一种人脐带间充质干细胞的无血清冻存液
专利汇可以提供一种人脐带间充质干细胞的无血清冻存液专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种人脐带间充质干细胞的冻存液，属于干细胞培养技术领域，是适合临床应用的干细胞冻存液的组合物。采用多种成分对冻存条件进行优化，其体积百分比为含人脐带间充质干细胞无血清培养基65%-75%、人血 白蛋白 9-12%、二甲基亚砜9-12%、腺苷3-5.5%、以及人脐带间充质干细胞来源的外泌体溶液2.5-5%和人脐带间充质干细胞来源的短肽和多肽类化合物溶液2.5-5%的混合溶液。脐带间充质干细胞在上述冻存液中复苏后贴壁率达到95%以上，传代培养及扩增之后分析，流式细胞术结果显示干细胞的特性稳定。冻存液中不含胎 牛 血清，防止了外源性不明成分和病原性污染，有效保证干细胞 治疗 产品的 质量 稳定和标准化，为用于临床治疗奠定了 基础 。，下面是一种人脐带间充质干细胞的无血清冻存液专利的具体信息内容。
1.一种人脐带间充质干细胞的无血清冻存液，其混合溶液体系中成分的百分比为：含有人脐带间充质干细胞无血清培养基65%-75%、人血白蛋白9-12%、二甲基亚砜9-12%、腺苷
3-5.5%、以及人脐带间充质干细胞来源的外泌体溶液2.5-5%和人脐带间充质干细胞来源的短肽和多肽类化合物溶液2.5-5%。
2.根据权利要求1 要求的冻存液体系中，人脐带间充质干细胞无血清培养基的配制可以选择不同体积百分比的无血清培养基建立储存体系，优化后分别配制体积百分比为65%、
67%、69%、71%，73%，75% 的冻存液体系。
3.根据权利要求1 要求的冻存液体系中，人脐带间充质干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加营养因子成份，其中基础培养基为Alpha-MEM培养基，根据需要添加如下成份： 营养因子A（50 ng/mL），营养因子B（50 ng/mL），血小板源性因子（50 ng/mL），表皮生长因子（50 ng/mL），碱性成纤维生长因子（50 ng/mL），细胞因子抗体A（20 ng/mL），细胞因子抗体B（20 ng/mL），细胞因子抗体C（20 ng/mL）。
4.根据权利要求1 要求的冻存液体系中，加入浓度为40g/L的医用人血白蛋白，其中人血白蛋白的体积百分比分别优化为9%，9.5%，10%，10.5%，11%，12%。
5.根据权利要求1 要求的冻存液体系中，加入医用二甲基亚砜，其中二甲基亚砜的体积百分比分别优化为9%，9.5%，10%，10.5%，11%，12%。
6.根据权利要求1 要求的冻存液体系中，加入浓度为4mmol/L浓度的腺苷，腺苷的体积百分比分别优化为3%，3.5%，4%，4.5%，5%，5.5%。
7.根据权利要求1 在冻存液体系中，加入浓度为400ng/mL人脐带间充质干细胞来源的外泌体，人脐带间充质干细胞来源的外泌体溶液体积百分比分别优化为2.5%，3%，3.5%，4%，
4.5%，5%。
8.根据权利要求1 在冻存液体系中，加入400ng/mL的浓度人脐带间充质干细胞来源的短肽和多肽类化合物，人脐带间充质干细胞来源的短肽和多肽类化合物溶液的体积百分比分别优化为2.5%，3%，3.5%，4%，4.5%，5%。
一种人脐带间充质干细胞的无血清冻存液
技术领域
背景技术
发明内容
5
a) 从液氮罐中快速取出1管冻存的细胞（7×10个/管冻存）至备有液氮的冰盒中，待用；
b)打开水浴锅至37℃；
c)用10mL移液管吸取9mL无血清培养基至15mL离心管中，待用；
d)用镊子从冰盒中夹出细胞，在37℃水浴中快速解冻，轻轻摇晃，直至只有一小块冰坨，复苏时间控制在2min以内；
e)用100-1000μL Tip头将复苏好的细胞吸至离心管中，轻晃混匀，Tip头可吸取少量离心管中的细胞悬液清洗一遍冻存管，400g，室温离心3min；
f)用移液管向1个T75培养瓶中加入7mL完全培养基；离心完，倒去上清，擦拭管口，加入
8mL完全培养基重悬细胞，吹打10次混匀，取20μL细胞悬液用于计数，接种至培养瓶中；
g) 培养瓶上手动标记细胞名称、复苏代数和复苏日期，放至37℃，5%CO2培养箱中培养；
h) 20μL细胞悬液用配制好的台盼蓝染液（0.4%台盼蓝染液用PBS稀释1倍）稀释2倍计数；
i) 操作完，整理生物安全柜和桌面，放入下次操作时需用耗材，紫外照射消毒30min。
b)从培养箱中取出细胞，倒去废液，擦拭瓶口，用5mL移液管吸取5mL生理盐水将细胞洗一遍（注：不要直接吹打细胞），轻晃培养瓶，吸去废液；
c)吸取2mL0.25%Trypsin-EDTA加入到培养瓶内，丢弃移液管，轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖整个培养瓶，5%CO2培养箱中放置3min，在显微镜下观察细胞，用手掌轻轻拍打培养瓶确保细胞完全从培养瓶底壁脱落；
d)用5mL移液管吸取2mL完全培养基至培养瓶内，吹打10次混匀，移入1个15mL离心管中，混匀，丢弃移液管；
e)用5mL移液管吸取5mL 生理盐水将培养瓶中残留的细胞洗一遍，移入上述15mL离心管中，丢弃移液管，400g，室温离心3min；
f)倒去上清，擦拭管口，用10mL移液管吸取32mL完全培养基至1个T225培养瓶中；再吸取8mL完全培养基重悬细胞，吹打10次混匀，取20μL细胞悬液用于计数，接种至培养瓶中；
g)培养瓶上手动标记细胞名称、传代代数和传代日期，放至37℃，5%CO2培养箱中培养；
h) 20μL细胞悬液用配制好的台盼蓝染液（0.4%台盼蓝染液用PBS稀释1倍）稀释5倍计数；
i) 操作完，整理生物安全柜和桌面，放入下次操作时需用耗材，紫外照射消毒30min。
图1C为无血清冻存液中保存的人脐带间充质干细胞复苏培养96小时后的细胞形态图片，细胞融合达到80%，细胞形态均一，呈长梭形，细胞核为圆形或椭圆形，位于胞体中央；
2）图2为无血清冻存液和常规冻存液中保存的人脐带间充质干细胞复苏后培养的生长曲线图，细胞生长情况：两种冻存液保存的人脐带间充质干细胞复苏后培养的细胞生长情况差异有显著性意义(P > 0.05)；
图2中的曲线1为本发明的人脐带间充质干细胞无血清冻存液中保存的人脐带间充质干细胞复苏后培养的生长曲线图；
图2中的曲线2为常规冻存液冻存中保存的人脐带间充质干细胞复苏后培养的生长曲线图；
图2中，横坐标表示生长时间单位为天数，纵坐标表示细胞计数值。
无血清冻存液和常规（对照组）冻存液中保存的人脐带间充质干细胞复苏后培养的干细胞阳性表达CD90/CD44/CD73/CD105，阴性表达CD34/CD45/CD19/CD11b/HLA-DR，没有统计学差异。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种用于豆粕发酵的发酵酶解剂及其应用 | 2020-05-08 | 585 |
| 一种抗体药物偶联物及其应用 | 2020-05-08 | 538 |
| 血脑屏障穿梭体 | 2020-05-11 | 630 |
| 一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法 | 2020-05-12 | 152 |
| 一种育苗培养基质及其制备方法 | 2020-05-14 | 121 |
| 一种具有表观遗传修饰功能腺相关病毒的制备方法及应用 | 2020-05-12 | 704 |
| 一种南方型肉兔饲料复合酶添加剂及其应用 | 2020-05-12 | 327 |
| 一种固态联合发酵红枣渣、柑橘皮渣、马铃薯渣生物饲料及其制备方法 | 2020-05-13 | 90 |
| 用于植入的中脑多巴胺（DA）神经元 | 2020-05-13 | 287 |
| 一种苜蓿草发酵浆液饲料的制备方法 | 2020-05-12 | 979 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
