.8(芳基C)，147.6，148.2(芳基C-O)，179.6(COOH)； HRMS(CI，m/z)：545.457026(M+H+，C35H61O4计算值：545.456986)。

2，5，7，8-四甲基-2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 辛酸(6)

(产率91％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，34H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.08，2.11，2.16(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.36(m，2H，CH2COOH)，2.58(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，3.62(t， J＝5.5Hz，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-，7a-，8a-CH3)， 19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4，24.6， 24.8，25.1，25.7，26.6(CH2)，28.0(CH)，30.0(CH2)，31.3(3-CH2)，32.7， 32.8(CH)，34.0，37.3，37.3，37.4，39.3，40.0(CH2)，72.7(OCH2)，74.6(2-C)， 117.6，122.8，125.5，127.6(芳基C)，147.5，148.3(芳基C-O)，179.4(COOH)； HRMS(CI，m/z)：573.484396(M+H+，C37H65O4计算值：573.488286)。

2，5，8-三甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙 酸(7)

用溴乙酸甲酯(0.4克，2.8毫摩尔)处理R，R，R-α-生育酚(75毫克，0.18毫摩 尔)的N，N-二甲基甲酰胺(2毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(0.5g， 12.5mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物， 并用乙醚(3×10ml)萃取。用水(3×10ml)和盐水(1×10ml)洗涤合并的乙醚层，然后 用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc 和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×10ml) 和盐水(1×10ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空 干燥48小时。这得到蜡状的米色固体7(80毫克，97％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH， 1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)， 2.12，2.14(2xs，6H，5a-，8a-CH3)，2.61(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，4.59(s，2H， OCH3)，6.53(s，1H，芳基CH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.2，16.1(5a-，8a-CH3)， 19.6，19.7(CH3)，20.7，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4， 24.8(CH2)，27.9(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.2，37.4，37.5，39.4， 40.0(CH2)，66.8(OCH2)，74.8(2-C)，113.8，120.7，123.1，127.3(芳基C)，147.1， 148.2(芳基C-O)，175.3(COOH)；HRMS(CI，m/z)：475.377840(M+H+，C30H51O4计算 值：475.378736)。

2，7，8-三甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙 酸(8)

用溴乙酸甲酯(1.1克，7.4毫摩尔)处理R，R，R-α-生育酚(100毫克，0.24毫 摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(1.0g， 25mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并 用乙醚(3×10ml)萃取。用水(3×10ml)和盐水(1×10ml)洗涤合并的乙醚层，然后用 Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％ 乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×10ml)和 盐水(1×10ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干 燥48小时。这得到蜡状的米色固体8(110毫克，97％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH， 1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)， 2.12，2.19(2xs，6H，7a-，8a-CH3)，2.61(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，4.59(s，2H， OCH2)，6.39(s，1H，芳基CH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.9，12.0(7a-，8a-CH3)， 19.6，19.7(CH3)，20.7，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4， 24.8(CH2)，27.9(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.2，37.4，37.5，39.4， 40.0(CH2)，66.6(OCH2)，75.7(2-C)，110.6，117.7，125.0，126.3(芳基C)，146.9， 148.7(芳基C-O)，175.0(COOH)；HRMS(CI，m/z)：475.377962(M+H+，C30H51O4计算 值：475.378736)。

2，8-二甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸 (9)

用溴乙酸甲酯(1.1克，7.4毫摩尔)处理R，R，R-α-生育酚(100毫克，0.25毫 摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(1.0g， 25mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并 用乙醚(3×10ml)萃取。用水(3×10ml)和盐水(1×10ml)洗涤合并的乙醚层，然后用 Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％ 乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×10ml)和 盐水(1×10ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干 燥48小时。这得到蜡状的米色固体9(111毫克，98％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH， 1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)， 2.15(s，3H，8a-CH3)，2.71(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，4.59(s，2H，OCH2)，6.48(d， J＝3.0Hz，1H，芳基CH)，6.61(d，J＝3.0Hz，1H，芳基CH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)： 16.2(8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，24.0(2a-CH3)， 24.4，24.8(CH2)，27.9(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.2，37.4，37.5，39.4， 40.0(CH2)，65.7(OCH2)，75.8(2-C)，112.3，115.6，121.1，127.5(芳基C)，147.2， 149.9(芳基C-O)，174.8(COOH)；HRMS(CI，m/z)：460.3552022(M+H+，C30H51O4计 算值：460.355262)。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 乙酰胺(10)

用N-羟基琥珀酰亚胺(26毫克，0.23毫摩尔)和二环己基碳二亚胺(46毫 克，0.23毫摩尔)处理1(0.1克，0.2毫摩尔)的CH2Cl2(5毫升)溶液。2分钟后，形 成白色沉淀。搅拌得到的悬液2小时。再搅拌反应物6小时。将反应混合物冷却 至-30℃并过滤。浓缩滤液，通过硅胶层析用EtOAc(35％，v/v)的己烷溶液洗脱， 纯化得到的无色油。这得到白色固体(75毫克，76％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH， 1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)， 2.10，2.12，2.16(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)， 4.19(s，2H，OCH3)，6.36，6.92(2x宽，2H，NH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8， 12.7(5a-，7a-，8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)， 23.8(2a-CH3)，24.4，24.8，(CH2)，28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3， 37.4，37.5，39.4，40.0(CH2)，70.9(OCH2)，74.9(2-C)，117.8，123.3，125.4， 127.3(芳基C)，146.5，148.4(芳基C-O)，172.1(COOH)；HRMS(CI，m/z)： 488.409341(M+H+，C31H54NO3计算值：488.410370)。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 乙酸甲酯(11)

用N，N-二甲基氨基吡啶(26毫克，0.23毫摩尔)、甲醇(1ml)和二环己基碳二 亚胺(46毫克，0.23毫摩尔)处理1(0.1克，0.2毫摩尔)的CH2Cl2(5毫升)溶液。2 分钟后，形成白色沉淀。搅拌得到的悬液6小时。将反应混合物冷却至-30℃并过 滤。浓缩滤液，通过硅胶层析用EtOAc(40％，v/v)的己烷溶液洗脱，纯化得到的 无色油。这产生白色固体(82毫克，80％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H， 4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-， 5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.10， 2.16，2.20(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，3.85(s， 3H，OCH3)，4.32(s，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-，7a-， 8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)， 24.4，24.8(CH2)，28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.4，37.5， 39.4，40.0(CH2)，50.2(OCH3)，69.8(OCH2)，74.9(2-C)，117.6，123.0，125.6， 127.5(芳基C)，147.6，148.2(芳基C-O)，169.8(COOH)；HRMS(CI，m/z)： 503.408411(M+H+，C32H55O4计算值：503.410036)。

2-(N，N-(羧甲基)-2(2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并 二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(12)

用亚氨基二乙酸二乙酯(77毫克，0.4毫摩尔)和六氟磷酸O-7-氮杂苯并三唑- 1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(HATU)(46毫克，0.23毫摩尔)处理1(0.2克，0.4毫 摩尔)的CH2Cl2(5毫升)溶液。12小时后，将反应混合物浓缩至糊状物，然后通过 硅胶层析用EtOAc(30％，v/v)的己烷溶液洗脱纯化。这得到所要的无色油状二酯 中间物(150毫克，55％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，30H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.78(m，2H，3-CH2)，2.08，2.13，2.17(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.58(t，J＝6.8Hz，2H，4-CH2)，4.19，4.22(q，J＝7.4Hz，4H， OCH2)，4.30，4.33，4.42(3xs，6H，2x NCH2，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)： 11.7，11.8，12.7(5a-，7a-，8a-CH3)，14.0(CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6， 21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4，24.8(CH2)，28.0(CH)， 31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.4，37.5，39.4，40.0(CH2)，48.1， 49.4(NCH2)，61.2，61.5(OCH2)，71.8(OCH2)，74.8(2-C)，117.5，122.9，125.6， 127.4(芳基C)，148.0，148.1(芳基C-O)，168.8，169.0(CO)；MS(CI，m/z)： 660(M+H+，C39H65NO7计算值：659.47610)。

用1N NaOH(1毫升)处理二酯中间物(0.15克，0.23毫摩尔)的乙醇(4毫升)溶 液。70℃搅拌得到的混浊混合物15小时。用1N HCl酸化反应混合物，真空除去 乙醇。用CHCl3(5×20ml)萃取得到的水溶液，用Na2SO4干燥合并的有机层。这得 到白色固体状的12(0.13克，52％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-， 8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-， 6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.70(m，2H，3-CH2)，2.01，2.05， 2.08(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.47(m，2H，4-CH2)，4.18(m，4H，2x NCH2)， 4.31(m，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.5，11.6，12.4(5a-，7a-，8a-CH3)， 19.4，19.5(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4，24.8 (CH2)，28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.4，32.5(CH)，37.0，37.2，37.5，39.1， 40.0(CH2)，48.1，49.4(NCH2)，71.1(O-CH2)，74.8(2-C)，117.5，122.9，125.4， 127.2(芳基C)，147.8，148.1(芳基C-O)，168.8，169.0(CO)；HRMS(CI，m/z)： 604.420882(M+H+，C35H58NO7计算值：604.421329)。

2-(2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧 基))乙-1-醇(13)

用碘乙醇(1.7克，10毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(2.5g，63mmol)处理 R，R，R-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室 温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml) 萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将 醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用30％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶 液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml) 洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这 得到黄色油状的13(0.40克，73％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-， 8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-， 6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.07，2.14， 2.16(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)， 3.79(m，2H，OCH2)，3.94(m，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-， 7a-，8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)， 24.4，24.8(CH2)，28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.4，37.5， 39.4，40.0(CH2)，63.1，69.2(OCH2)，75.0(2-C)，117.8，123.4，126.4，128.3(芳 基C)，149.2，149.5(芳基C-O)；MS(CI，m/z)：475(M+H+，C31H54O3计算值： 474.40729)。

2-(2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(14)

用溴乙酸甲酯(0.8克，5.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(0.7g，18mmol)处理 2，2，5，7，8-五甲基-6-苯并二氢吡喃醇(0.3克，1.36毫摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺 (20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应 物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层， 然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用30％(v/v)EtOAc 和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml) 和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空 干燥48小时。这得到白色固体状的14(0.31克，82％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 1.31(s，6H，CH3)，1.81(t，J＝7.8Hz，3-CH2)，2.10，2.16，2.19(3xs，9H，5a-，7a-， 8a-CH3)，2.61(t，J＝7.8Hz，2H，4-CH2)，4.39(s，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3， ppm)：11.7，11.8，12.7(5a-，7a-，8a-CH3)，20.9，26.8，32.7(烷基)，69.1(OCH2)， 72.9(2-C)，117.5，123.2，125.5，127.3(芳基)，147.0，148.6(O-芳基)， 173.8(COOH)；HRMS(CI，m/z)：279.159238(M+H+，C16H23O4计算值：279.159634)。

2，5，7，8-四甲基-(2RS-(4RS，8RS，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧 基)乙酸(15)

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g，30mmol)处 理全外消旋-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。 在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚 (3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸 的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水 (1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48 小时。这得到蜡状的米色固体15(80％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.88(m，12H，4a’-， 8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-， 6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.84(m，2H，3-CH2)，2.07，2.14， 2.16(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.61(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，4.34(s，2H， OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.5，11.7，12.6(5a-，7a-，8a-CH3)，19.6， 19.7(CH3)，20.6，21.3(CH2)，22.6，22.8(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.5，24.9(CH2)， 29.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.6，32.8(CH)，37.5，37.8，37.9，39.5，41.0(CH2)， 69.3(OCH2)，75.1(2-C)，117.9，123.3，125.5，127.3(芳基C)，147.0，148.0(芳 基C-O)，173.9(COOH)；HRMS(CI，m/z)：489.394375(M+H+，C31H53O4计算值： 489.394383)。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(羧基)苯并二氢吡喃-6-基氧基))乙酸(16)

用溴乙酸甲酯(0.8克，5.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(0.7g，18mmol)处理 (-)-(R)-6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸(0.34克，1.36毫摩尔)的 N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。 用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗 涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯 化，用30％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30 毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液 浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到白色固体16(0.33克，80％)。1H- NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.52(s，3H，2a-CH2)，2.10(m，2H，3-CH2)，2.12，2.16， 2.19(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.56(t，J＝6.5Hz，2H，4-CH2)， 4.36(s，2H，OCH2)。

2，5，7，8-四甲基-2R-(2RS，6RS，10-三甲基十一烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基) 乙酸(17)

搅拌并回流10克(40毫摩尔)(-)-(S)-6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢-吡 喃-2-羧酸和0.5克对甲苯磺酸一水合物的200毫升甲醇溶液4小时。冷却后，用 水稀释溶液，并用乙醚萃取。用饱和碳酸氢钠水溶液、H2O、和盐水(1×30ml)洗涤 合并醚层，然后用Na2SO4干燥。浓缩得到的溶液并真空干燥48小时。这得到10 克(95％)无色固体状的(-)-(S)-6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸甲酯， 不经进一步纯化使用。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.52(s，3H，2a-CH2)，2.10(m，2H， 3-CH2)，2.12，2.16，2.19(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.56(t，J＝6.5Hz，2H， 4-CH2)，3.55(s，3H，OCH3)；MS(CI，m/z)：264.422 M+H+，C15H20O4计算值：265.3224。

在2克(7.58mmol)该酯的7.5毫升N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中加入2.6 克(18.8毫摩尔)无水颗粒状碳酸钾，然后加入2.3毫升(20毫摩尔)苄基氯。室温 搅拌得到的浆液41小时，然后倒入50毫升水中，以通常方法用乙醚后处理。50 ℃在高真空下从产物中除去过量苄基氯。获得2.69克(100％)黄色固体状的纯 (TLC)(-)-(S)-6-苄氧基-2，5，7，8-四甲基一苯并二氢吡喃-2-羧酸甲酯，熔点 102-106℃。制备该化合物的无色固体状的分析级样品，熔点108-109℃(从乙醚/ 甲醇中)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.54(s，3H，2a-CH3)，2.01(m，2H，3-CH2)，2.14， 2.17，2.19(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.51(t，J＝6.7Hz，2H，4-CH2)， 3.64(s，3H，OCH3)，5.12(s，2H，6-OCH2)，7.15(m，5H，ArH)；MS(CI，m/z)：355.232 XM+H+：C22H25O4计算值：354.448。

将3.54克(10毫摩尔)上述醚酯的20毫升甲苯溶液和10毫升CH2Cl2一起在 干冰/丙酮浴中搅拌，同时用10分钟滴加12毫升(18毫摩尔)25％二异丁基氢化铝 的甲苯溶液(Texas Alkyls)。约-70℃搅拌30分钟后，用10毫升MeOH小心分解(- 70℃)反应混合物。加入50毫升水和50毫升1N的H2SO4水溶液后，将混合物温至 室温，用乙醚以通常方法后处理，得到3.2克(100％)粗醛[(+)S-6-苄氧基-2，5，7，8- 四甲基苯并二氢吡喃-2-甲醛]，该产物是粘稠的油状物，通过硅胶层析纯化，用 19％(v/v)EtOAc的己烷溶液洗脱。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.53(s，3H， 2a-CH3)，2.11(m，2H，3-CH2)，2.24，2.27，2.29(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)， 2.481(t，J＝6.7Hz，2H，4-CH2)，5.19(s，2H，6-OCH2)，7.20(m，5H，ArH)，9.6(s， 1H，CHO)；MS(CI，m/z)：325.332 M+H+：C21H24O3计算值：324.422。

将9.6克假紫罗酮的溶液溶于100毫升95％乙醇中；室温下加入0.68克氢硼 化钠(溶于乙醇)后，搅拌混合物2小时，放置过夜。将混合物加到2克氢氧化钠 的500毫升水溶液中。用乙醚萃取混合物，用水洗涤醚萃取物，干燥并浓缩。真 空蒸馏剩余的油得到无色油(假紫罗醇)；沸点112-120℃/5mmHG，7.7克(80％)。

在2.97克假紫罗醇的10毫升乙腈溶液中，一边搅拌(温度维持在30℃以下) 加入将干燥氯化氢通入三苯基膦的干燥乙醚溶液获得的4.53克三苯基膦盐酸盐。 室温下放置混合物过夜，然后减压在50℃下除去乙腈。在剩余物中加入4.47毫 克(+)S-6-苄氧基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-甲醛的15毫升二甲基甲酰胺 溶液，搅拌混合物。当获得澄清溶液时，在15℃以下搅拌滴加从0.352克钠和7 毫升无水甲醇制备的甲醇钠。由于形成内鎓盐，反应混合物变成红色。加完后，10 ℃继续搅拌30分钟；然后将混合物逐渐加热到80℃，此时红色消失。将产物倒 入200毫升50％的甲醇水溶液，干燥并真空浓缩。将剩余的油溶解在20毫升乙醚 中，加入氯化汞的乙醚溶液，直到不再形成沉淀。这时滤出沉淀并用水洗涤滤液， 干燥并浓缩后，得到4.7克黄色油状物。顺式和反式的链烯粗混合物(MS(CI，m/z)： 485.22，M+H+，C34H44O2的计算值是484.7255)溶于30毫升乙酸乙酯中，加入0.80 克5％钯碳，在40psi的H2下振摇混合物30小时，然后滤过硅藻土(Celilte)用乙 酸乙酯充分漂洗。浓缩滤液，用硅胶层析纯化，用EtOAc的己烷(1∶9)溶液洗脱， 得到2，5，7，8-四甲基-(2R-(2RS，6RS，10-三甲基十一烷基))-6-苯并二氢吡喃醇 (60％产率)1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.97(m，12H，2a’-，6a’-，10a’-，11’-CH3)， 1.1-1.7(m，20H，2’-，6’-，10’-CH，1’-，3’-，4’-，5’-，7’-，8’-，9’-CH2， 2a-CH3)，1.88(m，2H，3-CH2)，2.17，2.19，2.20(3xs，9H，5a-，7a-， 8a-CH3)，2.63(t，J＝6.7Hz，2H，4-CH2)；MS(CI，m/z)：403.27，M+H+：C27H46O2计算 值：402.6632。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g，30mmol)处理 2，5，7，8-四甲基-(2R-(2RS，6RS，10-三甲基十一烷基))-6-苯并二氢吡喃醇(0.466 克，1.16毫摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的 黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml) 和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色 油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。这得到76％ 产率的化合物17。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.97(m，12H，2a’-，6a’-，10a’-， 11’-CH3)，1.2-1.7(m，20H，2’-，6’-，10’-CH，1’-，3’-，4’-，5’-，7’-，8’-， 9’-CH2，2a-CH3)，1.92(m，2H，3-CH2)，2.18，2.20，2.23(3xs，9H，5a-，7a-， 8a-CH3)，2.68(t，J＝6.8Hz，2H，4-CH2)，4.48(s，2H，OCH2)；MS(CI，m/z)：461.44， M+H+：C29H48O4计算值：460.700。

2，5，7，8-四甲基-2R-(2，6，10，三甲基-1，3，5，9E:Z癸四烯)苯并二氢吡喃-6- 基氧基)乙酸(18)

在(-)-(S)-6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸甲酯(20毫克， 0.075摩尔)的50毫升无水DMF溶液中，加入咪唑(13毫克，0.1911摩尔)和叔丁 基二甲基-甲硅烷基氯(14毫克，0.0933摩尔)。23℃搅拌混合物24小时，然后用 乙醚处理，倒入1N HCl。干燥有机萃取物(盐水，Na2SO4)，真空浓缩。用快速层 析纯化粗产物(9∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到6-[二甲基(1，1-二甲基乙基)甲硅烷 基]-2，5，7，8-四甲基-苯并二氢吡喃-2-羧酸酯(TBS保护的甲酯)。1H- NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.12(s，6H)，1.102(s，9H)，1.18(s，3H)，1.48(s，3H)， 1.645(s，3H)，2.07(s，3H)，2.2(t，J＝6.5hz 2H)，2.48-2.7(m，2H)和3.72(s，3H， OCH3)；MS(CI，m/z)：379.32，M+H+：C21H34O4计算值：378.586。

搅拌上述醚酯的3.78克(10毫摩尔)的20毫升甲苯和10毫升CH2Cl2的溶液， 以便在干冰/丙酮浴中冷却，同时用10分钟以上滴加12毫升(18毫摩尔)25％二异 丁基氢化铝的甲苯(Texas，Alkyls)溶液。约-70℃搅拌30分钟后，小心用10毫 升MeOH分解反应混合物(-70℃)。加入50毫升水和50毫升1N的H2SO4水溶液后， 将混合物温至室温，用乙醚以常规方式后处理，得到粘稠油状的3.2克(90％)粗醛 [(+)S-6-[二甲基(1，1-二甲基乙基)甲硅烷基]-2，5，7，8-四甲基-苯并二氢吡喃-2- 甲醛]，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc的己烷溶液洗脱。浓缩该溶液，然后 真空干燥48小时，得到固体状的TBDS醛(78％)，熔点66-68℃。1H-NMR(CDCl3/TMS， ppm)：0.12(s，6H)，1.1(s，9H)，1.38(s，3H)，1.64(s，3H)，2.12(s，3H)，2.16(s， 3H)，2.3-2.2(m，2H)，2.53(m，2H)和9.82(d，J＝1.4Hz，1H)；MS(CI，m/z)：349.40， M+H+：C20H32SiO3计算值：348.560。

在2.97克假紫罗醇的10毫升乙腈溶液中，一边搅拌(温度维持在30℃以下) 加入将无水氯化氢通入三苯基膦的无水乙醚溶液获得的4.53克三苯基膦盐酸。室 温下放置混合物过夜，然后减压在50℃以下除去乙腈。在剩余物中加入4.80克 [(+)S-6-[二甲基(1，1-二甲基乙基)甲硅烷基]-2，5，7，8-四甲基-苯并二氢吡喃-2- 甲醛]的15毫升二甲基甲酰胺溶液，搅拌混合物。当获得澄清溶液时，在15℃以 下搅拌滴加从0.352克钠和7毫升无水甲醇制备的甲醇钠。形成的内鎓盐将反应 混合物变成红色。加完后，10℃继续搅拌30分钟；然后将混合物逐渐加热到80 ℃，此时红色消失。将产物倒入200毫升50％的甲醇水溶液，干燥并真空浓缩。 将剩余的油溶解在20毫升乙醚中，加入氯化汞的乙醚溶液，直到不再形成沉淀。 这时滤出沉淀并用水洗涤滤液，干燥并浓缩后，得到4.7克黄色油状物。顺式和 反式的链烯粗甲硅烷基醚混合物溶于THF中，加入四-正丁基氟化铵(0.031摩尔)。 23℃搅拌40分钟后，将混合物倒入水中，萃取入乙醚。干燥并浓缩乙醚萃取物， 用硅胶层析纯化，用EtOAc的己烷(1∶9)溶液洗脱，得到2，5，7，8-四甲基-2R- (2，6，10-三甲基-1，3，5，9E:Z癸四烯基)-6-苯并二氢吡喃醇(68％产率)1H- NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.28(s，3H，2aCH3)，1.65(s，3H)，1.70(s，6H)，1.72(s， 3H)，1.9(m，6H)，2.18(s，3H)，2.35(S，6H)，2.53(t，J＝6.6Hz，2H， 4CH2)，5.13-5.27(m，3H)和6.44(m，2H)；MS(CI，m/z)：395.17，M+H+：C27H38O2计算值：394.60。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g，30mmol)处理 2，5，7，8-四甲基-2R-(2，6，10-三甲基-1，3，5，9E:Z癸四烯基)-6-苯并二氢吡喃 (0.457克，1.16毫摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌 得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水 (3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩 成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得 到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用 Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩，真空干燥48小时。这得到67％产率的化合物18。 1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.24(s，3H，2aCH3)，1.63(s，3H)，1.72(s，6H)，1.74(s， 3H)，1.92(m，6H)，2.18(s，3H)，2.29(S，6H)，2.43(t，J＝6.6Hz，2H，4CH2)，4.68(s， 2H，OCH2)，5.10-5.27(m，3H)和6.34(m，2H)；MS(CI，m/z)：452.24，M-H+：C27H38O2计算值：452.63。

3-(2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧 基)丙基-1-氯化铵(19)

冷却3-溴丙基胺溴化氢(1.0克，4.6毫摩尔)的2∶1二噁烷/水(45毫升)溶 液至0℃，并用K2CO3(6.22克，45毫摩尔)和碳酸氢联叔丁酯(1.5克，6.9毫摩 尔)。反应混合物搅拌15小时，同时温热至室温。真空除去二噁烷，用5N HCl酸 化剩余的水混合物，用乙酸乙酯萃取(5×25毫升)。用MgSO4干燥合并的有机层， 得到无色油状的3-溴-N-(叔丁氧基羰基)丙胺(0.93克，93％)。1H-NMR(CDCl3/TMS， ppm)：1.41(s，9H，CH3)，2.02(五重，J＝6.4Hz，2H，CH2)，3.23(m，2H，NCH2)，3.41(t， J＝6.6Hz，CH2Br)，4.8(宽，1H，NH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：28.3(CH3)，30.7，32.6， 38.9(CH2)，79.3(四重C)，155.9(CO)；MS(CI，m/z)：239.241，(M+H+：C8H16BrNO2计算值：237.03644)。

用3-溴-N-(叔丁氧基羰基)丙胺(0.9克，3.8毫摩尔)和过量的粉末状 NaOH(0.32克，8毫摩尔)处理R，R，R-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩尔)的N，N-二 甲基甲酰胺(15毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的 乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用1 10％(v/v)EtOAc的己烷溶液洗脱。这得到无色油状的所要的醚(0.45克，66％)。 1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m， 33H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2， 2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，1.99(五重，J＝6.2Hz，2H，CH2)，2.07，2.14， 2.16(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，3.43(m，2H， NCH2)，3.73(t，J＝5.7Hz，2H，OCH2)，4.34(s，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)： 11.7，12.0，12.9(5a-，7a-，8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6， 22.7(CH3)，23.7(2a-CH3)，24.4，24.8(CH2)，27.9(CH)，31.2(3-CH2)，32.7， 32.8(CH)，37.2，37.4，37.5，39.3，40.1(CH2)，70.2(OCH2)，74.8(2-C)，117.5， 122.9，125.5，127.5(芳基C)，147.5，148.0(芳基C-O)，156.0(CO)；MS(CI， m/z)：589(M+H+，C37H65NO4计算值：587.49136)。

将上述N-保护的醚(0.1克，0.17毫摩尔)溶于4N HCl的二噁烷(1毫升，4 毫摩尔)溶液，并搅拌4小时。在反应混合物上吹过氩气流，除去二噁烷。真空干 燥得到的物质8小时，得到白色固体状的19(82毫克，99％)。1H-NMR(CDCl3/TMS， ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，33H，4’-，8’-， 12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m， 2H，3-CH2)，1.99(五重，J＝6.2Hz，2H，CH2)，2.07，2.11，2.15(3xs，9H，5a-，7a-， 8a-CH3)，2.29(m，2H，CH2)，2.59(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，3.43(m，2H，NCH2)， 3.79(m，2H，CH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.8，11.9，12.7(5a-，7a-，8a-CH3)， 19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.9(2a-CH3)，24.4， 24.8(CH2)，28.0(CH)，28.4(CH3)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.4， 37.5，39.4，40.0(CH2)，74.8(OCH2)，75.0(2-C)，117.5，122.9，126.0，127.3(芳 基C)，147.8，148.0(芳基C-O)；HRMS(CI，m/z)：487.438887(M+H+，C32H57NO2计 算值：487.438935)。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-3-烯-6-基 氧基)乙酸(20)

加热回流R，R，R-α-生育酚乙酸酯(2克，4.2毫摩尔)的无水甲苯(150毫升)溶 液，然后用分成4份的2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.96克，4.2毫摩尔)每 隔1小时处理1次。反应物回流24小时。此时，反应混合物变成暗红色，沉淀出 浅色固体。反应物冷却至室温，过滤，浓缩滤液。用硅胶层析纯化得到的深色油 状物，用乙酸乙酯(10％，v/v)的己烷溶液洗脱。这得到无色油状的所要苯并吡喃乙 酸酯(1.74克，88％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，2.07，2.13，2.18(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)， 2.35(s，3H，CH3CO-)，5.61，6.52(2xd，J＝10.0Hz，2H，CH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)： 11.5，11.6，13.1(5a-，7a-，8a-CH3)，14.1(CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.4， 21.4(CH2)，22.6，22.7(CH3)，24.4，24.8，(CH2)，25.8(2a-CH3)，27.9(CH2)， 30.8(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.2，37.4，39.4，41.0(CH2)，60.3(2-C)，117.6， 119.7，122.3，122.6，128.9，129.6(芳基和乙烯基C)，141.2，148.4(芳基C-O)， 169.4(芳基CO)；HRMS(CI，m/z)：471.375799 M+H+，C31H50O3计算值：470.375996。

用2N NaOH(20毫升)处理苯并吡喃乙酸酯(1.0克，2.13毫摩尔)的乙醇(20 毫升)溶液，60℃搅拌90分钟。冷却反应混合物，用5N HCl酸化，真空除去乙醇。 用乙醚萃取得到的水溶液，浓缩成淡黄色油状物，用硅胶层析纯化，用乙酸乙酯 (15％，v/v)的己烷溶液洗脱。这得到所要的无色油状苯并吡喃-6-醇中间物(0.92 克，98％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)， 1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-， 11’-CH2，2a-CH3)，2.14，2.18，2.19(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，5.63，6.55(2xd， J＝10.0Hz，2H，CH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：10.8，11.6，12.4(5a-，7a-，8a-CH3)， 19.6，19.7(CH3)，21.3(CH2)，22.6，22.7(CH3)，24.4，24.8(CH2)， 25.2(2a-CH3)，27.9(CH)，30.9(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.2，37.4，37.5，39.3， 40.5(CH2)，50.8(2-C)，116.2，117.8，120.1，122.3，123.0，130.0(芳基和乙 烯基C)，144.6，145.3(芳基C-O)，169.4(CO)；HRMS(CI，m/z)： 428.365275(M+H+，C29H48O2计算值：428.365431。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g，30mmol)处理 苯并吡喃-6-醇中间物(0.9克，2.1毫摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。 在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚 (3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的 己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水 (1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48 小时。这得到无色的化合物19(0.90克，88％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H， 4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-， 5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，2.07，2.10，2.19(3xs，9H，5a-， 7a-，8a-CH3)，4.37(s，2H，OCH2)，5.62，6.50(2xd，J＝10.0Hz，2H，CH)；13C- NMR(CDCl3，ppm)：11.3，11.5，12.9(5a-，7a-，8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)， 21.3(CH2)，22.6，22.7(CH3)，24.4，24.8(CH2)，25.6(2a-CH3)，27.9(CH)， 30.9(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.2，37.4，37.5，39.3，40.9(CH2)，60.5(OCH2)， 69.1(2-C)，118.0，119.8，122.8，122.9，129.6，19.8(芳基和乙烯基C)，147.5， 147.8(芳基C-O)，173.4(CO)；HRMS(CI，m/z)：487.378731 M+H+，C31H51O4计算值： 487.378736。

2-(2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧 基)三乙基硫酸铵(21)

用三氧化硫-N，N-二甲基甲酰胺配合物(0.16克，1.0毫摩尔)处理2- (2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基))乙- 1-醇(13)(0.1克，0.21毫摩尔)的无水DMF(2毫升)和吡啶(0.6毫升)溶液，将得 到的溶液搅拌24小时。用1N HCl淬灭反应混合物，然后用CH2Cl2萃取(5×5毫升)。 将氨气鼓泡通过CH2Cl2溶液10分钟。将得到的溶液浓缩成黄色糊状物，并用硅胶 层析纯化，用MeOH(10％，v/v)和三乙胺(2％)的CHCl3溶液洗脱。这得到黄色半固 体状的21(92毫克，77％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，33H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，1.95，2.01，2.05(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.45(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)，3.05(m，6H，NCH2)，3.79(m， 2H，OCH2)，4.21(m，2H，OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：9.46(CH3)，12.4， 12.6，13.5(5a-，7a-，8a-CH3)，20.3，20.4(CH3)，21.3，21.7(CH2)，23.3， 23.4(CH3)，24.5(2a-CH3)，25.1，25.5(CH2)，28.6(CH)，31.9(3-CH2)，33.3， 33.4(CH)，37.9，38.1，40.0，40.8(CH2)，46.9(NCH2)，67.4，71.9(OCH2)， 75.5(2-C)，118.3，123.5，126.5，128.3(芳基C)，148.5(芳基C-O)；HRMS(CI， m/z)：554.364102 M-NH3，C31H54O6S计算值：554.364119。

6-(2，5，7，8-四甲基-(2R-(4R，8，12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃)乙酸 (22)

将R，R，R-α-生育酚(1.0克，2.3毫摩尔)的无水CH2Cl2(25毫升)溶液冷至0 ℃。加入二异丙基乙基胺(2毫升，11.6毫摩尔)，然后滴加三氟甲基磺酸酐(5.0 克，17.7毫摩尔)。溶液立即变暗，并温至室温，一边搅拌24小时。用水淬灭反 应，然后用乙醚萃取(2×100毫升)。用1N HCl(50ml)、H2O(50ml)、盐水(50ml)洗 涤合并的醚层，然后用MgSO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油状物，并用硅胶层析 纯化，用乙酸乙酯(3％，v/v)的己烷溶液洗脱。这得到所要的黄色油状的三氟甲基 磺酸酯中间物(1.3克，定量)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-， 8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-， 6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.07，2.13， 2.21(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.62(t，J＝6.6Hz，2H，4-CH2)；13C-NMR(CDCl3， ppm)：11.9，13.2，14.0(5a-，7a-，8a-CH3)，19.6，19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)， 22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4，24.8(CH2)，28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.7， 32.8(CH)，37.3，37.4，37.5，39.4，40.0(CH2)，75.6(2-C)，118.4，124.4，126.7， 128.1(芳基C)，139.6，150.9(芳基C-O)；19F-NMR(CDCl3，ppm)：-73.52；HRMS(CI， m/z)：563.337803(M+H+，C30H50O4F3S计算值：563.338192)。

用LiCl(0.98g，4.62mmol)、三苯基膦(0.37g，1.4mmol)、2，6-二-叔丁基-4- 甲基苯酚(2-3颗晶体)、三丁基(乙烯基)锡(0.73克，2.31毫摩尔)和二氯二(三苯 基膦)-钯(II)(0.24克，0.35毫摩尔)处理上述三氟甲基磺酸酯(1.3g，2.31mmol) 的无水DMF(23毫升)溶液。将该混合物加热到120℃并搅拌。2小时后，再加入三 丁基(乙烯基)锡(0.73g，2.31mmol)。8小时后，将反应物冷却至室温，加入水(50 毫升)和乙醚(50毫升)的混合物。用1N HCl(6×30ml)和KF(6×30ml)的饱和溶液洗 涤醚层。用Na2SO4干燥醚溶液，然后浓缩成深色油状物。用硅胶层析纯化该物质， 用乙酸乙酯(3％，v/v)的己烷溶液洗脱，得到澄清油状物的6-乙烯基苯并二氢吡喃 醇中间物(0.38克，38％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-， 13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-， 9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.86(m，2H，3-CH2)，2.20，2.24，2.28(3xs，9H， 5a-，7a-，8a-CH3)，2.62(t，J＝6.8Hz，2H，4-CH2)，5.18，5.56(2xdd，Jgem＝2.3Hz， Jcis＝11.2Hz，Jtrans＝18.7Hz，2H，＝CH2)，6.77(dd，J＝18.7，11.2Hz，1H，CH)；13C- NMR(CDCl3，ppm)：11.9，16.3，17.2(5a-，7a-，8a-CH3)，19.7，19.8(CH3)，20.8， 21.1(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.9(2a-CH3)，24.5，24.8(CH2)，28.0(CH)， 31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.5，37.5，39.4，40.1(CH2)， 74.9(2-C)，116.7，119.0，122.0，129.8，131.2，132.8，136.8(芳基/乙烯基C)，150.9(芳 基C-O)；HRMS(CI，m/z)：440.401602(M+H+，C31H52O计算值：440.401812)。

将上述6-乙烯基苯并二氢吡喃中间物(0.12克，0.27毫摩尔)的无水THF(1毫 升)溶液冷至0℃，用9-BBN(0.60ml，0.5M溶于THF，0.3mmol)处理。加热回流反 应混合物8小时。用水(1.5ml)淬灭反应，用NaBO3·4H2O处理，搅拌得到的浆液 过夜。用CH2Cl2(2×20ml)萃取乙醚(4毫升)和反应混合物。将有机层浓缩成澄清 油状物，用硅胶层析纯化，用乙酸乙酯(50％，v/v)的己烷溶液洗脱。这得到所要 的无色油状的6-(2-羟基乙基)苯并二氢吡喃中间物(30毫克，24％)。1H- NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-，8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H， 4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-，6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2， 2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.17，2.24，2.28(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.68(t， J＝6.8Hz，2H，4-CH2)，3.01(t，J＝7.5Hz，2H，Ar-CH2)，3.74(t，J＝7.5Hz，2H， OCH2)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：12.0，15.1，16.0(5a-，7a-，8a-CH3)，19.6， 19.7(CH3)，20.6，21.1(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4，24.8(CH2)， 28.0(CH)，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.4，37.5，39.4，40.0(CH2)， 62.2(OCH2)，72.6(2-C)，116.8，122.3，124.9，132.4，133.9(芳基C)，150.1(芳 基C-O)；HRMS(CI，m/z)：458.412154(M+H+，C31H54O2计算值：458.412384)。

用上述6-(2-羟基乙基)苯并二氢吡喃中间物(32毫克，0.07毫摩尔)的CH2Cl2溶液(0.5mL)处理氯铬酸吡啶鎓(32毫克，0.1毫摩尔)的无水CH2Cl2(0.5毫升)溶 液。搅拌反应物2小时，此时用薄层层析未见任何起始物质。加入乙醚(2毫升)， 将得到的溶液滤过硅藻土薄板。浓缩滤液，得到黄色油状物(20毫克)。将该油状 物溶于叔丁醇(0.5毫升)，用磷酸缓冲液(0.5毫升，1N，pH＝4.0)、2-甲基-2-丁 烯(0.1毫升)和NaClO2(5.4mg，0.05mmol)处理。搅拌40分钟后，用CHCl3(6×10ml) 萃取反应混合物，用Na2SO4干燥合并的有机层。将CHCl3溶液浓缩成黄色油状物， 通过制备级薄层层析，用乙酸乙酯(30％，v/v)和乙酸(1％)的己烷溶液洗脱纯化。这 得到无色油状的22(20毫克，63％)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.87(m，12H，4a’-， 8a’-，12a’-，13’-CH3)，1.0-1.6(m，24H，4’-，8’-，12’-CH，1’-，2’-，3’-，5’-， 6’-，7’-，9’-，10’-，11’-CH2，2a-CH3)，1.81(m，2H，3-CH2)，2.17，2.24， 2.28(3xs，9H，5a-，7a-，8a-CH3)，2.66(t，J＝6.8Hz，2H，4-CH2)，3.71(s，2H， CH2COOH)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：12.0，15.3，16.2(5a-，7a-，8a-CH3)，19.6， 19.7(CH3)，20.6，21.0(CH2)，22.6，22.7(CH3)，23.8(2a-CH3)，24.4，24.8(CH2)， 28.0(CH)，28.9，31.2(3-CH2)，32.7，32.8(CH)，37.3，37.4，37.5，39.4， 40.0(CH2)，72.6(2-C)，117.1，122.2，124.9，132.4，132.7(芳基C)，150.2(芳 基C-O)，179.2(COOH)；HRMS(CI，m/z)：472.391583(M+H+，C31H52O3计算值： 472.391644)。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(庚基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(23)

在室温下搅拌己基三苯基溴化鏻(0.880克，2.05毫摩尔)的11.2毫升无水DME 溶液，同时加入2.4M正丁基锂的己烷溶液0.86毫升(2.06毫摩尔)。室温下搅拌 得到的红色溶液2小时，然后加入[(+)S-6-苄氧基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃 -2-甲醛(306毫克，0.944毫摩尔)的3毫升无水DME溶液，65-75℃继续搅拌3 小时。冷却后，将反应混合物倒入冷的稀释H2SO4中，用乙醚以常规方式后处理。 真空浓缩乙醚，得到油状物。用柱层析分离产物，用氯仿洗脱，得到46％的产物。 将顺式和反式链烯混合物溶于30毫升乙酸乙酯中，加入50毫克5％钯碳，在40psi H2下振摇混合物10小时，滤过硅藻土，用乙酸乙酯充分漂洗。浓缩滤液，用硅胶 层析纯化，用EtOAc的己烷(1∶9)溶液洗脱，得到(2R)2，5，7，8-四甲基-2-(庚基)-6- 苯并二氢吡喃醇(60％产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.89(s，3H)，1.3-1.5(m， 15H)，1.89(m，2H)，2.2(s，3H)，2.08(s，3H)，2.23(s，3H)和2.48(t，J＝6.5Hz， 2H)；MS(CI，m/z)：305.35 M+H+，C20H32O2计算值：304.4746。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g，30mmol)处理 2，5，7，8-四甲基-2-(庚基)苯并二氢吡喃醇(0.353克，1.16毫摩尔)的N，N-二甲基 甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸 化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙 醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用 19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的液体溶于乙醚(30毫升)，用 H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。浓缩得到的溶液，真空干 燥48小时。这得到36％产率的化合物23。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 0.88(s，3H)，1.2-1.5(m，15H)，1.88(m，2H)，2.1(s，3H)，2.18(s，3H)，2.2(s， 3H)，2.55(t，J＝6.5Hz，2H)和4.78(s，2H)；HRMS(CI，m/z)：363.2535(M+H+， C22H35O4计算值：363.2541)。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(24) 用合成23相同的方法，使用合适的溴化鏻合成了化合物24和25。

1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.83(s，3H)，1.25-1.57(m，27H)， 1.88(m，2H)，2.1(s，3H)，2.18(s，3H)，2.20(s，3H)，2.55(t，J＝6.6Hz，2H)和 4.48(s，2H)；MS(CI，m/z)：447.14 M+H+，C28H46O4计算值：446.6732。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(十七烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(25)

1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：0.86(s，3H)，1.15-1.67(m，35H)，1.88(m，2H)， 2.16(s，3H)，2.20(s，3H)，2.23(s，3H)，2.55(t，J＝6.4Hz，2H)和4.78(s，2H)； MS(CI，m/z)：503.45 M+H+，C32H54O4计算值：502.781。

2，5，7，8-四甲基-2R-(4，8-二甲基-1，3，7EZ壬三烯)苯并二氢吡喃-6-基氧 基)乙酸(26)

用合成化合物18的相同方法，使用橙花醇代替假紫罗醇合成了化合物26。 1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.24(s，3H，2aCH3)，1.63(m，1H)，1.68(s，3H)，1.92(m， 6H)，2.18(s，3H)，2.29(S，6H)，2.43(t，J＝6.6Hz，2H，4CH2)，4.68(s，2H，OCH3)， 5.64(m，2H)和5.27(m，1H)；MS(CI，m/z)：413.24 M+H+，C26H36O4计算值：412.0115。

E，Z，RS，RS，RS-(植基三甲基苯硫酚-6-基氧基)乙酸(27)

将2，3，6-三甲基苯酚(1.6克，11.8毫摩尔)溶于已用氮气冒泡脱氧的50毫升 无水甲醇中。在该溶液中加入硫氰酸铵(2.2克，28.9mmol)，然后冷至0℃，并用 氯气冒泡。起初无色均匀的溶液变成粉红色，然后变成绿色，同时形成白色沉淀。 0℃搅拌该溶液1小时，然后20℃再搅拌1小时。用氮气冒泡除去溶解的氯，过 滤除去沉淀。减压蒸发滤液，在高真空(0.1托)下干燥，得到2.20克(97％)2，3，5- 三甲基-4-羟基苯基硫氰酸酯，它足够纯，可用于合成的下一步。从己烷中重结晶出 分析样品：白色晶体，熔点100.3℃。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：δ 7.2(s，1H)，5.0(s，1H)，2.4(s，3H)，2.2(s，6H)。

将2，3，5-三甲基-4-羟基苯基硫氰酸酯(2克，10.35毫摩尔)溶于100毫升含 有25毫升无水四氢呋喃的无水乙醚中。用1小时在室温下将该溶液滴加到100毫 升含有LiAlH4(0.9克，24毫摩尔)的无水乙醚中。20℃下再过1小时后，将非均 相的混合物冷却到0℃，并加入含水乙醚(50毫升)、水(50毫升)和1N HCl(50毫 升)，破坏未反应的LiAlH4。再加入50毫升水，分离有机相，用水(2×50ml)、NaHCO3溶液(2×50ml)、水(2×50ml)和饱和NaCl(50毫升)洗涤。用无水MgSO4干燥有机相， 减压除去溶剂。用5％乙酸乙酯的己烷溶液硅胶柱层析得到1.8克(90％)白色粉末 状的2，3，5-三甲基-4-羟基苯硫酚，熔点86℃[文献值1，熔点86℃]。

回流2，3，5-三甲基-4-羟基苯硫酚(3克，17.83毫摩尔)、异植醇(4.8克，16.19 毫摩尔)、无水氯化锌(1.2克，8.8毫摩尔)和0.2毫升冰醋酸的30毫升无水乙醚 溶液1小时。然后50℃真空除去溶剂，将获得的红色油状物溶于50毫升石油醚 和20毫升70％甲醇水溶液的混合物中。干燥醚层(Na2SO4)，真空蒸发，得到红色 油状物，用硅胶层析，用己烷∶乙醚(9∶1)洗脱纯化，得到3克(38％)黄色油状的 EZ，RS，RS-植基三甲基羟基苯硫酚。1H-NMR(CDCl3)：δ7.11(s，1H，Ar-H)，5.23(t，1H， 乙烯基-H)，4.62(s，1H，OH)，3.34(d，2H，Ar-S-CH2-)，2.41(s，3H，Ar-CH3)， 2.19(s，3H，Ar-CH3)，2.18(s，3H，Ar-CH3)，0.83-1.92(m，39H，植醇链)。

用溴乙酸甲酯(7.4克，48.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(7g，175mmol)处理 植基三甲基羟基苯硫酚(3克，6.7毫摩尔)的N，N-二甲基甲酰胺(80毫升)溶液。在 室温下搅拌得到的粉红色油状物24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×15ml) 萃取。用水(3×15ml)和盐水(1×15ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将 醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用20％(v/v)EtOAc的己烷溶液洗脱，得 到3克(88％)黄色油状的EZ，RS，RS，RS-(植基三甲基苯硫酚-6-基氧基)乙酸。1H- NMR(CDCl3)：δ10.90(s，1H，COOH)，8.08(s，1H，Ar-H)，5.30(t，1H，乙烯基-H)， 4.35(s，2H，CH2COOH)，3.42(d，2H，Ar-S-CH2-)，2.34(s，3H， Ar-CH3)，2.25(s，3H，Ar-CH3)，2.22(s，3H，Ar-CH3)，0.83-1.94(m，39H，植基链)。 HRMS(CI，m/z)：504.362821(M+H+，C31H53O3S计算值：504.363718)。

(R)-2[(2，5，7，8-四甲基-2-(3-丙烯甲酯)苯并二氢吡喃-6-基氧基]乙酸(28)

在(甲氧羰基甲基)三苯基溴化鏻浆液(1.8毫克，4.32毫摩尔，在12毫升℃的 THF中)中滴加1.66毫升正丁基锂(2.5M的己烷溶液)。在室温下放置溶液2小时， 然后通过套管加入(+)S-6-[二甲基(1，1-二甲基乙基)甲硅烷基]-2，5，7，8-四甲基 苯并二氢吡喃-2-甲醛(1.31克，3.76毫摩尔)的7毫升THF溶液。室温搅拌溶液44 小时，然后加入10毫升1N的HCl水溶液。分层，然后用乙醚(3×15ml)萃取水相。 用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液后，用快速层析纯化 粗链烯，用二氯甲烷洗脱，得到产率为93％的顺式和反式的链烯混合物。将顺式 和反式链烯的甲硅烷基醚混合物(3.76毫摩尔)溶于THF，加入四正丁基氟化铵 (0.041摩尔)。23℃搅拌1.5小时后，将混合物倒入水中，萃取入乙醚。干燥并 浓缩醚萃取物，用硅胶层析，用EtOAc的己烷溶液(3∶7)洗脱纯化，分离并确定 2，5，7，8-四甲基-2R-(3’-丙烯甲酯)-6-苯并二氢吡喃醇的顺式和反式异构体(68％ 产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.65(s，3H，2aCH3)，2.12(m，2H，3CH2)， 2.39(s，9H，CH3)，2.48(m，2H，4CH2)，3.78(s，3H，OCH3)，6.11(d，1H，CH＝)和 7.13(d，1H，CH＝)。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g，30mmol)处理 2，5，7，8-四甲基-2R-(3’-丙烯甲酯)6-苯并二氢吡喃醇(0.353克，1.16毫摩尔)的 N，N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。 用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗 涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化， 用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的液体溶于乙醚(30毫升)， 用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。浓缩得到的溶液，真 空干燥48小时。这得到40％产率的化合物28。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)： 1.68(s，3H，2a CH3)，2.11(m，2H，3CH2)，2.36(s，9H，CH3)，2.56(m，2H，4CH2)， 3.70(s，3H，OCH3)，4.78(s，2H，OCH2)，6.03(d，1H，CH＝)和7.03(d，1H，CH＝)； MS(CI，m/z)：337.24 M+H+，C18H24O6计算值：336.3867。

2，5，7，8-四甲基-(2R-(丙酸酯)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(29)

将顺式和反式链烯2，5，7，8-四甲基-2R-(3-丙烯甲酯)-6-苯并二氢吡喃醇的 混合物溶于30毫升乙酸乙酯，并加入50毫克5％钯碳，在40psi H2下振摇混合物 24小时，然后滤过硅藻土，并用乙酸乙酯充分漂洗。浓缩滤液，用硅胶层析纯化， 用EtOAc的己烷溶液(1∶9)得到化合物29。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)：1.62(s，3H，2a CH3)，2.0-2.3(m，6H，CH2)，2.41(s，9H，CH3)，2.53(m，2H，4CH2)， 3.67(s，3H，OCH3)，4.88(s，2H，OCH2)；MS(CI，m/z)：339.34 M+H+，C18H26O6计算值： 338.4025。

实施例3

全消旋1-氮杂-α-生育酚类似物的合成：

植基三甲基氢醌(31)

将三甲基氢醌(30，7.5g，49.28mmol)、异植醇(12g，40.47mmol)、无水氯 化锌(3g，22.01mmol)和0.4mL冰醋酸的60mL无水乙醚溶液回流1小时。然后50 ℃真空除去溶剂，获得的浆液溶于50mL石油醚和20mL70％甲醇水溶液的混合物中。 加入20mL乙醚破坏形成的乳液。干燥(Na2SO4)乙醚层，真空蒸发得到红色固态糊 剂，用70mL石油醚剧烈研磨。冷却到-78℃后，离心悬液，滗出上清液石油醚。 在晶状固体中加入冷石油醚(10mL)，重复两次操作得到10g(47％)粘性白色固体， 在下一步中不经进一步纯化使用。

二乙酸植基三甲基氢醌酯(32)

将粗植基三甲基氢醌(31，9g，20.1mmol)溶于无水吡啶(90g)和乙酸酐(90g)。 在室温下储藏10小时后，将混合物倒到冰上(200mL)，用乙醚萃取(2×100mL)。 用3N硫酸(2×100mL)、10％碳酸氢钠溶液(2×100mL)，再用水(2×100mL)洗涤乙 醚溶液，干燥(Na2SO4)，蒸发得到10.2g(95％)淡黄色油状二乙酸酯(32)。在下一 步中不经进一步纯化使用油。

三甲基(3，7，11，15-四甲基-3-苯甲酰氨基十六烷基)氢醌二乙酸酯(33)

在苄腈(10g，96.97mmol)、浓硫酸(10g)和冰醋酸(40mL)的混合物中，在0℃ 一边搅拌一边加入二乙酸酯(32，10g，19.43mmol)。溶液在室温储藏10小时，然 后倒到冰上(150mL)用乙醚萃取(3×100mL)。用水(3×100mL)和饱和碳酸氢钠洗涤 乙醚萃取物至中性，干燥(Na2SO4)并真空蒸发。粗产物(21g)在硅胶上层析，用石 油醚∶乙醚(9∶1)洗脱。首先除去未改变的苄腈。用乙醚洗脱得到11g(88％)产物， 从石油醚中结晶获得分析级样品(33)，m.p.90-92℃(文献1 94-95℃)。

2，5，7，8-四甲基-2-(4，8，12-三甲基十三烷基)3，4-二氢喹啉-6(2H)-酮(37)

在二乙酸酯(33，13g，20.4mmol)的60mL甲醇溶液中加入固态氢氧化钾(11g)， 混合物在氩气下回流45分钟，冷却后，用冰水(100mL)稀释溶液，在二氧化碳下 用乙醚(3×100mL)萃取得到10g(88％)粗氢醌(34)。

将该产物(34，10g，18.1mmol)的无水乙醚(110mL)溶液一边搅拌，一边经20 分钟滴加到氢化锂铝(20g，527mmol)的无水乙醚(110mL)悬液中，混合物回流14 小时，然后在二氧化碳下滴加甲醇(10mL)，然后是3N盐酸(30mL)水解。用乙醚(3 ×200mL)萃取后，获得粗固态苄胺衍生物(35，8.4g，86％)。

将该物质(35，8.4g，15.6mmol)溶于冰醋酸(120mL)中，50℃，在2g钯碳(5％) 存在下，在室温，大气压下氢化22小时(或直到氢气吸收停止)。冷却后，滤去催 化剂，用水(50mL)稀释溶液，用乙醚(3×80mL)萃取，并干燥(Na2SO4)。

在该干燥和中性的36的醚溶液中加入新鲜的氧化银(2.1g，8.93mmol)，搅 拌悬液14小时。在氩气下过滤并蒸发后，获得4g粗亚氨基醌(37)，它在硅胶上 层析，用己烷∶乙醚(200∶1)洗脱得到2.4g(63％)纯的黄色油。HMRS(cl，m/z)： 428.389883(M+H+，C29H49NO的计算值428.389241)。

1-氮杂-α-生育酚(38)

将亚氨基醌(37，1.34g，3.133mmol)的10mL乙醚在室温和大气压下，在190mg Lindlar催化剂的存在下氢化。20小时后，在氩气下滤去催化剂，真空蒸发滤液 得到810mg(60％)粗红色油，在下一步中不经进一步纯化使用。

1-氮杂-α-生育酚-6-基氧基-乙酸(39)和1-氮杂-α-生育酚-6-基氧基-甲酯 乙酸(40)

用溴化乙酸甲酯(2.1g，13.4mmol)和过量的粉末状NaOH(1.9g，48.4mmol)处 理1-氮杂-α-生育酚(38，800mg，1.86mmol)的DMF(30mL)溶液。得到的黄色悬液 在室温下剧烈搅拌24小时。用5N HCl将反应混合物酸化至pH6，用二乙醚(3×30mL) 萃取。用水(3×40mL)、盐水(1×40mL)洗涤合并的乙醚层并干燥(Na2SO4)。将乙 醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用CH2Cl2∶MeOH∶HAc(97∶2∶1)洗脱得到 300mg(33％)粘性黄色固体(39)。1H-NMR(CDCl3，ppm)4.30(s，2H，OCH2)，3.30(s， 1H，NH)，2.59(t，2H，Ar-CH2)，2.18(s，3H，Ar-CH3)，2.12(s，3H，Ar-CH3)， 2.00(s，3H，Ar-CH3)，1.80-0.84(m，38H，Ar-CH2CH2，NCCH3和植基链)；13C-NMR (CDCl3，ppm)：12.01，12.77，12.96，19.60，19.67，19.72，21.09，22.60，22.71， 24.42，24.79，26.56，27.95，32.11，32.74，37.26，37.37，37.42，37.55，37.65 39.34，41.36，50.92，69.50(脂族C)，117.69，118.55，125.99，126.39，138.07， 146.05(Ar-C)，173.18(COOH)；(HRMS(CI，m/z)：488.411055(M+H+，C31H53NO3的计算值：488.410370)和150毫克(17％)黄色油(40)。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm) 4.31(s，2H，OCH2)，3.85(S，3H，CO2CH3)，3.32(S，1H，NH)，2.61(T，2H，Ar-CH2)， 2.23(S，3H，Ar-CH3)，2.17(S，3H，Ar-CH3)，2.01(S，3H，Ar-CH3)，1.81-0.86 (M，38H，Ar-CH2CH2，NCCH3和植基链)；13C-NMR(CDCl3，ppm)11.96，12.67，12.90， 19.57，19.63，19.69，21.06，21.95，22.57，22.68，24.38，24.74，26.49，27.91， 32.25，32.67，32.70，37.21，37.33，37.53，39.31，41.68，50.43，51.87， 69.97，(脂族C)，116.98，117.72，126.01，126.36，138.43，146.18(芳基 C)，169.83(C＝O)；HRMS(CI，mlz)：502.425330(M+H+，C32H55NO3的计算值： 502.426020)。

1-氮杂-N-甲基-α-生育酚-6-基氧基-乙酸甲酯(41)

根据文献方法2，0℃搅拌粉末状KOH(500mg，7.77mmol)的DMSO(30mL)混合 物5分钟。加入乙酸甲酯(40，1.3g，23.32mmol)，然后立即加入CH3I(3.3g， 23.32mmol)。连续搅拌0.5h(0℃)，然后将混合物倒到水中。合并最终混合物的 萃取物(CH2Cl2，3×40mL)，用水(40mL)、盐水(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)然后蒸发。 得到的黄色油在硅胶上层析，用5％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到810mg(60％)淡黄 色油。1H-NMR(CDCl3/TMS，ppm)4.34(s，2H，OCH3)，3.84(s，3H，CO2CH3)，2.55 (t，2H，Ar-CH2，)，2.49(s，3H，NCH3)，2.24(s，3H，Ar-CH3)，2.20(s，3H，Ar-CH3)， 2.13(s，3H，Ar-CH3)，1.82-0.82(m，38H，Ar-CH2CH2，NCCH3和植基)；13C- NMR(CDCl3，ppm)11.72，13.12，14.27，19.55，19.68，20.93，22.57，22.66， 22.88，24.35，24.74，25.33，25.37，27.90，32.59，32.71，37.23，37.33，37.51， 37.63，38.49，39.06，39.29，51.14，69.57(脂族C)，125.34，126.36，127.42， 130.32，143.89，150.33(Ar-C)，169.73(C＝O)。化合物41在下一步中不经进 一步纯化使用。

1-氮杂-N-甲基-α-生育酚-6-基氧基-乙酸(42)

在酯(41，740mg，14.34mmol)的乙醇(34mL)混合物中滴加2N NaOH(9mL，10 当量，14.34mmol)。在室温下搅拌淡黄色溶液4小时后，用2N HCl将反应混合物 酸化至pH6，然后用EtOAc(3×100mL)萃取，用水(2×100mL)、盐水(1×100mL)洗 涤合并的有机层，干燥(MgSO4)，蒸发得到淡黄色油。用硅胶层析油，用1％HOAc、 30％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到650mg(90％)无色油状的产物(42)。1H-NMR (CDCl3/TMS，ppm)10.43(s，1H，CO2H)，4.37(s，1H，OCH2)，2.51(t，2H，Ar-CH2)， 2.43(s，3H，NCH3)，2.22(Ar-CH3)，2.12(s，3H，Ar-CH3)，1.81-0.80(m，38H， Ar-CH2CH2，NCCH3和植基链)；13C-NMR(CDCl3，ppm)：11.77，13.18，14.28，19.68， 19.73，20.80，20.96，22.62，22.72，23.00，24.00，24.41，24.80，25.37，27.80， 32.77，37.28，37.30，37.74，38.00，39.00，39.35，54.69，69.17(脂族C)， 125.11，126.55，127.20，130.63，142.00，149.60(Ar-C)，173.62(COOH)； HRMS(CI，m/z)；502.426327(M+H+，C32H55NO3的计算值：502.426020)。

6-(2，4-二硝基苯基偶氮(2，5，7，8-四甲基-2-(4，8，12-三甲基十三烷基)- 1，2，3，4-四氢喹啉(43)

将2，4-二硝基苯基肼(1.95g，9.82mmol)溶于34mL热纯乙醇中，小心加入 3.4mL浓硫酸。将热红色溶液冷却至室温，搅拌下加入亚氨基醌(37，100g，2.34mmol) 的12mL无水乙醇溶液。使混合物在室温下放置70小时，然后用120mL水稀释， 用乙醚萃取(3×100mL)。合并的乙醚萃取物用水(6×100mL)洗至中性，干燥(Na2SO4) 并真空蒸发得到2.9g部分结晶的暗紫色物质。该产物在硅胶上层析，用5％乙醚 的石油醚溶液洗脱，得到1.35g(95％)紫色晶体(43)。m.p.72-73℃(文献1，73-75 ℃)。HRMS(CI，m/z)：608.417199(M+H+，C35H53N5O4的计算值608.417581)。

实施例4

细胞培养条件

所有测试细胞系使用已建立的标准条件，在37℃、5％CO2、补充了胎牛血清 的标准培养基中培养。用胰蛋白酶分离粘着在塑料上的细胞，洗涤，计数，直接 在实验中使用。常规检测所有细胞，以验证没有支原体污染。

实施例5

新颖生育酚和生育三烯酚化合物的溶解和稀释

将所有化合物当成是光敏感(光可降解的)来处理。最初，将所有化合物溶于 无水乙醇，然后用合适的培养液稀释到最终浓度为0.5％乙醇。

实施例6

确定诱导凋亡的有效浓度(EC50)

虽然亲本的未结构修饰的生育酚形式不显示针对肿瘤细胞库的有效凋亡性 能，但通过醚键合不同组成和大小的部分结构修饰的29种RRR-α-生育酚化合物 中的15种和5种1-氮杂-α-生育酚类似物中的2种对于诱导肿瘤细胞经历凋亡是 极有效的，而对于正常细胞不诱导凋亡。化合物1、2、3、7、8、9、12、15、17、 19、20、21、22、25、26、27、39和42显示对于来自各式各样的细胞种系的人 癌细胞具有有效生长抑制(诱导凋亡)性能，这些细胞种系包括(i)乳腺(雌激素反 应Michigan Cancer Foundation人乳腺癌细胞系号7、MCF-7McGuire；非雌激 素反应性M.D.Anderson转移性乳腺人癌细胞系，MDA-MB-435；和雌激素非反应性 M.D.Anderson转移性人乳腺癌细胞系MDA-MB-231)；(ii)前列腺(雄激素反应性 人前列腺癌细胞系，LnCaP和雄激素非反应性人前列腺癌细胞系PC-3和DU-145 细胞系)；(iii)早幼粒细胞白血病细胞(人早幼粒细胞白血病细胞系HL-60)，淋 巴样细胞系Jurkat和HL-60；(iv)宫颈(人宫颈癌细胞系ME-180)；(v)卵巢(人 卵巢癌细胞系C-170细胞)；(vi)子宫内膜(人子宫内膜癌细胞系RL-95-2细 胞)；(vii)结肠细胞系DLD-1；和(viii)肺细胞系A-549。使正常的原代乳腺细 胞(正常的原早传代的人乳房上皮细胞，HMEC)和不死的但非致瘤性的乳房细胞 (Michigan Cancer Foudation不死的，但非致瘤性的人乳房10A细胞，MCF-10A) 在与上述药物动力学设计形式的生育酚一起培养时，不经历凋亡。

新颖试剂控制癌生长的有效治疗剂量被称为生长抑制浓度(IC50)或有效浓度 (EC50)，它表示通过DNA合成的抑制、细胞循环封阻和/或细胞死亡封阻50％的癌 生长。表1和2表示了本发明的29种新颖RRR-α-生育酚化合物和本发明的5种 1-氮杂-α-生育酚类似物中的两种对测试癌细胞库的凋亡EC50。

                                                                                                  表1

                                                                            新颖生育酚化合物诱导的凋亡(EC50范围微克/毫升)     细胞类型     VES     1     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13   14     15     乳腺癌     HMEC     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N   N     NT     MCF-10A     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N     N   N     NT     MDA-MB-435     5-10     5-10     10-20     5-10     N     N     N     5-10     5-10     5-10     N     N     5-10     N   N     20-30     MDA-MB-231     5-10     5-10     10-20     5-10     N     N     N     5-10     5-10     5-10     N     N     5-10     N   N     20-30     MCF-7     10-20     5-10     20-30     20-30     N     N     N     10-20     10-20     10-20     N     N     5-10     N   N     20-30     T47D     N     N     N     N     N     N     N     N     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     宫颈     ME-180     10-20     1-5     5-10     10-20     N     N     N     5-10     5-10     5-10     N     N     5-10     N   N     N     卵巢     C-170     N     10-20     10-20     10-20     N     N     N     10-20     10-20     N     N     N     10-20     N   N     N     子宫内膜     RL-95-2     10-20     10-20     10-20     10-20     N     N     N     5-10     1-5     5-10     N     N     5-10     N   N     N     前列腺     PREC     N     N     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     LnCaP     5-10     5-10     5-10     5-10     N     N     N     2.5-5     5-10     5-10     N     N   ＞20-30     NT   N     NT     PC-3     10-20     5-10     5-10     5-10     N     N     N     5-10     5-10     5-10     NT     N     10-20     N   N     NT     DU-145     10-20     5-10     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     结肠     HT-29     5-10     10-20     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     DLD-1     10-20     10-20     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     肺     A-549     20-30     10-20     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT   淋巴样细胞     骨髓瘤     10-20     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     Raji     10-20     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     Ramos     10-20     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     Jurkat     10-20     10-20     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT     NT     HL-60     10-20     5-10     10-20     10-20     N     N     N     5-10     10-20     10-20     N     N     20-30     N   N     NT

Ec50＝诱导50％凋亡的生育酚化合物1-29的微克/毫升；N＝当用1-60Ec50微克/毫升生育酚化合物1-29处理2日后，无凋亡；NT＝未测试；*＝化合物显示毒性

                                                                                       表2

                                                                  新颖生育酚化合物诱导的凋亡 ( EC 50 范围微克/毫升 )   细胞类型     16     17     18     19     20     21     22   23   24     25     26     27   28     29     39     42   43     乳腺癌     HMEC     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT   NT     MCF-10A     NT     N     NT     N     N     N     NT   N   NT     N     N     NT   NT   NT     NT     NT   NT   MDA-MB-435     N     NT     N   10-20   10-20     N     NT   N   N     N   20-40     NT   NT   NT   10-20   10-20   PPT   MDA-MB-231     N     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT   NT     MCF-7     N   10-20     N   10-20    5-10     N  15-20   N   N     N     N   10-20   NT   NT     NT     NT   NT     T47D     NT   10-20     NT     N    5-10*     NT     NT   NT   NT     NT     N     NT   NT   NT     NT     NT   NT     宫颈     ME-180     NT   20-30     N    1-5    1-5     1-5     NT   NT   NT     N     *     NT   NT   NT     NT     NT   NT     卵巢     C-170     NT   20-30     N    1-5     *     N     NT   NT   NT     N   20-30     NT   NT   NT     NT     NT   NT    子宫内膜     RL-95-2     NT     NT     NT     NT     NT     N     NT   NT   NT     N   20-30     NT   NT   NT     NT     NT   NT     前列腺      PREC     NT     NT     N     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT   NT      LnCaP     NT   10-20     NT    5-10    5-10     N     NT   NT   N     N   10-20   10-20   NT   NT     NT     NT   NT      PC-3     NT     NT     NT     N    5-10*     N     NT   N   N   20-30     N     NT   NT   NT     NT     NT   NT      DU-145     NT     NT     NT    5-10    5-10*     N     NT   N   N   20-30     N     NT   NT   NT     NT     NT   NT      结肠      HT-29     NT     N     N     NT     NT     NT     NT   N   NT     N     N     NT   NT   NT     NT     NT   NT      DLD-1     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT   N     N   20-40     NT   NT   NT     NT     NT   NT      肺      A-549     NT     N     N   20-30   20-30     NT     NT   NT   NT     NT     N     NT   NT   NT     NT     NT   NT   淋巴样细胞     骨髓瘤     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT   NT     Raji     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT   NT     Ramos     NT     NT     NT     NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT     NT   NT   NT     NT     NT   NT     Jurkat     NT   10-20     N   10-20   10-20     NT     NT   NT   NT     NT   20-30     NT   NT   NT     NT     NT   NT     HL-60     NT   10-20     N   10-20     10     NT     NT   NT   NT     NT     N     NT   NT   NT     NT     NT   NT

EC50＝诱导50％凋亡的微克/毫升生育酚化合物1-29；N＝当用1-60EC50微克/毫升生育酚化合物1-29处理2日后无凋亡； NT＝未测试；*＝化合物显示毒性

实施例7

凋亡的生物试验

在12孔板中以1.5×105细胞/孔培养细胞，使细胞粘着过夜，然后与新的测 试化合物以0.01、0.1、1、5、10和20微克/毫升培育1、2和3日。处理后，沉 淀细胞(飘浮的加胰蛋白酶释放的粘着细胞)，洗涤，并用2微克/毫升的DAPI(4’，6- 二脒-2’-苯基吲哚二盐酸盐)的100％甲醇溶液37℃染色15分钟，和/或用TUNEL 染色，然后用Zeiss ICM405显微镜观察。将核中含有清晰凝聚或碎片化的染色质 的细胞评为凋亡。数据表示成经历凋亡的细胞百分数。

实施例8

DNA合成停滞的生物试验

为了测试DNA的合成，以2.5×105/ml使用所有细胞，用化合物1-29的每一 种(表1和2)，浓度为0.01、0.1、1、5、10和20微克/毫升处理细胞，将200 微升各测试组一式四份置于96孔培养板(Corning，Corning NY)中。实验重复两 次，一块板用于存活测试，另一块用于检测3H-TdR的摄取，以监测DNA合成。37 ℃，5％CO2培养培养板48小时。培育结束前8小时，将3H-TdR加到一块重复板中， 继续培养8小时。然后收集细胞(需要胰蛋白酶消化，以收集粘着细胞)，并测定 同位素摄取，表示成计数/分钟(cpm)。为了存活研究，在培育终点，从孔中取出 细胞，用台酚蓝排除法检查存活。计算存活百分数和DNA合成百分数与各处理组 的未处理或载体处理的细胞的比。

实施例9

细胞循环停滞的生物试验

用新的测试试剂培养细胞2-3天，用95％乙醇固定，并用碘化丙锭染色过夜。 用具有定于488纳米的氩气激光的Coulter Epics Elite流式细胞计数器确定DNA 含量，同时测定细胞大小。用Coultier Multicycle程序将数据分析成各细胞循 环相中的细胞百分数。

实施例10

细胞分化的生物试验

为了确定新颖化合物是否诱导细胞分化，在滑动盖上培养细胞，用95％乙醇 固定并用脂专一性染料染色，以检测牛奶脂肪。另外，使用实验室中制备的多克 隆抗体，用免疫组织学和蛋白质分析检测细胞中牛奶蛋白酪蛋白的存在。

实施例11

DNA合成停滞作用

培养细胞48小时，用氚化的胸苷脉冲标记8小时，收集并计数。将数据表 示成每分钟计数。通过用测试化合物处理的细胞摄取氚化的胸苷减少，确定了DNA 合成停滞的验证。用碘化丙锭(propidium iodide)染色和标准细胞循环分析进一 步证实了DNA合成停滞。

实施例12

凋亡诱导的机制

这些化合物诱导凋亡的机制看来与三种不同的凋亡信号途径有关；即潜在的 转化生长因子β(TGF-β)的激活，Fas/Fas配体信号途径的激活和应激激酶(c-Jun N-末端激酶)途径的信号传递。

TGF-β是已知通过抑制DNA合成停滞并诱导凋亡来抑制细胞生长的强力生长 抑制剂分子。TGF-β仅和诱导凋亡途径有关，即，目前没有证据显示TGF-β影响 DNA合成停滞；然而，还未完全排除该可能性。细胞产生并分泌潜在的非活性形 式的TGF-β。为了成为有效的肿瘤生长抑制剂，潜在的TGF-β必须通过诱导细 胞表面蛋白来激活，这些蛋白提供加工和激活切开潜在蛋白并释放活性TGF-β的 蛋白酶所需的正确结构。

已显示本发明的化合物激活蛋白酶，如组织蛋白酶D家族蛋白酶，并上调与 无活性的TGF-β结合，并允许通过蛋白酶激活的甘露糖-6-磷酸受体。活性TGF- β通过细胞膜向TGF-β受体I和II发出信号，激活应激激酶或c-Jun N-末端激 酶(JNK)的下游激酶，它们磷酸化并激活转录因子c-Jun、ATF-2和Elk-1。转录 因子c-Jun的延长活化导致肿瘤细胞经历凋亡。这些转录因子以同源二聚体或异 源二聚体与许多转录因子配偶体一起起作用，激活促凋亡基因和/或下调抗凋亡基 因，导致DNA碎片化。本发明的化合物在正常非肿瘤细胞中不产生抗增殖的TGB -β信号。

称为Fas/Fas配体凋亡信号途径的第二种凋亡诱导机制是由本发明的新化合 物激活的。激活的Fas/Fas配体信号传导可能导致凋亡引起的快速细胞死亡。因 此，对于要逃避由Fas/Fas配体引起的死亡的肿瘤细胞，它们必须灭活该最重要 的凋亡途径。肿瘤细胞灭活该Fas/Fas配体信号途径的机制各自不同；然而，许 多肿瘤细胞下调膜上的Fas受体及其Fas配体的表达。

最重要的是，已显示R，R，R-2-(2，5，7，8-四甲基-2-(4，8，12-三甲基十三烷基) 苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(1)诱导Fas/Fas配体抗性的肿瘤细胞变成Fas/Fas 配体敏感性的。化合物1还能增强Fas配体在LNCaP前列腺细胞膜上的表达。研 究显示，Fas信号抗性的人乳腺癌细胞将Fas受体束缚在它们的细胞质中，但当 与化合物1一起培养时，Fas受体从细胞质中转移到膜上；从而使细胞变成Fas 信号敏感的。另外，该化合物在抗Fas引发的凋亡中起协同作用，其中用人乳腺 和前列腺癌细胞，共处理比分别处理要获得更大量的细胞杀伤。能将Fas信号抗 性的肿瘤细胞转换成Fas信号敏感性的肿瘤细胞，并显示协同杀伤作用的化合物 1提供了通过宿主免疫监视系统和药物干涉破坏肿瘤细胞的极重要的机制。本发 明的化合物不激活正常非肿瘤细胞的Fas信号途径。

这些化合物可能通过TGF-β和Fas/Fas配体信号激活JNK信号途径。JNK 的延长活化导致c-Jun和ATF-2转录因子的延长活化，推测它们分别在促凋亡和 抗凋亡基因的表达或阻抑中起作用。

实施例13

DNA合成停滞、细胞循环停滞和细胞分化的诱导机制

通过DNA合成停滞、细胞循环停滞引起的生长抑制的机制，和通过诱导细胞 分化引起的生长抑制的机制尚未由凋亡引起的生长抑制机制一样完全被确定特 征。研究显示，本发明的化合物对细胞循环具有很深的影响，在处理24小时内诱 导约95％的肿瘤细胞DNA合成停滞。与本文公开的化合物一起培养的肿瘤细胞的 生长被抑制在G1细胞循环期中，经历形态变化，并表达牛乳脂肪，这是一种被封 阻在细胞循环中的细胞经历分化的指征。P21基因，一种已知是细胞从G1细胞循 环期进入细胞循环的S期的抑制基因，及其mRNA和P21基因的蛋白质，通过用化 合物1处理MDA-MB-435人乳腺癌细胞被上调。

实施例14

用于人癌细胞的体内可能性

本发明有可能用作治疗剂。进行了原位或异位移植入免疫受损的动物(如裸 鼠)的人肿瘤细胞的肿瘤生长和转移的体内研究，或使用熟知的动物模型的体内研 究。移植入免疫受损的小鼠的人肿瘤细胞生长的抑制提供了临床试验的临床前数 据。体内研究包括两种人肿瘤细胞模型，转移性的非雌激素反应性MDA-MB-435乳 腺癌模型和雄激素非反应性PC-3前列腺癌模型。

MDA-MB-435乳腺癌模型：

作为固态肿瘤，在免疫受损的裸鼠或SCID小鼠中生长被标记蛋白(荧光绿色 蛋白)稳定转染的无病原体的MDA-MB-435人乳腺癌细胞。切去肿瘤，将1毫米的 等大小的片段原位植入雌性裸鼠的乳腺脂肪层或异位植入后胁腹。测定肿瘤生长、 转移和动物的死亡。通过测径评估肿瘤大小，测量肿瘤生长。在杀死时，除去肿 瘤，测量大小，并用于组织化学检测。用组织切片的组织化学染色检测标记的荧 光绿色蛋白的表达，来检测器官如脾脏、淋巴结、肺和骨髓中转移的MDA-MB-435 细胞。

PC-3前列腺癌模型

作为固态肿瘤，在裸鼠中生长被标记蛋白(荧光绿色蛋白)稳定转染的、无病 原体的PC-3人前列腺癌细胞。除去肿瘤，将1毫米的等大小的片段植入雄性裸 鼠的后胁腹。测定肿瘤生长、转移和动物的死亡。在杀死时，除去肿瘤，测量大 小，并用于组织化学检测。组织化学染色组织，检测标记的荧光绿色蛋白的表达， 来检测器官如脾脏、淋巴结、肺和骨髓中转移的PC-3细胞。

皮肤癌动物模型

在SENCAR和SKH-1无毛小鼠中用紫外线照射和化学(DMBA)处理诱导皮肤 癌。另外，使用了在皮肤的基底细胞中专一表达癌基因Her-2/neu(该基底细胞会 自发的发展成皮肤癌)的小鼠。每日在皮肤癌引发前或后皮肤外用本文公开的化合 物，并评估了皮肤乳头瘤形成的发展。同样处理对照小鼠，除了它们接受外用于 皮肤的载体处理。监测这些化合物治疗乳头瘤的效力和它们当用于恶化过程之前 时影响恶性转化的能力。

实施例15

新颖化合物的补充

在开始体内实验之前，将显示最大量的肿瘤细胞杀伤量的本发明的化合物以 不同水平施给裸鼠、SCID小鼠、转基因小鼠和其它小鼠，来建立可安全施用，没 有不良影响的化合物的最高水平。以适合模型的方式，如口腔、注射，包括直接 注射入靶器官，或外用施用化合物。建立可被耐受的最高化合物水平和有效施药 途径后，将新的化合物每日施给小鼠，如上所述确定肿瘤的生长和发展。

实施例16

化合物1最大耐受剂量(MTD)的建立

在进行预临床化疗研究之前，在无肿瘤的Balb/c雌小鼠中测试化合物1，尝 试建立最大耐受剂量。化合物1溶于100％乙醇中，建立储藏溶液(2g化合物1于 5毫升100％乙醇中)，用花生油稀释(未补充维生素E)，得到20，10和5mg/0.1ml。 溶解RRR-α-生育酚琥珀酸酯(VES；琥珀酸部分与RRR-α-生育酚通过酯键连接)并 如上稀释，达到20mg/0.1ml/管，作为另一种对照。将总共30只Balb/c雌性小 鼠分成6组(5只小鼠/组)，用管饲法每天补充化合物1，共23天。组1小鼠是未 处理的，作为对照；组2小鼠是载体对照组，接受0.1mL载体(与处理组相当的乙 醇+花生油)/小鼠/日，共23天，组3小鼠每天接受20毫克VES，共23天。处理 组3，4和5每天用5、10 20mg化合物1管饲，共23天。通过管饲法每天将5、 10和20mg/天的化合物1施给组3、4和5中的小鼠，共23天，让小鼠良好耐受。 每周测定重量，接受5、10和20mg/天的化合物1的小鼠的重量当与用VES处理、 未处理和载体处理的对照小鼠(图8，第11天和第23天处理的数据)的重量比较 时无显著差异。小鼠仍然活跃，无毒性症状。在MTD研究完成时，杀死小鼠，尸 检无毒性症状。

实施例17

化合物1的化疗作用

最大耐受剂量研究显示，以最高水平(20mg/天/23天)施用的化合物1无毒； 然而由于使用无毒水平，不能建立最大耐受剂量。对于预临床化疗研究，在不存 在最大耐受剂量的情况下，用30和20mg/0.1mL每日管饲补充小鼠21天。将化合 物1以2g化合物1/5mL乙醇溶于100％乙醇中，稀释在花生油(未补充微生物E)中， 达到30和20mg化合物1/0.1mL。载体对照由乙醇和花生油等价物的混合物组成。 预临床化疗研究用化合物1进行，使用移植到Balb/c免疫受损的裸鼠中的人 MDA-MB-435人乳腺癌细胞，人DU-145前列腺癌细胞和人HT-20结肠肿瘤细胞。

用总共40只免疫受损的裸鼠在每种肿瘤细胞类型中测试各试验化合物(两个 处理组，20和30mg/天)。对于每种肿瘤，使用各10只小鼠的4个实验处理组(载 体/0.1mL/每天管饲，21天，化合物1为30mg化合物1/0.1ml管饲/天，21天， 化合物1为20mg化合物1/0.1ml管饲/天，21天)。在异植体研究中使用确定剂 量的有效化疗药物。用20mg/kg，腹膜内每天施用5天的紫杉醇作为人MDA-MB-435 乳腺癌异植体的阳性对照；用1mg/kg，静脉内每天施用5天的米托蒽醌作为人 DU-145前列腺癌细胞的阳性对照；和用每天30mg/kg，施用5天的5-氟尿苷(5 FU) 作为人HT-29结肠癌细胞的阳性对照。将肿瘤细胞在皮下移植入左侧，使其生长 到约70mg，开始每天管饲测试化合物治疗，并持续总共21天。每天通过测径器 测量监测小鼠的肿瘤大小。小鼠治疗21天；然而当载体对照的肿瘤达到重500mg 时，杀死小鼠。在方案结束时，切下肿瘤，确定肿瘤重量。在杀死时，从两个化 合1测试组的小鼠收集血清、肿瘤和心肌，通过HPLC分析建立化合物1的水平(数 据未包括)。通过将两个治疗组的肿瘤大小与三种肿瘤类型的各载体对照组比较， 和将两个治疗组的肿瘤大小与阳性对照的肿瘤组比较，确定了以30和20mg/天每 天施用的化合物1的化疗效果。治疗是21天，实验持续到载体对照的肿瘤平均重 量达到500mg。

表3和表4以及图9A-C描述了体内临床前化疗数据，并表示了治疗的21-22 天。用化合物1以20和30mg/天通过管饲治疗移植了人MDA-MB-435乳腺癌细胞 的裸鼠21天，当与治疗后21天的各载体对照组的平均肿瘤重量比较，分别减少 了20.7％和44.6％的移植肿瘤细胞的平均肿瘤重量(毫克)。当与载体对照组的平均 肿瘤生长比较时，紫杉醇减少了90.3％的平均肿瘤生长(表3、4和图9A)。数据根 据治疗开始(第1天)的增重转换成平均肿瘤生长，列于表4。当和22天的载体对 照组的平均肿瘤重量比较时，用化合物1以20和30mg/天通过管饲治疗用人DU-145 前列腺癌细胞移植的裸鼠，减少了31.5和24.8％移植肿瘤细胞的平均肿瘤重量(毫 克)(表3、4和图9B)。当与载体对照组的平均肿瘤生长比较，阳性对照米托蒽醌 减少27.9％平均肿瘤生长。当和22天的载体对照组的平均肿瘤重量比较时，用化 合物1以20和30mg/天通过管饲治疗用人HT-29结肠癌细胞移植的免疫受损的裸 鼠，减少了33.3和34.5％移植肿瘤细胞的平均肿瘤重量(毫克)(表3、4和图9C)。 当和载体对照组的平均肿瘤生长比较时，5-氟尿嘧啶减少了31.4％的平均肿瘤生 长。

                                          表3

                            移植到裸鼠中的MDA-MB-435人乳腺癌细胞 治疗后的平均肿瘤重量(mg)   治疗   1   4   7   10   14   17   21   载体   70.1   98.2   119.5   153.2   172.8   203.7   226.1   1   (20mg)   70.1   85.8   123.9   127.9   147.2   143.8   179.4   1(30mg)   68.1   85.7   97.3   98.4   126.6   118.7   125.2   紫杉醇   70.7   71.5   38.2   11.7   5.7   3.6   6.8

移植到裸鼠中的DU-145人前列腺癌细胞 治疗后的平均肿瘤重量(mg) 治疗 1   5  8  12  15  19  22 载体 66.5  111.4  167.1  258.5  351.1  458.3  540.9 1 (20mg) 66.5  103.5  137.9  208  254.8  362.2  370.5 1(30mg) 67.8  102.5  131.3  241.2  256.8  379.9  407 米托蒽醌 66.8  107.2  141.1  185.4  205.2  325.3  389.4

移植入裸鼠的HT-29人结肠癌细胞 治疗后的平均肿瘤重量(mg) 治疗 1  5  8  12  15  19  22 载体 80.3  91.7  133.2  185.6  204.8  260.1  372.2 1 (20mg) 59.5  84.0  97.0  124.6  147.3  198.0  248.2 1(30mg) 40.0  83.0  96.7  129.3  144.1  176.1  243.8 5-FU 59.3  87.5  105.8  145.8  141.6  212.3  255.5

表4

治疗后平均肿瘤增重(mg)百分数

MDA-MB-435人乳腺癌细胞 治疗后的平均肿瘤增重(mg)百分数1 治疗 1  4  7  10  14  17  21 载体 100  140.1  170.5  218.5  246.5  290.6  322.5 1(20mg) 100  122.4  176.7  182.5  210.0  205.1  255.9 1(30mg) 100  125.8  142.9  144.5  185.9  174.3  178.6 紫杉醇 100  101.1  -46.0  -83.7  -91.8  -99.5  -90.3

DU-145人前列腺癌细胞 治疗后的平均肿瘤增重(mg)百分数 治疗 1  5  8  12  15  19  22 载体 100  167.5  251.3  388.7  528.0  458.3  689.2 1 (20mg) 100  155.6  207.4  312.8  383.2  362.2  544.7 1(30mg) 100  151.2  193.7  355.8  378.8  379.9  560.3 米托蒽醌 100  160.5  211.2  277.5  307.2  487.0  582.9

HT-29人结肠癌细胞 治疗后的平均肿瘤增重(mg)百分数 治疗 1  5  8  12  15  19  22 载体 100  152.1  220.9  307.8  339.6  431.3  617.2 1 (20mg) 100  141.2  163.0  209.4  247.6  332.8  417.1 1(30mg) 100  139.5  162.5  217.3  242.2  296.0  409.7 5-FU 100  147.6  178.4  245.9  247.2  358.0  430.0

1通过将治疗后各时间期的平均肿瘤重量除以相同治疗组内第1天的平均肿 瘤重量，乘以100，确定治疗后平均肿瘤增重(mg)百分数。

实施例18

储藏溶液、载体和化合物1稀释液的制备

每周制备化合物1，储藏在4℃。

制备方法如下：

化合物1的储藏溶液：

将2克化合物1溶于5毫升100％的乙醇(ETOH)中，并在37℃涡流搅匀。这 是进入溶液的化合物1的最大量。

对于随后的稀释，加入干化合物1得到合适含量的化合物1，同时保证两实 验组和对照组中的乙醇量相等。

30毫克/0.1毫升管饲/小鼠的化合物1：

合并1毫升化合物1储藏溶液，3毫升除尽维生素E的花生油和800毫克化 合物1(干燥)，37℃涡流搅匀。

20毫克/0.1毫升管饲/小鼠的化合物1：

合并1毫升化合物1储藏溶液，3毫升除尽维生素E的花生油和400毫克化 合物1(干燥)，37℃涡流约2小时直到变成溶液。

10毫克/0.1毫升管饲/小鼠的化合物1：

合并1毫升化合物1储藏溶液和3毫升除尽维生素E的花生油。

载体：

合并1毫升ETOH和3毫升除尽维生素E的花生油。

实施例19

化合物1在ACI大鼠癌模型中的化学预防性能

在体内使用化合物1来治疗移植在免疫受损的裸鼠中的人乳腺、前列腺和结 肠肿瘤。化合物1针对人乳腺癌的化学预防效力显示于雌激素癌引发的ACI大鼠 乳腺癌模型中。移植了雌激素小丸的约90％的大鼠在雌激素植入的6月内发生了 乳腺癌。

将化合物1溶于100％乙醇，并用除尽维生素E的花生油稀释到合适剂量。如 实施例14和15中所述，确定最大耐受剂量(MTD，可施用且没有不良影响的化合 物的最大剂量)。以MTD和1/2MTD施用化合物1。在4周龄的ACI大鼠肩部区的 膜下移植雌激素小丸。管饲MTD和1/2MTD的化合物1。在对照组中在雌激素移植 约100日后检测乳腺肿瘤。90％的对照大鼠在雌激素移植的6个月中发生了乳腺癌。 在处理开始的不同时间杀死来自对照和处理组的患肿瘤的动物，检测乳房组织中 的明显肿瘤，并进一步用组织学分析检测。

本文引用了下列文献。

1.Colowisk，Sidney，P.和Kaplan，Nathan，O.Methods in Enzymology，卷 XVIII，维生素和辅酶，C部分，Donald B.mcCormick和Lemuel D.Wright编， XII节，pp.335。

2.Dhar，A.，Liu，S.，Klucik，J.，Berlin，K.D.，Madler，M.M.，Lu，S.， Ivey，R.T.，Zacheis，D.，Brwon，C.W.，Nelson，E.C.，Birchbichler，P.J.， Benbrook，D.M.，合成，结构-活性关系和氮杂芳醇(arotinoid)的RARγ-配体相互 作用，J.Med.Chem.42，pp.3602-3614(1999)。

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本领域技术人员将易于理解，本发明很好的适合实施目的，并获得提到的， 以及其中固有的那些结果和优点。本发明和本文所述的方法、步骤、处理、分子 和具体化合物是优选例的代表，是例证性的，不是要限制本发明的范围。其中的 变化和其它用途对于本领域技术人员是存在的，它们包含在权利要求书范围限定 的本发明的精神内。