发明领域
[0001] 本发明涉及EGFR
抑制剂的用途和使用EGFR抑制剂的治疗方法。本发明还涉及用于治疗T细胞介导的自身免疫
疾病的包含EGFR抑制剂的药物组合物。本发明还涉及用于治疗T细胞介导的自身免疫疾病的EGFR抑制剂、EGFR抑制剂在制备用于治疗或
预防T细胞介导的自身免疫疾病的药物中的用途、在有此需要的个体中治疗或预防T细胞介导的自身免疫疾病的方法，所述方法包括给予所述个体
治疗有效量的EGFR抑制剂，以及所述EGFR抑制剂用于治疗或预防T细胞介导的自身免疫疾病的用途。
[0002] 发明背景
[0003] TEC家族蛋白酪
氨酸激酶ITK(诱导型T细胞激酶，也称为Itk)、RLK和TEC是T细胞受体
信号传导的关键组分，其有助于T细胞活化的调节和极化。功能研究表明TEC激酶是控制CD4+T辅助细胞分化和促进效应子功能的途径的重要介质。
[0004] ITK已被证明可以调节自身
反应性T细胞运输。缺乏ITK的T细胞表现出增殖能
力降低、细胞因子分泌减少以及T细胞分化
缺陷(Andreotti,AH等人的综述，由Tec家族激酶Itk调节的T细胞信号传导(T-cell signaling regulated by the Tec family kinase Itk,.)Cold Spring Harb Perspect Biol,2010.2(7):p.a002287)。最近证明，ITK的缺失在多发性硬化症EAE的小鼠模型中是保护性的，其中致病性T细胞发育较少(Kannan,AK等人，Itk信号通过调节CD4+T细胞活化和运输来促进神经
炎症(Itk signals promote neuroinflammation by regulating CD4+T-cell activation and trafficking)，J Neurosci,2015.35(1):221-33页)。还发现ITK的小分子抑制剂可减少I型糖尿病模型中T细胞浸润和胰岛细胞的破坏-突出了ITK抑制剂治疗T细胞介导的自身免疫疾病如I型糖尿病的可能性(Jain,N.等人,CD28和ITK信号调节自身反应性T细胞运输(CD28and ITK signals regulate autoreactive T cell trafficking)，Nat Med,2013.19(12):1632-7页)。此外，最近的报告证明ITK和RLK的小分子抑制剂在过继转移小鼠模型中预防结肠炎进展(Cho,H.S.等人,ITK和RLK的小分子抑制剂损害Th1分化和预防结肠炎疾病进展(A Small Molecule Inhibitor of ITK and RLK Impairs Th1Differentiation and Prevents Colitis Disease Progression),J Immunol,2015,195(10):4822-31页)。
[0005] 因此，TEC激酶、特别是ITK，现已成为T细胞功能的重要调节剂，其具有调节自身反应性T细胞应答的令人兴奋的治疗潜力(亦参见WO2015054612A1及其中引用的参考文献)。
[0006] 大约10-15％的NSCLC(非小细胞
肺癌)具有激活EGFR突变并对第一代和第二代EGFR抑制剂起反应，但抑制wt(野生型)EGFR导致GI(胃肠道)毒性和皮疹，其减弱了临床应用。此外，响应的持久性受到获得性抗性的限制，在大约一半的病例中发生了看
门人(gatekeeper)残基(T790M)的二次突变。化合物A，在本文中也称为EGF816，是突变型EGFR(包括T790M双突变体)的有效的第三代不可逆抑制剂，对野生型EGFR具有良好的选择性。化合物A也称为纳扎替尼。在临床前研究中，化合物A在多种突变EGFR环境中显示出体内功效。化合物A目前正在进行临床试验，例如在携带T790M的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中。
[0007] 出乎意料的是，发现化合物A与TEC家族的激酶、特别是ITK具有交叉反应性。与ITK的
生物学一致，化合物A在体外测定中导致T
细胞增殖的阻断。因此，化合物A可用于治疗各种T细胞介导的自身免疫疾病。T细胞介导的自身免疫疾病的实例尤其包括溃疡性结肠炎、类
风湿性关节炎、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、多发性肌炎、I型糖尿病、
乳糜泻和多发性硬化。因此，化合物A也可用于治疗T细胞介导的自身免疫疾病，例如溃疡性结肠炎、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、多发性肌炎、乳糜泻、非感染性葡萄膜炎、舍格伦综合征、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性
肝炎和强直性脊柱炎。
[0008] 发明概述
[0009] 因此，本发明提供了用于治疗某些T细胞介导的自身免疫疾病的化合物A(也称为纳扎替尼)，其为下述式(I)的化合物，
[0010]
[0011] 或其药学上可接受的盐。
[0012] 化合物A的化学名为(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺。
[0013] 这种T细胞介导的自身免疫疾病可选自溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、多发性肌炎、I型糖尿病、乳糜泻、多发性硬化症、非感染性葡萄膜炎、舍格伦综合征、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎和强直性脊柱炎。
[0014] T细胞介导的自身免疫疾病还可选自类风湿性关节炎、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、多发性肌炎、I型糖尿病、乳糜泻、多发性硬化、非感染性葡萄膜炎、舍格伦综合征、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎和强直性脊柱炎。
[0015] T细胞介导的自身免疫疾病还可选自溃疡性结肠炎、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、多发性肌炎、乳糜泻、非感染性葡萄膜炎、舍格伦综合征、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎和强直性脊柱炎。
[0016] 可以通过纳扎替尼治疗的T细胞介导的自身免疫疾病包括溃疡性结肠炎、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、多发性肌炎、乳糜泻、非感染性葡萄膜炎、舍格伦综合征、原发性胆汁性肝硬化和强直性脊柱炎。
[0017] T细胞介导的自身免疫疾病的其他实施方案如
权利要求中所定义。优选地，待治疗的疾病是I型糖尿病。
[0018] 因此，本发明还提供了：
[0019] -用于治疗如本文所定义的T细胞介导的自身免疫疾病的包含化合物A或其药学上可接受的盐的药物组合物；
[0020] -治疗如本文所定义的T细胞介导的自身免疫疾病的方法，包括将治疗有效量的化合物A或其药学上可接受的盐给予有需要的个体；
[0021] 和
[0022] -化合物A或其药学上可接受的盐在制备用于治疗如本文所定义的T细胞介导的自身免疫疾病的药物中的用途。
[0023] 本发明还提供了用于治疗I型糖尿病的化合物A。
[0024] 发明详述
[0025] 如本文所用，冠词“一”和“一个”指的是冠词的一个或多于一个(例如，至少一个)语法对象。
[0026] 除非上下文另有明确说明，否则术语“或”在本文中用于表示术语“和/或”并且可与术语“和/或”互换使用。
[0027] 如本文所用，术语“治疗”是指由给予一种或多种治疗所引起的疾病例如自身免疫疾病的进展、严重性和/或持续时间的减少或改善，或一种或多种疾病症状(优选一种或多种可辨别的症状)的改善。在具体的实施方案中，术语“治疗”是指改善自身免疫病症的至少一种可测量的身体参数，该参数不一定是患者可辨别的。在其他实施方案中，术语“治疗”是指从身体上(通过例如稳定可辨别的症状)和/或从生理上(通过例如稳定身体参数)抑制自身免疫病症的进展。
[0028] 化合物A
[0029] 化合物A，也称为纳扎替尼，是表皮生长因子受体(EGFR)的靶向共价不可逆抑制剂，其选择性抑制活化和获得性抗性突变体(L858R、ex19del和T790M)，但不抑制WT EGFR(参见Jia等人，Cancer Res,2014年10月1日，74；1734)。化合物A在EGFR突变体(L858R、ex19del和T790M)癌症模型(体外和体内)中显示出显著功效，在临床相关的有效浓度下没有WT EGFR抑制的迹象。
[0030] 化合物A是(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基)氮杂环庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基异烟酰胺，其公开于PCT公开号WO2013/184757。该PCT公开文本还公开了化合物A的制备方法和包含化合物A的药物组合物。化合物A的特别有用的盐是其甲磺酸盐或
盐酸盐。这些盐和其药物组合物公开于WO 2015/083059中。
[0031] 提出以下
实施例是为了帮助理解本公开的内容，但并不意图也不应解释为以任何方式限制其范围。
[0032] 实施例1：化合物A显示对TEC激酶的抑制
[0033] T细胞TEC家族激酶(ITK、TEC和TXK)位于TCR(T细胞受体)的下游，并且在T细胞活化和信号传导中起重要作用。ITK是TEC家族激酶中最重要的成员。T细胞过度活化与许多自身免疫疾病有关，因此抑制TEC家族激酶可能有效治疗T细胞介导的自身免疫疾病。
[0034] 化合物A是突变型EGFR的有效抑制剂，在体外也显示出对Tec家族激酶的有效抑制。如表1所示，在基于生物化学的测定中，化合物A对ITK、TEC和TXK这三种T细胞Tec家族成员显示出个位数nM的效力。在细胞试验中，化合物A有效地抑制T细胞Tec家族成员，其抑制IL-2产生、小鼠CD4T细胞和人CD4T细胞增殖的IC50值分别为21、107和140nM。相反，化合物A对B细胞Tec家族激酶的效力较低，如通过小鼠B细胞和TMD-8(BTK依赖性)增殖测定中上移的IC50值所证明的。
[0035] 如下所示，相对于B细胞，化合物A选择性地优先抑制T细胞，而依鲁替尼对B细胞的抑制比对T细胞更有效。因此，依鲁替尼具有更广泛免疫抑制的潜力，而化合物A可能对T细胞介导的自身免疫疾病具有选择性。
[0036] 体外测定方法(表1中描述的测定)：
[0037] 使用Caliper Life Sciences的
专利LabChipTM技术进行ITK、TEC和TXK的生化分析。该技术使用微
流体芯片来测量
荧光肽底物向磷
酸化产物的转化。在各种化合物浓度存在下测定产物转化率并计算IC50值。
[0038] 使用Jurkat细胞进行细胞IL-2产生测定。在各种浓度的化合物存在下刺激CD3/CD28过夜后，通过ELISA测量条件培养基中的IL-2含量，并测定化合物(化合物A或依鲁替尼)的IC50。
[0039] 在小鼠CD4T细胞测定中，从小鼠脾脏中纯化CD4+T细胞并在涂有抗CD3的组织培养板中铺板。将细胞在各种浓度的化合物存在下于37℃温育48小时。然后加入3H-胸苷，将细胞在37℃再温育18小时。然后
收获细胞并在β计数器上读数。
[0040] 在人CD4T细胞测定中，在抗CD3/抗CD28珠的存在下培养从Leukopak分离的原代人CD4+T细胞以刺激T细胞增殖。4天后，使用Cell Titer Glo测量细胞活力。
[0041] 在小鼠B细胞测定中，从小鼠脾细胞中纯化B细胞并在补充有抗IgM和m-IL4的组织培养板中铺板。将细胞在各种浓度的化合物存在下于37℃温育。3天后，使用Cell Titer Glo测量细胞活力。
[0042] 在BTK依赖性TMD-8细胞增殖测定中，将TMD-8细胞在各种浓度的化合物存在下于37℃温育。3天后，使用Cell Titer Glo测量细胞活力。
[0043] 表1：化合物A和依鲁替尼对Tec家族激酶的生化和细胞IC50
[0044]
[0045] *IL2生产测定包括TEC家族激酶(ITK、TEC和TXK)
[0046] 实施例2：化合物A的免疫调节体内作用
[0047] T细胞在免疫调节中起关键作用。T细胞Tec家族激酶是T细胞功能的重要参与者，其反过来可调节免疫功能。化合物A在T细胞依赖性
抗体应答(TDAR)测定中进行测试，该测定是免疫系统的常用功能评估。将化合物A以30mg/kg/天的剂量对大鼠口服
给药5周。在主要研究动物的研究第11天和第25天以及恢复组的第28天和第42天，动物接受300μg KLH(钥孔血蓝蛋白)
抗原。收集用于抗KLH IgM和抗KLH IgG抗体的血清学评估的样品(在给药之前的研究第19、21、23、25和36天从主要研究动物收集；在注射KLH之前的恢复第42和53天从恢复动物收集)。当将值与平行的载体对照比较时，观察到KLH免疫后化合物A处理的动物的免疫调节反应。如表2所示，对于所有测试组的雄性和雌性大鼠，抗KLH IgM抗体(初次应答)的降低在研究第19-21天达到峰值。对于雌性大鼠，在研究第21、23、25天(初次应答，时间
进程)和第36天(加强后)也观察到平均抗KLH IgM值的降低。雄性和雌性大鼠的抗KLH IgG抗体在研究第19、21、23和25天的平均浓度降低明显。在研究第36天，在雌性大鼠中检测到平均浓度的降低。
[0048] 观察到停止化合物A治疗后的恢复。雄性和雌性大鼠中与化合物A有关的抗KLH抗体产生的减少均是可逆的。这包括初次应答-抗KLH IgM和通过二级抗KLH IgG产生测量的同种型转换，其表现为在恢复取样时间点(恢复第42天和第53天)的值与平行对照的相似。
[0049] 总之，在30mg/kg的剂量下，观察到化合物A对初级IgM抗体形成和同种型转换为IgG抗体的体内作用。停止化合物A给药后该效果逆转。体外生化/细胞数据和体内TDAR结果一起表明化合物A具有潜在的免疫调节潜力。
[0050] 表2：以30mg/kg/天施用化合物A后与载体对照相比的平均百分比差异表示的抗KLH IgM和IgG减少
[0051]
[0052] '-'表示结果与对照结果没有显著差异。
[0053] 平均％差异＝(平均给药组值-平均对照值)/平均对照值)×100％
[0054] '*'表示恢复日
[0055] 体外生物化学/细胞数据和体内TDAR结果一起表明化合物A抑制T细胞功能。
[0056] 以参考方式加入
[0057] 本文提及的所有出版物、专利和登记号均通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物或专利被具体和单独地指出通过引用并入一样。
[0058] 等同方式
[0059] 虽然已经讨论了本公开的具体实施方案，但是以上
说明书是说明性的而非限制性的。本公开的全部范围应该通过参考权利要求及其等同方式的全部范围和说明书以及这些变化来确定。
