生育酚、生育三烯酚、其它苯并二氢吡喃和侧链衍生物，及其用途

发明背景发明领域本发明总的涉及有机化学领域和抗增殖和促凋亡化合物。更具体的，本发明涉及基于苯并二氢吡喃的化合物及其衍生物，及其作为细胞抗增殖、促凋亡、免疫调节和抗病毒药剂的用途。

相关领域的描述细胞增殖和细胞死亡(凋亡)的生物学是极端复杂的，涉及多种胞内信号传递途径和多种相互作用的基因产物。癌症细胞可显示多种细胞增殖正常调控的缺陷，从而使它们的数量增加。另外，癌症细胞显示与通过多步过程除去异常细胞(称作细胞程序性死亡或凋亡)有关的机制的缺陷。因此，失控的细胞增殖和对引起死亡的信号途径的抑制联合起来，使癌症细胞同时具有生长和存活优势。

细胞数量是否增加由负作用和正作用的生长调节基因产物的表达平衡，以及是否存在功能性细胞死亡信号传递途径决定。负作用的生长调节基因能封阻在细胞循环中的细胞。正作用生长调节基因刺激细胞循环前进。和凋亡有关的基因可以是促凋亡或抗凋亡的，两者之间的动态平衡决定一个细胞是生存还是死亡。

为了生存并增加其数量，癌症细胞随时间经历了一系列突变事件，这些事件除去调节控制，赋予它们即使在存在促凋亡信号的情况下，也能不受检查的生长并存活的能力，并发展出允许它们逃避免疫应答防御系统的检查和清除的特性。癌症可导致个体死亡，除非用手术切除或用药物有效治疗。

存在各式各样的病理性细胞增殖状况，对于它们需要新的治疗方法和药剂来提供治疗的益处。这些病理状况可在几乎所有能异常细胞增殖或对细胞死亡信号应答异常的细胞类型中发生。在显示病理性或异常生长和死亡特征的细胞类型中，有(1)成纤维细胞，(2)血管内皮细胞，和(3)表皮细胞。因此，需要新颖方法，以在个体的所有或几乎所有器官和组织系统中治疗局部或扩散的病理状况。

大多数癌症，不论它们是雄性专一性的，如前列腺或睾丸癌，或雌性专一性的，如乳腺癌、卵巢癌或宫颈癌，或它们相等的影响雄性或雌性，如肝癌、皮肤癌或肺癌，随时间产生越来越多的基因损伤和后随事件，并最终变得具有高度转移性并难于治疗。已证明，手术摘除局部癌症仅在癌症未扩散超过原发性病变时是有效的。一旦癌症已扩散到其它组织和器官，手术程序必须补充其它更专一性的程序，来根除患病的或恶性的细胞。大部分常用的治疗患病的或恶性的细胞的补充程序，如化疗或生物照射，不能局限于肿瘤细胞，并且虽然它们具有对恶性细胞比例较大的破坏作用，还是常常在某些程度上影响正常细胞。

已用生育酚、生育三烯酚和维生素E的某些衍生物作为促凋亡药剂和DNA合成抑制剂。结构上，维生素E是由苯并二氢吡喃醇头部和烷基侧链构成的。有8种天然存在的维生素E形式：alpha(α)、beta(β)、gamma(γ)和delta(δ)生育酚，和α、β、γ和δ生育三烯酚。生育酚和生育三烯酚不同在于，它们具有饱和的植基侧链，而不是未饱和的异戊二烯基侧链。四种形式的生育酚和生育三烯酚的不同在于苯并二氢吡喃醇头部上的甲基基团的数目(α有3个，β和γ有2个，而δ有1个)。

RRR-α-生育酚琥珀酸酯是RRR-α-生育酚的衍生物，它的结构通过酯键被修饰，在苯并二氢吡喃头部的6-位具有一个琥珀酰基链段而不是羟基链段。该RRR-α-生育酚的酯连接的琥珀酸链段具有维生素E影响触发凋亡和抑制DNA合成的生物学作用的最强大形式。该维生素E形式诱导肿瘤细胞经历凋亡，同时对正常细胞没有凋亡诱导作用。该维生素E形式作为抗癌药剂的最大优点是，许多癌细胞低水平表达或不表达能切开琥珀酸链段的酯酶，而该酯酶将RRR-α-生育酚的琥珀酸酯形式转换成游离RRR-α-生育酚形式。RRR-α-生育酚不显示强大的抗增殖作用和凋亡触发生物活性。然而，酯连接的维生素E琥珀酸酯在体内是无效的，因为宿主中的天然酯酶切去琥珀酸链段，形成无效的抗癌药剂RRR-α-生育酚。

现有技术的缺陷在于，缺乏在各种各样的病理生理状况下抑制不希望的或失控的细胞增殖，而对正常细胞没有或几乎没有影响的有效方法。本发明填补了本领域这一长期存在的需要。

发明简述在本发明的一个实施例中，提供了一种化合物，具有结构式其中X是氧、氮或硫；R1选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧酸、羧酸酯(盐)、羧酰胺、酯、硫代酰胺、硫醇酯、硫醇酸、糖、烷氧基-连接的糖、胺、磺酸酯(盐)、硫酸酯(盐)、磷酸酯(盐)、醇、醚和腈；R2选自氢、甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R3选自氢、甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R4选自甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；和R5选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧基、酰胺和酯；其中当X是氧时，R2是甲基，R3是甲基，R4是甲基而R5是植基，R1不是丁酸。

在本发明的另一个实施例中，提供了一种治疗细胞增殖疾病的方法，该方法包括施给动物药物学上有效量的化合物，该化合物具有结构式：其中X是氧、氮或硫；R1选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧酸、羧酸酯(盐)、羧酰胺、酯、硫酰胺、硫醇酯、硫醇酸、糖、烷氧基-连接的糖、胺、磺酸酯(盐)、硫酸酯(盐)、磷酸酯(盐)、醇、醚和腈；R2选自氢、甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R3选自氢、甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；R4选自甲基、苄基羧酸、苄基羧酸酯(盐)、苄基羧酰胺、苄酯、糖和胺；和R5选自烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、羧基、酰胺和酯。

在本发明的另一个实施例中，提供了一种含有本文公开的化合物和一种药物学上可接受的载体的药物组合物在本发明的另一个实施例中，提供了一种诱导细胞凋亡的方法，该方法包括使所述细胞与药物学上有效量的本发明的化合物接触的步骤。

本发明的其它方面、特征、益处和优点将从下文对本发明根据公开目的提供的优选例的描述中变得清楚。

附图简述通过参考在附图中说明的某些实施例，其中获得、简要总结在详细的、更特定的本发明描述可被理解的本发明的上述特征、优点和目的，以及其它将变得清楚的方面。这些附图构成了本说明书的一部分。然而还要注意，附图说明了本发明的优选例，因此不被看作是限制其范围。

图1显示了生育酚、生育三烯酚和其它基于苯并二氢吡喃醇化合物的一般结构。

图2显示了目前合成并测试过的一般基于生育酚的化合物1-29。

图3A、3B和3C显示在位置R1化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合成方法。

图4显示在位置R2化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合成方法。

图5显示在位置R3和R4化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合成方法。

图6显示在位置R5化学改变苯并二氢吡喃醇化合物的通用有机合成方法。

发明详述本文所用的术语“个体”指动物或人。

本文所用的术语“生物学抑制性的”或增殖细胞生长的“抑制”应包括部分或全部生长抑制，还意味着包括细胞增殖或生长速率的下降。可通过评估试验物质对组织培养物中恶性或异常增殖的靶细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长的影响，或其它本领域一般技术人员已知的方法确定本发明组合物的生物抑制剂剂量。

本文所用的术语“细胞程序性死亡或凋亡的诱导”应包括显示部分或全部细胞死亡，且细胞显示确定的形态学和生物化学凋亡特征。可通过评估试验物质对组织培养物中恶性的或异常增殖靶细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长的影响，或其它本领域一般技术人员已知的方法确定本发明组合物的诱导凋亡的剂量。

本文所用的术语“细胞循环停滞的诱导”应包括由于处理的细胞被封阻在G0/G1或G2/M细胞循环期的生长停滞。可通过评估试验物质对组织培养物中靶恶性或异常增殖细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长的影响，或其它本领域一般技术人员已知的方法确定本发明组合物的诱导细胞循环停滞的剂量。

本文所用的术语“细胞分化的诱导”应包括由于处理的细胞被诱导经历细胞分化(该阶段不发生细胞增殖)的生长停滞。可通过评估试验物质对组织培养物中恶性或异常增殖靶细胞生长，动物和细胞培养物中肿瘤生长的影响，或其它本领域一般技术人员已知的方法确定本发明组合物的诱导细胞分化的剂量。

本发明提供生育酚、生育三烯酚和其它带或不带饱和植基或不饱和异戊二烯基侧链的苯并二氢吡喃衍生物，及其同类物。利用醚和数种其它化学键来将不同链段与生育酚生育三烯酚及其它苯并二氢吡喃衍生物连接，可产生新的内用抗癌化合物。图1显示了本发明的新颖化合物的一般结构，而图3-6提供了其合成的可能途径。这些分子的新颖特征包括：苯并二氢吡喃结构的位置R1-R5的化学官能化，植基和异戊二烯基侧链的化学官能化，特别是基于生育酚和生育三烯酚的化合物(图1)。特别优选的化合物包括2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(1)、2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)丙酸(2)、2,5,8-三甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(7)、2,7,8-三甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(8)、2,8-二甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(9)、2-(N,N-(羧基甲基)-2(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(12)、2,5,7,8-四甲基-(2RS-(4RS,8RS,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(15)、2,5,7,8-四甲基-2R-(2RS,6RS,10-三甲基十一烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(17)、氯化3-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)丙基-1-铵(19)、2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-3-烯-6-基氧基)乙酸(20)、2-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)三乙基硫酸铵(21)、6-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃)乙酸(22)、2,5,7,8-四甲基-(2R-(十七烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(25)、2,5,7,8-四甲基-2R-(4,8-二甲基-1,3,7EZ壬三烯)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(26)、和E,Z,RS,RS-(植基三甲基苯硫酚-6-基氧基)乙酸(27)。

本发明药物动力学设计的化合物具有提高的治疗指数，并且是癌细胞生长的强大抑制剂，即它们显示高抗肿瘤活性，而具有极小的副作用。由于在哺乳动物中没有已知的醚酶，不能轻易降解这些化合物。这些化合物可用于治疗与过量细胞增殖有关的癌症和疾病，以及由于细胞杀伤机制受抑制而导致的细胞大量积聚，而且副作用非常小。本发明的化合物通过诱导凋亡和DNA合成停滞抑制癌细胞生长。这些化合物对凋亡的诱导是通过活化TGF-β、应激激酶和Fas/Fas配体信号传递途的活化来调节的。不排除其它途径，如神经酰胺产生的凋亡诱导。这些生长抑制剂性能使化合物可用于治疗增殖性疾病，包括不同细胞类型和种系的癌症、非肿瘤性过度增生疾病和与凋亡信号传递途径缺陷有关的疾病。本发明的几种化合物同时是凋亡的强诱导物和代表不同细胞种系的肿瘤细胞DNA合成停滞的强抑制剂。

说明了本发明的化合物在治疗癌症和其它涉及过量细胞增殖或细胞不能死亡的疾病和异常中的治疗用途。以新颖衍生物(表1和2)的EC50浓度显示诱导人乳腺癌细胞(MDA MB435,MDA MB 231，和MCF-7乳腺癌细胞)、人前列腺癌细胞(PC-3、DU-145和LnCaP)、人卵巢肿瘤细胞(C-170)、人宫颈癌肿瘤细胞(ME-180)、人子宫内膜细胞(RL-95-2)、人淋巴样细胞(骨髓瘤，Raji,Ramos,Jurkat和HL-60)，结肠癌细胞(HT-29和DLD-1)和肺癌细胞(A-549)的凋亡。显示新的衍生物不诱导正常人乳房表皮细胞(HMEC)和不死化，但是非肿瘤性的MCF-10A乳房细胞的凋亡。

可用本发明的这些新化合物和方法治疗肿瘤病和非肿瘤病。肿瘤病的代表例是卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、膀胱癌、肺癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、睾丸癌、神经胶质瘤、纤维肉瘤、成视网膜细胞瘤、骨髓瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、结肠癌、肾癌、胰脏癌、基底细胞癌和鳞状细胞癌。非肿瘤疾病的代表例选自牛皮癣、良性增生性皮肤病、鱼鳞癣、乳头瘤、视网膜变性、硬皮病和血管瘤。

本发明的化合物和方法可用于治疗由于所选细胞不能经历正常细胞程序性死亡或凋亡发生的非肿瘤疾病。由于细胞不能死亡发生的疾病和异常的代表例是自身免疫病。自身免疫病的特征是免疫细胞破坏自身细胞、组织和器官。一组代表性的自身免疫病包括自身免疫甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、系统性红斑狼疮、疱疹样皮炎、乳糜泻和风湿性关节炎。本发明不限于自身免疫，还包括所有具有免疫成分的异常，如与心血管空斑形成有关的炎症过程，或紫外线照射引起的皮肤损伤。

可用本发明的化合物和方法治疗由于病毒感染引起的疾病和异常。由于病毒感染引起的疾病和异常的代表例是人免疫缺陷病毒(HIV)。由于这些化合物作用于胞内信号传递网络，它们能作用于任何类型的外部细胞信号，如细胞因子、病毒、细菌、毒素、重金属等。

可用本发明的方法治疗任何动物。最优选的，本发明的方法可用于人。

一般为了实现药理性有效细胞杀伤和抗增殖效果，可以任何治疗有效的剂量施用这些化合物及其同类物。优选以0.1mg/kg-约100mg/kg的剂量施用结构修饰的生育酚和生育三烯酚和同类物。更优选的，以约1mg/kg-约10mg/kg的剂量施用结构修饰的生育酚和生育三烯酚和类似物。

可通过外用、眼内、肠道外、口腔、鼻内、静脉内、肌肉内、皮下、或任何其它合适途径施用本发明的组合物。施用的剂量视年龄、疾病的临床阶段和程度，或个体的遗传因素、部位、重量、同时治疗(如存在)的种类，病理或恶性状况的性质而定。可以胶囊、片剂、溶液、悬液或酏剂等用于口服的形式，溶液、悬液或乳剂等无菌液体形式使用本发明方法中所用的有效传递系统。对于外用，可使用油膏、霜或喷剂。优选用任何惰性载体与合适的增溶剂，如盐水或磷酸缓冲盐，或其它方法中化合物使用的本发明具有合适溶解性的载体，如乙醇、丙酮或DMSO联用。

存在各种各样由于缺乏正常细胞死亡引起的病理性癌细胞和非癌细胞增殖情况和细胞聚集，对于它们，本发明的组合物和方法将提供治疗益处。这些病理情况可存在于几乎所有能异常细胞增殖或程序性细胞死亡机制有缺陷的细胞类型中。在显示病理性或异常生长，或异常死亡的细胞类型中有(1)成纤维细胞，(2)血管内皮细胞和(3)表皮细胞。可从上文看出，本发明的方法可用于在个体的所有或几乎所有器官和组织系统中治疗局部或扩散的病理情况。

特别考虑，可用新的本发明基于苯并二氢吡喃的化合物及其衍生物制备药物组合物。就此，药物组合物含有本发明的新颖化合物和药物学上可接受的载体。本领域一般技术人员不需实验即可确定施用本发明的化合物和同类物的合适剂量和途径。

因此，本发明针对设计和有效使用能专一性靶向癌细胞，并下调生长刺激信号、或上调生长抑制信号、或下调存活信号和/或上调死亡信号的新颖药剂。更具体的，本发明创造了激活生长抑制因子、触发死亡信号传递途径并抑制DNA合成的新颖药剂，并确定了其特征。

给出下列例子，用于说明本发明的各种实施例，而不是为了以任何形式限制本发明。

实施例1有机合成方法通过结构修饰苯并二氢吡喃环系统，能合成各种生育酚、生育三烯酚和其它带或不带饱和植基或未饱和异戊二烯基侧链的苯并二氢吡喃衍生物(图3-8)。结构变量R1、R2、R3、R4、R5和X表示苯并二氢吡喃基上被修饰的基团。用烷基化化学，可合成大量含有不同R1基团的化合物，特别是当X是氧时。烷基化后，R1基团的进一步化学修饰能合成各种各样的新颖化合物。溴化苯并二氢吡喃基的苄基的甲基提供了能改变R2、R3和R4基团的中间物。改变基团R5也是可能的，尤其是当从商品可购得的6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸开始时。将X改变为除了氧以外的基团(在生育酚和生育三烯酚中X是氧)可使用钯化学(对于X=CH2)和亲核芳族取代(对于X=N或S)实现。其它对苯并二氢吡喃结构的可能修饰包括：3-4位的不饱和化；环缩小；产生5元呋喃基环；和杂原子取代(N或S)苯并二氢吡喃环上的氧。

使用的试剂可以是商品购得的，或根据已知程序制备的。通过蒸馏获得无水CH2Cl2和THF。所用的所有其它溶剂是试剂级的。无水反应条件维持在烘箱干燥的玻璃器皿中的微带正压力的氩气中。用从EM Science购得的230-400筛目二氧化硅进行硅胶层析。在Varian Unity频谱仪上分别在300.132MHz和75.033MHz频率获得常规1H-和13C-NMR。NMR谱参照TMS(0ppm)或CDCl3的同位素杂质峰(对于1H和13C，分别是7.26和77.0ppm)。在德克萨斯大学奥斯丁分校的质谱中心进行了高分辨电子冲击离子化质谱分析。

实施例2新生育酚化合物的合成和表征2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(1)用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)处理R,R,R-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(1.2g,30mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。产物1是蜡状的米色固体(0.50克，88％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.07,2.14,2.16(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),4.34(s,2H,OCH3)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),69.2(OCH2),75.0(2-C),117.8,123.2,125.4,127.3(芳基C)，147.0,148.5(芳基C-O)，173.7(COOH)；HRMS(CI,m/z):489.394374(M+H+,C31H53O4计算值：489.394386)。用HMQC、DEPT-135和1H-NOSEY确认所有值。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)丙酸(2)用合成1的相同方法，使用合适的溴烷酸合成了化合物2-6。(产率89％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.09,2.14,2.19(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),2.85(t,J=6.4Hz,2H,CH2COOH),3.96(t,J=6.4Hz,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),35.1,37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),67.5(OCH2),74.8(2-C),117.5,122.9,125.8,127.8(芳基C)，147.6,148.0(芳基C-O)，177.1(COOH)；HRMS(CI,m/z):503.408610(M+H+,C32H55O4计算值：503.410036)。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)丁酸(3)(85％产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,26H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.14,2.17,2.21(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.62(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),2.72(t,J=7.2Hz,2H,CH2COOH),3.74(t,J=6.1Hz,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.9(2a-CH3),24.4,24.8,25.3(CH2),28.0(CH),30.9,31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),71.3(OCH2),74.8(2-C),117.5,122.9,125.7,127.7(芳基C)，147.8,147.9(芳基C-O)，178.9(COOH)；HRMS(CI,m/z):516.424374(M+H+,C33H57O4计算值：516.424386)。

2,5,7,8-四甲基-2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)缬草酸(4)(90％产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,28H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’,10’,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.09,2.14,2.18(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.49(t,J=6.8Hz,2H,CH2COOH),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.68(t,J=5.5Hz,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0,21.4(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),30.0(CH2),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),35.8,37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),72.2(OCH2),74.9(2-C),117.8,123.2,125.4,127.3(芳基C)，147.6,148.3(芳基C-O)，178.7(COOH)；HRMS(CI,m/z):530.433514(M+H+,C34H595O4计算值：530.433516)。

2,5,7,8-四甲基-2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)己酸(5)(产率77％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,30H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.08,2.12,2.16(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.32(t,J=6.5Hz,2H,CH2COOH),2.57(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.64(t,J=5.5Hz,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.8,11.9,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.6,24.8,25.7(CH2),28.0(CH),30.0(CH2),31.3(3-CH2),32.7,32.8(CH),34.0,37.3,37.3,37.4,39.3,40.0(CH2),72.6(OCH2),74.7(2-C),117.4,122.7,125.4,127.8(芳基C),147.6,148.2(芳基C-O)，179.6(COOH)；HRMS(CI,m/z):545.457026(M+H+,C35H61O4计算值：545.456986)。

2,5,7,8-四甲基-2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)辛酸(6)(产率91％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,34H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.08,2.11,2.16(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.36(m,2H,CH2COOH),2.58(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.62(t,J=5.5Hz,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.6,24.8,25.1,25.7,26.6(CH2),28.0(CH),30.0(CH2),31.3(3-CH2),32.7,32.8(CH),34.0,37.3,37.3,37.4,39.3,40.0(CH2),72.7(OCH2),74.6(2-C),117.6,122.8,125.5,127.6(芳基C)，147.5,148.3(芳基C-O)，179.4(COOH)；HRMS(CI,m/z):573.484396(M+H+,C35H61O4计算值：573.488286)。

2,5,8-三甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(7)用溴乙酸甲酯(0.4克，2.8毫摩尔)处理R,R,R-α-生育酚(75毫克，0.18毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(0.5g,12.5mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到蜡状的米色固体7(80毫克，97％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.12,2.14(2xs,6H,5a-,8a-CH3),2.61(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),4.59(s,2H,OCH3),6.53(s,1H，芳基CH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.2,16.1,12.7(5a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.7,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),27.9(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.2,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),66.8(OCH2),74.8(2-C),113.8,120.7,123.1,127.3(芳基C)，147.1,148.2(芳基C-O)，175.3(COOH)；HRMS(CI,m/z):475.377840(M+H+,C30H51O4计算值：475.378736)。

2,7,8-三甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(R)用溴乙酸甲酯(1.1克，7.4毫摩尔)处理R,R,R-α-生育酚(100毫克，0.24毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(1.0g,25mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到蜡状的米色固体8(110毫克，97％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.12,2.19(2xs,6H,7a-,8a-CH3),2.61(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),4.59(s,2H,OCH2),6.39(s,1H，芳基CH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.9,12.0(7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.7,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),27.9(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.2,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),66.6(OCH2),75.7(2-C),110.6,117.7,125.0,126.3(芳基C),146.9,148.7(芳基C-O)，175.0(COOH)；HRMS(CI,m/z):475.377962(M+H+,C30H51O4计算值：475.378736)。

2,8-二甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并三氢吡喃-6-基氧基)乙酸(9)用溴乙酸甲酯(1.1克，7.4毫摩尔)处理R,R,R-α-生育酚(100毫克，0.25毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液，并加入过量的粉末状NaOH(1.0g,25mmol)。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到蜡状的米色固体9(111毫克，98％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.15(s,3H,8a-CH3),2.71(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),4.59(s,2H,OCH2),6.48(d,J=3.0Hz,1H，芳基CH)，6.61(d,J=3.0Hz,1H，芳基CH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):16.2(8a-CH3),19.6,19.7(CH3),21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),24.0(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),27.9(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.2,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),65.7(OCH2),75.8(2-C),112.3,115.6,121.1,127.5(芳基C)，147.2,149.9(芳基C-O)，174.8(COOH)；HRMS(CI,m/z):460.3552022(M+H+,C30H51O4计算值：460.355262)。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酰胺(10)用N-羟基琥珀酰亚胺(26毫克，0.23毫摩尔)和二环己基碳二亚胺(46毫克，0.23毫摩尔)处理1(0.1克，0.2毫摩尔)的CH2Cl2(5毫升)溶液。2分钟后，形成白色沉淀。搅拌得到的悬液2小时。再搅拌反应物6小时。将反应混合物冷却至-30℃并过滤。浓缩滤液，通过硅胶层析用EtOAc(35％,v/v)的己烷溶液洗脱，纯化得到的无色油。这得到白色固体(75毫克，76％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.10,2.12,2.16(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),4.19(s,2H,OCH3),6.36,6.92(2x宽，2H,NH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8,(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),70.9(OCH2),74.9(2-C),117.8,123.3,125.4,127.3(芳基C)，146.5,148.4(芳基C-O)，172.1(COOH)；HRMS(CI,m/z):488.409341(M+H+,C31H54NO3计算值：488.410370)。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸甲酯(11)用N,N-二甲基氨基吡啶(26毫克，0.23毫摩尔)、甲醇(1ml)和二环己基碳二亚胺(46毫克，0.23毫摩尔)处理1(0.1克，0.2毫摩尔)的CH2Cl2(5毫升)溶液。2分钟后，形成白色沉淀。搅拌得到的悬液6小时。将反应混合物冷却至-30℃并过滤。浓缩滤液，通过硅胶层析用EtOAc(40％,v/v)的己烷溶液洗脱，纯化得到的无色油。这产生白色固体(82毫克，80％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.10,2.16,2.20(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.85(s,3H,OCH3),4.32(s,2H,OCH3)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),50.2(OCH3),69.8(OCH2),74.9(2-C),117.6,123.0,125.6,127.5(芳基C)，147.6,148.2(芳基C-O)，169.8(COOH)；HRMS(CI,m/z):503.408411(M+H+,C32H55O4计算值：503.410036)。

2-(N,N-(羧甲基)-2(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(12)用亚氨基二乙酸二乙酯(77毫克，0.4毫摩尔)和六氟磷酸O-7-氮杂苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓(HATU)(46毫克，0.23毫摩尔)处理1(0.2克，0.4毫摩尔)的CH2Cl2(5毫升)溶液。12小时后，将反应混合物浓缩至糊状物，然后通过硅胶层析用EtOAc(30％,v/v)的己烷溶液洗脱纯化。这得到所要的无色油状二酯中间物(150毫克，55％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,30H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.78(m,2H,3-CH2),2.08,2.13,2.17(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.58(t,J=6.8Hz,2H,4-CH2),4.22(q,J=7.4Hz,4H,OCH2),4.30,4.33,4.42(3xs,6H,2x NCH2,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),14.0(CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),48.1,49.4(NCH2),61.2,61.5(OCH2),71.8(OCH2),74.8(2-C),117.5,122.9,125.6,127.4(芳基C)，148.0,148.1(芳基C-O)，168.8,169.0(CO)；MS(CI,m/z):660(M+H+,C39H65NO7计算值：659.47610)。

用1N NaOH(1毫升)处理二酯中间物溶液(0.15克，0.23毫摩尔)的乙醇(4毫升)溶液。70℃搅拌得到的雾状混合物15小时。用1N HCl酸化反应混合物，真空除去乙醇。用CHCl3(5×20ml)萃取得到的水溶液，用Na2SO4干燥合并的有机层。这得到白色固体状的12(0.13克，52％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.70(m,2H,3-CH2),2.01,2.05,2.08(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.47(m,2H,4-CH2),4.18(m,4H,2xNCH2),4.31(m,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.5,11.6,12.4(5a-,7a-,8a-CH3),19.4,19.5(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.4,32.5(CH),37.0,37.2,37.5,39.1,40.0(CH2),48.1,49.4(NCH2),71.1(O-C),74.8(2-C),117.5,122.9,125.4,127.2(芳基C)，147.8,148.1(芳基C-O),168.8,169.0(CO)；HRMS(CI,m/z):604.420882(M+H+,C35H58NO7计算值：604.421329)。

2-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基))乙-1-醇(13)用碘乙醇(1.7克，10毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(2.5g,63mmol)处理R,R,R-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用30％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到黄色油状的13(0.40克，73％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.07,2.14,2.16(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.79(m,2H,OCH2),3.94(m,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.3,40.0(CH2),63.1,69.2(OCH2),75.0(2-C),117.8,123.4,126.4,128.3(芳基C)，149.2,149.5(芳基C-O)；MS(CI,m/z):475(M+H+,C35H61O4计算值：474.40729)。

2-(2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(14)用溴乙酸甲酯(0.8克，5.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(0.7g,18mmol)处理2,2,5,7,8-五甲基-6-苯并二氢呋喃醇(0.3克，1.36毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用30％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到白色固体状的14(0.31克，82％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.31(s,6H,CH3),1.81(t,J=7.8Hz,3-CH2),2.10,2.16,2.19(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.61(t,J=7.8Hz,2H,4-CH2),4.39(s,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,11.8,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),20.9,26.8,32.7(烷基),69.1(OCH2),72.9(2-C),117.5,123.2,125.5,127.3(芳基)，147.0,148.6(O-芳基)，173.8(COOH)；HRMS(CI,m/z):279.159238(M+H+,C16H23O4计算值：279.159634)。

2,5,7,8-四甲基-(2RS-(4RS,8RS,12-三基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(15)用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g,30mmol)处理全外消旋-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到蜡状的米色固体15(80％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.88(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.84(m,2H,3-CH2),2.07,2.14,2.16(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.61(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),4.34(s,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.5,11.7,12.6(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.3(CH2),22.6,22.8(CH3),23.8(2a-CH3),24.5,24.9(CH2),29.0(CH),31.2(3-CH2),32.6,32.8(CH),37.5,37.8,37.9,39.5,41.0(CH2),69.3(OCH2),75.1(2-C),117.9,123.3,125.5,127.3(芳基C)，147.0,148.0(芳基C-O),173.9(COOH)；HRMS(CI,m/z):489.394375(M+H+,C31H53O4计算值：489.394383)。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(羧基)苯并二氢吡喃-6-基氧基))乙酸(16)用溴乙酸甲酯(0.8克，5.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(0.7g,18mmol)处理(-)-(R)-6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸(0.34克，1.36毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用30％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到白色固体16(0.33克，80％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.52(s,3H,2a-CH2),2.10(m,2H,3-CH3),2.12,2.16,2.19(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.56(t,J=6.5Hz,2H,4-CH2),4.36(s,2H,OCH2)。

2,5,7,8-四甲基-2R-(2RS,6RS,10-三甲基十一烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)羧酸(17)搅拌并回流10克(40毫摩尔)(-)-(S)-6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢-吡喃-2-羧酸和0.5克对甲苯磺酸一水合物的200毫升甲醇溶液4小时。冷却后，用水稀释溶液，并用乙醚萃取。用饱和碳酸氢钠水溶液、H2O、和盐水(1×30ml)洗涤合并醚层，然后用Na2SO4干燥。浓缩得到的溶液并真空干燥48小时。这得到10克(95％)无色固体状的(-)-(S)-6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸甲酯，不经进一步纯化使用。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.52(s,3H,2a-CH2),2.10(m,2H,3-CH3),2.12,2.16,2.19(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.56(t,J=6.5Hz,2H,4-CH2),3.55(s,3H,OCH2)；MS(CI,m/z):264.422M+H+,C15H20O4计算值：265.3224。

在2克该酯的7.5毫升N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中加入2.6克(18.8毫摩尔)无水颗粒状碳酸钾，然后加入2.3毫升(20毫摩尔)苄基氯。室温搅拌得到的浆液41小时，然后倒入50毫升水中，以通常途径用乙醚后处理。50℃在高真空下从产物中除去过量苄基氯。获得2.69克(100％)黄色固体状的纯(TLC)(-)-(S)-6-苄氧基-2,5,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-2-羧酸甲酯，熔点102-106℃。制备该化合物的无色固体状的分析级标本，熔点108-109℃(从乙醚/甲醇中)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.54(s,3H,2a-CH2),2.01(m,2H,3-CH3),2.14,2.17,2.19(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.51(t,J=6.7Hz,2H,4-CH2),3.64(s,3H,OCH3),5.12(s,2H,6-OCH2),7.15(m,5H,ArH)；MS(CI,m/z):355.232 M+H+:C22H25O4计算值：354.448。

将3.45克(10毫摩尔)上述醚酯的20毫升甲苯溶液和10毫升CH2Cl2一起在干冰/丙酮浴中搅拌，同时用10分钟滴加12毫升(18毫摩尔)25％二异丁基氢化铝的甲苯溶液(Texas Alkyls)。约-70℃搅拌30分钟后，用10毫升MeOH小心分解(-70℃)反应混合物。加入50毫升水和50毫升1N的H2SO4水溶液后，将混合物温至室温，用乙醚以通常方法后处理，得到3.2克(100％)粗的无水[(+)S-6-苄氧基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-甲醛]，该产物是粘稠的油状物，通过硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc的已烷溶液洗脱。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.53(s,3H,2a-CH2),2.11(m,2H,3-CH3),2.24,2.27,2.29(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.481(t,J=6.7Hz,2H,4-CH2),5.19(s,2H,6-OCH2),7.20(m,5H,ArH),9.6(s,1H,CHO)；MS(CI,m/z):325.332M+H+:C21H24O4计算值：324.422。

将9.6克假紫罗酮的溶液溶于100毫升95％乙醇中；室温下加入0.68克氢硼化钠(溶于乙醇)后，搅拌混合物2小时，放置过夜。将混合物加到2克氢氧化钠的500毫升水溶液中。用乙醚萃取混合物，用水洗涤醚萃取物，干燥并浓缩。真空蒸馏剩余的油得到无色油(假紫罗醇)；沸点112-120℃/5mmHG,7.7克(80％)。

在2.97克假紫罗醇的10毫升乙腈溶液中，一边搅拌(温度维持在30℃以下)加入将无水氯化氢通入三苯基膦的无水乙醚溶液获得的4.53克三苯基膦盐酸。室温下放置混合物过夜，然后减压在50℃下除去乙腈。在剩余物中加入4.47毫克(+)S-6-苄氧基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-甲醛的15毫升二甲基甲酰胺溶液，搅拌混合物。当获得澄清溶液时，在15℃以下搅拌滴加从0.352克钠和7毫升无水甲醇制备的甲醇钠。由于形成内鎓盐，反应混合物变成红色。加完后，10℃继续搅拌30分钟；然后将混合物逐渐加热到80℃，此时红色消失。将产物倒入200毫升50％的甲醇水溶液，干燥并真空浓缩。将剩余的油溶解在20毫升乙醚中，加入氯化汞的乙醚溶液，直到不再形成沉淀。这时滤出沉淀并用水洗涤滤液，干燥并浓缩后，得到4.7克黄色油状物。顺式和反式的链烯粗混合物(MS(CI,m/z):485.22,M+H+,C34H44O2的计算值是484.7255)溶于30毫升乙酸乙酯中，加入0.80克5％钯碳，在40psi的H2下振摇混合物30小时，然后滤过硅藻土(Celilte)用乙酸乙酯充分漂洗。浓缩滤液，用硅胶层析纯化，用EtOAc的己烷(1∶9)溶液洗脱，得到2,5,7,8-四甲基-(2R-(2RS,6RS,10-三甲基十一烷基))-6-苯并二氢吡喃醇(60％产率)1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.97(m,12H,2a’-,6a’-,10a’-,11’-CH3),1.1-1.7(m,20H,2’-,6’-,10’-CH,1’-,3’-,4’-,5’-,7’-,8’-,9’-CH2,2a-CH3),1.88(m,2H,3-CH2),2.17,2.19,2.20(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.63(t,J=6.7Hz,2H,4-CH2)；MS(CI,m/z):403.27,M+H+:C27H46O2计算值：402.6632。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g,30mmol)处理2,5,7,8-四甲基-(2R-(2RS,6RS,10-三甲基十一烷基))-6-苯并二氢吡喃醇(0.466克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。这得到76％产率的化合物17。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.97(m,12H,2a’,6a’-,10a’-,11’-CH3),1.2-1.7(m,20H,2’-,6’-,10’-CH,1’-,3’-,4’-,5’-,7’-,8’-,9’-CH2,2a-CH3),1.92(m,2H,3-CH2),2.18,2.20,2.23(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.68(t,J=6.8Hz,2H,4-CH2),4.48(s,2H,OCH2)；MS(CI,m/z):461.44,M+H+:C29H48O4计算值：460.700。

2,5,7,8-四甲基-2R-(2,6,10,三甲基-1,3,5,9EZ癸四烯)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(18)在(-)-(S)-6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸甲酯(20毫克，0.075摩尔)的50毫升无水DMF溶液中，加入咪唑(13毫克，0.1911摩尔)和叔丁基二甲基-氯硅烷(14毫克，0.0933摩尔)。23℃搅拌混合物24消失，然后用乙醚处理，倒入1N HCl。干燥有机萃取物(盐水，Na2SO4)，真空浓缩。用快速层析纯化粗产物(9∶1己烷∶乙酸乙酯)，得到6-[二甲基(1,1-二甲基乙基)甲硅烷基]-2,5,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-2-羧酸酯(TBS保护的甲酯)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.12(s,6H),1.102(s,9H),1.18(s,3H),1.48(s,3H),1.645(s,3H),2.07(s,3H),2.2(t,J=6.5hz 2H),2.48-2.7(m,2H)和3.72(s,3H,OCH3)；MS(CI,m/z):379.32,M+H+:C21H34O4计算值：378.586。

搅拌上述醚酯的3.78克(10毫摩尔)的20毫升甲苯和10毫升CH2Cl2的溶液，以便在干冰/丙酮浴中冷却，同时用10分钟以上滴加12毫升(18毫摩尔)25％二异丁基氢化铝的甲苯(Texas,Alkyls)溶液。约-70℃搅拌30分钟后，小心用10毫升MeOH分解反应混合物(-70℃)。加入50毫升水和50毫升1N的H2SO4水溶液后，将混合物温至室温，用乙醚以常规方式后处理，得到粘稠油状的3.2克(90％)粗醛[(+)S-6-[二甲基(1,1-二甲基乙基)甲硅烷基]-2,5,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-2-甲醛]，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc的己烷溶液洗脱。浓缩该溶液，然后真空干燥48小时，得到固体状的TBDS醛(78％)，熔点66-68℃。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.12(s,6H),1.1(s,9H),1.38(s,3H),1.64(s,3H),2.12(s,3H),2.16(s,3H),2.3-2.2(m,2H),2.53(m,2H)和9.82(d,J=1.4Hz,1H)；MS(CI,m/z):349.40,M+H+:C20H32SiO3计算值：348.560。

在2.97克假紫罗醇的10毫升乙腈溶液中，一边搅拌(温度维持在30℃以下)加入将无水氯化氢通入三苯基膦的无水乙醚溶液获得的4.53克三苯基膦盐酸。室温下放置混合物过夜，然后减压在50℃下除去乙腈。在剩余物中加入4.80克[(+)S-6-[二甲基(1,1-二甲基乙基)甲硅烷基]-2,5,7,8-四甲基-苯并二氢吡喃-2-甲醛]的15毫升二甲基甲酰胺溶液，搅拌混合物。当获得澄清溶液时，在15℃下搅拌滴加从0.352克钠和7毫升无水甲醇制备的甲醇钠。形成的内鎓盐将反应混合物变成红色。加完后，10℃继续搅拌30分钟；然后将混合物逐渐加热到80℃，此时红色消失。将产物倒入200毫升50％的甲醇水溶液，干燥并真空浓缩。将剩余的油溶解在20毫升乙醚中，加入氯化汞的乙醚溶液，直到不再形成沉淀。这时滤出沉淀并用水洗涤滤液，干燥并浓缩后，得到4.7克黄色油状物。顺式和反式的链烯粗混合物(MS(CI,m/z):485.22,M+H+,C34H44O2的计算值是484.7255)溶于THF中，加入四-正丁基氟化铵(0.031摩尔)。23℃搅拌40分钟后，将混合物倒入水中，萃取入乙醚。干燥并浓缩乙醚萃取物，用硅胶层析纯化，用EtOAc的己烷(1∶9)溶液洗脱，得到2,5,7,8-四甲基-2R-(2,6,10-三甲基-1,3,5,9E:Z癸四烯基)-6-苯并二氢吡喃醇(68％产率)1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.28(s,3H,2aCH3),1.65(s,3H),1.70(s,6H),1.72(s,3H),1.9(m,6H),2.18(s,3H),2.35(S,6H),2.53(t,J=6.6Hz,2H,4CH2),5.13-5.27(m,3H)和6.44(m,2H)；MS(CI,m/z):395.17,M+H+:C27H38O2计算值：394.60。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g,30mmol)处理2,5,7,8-四甲基-2R-(2,6,10-三甲基-1,3,5,9E:Z癸四烯基)-6-苯并二氢吡喃(0.457克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到67％产率的化合物18。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.24(s,3H,2aCH3),1.63(s,3H),1.72(s,6H),1.74(s,3H),1.92(m,6H),2.18(s,3H),2.29(S,6H),2.43(t,J=6.6Hz,2H,4CH2),4.68(s,2H,OCH2),5.10-5.27(m,3H)和6.34(m,2H)；MS(CI,m/z):452.24,M-H+:C27H38O2计算值：452.63。

氯化3-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)丙基-1-铵(19)冷却3-溴丙基胺溴化氢(1.0克，4.6毫摩尔)的2∶1二噁烷/水(45毫升)溶液至0℃，并用K2CO3(6.22克，45毫摩尔)和焦碳酸二叔丁酯(1.5克，6.9毫摩尔)。反应混合物搅拌15小时，同时温热至室温。真空除去二噁烷，用5NHCl酸化剩余的水混合物，用乙酸乙酯萃取(5×25毫升)。用MgSO2干燥合并的有机层，得到无色油状的3-溴-N-(叔丁氧基羰基)丙胺(0.93克，93％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.41(s,9H,2aCH3),2.02(五重，J=6.4Hz,2H,CH2),3.23(m,2H,NCH2),3.41(t,J=6.6Hz,CH2Br),4.8(宽，1H,NH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):28.3(CH3),30.7,32.6,38.9(CH2),79.3(四重C),155.9(CO)；MS(CI,m/z):239.241,(M+H+:C8H16BrNO2计算值：237.03644)。

用3-溴-N-(叔丁氧基羰基)丙胺(0.9克，3.8毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(0.32克，8毫摩尔)处理R,R,R-α-生育酚(0.5克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用10％(v/v)EtOAc的己烷溶液洗脱。这得到无色油状的所要醚(0.45克，66％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,33H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’,10’,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),1.99(四重，J=6.2Hz,2H,CH2),2.07,2.14,2.16(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.43(m,2H,NCH2),3.73(t,J=5.7Hz,2H,OCH2),4.34(s,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.7,12.0,12.9(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.7(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),27.9(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.2,37.4,37.5,39.3,40.1(CH2),70.2(OCH2),74.8(2-C),117.5,122.9,125.5,127.5(芳基C)，147.5,148.0(芳基C-O)，156.0(CO)；MS(CI,m/z):589(M+H+,C37H65NO4计算值：587.49136。

将上述N-保护的醚(0.1克，0.17毫摩尔)溶于4N HCl的二噁烷(1毫升，4毫摩尔)溶液，并搅拌4小时。在反应混合物上吹过氩气流，除去二噁烷。真空干燥得到的物质8小时，得到白色固体状的19(82毫克，99％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,33H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),1.99(四重，J=6.2Hz,2H,CH2),2.07,2.11,2.15(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.29(m,2H,CH2),2.59(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.43(m,2H,NCH2),3.79(m,2H,CH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.8,11.9,12.7(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.9(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),28.4(CH3),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),74.8(OCH2),75.0(2-C),117.5,122.9,126.0,127.3(芳基C)，147.8,148.0(芳基C-O)；HRMS(CI,m/z):487.438887(M+H+,C32H57NO2计算值：487.438935)。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-3-烯-6-基氧基)乙酸(20)加热回流R,R,R-α-生育酚乙酸酯(2克，4.2毫摩尔)的无水甲苯(150毫升)溶液，然后用分成4份的2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(0.96克，4.2毫摩尔)每隔1小时处理1次。反应物回流24小时。此时，反应混合物变成暗红色，沉淀出浅色固体。反应物冷却至室温，过滤，浓缩滤液。用硅胶层析纯化得到的深色油状物，用乙酸乙酯(10％,v/v)的己烷溶液洗脱。这得到无色油状的所要苯并吡喃乙酸酯(1.74克，88％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),2.07,2.13,2.18(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.35(s,3H,CH3CO-),5.61,6.52(2xd,J=10.OHz,2H,CH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.5,11.6,13.1(5a-,7a-,8a-CH3),14.1(CH3),19.6,19.7(CH3),20.4,21.4(CH2),22.6,22.7(CH3),24.4,24.8,(CH2),25.8(2a-CH3),27.9(CH2),30.8(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.2,37.4,39.4,41.0(CH2),60.3(2-C),117.6,119.7,122.3,122.6,128.9,129.6(芳基和乙烯基C),141.2,148.4(芳基C-O),169.4(芳基CO)；HRMS(CI,m/z):471.375799M+H+,C31H50O3计算值：470.375996。

用2N NaOH(20毫升)处理苯并吡喃乙酸酯(1.0克，2.13毫摩尔)的乙醇(20毫升)溶液，60℃搅拌90分钟。冷却反应混合物，用5N HCl酸化，真空除去乙醇。用乙醚萃取得到的水溶液，浓缩成淡黄色油状物，用硅胶层析纯化，用乙酸乙酯(15％,v/v)的己烷溶液洗脱。这得到所要的无色油状苯并吡喃-6-醇中间物(0.92克，98％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),2.14,2.18,2.19(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),5.63,6.55(2xd,J=10.0Hz,2H,CH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):10.8,11.6,12.4(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),21.3(CH2),22.6,22.7(CH3),24.4,24.8(CH2),25.2(2a-CH3),27.9(CH),30.9(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.2,37.4,37.5,39.3,40.5(CH2),50.8(2-C),116.2,117.8,120.1,122.3,123.0,130.0(芳基和乙烯基C),144.6,145.3(芳基C-O)，169.4(CO)；HRMS(CI,m/z):428.365275(M+H+,C29H48O2计算值：428.365431。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g,30mmol)处理苯并吡喃-6-醇中间物(0.9克，2.1毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚层溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。将得到的溶液浓缩成淡黄色油，真空干燥48小时。这得到无色的化合物19(0.90克，88％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),2.07,2.10,2.19(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),4.37(s,2H,OCH3),5.62,6.50(2xd,J=10.0Hz,2H,CH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.3,11.5,12.9(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),21.3(CH2),22.6,22.7(CH3),24.4,24.8(CH2),25.6(2a-CH3),27.9(CH),30.9(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.2,37.4,37.5,39.3,40.9(CH2),60.5(OCH2),69.1(2-C),118.0,119.8,122.8,122.9,129.6,19.8(芳基和乙烯基C),147.5,147.8(芳基C-O),173.4(CO)；HRMS(CI,m/z):487.378731 M+H+,C31H51O4计算值：487.378736。

2-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)三乙基硫酸铵(21)用三氧化硫-N,N-二甲基甲酰胺复合物(0.16克，1.0毫摩尔)处理2-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8R,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基))乙-1-醇(13)(0.1克，0.21毫摩尔)的无水DMF(2毫升)和吡啶(0.6毫升)溶液。用1N HCl淬灭反应混合物，然后用CH2Cl2萃取(5×5毫升)。将氨气气泡通过CH2Cl2溶液10分钟。将得到的溶液浓缩成黄色糊状物，并用硅胶层析纯化，用MeOH(10％,v/v)和三乙胺(2％)的CHCl3溶液洗脱。这得到黄色半固体状的21(92毫克，77％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,33H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),1.95,2.01,2.05(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.45(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2),3.05(m,6H,NCH2),3.79(m,2H,OCH2),4.21(m,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):9.46(CH3),12.4,12.6,13.5(5a-,7a-,8a-CH3),20.3,20.4(CH3),21.3,21.7(CH2),23.3,23.4(CH3),24.5(2a-CH3),25.1,25.5(CH2),28.6(CH),31.9(3-CH2),33.3,33.4(CH),37.9,38.1,40.0,40.8(CH2),46.9(NCH2),67.4,71.9(OCH2),75.5(2-C),118.3,123.5,126.5,128.3(芳基C),148.5(芳基C-O)；HRMS(CI,m/z):554.364102M-NH3,C31H54O6S计算值：554.364119。

6-(2,5,7,8-四甲基-(2R-(4R,8,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃)乙酸(22)将R,R,R-α-生育酚(1.0克，2.3毫摩尔)的无水CH2Cl2(25毫升)溶液冷至0℃。加入二异丙基乙基胺(2毫升，11.6毫摩尔)，然后滴加三氟甲基磺酸酐(5.0克，17.7毫摩尔)。溶液立即变暗，并温至室温，一边搅拌24小时。用水淬灭反应，然后用乙醚萃取(2×100毫升)。用1N HCl(50ml)、H2O(50ml)、盐水(50ml)洗涤合并的醚层，然后用MgSO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油状物，并用硅胶层析纯化，用乙酸乙酯(3％,v/v)的己烷溶液洗脱。这得到所要的黄色油状的三氟甲烷磺酸酯中间物(1.3克，定量)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.07,2.13,2.21(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.62(t,J=6.6Hz,2H,4-CH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.9,13.2,14.0(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),75.6(2-C),118.4,124.4,126.7,128.1(芳基C),139.6,150.9(芳基C-O)；19F-NMR(CDCl3,ppm):-73.52；HRMS(CI,m/z):563.337803(M+H+,C30H50O4F3S计算值：563.338192)。

用LiCl(0.98g,4.62mmol)、三苯基膦(0.37g,1.4mmol)、2,6-二-叔丁基-4-甲基苯酚(2-3颗晶体)、三丁基(乙烯基)锡(0.73克，2.31毫摩尔)和二氯二(三苯基膦)-钯(Ⅱ)(0.24克，0.35毫摩尔)处理上述三氟甲烷磺酸酯(1.3g,2.31mmol)的无水DMF(23毫升)溶液。将该混合物加热到120℃并搅拌。2小时后，再加入三丁基(乙烯基)锡(0.73g,2.31mmol)。8小时后，将反应物冷却至室温，加入水(50毫升)和乙醚(50毫升)的混合物。用1N HCl(6×30ml)和KF(6×30ml)的饱和溶液洗涤醚层。用Na2SO4干燥醚溶液，然后浓缩成深色油状物。用硅胶层析纯化该物质，用乙酸乙酯(3％,v/v)的己烷溶液洗脱，得到澄清油状物的6-乙烯基苯并二氢吡喃醇中间物(0.38克，38％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.86(m,2H,3-CH2),2.20,2.24,2.28(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.62(t,J=6.8Hz,2H,4-CH2),5.18,5.56(2xdd,Jgem=2.3Hz,Jcis=11.2Hz,Jtrans=18.7Hz,2H,=CH2),6.77(dd,J=18.7,11.2Hz,1H,CH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):11.9,16.3,17.2(5a-,7a-,8a-CH3),19.7,19.8(CH3),20.8,21.1(CH2),22.6,22.7(CH3),23.9(2a-CH3),24.5,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.5,37.5,39.4,40.1(CH2),74.9(2-C),116.7,119.0,122.0,129.8,131.2,132.8,136.8(芳基/乙烯基C),150.9(芳基C-O)；HRMS(CI,m/z):440.401602(M+H+,C31H52O计算值：440.401812)。

将上述6-乙烯基苯并二氢吡喃中间物(0.12克，0.27毫摩尔)的无水THF(1毫升)溶液冷至0℃，用9-BBN(0.60ml,0.5M溶于THF,0.3mmol)处理。加热回流反应混合物8小时。用水(1.5ml)淬灭反应，用NaBO3·4H2O处理，搅拌得到的浆液过夜。用CH2Cl2(2×20ml)萃取乙醚(4毫升)和反应混合物。将有机层浓缩成澄清油状物，用硅胶层析纯化，用乙酸乙酯(50％,v/v)的己烷溶液洗脱。这得到所要的无色油状的6-(2-羟基乙基)苯并二氢吡喃中间物(30毫克，24％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.17,2.24,2.28(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.68(t,J=6.8Hz,2H,4-CH2),3.01(t,J=7.5Hz,2H,Ar-CH3),3.74(t,J=7.5Hz,2H,OCH2)；13C-NMR(CDCl3,ppm):12.0,15.1,16.0(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.1(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),62.2(OCH2),72.6(2-C),116.8,122.3,124.9,132.4,133.9(芳基C),150.1(芳基C-O)；HRMS(CI,m/z):458.412154(M+H+,C31H54O2计算值：458.412384)。

用上述6-(2-羟基乙基)苯并二氢吡喃中间物(32毫克，0.07毫摩尔)的CH2Cl2溶液处理氯铬酸吡啶(32毫克，0.1毫摩尔)的无水CH2Cl2(0.5毫升)溶液搅拌反应物2小时，此时用薄层层析未见任何起始物质。加入乙醚(2毫升)，将得到的溶液滤过硅藻土薄板。浓缩滤液，得到黄色油状物(20毫克)。将该油状物溶于叔丁醇(0.5毫升)，用磷酸缓冲液(0.5毫升，1N,pH=4.0)、2-甲基-2-丁烯(0.1毫升)和NaClO2(5.4mg,0.05mmol)处理。搅拌40分钟后，用CHCl3(6×10ml)萃取反应混合物，用Na2SO4干燥合并的有机层。将CHCl3溶液浓缩成黄色油状物，通过制备级薄层层析，用乙酸乙酯(30％,v/v)和乙酸(1％)的己烷溶液洗脱纯化。这得到无色油状的22(20毫克，63％)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.87(m,12H,4a’-,8a’-,12a’-,13’-CH3),1.0-1.6(m,24H,4’-,8’-,12’-CH,1’-,2’-,3’-,5’-,6’-,7’-,9’-,10’-,11’-CH2,2a-CH3),1.81(m,2H,3-CH2),2.17,2.24,2.28(3xs,9H,5a-,7a-,8a-CH3),2.66(t,J=6.8Hz,2H,4-CH2),3.71(s,2H,CH2COOH)；13C-NMR(CDCl3,ppm):12.0,15.3,16.2(5a-,7a-,8a-CH3),19.6,19.7(CH3),20.6,21.0(CH2),22.6,22.7(CH3),23.8(2a-CH3),24.4,24.8(CH2),28.0(CH),28.9,31.2(3-CH2),32.7,32.8(CH),37.3,37.4,37.5,39.4,40.0(CH2),72.6(2-C),117.1,122.2,124.9,132.4,132.7(芳基C),150.2(芳基C-O),179.2(COOH)；HRMS(CI,m/z):472.391583(M+H+,C31H52O3计算值：472.391644)。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(庚基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(23)在室温下搅拌己基三苯基溴化鏻(0.880克，2.05毫摩尔)的11.2毫升无水DME溶液，同时加入2.4M正丁基锂的己烷溶液0.86毫升(2.06毫摩尔)。室温下搅拌得到的红色溶液2小时，然后加入[(+)S-6-苄氧基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-甲醛(306毫克，0.944毫摩尔)的3毫升无水DME溶液，65-75℃继续搅拌3小时。冷却后，将反应混合物倒入冷的稀释H2SO4中，用乙醚以常规方式后处理。真空浓缩乙醚，得到油状物。用柱层析分离产物，用氯仿洗脱，得到46％的产物。将顺式和反式链烯混合物溶液30毫升乙酸乙酯中，加入50毫克5％钯碳，在40psiH2下振摇混合物10小时，滤过硅藻土，用乙酸乙酯充分漂洗。浓缩滤液，用硅胶层析纯化，用EtOAc的己烷(1∶9)溶液洗脱，得到(2R)2,5,7,8-四甲基-2-(庚基)-6-苯并二氢吡喃醇(60％产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.89(s,3H),1.3-1.5(m,15H),1.89(m,2H),2.2(s,3H),2.08(s,3H),2.23(s,3H)和2.48(t,J=6.5Hz,2H)；MS(CI,m/z):305.35 M+H+,C20H32O2计算值：304.4746。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g,30mmol)处理2,5,7,8-四甲基-2-(庚基)苯并二氢吡喃醇(0.353克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的黄色液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。浓缩得到的溶液，真空干燥48小时。这得到36％产率的化合物23。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.88(s,3H),1.2-1.5(m,15H),1.88(m,2H),2.1(s,3H),2.18(s,3H),2.2(s,3H),2.55(t,J=6.5Hz,2H)和4.78(s,2H)；HRMS(CI,m/z):363.2535(M+H+,C22H35O4计算值：363.2541)。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(24)用合成23相同的方法，使用合适的溴化鏻合成了化合物24和25。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.83(s,3H),1.25-1.57(m,27H),1.88(m,2H),2.1(s,3H),2.18(s,3H),2.20(s,3H),2.55(t,J=6.6Hz,2H)和4.48(s,2H)；MS(CI,m/z):447.14M+H+,C28H46O4计算值：446.6732。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(十七烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(25)1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):0.86(s,3H),1.15-1.67(m,35H),1.88(m,2H),2.16(s,3H),2.20(s,3H),2.23(s,3H),2.55(t,J=6.4Hz,2H)和4.78(s,2H)；MS(CI,m/z):503.45M+H+,C32H54O4计算值：502.781。

2,5,7,8-四甲基-2R-(4,8-二甲基-1,3,7EZ壬三烯)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(26)用合成化合物18的相同方法，使用橙花醇代替假紫罗醇合成了化合物26。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.24(s,3H,2aCH3),1.63(m,1H),1.68(s,3H),1.92(m,6H),2.18(s,3H),2.29(S,6H),2.43(t,J=6.6Hz,2H,4CH2),4.68(s,2H,OCH3),5.64(m,2H)和5.27(m,1H)；MS(CI,m/z)；413.24M+H+,C25C36O4计算值：412.0115。EZ,RS,RS,RS-(植基三甲基苯硫酚-6-基氧基)乙酸(27)将2,3,6-三甲基苯酚(1.6克，11.8毫摩尔)溶于已用氮气冒泡脱氧的50毫升无水甲醇中。在该溶液中加入硫氰酸铵，然后冷至0℃，并用氯气冒泡。起初无色均匀的溶液变成粉红色，然后变成绿色，同时形成白色。0℃搅拌该溶液1小时，然后20℃再搅拌1小时。用氮气冒泡除去溶解的氯，过滤除去沉淀。减压蒸发滤液，在高真空(0.1torr)下干燥，得到2.20克(97％)2,3,5-三甲基-4-羟基苯基硫氰酸酯，它足够纯，可用于合成的下一步。从己烷中重结晶出分析样品：白色晶体，熔点100.3℃。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):δ7.2(s,1H),5.0(s,1H),2.4(s,3H),2.2(s,6H)。

将2,3,5-三甲基-4-羟基苯基硫氰酸酯(2克，10.35毫摩尔)溶于100毫升含有25毫升无水四氢呋喃的无水乙醚中，用1小时在室温下将该溶液滴加到100毫升含有LiAlH4(0.9克，24毫摩尔)的无水乙醚中。20℃下再过1小时后，将不均匀的混合物冷却到0℃，并加入含水乙醚(50毫升)、水(50毫升)和1NHCl(50毫升)，破坏未反应的LiAlH4。再加入50毫升水，分离有机相，用水(2×50ml)、NaHCO3溶液(2×50ml)、水(2×50ml)和饱和NaCl(50毫升)洗涤。用无水MgSO4干燥有机相，减压除去溶剂。用5％乙酸乙酯的己烷溶液硅胶柱层析得到1.8克(90％)白色粉末状的2,3,5-三甲基-4-羟基苯硫酚，熔点86℃[Lit1,mp86℃]。

回流2,3,5-三甲基-4-羟基苯硫酚(3克，17.83毫摩尔)、异植醇(4.8克，16.19毫摩尔)、无水氯化锌(1.2克，8.8毫摩尔)和0.2毫升冰醋酸的30毫升无水乙醚溶液1小时，然后50℃真空除去溶剂，将获得的红色油状物溶于50毫升石油醚和20毫升70％甲醇水溶液的混合物中。干燥醚层(Na2SO4)，真空蒸发，得到红色油状物，用硅胶层析，用己烷∶乙醚(9∶1)洗脱纯化，得到3克(38％)黄色油状的EZ,RS,RS-植基三甲基羟基苯硫酚。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):δ7.11(s,1H,Ar-H),5.23(t,1H,乙烯基-H),4.62(s,1H,OH),3.34(d,2H,Ar-S-CH2-),2.41(s,3H,Ar-CH3),2.19(s,3H,Ar-CH3),2.18(s,3H,Ar-CH3),0.83-1.92(m,39H，植醇链)。

用溴乙酸甲酯(7.4克，48.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(7g,175mmol)处理植基三甲基羟基苯硫酚(3克，6.7毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(80毫升)溶液。在室温下搅拌得到的粉红色油状物24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用20％(v/v)EtOAc的己烷溶液洗脱，得到3克(88％)黄色油状的EZ,RS,RS,RS-(植基三甲基苯硫酚-6-基氧基)乙酸。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):δ10.90(s,1H,COOH),8.08(s,1H,Ar-H),5.30(t,1H，乙烯基-H),4.35(s,2H,CH2COOH),3.42(d,2H,Ar-S-CH2-),2.34(s,3H,Ar-CH3),2.25(s,3H,Ar-CH3),2.22(s,3H,Ar-CH3),0.83-1.94(m,39H，植基链)。HRMS(CI,m/z):504.362821(M+H+,C31H53O3S计算值：504.363718)。

(R)-2[(2,5,7,8-四甲基-2-(3丙烯甲酯)苯并二氢吡喃-6-基氧基]乙酸(28)在(甲酯基甲基)三苯基溴化鏻浆液(1.8毫克，4.32毫摩尔，溶于12毫升0℃的THF中)中滴加1.66毫升正丁基锂(2.5M的己烷溶液)。在室温下放置溶液2小时，然后通过套管加入(+)S-6-[二甲基(1,1-二甲基乙基)甲硅烷基]-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-甲醛(1.31克，3.76毫摩尔)的7毫升THF溶液。室温搅拌溶液44小时，然后加入10毫升1N的HCl水溶液。分层，然后用乙醚(3×15ml)萃取水相。用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液后，用快速层析纯化粗链烯，用二氯甲烷洗脱，得到产率为93％的顺式或反式的链烯混合物。将顺式和反式链烯的甲硅烷醚混合物溶于THF，加入四正丁基氟化铵(0.041摩尔)。23℃搅拌1.5小时后，将混合物倒入水中，萃取入乙醚。干燥并浓缩醚萃取物，用硅烷层析，用EtOAc的己烷溶液(3∶7)洗脱纯化，分离并确定2,5,7,8-四甲基-2R-(3’丙烯甲酯)-6-苯并二氢吡喃醇的顺式和反式异构体(68％产率)。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.65(s,3H,2aCH3),2.12(m,2H,3CH2),2.39(s,9H,CH3),2.48(m,2H,4CH2),3.78(s,3H,OCH3),6.11(d,1H,CH=)和7.13(d,1H,CH=)。

用溴乙酸甲酯(3.4克，8.3毫摩尔)和过量的粉末状NaOH(1.2g,30mmol)处理2,5,7,8-四甲基-2R-(3’丙烯甲酯)6-苯并二氢吡喃醇(0.353克，1.16毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。在室温下剧烈搅拌得到的黄色浆液24小时。用5N HCl酸化反应物，并用乙醚(3×30ml)萃取。用水(3×30ml)和盐水(1×30ml)洗涤合并的乙醚层，然后用Na2SO4干燥。将醚溶液浓缩成黄色油，用硅胶层析纯化，用19％(v/v)EtOAc和2％乙酸的己烷溶液洗脱。将得到的液体溶于乙醚(30毫升)，用H2O(3×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥。浓缩得到的溶液，真空干燥48小时。这得到40％产率的化合物28。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.68(s,3H,2aCH3),2.11(m,2H,3CH2),2.36(s,9H,CH3),2.56(m,2H,4CH2),3.70(s,3H,OCH3),4.78(s,2H,OCH2),6.03(d,1H,CH=)和7.03(d,1H,CH=)；MS(CI,m/z):337.24M+H+,C18H24O6计算值：336.3867。

2,5,7,8-四甲基-(2R-(丙酸酯)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(29)将顺式和反式链烯2,5,7,8-四甲基-2R-(3丙烯甲酯)-6-苯并二氢吡喃醇的混合物溶于30毫升乙酸乙酯，并加入50毫克5％钯碳，在40psiH2下振摇混合物24小时，然后滤过硅藻土，并用乙酸乙酯充分漂洗。浓缩滤液，用硅胶层析纯化，用EtOAc的己烷溶液(1∶9)得到化合物29。1H-NMR(CDCl3/TMS,ppm):1.62(s,3H,2aCH3),2.0-2.3(m,6H,CH2),2.41(s,9H,CH3),2.53(m,2H,4CH2),3.67(s,3H,OCH3),4.88(s,2H,OCH2)；MS(CI,m/z):339.34M+H+,C18H26O6计算值：338.4025。

实施例3细胞培养条件所有测试细胞系使用已建立的标准条件，在37C、5％CO2、补充了胎牛血清的标准培养基中培养。用胰蛋白酶分离粘着在塑料上的细胞，洗涤，计数，直接在实验中使用。常规检测所有细胞，以验证没有支原体污染。

实施例4新颖生育酚和生育三烯酚化合物的溶解和稀释将所有化合物当成是光敏感(光可降解的)来处理。最初，将所有化合物溶于纯乙醇，然后用合适的培养液稀释到最终浓度为0.5％乙醇。

实施例5确定诱导凋亡的有效浓度(EC50)虽然亲本的未结构修饰的生育酚形式不显示针对肿瘤细胞库的有效凋亡性能，但通过醚键合不同组成和大小的链段结构修饰的29种RRR-α-生育酚化合物中的15种对于诱导肿瘤细胞经历凋亡是极端有效的，而对于正常细胞不诱导凋亡。化合物1、2、3、7、8、9、12、15、17、19、20、21、22、25、26和27显示对于来自各式各样的细胞种系的人癌细胞具有有效生长抑制剂(凋亡诱导)性能，这些细胞种系包括(ⅰ)乳腺(雌激素反应Michigan CancerFoundation人乳腺癌细胞系号7、MCF-7 McGuire；非雌激素反应性M.D.Anderson转移性乳腺人癌细胞系，MDA-MB-435；和雌激素非反应性M.D.Anderson转移性人乳腺癌细胞系MDA-MB-231)；(ⅱ)前列腺(雄激素反应性人前列腺癌细胞系，LnCaP和雄激素非反应性人前列腺癌细胞系PC-3和DU-145细胞系)；(ⅲ)早幼粒细胞白血病细胞(人早幼粒细胞白血病细胞系HL-60)，淋巴样细胞系Jurkat和HL-60；(ⅳ)喉(人喉癌细胞系ME-180)；(ⅴ)卵巢(人卵巢癌细胞系C-170细胞)；(ⅵ)子宫内膜(人子宫内膜癌细胞系RL-95-2细胞)；(ⅶ)结肠细胞系DLD-1；和(ⅷ)肺细胞系A-549。使正常的原代乳腺细胞(正常的原代早传代的人乳房表皮细胞，HMEC)和不死化的非肿瘤原性的乳房细胞(Michigan Cancer Foudation不死化，但非肿瘤原性的人乳房10A细胞，MCF-10A)在与上述药物动力学设计的生育酚形式一起培养时，不经历凋亡。

新颖试剂控制癌症生长的有效治疗剂量被称为生长抑制浓度(IC50)或有效浓度(EC50)，它表示通过DNA合成的抑制、细胞循环封阻和/或细胞死亡封阻50％的癌症生长。表1和2表示了本发明的14种新颖化合物对测试癌细胞库的凋亡EC50。

表1新颖生育酚化合物诱导的凋亡(EC50范围微克/毫升)

EC50=诱导50％凋亡的生育酚化合物1-29的微克/毫升；N=当用1-60ECn微克/毫升生育酚化合物1-29处理2日后，无凋亡： NT=未测试；*=化合物显示毒性表2新颖生育酚化合物诱导的凋亡(EC50范围微克/毫升)

EC50=诱导50％凋亡的微克/毫升生育酚化合物1-29；N=当用1-60EC50微克/毫升生育酚化合物1-29处理2日后无凋亡；NT=未测试；*=化合物显示毒性实施例 6凋亡的生物试验在12孔板中以1.5×105细胞/孔培养细胞，使细胞粘着过夜，然后与新的测试化合物以0.01、0.1、1、5、10和20微克/毫升培育1、2和3日。处理后，沉淀细胞(飘浮的加胰蛋白酶释放的粘着细胞)，洗涤，并用2微克/毫升的DAPI(4’,6-二脒-2’-苯基吲哚二氯化氢)的100％甲醇溶液37℃染色15分钟，和/或用TUNEL染色，然后用Zeiss ICM405显微镜观察。将核中含有清晰缩小或碎片化的染色质的细胞评为凋亡。数据表示成经历凋亡的细胞百分数。

实施例7DNA合成停滞的生物试验为了测试DNA的合成，以2.5×105/ml使用所有细胞，用化合物1-29的每一种(表1和2)，浓度为0.01、0.1、1、5、10和20微克/毫升处理细胞，将200微升各测试组一式四份置于96孔培养板(Corning,Corning NY)中。实验重复两次，一块板用于存活测试，另一块用于检测3H-TdR的摄取，以监测DNA合成。37℃,5％CO2培养培养板48小时。培育结束前8小时，将3H-TdR加到一块重复板中，继续培养8小时。然后收集细胞(需要胰蛋白酶消化，以收集粘着细胞)，并测定同位素摄取，表示成计数/分钟(cpm)。为了存活研究，在培育终点，从孔中取出细胞，用台酚蓝排除法检查存活。计算存活百分数和DNA合成百分数与各处理组的未处理或载体处理的细胞的比。

实施例8细胞循环停滞的生物试验用新的测试试剂培养细胞2-3天，用95％乙醇固定，并用碘化丙锭染色过夜。用具有定于488纳米的氩气激光的Coulter Epics Elite流式细胞计数器确定DNA含量，同时测定细胞大小。用Coultier Multicycle程序将数据分析成各细胞循环相中的细胞百分数。

实施例9

细胞分化的生物试验为了确定新颖化合物是否诱导细胞分化，在滑动盖上培养细胞，用95％乙醇固定并用脂专一性染料染色，以检测牛奶脂肪。另外，使用实验室中制备的多克隆抗体，用免疫组织学和蛋白质分析检测细胞中牛奶蛋白酪蛋白的百分数。

实施例10DNA合成停滞作用培养细胞48小时，用氚化的胸腺嘧啶脉冲标记8小时，收集并计数。将数据表示成每分钟计数。通过用测试化合物处理的细胞摄取氚化的胸腺嘧啶减少，确认了DNA合成停滞的验证。用碘化丙锭(propidium iodide)染色和标准细胞循环分析进一步证实了DNA合成停滞。

实施例11凋亡诱导的机制这些化合物诱导凋亡的机制似乎与三种不同的信号途径有关；即潜在的转化生长因子β(TGF-β)的激活，Fas/Fas配体信号途径的激活和应激激酶(c-JunN-末端激酶)途径的信号传递。

TGF-β是已知通过抑制DNA合成停滞并诱导凋亡来抑制细胞生长的强力生长抑制剂分子。TGF-β仅和诱导凋亡途径有关，即，目前没有证据显示TGF-β影响DNA合成停滞；然而，还未完全排除该可能性。细胞产生并分泌潜在的非活性形式的TGF-β。为了成为有效的肿瘤生长抑制剂，潜伏的TGF-β必须通过诱导细胞表面蛋白来激活，这些蛋白提供加工和激活切开潜伏蛋白并释放活性TGF-β的活性蛋白酶所需的正确结构。

已显示本发明的化合物激活蛋白酶，如组织蛋白酶D家族蛋白酶，并上调与无活性的TGF-β结合，并允许通过蛋白酶激活的甘露糖-6-磷酸受体。活性TGF-β通过细胞膜向TGF-β受体Ⅰ和Ⅱ发出信号，激活应激激酶或c-JunN-末端激酶(JNK)的下游激酶，它们磷酸化并激活转录因子c-Jun、ATF-2和Elk-1。转录因子c-Jun的延长活化导致肿瘤细胞经历凋亡。这些转录因子以同源二聚物或异源二聚物与许多转录因子伙伴一起起作用，激活促凋亡基因和/或下调抗凋亡基因，导致DNA碎片化。本发明的化合物在正常非肿瘤细胞中不产生抗增殖的TGB-β信号。

称为Fas/Fas配体凋亡信号途径的第二种凋亡诱导机制是由本发明的新化合物激活的。激活的Fas/Fas配体信号传导可能导致凋亡引起的快速细胞死亡。因此，对于要逃避由Fas/Fas配体引起的死亡的肿瘤细胞，它们必须灭活该最重要的凋亡途径。肿瘤细胞灭活该Fas/Fas配体信号途径的机制各自不同；然而，许多肿瘤细胞下调膜上的Fas受体及其Fas配体的表达。

最重要的是，已显示R,R,R-2-(2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基)苯并二氢吡喃-6-基氧基)乙酸(1)诱导Fas/Fas配体抗性的肿瘤细胞变成Fas/Fas配体敏感性的。化合物1还能增强Fas配体在LNCaP前列腺细胞膜上的表达。研究显示，Fas信号抗性的人乳腺癌细胞将Fas受体束缚在它们的细胞质中，但当与化合物1一起培养时，Fas受体从细胞质中转移到膜上；从而使细胞变成Fas信号敏感的。另外，该化合物在抗Fas引发的凋亡中起协同作用，其中用人乳腺和前列腺癌细胞，共处理比分别处理要获得更大量的细胞杀伤。能将Fas信号抗性的肿瘤细胞转换成Fas细胞敏感性的肿瘤细胞，并显示协同杀伤作用的化合物1提供了通过宿主免疫监视系统和药物干涉破坏肿瘤细胞的极重要的机制。本发明的化合物不激活正常非肿瘤细胞的Fas信号途径。

这些化合物可能通过TGF-β和Fas/Fas配体信号激活JNK信号途径。JNK的延长活化导致c-Jun和ATF-2转录因子的延长活化，推测它们分别在促凋亡和抗凋亡基因的表达或阻抑中起作用。

实施例12DNA合成停滞、细胞循环停滞和细胞分化的诱导机制通过DNA合成停滞、细胞循环停滞引起的生长抑制的机制，和通过诱导细胞分化引起的生长抑制的机制尚未由凋亡引起的生长抑制机制一样完全被确定特征。研究显示，本发明的化合物对细胞循环具有很深的影响，在处理24小时内诱导约95％的肿瘤细胞DNA合成停滞。与本文公开的化合物一起培养的肿瘤细胞的生长被抑制在G1细胞循环期中，经历形态变化，并表达牛乳脂肪，这是一种被封阻在细胞循环中的细胞经历分化的指征。P21基因，一种已知是细胞从G1细胞循环期进入细胞循环的S期的抑制基因，及其mRNA和P21基因的蛋白质，通过用化合物1处理MDA-MB-435人乳腺癌细胞被上调。

实施例13人癌细胞的体内可能性本发明有可能用作治疗剂。进行了原位或异位移植入免疫受损的动物(如裸鼠)的人肿瘤细胞的肿瘤生长和转移的体内研究，或使用熟知的动物模型的体内研究。移植入免疫受损的小鼠的人肿瘤细胞生长的抑制提供了临床试验的临床前数据。体内研究包括两种肿瘤细胞模型，转移性的非雌激素反应性MDA-MB-435乳腺癌模型和雄激素非反应性PC-3前列腺癌模型。

MDA-MB-435乳腺癌模型：作为固态肿瘤，在免疫受损的裸鼠或SCID小鼠中生长被标记蛋白(荧光绿色蛋白)稳定转染的无病原体的MDA-MB-435人乳腺癌细胞。切去肿瘤，将1毫米的等大小的片段原位植入雌性裸鼠的乳腺脂肪层或异位植入后肢。测定肿瘤生长、转移和动物的死亡。通过测径评估肿瘤大小，测量肿瘤生长。在杀死时，除去肿瘤，测量大小，并用于组织化学检测。用组织切片的组织化学染色检测标记的荧光绿色蛋白，来检测器官如脾脏、淋巴结、肺和骨髓中转移的MDA-MB-435细胞。

PC-3前列腺癌模型作为固态肿瘤，在裸鼠中培育被标记蛋白(荧光绿色蛋白)稳定转染的、无病原体的PC-3人前列腺癌细胞。除去肿瘤，将1毫米的等大小的片段植入雄性裸鼠的后肢。测定肿瘤生长、转移和动物的死亡。测径评估肿瘤大小，测量肿瘤生长。在杀死时，除去肿瘤，测量大小，并用于组织化学检测。组织化学染色组织，检测标记的荧光绿色蛋白，来检测器官如脾脏、淋巴结、肺和骨髓中转移的PC-3细胞。

皮肤癌动物模型在SENCAR和SK-1无毛小鼠中用紫外线照射和化学(DMBA)处理诱导皮肤癌。另外，使用了在皮肤的基底细胞中专一表达癌基因Her-2/neu(该基底细胞会自发的发展成皮肤癌)的小鼠。每日在皮肤癌引发前或后皮肤外用本文公开的化合物，并评估了皮肤乳头瘤形成的发展。同样处理对照小鼠，除了它们接受外用于皮肤的载体处理。监测这些化合物治疗乳头瘤的效力和它们当用于恶化过程之前时影响恶性转化的能力。

实施例14新颖化合物的补充在开始体内实验之前，将显示最大量的肿瘤细胞杀伤量的本发明的化合物以不同水平施给裸鼠、SCID小鼠、转基因小鼠和其它小鼠，来建立可安全施用，没有不良影响的化合物的最高水平。以适合模型的方式，如口腔、注射，包括直接注射入靶器官，或外用施用化合物。建立可被耐受的最高化合物水平和有效施药途径后，将新的化合物每日施给小鼠，如上所述确定肿瘤的生长和发展。

实施例15最大耐受剂量(MTD)的建立为了建立化合物1的最大耐受剂量(MTD)，将25只Balb/c小鼠置于下列5组中：组1：未处理组2：用载体处理(ETOH+花生油)/0.1毫升强饲/小鼠/日组3：20毫克化合物1/0.1毫升强饲/小鼠/日组4：10毫克化合物1/0.1毫升强饲/小鼠/日组5：5毫克化合物1/0.1毫升强饲/小鼠/日将化合物1溶于100％乙醇，在除尽维生素E的花生油中稀释至合适水平，以强饲传递20、10和5毫克/0.1毫升体积。载体对照由100％乙醇和除尽维生素E的花生油组成。每日处理小鼠共30日。开始处理后，每周称体重。在组中小鼠重量没有区别。小鼠仍然活跃，未显示毒性的症状。

在30日处理中，每周对血清和组织样品进行高效液相层析分析。在所有三个测试组的血清和组织中都监测到化合物1。

实施例16储藏溶液、载体和化合物1稀释液的制备化合物1的储藏溶液：将2克化合物1溶于5毫升100％的乙醇(ETOH)中，并在37℃涡流搅匀。

20毫克/0.1毫升强饲/小鼠的化合物1：合并1毫升化合物1储藏溶液，3毫升除尽维生素E的花生油和400毫克化合物1(无水)，37℃涡流搅匀。

10毫克/0.1毫升强饲/小鼠的化合物1：合并1毫升化合物1储藏溶液和3毫升除尽维生素E的花生油。

5毫克/0.1毫升强饲/小鼠的化合物1：合并0.5毫升化合物1储藏溶液和3毫升除尽维生素E的花生油。

载体：合并1毫升ETOH和3毫升除尽维生素E的花生油。

实施例17化合物1在ACI大鼠癌模型中的化学预防性能在体内使用化合物1来治疗移植在免疫受损的裸鼠中的人乳腺、前列腺和结肠肿瘤。化合物1针对人乳腺癌的化学预防效力显示于雌激素癌引发的ACI大鼠乳腺癌模型中。移植了雌激素小丸的约90％的大鼠在雌激素植入的6月内发生了乳腺癌。

将化合物1溶于100％乙醇，并用除尽维生素E的花生油稀释到合适剂量。如实施例14和15中所述，确定最大耐受剂量(MTD，可施用且没有不良影响的化合物的最大剂量)。以MTD和1/2MTD施用化合物1。在4周龄的ACI大鼠肩部区的膜下移植雌激素小丸。强饲MTD和1/2MTD的化合物1。在对照组中在雌激素移植约100日后检测乳腺肿瘤。90％的对照大鼠在雌激素移植的6个月中发生了乳腺癌。在处理开始的不同时间杀死来自对照和处理组的患肿瘤的动物，检测乳房组织中的明显肿瘤，并进一步用组织学分析检测。

本领域技术人员将易于理解，本发明很好的适合实施目的，并获得提到的，以及其中固有的那些结果和优点。本发明和本文所述的方法、程序、处理、分子和具体化合物是优选例的代表，是例证性的，不是要限制本发明的范围。其中的变化和其它用途对于本领域技术人员是存在的，它们包含在权利要求范围限定的本发明的精神内。