一种中药组合物及其制备方法和应用
阅读：886发布：2023-12-21
专利汇可以提供一种中药组合物及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及中药技术领域，公开了一种中药组合物及其制备方法和应用。本发明所述中药组合物由白芍或赤芍、黄芪、川芎、当归、桃仁、红花、苦参、防 风 和女贞子制成。通过本发明中药组合物进行 预防 性 给药 能有效防止由过 氧 化氢造成的 成 纤维 细胞 线粒体膜电位下降，在动物和人体试验中用本发明中药组合物制备的乳液和啫喱能有效提高 皮肤 微循环血流量和经皮氧分压，说明本发明中药组合物具有促进气血微循环、增加血液灌注量、提高皮肤氧含量和活化皮肤细胞的功效。，下面是一种中药组合物及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种中药组合物，其特征在于，原料药包括白芍或赤芍中的一种、黄芪、川芎、当归、桃仁、红花、苦参、防风和女贞子。
2.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于，以质量份计，包括白芍或赤芍10～40份、黄芪30～60份、川芎10～30份、当归10～30份、桃仁5～20份、红花5～20份、苦参5～20份、防风5～20份和女贞子10～30份。
3.根据权利要求1或2任一项所述中药组合物，其特征在于，还包括5～20份的覆盆子。
4.权利要求1至3任一项所述中药组合物的制备方法，其特征在于，对所述原料药进行醇沉，收集醇提液。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)所述中药组合物原料药粉碎后按所述质量份称取，混匀；
(2)用体积百分比为50％～95％的乙醇提取，原料药混合物与乙醇质量体积比g/mL为
1：10～1：40，70℃～90℃提取1-5h；
(3)将步骤(2)得到的提取液冷却至20℃～50℃，过滤，得到滤液；
(4)将步骤(3)得到的滤液和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混匀，旋蒸出溶剂，抽滤，收集滤液，即得。
6.权利要求1至3任一项所述中药组合物或权利要求4或权利要求5所述制备方法制得的中药组合物在制备活血护肤品、药物或者保健品中的应用。
7.一种具有活血作用的乳液，其特征在于，包含如下重量百分比的成分：
8.根据权利要求7所述乳液，其特征在于，包含如下重量百分比的成分：
所述硬脂酸、硬脂酸单甘脂、白矿油、辛酸/癸酸三甘油酯和氢化植物油为油脂；
所述山梨醇、丙二醇和三乙醇胺为保湿剂；
所述月桂醇醚-23为乳化剂。
9.权利要求7或8所述乳液的制备方法，其特征在于，将保湿剂与水混合制成水相组分A，将油脂、乳化剂和抗敏剂混合制成油相组分B，将水相组分A和油相组分B混合后加入所述中药组合物制得。
10.一种具有活血作用的啫喱，其特征在于，包含如下重量百分比的成分：
一种中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及中药技术领域，特别涉及一种中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
[0002] 气血是中医对饮食和氧气在脏腑协同作用下生成的对人体有濡养作用和温煦、激发、防御作用的“精微物质”及其功能的一种定义。气血既是人体生长发育的物质基础，也是保持健康美容的物质基础。气血化生之后，借助遍布全身的经络系统上荣皮毛，气血上荣是中医美容的基础。
[0003] “活血养血”是基于中医的“气滞血瘀”理论，机体出现“气滞血瘀”是由外因(如六淫)和内因(如五脏五行)引起的。皮肤是机体最大的器官，覆盖在机体表面，同属于中医整体观的“气滞血瘀”理论体系。一方面，就机体衰老相关因素，遭受外界有害因素引起的衰老的首先是皮肤，同时随着机体内源性有害因素积累也导致皮肤衰老；另一方面，就机体衰老的表象，无论是内源性损伤还是外源性损伤导致的衰老，往往还是首先表现在皮肤上。所以，皮肤衰老同样可以在机体“气滞血瘀”理论指导下进行研究。
[0004] 按照中医理论，由“气滞血瘀”引起的皮肤衰老，会出现皮肤干燥、暗淡、色素不均匀、出现皱纹等临床表现。目前护肤品的功效成分多是以营养皮肤作为主要手段来达到护肤的功效，但如果皮肤处于正常的生理代谢状态时是可以自给自足的，并不需要外界额外提供营养。只有当皮肤的生理代谢出现问题，靠自身生理功能无法满足自身所需了才需要外界的营养补给，而且当皮肤的生理代谢处于极低的状态下是无法吸收外界提供的营养参与皮肤的生理代谢，所以从外界向皮肤提供营养这一解决方式虽然治标但并不能从根本上解决皮肤问题。
发明内容
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种中药组合物，该中药组合物具有促进气血微循环、增加血液灌注量、提高皮肤氧含量和活化皮肤细胞的功效，同时提供了该中药组合物的制备方法及其在活血护肤品、药品或保健品中的应用。
[0006] 本发明是从皮肤衰老的根本原因入手，从根本上解决因为机体衰老引起的皮肤代谢下降问题，能有效提升皮肤血液微循环及经皮氧分压，提升皮肤的新陈代谢；也能防止过氧化氢造成的皮肤成纤维细胞线粒体膜电位的下降，维持线粒体的活力，为皮肤持续供能，通过皮肤自身代谢的加强提高皮肤细胞活力。
[0007] 为了实现本发明的目的，本发明提供如下技术方案：
[0009] 本发明结合中国传统中医理论，利用先进的生物技术，将白芍或赤芍、黄芪、川芎、当归、桃仁、红花、苦参、防风和女贞子有效地组合在一起形成复方，并将其提取后得到提取物，可以有效促进气血微循环、增加血液灌注量、提高皮肤氧含量和活化皮肤细胞。
[0010] 作为优选，所述中药组合物以质量份计，包括白芍或赤芍10～40份、黄芪30～60份、川芎10～30份、当归10～30份、桃仁5～20份、红花5～20份、苦参5～20份、防风5～20份和女贞子10～30份。
[0011] 进一步优选，所述中药组合物以质量份计，包括白芍或赤芍15～35份、黄芪35～55份、川芎15～25份、当归15～25份、桃仁10～15份、红花10～15份、苦参10～15份、防风10～15份和女贞子15～25份。
[0012] 作为优选，所述中药组合物还包括覆盆子。
[0013] 进一步优选，所述中药组合物还包括5～20份的覆盆子。
[0014] 本发明提供了所述中药组合物的制备方法，对所述原料药进行醇沉，收集醇提液。
[0015] 作为优选，所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：
[0016] (1)所述中药组合物原料药粉碎后按所述重量份数称取，混匀；
[0017] (2)用体积百分比为50％～95％的乙醇提取，原料药混合物与乙醇质量体积比g/mL为1：10～1：40，70℃～90℃提取1-5h；
[0018] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至20℃～50℃，过滤，得到滤液；
[0019] (4)将步骤(3)得到的滤液和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混匀，旋蒸出溶剂，抽滤，收集滤液，即得。
[0020] 细胞的生理和功能状态取决于细胞的能量代谢过程。在细胞的能量代谢过程中，线粒体内膜呼吸链酶复合体在传递电子的同时将H+泵出至膜间隙内，形成的内膜内电位低于内膜外的电位即线粒体的膜电位。线粒体膜电位不仅是推动ATP合成的动力，而且影响着细胞内钙稳态的调节，并对细胞的存活和功能至关重要。因此线粒体膜电位是反映线粒体和细胞功能变化的敏感指标。膜电位的下降可以引起线粒体能量产生障碍、活性氧生成增多、细胞钙稳态失调以及诱导细胞发生凋亡，这些变化均和组织细胞的损伤密切相关。
[0021] 使用本发明所述中药组合物对过氧化氢诱导的成纤维细胞损伤模型进行预防性给药，使用流式细胞仪对成纤维细胞线粒体膜电位进行检测，与对照组相比，使用本发明所述中药组合物进行预防性给药能有效防止过氧化氢造成的成纤维细胞线粒体膜电位下降。
[0022] 本发明提供了所述中药组合物或所述制备方法制得的中药组合物在制备活血护肤品、药物或者保健品中的应用。
[0023] 本发明提供了一种具有活血作用的乳液，其特征在于，包含如下重量百分比的成分：
[0024]
[0026] 所述乳化剂为月桂醇醚或溶血磷脂酰胆碱中的一种或多种；
[0027] 所述保湿剂为透明质酸，丙二醇，山梨醇，三乙醇胺中的一种或多种。
[0028] 所述抗敏剂选自市面上可以购得的抗敏剂。
[0029] 作为优选，所述乳液还包括稳定剂。
[0030] 进一步优选，所述稳定剂的重量百分比为0.1-0.3％。
[0031] 作为优选，所述乳液包含如下重量百分比的成分：
[0032]
[0033] 所述硬脂酸、硬脂酸单甘脂、白矿油、辛酸/癸酸三甘油酯和氢化植物油为油脂；
[0034] 所述山梨醇、丙二醇和三乙醇胺为保湿剂，所述山梨醇为70％水溶液；
[0035] 所述月桂醇醚-23为乳化剂；
[0036] 所述卡波姆为稳定剂。
[0037] 本发明提供了所述乳液的制备方法，将保湿剂与水混合制成水相组分A，将油脂、乳化剂和抗敏剂混合制成油相组分B，将水相组分A和油相组分B混合后加入所述中药组合物和稳定剂制得。
[0038] 作为优选，所述乳液的制备方法包括以下步骤：
[0039] (1)将水溶性物质山梨醇(70％水溶液)、丙二醇、三乙醇胺加入到去离子水中，搅拌溶解，加热至85℃，维持20min灭菌，制成水相组分A；
[0040] (2)将硬脂酸、硬脂酸单甘脂、白矿油、对羟基苯甲酸甲脂、辛酸三甘油脂、月桂酸醚-23、氢化植物油和抗敏剂混合，在不断搅拌下，加热至85℃，使之溶解成均匀透明的液相，制成油相组分B；
[0041] (3)在不断搅拌下，将组分B加入到组分A中，然后用均质机剧烈搅拌0.5min，然后慢速搅拌，并缓慢降温冷却至50℃，后添加所述中药组合物和卡波姆再继续搅拌至40℃即可。
[0042] 改善皮肤的气血微循环可以为皮肤的角质形成细胞、成纤维细胞等细胞提供充足的氧分和营养物质，并将细胞的代谢产物和各种有害物质如超氧阴离子等及时清除，减少胶原纤维的氧化，维持皮肤中各种细胞良好的功能。较好的皮肤气血微循环状态不但和延缓皮肤衰老有关，而且和美白祛斑也存在联系。
[0043] 本发明所述乳液分别在动物试验和人体试验中进行了促进气血微循环功效的验证。在动物试验中，将乳液涂抹于裸鼠皮肤，使用激光多普勒血流分析仪测定乳液涂抹后裸鼠皮肤微循环血流量的变化，试验结果显示相比于对照组，乳液涂抹部位的微循环血流量有明显提高(P＜0.05)。在人体试验中，将乳液涂抹于志愿受试者脸部，3天后用激光多普勒血流分析仪测定受试者皮肤微循环血流量变化。试验结果显示9名志愿者中有8名志愿者的皮肤微循环血流量得到了一定程度的提升，仅有1名志愿者的皮肤微循环血流量降低(一致率为98.5％)，有4名志愿者的皮肤微循环血流量的提高量达到10％以上，说明所述乳液具有一定的提高皮肤微循环血流量的功效。
[0044] 经皮氧分压是局部非侵入性检测方法，可以通过与测定位点相连的电极反映从毛细血管透过表皮弥散出来的氧气含量，如果组织的氧分压升高则说明流经该处血液中的氧含量多，经皮氧分压可以实时、持续地反映机体向组织的供氧能力。经皮氧分压取决于呼吸系统功能、血液运输氧气功能和循环系统功能。因为皮肤处于机体氧供系统的末端，所以机体输送氧气的任何环节出现损伤，都能立刻从经皮氧分压变化反映出来。
[0045] 本发明所述乳液分别在动物试验和人体试验中进行了经皮氧分压测试。在动物试验中，将乳液涂抹于裸鼠皮肤，使用经皮氧分压检测仪测定给药30分钟和连续给药3天后裸鼠皮肤经皮氧分压的变化，试验结果显示相比于对照组，乳液涂抹部位的经皮氧分压显著提高(P＜0.05)。在人体试验中，将乳液涂抹于志愿受试者脸部，每天涂抹3次，早中晚各1次，3天后用经皮氧分压检测仪测定受试者皮肤经皮氧分压的变化。试验结果显示9名志愿者中，有5名志愿者的经皮氧分压相对于使用前有一定程度的提高(一致率大于100％)。仅有2名受试志愿者在使用样品3天后经皮氧分压有一定程度的降低，说明所述乳液对人体经皮氧分压具有一定的提高作用。
[0046] 本发明提供了一种具有活血作用的啫喱，包含如下重量百分比的成分：
[0047]
[0048] 作为优选，所述啫喱还包含重量百分比为0.4-0.5％的防腐剂。
[0049] 作为优选，所述啫喱包含如下重量百分比的成分：
[0050]
[0052] 所述甘油和丁二醇为多元醇；
[0054] 所述10％氢氧化钠溶液为中和剂。
[0055] 所述1％透明质酸钠溶液和10％氢氧化钠溶液均为溶质与水的质量比，单位均为g/mL。
[0056] 本发明提供了所述啫喱的制备方法，将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、黄原胶、丁二醇、甘油、吡咯烷酮羧酸钠、尿素与水混匀后加热到80℃保温0.5h，降温到45-50℃加入10％氢氧化钠溶液、1％透明质酸钠溶液和所述中药组合物，降温到40-45℃，35-38℃出料。
[0057] 作为优选，所述啫喱还包含重量百分比为0.4-0.5％的苯氧乙醇/乙基己基甘油(苯氧乙醇和乙基己基甘油的混合物)。
[0058] 优选地，苯氧乙醇和乙基己基甘油的混合物中，苯氧乙醇和乙基己基甘油的质量比9:1。
[0059] 本发明提供了所述啫喱的制备方法，将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、黄原胶、丁二醇、甘油、吡咯烷酮羧酸钠、尿素与水混匀后加热到80℃保温0.5h，降温到45-50℃加入10％氢氧化钠溶液、1％透明质酸钠溶液和所述中药组合物，降温到40-45℃加入苯氧乙醇/乙基己基甘油，35-38℃出料。
[0060] 作为优选，所述啫喱的制备方法包括以下步骤：
[0061] (1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物撒入水中，静置水合完全；
[0062] (2)将黄原胶和丁二醇、甘油混合均匀，快速搅拌加入水中，搅拌溶解均匀；
[0063] (3)加入吡咯烷酮羧酸钠、尿素，混合均匀，加热到80℃，保温半小时；
[0064] (4)搅拌降温，降温到45-50℃加入10％氢氧化钠溶液，搅拌均匀；
[0065] (5)加入1％透明质酸钠溶液，搅拌均匀后加入所述中药组合物；
[0066] (6)降温到40-45℃加入苯氧乙醇/乙基己基甘油(商品名：PEHG，购自托尔专用化学品(上海)有限公司)，搅拌均匀；
[0067] (7)35-38℃出料。
[0068] 本发明所述啫喱分别在动物试验和人体试验中进行了促进气血微循环功效的验证。在动物试验中，将啫喱涂抹于裸鼠皮肤，使用激光多普勒血流分析仪测定啫喱涂抹后裸鼠皮肤微循环血流量的变化，试验结果显示相比于对照组，啫喱涂抹部位的微循环血流量有明显提高(P＜0.05)。在人体试验中，将乳液涂抹于志愿受试者脸部，3天后用激光多普勒血流分析仪测定受试者皮肤微循环血流量变化。试验结果显示9名志愿者的皮肤微循环血流量均得到了一定程度的提升，有2名志愿者的皮肤微循环血流量的提高量达到25％以上，说明所述啫喱具有一定的提高皮肤微循环血流量的功效。
[0069] 本发明所述啫喱分别在动物试验和人体试验中进行了经皮氧分压测试。在动物试验中，将啫喱涂抹于裸鼠皮肤，使用经皮氧分压检测仪测定啫喱涂抹后裸鼠皮肤经皮氧分压的变化，试验结果显示相比于对照组，啫喱涂抹部位的经皮氧分压显著提高(P＜0.05)。在人体试验中，将啫喱涂抹于志愿受试者脸部，3天后用经皮氧分压检测仪测定受试者皮肤经皮氧分压的变化。试验结果显示9名志愿者中，有5名志愿者的经皮氧分压相对于使用前有一定程度的提高(一致率大于100％)。仅有2名受试志愿者在使用样品3天后经皮氧分压有一定程度的降低，说明所述啫喱对人体经皮氧分压具有一定的提高作用。
[0070] 本发明提供了一种中药组合物，该中药组合物具有促进气血微循环、增加血液灌注量、提高皮肤氧含量和活化皮肤细胞的功效，同时提供了该中药组合物的制备方法及其在活血护肤品、药品或保健品中的应用。通过所述中药组合物进行预防性给药能有效防止由过氧化氢造成的成纤维细胞线粒体膜电位的下降。本发明还提供了由所述中药组合物制备的乳液和啫喱，以及所述乳液和啫喱的制备方法，并设计了动物试验和人体试验对乳液和啫喱进行了功效验证，试验结果显示所述乳液和啫喱均能有效地提高皮肤微循环血量和经皮氧分压。附图说明
[0071] 图1所示为成纤维细胞线粒体膜电位荧光图，A为对照组，B为过氧化氢模型组，C为75μg/mL药物预处理组，D为150μg/mL药物预处理组，E为300μg/mL药物预处理组；
[0072] 图2所示为乳液涂抹裸鼠皮肤微循环血流量测试试验结果；
[0073] 图3所示为乳液涂抹裸鼠皮肤经皮氧分压测试试验结果；
[0074] 图4所示为啫喱涂抹裸鼠皮肤微循环血流量测试试验结果；
[0075] 图5所示为啫喱涂抹裸鼠皮肤经皮氧分压测试试验结果。
具体实施方式
[0076] 本发明公开了一种中药组合物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0077] 本发明提供的中药组合物及其制备方法和应用中所用组分及制剂均可由市场购得。其中，抗敏剂选自市面上可以购得的抗敏剂如瑞士Rahn公司defensil等；商品名：PEHG，苯氧乙醇/乙基己基甘油，购自托尔专用化学品(上海)有限公司。
[0078] 下面结合实施例，进一步阐述本发明。
[0079] 实施例1本发明所述中药组合物的制备
[0080] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪45份、赤芍20份、川芎20份、当归20、桃仁15份、红花10份、苦参15份、防风10份、女贞子20份；
[0081] (2)用体积百分比为60％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：30，80℃提取3h；
[0082] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至30℃，100目过滤，得到滤液；
[0083] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0084] 实施例2本发明所述中药组合物的制备
[0085] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪30份、赤芍10份、川芎10份、当归10份、桃仁5份、红花5份、苦参5份、防风5份、女贞子10份；
[0086] (2)用体积百分比为95％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：40，70℃提取1h；
[0087] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至20℃，200目过滤，得滤液；
[0088] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0089] 实施例3本发明所述中药组合物的制备
[0090] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪60份、赤芍40份、川芎30份、当归30份、桃仁20份、红花20份、苦参20份、防风20份、女贞子30份；
[0091] (2)用体积百分比为50％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：10，90℃提取5h；
[0092] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至50℃，200目过滤，得滤液；
[0093] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0094] 实施例4本发明所述中药组合物的制备
[0095] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪60份、白芍40份、川芎10份、当归10份、桃仁20份、红花20份、苦参5份、防风5份、女贞子30份；
[0096] (2)用体积百分比为50％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：10，90℃提取4h；
[0097] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至40℃，150目过滤，得滤液；
[0098] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0099] 实施例5本发明所述中药组合物的制备
[0100] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪30份、白芍10份、川芎15份、当归15份、桃仁5份、红花5份、苦参10份、防风15份、女贞子15份；
[0101] (2)用体积百分比为60％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：30，80℃提取1h；
[0102] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至50℃，100目过滤，得到滤液；
[0103] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0104] 实施例6本发明所述中药组合物的制备
[0105] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪35份、白芍15份、川芎30份、当归30份、桃仁10份、红花15份、苦参20份、防风20份、女贞子10份；
[0106] (2)用体积百分比为95％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：40，70℃提取5h；
[0107] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至50℃，200目过滤，得到滤液；
[0108] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0109] 实施例7本发明所述中药组合物的制备
[0110] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄60份、白芍10份、川芎10份、当归10份、桃仁5份、红花5份、苦参5份、防风5份、女贞子10份，覆盆子20份；
[0111] (2)用体积百分比为50％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：10，70℃提取1h；
[0112] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至20℃，100目过滤，得到滤液；
[0113] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0114] 实施例8本发明所述中药组合物的制备
[0115] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪50份、白芍30份、川芎20份、当归20份、桃仁15份、红花15份、苦参15份、防风15份、女贞子20份，覆盆子15份；
[0116] (2)用体积百分比为60％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：30，80℃提取3h；
[0117] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至30℃，150目过滤，得到滤液；
[0118] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0119] 实施例9本发明所述中药组合物的制备
[0120] (1)所述原料药粉碎后按如下质量份称取，混匀：黄芪30份、赤芍40份、川芎30份、当归30份、桃仁20份、红花20份、苦参20份、防风20份、女贞子30份，覆盆子5份；
[0121] (2)用体积百分比为95％的乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/mL为1：40，90℃提取5h；
[0122] (3)将步骤(2)得到的提取液冷却至50℃，200目过滤，得到滤液；
[0123] (4)往滤液中加入和步骤(2)所加乙醇等量的1，3-丁二醇混溶均匀，旋蒸出溶液中的乙醇，在布氏漏斗里铺0.45μm滤板进行真空减压抽滤，收集滤液，即得。
[0124] 实施例10本发明所述中药组合物维持成纤维细胞线粒体膜电位功效评价[0125] 1.材料与仪器
[0127] 仪器：无菌操作台、离心机、CO2培养箱、酶标仪、流式细胞仪。
[0128] 2.CCK-8法测定所述中药组合物毒性
[0129] 将成纤维细胞铺于96孔板，待其长至80％进行加药，加入药物为实施例1制备的中药组合物，药物浓度见表1，空白对照为培养基。不同浓度药物作用24h后加入CCK-8试剂10μL，反应3小时后用酶标仪测定450nm吸光值。
[0130] 细胞存活率％＝各组吸光度值(A)/空白组吸光度值(A)×100％。
[0131] 一般认为细胞活率大于80％的药物浓度基本无毒，从表1数据可看出药物作用成纤维细胞24h的最大无毒浓度为0.375mg/mL。
[0132] 表1 中药组合物作用成纤维细胞24h对细胞活率的影响
[0133]
[0134] 3.建立过氧化氢细胞损伤模型
[0135] 将成纤维细胞铺于96孔板，待其长至80％加入过氧化氢，空白对照为培养基。不同浓度过氧化氢分别作用30min、1h、2h、4h及6h后加入CCK-8试剂10μL，反应3小时后用酶标仪测定其450nm吸光值。
[0136] 由表2数据可知不同浓度过氧化氢刺激成纤维细胞同样时间的细胞活率与过氧化氢浓度呈反比，过氧化氢浓度越高细胞活率越低。且相同浓度过氧化氢刺激成纤维细胞不同时间的细胞活率无明显差异(P>0.05)，由此得出过氧化氢短时间30min刺激成纤维细胞较优，因此选用0.7mM过氧化氢作用30min作为建立细胞损伤模型的参数。
[0137] 表2 不同浓度过氧化氢刺激成纤维细胞不同时间对细胞活率的影响[0138]
[0139] 4.所述中药组合物维持线粒体膜电位测试
[0140] 试验分为五组，将成纤维细胞以2×105个/孔接种于6孔板，待24h细胞贴壁后，正常对照组每孔给予1mL无血清培养基，过氧化氢模型组每孔给予1mL浓度为0.7mmol·L-1H2O2作用30min，3个药物预处理组先给予1mL浓度分别为75、150、300μg/mL的药物孵育24小时后再给予0.7mmol·L-1H2O2作用30min。各组处理完后分别收集细胞，用PBS清洗两次，加入500μL的JC-1并将其置于37℃、5％CO2的培养箱中孵育20min，孵育完后收集细胞并用Incubation buffer清洗两次，吸取500μL Incubation buffer重新悬浮细胞并用流式细胞仪分析。
[0141] 试验数据如图1所示，与正常对照组相比，过氧化氢模型组线粒体膜电位显著降低；与过氧化氢模型组比较，75、150、300μg/mL药物预处理组均提高了成纤维细胞的线粒体膜电位，且对线粒体膜电位的提高程度与用于预处理的药物浓度呈正比，说明通过所述实施例1制备的中药组合物预防性给药能有效防止由过氧化氢造成的成纤维细胞线粒体膜电位的下降。用实施例2至9制备的中药组合物重复上述试验，试验结果与实施例1制备的中药组合物的效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0142] 实施例11本发明所述乳液的制备
[0143]
[0144] 制备步骤：
[0145] (1)将水溶性物质山梨醇(70％水溶液)、丙二醇、三乙醇胺加入到去离子水中，搅拌溶解，加热至85℃，维持20min灭菌，制成水相组分A；
[0146] (2)将硬脂酸、硬脂酸单甘脂、白矿油、对羟基苯甲酸甲脂、辛酸三甘油脂、月桂酸醚-23、氢化植物油和抗敏剂defensil混合，在不断搅拌下，加热至85℃，使之溶解成均匀透明的液相，制成油相组分B；
[0147] (3)在不断搅拌下，将组分B加入到组分A中，然后用均质机剧烈搅拌0.5min，然后慢速搅拌，并缓慢降温冷却至50℃，后添加所述中药组合物和卡波姆再继续搅拌至40℃即可。
[0148] 实施例12本发明所述乳液的制备
[0149]
[0150] 制备步骤同实施例11。
[0151] 实施例13本发明所述乳液的制备
[0152]
[0153]
[0154] 制备步骤同实施例11。
[0155] 实施例14本发明所述乳液促进气血微循环功效评价
[0156] 1.材料、对象和仪器
[0157] 材料：动物试验受试样品如表3所示，人体试验受试样品为实施例11制备的乳液。
[0158] 表3 皮肤微循环血流乳液动物试验受试样品
[0159]
[0160] 对象：健康的6周龄裸鼠；受试志愿者。
[0161] 仪器：激光多普勒血流分析仪(帕瑞医学，PeriScan PIM 3)。
[0162] 2.动物试验
[0163] 分组：将裸鼠分为4组，每组3只裸鼠。第1组为空白对照组，涂抹样品1(水)；第2、3组为受试样品组，分别涂抹样品2(实施例11制备的乳液)和样品3(实施例12制备的乳液)；第4组为空白基质组，涂抹样品4(实施例11的空白基质，即不添加本发明所述的中药组合物，其余有效物质配方与实施例11一致，制备方法与实施例11一致得到的样品4)。
[0164] 给药方法：每只裸鼠皮肤涂抹3cm2相应受试样品或对照样品，连续给药3天。
[0165] 检测方法：使用激光多普勒血流分析仪测定给药前、给药30分钟后和给药3天后裸鼠皮肤微循环血流量。
[0166] 统计方法：采用单因素方差分析统计分析皮肤微循环血流量的组间差异。
[0167] 裸鼠皮肤微循环血流量测试结果如图2所示。
[0168] 测试结果显示，涂抹样品1的空白对照组小鼠在给药30min后及3d后皮肤微循环血流量相比于涂抹前均有一定程度的降低。分别涂抹样品2、3、4的试验组在给药30min后及3d后的皮肤微循环血流量均有显著提高，且相对于空白对照组具有显著性差异(P＜0.05)，说明受试样品具有一定的提高皮肤微循环血流量的作用。用实施例13制备的乳液重复上述试验，试验结果与实施例11和12制备的乳液效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0169] 3.人体试验
[0170] 方案如下：
[0171] (1)样品制备：受试样品为实施例11制备的乳液；
[0172] (2)志愿者选择：选取9名志愿者，填写知情同意书后，自愿受试；
[0173] (3)涂抹方式：每天涂抹3次，早中晚各1次，全脸涂抹；
[0174] (4)通过对受试者在使用样品前后皮肤微循环血流量的变化情况，评估样品对人体皮肤微循环的改善作用。
[0175] 在使用样品前及使用样品3d后用激光多普勒血流分析仪测试人体皮肤微循环血流量的试验结果如表4所示。
[0176] 表4 皮肤微循环血流量乳液人体试验结果
[0177]
[0178]
[0179] 表4的结果显示，使用3d后有8名志愿者的皮肤微循环血流量得到了一定程度的提升，仅有1名志愿者的皮肤微循环血流量降低(一致率为98.5％)，有4名志愿者的皮肤微循环血流量的提高量达到10％以上，说明所受试样品具有一定的提高皮肤微循环血流量的功效。用实施例12和13制备的乳液重复上述试验，试验结果与实施例11制备的乳液效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0180] 实施例15本发明所述乳液经皮氧分压测试
[0181] 1材料、对象与仪器
[0182] 材料：动物试验受试样品如表5所示，人体试验受试样品为实施例11制备的乳液。
[0183] 表5 经皮氧分压乳液动物试验受试样品
[0184]
[0185] 对象：健康的6周龄裸鼠；受试志愿者。
[0186] 仪器：经皮氧分压检测仪(帕瑞医学，PeriFlux 5000血管检查工作站)。
[0187] 2.动物试验
[0188] 分组：将裸鼠分为4组，每组3只裸鼠。第1组为空白对照组，涂抹样品1(水)；第2、3组为待测样品组，分别涂抹样品2(实施例11制备的乳液)和样品3(实施例12制备的乳液)；第4组为空白基质组，涂抹样品4(实施例11的空白基质，即不添加本发明所述的中药组合物，其余有效物质配方与实施例11一致，制备方法与实施例11一致得到的样品4)。
[0189] 给药方法：每只裸鼠皮肤涂抹3cm2相应受试样品或对照样品，连续给药3天。
[0190] 检测方法：使用经皮氧分压测试仪测定给药前、给药后30分钟后和给药3天后裸鼠皮肤的经皮氧分压。
[0191] 统计方法：采用单因素方差分析统计分析皮肤经皮氧分压的组间差异。
[0192] 经皮氧分压测试结果如图3所示。
[0193] 测试结果显示，涂抹样品1的空白对照组在给药30min后及3d后经皮氧分压相比于涂抹前均有一定程度的降低。分别涂抹样品2、3、4的试验组在给药30min后及3d后的经皮氧分压均有显著提高，且相比于空白对照组具有显著性差异(P＜0.05)，说明受试样品具有良好的提高经皮氧分压的功效。用实施例13制备的乳液重复上述试验，试验结果与实施例11和12制备的乳液效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0194] 3.人体试验
[0195] 方案如下：
[0196] (1)样品制备：受试样品为实施例11制备的乳液。
[0197] (2)志愿者选择：选取9名志愿者，填写知情同意书后，自愿受试。
[0198] (3)涂抹方式：每天涂抹3次，早中晚各1次，全脸涂抹。
[0199] (4)分析受试者在使用样品前后的经皮氧分压的变化情况。
[0200] 使用样品前及涂抹样品3d后，经皮氧分压测试结果如表6所示。
[0201] 表6 经皮氧分压乳液人体试验结果
[0202]
[0203]
[0204] 表6结果显示，使用3d后9名志愿者中有5名志愿者的经皮氧分压相对于使用前有一定程度的提高(一致率大于100％)。仅有2名受试志愿者在使用样品3d后经皮氧分压有一定程度的降低，说明受试样品对人体经皮氧分压具有一定的提高作用。用实施例12和13制备的乳液重复上述试验，试验结果与实施例11制备的乳液效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0205] 实施例16本发明所述啫喱的制备
[0206]
[0207] 制备方法：
[0208] (1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物撒入水中，静置水合完全；
[0209] (2)将黄原胶和丁二醇、甘油混合均匀，快速搅拌加入水中，搅拌溶解均匀；
[0210] (3)加入PCA-Na(吡咯烷酮羧酸钠)、尿素，混合均匀，加热到80℃，保温半小时；
[0211] (4)搅拌降温，降温到45℃加入10％氢氧化钠溶液，搅拌均匀；
[0212] (5)加入1％透明质酸钠溶液，搅拌均匀后加入所述中药组合物；
[0213] (6)降温到40℃加入PEHG，搅拌均匀；
[0214] (7)35℃出料。
[0215] 实施例17本发明所述啫喱的制备
[0216]
[0217] 制备方法：
[0218] (1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物撒入水中，静置水合完全；
[0219] (2)将黄原胶和丁二醇、甘油混合均匀，快速搅拌加入水中，搅拌溶解均匀；
[0220] (3)加入PCA-Na(吡咯烷酮羧酸钠)、尿素，混合均匀，加热到80℃，保温半小时；
[0221] (4)搅拌降温，降温到50℃加入10％氢氧化钠溶液，搅拌均匀；
[0222] (5)加入1％透明质酸钠溶液，搅拌均匀后加入所述中药组合物；
[0223] (6)降温到45℃加入PEHG，搅拌均匀；
[0224] (7)38℃出料。
[0225] 实施例18本发明所述啫喱的制备
[0226]
[0227] 制备方法：
[0228] (1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物撒入水中，静置水合完全；
[0229] (2)将黄原胶和丁二醇、甘油混合均匀，快速搅拌加入水中，搅拌溶解均匀；
[0230] (3)加入PCA-Na(吡咯烷酮羧酸钠)、尿素，混合均匀，加热到80℃，保温半小时；
[0231] (4)搅拌降温，降温到48℃加入10％氢氧化钠溶液，搅拌均匀；
[0232] (5)加入1％透明质酸钠溶液，搅拌均匀后加入所述中药组合物；
[0233] (6)降温到43℃加入PEHG，搅拌均匀；
[0234] (7)37℃出料。
[0235] 实施例19本发明所述啫喱促进气血循环功效评价
[0236] 1材料、对象与仪器
[0237] 材料：动物试验受试样品如表7所示，人体试验受试样品为实施例16制备的啫喱。
[0238] 表7 皮肤微循环血流量啫喱动物试验受试样品
[0239]
[0240] 对象：健康的6周龄裸鼠；受试志愿者。
[0241] 仪器：激光多普勒血流分析仪(帕瑞医学，PeriScan PIM 3)。
[0242] 2.动物试验
[0243] 分组：将裸鼠分为4组，每组3只裸鼠。第1组为空白对照组，涂抹样品1(水)；第2、3组为待测样品组，分别涂抹样品2(实施例16制备的啫喱)和样品3(实施例17制备的啫喱)；第4组为空白基质组，涂抹样品4(实施例16的空白基质，即不添加本发明所述的中药组合物，其余有效物质配方与实施例16一致，制备方法与实施例16一致得到的样品4)。
[0244] 给药方法：每只裸鼠皮肤涂抹3cm2相应受试样品或对照样品，连续给药3天。
[0245] 检测方法：使用激光多普勒血流分析仪测定给药前、给药30分钟后和给药3天后裸鼠皮肤微循环血流量。
[0246] 统计方法：采用单因素方差分析统计皮肤微循环血流量组间差异。
[0247] 裸鼠皮肤微循环血流量测试结果如图4所示。
[0248] 测试结果显示，涂抹样品1的空白对照组小鼠在给药30min后及3d后皮肤微循环血流量相比于给药前均有一定程度的降低。分别涂抹样品2、3、4试试验组在给药30min后及3d后的皮肤微循环血流量均有显著提高，且相对于空白对照组具有显著性差异(P＜0.05)，说明受试样品具有一定的提高皮肤微循环血流量的作用。用实施例18制备的啫喱重复上述试验，试验结果与实施例16和17制备的啫喱效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0249] 3.人体试验
[0250] 方案如下：
[0251] (1)样品制备：将受试样品为实施例16制备的啫喱；
[0252] (2)志愿者选择：选取9名志愿者，填写知情同意书后，自愿受试；
[0253] (3)涂抹方式：每天涂抹3次，早中晚各1次，全脸涂抹；
[0254] (4)通过对受试者在使用样品前后皮肤微循环血流量的变化情况，评估样品对人体皮肤微循环的改善作用。
[0255] 在使用样品前及使用样品3d后用激光多普勒血流分析仪测试人体皮肤微循环血流量的试验结果如表8所示。
[0256] 表8 皮肤微循环血流量啫喱人体试验结果
[0257]
[0258] 表8结果显示，使用3d后9名志愿者的皮肤微循环血流量均得到了一定程度的提升，有2名志愿者的皮肤微循环血流量的提高量达到25％以上。由此可知，受试样品具有一定的提高皮肤微循环血流量的功效。用实施例17和18制备的啫喱重复上述试验，试验结果与实施例16制备的啫喱效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0259] 实施例20本发明所述啫喱经皮氧分压测试
[0260] 1.材料、对象与仪器
[0261] 材料：动物试验受试样品如表9所示，人体试验受样品为实施例16制备的啫喱。
[0262] 表9 经皮氧分压啫喱动物试验受试样品
[0263]
[0264] 对象：健康的6周龄裸鼠；受试志愿者。
[0265] 仪器：经皮氧分压检测仪(帕瑞医学，PeriFlux 5000血管检查工作站)。
[0266] 2.动物试验
[0267] 分组：将裸鼠分为4组，每组3只裸鼠。第1组为空白对照组，涂抹样品1(水)；第2、3组为待测样品组，分别涂抹样品2(实施例16制备的啫喱)和样品3(实施例17制备的啫喱)；第4组为空白基质组，涂抹样品4(实施例16的空白基质，即不添加本发明所述的中药组合物，其余有效物质配方与实施例16一致，制备方法与实施例16一致得到的样品4)。
[0268] 给药方法：每只裸鼠皮肤涂抹3cm2相应受试样品或对照样品，连续给药3天。
[0269] 检测方法：使用经皮氧分压测试仪测定给药前、给药后30分钟后和给药3天后裸鼠皮肤的经皮氧分压。
[0270] 统计方法：采用单因素方差分析统计分析皮肤的经皮氧分压的组间差异。
[0271] 经皮氧分压测试结果如图5所示。
[0272] 测试结果显示，涂抹样品1的空白对照组在给药30min后及3d后经皮氧分压相比于涂抹前均有一定程度的降低。分别涂抹样品2、3、4的试验组在给药30min后及3d后的经皮氧分压均有显著提高，且相比于空白对照组具有显著性差异(P＜0.05)，说明受试样品具有良好的提高经皮氧分压的功效。用实施例18制备的啫喱重复上述试验，试验结果与实施例16和17制备的啫喱效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0273] 3.人体试验
[0274] 方案如下：
[0275] (1)样品制备：受试样品为实施例16制备的啫喱。
[0276] (2)志愿者选择：选取9名志愿者，填写知情同意书后，自愿受试。
[0277] (3)涂抹方式：每天涂抹3次，早中晚各1次，全脸涂抹。
[0278] (4)分析受试者在使用样品前后的经皮氧分压的变化情况。
[0279] 使用样品前及涂抹样品3d后，经皮氧分压测试结果表10所示。
[0280] 表10 经皮氧分压啫喱人体试验结果
[0281]
[0282] 表10结果显示，使用3d后9名志愿者中有5名志愿者的经皮氧分压相对于使用前有一定程度的提高(一致率大于100％)，且其提高量超过50％。由此可知，受试样品对人体经皮氧分压具有一定的提高作用。用实施例17和18制备的啫喱重复上述试验，试验结果与实施例16制备的啫喱效果相同或相近，无显著差异(P＞0.05)。
[0283] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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