用于治疗白癜风的组合物和方法
阅读：416发布：2020-05-13
专利汇可以提供用于治疗白癜风的组合物和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本技术提供 预防 或 治疗 白癜 风 的方法。所述方法提供施用有效量的芳族阳离子肽来治疗或改善例如在罹患或易患上白癜风的受试者中存在的黑素细胞变性。在一些实施方案中，所述方法包括对于罹患白癜风或处于白癜风风险下的受试者向有需要的受试者施用有效量的芳族阳离子肽。本技术涉及通过施用 治疗有效量 的芳族阳离子肽如D‑Arg‑2′,6′‑Dmt‑Lys‑Phe‑NH2来治疗、改善或预防 哺乳动物 或哺乳动物细胞中的白癜风。，下面是用于治疗白癜风的组合物和方法专利的具体信息内容。
1.一种肽或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗或改善有需要的受试者中的白癜风的至少一种症状的药物的用途，其中，所述肽是式D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2。
2.如权利要求1所述的用途，其中，所述症状选自：光敏性增加，对二硝基氯苯的接触敏感性反应降低，皮肤、口和鼻的粘膜、视网膜或生殖器的色素脱失，和头皮上的毛发、睫毛、眉毛或胡须过早白化或灰化。
3.如权利要求1所述的用途，其中，白癜风与以下中的一者或多者相关：自身免疫性甲状腺病、恶性贫血、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病、阿狄森氏病、乳糜泻、炎性肠病和全身性红斑狼疮。
4.如权利要求1所述的用途，其中，白癜风与至少一种基因突变相关。
5.如权利要求4所述的用途，其中，所述基因突变位于由以下构成的组中：NLRP1、TYR、I类HLA、II类HLA、III类HLA、PTPN22、XBP1、IL2RA、LPP、RERE、FOXP1、TSLP、CCR6、GZMB、UBASH3A、C1QTNF6和FOXP3。
6.如权利要求1所述的用途，其中，所述肽是经局部或经全身施用的。
7.如权利要求3所述的用途，其中，自身免疫性甲状腺病选自由桥本氏甲状腺炎和格雷夫斯病组成的组。
8.如权利要求6所述的用途，其中，所述肽是经口、经静脉内、经皮下、经腹膜内或经肌内施用的。
用于治疗白癜风的组合物和方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2013年12月2日提交的美国申请No.61/910,742的权益和优先权，所述申请的内容以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
[0003] 本技术大体上涉及预防或治疗白癜风的组合物和方法。特别是，本技术的实施方案涉及施用有效量的芳族阳离子肽来治疗或改善例如在罹患或易患上白癜风的受试者中存在的黑素细胞变性。
背景技术
[0004] 提供下面的描述来辅助读者的理解。所提供的信息或所引用的参考文献都不承认是现有技术。
[0005] 白癜风是一种色素沉着病症，其中黑素细胞(负责皮肤色素沉着的细胞)被破坏。因此，白色斑块出现在身体不同部位中的皮肤上。虽然斑块最初较小，但它们通常增大并改变形状。白癜风病灶可出现在任何地方，但最通常存在于肢端区域、粘膜(衬在口和鼻内部的组织)、视网膜和生殖器上。其他症状包括光敏性增加、对二硝基氯苯的接触敏感性反应降低，和在受白癜风影响的区域上生长的毛发过早白化或灰化。黑光可用于这种疾病的早期阶段以进行鉴别并确定治疗的有效性。具有白癜风的皮肤当暴露于黑光时将发出黄光、绿光或蓝光，而相比之下，健康的皮肤将没有反应。
[0006] 多种医学疗法，包括局部用类固醇疗法、补骨脂素光化疗法和色素脱失，可以减少白癜风的出现。然而，这些疗法中的每种在功效和/或严重的副作用方面存在缺点，例如皮肤皱缩、严重晒伤、起泡、色素沉着过度、白内障、炎症、恶心、呕吐、瘙痒、异常毛发生长和皮肤癌。此外，手术疗法不是最佳的，因为它们只适合白癜风患者子集并且伴随着感染、疤痕、起泡和异常色素沉着的风险。因此，仍需要有效地且安全地对抗白癜风的治疗策略。发明内容
[0007] 本技术涉及通过向有需要的受试者施用治疗有效量的芳族阳离子肽如D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐来治疗、改善或预防哺乳动物或哺乳动物细胞中的白癜风。在一些方面，本技术涉及通过施用如本文所公开的芳族阳离子肽，来治疗、改善或预防受试者中或有需要的哺乳动物细胞中的黑素细胞变性。在一些实施方案中，所述哺乳动物受试者处于白癜风的风险下，或罹患白癜风，或患上白癜风的风险增加。在一些实施方案中，所述受试者罹患以影响黑素细胞存活的基因突变为特征的疾病或病状或者患上所述疾病或病状的风险增加。在一些实施方案中，所述受试者罹患或易患上以NLRP1突变为特征的疾病或病状。在一些实施方案中，所述受试者罹患或易患上以TYR突变为特征的疾病或病状。在一些实施方案中，所述黑素细胞变性与至少一种基因突变相关。在一些实施方案中，所述基因突变包括以下基因或基因区域中的一个或多个中的突变：NLRP1、TYR、I类HLA、II类HLA、III类HLA、PTPN22、XBP1、IL2RA、LPP、RERE、FOXP1、TSLP、CCR6、GZMB、UBASH3A、C1QTNF6、FOXP3。
[0008] 在一些实施方案中，所述哺乳动物细胞是在原位、离体或体内。在一些实施方案中，黑素细胞变性是由于生物化学或代谢途径的异常。在一些实施方案中，黑素细胞变性是由于生物蝶呤、苯酚或儿茶酚的代谢异常。在一些实施方案中，黑素细胞变性是由于因暴露于苯酚/儿茶酚衍生物如4-叔丁基苯酚而造成的应力。在一些实施方案中，黑素细胞变性是由于自身免疫反应。
[0009] 本文还公开了用于治疗有需要的受试者中的白癜风的方法，所述方法包括：施用治疗有效量的芳族阳离子肽如D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐，从而治疗或改善白癜风的至少一种症状。
[0010] 在所公开方法的一些实施方案中，白癜风的症状可包括以下中的任何一种或多种：光敏性增加，对二硝基氯苯的接触敏感性反应降低，皮肤、粘膜(衬在口和鼻内部的组织)、视网膜或生殖器的色素脱失，和头皮上的毛发、睫毛、眉毛或胡须过早白化或灰化。
[0011] 在所公开方法的一些实施方案中，白癜风可能与以下中的一种或多种相关：黑素瘤、自身免疫性甲状腺病(桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)和格雷夫斯病(Graves'disease))、恶性贫血、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病、阿狄森氏病(Addison's disease)、乳糜泻、炎性肠病和全身性红斑狼疮。
[0012] 在所公开方法的一些实施方案中，白癜风与至少一种基因突变相关。在所公开方法的一些实施方案中，所述基因突变位于以下基因或基因区域中的一个或多个中：NLRP1、TYR、I类HLA、II类HLA、III类HLA、PTPN22、XBP1、IL2RA、LPP、RERE、FOXP1、TSLP、CCR6、GZMB、UBASH3A、C1QTNF6、FOXP3。
[0013] 在一些方面，提供治疗、预防或改善黑素细胞变性和色素脱失的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：使所述细胞与治疗有效量的芳族阳离子肽如D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐接触，从而治疗、预防或改善黑素细胞变性和色素脱失。在一些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述细胞是在哺乳动物受试者中。
[0014] 在一些方面，提供治疗、预防或改善因暴露于4-叔丁基苯酚而诱导的黑素细胞变性和色素脱失的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：使所述细胞与治疗有效量的芳族阳离子肽如D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐接触，从而治疗、预防或改善因暴露于4-叔丁基苯酚而诱导的黑素细胞变性和色素脱失。
[0015] 在一些方面，提供通过降低表皮细胞中的T细胞积聚和细胞毒性活性来治疗、预防或改善黑素细胞变性和色素脱失的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：使所述细胞与治疗有效量的芳族阳离子肽如D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐接触，从而通过降低表皮细胞中的T细胞积聚和细胞毒性活性来治疗、预防或改善黑素细胞变性和色素脱失。在一些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述细胞是在哺乳动物受试者中。
[0016] 在一些方面，本公开提供治疗或预防白癜风的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐，例如，D-Arg-2′,6′-Dmt-Lys-Phe-NH2，或其药学上可接受的盐，例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。在一些实施方案中，所述方法还包括施用一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述芳族阳离子肽是具有以下的肽：
[0017] 至少一个净正电荷；
[0018] 最少四个氨基酸；
[0019] 最多约20个氨基酸；
[0020] 净正电荷的最小数目(pm)与氨基酸残基总数(r)之间的关系，其中3pm是小于或等于r+1的最大数目；和芳族基团的最小数目(a)与净正电荷总数(pt)之间的关系，其中2a是小于或等于pt+1的最大数目，不同之处在于当a是1时，pt也可以是1。在特定实施方案中，所述受试者是人类。
[0021] 在一些实施方案中，2pm是小于或等于r+1的最大数目，并且a可能等于pt。所述芳族阳离子肽可能是具有最少两个或最少三个正电荷的水溶性肽。在一些实施方案中，所述肽包含一个或多个非天然存在的氨基酸，例如，一个或多个D-氨基酸。在一些实施方案中，所述氨基酸在C端的C端羧基被酰胺化。在某些实施方案中，所述肽具有最少四个氨基酸。所述肽可具有最多约6个、最多约9个、或最多约12个氨基酸。
[0022] 在一些实施方案中，所述肽在N端包含酪氨酸或2',6'-二甲基酪氨酸(Dmt)残基。例如，所述肽可具有式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2或2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在另一个实施方案中，所述肽在N端包含苯丙氨酸或2',6'-二甲基苯丙氨酸残基。例如，所述肽可具有式Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2或2',6'-Dmp-D-Arg-Phe-Lys-NH2。在一个特定实施方案中，所述芳族阳离子肽具有式D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐，例如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
[0023] 在一个实施方案中，所述肽由式I限定：
[0024]
[0025] 其中R1和R2各自独立地选自
[0026] (i)氢；
[0027] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0028] (iii) 其中m＝1-3；
[0029] (iv)
[0030] (v)
[0031] R3和R4各自独立地选自
[0032] (i)氢；
[0033] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0035] (iv)氨基；
[0036] (v)C1-C4烷基氨基；
[0037] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0038] (vii)硝基；
[0039] (viii)羟基；
[0040] (ix)卤素，其中“卤素”涵盖氯、氟、溴和碘；
[0041] R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自
[0042] (i)氢；
[0043] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0044] (iii)C1-C6烷氧基；
[0045] (iv)氨基；
[0046] (v)C1-C4烷基氨基；
[0047] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0048] (vii)硝基；
[0049] (viii)羟基；
[0050] (ix)卤素，其中“卤素”涵盖氯、氟、溴和碘；并且
[0051] n是1至5的整数。
[0052] 在一个特定实施方案中，R1和R2是氢；R3和R4是甲基；R5、R6、R7、R8和R9都是氢；并且n是4。
[0053] 在一个实施方案中，所述肽由式II限定：
[0054]
[0055] 其中R1和R2各自独立地选自
[0056] (i)氢；
[0057] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0058] (iii) 其中m＝1-3；
[0059] (iv)
[0060] (v)
[0061] R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12各自独立地选自
[0062] (i)氢；
[0063] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0064] (iii)C1-C6烷氧基；
[0065] (iv)氨基；
[0066] (v)C1-C4烷基氨基；
[0067] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0068] (vii)硝基；
[0069] (viii)羟基；
[0070] (ix)卤素，其中“卤素”涵盖氯、氟、溴和碘；并且
[0071] n是1至5的整数。
[0072] 在一个特定实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12都是氢；并且n是4。在另一个实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R11都是氢；R8和R12是甲基；R10是羟基；并且n是4。
[0073] 所述芳族阳离子肽可以多种方式施用。在一些实施方案中，所述肽可经口、经局部、经鼻内、经腹膜内、经静脉内、经皮下或透皮(例如，通过离子电渗疗法)施用。在一些实施方案中，所述芳族阳离子肽是通过冠状动脉内途径或动脉内途径施用的。
[0074] 在一个实施方案中，本技术提供通过施用如本文所公开的芳族阳离子肽来治疗、改善或预防有需要的哺乳动物受试者中的白癜风和/或治疗或改善有需要的受试者中的黑素细胞变性的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐，从而预防或治疗白癜风和/或其体征或症状。在一个实施方案中，所述方法还包括向所述受试者施用一种或多种另外的治疗剂的步骤。在一个实施方案中，所述哺乳动物受试者处于白癜风的风险下，或罹患白癜风，或患上白癜风的风险增加。在一些实施方案中，所述受试者罹患以黑素细胞变性为特征的疾病或病状或者患上以黑素细胞变性为特征的疾病或病状的风险增加。在一些实施方案中，所述受试者罹患以影响黑素细胞存活的基因突变为特征的疾病或病状或者患上以影响黑素细胞存活的基因突变为特征的疾病或病状的风险增加。在一些实施方案中，所述受试者罹患以NLRP1突变为特征的疾病或病状或者患上以NLRP1突变为特征的疾病或病状的风险增加。在一些实施方案中，所述受试者罹患以TYR突变为特征的疾病或病状或者患上以TYR突变为特征的疾病或病状的风险增加。在一些实施方案中，所述受试者是通过施用如本文所公开的芳族阳离子肽来处理的。
[0075] 在另一个方面，本技术提供用于鉴别受试者以用一种或多种芳族阳离子肽处理的诊断测定法，其中所述测定法包括：从所述受试者移出组织，其中所述组织表现出白癜风的表型或症状；从所述组织分离黑素细胞；培养所分离的黑素细胞；将所述黑素细胞分成至少两组；用至少一种芳族阳离子肽处理第一组的黑素细胞；用媒介物对照处理第二组的黑素细胞；对所述第一组和第二组的黑素细胞测定至少一种治疗作用；和比较所述第一组的黑素细胞的至少一种治疗作用与所述第二组的黑素细胞的至少一种治疗作用。
[0076] 在一些实施方案中，所述至少一种治疗作用是选自以下的一种或多种治疗作用：线粒体膜电位升高、ATP产生增加、细胞存活或增殖增加，和黑色素产生增加。
[0077] 在一些实施方案中，所述测定法还包括比较所述第一组和第二组的黑素细胞的至少一种治疗作用与从来自未诊断患有白癜风的至少一个受试者的黑素细胞测定的至少一种治疗作用。
[0078] 在一些实施方案中，基于选自以下的一种或多种标准来选择受试者作为治疗候选者：受试者已确诊具有累及15％至50％的总身体表面的非节段型白癜风(NSV)、累及头和颈部的NSV、历经3个月时期的稳定的或缓慢进行性的白癜风，受试者为至少13岁，和受试者具有至少一个尺寸测量为至少2×2cm的白癜风病灶。
[0079] 在一些实施方案中，如果相比于来自受试者的未被处理的黑素细胞，来自所述受试者的用芳族阳离子肽处理的黑素细胞中的线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生存在约1％至50％、5％至40％、10％至30％、或15％至25％的增加，则所述受试者被选择用至少一种芳族阳离子肽处理。
[0080] 在一些实施方案中，如果来自受试者的用芳族阳离子肽处理的黑素细胞的线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生朝向正常水平恢复了约1％至50％、5％至40％、10％至30％、或15％至25％，则所述受试者被选择用至少一种芳族阳离子肽处理，其中线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生的正常水平是通过测定来自未诊断患有白癜风的至少一个受试者的黑素细胞来确定的。
[0081] 在另一个方面，本技术提供用于监测诊断患有白癜风的受试者的芳族阳离子肽处理的测定法，其中所述测定法包括从经历芳族阳离子处理的白癜风受试者的一个或多个受影响皮肤区域移出组织，从所述组织分离黑素细胞，培养所分离的黑素细胞，对所分离的黑素细胞测定至少一种治疗作用，比较所述治疗作用与黑素细胞细胞能量、黑色素产生和/或细胞增殖的正规化水平。
[0082] 在一些实施方案中，所述至少一种治疗作用是选自以下的一种或多种治疗作用：线粒体膜电位升高、ATP产生增加、细胞存活或增殖增加，和黑色素产生增加。
[0083] 在一些实施方案中，所述测定法还包括比较用芳族阳离子肽处理的治疗作用与来自白癜风受试者在用芳族阳离子肽处理之前的黑素细胞细胞能量、黑色素产生和/或细胞增殖的原始水平。
[0084] 在另一个方面，本技术提供用于确定白癜风疗法的功效的筛选测定法，所述测定法包括从诊断患有白癜风的受试者的受影响皮肤区域移出组织，从所述组织分离黑素细胞，培养所分离的黑素细胞，将所述黑素细胞分成两个或更多个组，用至少一种芳族阳离子肽处理至少一组黑素细胞，用媒介物对照处理至少一组黑素细胞，用白癜风疗法处理至少一组黑素细胞，对所述黑素细胞测定通过用芳族阳离子肽和白癜风疗法进行处理的治疗作用，和比较用芳族阳离子肽处理的治疗作用与用白癜风疗法处理的治疗作用。附图说明
[0085] 图1是示出利用0μM、1.5μM和2.0μM的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对来自诊断患有白癜风的人类受试者的黑素细胞(VHM)处理7天使得所处理VHM的线粒体膜电位升高的曲线图。将经过处理和未经过处理的VHM的线粒体膜电位与来自不具有白癜风的人类受试者的黑素细胞(NHM)的线粒体电位进行比较，所述NHM也用0μM、1.5μM和2.0μM的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理7天。
[0086] 图2是示出利用2.0μM的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对来自诊断患有白癜风的人类受试者的黑素细胞(VHM)处理3天使得经过处理的VHM黑素细胞相比于未经过处理的VHM黑素细胞(即，0μM的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)的ATP产生增加的曲线图。
具体实施方式
[0087] 应理解，本技术的某些方面、模式、实施方案、变化和特征在下文以多种细节水平描述以提供对本技术的实质性理解。本技术提供如下方法，其包括施用有效量的芳族阳离子肽来治疗或改善例如在罹患或易患上白癜风的受试者中存在的黑素细胞变性。
[0088] 虽然本文所述的芳族阳离子肽可以中性(非盐)肽形式存在和使用，但本说明书旨在涵盖本文所述的肽的所有盐，以及所述肽的这些盐的使用方法。在一个实施方案中，所述肽的盐包含药学上可接受的盐。药学上可接受的盐是可以药物或药剂形式施用至人类和/或动物并且在施用后保持游离化合物(中性化合物或非盐化合物)的至少一些生物活性的那些盐。碱性肽的所需盐可利用本领域技术人员已知的方法通过用酸处理所述化合物来制备。无机酸的实例包括(但不限于)盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。有机酸的实例包括(但不限于)甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、磺酸和水杨酸。还可以制备碱性肽与氨基酸的盐，例如天冬氨酸盐和谷氨酸盐。酸性肽的所需盐可利用本领域技术人员已知的方法通过用碱处理所述化合物来制备。酸性肽的无机盐的实例包括(但不限于)碱金属和碱土金属盐，例如钠盐、钾盐、镁盐和钙盐；铵盐；和铝盐。
[0089] 酸性肽的有机盐的实例包括(但不限于)普鲁卡因、二苄胺、N-乙基哌啶、N,N'-二苄基乙二胺和三乙胺盐。还可以制备酸性肽与氨基酸的盐，例如赖氨酸盐。本技术还包括肽的所有立体异构体和几何异构体，包括非对映异构体、对映异构体和顺式/反式(E/Z)异构体。本技术还包括呈任何比率的立体异构体和/或几何异构体的混合物，包括(但不限于)外消旋混合物。
[0090] 定义
[0091] 下文提供如本说明书中使用的某些术语的定义。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语通常具有与本技术所属领域的普通技术人员所通常理解相同的含义。
[0093] 如本文所用，对受试者“施用”药剂、药物或肽包括向受试者引入或递送化合物以执行其预期功能的任何途径。施用可通过任何合适的途径进行，包括经口、经鼻内、经肠胃外(经静脉内、经肌内、经腹膜内或经皮下)，或经局部。在一些实施方案中，所述芳族阳离子肽是通过冠状动脉内途径或动脉内途径施用的。施用包括自我施用和由另一个人施用。
[0094] 如本文所用，术语“氨基酸”用于指含有至少一个氨基和至少一个羧基的任何有机分子。通常，至少一个氨基在相对于羧基的α位。术语“氨基酸”包括天然存在的氨基酸和合成氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些，以及后来被修饰的那些氨基酸，例如，羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构的化合物，即，α-碳结合于氢、羧基、氨基和R基团，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这些类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构，但以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化学化合物。氨基酸在本文中可由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号提及。
[0095] 如本文所用，术语“有效量”是指足以达到所需的治疗和/或预防作用的量，例如，导致白癜风或与黑素细胞变性相关的一种或多种症状的预防或减少的量。在治疗性或预防性应用的上下文中，施用至受试者的组合物的量将取决于疾病的类型和严重程度以及个体的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和药物耐受性。它还将取决于疾病的程度、严重程度和类型。本领域技术人员将能够根据这些和其他因素来确定适当的剂量。所述组合物还可以与一种或多种另外的治疗性化合物组合施用。在本文所述的方法中，所述芳族阳离子肽可施用至具有黑素细胞变性的一种或多种体征或症状的受试者。例如，芳族阳离子肽的“治疗有效量”是指其中黑素细胞变性的生理作用在最低限度上被改善的水平。治疗有效量可以一次或多次施用给予。在一些实施方案中，白癜风的体征、症状或并发症包括(但不限于)光敏性增加，对二硝基氯苯的接触敏感性反应降低，皮肤、粘膜、视网膜或生殖器的色素脱失，和头皮上的毛发、睫毛、眉毛或胡须过早白化或灰化。
[0096] “分离的”或“纯化的”多肽或肽基本上不含来自产生所述药剂的细胞或组织源的细胞物质或其他污染多肽，或者当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。例如，分离的芳族阳离子肽将不含会干扰所述药剂的诊断或治疗用途的物质。这些干扰物质可包括酶、激素和其他蛋白质和非蛋白质溶质。
[0097] 如本文所用，术语“净电荷”是指由肽中存在的氨基酸携带的正电荷数和负电荷数的平衡。在本说明书中，应理解，净电荷是在生理pH下测量的。在生理pH下带正电荷的天然存在的氨基酸包括L-赖氨酸、L-精氨酸和L-组氨酸。在生理pH下带负电荷的天然存在的氨基酸包括L-天冬氨酸和L-谷氨酸。
[0098] 如本文所用，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，是指包含通过肽键或修饰的肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸的聚合物，即，肽等排体。多肽是指短链，通常被称为肽、糖肽或低聚物，以及较长链，通常被称为蛋白质。多肽可含有除20种基因编码氨基酸之外的氨基酸。多肽包括通过天然过程如翻译后加工或通过本领域中众所周知的化学修饰技术而修饰的氨基酸序列。
[0099] 如本文所用，病症或病状的“预防”是指在统计样本中，相对于对照样本降低了样本中的病症或病状的发生率，或者相对于对照样本延迟了病症或病状的发生或降低了病症或病状的一种或多种症状的严重程度的化合物。如本文所用，预防白癜风包括预防自身免疫反应，抑制与暴露于4-叔丁基苯酚相关的细胞毒性和细胞凋亡，或抑制毛发或表皮细胞的进行性色素脱失，从而预防或改善黑素细胞变性的有害作用。
[0100] 如本文所用，术语“单独的”治疗性使用是指在同一时间或在基本上同一时间通过不同途径施用至少两种活性成分。
[0101] 如本文所用，术语“连续的”治疗性使用是指在不同时间施用至少两种不同活性成分，施用途径是相同或不同的。更具体地，连续使用是指在另一种或其他的施用开始之前活性成分之一的整个施用。因此可在施用另一种或其他活性成分之前经若干分钟、小时或天来施用活性成分之一。在这种情况下不存在同时治疗。
[0102] 如本文所用，术语“同时的”治疗性使用是指通过相同途径并且在相同的时间或在基本上相同的时间施用至少两种活性成分。
[0103] 如本文所用，术语“受试者”、“个体”或“患者”可能是单独的生物体、脊椎动物、哺乳动物或人。
[0104] “协同治疗作用”是指由两种药剂的组合产生并且超过否则将由单独任一药剂的单独施用产生的治疗作用的大于加和性的治疗作用。因此，较低剂量的一种或两种药剂可用于治疗白癜风，从而产生增加的治疗功效和降低的副作用。
[0105] 如本文所用，术语“治疗”或“减轻”是指治疗性处理，其中目的是预防或减缓(减轻)靶向的病理状况或病症。如果在根据本文所述的方法接受治疗量的的芳族阳离子肽后，受试者显示可观测的和/或可测量的黑素细胞变性降低，则所述受试者被成功地“治疗”白癜风。此外，应理解，如所述的医学病状的各种治疗或预防模式旨在是指“实质性的”，其包括全部以及小于全部的治疗或预防，并且其中达到一些生物学或医学相关结果。
[0106] 白癜风的发病机制
[0107] 白癜风是一种色素沉着病症，其中黑素细胞(负责皮肤色素沉着的细胞)被破坏。因此，白色斑块出现在身体不同部位中的皮肤上。虽然斑块最初较小，但它们通常增大并改变形状。白癜风病灶可出现在任何地方，但最通常存在于肢端区域、粘膜(衬在口和鼻内部的组织)、视网膜和生殖器上。其他症状包括光敏性增加、对二硝基氯苯的接触敏感性反应降低，和在受白癜风影响的区域上生长的毛发过早白化或灰化。黑光可用于这种疾病的早期阶段以进行鉴别并确定治疗的有效性。具有白癜风的皮肤当暴露于黑光时将发出黄光、绿光或蓝光，而相比之下，健康的皮肤将没有反应。
[0108] 非节段型白癜风(NSV)与色素脱失斑块位置中的某种形式的对称相关。NSV的种类包括全身型白癜风、泛发型白癜风、肢端颜面型白癜风、粘膜型白癜风和局灶型白癜风。全身型白癜风(GV)(最常见的种类)影响到世界人口的约0.5％，平均发作年龄为约24岁并且在男性和女性中出现的频率大致相同。虽然无种族差异，但所述疾病对于具有较深肤色的个体可能更加明显并且因此在情感上令人痛苦。
[0109] 节段型白癜风(SV)在外观、病因和发病率上与NVS不同。SV倾向于影响与来自脊髓的背根相关的皮肤区域并且最通常是单侧的。SV相比于NSV的蔓延速度远远更快，并且在未经治疗的情况下，SV在过程中更稳定/静态并且不与自身免疫疾病相关。
[0110] 白癜风病灶具有炎性细胞、特别是细胞毒性和辅助T细胞和巨噬细胞的浸润。白癜风患者也更可能具有至少一种其他自身免疫疾病，包括桥本氏甲状腺炎、格雷夫斯病、恶性贫血、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病、阿狄森氏病、乳糜泻、炎性肠病和全身性红斑狼疮。此外，最近的GV全基因组关联研究已经鉴别出总共17种确定的GV易感基因座：NLRP1、TYR、I类HLA、II类HLA、III类HLA、PTPN22、XBP1、IL2RA、LPP、RERE、FOXP1、TSLP、CCR6、GZMB、UBASH3A、C1QTNF6和FOXP3。几乎所有的这些易感基因座都编码已知的免疫调节蛋白，并且许多与在流行病学上与GV有关的其他自身免疫疾病的遗传易感性相关。一种例外是TYR，其编码酪氨酸酶，这是在黑素细胞中的黑色素生物合成的关键酶和GV中的主要自身抗原。然而，GV中的自身免疫反应的特定触发物尚未被鉴别，因为自身抗原本身通常不产生有害的免疫反应。
[0111] 白癜风的确切病因是未知的。然而，流行病学证据表明，白癜风是一种同时涉及遗传倾向和未知的环境触发物的复杂疾病。约30％的患有白癜风的人拥有具有所述疾病的家族成员。然而，即使父母具有白癜风，也仅有5％到7％的儿童将患上白癜风，并且大多数具有白癜风的人不具有所述病症的家族史。因此，GV呈现非孟德尔式(non-Mendelian)模式，其表明多基因、多因子遗传。这些数据表明，遗传因素在确定一个人对白癜风的易感性方面相当重要。然而，双胞胎研究表明，虽然基因在疾病发病机制中起重要作用，但非遗传因素也一样重要(如果不是更重要的话)。虽然已经提出了GV的许多不同环境风险因素，但使黑素细胞消失或变得不起作用的确切机制仍然不清楚。
[0112] 本技术涉及通过施用如本文所公开的芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐来治疗或改善有需要的受试者中的黑素细胞变性。本技术涉及通过向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐来治疗、改善或预防哺乳动物中的白癜风。
[0113] 本技术的芳族阳离子肽
[0114] 本技术的芳族阳离子肽是水溶性并且高极性的。尽管有这些特性，但所述肽可以容易地穿透细胞膜。所述芳族阳离子肽通常包括通过肽键共价连接的最少三个氨基酸或最少四个氨基酸。芳族阳离子肽中存在的氨基酸的最大数目是通过肽键共价连接的约20个氨基酸。适宜地，氨基酸的最大数目是约12个、或约9个、或约6个。
[0115] 在一些方面，本技术提供芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。在一些实施方案中，所述肽包含至少一个净正电荷；最少三个氨基酸；最多约20个氨基酸；
[0116] 净正电荷的最小数目(pm)与氨基酸残基总数(r)之间的关系，其中3pm是小于或等于r+1的最大数目；和
[0117] 芳族基团的最小数目(a)与净正电荷总数(pt)之间的关系，其中2a是小于或等于pt+1的最大数目，不同之处在于当a是1时，pt也可以是1。
[0118] 在一些实施方案中，所述肽包含氨基酸序列Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2或D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH2。在一些实施方案中，所述肽包含表5(参见下文)的肽中的一种或多种：
[0119] 在一个实施方案中，所述芳族阳离子肽由式I限定。
[0120]
[0121] 其中R1和R2各自独立地选自
[0122] (i)氢；
[0123] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0124] (iii) 其中m＝1-3；
[0125] (iv)
[0126] (v)
[0127] R3和R4各自独立地选自
[0128] (i)氢；
[0129] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0130] (iii)C1-C6烷氧基；
[0131] (iv)氨基；
[0132] (v)C1-C4烷基氨基；
[0133] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0134] (vii)硝基；
[0135] (viii)羟基；
[0136] (ix)卤素，其中“卤素”涵盖氯、氟、溴和碘；
[0137] R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自
[0138] (i)氢；
[0139] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0140] (iii)C1-C6烷氧基；
[0141] (iv)氨基；
[0142] (v)C1-C4烷基氨基；
[0143] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0144] (vii)硝基；
[0145] (viii)羟基；
[0146] (ix)卤素，其中“卤素”涵盖氯、氟、溴和碘；并且
[0147] n是1至5的整数。
[0148] 在一个特定实施方案中，R1和R2是氢；R3和R4是甲基；R5、R6、R7、R8和R9都是氢；并且n是4。
[0149] 在一个实施方案中，所述肽由式II限定：
[0150]
[0151] 其中R1和R2各自独立地选自
[0152] (i)氢；
[0153] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0154] (iii) 其中m＝1-3；
[0155] (iv)
[0156] (v)
[0157] R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12各自独立地选自
[0158] (i)氢；
[0159] (ii)直链或支链的C1-C6烷基；
[0160] (iii)C1-C6烷氧基；
[0161] (iv)氨基；
[0162] (v)C1-C4烷基氨基；
[0163] (vi)C1-C4二烷基氨基；
[0164] (vii)硝基；
[0165] (viii)羟基；
[0166] (ix)卤素，其中“卤素”涵盖氯、氟、溴和碘；并且
[0167] n是1至5的整数。
[0168] 在一个特定实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12都是氢；并且n是4。在另一个实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R11都是氢；R8和R12是甲基；R10是羟基；并且n是4。
[0169] 在一个实施方案中，本技术的芳族阳离子肽具有交替的芳族和阳离子氨基酸的核心结构基序。例如，所述肽可为由下文阐述的式III至VI中的任一个限定的四肽：
[0170] 芳族–阳离子–芳族–阳离子(式III)
[0171] 阳离子–芳族–阳离子–芳族(式IV)
[0172] 芳族–芳族–阳离子–阳离子(式V)
[0173] 阳离子–阳离子–芳族–芳族(式VI)
[0174] 其中，芳族是选自以下的残基：Phe(F)、Tyr(Y)、Trp(W)和环己基丙氨酸(Cha)；并且阳离子是选自以下的残基：Arg(R)、Lys(K)、正亮氨酸(Nle)和2-氨基-庚酸(Ahe)。
[0175] 本文公开的肽可配制成药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指由可接受用于施用至患者如哺乳动物的碱或酸制备的盐(例如，对于给定的给药方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。然而，应理解，盐无需是药学上可接受的盐，例如不旨在用于施用至患者的中间化合物的盐。药学上可接受的盐可衍生自药学上可接受的无机或有机碱和衍生自药学上可接受的无机或有机酸。另外，当肽含有碱性部分如胺、吡啶或咪唑和酸性部分如羧酸或四唑时，可形成两性离子并且其包括在如本文所用的术语“盐”内。衍生自药学上可接受的无机碱的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐和锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括被取代的胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺等。衍生自药学上可接受的无机酸的盐包括硼酸、碳酸、氢卤酸(氢溴酸、盐酸、氢氟酸或氢碘酸)、硝酸、磷酸、氨基磺酸和硫酸的盐。衍生自药学上可接受的有机酸的盐包括脂族羟基酸(例如，柠檬酸、葡糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸和酒石酸)、脂族一元羧酸(例如，乙酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸)、氨基酸(例如，天冬氨酸和谷氨酸)、芳族羧酸(例如，苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯基乙酸、龙胆酸、马尿酸和三苯基乙酸)、芳族羟基酸(例如，邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-甲酸和3-羟基萘-2-甲酸)、抗坏血酸、二元羧酸(例如，富马酸、马来酸、草酸和琥珀酸)、葡萄糖醛酸、扁桃酸、粘酸、烟酸、乳清酸、扑酸、泛酸、磺酸(例如，苯磺酸、樟脑磺酸、乙二磺酸、乙磺酸、羟乙磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和对甲苯磺酸)、羟萘甲酸(xinafoic acid)等的盐。在一些实施方案中，所述盐是乙酸盐。另外或可选地，在一些实施方案中，所述盐是三氟乙酸盐。另外或可选地，在一些实施方案中，所述盐是酒石酸盐。
[0176] 本文公开的本技术的芳族阳离子肽可通过本领域中众所周知的任何方法来合成。适于化学合成所述蛋白质的方法包括例如液相和固相合成，以及由Stuart和Young在《固相肽合成(Solid Phase Peptide Synthesis)》,第二版,Pierce Chemical Company(1984)和在《酶学方法(Methods Enzymol.)》,289,Academic Press,Inc.,纽约(1997)中描述的那些方法。重组肽可分别使用分子生物学、蛋白生物化学、细胞生物学和微生物学中的常规技术产生，例如以下文献中所述的那些：《分子生物学现行规范(Current Protocols in Molecular Biology)》,第I-III卷,Ausubel编(1997)；Sambrook等《,分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》,第二版(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1989)《；DNA克隆：实践方法(DNA Cloning:A Practical Approach)》,第I和II卷,Glover编(1985)；《低聚核苷酸合成(Oligonucleotide
Synthesis)》,Gait编(1984)；《核酸杂交(Nucleic Acid Hybridization)》,Hames和Higgins编(1985)；《转录和翻译(Transcription and Translation)》,Hames和Higgins编(1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》,Freshney编(1986)；《固定化细胞和酶(Immobilized Cells and Enzymes)》(IRL Press,1986)；Perbal《, 分子克隆实践指南(A Practical Guide to Molecular Cloning)》；系列，《酶学方法(Meth.Enzymol.)》(Academic Press,Inc.,1984)；《用于哺乳动物细胞的基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)》,Miller和Calos编(Cold Spring Harbor Laboratory,NY,1987)；和《酶学方法(Meth.Enzymol.)》,第154和155卷,Wu和Grossman以及Wu编。
Synthesis)》,Gait编(1984)；《核酸杂交(Nucleic Acid Hybridization)》,Hames和Higgins编(1985)；《转录和翻译(Transcription and Translation)》,Hames和Higgins编(1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》,Freshney编(1986)；《固定化细胞和酶(Immobilized Cells and Enzymes)》(IRL Press,1986)；Perbal《, 分子克隆实践指南(A Practical Guide to Molecular Cloning)》；系列，《酶学方法(Meth.Enzymol.)》(Academic Press,Inc.,1984)；《用于哺乳动物细胞的基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)》,Miller和Calos编(Cold Spring Harbor Laboratory,NY,1987)；和《酶学方法(Meth.Enzymol.)》,第154和155卷,Wu和Grossman以及Wu编。
[0177] 芳族阳离子肽前体可通过本领域中已知的化学(例如，使用溶液和固相化学肽合成)或重组合成制得。例如本技术的酰胺化的芳族阳离子肽的前体可以类似方式制得。在一些实施方案中，重组产生被认为具有显著更大成本效益。在一些实施方案中，通过本领域中此外已知的酰胺化反应将前体转化成活性肽。例如，酶促酰胺化描述于美国专利No.4,708,934和欧洲专利公开0 308 067和0 382 403中。重组产生可用于前体和催化所述前体转化成芳族阳离子肽的所需活性形式的酶。这种重组产生在《生物技术(Biotechnology)》,第11卷(1993)第64-70页中得到讨论，所述文献还描述了前体向酰胺化产物的转化。在酰胺化期间，可使用酮酸如α-酮酸或其盐或酯(其中所述α-酮酸具有分子结构RC(O)C(O)OH，并且其中R选自芳基、C1-C4烃部分、卤化或羟基化C1-C4烃部分和C1-C4羧酸)来代替过氧化氢酶辅因子。这些酮酸的实例包括(但不限于)丙酮酸乙酯、丙酮酸和其盐，丙酮酸甲酯、苯甲酰甲酸和其盐，2-酮丁酸和其盐，3-甲基-2-氧代丁酸和其盐，以及2-酮戊二酸和其盐。
[0178] 在一些实施方案中，可例如通过在大肠杆菌中以与谷胱甘肽-S-转移酶的可溶性融合蛋白形式产生甘氨酸延伸前体来进行重组芳族阳离子肽的产生。α-酰胺化酶催化前体转化为活性芳族阳离子肽。所述酶是如上文引用的生物技术文章中所述，例如在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中重组产生的。其他酰胺化肽的其他前体可以类似方式产生。无需酰胺化或其他另外的官能团的肽也可以类似方式产生。其他肽活性剂可购得或者可通过本领域中已知的技术产生。
[0179] 所述肽任选地含有一个或多个非天然存在的氨基酸。最佳地，所述肽不具有天然存在的氨基酸。所述非天然存在的氨基酸可为左旋(L-)、右旋(D-)或其混合物。非天然存在的氨基酸是通常不在活生物体中的正常代谢过程中合成并且不天然存在于蛋白质中的那些氨基酸。此外，所述非天然存在的氨基酸适宜地也不会由共同的蛋白酶识别。所述非天然存在的氨基酸可存在于肽中的任何位置。例如，所述非天然存在的氨基酸可在N端、C端，或在N端与C端之间的任何位置。
[0180] 所述非天然氨基酸可例如包含天然氨基酸中不存在的烷基、芳基或烷基芳基基团。非天然烷基氨基酸的一些实例包括α-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸和ε-氨基己酸。非天然芳基氨基酸的一些实例包括邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸和对氨基苯甲酸。非天然烷基芳基氨基酸的一些实例包括邻氨基苯基乙酸、间氨基苯基乙酸和对氨基苯基乙酸，和γ-苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨基酸包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍生物可例如包括将一个或多个化学基团加成至天然存在的氨基酸。
[0181] 例如，一个或多个化学基团可加成至苯丙氨酸或酪氨酸残基的芳环的2'、3'、4'、5'或6'位或者色氨酸残基的苯环的4'、5'、6'或7'位中的一个或多个。所述基团可以是可加成到芳环上的任何化学基团。这些基团的一些实例包括支链或无支链的C1-C4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基、C1-C4烷氧基(即，烷氧基)、氨基、C1-C4烷基氨基和C1-C4二烷基氨基(例如，甲基氨基、二甲基氨基)、硝基、羟基、卤基(即，氟、氯、溴或碘)。天然存在氨基酸的非天然存在衍生物的一些具体实例包括正缬氨酸(Nva)和正亮氨酸(Nle)。
[0182] 肽中的氨基酸的修饰的另一个实例是所述肽的天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基的衍生化。衍生化的一个实例是用氨或用伯胺或仲胺、例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺进行酰胺化。衍生化的另一个实例包括用例如甲醇或乙醇进行酯化。另一种这样的修饰包括赖氨酸、精氨酸或组氨酸残基的氨基的衍生化。例如，这些氨基可被酰化。一些合适的酰基包括例如苯甲酰基或包含任何上述C1-C4烷基的烷酰基，例如乙酰基或丙酰基。
[0183] 所述非天然存在的氨基酸适宜地抵抗常见蛋白酶或对常见蛋白酶不敏感。抵抗蛋白酶或对蛋白酶不敏感的非天然存在氨基酸的实例包括任何上述天然存在的L-氨基酸的右旋(D-)形式以及L-和/或D-非天然存在氨基酸。所述D-氨基酸通常不存在于蛋白质中，但它们存在于通过除细胞的正常核糖体蛋白质合成机制之外的方式合成的某些肽抗生素中。如本文所用，所述D-氨基酸被视为非天然存在的氨基酸。
[0184] 为了最小化蛋白酶敏感性，所述肽应具有少于五个、或少于四个、或少于三个、或少于两个由常见蛋白酶识别的连续L-氨基酸，而不论所述氨基酸是天然存在的还是非天然存在的。最佳地，所述肽仅具有D-氨基酸，而无L-氨基酸。如果所述肽含有氨基酸的蛋白酶敏感序列，则所述氨基酸中的至少一个是非天然存在的D-氨基酸，从而赋予蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的一个实例包括容易通过常见蛋白酶如内肽酶和胰蛋白酶裂解的两个或更多个连续碱性氨基酸。碱性氨基酸的实例包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
[0185] 所述芳族阳离子肽应具有相比于肽中的氨基酸残基总数在生理pH下最小数目的净正电荷。在生理pH下净正电荷的最小数目在下文将被称为(pm)。肽中的氨基酸残基总数在下文将被称为(r)。下文讨论的净正电荷的最小数目都是在生理pH下。如本文所用的术语“生理pH”是指哺乳动物身体的组织和器官的细胞中的正常pH。例如，人类的生理pH通常是约7.4，但哺乳动物中的正常生理pH可为约7.0至约7.8的任何pH。
[0186] 通常，肽具有带正电荷的N端氨基和带负电荷的C端羧基。所述电荷在生理pH下相互抵消。作为计算净电荷的一个实例，肽Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg具有一个带负电荷的氨基酸(即，Glu)和四个带正电荷的氨基酸(即，两个Arg残基、一个Lys和一个His)。因此，上述肽具有三个净正电荷。
[0187] 在一个实施方案中，所述芳族阳离子肽具有在生理pH下的净正电荷最小数目(pm)与氨基酸残基总数(r)之间的关系，其中3pm是小于或等于r+1的最大数目。在这个实施方案中，净正电荷最小数目(pm)与氨基酸残基总数(r)之间的关系如下：
[0188]
[0189] 在另一个实施方案中，所述芳族阳离子肽具有净正电荷的最小数目(pm)与氨基酸残基总数(r)之间的关系，其中2pm是小于或等于r+1的最大数目。在这个实施方案中，净正电荷最小数目(pm)与氨基酸残基总数(r)之间的关系如下：
[0190]
[0191] 在一个实施方案中，净正电荷的最小数目(pm)与氨基酸残基总数(r)相同。在另一个实施方案中，所述肽具有三个或四个氨基酸残基和最少一个净正电荷、或最少两个净正电荷、或最少三个净正电荷。
[0192] 此外重要的是，所述芳族阳离子肽具有相比于净正电荷总数(pt)为最小数目的芳族基团。所述芳族基团的最小数目在下文将被称为(a)。具有芳族基团的天然存在的氨基酸包括氨基酸组氨酸、色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。例如，六肽Lys-Gln-Tyr-D-Arg-Phe-Trp具有两个净正电荷(由赖氨酸和精氨酸残基贡献)和三个芳族基团(由酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基贡献)。
[0193] 所述芳族阳离子肽还应具有芳族基团的最小数目(a)与在生理pH下的净正电荷总数(pt)之间的关系，其中3a是小于或等于pt+1的最大数目，不同之处在于当pt是1时，a也可以是1。在这个实施方案中，芳族基团的最小数目(a)与净正电荷总数(pt)之间的关系如下：
[0194]
[0195] 在另一个实施方案中，所述芳族阳离子肽具有芳族基团的最小数目(a)与净正电荷总数(pt)之间的关系，其中2a是小于或等于pt+1的最大数目。在这个实施方案中，芳族氨基酸残基的最小数目(a)与净正电荷总数(pt)之间的关系如下：
[0196]
[0197] 在另一个实施方案中，芳族基团数目(a)和净正电荷总数(pt)相同。
[0198] 羧基、特别是C端氨基酸的末端羧基适宜地用例如氨酰胺化以形成C端酰胺。可选地，所述C端氨基酸的末端羧基可用任何伯胺或仲胺酰胺化。所述伯胺或仲胺可例如是烷基、特别是支链或无支链的C1-C4烷基、或芳基胺。因此，肽的C端的氨基酸可被转化成酰氨基、N-甲基酰氨基、N-乙基酰氨基、N,N-二甲基酰氨基、N,N-二乙基酰氨基、N-甲基-N-乙基酰氨基、N-苯基酰氨基或N-苯基-N-乙基酰氨基。不存在于芳族阳离子肽的C端的天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸和谷氨酸残基的游离羧酸酯基团也可以被酰胺化，而无论它们存在于肽内哪个地方。这些内部位置处的酰胺化可以是用氨或任何上述伯胺或仲胺。
[0199] 在一个实施方案中，所述芳族阳离子肽是具有两个净正电荷和至少一个芳族氨基酸的三肽。在一个特定实施方案中，所述芳族阳离子肽是具有两个净正电荷和两个芳族氨基酸的三肽。
[0200] 芳族阳离子肽包括(但不限于)以下肽实例：
[0201]表5.示例性芳族阳离子肽
D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Phe-Lys-Dmt-D-Arg-NH2
2',6'-Dmp-D-Arg-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Phe-Lys-Dmt-NH2
D-Arg-Phe-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Lys-Dmt-Phe-NH2
D-Arg-Lys-Phe-Dmt-NH2
Phe-Lys-D-Arg-Dmt-NH2
Phe-D-Arg-Lys-Dmt-NH2
Phe-Dmt-D-Arg-Lys-NH2
Phe-Dmt-Lys-D-Arg-NH2
Lys-Phe-Dmt-D-Arg-NH2
Lys-Dmt-D-Arg-Phe-NH2
Lys-Dmt-Phe-D-Arg-NH2
Lys-D-Arg-Phe-Dmt-NH2
Lys-D-Arg-Dmt-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Dmt-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Tyr-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Trp-NH2
Trp-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Trp-D-Arg-Tyr-Lys-NH2
Trp-D-Arg-Trp-Lys-NH2
Trp-D-Arg-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Trp-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Trp-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Trp-Lys-Dmt-NH2
D-Arg-Trp-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Lys-Trp-Phe-NH2
D-Arg-Lys-Trp-Dmt-NH2
Cha-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Ala-D-Arg-Phe-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-NH2
Lys-D-Arg-Tyr-NH2
Phe-D-Arg-His
D-Tyr-Trp-Lys-NH2
Trp-D-Lys-Tyr-Arg-NH2
Tyr-His-D-Gly-Met
Phe-Arg-D-His-Asp
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-Glu-NH2
Met-Tyr-D-Lys-Phe-Arg
D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Phe-Lys-Dmt-D-Arg-NH2
2',6'-Dmp-D-Arg-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Phe-Lys-Dmt-NH2
D-Arg-Phe-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Lys-Dmt-Phe-NH2
D-Arg-Lys-Phe-Dmt-NH2
Phe-Lys-D-Arg-Dmt-NH2
Phe-D-Arg-Lys-Dmt-NH2
Phe-Dmt-D-Arg-Lys-NH2
Phe-Dmt-Lys-D-Arg-NH2
Lys-Phe-Dmt-D-Arg-NH2
Lys-Dmt-D-Arg-Phe-NH2
Lys-Dmt-Phe-D-Arg-NH2
Lys-D-Arg-Phe-Dmt-NH2
Lys-D-Arg-Dmt-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Dmt-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Tyr-NH2
D-Arg-Dmt-D-Arg-Trp-NH2
Trp-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Trp-D-Arg-Tyr-Lys-NH2
Trp-D-Arg-Trp-Lys-NH2
Trp-D-Arg-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Trp-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Trp-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Trp-Lys-Dmt-NH2
D-Arg-Trp-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Lys-Trp-Phe-NH2
D-Arg-Lys-Trp-Dmt-NH2
Cha-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Ala-D-Arg-Phe-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-NH2
Lys-D-Arg-Tyr-NH2
Phe-D-Arg-His
D-Tyr-Trp-Lys-NH2
Trp-D-Lys-Tyr-Arg-NH2
Tyr-His-D-Gly-Met
Phe-Arg-D-His-Asp
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-Glu-NH2
Met-Tyr-D-Lys-Phe-Arg
[0202]表5.示例性芳族阳离子肽
D-His-Glu-Lys-Tyr-D-Phe-Arg
Lys-D-Gln-Tyr-Arg-D-Phe-Trp-NH2
Phe-D-Arg-Lys-Trp-Tyr-D-Arg-His
Gly-D-Phe-Lys-Tyr-His-D-Arg-Tyr-NH2
Val-D-Lys-His-Tyr-D-Phe-Ser-Tyr-Arg-NH2
Trp-Lys-Phe-D-Asp-Arg-Tyr-D-His-Lys
Lys-Trp-D-Tyr-Arg-Asn-Phe-Tyr-D-His-NH2
Thr-Gly-Tyr-Arg-D-His-Phe-Trp-D-His-Lys
Asp-D-Trp-Lys-Tyr-D-His-Phe-Arg-D-Gly-Lys-NH2
D-His-Lys-Tyr-D-Phe-Glu-D-Asp-D-His-D-Lys-Arg-Trp-NH2
Ala-D-Phe-D-Arg-Tyr-Lys-D-Trp-His-D-Tyr-Gly-Phe
Tyr-D-His-Phe-D-Arg-Asp-Lys-D-Arg-His-Trp-D-His-Phe
Phe-Phe-D-Tyr-Arg-Glu-Asp-D-Lys-Arg-D-Arg-His-Phe-NH2
Phe-Try-Lys-D-Arg-Trp-His-D-Lys-D-Lys-Glu-Arg-D-Tyr-Thr
Tyr-Asp-D-Lys-Tyr-Phe-D-Lys-D-Arg-Phe-Pro-D-Tyr-His-Lys
Glu-Arg-D-Lys-Tyr-D-Val-Phe-D-His-Trp-Arg-D-Gly-Tyr-Arg-D-Met-NH2
Arg-D-Leu-D-Tyr-Phe-Lys-Glu-D-Lys-Arg-D-Trp-Lys-D-Phe-Tyr-D-Arg-Gly
D-Glu-Asp-Lys-D-Arg-D-His-Phe-Phe-D-Val-Tyr-Arg-Tyr-D-Tyr-Arg-His-Phe-NH2Asp-Arg-D-Phe-Cys-Phe-D-Arg-D-Lys-Tyr-Arg-D-Tyr-Trp-D-His-Tyr-D-Phe-Lys-PheHis-Tyr-D-Arg-Trp-Lys-Phe-D-Asp-Ala-Arg-Cys-D-Tyr-His-Phe-D-Lys-Tyr-His-Ser-NH2Gly-Ala-Lys-Phe-D-Lys-Glu-Arg-Tyr-His-D-Arg-D-Arg-Asp-Tyr-Trp-D-His-Trp-His-D-Lys-AspThr-Tyr-Arg-D-Lys-Trp-Tyr-Glu-Asp-D-Lys-D-Arg-His-Phe-D-Tyr-Gly-Val-Ile-D-His-Arg-Tyr-Lys-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-Arg
Lys-Gln-Tyr-Arg-Phe-Trp
Dmt-D-Arg-Phe-A2bu-NH2
Dmt-D-Arg-Phe(p-F)-Lys-NH2
Dmt(NMe)-D-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe(d5)-Gly-ol
H-Tyr-D-Arg-Phe(d5)-Lys-NH2
H-Dmt-D-Arg-Phe(d5)Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Ald-NH2
D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH(CH2)2-NH-dns-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH(CH2)2-NH-atn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-dnsLys-NH2
2',6'-Dmt-D-Cit-Phe-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Cit-Phe-Ahp-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
2'6-'Dmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Ahp(2-氨基庚酸)-NH2
Bio-2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Tyr-D-Arg-Tyr-Lys-NH2
Tyr-D-Arg-Tyr-Orn-NH2
D-His-Glu-Lys-Tyr-D-Phe-Arg
Lys-D-Gln-Tyr-Arg-D-Phe-Trp-NH2
Phe-D-Arg-Lys-Trp-Tyr-D-Arg-His
Gly-D-Phe-Lys-Tyr-His-D-Arg-Tyr-NH2
Val-D-Lys-His-Tyr-D-Phe-Ser-Tyr-Arg-NH2
Trp-Lys-Phe-D-Asp-Arg-Tyr-D-His-Lys
Lys-Trp-D-Tyr-Arg-Asn-Phe-Tyr-D-His-NH2
Thr-Gly-Tyr-Arg-D-His-Phe-Trp-D-His-Lys
Asp-D-Trp-Lys-Tyr-D-His-Phe-Arg-D-Gly-Lys-NH2
D-His-Lys-Tyr-D-Phe-Glu-D-Asp-D-His-D-Lys-Arg-Trp-NH2
Ala-D-Phe-D-Arg-Tyr-Lys-D-Trp-His-D-Tyr-Gly-Phe
Tyr-D-His-Phe-D-Arg-Asp-Lys-D-Arg-His-Trp-D-His-Phe
Phe-Phe-D-Tyr-Arg-Glu-Asp-D-Lys-Arg-D-Arg-His-Phe-NH2
Phe-Try-Lys-D-Arg-Trp-His-D-Lys-D-Lys-Glu-Arg-D-Tyr-Thr
Tyr-Asp-D-Lys-Tyr-Phe-D-Lys-D-Arg-Phe-Pro-D-Tyr-His-Lys
Glu-Arg-D-Lys-Tyr-D-Val-Phe-D-His-Trp-Arg-D-Gly-Tyr-Arg-D-Met-NH2
Arg-D-Leu-D-Tyr-Phe-Lys-Glu-D-Lys-Arg-D-Trp-Lys-D-Phe-Tyr-D-Arg-Gly
D-Glu-Asp-Lys-D-Arg-D-His-Phe-Phe-D-Val-Tyr-Arg-Tyr-D-Tyr-Arg-His-Phe-NH2Asp-Arg-D-Phe-Cys-Phe-D-Arg-D-Lys-Tyr-Arg-D-Tyr-Trp-D-His-Tyr-D-Phe-Lys-PheHis-Tyr-D-Arg-Trp-Lys-Phe-D-Asp-Ala-Arg-Cys-D-Tyr-His-Phe-D-Lys-Tyr-His-Ser-NH2Gly-Ala-Lys-Phe-D-Lys-Glu-Arg-Tyr-His-D-Arg-D-Arg-Asp-Tyr-Trp-D-His-Trp-His-D-Lys-AspThr-Tyr-Arg-D-Lys-Trp-Tyr-Glu-Asp-D-Lys-D-Arg-His-Phe-D-Tyr-Gly-Val-Ile-D-His-Arg-Tyr-Lys-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-Arg
Lys-Gln-Tyr-Arg-Phe-Trp
Dmt-D-Arg-Phe-A2bu-NH2
Dmt-D-Arg-Phe(p-F)-Lys-NH2
Dmt(NMe)-D-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe(d5)-Gly-ol
H-Tyr-D-Arg-Phe(d5)-Lys-NH2
H-Dmt-D-Arg-Phe(d5)Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Ald-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Ald-NH2
D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH(CH2)2-NH-dns-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH(CH2)2-NH-atn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-dnsLys-NH2
2',6'-Dmt-D-Cit-Phe-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Cit-Phe-Ahp-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
2'6-'Dmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Ahp(2-氨基庚酸)-NH2
Bio-2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Tyr-D-Arg-Tyr-Lys-NH2
Tyr-D-Arg-Tyr-Orn-NH2
[0203]表5.示例性芳族阳离子肽
Tyr-D-Arg-Tyr-Dab-NH2
Tyr-D-Arg-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Dap-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Dab-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Lys-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Orn-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Dab-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-dnsDap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-atnDap-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Dab-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Dap-NH2
Tyr-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Dap-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Arg-NH2
Tyr-D-Arg-Tyr-Dab-NH2
Tyr-D-Arg-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Dap-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-3',5'-Dmt-Dab-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Lys-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Orn-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Dab-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-Tyr-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Lys-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Orn-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Dab-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Dap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-dnsDap-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-atnDap-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Lys-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Orn-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Dab-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Dap-NH2
Tyr-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Dap-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Tyr-D-Lys-Tyr-Arg-NH2
[0204]表5.示例性芳族阳离子肽
Tyr-D-Orn-Tyr-Arg-NH2
Tyr-D-Dab-TyrArg-NH2
Tyr-D-Dap-Tyr-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Orn-2',6'-Dmt-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Dab-2',6'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Dap-3',5'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Orn-3',5'-Dmt-Arg-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
Lys-Phe-D-Arg-Dmt-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-Cys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Cys-NH2
2',6'-Dmt-D-Cit-Phe-Lys-Cys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Cys-NH2
Tyr-D-Orn-Tyr-Arg-NH2
Tyr-D-Dab-TyrArg-NH2
Tyr-D-Dap-Tyr-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Lys-2',6'-Dmt-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Orn-2',6'-Dmt-Arg-NH2
2',6'-Dmt-D-Dab-2',6'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Dap-3',5'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-3',5'-Dmt-Arg-NH2
3',5'-Dmt-D-Orn-3',5'-Dmt-Arg-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Orn-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Dab-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Dap-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Mmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Tmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Lys-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Orn-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Dab-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Dap-NH2
Hmt-D-Lys-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
Mmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
Tmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Orn-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Dab-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Dap-Phe-Arg-NH2
Hmt-D-Arg-Phe-Arg-NH2
Lys-Phe-D-Arg-Dmt-NH2
Tyr-D-Arg-Phe-Lys-Cys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-Cys-NH2
2',6'-Dmt-D-Cit-Phe-Lys-Cys-NH2
2',6'-Dmt-D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Cys-NH2
[0205]表5.示例性芳族阳离子肽
Tyr-D-Lys-Phe-Arg-Cys-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Arg-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Glu-Cys-Gly-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Ser-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Gly-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Ser-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Gly-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Glu-Cys-Gly-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Ser-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Gly-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Trp-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Met-NH2
D-Arg-Dmt-Lys(NαMe)-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe(NMe)-NH2
D-Arg-Dmt-Lys(NαMe)-Phe(NMe)-NH2
α α
D-Arg(NMe)-Dmt-(NMe)-Lys(NMe)-Phe(NMe)-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Dmt-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Lys-Met-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Dmt-Lys-Met-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Sar-Gly-Cys-NH2
D-Arg-Ψ[CH2-NH]Dmt-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Ψ[CH2-NH]Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-LysΨ[CH2-NH]Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Ψ[CH2-NH]Lys-Ψ[CH2-NH]Phe-NH2
Phe-D-Arg Phe-Lys-Cys-NH2
d5-D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2
Met-Tyr-D-Arg-Phe-Arg-NH2
D-Arg-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Phe-D-Arg-D-Phe-Lys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-D-Lys-NH2
D-Phe-D-Arg-D-Phe-D-Lys-NH2
Lys-D-Phe-Arg-Dmt-NH2
D-Arg-Arg-Dmt-Phe-NH2
Dmt-D-Phe-Arg-Lys-NH2
Phe-D-Dmt-Arg-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-NH2
Arg-D-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Phe-NH2
Arg-D-Dmt-Arg-NH2
Dmt-D-Arg-NH2
D-Arg-Dmt-NH2
D-Dmt-Arg-NH2
Arg-D-Dmt-NH2
D-Arg-D-Dmt-NH2
D-Arg-D-Tyr-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Tyr-D-Lys-Phe-NH2
Tyr-D-Lys-Phe-Arg-Cys-NH2
3',5'-Dmt-D-Lys-Phe-Arg-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Glu-Cys-Gly-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Ser-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Gly-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Ser-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-Lys-Gly-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Glu-Cys-Gly-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Ser-Cys-NH2
Phe-D-Arg-Dmt-Lys-Gly-Cys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Trp-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Met-NH2
D-Arg-Dmt-Lys(NαMe)-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe(NMe)-NH2
D-Arg-Dmt-Lys(NαMe)-Phe(NMe)-NH2
α α
D-Arg(NMe)-Dmt-(NMe)-Lys(NMe)-Phe(NMe)-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Dmt-Lys-Trp-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Lys-Met-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Dmt-Lys-Met-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Sar-Gly-Cys-NH2
D-Arg-Ψ[CH2-NH]Dmt-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Ψ[CH2-NH]Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-LysΨ[CH2-NH]Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Ψ[CH2-NH]Lys-Ψ[CH2-NH]Phe-NH2
Phe-D-Arg Phe-Lys-Cys-NH2
d5-D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2
Met-Tyr-D-Arg-Phe-Arg-NH2
D-Arg-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Phe-D-Arg-D-Phe-Lys-NH2
Phe-D-Arg-Phe-D-Lys-NH2
D-Phe-D-Arg-D-Phe-D-Lys-NH2
Lys-D-Phe-Arg-Dmt-NH2
D-Arg-Arg-Dmt-Phe-NH2
Dmt-D-Phe-Arg-Lys-NH2
Phe-D-Dmt-Arg-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-NH2
Arg-D-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Phe-NH2
Arg-D-Dmt-Arg-NH2
Dmt-D-Arg-NH2
D-Arg-Dmt-NH2
D-Dmt-Arg-NH2
Arg-D-Dmt-NH2
D-Arg-D-Dmt-NH2
D-Arg-D-Tyr-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Tyr-D-Lys-Phe-NH2
[0206]表5.示例性芳族阳离子肽
D-Arg-Tyr-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-D-Tyr-D-Lys-D-Phe-NH2
Lys-D-Phe-Arg-Tyr-NH2
D-Arg-Arg-Tyr-Phe-NH2
Tyr-D-Phe-Arg-Lys-NH2
Phe-D-Tyr-Arg-Lys-NH2
D-Arg-Tyr-Lys-NH2
Arg-D-Tyr-Lys-NH2
D-Arg-Tyr-Phe-NH2
Arg-D-Tyr-Arg-NH2
Tyr-D-Arg-NH2
D-Arg-Tyr-NH2
D-Tyr-Arg-NH2
Arg-D-Tyr-NH2
D-Arg-D-Tyr-NH2
Dmt-Lys-Phe-NH2
Lys-Dmt-D-Arg-NH2
Phe-Lys-Dmt-NH2
D-Arg-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Cha-Lys-NH2
D-Arg-Trp-Lys-NH2
Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Dmt-Lys-NH2
Lys-Phe-NH2
D-Arg-Cha-Lys-Cha-NH2
D-Nle-Dmt-Ahe-Phe-NH2
D-Nle-Cha-Ahe-Cha-NH2
6-丁酸CoQ0-Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
6-癸酸CoQ0-Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Arg-Arg-Dmt-Phe
Arg-Cha-Lys
Arg-Dmt
Arg-Dmt-Arg
Arg-Dmt-Lys
Arg-Dmt-Lys-Phe
Arg-Dmt-Lys-Phe-Cys
Arg-Dmt-Phe
Arg-Dmt-Phe-Lys
Arg-Lys-Dmt-Phe
Arg-Lys-Phe-Dmt
Arg-Phe-Dmt-Lys
Arg-Phe-Lys
Arg-Trp-Lys
Arg-Tyr-Lys
Arg-Tyr-Lys-Phe
D-Arg-D-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-D-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
D-Arg-D-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-D-Dmt-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-D-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Cys
D-Arg-Tyr-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-D-Tyr-D-Lys-D-Phe-NH2
Lys-D-Phe-Arg-Tyr-NH2
D-Arg-Arg-Tyr-Phe-NH2
Tyr-D-Phe-Arg-Lys-NH2
Phe-D-Tyr-Arg-Lys-NH2
D-Arg-Tyr-Lys-NH2
Arg-D-Tyr-Lys-NH2
D-Arg-Tyr-Phe-NH2
Arg-D-Tyr-Arg-NH2
Tyr-D-Arg-NH2
D-Arg-Tyr-NH2
D-Tyr-Arg-NH2
Arg-D-Tyr-NH2
D-Arg-D-Tyr-NH2
Dmt-Lys-Phe-NH2
Lys-Dmt-D-Arg-NH2
Phe-Lys-Dmt-NH2
D-Arg-Phe-Lys-NH2
D-Arg-Cha-Lys-NH2
D-Arg-Trp-Lys-NH2
Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Dmt-Lys-NH2
Lys-Phe-NH2
D-Arg-Cha-Lys-Cha-NH2
D-Nle-Dmt-Ahe-Phe-NH2
D-Nle-Cha-Ahe-Cha-NH2
6-丁酸CoQ0-Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
6-癸酸CoQ0-Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
Arg-Arg-Dmt-Phe
Arg-Cha-Lys
Arg-Dmt
Arg-Dmt-Arg
Arg-Dmt-Lys
Arg-Dmt-Lys-Phe
Arg-Dmt-Lys-Phe-Cys
Arg-Dmt-Phe
Arg-Dmt-Phe-Lys
Arg-Lys-Dmt-Phe
Arg-Lys-Phe-Dmt
Arg-Phe-Dmt-Lys
Arg-Phe-Lys
Arg-Trp-Lys
Arg-Tyr-Lys
Arg-Tyr-Lys-Phe
D-Arg-D-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-D-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
D-Arg-D-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-D-Dmt-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-D-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Phe-Cys
[0207]表5.示例性芳族阳离子肽
D-Arg-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Dmt-Arg
Dmt-Lys
Dmt-Lys-Phe
Dmt-Phe-Arg-Lys
H-Arg-D-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氯-L-酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氯酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氟-L-酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氟酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二甲基-L-苯丙氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二甲基苯丙氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-4-甲氧基-2,6-二甲基-L-酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-4-甲氧基-2,6-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Arg-Dmt-Phe-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-2,6-二甲基苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-3-羟基苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-OH
H-D-Arg-Dmt-Lys-Phe-OH
H-D-Arg-Dmt-N6-乙酰基赖氨酸-Phe-NH2
H-D-Arg-Dmt-OH
H-D-Arg-D-Phe-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-D-Trp-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-2,6-二甲基-L-苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-3-羟基-L-苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-D-Dmt-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-D-Trp-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-D-Tyr-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-Dmt-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-Tyr-NH2
H-D-Arg-Dmt-N6-乙酰基-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Lys-Phe-Dmt-NH2
H-D-Arg-Phe-Lys-Dmt-NH2
H-D-Arg-Phe-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2
H-D-His-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-D-Lys-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-D-Arg-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Dmt-D-Phe-Arg-Lys-NH2
H-Dmt-Lys-D-Arg-Phe-NH2
H-Dmt-Lys-Phe-D-Arg-NH2
H-Dmt-Phe-D-Arg-Lys-NH2
H-Dmt-Phe-Lys-D-Arg-NH2
H-D-N2-乙酰基精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-D-N8-乙酰基精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-D-Arg-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-Lys-D-Arg-Phe-NH2
H-His-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Lys-D-Arg-Dmt-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Dmt-Arg
Dmt-Lys
Dmt-Lys-Phe
Dmt-Phe-Arg-Lys
H-Arg-D-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氯-L-酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氯酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氟-L-酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二氟酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二甲基-L-苯丙氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-2,6-二甲基苯丙氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-4-甲氧基-2,6-二甲基-L-酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-4-甲氧基-2,6-二甲基酪氨酸-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Arg-Dmt-Phe-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-2,6-二甲基苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-3-羟基苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-OH
H-D-Arg-Dmt-Lys-Phe-OH
H-D-Arg-Dmt-N6-乙酰基赖氨酸-Phe-NH2
H-D-Arg-Dmt-OH
H-D-Arg-D-Phe-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-D-Trp-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-2,6-二甲基-L-苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-3-羟基-L-苯丙氨酸-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-D-Dmt-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-D-Trp-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-D-Tyr-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-Dmt-NH2
H-D-Arg-Dmt-Lys-Tyr-NH2
H-D-Arg-Dmt-N6-乙酰基-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Lys-Phe-Dmt-NH2
H-D-Arg-Phe-Lys-Dmt-NH2
H-D-Arg-Phe-Lys-Phe-NH2
H-D-Arg-Tyr-Lys-Phe-NH2
H-D-His-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-D-Lys-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-D-Arg-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Dmt-D-Phe-Arg-Lys-NH2
H-Dmt-Lys-D-Arg-Phe-NH2
H-Dmt-Lys-Phe-D-Arg-NH2
H-Dmt-Phe-D-Arg-Lys-NH2
H-Dmt-Phe-Lys-D-Arg-NH2
H-D-N2-乙酰基精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-D-N8-乙酰基精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-D-Arg-Lys-Phe-NH2
H-Dmt-Lys-D-Arg-Phe-NH2
H-His-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Lys-D-Arg-Dmt-Phe-NH2
[0208]表5.示例性芳族阳离子肽
H-Lys-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Phe-D-Arg-Dmt-Lys-NH2
H-Phe-D-Arg-Lys-Dmt-NH2
H-Phe-Dmt-D-Arg-Lys-NH2
H-Phe-Dmt-Lys-D-Arg-NH2
H-Phe-Lys-Dmt-D-Arg-NH2
H-N2-乙酰基-D-精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-N7-乙酰基-D-精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Phe(d5)-D-Arg-Phe(d5)-Lys-NH2
H-Phe-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Phe-D-Arg-Phe-D-Lys-NH2
H-Phe-D-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly-NH2
Arg-D-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
Arg-D-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
Arg-D-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Arg-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
Arg-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
Arg-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Lys-Dmt-Arf
Lys-Phe
Lys-Phe-Arg-Dmt
Lys-Trp-Arg
Lys-Trp-D-Arg-NH2
Phe-Arg-Dmt-Lys
Phe-Arg-Phe-Lys
Phe-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly
Phe-Dmt-Arg-Lys
Phe-Lys-Dmt
琥珀酸单酯CoQ0-Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Phe(d5)-D-Arg-Phe(d5)-Lys-NH2
D-Arg-D-Tyr-D-Lys-D-Phe-NH2(P-231D)
Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg
Lys-Gln-Tyr-D-Arg-Phe-Trp
Dox-Succ-D-Arg-L-2',6'-二甲基-Tyr-L-Lys(Dox-Succ)-L-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Dox-Phe-NH-Dox
H-Lys-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Phe-D-Arg-Dmt-Lys-NH2
H-Phe-D-Arg-Lys-Dmt-NH2
H-Phe-Dmt-D-Arg-Lys-NH2
H-Phe-Dmt-Lys-D-Arg-NH2
H-Phe-Lys-Dmt-D-Arg-NH2
H-N2-乙酰基-D-精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-N7-乙酰基-D-精氨酸-Dmt-Lys-Phe-NH2
H-Phe(d5)-D-Arg-Phe(d5)-Lys-NH2
H-Phe-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Phe-D-Arg-Phe-D-Lys-NH2
H-Phe-D-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly-NH2
Arg-D-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
Arg-D-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
Arg-D-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Arg-Dmt-D-Lys-D-Phe-NH2
Arg-Dmt-D-Lys-Phe-NH2
Arg-Dmt-Lys-D-Phe-NH2
Lys-Dmt-Arf
Lys-Phe
Lys-Phe-Arg-Dmt
Lys-Trp-Arg
Lys-Trp-D-Arg-NH2
Phe-Arg-Dmt-Lys
Phe-Arg-Phe-Lys
Phe-Arg-Phe-Lys-Glu-Cys-Gly
Phe-Dmt-Arg-Lys
Phe-Lys-Dmt
琥珀酸单酯CoQ0-Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2
H-Phe(d5)-D-Arg-Phe(d5)-Lys-NH2
D-Arg-D-Tyr-D-Lys-D-Phe-NH2(P-231D)
Tyr-Arg-Phe-Lys-Glu-His-Trp-D-Arg
Lys-Gln-Tyr-D-Arg-Phe-Trp
Dox-Succ-D-Arg-L-2',6'-二甲基-Tyr-L-Lys(Dox-Succ)-L-Phe-NH2
D-Arg-Dmt-Lys-Dox-Phe-NH-Dox
[0209] Ald＝β-(6'-二甲基氨基-2'-萘甲酰基)苯胺
[0210] atnDap＝β-邻胺苯甲酰基-L-α,β-二氨基丙酸
[0211] Bio＝生物素
[0212] Cha＝环己基
[0213] d5＝氘
[0214] Dab＝二氨基丁酸
[0215] Dap＝二氨基丙酸
[0216] Dmp＝二甲基苯丙氨酸
[0217] Dmt＝二甲基酪氨酸
[0218] dnsDap＝β-丹磺酰基-L-α,β-二氨基丙酸
[0219] Hmt＝2'-羟基,6'-甲基酪氨酸
[0220] Mmt＝2'-甲基酪氨酸
[0221] Tmt＝N,2',6'-三甲基酪氨酸
[0222] 在一个实施方案中，所述肽具有μ-阿片样受体激动剂活性(即，它们激活μ-阿片样受体)。具有μ-阿片样受体激动剂活性的肽通常是在N端(即，第一氨基酸位置)具有酪氨酸残基或酪氨酸衍生物的那些肽。酪氨酸的合适衍生物包括2'-甲基酪氨酸(Mmt)；2',6'-二甲基酪氨酸(2'6'-Dmt)；3',5'-二甲基酪氨酸(3'5'Dmt)；N,2',6'-三甲基酪氨酸(Tmt)；和2'-羟基-6'-甲基酪氨酸(Hmt)。
[0223] 在一个实施方案中，具有μ-阿片样受体激动剂活性的肽具有式Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2。Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2具有由氨基酸酪氨酸、精氨酸和赖氨酸贡献的三个净正电荷，并且具有由氨基酸苯丙氨酸和酪氨酸贡献的两个芳族基团。Tyr-D-Arg-Phe-Lys-NH2的酪氨酸可以是酪氨酸的修饰衍生物(例如在2',6'-二甲基酪氨酸中)以产生具有式2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2的化合物。2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2具有分子量640并且在生理pH下带有三个净正电荷。2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2容易以与能量无关的方式穿透若干哺乳动物细胞类型的质膜(Zhao等《, 美国药理学与实验治疗学杂志(J.Pharmacol Exp Ther.)》,304:425-432,2003)。
[0224] 可选地，在其他情况下，所述芳族阳离子肽不具有μ-阿片样受体激动剂活性。例如，在长期治疗期间，例如在慢性疾病状态或状况中，激活μ-阿片样受体的芳族阳离子肽的使用可能是禁忌。在这些情况下，芳族阳离子肽的潜在不良或上瘾作用可以排除在人类患者或其他哺乳动物的治疗方案中使用激活μ-阿片样受体的芳族阳离子肽。潜在的不良作用可包括镇静、便秘和呼吸抑制。在这些情况下，不激活μ-阿片样受体的芳族阳离子肽可能是适当的治疗。不具有μ-阿片样受体激动剂活性的肽通常在N端(即，氨基酸位置1)不具有酪氨酸残基或酪氨酸衍生物。N端的氨基酸可以是除酪氨酸之外的任何天然存在或非天然存在的氨基酸。在一个实施方案中，N端的氨基酸是苯丙氨酸或其衍生物。苯丙氨酸的示例性衍生物包括2'-甲基苯丙氨酸(Mmp)、2',6'-二甲基苯丙氨酸(2',6'-Dmp)、N,2',6'-三甲基苯丙氨酸(Tmp)和2'-羟基-6'-甲基苯丙氨酸(Hmp)。
[0225] 不具有μ-阿片样受体激动剂活性的芳族阳离子肽的实例具有式Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2。可选地，N端苯丙氨酸可能是苯丙氨酸的衍生物，例如2',6'-二甲基苯丙氨酸(2'6'-Dmp)。在一个实施方案中，2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2的氨基酸序列重排以使得Dmt不是在N端。不具有μ-阿片样受体激动剂活性的这种芳族阳离子肽的实例具有式D-Arg-2'
6'-Dmt-Lys-Phe-NH2。
6'-Dmt-Lys-Phe-NH2。
[0226] 本文中列出的肽的合适的取代变体包括保守性氨基酸取代。氨基酸可根据其物理化学特性如下分组：
[0227] (a)非极性氨基酸：Ala(A)Ser(S)Thr(T)Pro(P)Gly(G)Cys(C)；
[0228] (b)酸性氨基酸：Asn(N)Asp(D)Glu(E)Gln(Q)；
[0229] (c)碱性氨基酸：His(H)Arg(R)Lys(K)；
[0230] (d)疏水性氨基酸：Met(M)Leu(L)Ile(I)Val(V)；和
[0231] (e)芳族氨基酸：Phe(F)Tyr(Y)Trp(W)His(H)。
[0232] 肽中的氨基酸被同一组中的另一种氨基酸取代被称为保守取代并且可以保留原始肽的物理化学特性。相比之下，肽中的氨基酸被不同组中的另一种氨基酸取代通常更可能改变原始肽的特性。
[0233] 激活μ-阿片样受体的肽的实例包括(但不限于)表6中所示的芳族阳离子肽。
[0234]
[0235]
[0236]
[0237]
[0238] Dab＝二氨基丁酸
[0239] Dap＝二氨基丙酸
[0240] Dmt＝二甲基酪氨酸
[0241] Mmt＝2'-甲基酪氨酸
[0242] Tmt＝N,2',6'-三甲基酪氨酸
[0243] Hmt＝2'-羟基,6'-甲基酪氨酸
[0244] dnsDap＝β-丹磺酰基-L-α,β-二氨基丙酸
[0245] atnDap＝β-邻胺苯甲酰基-L-α,β-二氨基丙酸
[0246] Bio＝生物素
[0247] 不激活μ-阿片样受体的肽的实例包括(但不限于)表7中所示的芳族阳离子肽。
[0248]
[0249]
[0250] Cha＝环己基丙氨酸
[0251] 表6和表7中所示的肽的氨基酸可呈L-或D-构型。
[0252] 所述肽可通过本领域中众所周知的任何方法来合成。适于化学合成所述蛋白质的方法包括例如由Stuart和Young在《固相肽合成(Solid Phase Peptide Synthesis)》,第二版,Pierce Chemical Company(1984)和在《酶学方法(Methods Enzymol.)》,289,Academic Press,Inc.,纽约(1997)中描述的那些。
[0253] 在实施本技术时，使用分子生物学、蛋白质生物化学、细胞生物学、免疫学、微生物学和重组DNA中的许多常规技术。这些技术是众所周知的并且分别在例如如下文献中得到解释《：分子生物学现行规范(Current Protocols in Molecular Biology)》,第I-III卷,Ausubel编(1997)；Sambrook等,《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》,第二版(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1989)；《DNA克隆：实践方法(DNA Cloning:A Practical Approach)》,第I和II卷,Glover编(1985)；《低聚核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)》,Gait编(1984)；
《核酸杂交(Nucleic Acid Hybridization)》,Hames和Higgins编(1985)；《转录和翻译(Transcription and Translation)》,Hames和Higgins编(1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》,Freshney编(1986)；《固定化细胞和酶(Immobilized Cells and Enzymes)》(IRL Press,1986)；Perbal,《分子克隆实践指南(A Practical Guide to Molecular Cloning)》；系列，《酶学方法(Meth.Enzymol.)》(Academic Press,Inc.,1984)；
《用于哺乳动物细胞的基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)》,Miller和Calos编(Cold Spring Harbor Laboratory,NY,1987)；和《酶学方法
(Meth.Enzymol.)》,第154和155卷,Wu和Grossman以及Wu编。
《核酸杂交(Nucleic Acid Hybridization)》,Hames和Higgins编(1985)；《转录和翻译(Transcription and Translation)》,Hames和Higgins编(1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》,Freshney编(1986)；《固定化细胞和酶(Immobilized Cells and Enzymes)》(IRL Press,1986)；Perbal,《分子克隆实践指南(A Practical Guide to Molecular Cloning)》；系列，《酶学方法(Meth.Enzymol.)》(Academic Press,Inc.,1984)；
《用于哺乳动物细胞的基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)》,Miller和Calos编(Cold Spring Harbor Laboratory,NY,1987)；和《酶学方法
(Meth.Enzymol.)》,第154和155卷,Wu和Grossman以及Wu编。
[0254] 芳族阳离子肽用于预防、改善或治疗白癜风的用途
[0255] 总则。在一些实施方案中，本文公开的方法提供用于预防、改善或治疗白癜风和/或白癜风症状的疗法，其包括施用有效量的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。因此，例如，一种或多种芳族阳离子肽可能：(1)单独地或以与其他活性剂或芳族阳离子肽的组合制剂形式共同配制和施用或递送；(2)以单独的制剂形式交替地或平行地递送；或(3)通过本领域中已知的任何其他组合治疗方案。当以交替疗法递送时，本文所述的方法可包括依序地(例如，在单独的溶液、乳液、悬浮液、片剂、丸剂或胶囊中)或在单独的注射器中通过不同的注射来施用或递送活性成分。一般来说，在交替疗法期间，依序地(即连续地)施用有效剂量的每种活性成分，而在同时疗法中，有效剂量的两种或更多种活性成分是一起施用的。还可使用各种顺序的间歇组合疗法。当以治疗有效量施用至罹患医学疾病或病状并且需要治疗的受试者时，施用芳族肽和其他活性剂的这些组合可导致协同生物作用。这种方法的一个优点是，可能需要较低剂量的芳族阳离子肽和/或其他活性剂来预防、改善或治疗受试者中的白癜风。此外，可通过使用较低剂量的芳族阳离子肽和/或其他活性剂来避免治疗的潜在副作用。
[0256] 本文描述的芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐可用于预防或治疗疾病。具体地，本公开提供治疗具有或疑似具有白癜风的受试者的预防性和治疗性方法。例如，在一些实施方案中，本公开提供治疗展现由NLRP1或TYR中的基因突变造成的黑素细胞变性的受试者的预防性和治疗性方法。因此，本方法提供通过向有需要的受试者施用有效量的芳族阳离子肽以降低所述受试者中的黑素细胞变性来预防和/或治疗受试者中的白癜风。在一些实施方案中，本技术涉及通过向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐来治疗、改善或预防哺乳动物中的白癜风。
[0257] 肽结合物的预防性和治疗性用途
[0258] 在一些实施方案中，本文描述的至少一种芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐可用于预防或治疗白癜风。具体地，本公开提供治疗罹患白癜风、处于患上白癜风的风险下或易患上白癜风的受试者的预防性和治疗性方法。因此，本方法提供通过向有需要的受试者施用有效量的至少一种芳族肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐来预防和/或治疗所述受试者中的白癜风。在一些实施方案中，向受试者施用至少一种芳族阳离子肽以努力预防、治疗或改善白癜风。
[0259] 在一些实施方案中，出于治疗性目的，施用有效量的至少一种芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐减轻或消除了受试者中的一种或多种白癜风症状。在治疗性应用中，将组合物或药物以足以治愈或至少部分延迟白癜风(包括其并发症和疾病发展中的中间病理学表型)的症状的量施用至疑似或已经罹患白癜风的受试者。在一些实施方案中，向受试者施用有效量的至少一种芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐调节白癜风的一种或多种体征或症状。举例来说(但并非作为限制)，白癜风的体征和症状包括(但不限于)皮肤(例如，面部、颈部、手、臂、脚、膝盖、生殖器和嘴唇上的皮肤)上的乳白色斑块产生(色素脱失)，毛发(例如，头皮上的毛发、睫毛、眉毛或胡须)的过早白化或灰化，衬在口腔内部的组织的颜色损失，以及视网膜内层的颜色的损失或改变。因此，本公开提供治疗罹患白癜风的个体的方法。罹患白癜风的受试者可以通过例如本领域中已知的任何诊断或预后测定法来鉴别。
[0260] 在预防性应用中，将有效量的至少一种芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐的药物组合物或药物以足以消除或降低疾病(包括所述疾病的生物化学、组织学和/或行为症状，其并发症和在疾病发展期间呈现的中间病理学表型)的风险、减轻其严重程度或延迟其发作的量施用至易患上疾病或病状或者另外处于疾病或病状风险下的受试者。处于白癜风风险下的受试者可以通过例如本领域中已知的任何诊断或预后测定法来鉴别。在一些实施方案中，在反常的特征性症状表现之前进行至少一种芳族阳离子肽如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐的施用，以使得疾病或病症得以预防或者可选地延迟其进程。可基于本文描述的筛选测定法来确定适当的化合物。
[0261] 本技术的芳族阳离子肽的生物作用的确定
[0262] 在多个实施方案中，进行合适的体外或体内测定法来确定基于特定芳族阳离子肽的治疗剂的作用以及其施用是否指示用于治疗。在多个实施方案中，可利用代表性动物模型来进行体外测定法，以确定基于给定芳族阳离子肽的治疗剂是否在降低黑素细胞变性、例如降低T细胞积聚和/或黑素细胞的细胞毒性杀伤中发挥所需作用。在人类受试者中测试之前，可以在合适的动物模型系统(包括但不限于大鼠、小鼠、鸡、牛、猴、兔等)中测试用于疗法中的化合物。类似地，对于体内测试，在施用至人类受试者之前，可以使用本领域中已知的任何动物模型系统。
[0263] 在一些实施方案中，通过本领域中众所周知的测定法来测定黑素细胞变性。在一些实施方案中，通过测量在表皮细胞暴露于100或250μM的4-叔丁基苯酚(4-TBP)(白癜风的常见诱导物)之后的细胞毒性的测定法来测定黑素细胞变性。在一些实施方案中，通过测量已经暴露于100或250μM的4-TBP的表皮细胞的存活率的测定法来测定黑素细胞变性。
[0264] 在一些实施方案中，通过测量自体皮肤外植体中的黑素细胞抗原特异性T细胞积聚和细胞毒性活性的测定法来测定黑素细胞变性。关于自体皮肤外植体模型的详细描述，参见Van Den Boorn等《,皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology)》,129:2220-2232(2009)。
[0265] 在一些实施方案中，通过测量在拔背毛之前和两周后白癜风小鼠模型毛皮中的进行性色素脱失的测定法来测定黑素细胞变性。在一些实施方案中，通过测量白癜风小鼠中的眼部色素沉着的存在的测定法来测定黑素细胞变性。在一些实施方案中，通过测量白癜风小鼠对二硝基氯苯的接触敏感性的测定法来测定黑素细胞变性。关于白癜风小鼠模型的详细描述，参见Lerner等,《皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology)》,87(3):299-304(1986)。
[0266] 在一些实施方案中，通过测量过继转移白癜风小鼠模型中的表皮色素脱失的测定法来测定黑素细胞变性。在一些实施方案中，通过测量过继转移白癜风小鼠模型中的酪氨酸酶RNA表达的测定法来测定黑素细胞变性。关于过继转移白癜风小鼠模型的详细描述，参见Harris等《,皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology)》,132:1869-1876(2012)。
[0267] 因此，在一些实施方案中，利用如本文所公开的芳族阳离子肽如D-Arg-2'6'Dmt-Lys-Phe-NH2(SS-31)或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐对具有白癜风的受试者进行的治疗性和/或预防性治疗将降低黑素细胞变性，从而改善白癜风的症状。白癜风的症状包括(但不限于)光敏性增加，对二硝基氯苯的接触敏感性反应降低，皮肤、粘膜、视网膜或生殖器的色素脱失，和头皮上的毛发、睫毛、眉毛或胡须过早白化或灰化。
[0268] 施用模式和有效剂量
[0269] 可使用本领域技术人员已知用于使细胞、器官或组织与肽接触的任何方法。合适的方法包括体外、离体或体内方法。体内方法通常包括向哺乳动物(适宜地人类)施用例如上述那些的芳族阳离子肽。当体内用于治疗时，所述芳族阳离子肽以有效量(即，具有所需治疗作用的量)施用至受试者。剂量和给药方案将取决于受试者中的感染程度、所用特定芳族阳离子肽的特性(例如，其治疗指数)、受试者和受试者的病史。
[0270] 可通过医师和临床医生所熟悉的方法在临床前试验和临床试验期间确定有效量。可通过用于施用药物化合物的多种众所周知的方法中的任一种向有需要的哺乳动物施用有效量的可用于所述方法中的肽。所述肽可全身性或局部地施用。
[0271] 所述肽可以药学上可接受的盐形式配制。术语“药学上可接受的盐”是指由可接受用于施用至患者如哺乳动物的碱或酸制备的盐(例如，对于给定的给药方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。然而，应理解，盐无需是药学上可接受的盐，例如不旨在用于施用至患者的中间化合物的盐。药学上可接受的盐可衍生自药学上可接受的无机或有机碱和衍生自药学上可接受的无机或有机酸。另外，当肽含有碱性部分如胺、吡啶或咪唑和酸性部分如羧酸或四唑时，可形成两性离子并且其包括在如本文所用的术语“盐”内。衍生自药学上可接受的无机碱的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐和锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括被取代的胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺等。衍生自药学上可接受的无机酸的盐包括硼酸、碳酸、氢卤酸(氢溴酸、盐酸、氢氟酸或氢碘酸)、硝酸、磷酸、氨基磺酸和硫酸的盐。衍生自药学上可接受的有机酸的盐包括脂族羟基酸(例如，柠檬酸、葡糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸和酒石酸)、脂族一元羧酸(例如，乙酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸)、氨基酸(例如，天冬氨酸和谷氨酸)、芳族羧酸(例如，苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯基乙酸、龙胆酸、马尿酸和三苯基乙酸)、芳族羟基酸(例如，邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-甲酸和3-羟基萘-2-甲酸)、抗坏血酸、二元羧酸(例如，富马酸、马来酸、草酸和琥珀酸)、葡萄糖醛酸、扁桃酸、粘酸、烟酸、乳清酸、扑酸、泛酸、磺酸(例如，苯磺酸、樟脑磺酸、乙二磺酸、乙磺酸、羟乙磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和对甲苯磺酸)、羟萘甲酸等的盐。在一些实施方案中，所述盐是乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
[0272] 本文描述的本技术的芳族阳离子肽可以并入药物组合物中以单独地或组合地施用至受试者以治疗或预防本文所述的病症。这些组合物通常包括活性剂和药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的盐水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。补充活性化合物也可以并入组合物中。
[0273] 药物组合物通常配制成与其预期施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外(例如，静脉内、皮内、腹膜内或皮下)、口服、吸入、透皮(局部)、眼内、离子电渗和经粘膜施用。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；
缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和用于调节张力的试剂，例如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠来调节pH。可以将肠胃外制剂封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。为方便患者或主治医师，对于一个疗程(例如，7天的治疗)，定量制剂可以含有所有必要设备(例如，药物小瓶、稀释剂小瓶、注射器和针头)的试剂盒提供。
缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和用于调节张力的试剂，例如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠来调节pH。可以将肠胃外制剂封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。为方便患者或主治医师，对于一个疗程(例如，7天的治疗)，定量制剂可以含有所有必要设备(例如，药物小瓶、稀释剂小瓶、注射器和针头)的试剂盒提供。
[0274] 适于注射用途的药物组合物可包括无菌水溶液(在水溶性时)或分散液和用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，用于肠胃外施用的组合物必须是无菌的并且在存在易注射性的程度上应当是流体。它在制造和储存条件下应该是稳定的并且必须防止微生物如细菌和真菌的污染作用。
[0275] 所述芳族阳离子肽组合物可以包括载体，其可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)和其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用包衣如卵磷脂，在分散液的情况下通过维持所需粒度，和通过使用表面活性剂，来维持适当的流动性。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现微生物作用的预防。可以包括谷胱甘肽和其他抗氧化剂来防止氧化。在许多情况下，在组合物中包括等渗剂，例如，糖、多元醇如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收的药剂例如单硬脂酸铝或明胶来产生可注射组合物的延长吸收。
[0276] 可通过将所需量的活性化合物按需要与上文列举的成分之一或组合一起并入适当溶剂中，接着过滤灭菌，来制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性化合物并入无菌媒介物(其含有基本分散基质和来自上文列举那些的所需其他成分)中来制备分散液。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，典型的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其可以得到活性成分加上来自其先前无菌过滤溶液的任何额外所需成分的粉末。
[0277] 口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。对于口服治疗施用的目的，活性化合物可与赋形剂混合并且以片剂、锭剂或胶囊(例如明胶胶囊)形式使用。还可以使用流体载体来制备口服组合物以用作漱口药。可以包括药物相容性粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可含有任何以下成分，或具有类似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶状二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或调味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。
[0278] 对于通过吸入施用，本技术的芳族阳离子肽例如可以来自含有合适的推进剂(例如，气体如二氧化碳)的加压容器或分配器、或者喷雾器的气雾剂喷雾形式递送。这些方法包括美国专利No.6,468,798中所述的那些。
[0279] 如本文所述的本技术的芳族阳离子肽的全身施用还可以是通过跨粘膜或透皮方式。对于跨粘膜或透皮施用，将适于待穿透屏障的渗透剂用于制剂中。这些渗透剂通常是本领域中已知的，并且对于跨粘膜施用包括例如清洁剂、胆汁盐和梭链孢酸衍生物。跨粘膜施用可以通过使用鼻喷雾来实现。对于透皮施用，将活性化合物配制成如本领域中通常已知的软膏、油膏、凝胶或乳膏。在一个实施方案中，透皮施用可通过离子电渗疗法来进行。
[0280] 本技术的芳族阳离子肽可以配制在载体体系中。所述载体可以是胶状体系。所述胶状体系可以是脂质体、磷脂双层媒介物。在一个实施方案中，将治疗性肽囊封在脂质体中，同时保持肽完整性。如本领域技术人员应理解，存在多种制备脂质体的方法。(参见Lichtenberg等,《生物化学分析方法(Methods Biochem.Anal.)》,33:337-462(1988)；Anselem等《,脂质体技术(Liposome Technology)》,CRC Press(1993))。脂质体制剂可以延迟清除并增加细胞摄取(参见Reddy《, 药物疗法年鉴(Ann.Pharmacother.)》,34(7-8):915-
923(2000))。还可以将活性剂装载在从药学上可接受的成分制备的粒子中，所述成分包括(但不限于)可溶性、不溶性、渗透性、不渗透性、可生物降解或胃滞留聚合物或脂质体。这些粒子包括(但不限于)纳米粒子、可生物降解的纳米粒子、微粒、可生物降解的微粒、纳米球、可生物降解的纳米球、微球、可生物降解的微球、胶囊、乳液、脂质体、胶束和病毒载体体系。
923(2000))。还可以将活性剂装载在从药学上可接受的成分制备的粒子中，所述成分包括(但不限于)可溶性、不溶性、渗透性、不渗透性、可生物降解或胃滞留聚合物或脂质体。这些粒子包括(但不限于)纳米粒子、可生物降解的纳米粒子、微粒、可生物降解的微粒、纳米球、可生物降解的纳米球、微球、可生物降解的微球、胶囊、乳液、脂质体、胶束和病毒载体体系。
[0281] 所述载体还可以是聚合物，例如，可生物降解的生物相容性聚合物基质。在一个实施方案中，本技术的芳族阳离子肽可以包埋在聚合物基质中，同时维持蛋白质完整性。所述聚合物可为天然的，例如多肽、蛋白质或多糖，或者合成的，例如聚α-羟基酸。实例包括由例如胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、醋酸纤维素、硝酸纤维素、多糖、纤维蛋白、明胶和其组合制成的载体。在一个实施方案中，所述聚合物是聚乳酸(PLA)或共聚乳酸/乙醇酸(PGLA)。所述聚合物基质可以多种形式和尺寸(包括微球和纳米球)制备和分离。聚合物制剂可导致治疗作用持续时间延长。(参见Reddy《, 药物疗法年鉴(Ann.Pharmacother.)》,34(7-8):915-923(2000))。用于人类生长激素(hGH)的聚合物制剂已经用于临床试验中。(参见Kozarich和Rich《, 化学生物学(Chemical Biology)》,2:548-552(1998))。
[0282] 聚合物微球持续释放制剂的实例描述于PCT公开WO 99/15154(Tracy等)、美国专利No.5,674,534和5,716,644(都属于Zale等)、PCT公开WO 96/40073(Zale等)和PCT公开WO 00/38651(Shah等)。美国专利No.5,674,534和5,716,644以及PCT公开WO 96/40073描述了含有用盐针对聚集稳定化的促红细胞生成素粒子的聚合物基质。
[0283] 在一些实施方案中，本技术的芳族阳离子肽是用将保护本技术的芳族阳离子肽免于从身体快速消除的载体制备的，例如控制释放制剂，包括植入物和微囊化递送体系。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。这些制剂可使用已知技术来制备。所述材料也可以从商业上获得，例如，来自Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals,Inc。脂质体悬浮液(包括靶向特异性细胞的脂质体与细胞特异性抗原的单克隆抗体)也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法来制备，例如，如美国专利No.4,522,811中所述。
[0284] 本技术的芳族阳离子肽也可以配制以增强细胞内递送。例如，脂质体递送体系是本领域中已知的，参见例如Chonn和Cullis,“Recent Advances in Liposome Drug Delivery Systems,”《生物技术新见(Current Opinion in Biotechnology)》6:698-708(1995)；Weiner,“Liposomes for Protein Delivery:Selecting Manufacture and Development Processes,”《免疫方法(Immunomethods)》,4(3):201-9(1994)；和Gregoriadis“,Engineering Liposomes for Drug Delivery:Progress and Problems,”《生物技术趋势(Trends Biotechnol.)》,13(12):527-37(1995)。Mizguchi等《, 癌症快报(Cancer Lett.)》,100:63-69(1996)描述了融合脂质体在体内和体外递送蛋白质至细胞的用途。
[0285] 本技术的芳族阳离子肽的剂量、毒性和治疗功效可以通过标准的药学程序在细胞培养物或实验动物中确定，例如，为确定LD50(群体的50％致死剂量)和ED50(在群体的50％中治疗有效的剂量)。毒性作用与治疗作用之间的剂量比是治疗指数，并且它可以比率LD50/ED50表示。在一些实施方案中，本技术的芳族阳离子肽展示高的治疗指数。虽然可使用展现有毒副作用的本技术的芳族阳离子肽，但应小心设计将这些化合物靶向受影响组织位点以最小化对未感染细胞的潜在损害并且从而降低副作用的递送体系。
[0286] 从细胞培养测定法和动物研究获得的数据可用于配制用于人类的一系列剂量。这些化合物的剂量位于一系列循环浓度内，其包括具有很少毒性或不具有毒性的ED50。取决于所用的剂型和所利用的施用途径，所述剂量可在这个范围内改变。对于所述方法中使用的本技术的任何芳族阳离子肽，可以最初从细胞培养测定法来评估治疗有效剂量。可以在动物模型中配制剂量以达到如在细胞培养物中测定的循环血浆浓度范围，其包括IC50(即，达到症状的半最大抑制的测试化合物浓度)。这种信息可用于更精确地确定人类中的有用剂量。可例如通过高效液相色谱法来测量血浆中的水平。
[0287] 通常，足以达到治疗性或预防性作用的本技术的芳族阳离子肽的有效量在每天每千克体重约0.000001mg至每天每千克体重约10,000mg的范围内。适宜地，剂量范围为每天每千克体重约0.0001mg至每天每千克体重约100mg。例如，剂量可为每天、每两天或每三天1mg/kg体重或10mg/kg体重或者在每周、每两周或每三周1-10mg/kg的范围内。在一个实施方案中，肽的单一剂量在每千克体重0.001-10,000微克范围内。在一个实施方案中，载体中的芳族阳离子肽浓度在每递送毫升0.2至2000微克范围内。示例性治疗方案需要每天一次或每周一次施用。在治疗性应用中，有时需要在相对较短时间间隔下的相对高剂量直至疾病进展降低或终止，并且直至受试者显示疾病症状的部分或完全改善。其后，可以向患者施用预防性方案。
[0288] 在一些实施方案中，本技术的芳族阳离子肽的治疗有效量可定义为在目标组织为10-12至10-6摩尔浓度、例如约10-7摩尔浓度的肽浓度。这种浓度可通过0.001至100mg/kg的全身剂量或等效剂量(通过身体表面积)递送。剂量时间表将被优化以维持在目标组织的治疗浓度。在一些实施方案中，所述剂量是通过单次每天或每周施药来施用的，但也可包括连续施用(例如，胃肠外输注或透皮应用)。在一些实施方案中，本技术的芳族阳离子肽的剂量在“低”、“中”或“高”剂量水平下提供。在一个实施方案中，低剂量是从约0.0001至约
0.5mg/kg/h、适宜地约0.001至约0.1mg/kg/h提供。在一个实施方案中，中剂量是从约0.01至约1.0mg/kg/h、适宜地约0.01至约0.5mg/kg/h提供。在一个实施方案中，高剂量是从约
0.5至约10mg/kg/h、适宜地约0.5至约2mg/kg/h提供。
0.5mg/kg/h、适宜地约0.001至约0.1mg/kg/h提供。在一个实施方案中，中剂量是从约0.01至约1.0mg/kg/h、适宜地约0.01至约0.5mg/kg/h提供。在一个实施方案中，高剂量是从约
0.5至约10mg/kg/h、适宜地约0.5至约2mg/kg/h提供。
[0289] 本领域技术人员应理解，某些因素可影响有效治疗受试者所需的剂量和时间选择，包括(但不限于)疾病或病症的严重程度、先前的治疗、受试者的一般健康状况和/或年龄，和存在的其他疾病。此外，用治疗有效量的本文所述的治疗组合物对受试者进行治疗可以包括单次治疗或一系列治疗。
[0290] 根据本方法处理的哺乳动物可以是任何哺乳动物，包括例如农场动物，例如绵羊、猪、牛和马；宠物动物，例如狗和猫；实验室动物，例如大鼠、小鼠和兔。在一些实施方案中，所述哺乳动物是人类。
[0291] 本技术的芳族阳离子肽的前药形式的施用
[0292] 本技术的芳族阳离子肽可以前药形式施用。前药是芳族阳离子肽的衍生物，其本身是相对非活性的，但其当被引入使用它们的受试者中时通过体内化学或生物过程(例如酶促转化)而转化成活性化合物。合适前药的其他讨论提供于以下文献中：H.Bundgaard,《前药设计(Design of Prodrugs)》,New York:Elsevier,1985；R.Silverman《,药物设计和药物作用的有机化学(The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action)》,Boston:Elsevier,2004；R.L.Juliano(编)《, 药物的受控递送的生物方法(Biological Approaches to the Controlled Delivery of Drugs)》(纽约科学院年鉴(Annals of the New York Academy of Sciences),第507卷),New York:N.Y Academy of Sciences,1987；和E.B.Roche(编) ,《通过前药和类似物来设计生物药物特性(Design of
Biopharmaceutical Properties Through Prodrugs and Analogs)》(由药物化学部赞助的专题讨论会，APhAAcademy of Pharmaceutical Sciences,1976年11月全国会议,佛罗里达州奥兰多市),Washington:The Academy,1977。
Biopharmaceutical Properties Through Prodrugs and Analogs)》(由药物化学部赞助的专题讨论会，APhAAcademy of Pharmaceutical Sciences,1976年11月全国会议,佛罗里达州奥兰多市),Washington:The Academy,1977。
[0293] 与本技术的芳族阳离子肽和其他治疗剂的组合疗法
[0294] 在一些实施方案中，本技术的芳族阳离子肽可与一种或多种另外的治疗剂组合以用于预防、改善或治疗白癜风。例如，白癜风的治疗通常涉及涂覆局部用类固醇乳膏、莫诺苯宗(monobenzone)或施用补骨脂素光化疗法。另外，作为非限制性实例，还可施用抗生素、激素、抗肿瘤剂、免疫调节剂、皮肤病药物、抗血栓形成和止吐剂。
[0295] 在一个实施方案中，将所述芳族阳离子肽与由局部用类固醇、局部用或口服补骨脂素、莫诺苯宗或光化学疗法组成的一种或多种治疗剂组合。
[0296] 在一个实施方案中，将另一种治疗剂与本技术的芳族阳离子肽组合施用至受试者，以使得产生协同治疗作用。“协同治疗作用”是指由两种治疗剂的组合产生并且超过否则将由单独任一治疗剂的单独施用产生的治疗作用的大于加和性的治疗作用。因此，较低剂量的一种或两种治疗剂可用于治疗白癜风，从而产生增加的治疗功效和降低的副作用。
[0297] 在任何情况下，多种治疗剂(包括但不限于例如本技术的芳族阳离子肽)可以任何次序或甚至同时地施用。如果同时，则多种治疗剂可以单一的统一形式或以多种形式(仅举例来说，作为单一丸剂或作为两种独立的丸剂)提供。治疗剂之一可以多种剂量给予，或者两种可以多种剂量给予。如果不是同时，则多次剂量之间的时间选择可从零周以上至少于四周之间变化。此外，组合方法、组合物和制剂不限于仅两种药剂的使用。
[0298] 使用芳族阳离子肽的诊断方法
[0299] 在一些实施方案中，本技术的至少一种芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐在诊断测定法中用于确定罹患白癜风的受试者是否是经历用至少一种芳族阳离子肽处理的候选者。
[0300] 在一些实施方案中，使用以下标准中的一种或多种(但不限于)，将诊断患有白癜风的受试者选择作为用至少一种芳族阳离子肽(例如，D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐处理的候选者：受试者已确诊累及15％至50％的总身体表面的非节段型白癜风(NSV)、累及头和颈部的NSV；历经3个月时期的稳定或缓慢进行性白癜风；所述受试者为至少13岁，并且所述受试者具有至少一个尺寸测量为至少2×2cm的白癜风病灶。另外或可选地，在一些实施方案中，如果受试者具有白癜风家族史，受试者罹患至少一种自身免疫疾病，或受试者在一个或多个基因中具有变异，则所述诊断患有白癜风的受试者被选择作为用至少一种芳族阳离子肽处理的候选者，其中所述基因包括(但不限于)NLRP1、TYR、I类HLA、II类HLA、III类HLA、PTPN22、XBP1、IL2RA、LPP、RERE、FOXP1、TSLP、CCR6、GZMB、UBASH3A、C1QTNF6和FOXP3。举例来说，但并非作为限制，在一些实施方案中，所述自身免疫疾病包括(但不限于)桥本氏甲状腺炎、格雷夫斯病、恶性贫血、类风湿性关节炎、牛皮癣、I型糖尿病、阿狄森氏病、乳糜泻、炎性肠病和全身性红斑狼疮。
[0301] 举例来说，但并非作为限制，在一些实施方案中，用于鉴别适合用芳族阳离子肽处理的诊断患有白癜风的受试者的诊断方法包括一种或多种以下步骤的任何组合：从来自诊断患有白癜风的受试者的一个或多个受影响皮肤区域(例如，显示白癜风表型的皮肤区域)移出组织，从所述组织分离黑素细胞和/或角化细胞，培养所分离的黑素细胞和/或角化细胞，将所述黑素细胞和/或角化细胞分成两个或更多个组，用至少一种芳族阳离子肽(例如，D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)处理至少一组黑素细胞和/或角化细胞，用媒介物对照(即，未用芳族阳离子肽处理)处理至少一组黑素细胞和/或角化细胞，对于所述黑素细胞和/或角化细胞测定治疗作用，和比较所述至少一种芳族阳离子肽(例如，D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)对被处理和未被处理的黑素细胞和/或角化细胞的治疗作用。在一些实施方案中，对于黑素细胞和/或角化细胞测定治疗作用包括(但不限于)测定以下中的一种或多种：线粒体膜电位升高、ATP产生增加、细胞存活或增殖增加，和黑色素产生增加。
[0302] 在一些实施方案中，将芳族阳离子肽对于来自诊断患有白癜风的受试者的被处理和未被处理的黑素细胞和/或角化细胞与来自未诊断患有白癜风的受试者的黑素细胞和/或角化细胞的治疗作用进行比较。在一些实施方案中，如果受试者不表达白癜风表型(例如，面部、颈部、手或膝盖上的白色皮肤斑块)，不表达以下基因NLRP1、TYR、I类HLA、II类HLA、III类HLA、PTPN22、XBP1、IL2RA、LPP、RERE、FOXP1、TSLP、CCR6、GZMB、UBASH3A、C1QTNF6和FOXP3中的一种或多种中的基因变异，不具有自身免疫疾病，或不具有白癜风家族史，则所述受试者被认为不罹患白癜风。
[0303] 在一些实施方案中，如果相比于来自诊断患有白癜风的受试者的未被处理的黑素细胞和/或角化细胞，来自所述受试者的用芳族阳离子肽处理的黑素细胞和/或角化细胞中的线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生存在约1％至50％、5％至40％、10％至30％、或15％至25％的增加，则所述诊断患有白癜风的受试者被选择用至少一种芳族阳离子肽(例如，D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)或其药学上可接受的盐处理。
[0304] 另外或可选地，在一些实施方案中，如果来自诊断患有白癜风的受试者的用芳族阳离子肽处理的黑素细胞和/或角化细胞的线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生朝向正常水平恢复了约1％至50％、5％至40％、10％至30％、或15％至25％，则所述诊断患有白癜风的受试者被选择用至少一种芳族阳离子肽(例如，D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)或其药学上可接受的盐处理。在一些实施方案中，通过测定来自未诊断患有白癜风的一个或多个受试者的黑素细胞和/或角化细胞来确定线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生的正常水平。举例来说，但并非作为限制，在一些实施方案中，通过对来自未诊断患有白癜风的至少三个不同受试者的线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生的水平取平均值来确定线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生的正常水平。
[0305] 在一些实施方案中，在诊断患有白癜风的受试者接受用至少一种本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐处理时，对所述经历芳族阳离子肽处理的受试者监测所述芳族阳离子肽处理的一种或多种治疗作用。举例来说，但并非作为限制，在一些实施方案中，监测芳族阳离子肽处理包括以下步骤中的一个或多个的任何组合：从经历芳族阳离子处理的白癜风受试者的一个或多个受影响皮肤区域移出活检组织，从所述组织分离黑素细胞和/或角化细胞，培养所分离的黑素细胞和/或角化细胞，对所分离的黑素细胞和/或角化细胞测定芳族阳离子处理的治疗作用，比较用芳族阳离子肽处理的治疗作用与黑素细胞和/或角化细胞细胞能量、黑色素产生和/或细胞增殖的正规化或标准化水平，和比较用芳族阳离子肽处理的治疗作用与在用芳族阳离子肽处理前来自所述白癜风受试者的黑素细胞和/或角化细胞细胞能量、黑色素产生和/或细胞增殖的原始水平。在一些实施方案中，所测定的治疗作用包括(但不限于)以下中的一种或多种：黑素细胞中的线粒体的线粒体膜电位升高、黑素细胞中的ATP产生增加、黑素细胞中的细胞存活或增殖增加，和黑素细胞的黑色素产生增加。
[0306] 如本文所用，细胞能量、黑色素产生和/或细胞增殖的“正规化”或“标准化”水平是指来自未诊断患有白癜风的受试者的黑素细胞和/或角化细胞的线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生的正常水平。举例来说，但并非作为限制，在一些实施方案中，通过对来自未诊断患有白癜风的至少三个不同受试者的线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生的水平取平均值来确定线粒体膜电位、ATP产生、细胞存活、细胞增殖或黑色素产生的正常水平。
[0307] 在一些实施方案中，至少一种本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐被用于筛选测定法中来确定白癜风疗法的功效。在一些实施方案中，将有待确定功效的白癜风疗法与用至少一种芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐处理进行比较。
[0308] 举例来说，但并非作为限制，在一些实施方案中，用于确定白癜风疗法的功效的筛选测定法包括以下的任何组合：从诊断患有白癜风的受试者的受影响皮肤区域移出组织，从所述组织分离黑素细胞，培养所分离的黑素细胞，将所述黑素细胞分成两个或更多个组，用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理至少一组黑素细胞，用媒介物对照处理至少一组黑素细胞(即，未被处理的细胞)，用白癜风疗法(即，有待确定功效的白癜风疗法)处理至少一组黑素细胞，对于所述黑素细胞测定用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2和白癜风疗法处理的治疗作用，和比较用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理的治疗作用与用白癜风疗法处理的相同治疗作用。在一些实施方案中，所测定的治疗作用包括(但不限于)以下中的一种或多种：黑素细胞中的线粒体的线粒体膜电位升高、黑素细胞中的ATP产生增加、黑素细胞中的细胞存活或增殖增加，和黑素细胞的黑色素产生增加。在一些实施方案中，如果用白癜风疗法处理黑素细胞相比于用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理黑素细胞具有更大或相等的治疗作用，则白癜风疗法被视为有效的。
[0309] 在另一个实施方案中，用于确定白癜风疗法的功效的筛选测定法包括以下中的任何组合：将来自本领域中已知的任何白癜风小鼠模型的小鼠分成至少两组，用白癜风疗法(即，有待确定功效的白癜风疗法)处理至少一组小鼠，用至少一种芳族阳离子肽例如D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理至少一组小鼠，用媒介物对照处理至少一组小鼠(即，未被处理的小鼠)，和比较所述白癜风疗法和芳族阳离子处理对小鼠的治疗作用。在一些实施方案中，所比较的治疗作用包括(但不限于)小鼠毛皮上的白色斑块减少，小鼠的黑素细胞中的线粒体的线粒体膜电位升高，小鼠的黑素细胞中的ATP产生增加，小鼠的黑素细胞中的细胞存活或增殖增加，和小鼠的黑素细胞的黑色素产生增加。在一些实施方案中，如果用白癜风疗法处理小鼠相比于用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理小鼠具有更大或相等的治疗作用，则白癜风疗法被视为有效的。
[0310] 实施例
[0311] 通过以下实施例进一步说明本技术，所述实施例不应理解为以任何方式进行限制。对于下文每个实施例，可使用本文描述的任何芳族阳离子肽。举例来说，但并非作为限制，下文实施例中使用的芳族阳离子肽可为2',6'-Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2、Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH2或D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2。
[0312] 实施例1：用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理白癜风黑素细胞
[0313] 本实施例证实对从诊断患有白癜风的受试者分离的黑素细胞的线粒体膜电位和ATP产生的作用。
[0314] 方法
[0315] 线粒体膜电位：从三名不具有白癜风的人类患者(NHM)和从三名诊断患有白癜风的人类患者(VHM)分离和培养黑素细胞。将来自每名患者的培养黑素细胞分成三组，其中每组用0μM、1.5μM和2μM的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理。每天向生长培养基添加D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2，持续7天。7天后，利用JC-1探头评估所述黑素细胞的线粒体膜电位(ΔΨm)(参见例如JC-1线粒体膜电位测定试剂盒，Cayman Chemical Co.,Ann Arbor,Michigan)。图1示出来自三个NHM培养物和三个VHM培养物的黑素细胞的线粒体膜电位的平均变化。
[0316] ATP产生：从两名诊断患有白癜风的人类患者(VHM)分离和培养黑素细胞。将来自每名患者的培养黑素细胞分成两组，其中每组用0μM和2μM的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理。每天向生长培养基添加D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2，持续3天。3天后，使所述黑素细胞裂解并且通过荧光测定来测量ATP水平。一式三份地进行每个测定法。图2示出来自相应的处理组和未处理组的VHM培养物的黑素细胞中的平均ATP量。
[0317] 结果
[0318] 图1示出用D-Arg-2'6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理VHM黑素细胞几乎使所述VHM黑素细胞的线粒体膜电位加倍。另外，用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理VHM黑素细胞使所述VHM黑素细胞的线粒体膜电位恢复至在未被处理的NHM黑素细胞中存在的水平。
[0319] 图2示出用2μM的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理VHM黑素细胞相比于未被处理的VHM黑素细胞使ATP产生水平升高。
[0320] 结果表明，用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理提高了VHM黑素细胞的线粒体膜电位和ATP产生。因而，用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理VHM黑素细胞提高了VHM黑素细胞的线粒体能量。因此，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐(包括但不限于D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)可用于在罹患或易患上白癜风的受试者中提高细胞能量和/或正规化黑素细胞的线粒体膜电位和ATP产生。
[0321] 实施例2：D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对黑素细胞中的4-TBP诱导的细胞毒性和细胞凋亡的治疗作用
[0322] 本实施例将证实D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对4-TBP诱导的白癜风的治疗作用。
[0323] 根据Yang和Boissy《, 色素细胞研究(Pigment Cell Research)》,12:237-245(1999)中描述的程序培养黑素细胞并用4-TBP处理以诱导白癜风。在暴露于4-TBP后用1-10μg的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理实验组的黑素细胞。使对照黑素细胞组仅暴露于4-TBP。
[0324] 结果
[0325] 可以预料，相比于未暴露于4-TBP的黑素细胞(正常)，未被处理的黑素细胞在暴露于4-TBP后将表现出高水平的细胞毒性和细胞凋亡(白癜风对照)。然而，可以预料，用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理的黑素细胞将显示与未暴露于4-TBP的正常黑素细胞类似并且大于在4-TBP暴露后的未被处理的黑素细胞的细胞存活率。
[0326] 这些结果将表明，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐可用于治疗与化学诱导的白癜风相关的细胞凋亡和细胞毒性。因此，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐(包括但不限于D-Arg-2,'6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)可用于治疗、预防或改善在罹患或易患上白癜风的受试者中观测到的黑素细胞变性和色素脱失。
[0327] 实施例3：D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对黑素细胞中的4-TBP诱导细胞毒性和细胞凋亡的预防作用
[0328] 本实施例将证实D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对4-TBP诱导的白癜风的预防作用。
[0329] 用1-10μg的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2培养黑素细胞持续一周。将对照组的黑素细胞在不存在芳族阳离子肽的情况下平行培养。随后根据Yang和Boissy《,色素细胞研究(Pigment Cell Research)》,12:237-245(1999)中所述的程序用4-TBP处理实验组和对照组以诱导白癜风。
[0330] 结果
[0331] 可以预料，相比于未暴露于4-TBP的黑素细胞(正常)，对照组内的黑素细胞在暴露于4-TBP后将表现出高水平的细胞毒性和细胞凋亡。然而，可以预料，在与4-TBP接触之前用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2培养的黑素细胞将显示与未暴露于4-TBP的正常黑素细胞类似并且大于在4-TBP暴露后的未被处理的黑素细胞的细胞存活率。
[0332] 这些结果将表明，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐可用于预防与化学诱导的白癜风相关的细胞凋亡和细胞毒性。因此，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐(包括但不限于D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)可用于治疗、预防或改善在罹患或易患上白癜风的受试者中观测到的黑素细胞变性和色素脱失。
[0333] 实施例4：D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对自体白癜风皮肤外植体中的T细胞积聚和细胞毒性活性的作用
[0334] 本实施例将证实D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对白癜风皮肤外植体模型中的T细胞积聚和细胞毒性活性的作用。
[0335] 将活动性白癜风患者再分成2组。向第I组受试者施用每日剂量为0.25mg/kg/天的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2，持续12周，而用药物媒介物处理第II组白癜风受试者并充当对照。从第I组和第II组白癜风受试者获得侧接色素脱失斑点的打孔活检。根据Van Den Boorn等《, 皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology)》,129:2220-2232(2009)中描述的程序培养这些活检以促进T细胞生长。使用皮肤外植体测定法测试这些病灶周围的T细胞浸润并积极杀伤皮肤组织微环境内的黑素细胞的能力。根据Van Den Boorn等《, 皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology)》,129:2220-
2232(2009)中描述的程序产生自体皮肤外植体。将病灶周围的T细胞与正常着色的自体皮肤外植体共同培养2天。使T细胞浸润到皮肤外植体并向位于真皮-表皮交界处的黑素细胞迁移。通过如Van Den Boorn等 ,《皮肤病学研究杂志(Journal of
InvestigativeDermatology)》,129:2220-2232(2009)中所述的免疫组织化学或免疫荧光对皮肤外植体冷冻切片分析浸润T细胞、黑素细胞和细胞凋亡的存在。
2232(2009)中描述的程序产生自体皮肤外植体。将病灶周围的T细胞与正常着色的自体皮肤外植体共同培养2天。使T细胞浸润到皮肤外植体并向位于真皮-表皮交界处的黑素细胞迁移。通过如Van Den Boorn等 ,《皮肤病学研究杂志(Journal of
InvestigativeDermatology)》,129:2220-2232(2009)中所述的免疫组织化学或免疫荧光对皮肤外植体冷冻切片分析浸润T细胞、黑素细胞和细胞凋亡的存在。
[0336] 结果
[0337] 可以预料，相比于从正常受试者取得的皮肤外植体，来自未被处理的白癜风受试者的自体皮肤外植体将展现高水平的T细胞积聚和黑素细胞破坏。此外预料到，来自用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理的受试者的皮肤外植体将显示与从正常受试者取得的皮肤外植体类似的T细胞积聚和黑素细胞存活率。此外预料到，来自用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理的受试者的皮肤外植体将显示大于未被处理的白癜风外植体的黑素细胞存活率。
[0338] 这些结果将表明，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐可用于抑制白癜风皮肤外植体模型中的T细胞积聚和细胞毒性活性。因此，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐(包括但不限于D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)可用于治疗、预防或改善在罹患或易患上白癜风的受试者中观测到的黑素细胞变性和色素脱失。
[0339] 实施例5：D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对白癜风小鼠模型的毛皮中的进行性色素脱失的作用
[0340] 本实施例将证实D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对白癜风小鼠模型的毛皮中的进行性色素脱失的作用。
[0341] 获得在Lerner等,《皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology)》,87:299-304(1986)中描述的白癜风小鼠。将白癜风小鼠再分成2组。向第I组小鼠施用每日剂量为0.25mg/kg/天的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2持续四周，然后拔背毛，而第II组白癜风小鼠在拔毛前用药物媒介物处理。通过光学显微镜监测无色素毛发的再生。
[0342] 结果
[0343] 可以预料，未被处理的白癜风小鼠在拔毛后将显示色素毛发被白色毛发进行性取代。此外预料到，相比于未被处理的白癜风小鼠，用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理的白癜风小鼠在拔背毛后将显示进行性色素脱失速率降低2周。
[0344] 这些结果将表明，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐可用于延迟或改善白癜风小鼠模型的毛皮中的进行性色素脱失速率(相对于未被处理的白癜风对照)。因此，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐(包括但不限于D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)可用于治疗、预防或改善在罹患或易患上白癜风的受试者中观测到的黑素细胞变性和色素脱失。
[0345] 实施例6：D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2对过继转移白癜风小鼠模型中的表皮色素脱失的作用
[0346] 获得在Harris等,《皮肤病学研究杂志(Journal of Investigative Dermatology)》,132:1869-1876(2012)中描述的白癜风小鼠。这种过继转移白癜风小鼠模型通过在保留毛发的同时诱导表皮色素脱失而概括了人类状况。将这些小鼠再分成2组。向第I组小鼠施用每日剂量为0.25mg/kg/天的D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2持续4周，而用药物媒介物处理第II组白癜风小鼠并充当对照。通过光学显微镜监测表皮组织如尾巴、鼻子和脚垫中的色素沉着损失。
[0347] 结果
[0348] 可以预料，这些未被处理的白癜风小鼠将在表皮组织如尾巴、鼻子和脚垫中显示进行性色素沉着损失。此外预料到，用D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2处理的白癜风小鼠相比于未被处理的白癜风小鼠将显示表皮组织中的色素脱失的严重程度降低。
[0349] 这些结果将表明，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐可用于降低过继转移白癜风小鼠模型中的表皮组织的色素脱失速率。因此，本技术的芳族阳离子肽或其药学上可接受的盐如乙酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐(包括但不限于D-Arg-2',6'-Dmt-Lys-Phe-NH2)可用于治疗、预防或改善在罹患或易患上白癜风的受试者中观测到的黑素细胞变性和色素脱失。
[0350] 等效物
[0351] 本技术在本申请中描述的特定实施方案方面不受限制，所述实施方案旨在作为本技术的单独的方面的单一例证。如本领域技术人员所显而易见的是，可以在不偏离本技术的精神和范围的情况下对本技术作出许多修改和变化。根据前述说明，除了本文列举的那些之外，在本技术的范围内的功能等效方法和装置是本领域技术人员显而易见的。这些修改和变化旨在落在所附权利要求书的范围内。本技术仅由所附权利要求书的条款以及这些权利要求授权的等效物的完全范围限制。应理解，本技术不限于特定方法、试剂、化合物、组合物或生物体系，其当然可以改变。此外应理解，本文使用的术语是仅出于描述特定实施方案的目的，而不旨在具限制性。
[0352] 此外，在本公开的特征或方面用马库什组来描述时，本领域技术人员将认识到，本公开因此也用马库什组的任何单独成员或成员亚组进行描述。
[0353] 如本领域技术人员所理解，对于任何和所有目的，特别是在提供书面说明方面，本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围以及其子范围的组合。任何列出的范围可容易地认为是充分描述并使得相同范围能够被分成至少相等的两份、三份、四份、五份、十份等。作为非限制性实例，本文讨论的每个范围可以容易地分成下三分之一、中间三分之一和上三分之一等。此外如本领域技术人员所理解，所有语言如“至多”、“至少”、“大于”、“小于”等都包括所述数目并且是指随后可以分成如上文所讨论的子范围的范围。最后，如本领域技术人员所理解，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1-3个细胞的组是指具有1、2或3个细胞的组。类似地，具有1-5个细胞的组是指具有1、2、3、4或5个细胞的组，等等。
[0354] 本文提及或引用的所有专利、专利申请、临时申请和公开是以全文(包括所有数字和表格)引用的方式并入的，其程度为它们不会与本说明书的明确教导相矛盾。
[0355] 其他实施方案阐述于以下权利要求书内。
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