这些条件对于动物的健康是不利的,对于接种和给药程序则更为不 利。接种和给药(medication)是需要非常特定的水质条件的两个程序: 中性pH、不含氯和碘、低硬度,因而在正常的野外条件下很少能达到最 佳结果。
水的硬度是指钙和镁离子的存在,它们主要来自于地下矿床。这些 离子对于预防中所使用的病毒、细菌及活性成分具有螯合或凝集作用。 理想状态是当接种或给药时水中不含或含有最低可能浓度的这些离子。
由于水中病原体的存在,需要用抗微生物剂来处理,其中最广泛使 用的是氯和碘。然而,由于它们对疫苗具有同样的效果而使其失活,从 而干扰接种过程。对于此项操作,水中必须完全不含卤素。
每个活的微生物,无论病毒还是细菌,都有空间结构或三级结构, 这种结构可被溶液的渗透压所改变,而且当其改变时,能够导致细菌外 壁破坏或大部分病毒变性。因此,为了保持活抗原稳定,理想的是接种 溶液具有最小的等电电势。
由于在许多情况下,牛奶本身含有会破坏疫苗的碘化物残余物,牛 奶作为稳定剂使用不是很有利,因而必须考虑只使用经过检定不含碘化 物的牛奶或可商购的稳定的制剂。而且,牛奶稳定pH及水中卤素存在 的能力非常有限,几乎为零。
本发明的应用领域为活抗原疫苗的
饮用水接种和给药系统以及喷 雾接种和给药系统。疫苗分配介质通常为水,但并不限于水,所以疫苗 能够应用其他分配介质,只要它是一种液体介质。
用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定化制剂包含一种多成分 的混合物,其配制为给用于动物生产过程的动物接种中所用的活抗原 (活病毒或细菌疫苗)提供延长的稳定性。
本发明包括一种产品,它可以是与水混合用于农畜接种的液体或固 体的形式。
pH稳定剂用于将疫苗溶液的pH稳定在6.5~7.5范围内,在此范围 内大部分细菌和病毒能够存活。pH稳定剂可以是
磷酸盐、
琥珀酸盐、
碳 酸氢盐和乳酸盐。优选使用磷酸
钾,因为其具有低刺激性并且认为其可 安全地用于动物和人类。
水硬度螯合剂用于去除能够导致疫苗中的病毒和细菌失活的溶于 水中的矿物质。螯合剂包括
乙二胺四乙酸盐。其中,优选使用乙二胺四 乙酸二钠盐(EDTA二钠),因为认为其可安全使用,不会明显改变溶 液的pH,且不会刺激活组织。
还原剂用于中和当地(实施地)水中存在的消毒剂。这些消毒剂可以 基于氯、碘、过
氧化物、溴、氟、臭氧或高锰酸盐。所有这些都可认为 是
氧化剂,可用(但不限于)
硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠(sodium metabisulfite)、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、二氧化硫、亚硫酸氢铵及硫 代硫酸铵中和。优选使用硫代硫酸钠,因其具有较高的中和能力,且被 认为是安全、无
腐蚀性的。
必要时,可使用
水溶性盐来提供保持疫苗中存在的病毒三级结构稳 定和细菌外壁完整所需的渗透压。其中,包括
盐酸盐、
氢碘酸盐、碳酸 盐、碳酸氢盐、磷酸盐、碘酸盐、氯酸盐、
氢溴酸盐、溴酸盐、
氢氟酸 盐、
硝酸盐、亚硝酸盐、氢
硫酸盐、硫酸盐和亚硫酸盐。其中,优选使 用
氯化钠,因其无毒、无刺激性且被认为可安全使用。
必要时,可使用碳水化合物来保护病毒或细菌结构免受家禽消化道 不利条件的影响,其中,包括
葡萄糖、右旋糖、乳糖、
蔗糖、甘露糖和 果糖。优选乳糖,因为其由于粉末粒径而具有高溶解性,且与家禽的正 常代谢没有不利的相互作用。
必要时,可使用食品级
着色剂来为接种员提供一种可视的确认手 段,其可使稳定剂的使用者知道何时已将保护剂加入水中,并最终知道 动物已经接受了含有疫苗的水。其中,包括颜料和蓝、红、绿、紫、橙 等颜料制剂。优选使用蓝色颜料,因其与活组织的
颜色具有对比效果。
必要时,可使用食品级抗湿剂来防止混合物由于其某些盐的吸湿性 而湿润。这些抗吸湿剂不会改变产品的理化功能,只是减少混合物变湿。 其实例包括
二氧化硅、
硬脂酸钙、硬脂酸镁、磷酸钙、磷酸镁、氧化镁、
硅酸钙、硅酸镁、硅
铝酸钠、硅酸铝酸钙等。其中,优选使用硬脂酸镁 和
二氧化硅,因其无毒、无刺激性且被认为可安全使用。
所述制剂按以下方式组成:乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐,浓度 范围为0.03%~34.19%,最佳浓度为3.75%;磷酸二氢钾,浓度范围为 0.03%~34.48%,最佳浓度为5%;
磷酸氢二钾,浓度范围为0.03%~ 56.07%,最佳浓度为41.25%;硫代硫酸钠,浓度范围为0.03%~33.73%, 最佳浓度为1.75%;氯化钠,浓度范围为0.03%~35.91%,最佳浓度为 10.75%;乳糖,浓度范围为0.03%~51.02%,最佳浓度为28%;二氧化 硅,浓度范围为0.03%~5%,最佳浓度为1%;硬脂酸镁,浓度范围为 0.03%~5%,最佳浓度为1%;亮蓝着色剂,浓度范围为0.03%~44.25%, 最佳浓度为7.50%。
生产方法为在最大
相对湿度30%、
温度15~35℃下,以如下顺序 加入原料,每次加入后,持续搅拌下逐步混合这些原料15分钟:磷酸 氢二钾、乳糖、磷酸二氢钾、乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐、硫代硫 酸钠、氯化钠、硬脂酸镁、二氧化硅和亮蓝着色剂。
当将疫苗与在温度15~35℃下制备的浓度为2.85~5.93克/升溶 液的稳定化溶液相混合时,病毒或药物没有暴露于不利条件下,因此其 存活能力长期保持。当动物饮用含有疫苗的溶液时,乳糖在病毒外表面 上作为保护剂起作用,从而避免其在转运直到到达下消化道系统的过程 中受到破坏,疫苗在下消化道系统中通过肠膜进入血流,开始免疫原性 反应。
使用方法限定如下:根据组成不同,在不断搅拌下,缓慢向制备的 每升疫苗溶液中加入2.85~5.93克/升的活疫苗稳定剂。一旦溶解,就 将所需量加入到疫苗中并应用于待接种的动物。
实施例1
粉末混合物包含0.03%EDTA、5.19%磷酸二氢钾、42.85%磷酸氢 二钾、1.82%硫代硫酸钠、11.17%氯化钠、31.16%乳糖、1.04%二氧化 硅、1.04%硬脂酸镁和7.79%着色剂。按每升水3.85克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度及 5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量效 价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为55ppm总硬度、pH 7.1、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为起始应用浓度的94%,因而只有6%的疫苗 活性丧失。
样品B:测得硬度为115ppm、pH 7.1、游离氯为4ppm。观察到疫 苗效价减少为疫苗起始应用浓度的30%,因而有70%的疫苗活性丧失。
实施例2
粉末混合物包含3.75%EDTA、5.00%磷酸二氢钾、41.25%磷酸氢 二钾、1.75%硫代硫酸钠、10.75%氯化钠、28%乳糖、1%硬脂酸镁、1 %二氧化硅和7.50%着色剂。按每升水4克该混合物的比例计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度及 5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入具有1000剂量效价 为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的小 瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观察 到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97%,因而只有3%的疫 苗活性丧失。
样品B:测得硬度为105ppm、pH 5.9、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的25%,因而有75%的疫苗活性丧 失。
实施例3
粉末混合物包含34.19%EDTA、3.42%磷酸二氢钾、28.21%磷酸 氢二钾、1.20%硫代硫酸钠、7.35%氯化钠、19.15%乳糖、0.68%硬脂 酸镁、0.68%二氧化硅和5.13%着色剂。按每升水5.85克该混合物的比 例计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度及 5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量效价 为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的 小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97%,因而只有3%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为110ppm、pH 6.0、游离氯为4ppm。观察到疫 苗效价减少为疫苗起始应用浓度的30%,因而有70%的疫苗活性丧失。
实施例4
粉末混合物包含3.95%EDTA、0.03%磷酸二氢钾、43.41%磷酸氢 二钾、1.84%硫代硫酸钠、11.31%氯化钠、29.47%乳糖、1.05%硬脂酸 镁、1.05%二氧化硅和7.89%着色剂。按每升水3.8克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH 7.6、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的93%,因而只有7%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为102ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的35%,因而有65%的疫苗活性丧 失。
实施例6
粉末混合物包含2.59%EDTA、34.48%磷酸二氢钾、28.45%磷酸 氢二钾、1.21%硫代硫酸钠、7.41%氯化钠、19.31%乳糖、0.69%硬脂 酸镁、0.69%二氧化硅和5.17%着色剂。按每升水5.8克该混合物的比 例计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH 6.2、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的83%,因而只有17% 的疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为104ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的33%,因而有67%的疫苗活性丧 失。
实施例7
粉末混合物包含6.32%EDTA、8.51%磷酸二氢钾、0.03%磷酸氢 二钾、2.98%硫代硫酸钠、18.29%氯化钠、47.64%乳糖、1.70%硬脂酸 镁、1.70%二氧化硅和12.76%着色剂。按每升水2.35克该混合物的比 例计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为2ppm总硬度、pH 5.8、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的73%,因而只有27% 的疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为102ppm、pH 5.9、游离氯为4ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的29%,因而有71%的疫苗活性丧 失。
实施例8
粉末混合物包含2.80%EDTA、3.74%磷酸二氢钾、56.07%磷酸氢 二钾、1.31%硫代硫酸钠、8.04%氯化钠、20.93%乳糖、0.75%硬脂酸 镁、0.75%二氧化硅和5.61%着色剂。按每升水5.35克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为3ppm总硬度、pH 7.6、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的91%,因而只有9%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为108ppm、pH 6.1、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的36%,因而有64%的疫苗活性丧 失。
实施例9
粉末混合物包含3.82%EDTA、5.09%磷酸二氢钾、41.97%磷酸氢 二钾、0.03%硫代硫酸钠、10.94%氯化钠、28.49%乳糖、1.02%硬脂酸 镁、1.02%二氧化硅和7.63%着色剂。按每升水3.93克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为4ppm总硬度、pH 7.1、游离氯滴定值为2ppm。 观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的72%,因而只有28% 的疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为100ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的35%,因而有65%的疫苗活性丧 失。
实施例10
粉末混合物包含2.53%EDTA、3.37%磷酸二氢钾、27.82%磷酸氢 二钾、33.73%硫代硫酸钠、7.25%氯化钠、18.89%乳糖、0.67%硬脂酸 镁、0.67%二氧化硅和5.06%着色剂。按每升水5.93克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为1ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的96%,因而只有4%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为107ppm、pH 6.1、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的32%,因而有68%的疫苗活性丧 失。
实施例11
粉末混合物包含4.20%EDTA、5.60%磷酸二氢钾、46.21%磷酸氢 二钾、1.96%硫代硫酸钠、0.03%氯化钠、31.36%乳糖、1.12%硬脂酸 镁、1.12%二氧化硅和8.40%着色剂。按每升水3.57克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH 7.2、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的96%,因而只有4%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为103ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的28%,因而有72%的疫苗活性丧失。
实施例12
粉末混合物包含2.69%EDTA、3.59%磷酸二氢钾、29.62%磷酸氢 二钾、1.26%硫代硫酸钠、35.91%氯化钠、20.11%乳糖、0.72%硬脂酸 镁、0.72%二氧化硅和5.39%着色剂。按每升水5.57克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为3ppm总硬度、pH 6.8、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的91%,因而只有9%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为100ppm、H 6.0、游离氯为5ppm。观察到疫 苗效价减少为疫苗起始应用浓度的31%,因而有69%的疫苗活性丧失。
实施例13
粉末混合物包含5.21%EDTA、6.94%磷酸二氢钾、57.27%磷酸氢 二钾、2.43%硫代硫酸钠、14.93%氯化钠、0.03%乳糖、1.39%硬脂酸 镁、1.39%二氧化硅和10.41%着色剂。按每升水2.88克该混合物的比 例计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为4ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的93%,因而只有7%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为100ppm、pH 5.9、游离氯为4ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的36%,因而有64%的疫苗活性丧失。
实施例14
粉末混合物包含2.55%EDTA、3.40%磷酸二氢钾、28.06%磷酸氢 二钾、1.19%硫代硫酸钠、7.31%氯化钠、51.02%乳糖、0.68%硬脂酸 镁、0.68%二氧化硅和5.1%着色剂。按每升水6.88克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将产品加入到pH 6、100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为21ppm总硬度、pH 7.3、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的95%,因而只有5%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为107ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的31%,因而有69%的疫苗活性丧失。
实施例15
粉末混合物包含3.97%EDTA、5.29%磷酸二氢钾、43.64%磷酸氢 二钾、1.85%硫代硫酸钠、11.37%氯化钠、31.74%乳糖、0.60%硬脂酸 镁、0.60%二氧化硅和0.03%着色剂。按每升水3.78克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验,其中将该产品加入到pH 6、100ppm总硬 度及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂 量效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品 A)的小瓶中,还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为2ppm总硬度、pH 7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97%,因而只有3%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为100ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的25%,因而有75%的疫苗活性丧失。
实施例16
粉末混合物包含2.21%EDTA、2.95%磷酸二氢钾、24.34%磷酸氢 二钾、1.03%硫代硫酸钠、6.34%氯化钠、17.70%乳糖、0.59%硬脂酸 镁、0.59%二氧化硅和44.25%着色剂。按每升水6.78克该混合物的比 例计量制备。
进行实验室规模试验,其中将该产品加入到pH 6、100ppm总硬 度及5ppm游离氯的空白水溶液中,并在5分钟内加入到具有1000剂 量效价为3.7log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品 A)的小瓶中,还包括使用不含该产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后,获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数 据:
样品A:水硬度为35ppm总硬度、pH 6.9、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的92%,因而只有8%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为109ppm、pH 6.0、游离氯为5ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的33%,因而有67%的疫苗活性丧 失。
已经描述了本发明,认为本发明在应用领域具有新颖性,因而
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