用于治疗寄生虫病的化合物和方法
阅读：11发布：2020-05-12
专利汇可以提供用于治疗寄生虫病的化合物和方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文提供可用于 治疗 多种寄生虫病的化合物。这些化合物及其药学可接受的盐可配制为药物组合物、兽药组合物，且可用于治疗和/或 预防 通过寄生虫扩散的 疾病 ，包括疟疾和隐孢子虫病。，下面是用于治疗寄生虫病的化合物和方法专利的具体信息内容。
1.一种化合物，具有式(I)的结构：
其中“虚线”键可以是单键或双键；
R1是任选经取代的芳基或杂芳基；
R2是任选经取代的烷氧基、环烷氧基或杂环基；
R3是氢或-CH2-X；
R4与R5独立为氢、-X或-CH2-X，R4和R5可一起形成5或6元稠环，且R4和R5中至少一者不是氢；
R6与R7独立为氢或R；以及
z1至z8在每次出现时独立选自CH或N；其中
-X在每次出现时独立选自-OH、-OR、-S(O)R、-S(O)2R、-N(R)-S(O)2R、-S(O)2-N(R)(R)、-S(O)2-NHR、-N(R)-C(O)-R或-N(R)(R)；以及
R在每次出现时独立选自任选经取代的C1-C12烷基；
或其药学可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，具有式(II)的结构：
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R7是氢。
4.根据权利要求1所述的化合物，具有式(IIb)的结构：
5.根据权利要求1所述的化合物，具有式(IIa)的结构：
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R4与R5是选自-X或-CH2-X的相同官能团。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R5是氢且R4是-X或-CH2-X。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R4是氢且R5是-X或-CH2-X。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的化合物，其中R4或R5的-X或-CH2-X基团中的-X是-OH、-NH2或-N(R)(R)。
10.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R4与R5独立选自-OH和-OR，且R4与R5一起形成6元稠环。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R6是C1-4线性或支链烃。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中R6是氢。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，其中R在每次出现时为C1-4线性或支链烃。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物，其中R1是任选经取代的C6芳基或杂芳基。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中R1是苯基、氟苯基、二氟苯基或吡啶基。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是C1-4线性或支链烷氧基。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中R2是甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
18.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是经一个或多个氟取代的C1-4线性或支链烷氧基。
19.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是-OCF3、-OCHF2或-OCH2F。
20.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是C3-6杂环基(例如，吖丙啶基、环氧乙烷基、环硫乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、硫化环丙烷基、二氮杂环丁烷基、二氧杂环丁烷基、二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、咪唑基、吡唑基、恶唑基等)。
21.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是氧杂环丁烷基或氮杂环丁烷基。
22.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是C3-6环烷氧基。
23.根据权利要求22所述的化合物，其中R2是环丙氧基。
24.根据权利要求1或6至23中任一项所述的化合物，其中z1至z4中的一者是N，其余为CH。
25.根据权利要求1或6至24中任一项所述的化合物，其中z5至z8中的一者是N，其余为CH。
26.根据权利要求1、6至23或25中任一项所述的化合物，其中z1和z4各自为N，且z3和z2各自为CH。
27.根据权利要求1、6至23或26中任一项所述的化合物，其中z5和z7各自为N，且z6和z8各自为CH。
28.一种化合物，具有式(III)的结构：
其中“虚线”键可以是单键或双键；
R1是任选经取代的芳基或杂芳基；
R2是任选经取代的烷氧基、环烷氧基或杂环基；
R3是氢或-CH2-X；
R6与R7独立为氢或R；以及
z1至z8在每次出现时独立选自CH或N；其中
-X在每次出现时独立选自-OH、-OR、-S(O)R、-S(O)2R、-N(R)-S(O)2R、-S(O)2-N(R)(R)、-S(O)2-NHR、-N(R)-C(O)-R或-N(R)(R)；以及
R在每次出现时独立为C1-C12烷基；
条件是，在R6是氢的情况下，R3是-CH2-N(R)(R)且所述“虚线”键是双键。
29.根据权利要求28所述的化合物，具有式(IV)的结构：
30.根据权利要求28或29所述的化合物，其中所述“虚线”键是双键。
31.根据权利要求28或29所述的化合物，其中R6是C1-4线性或支链烃。
32.根据权利要求28至31中任一项所述的化合物，其中R1是任选经取代的C6芳基或杂芳基。
33.根据权利要求28至32中任一项所述的化合物，其中R1是苯基、氟苯基、二氟苯基或吡啶基。
34.根据权利要求28至33中任一项所述的化合物，其中R2是C1-4线性或支链烷氧基。
35.根据权利要求28至23中任一项所述的化合物，其中R2是甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
36.根据权利要求35所述的化合物，其中R2是C3-6环烷氧基。
37.根据权利要求35所述的化合物，其中R2是环丙氧基。
38.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是经一个或多个氟取代的C1-4线性或支链烷氧基。
39.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是-OCF3、-OCHF2或-OCH2F。
40.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是C3-6杂环基(例如，吖丙啶基、环氧乙烷基、环硫乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、硫化环丙烷基、二氮杂环丁烷基、二氧杂环丁烷基、二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、咪唑基、吡唑基、恶唑基等)。
41.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R2是氧杂环丁烷基。
42.根据权利要求28或30至37中任一项所述的化合物，其中z1至z4中的一者是N，其余为CH。
43.根据权利要求28或30至42中任一项所述的化合物，其中z5至z8中的一者是N，其余为CH。
44.根据权利要求28、30至37或43中任一项所述的化合物，其中z1和z4各自为N，且z3和z2各自为CH。
45.根据权利要求28、30至37或44中任一项所述的化合物，其中z5和z7各自为N，且z6和z8各自为CH。
46.根据权利要求1或28所述的化合物，其中所述化合物选自化合物E1至E38组成的组。
47.一种医药组合物，包含药学可接受的赋形剂和根据权利要求1至46中任一项所述的化合物。
48.根据权利要求47所述的医药组合物，其中所述化合物以有效量存在。
49.根据权利要求47所述的医药组合物，配制为兽药组合物。
50.根据权利要求47至49中任一项所述的医药组合物，其中所述化合物以有效量存在以治疗疟疾。
51.根据权利要求47至49中任一项所述的医药组合物，其中所述化合物以治疗有效的量存在，以治疗由来自隐孢子虫属的寄生虫造成的疾病。
52.根据权利要求51所述的医药组合物，其中所述疾病是隐孢子虫病。
53.一种治疗或预防受试者的寄生虫病的方法，包含向所述受试者给药有效量的根据权利要求1至46所述的化合物的步骤。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述寄生虫病是疟疾。
55.根据权利要求53所述的方法，其中所述疟疾是耐药性疟疾。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述耐药性疟疾对于氯喹、奎宁、乙胺嘧啶、磺胺多辛、甲氟奎、蒿甲醚、本芴醇、青蒿琥酯、阿莫地喹、双氢青蒿素、哌喹、氯胍、强力霉素、克林霉素、青蒿素、阿托伐醌或其任意组合具有耐药性。
57.根据权利要求53所述的方法，其中所述疟疾是肝脏阶段疟疾。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述受试者的肝脏被造成疟疾的寄生虫感染，且所述治疗防止了所述感染从其肝脏扩散。
59.根据权利要求53所述的方法，其中所述疟疾是血液阶段疟疾。
60.根据权利要求53所述的方法，其中所述疟疾是传播阶段疟疾。
61.根据权利要求53所述的方法，其中所述疟疾由蚊类体内的选自恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫、伯氏鼠疟原虫、夏氏疟原虫、文氏疟原虫或约氏疟原虫者携带。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述蚊类是恶性疟原虫。
63.根据权利要求53所述的方法，其中所述寄生虫病是隐孢子虫病。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述隐孢子虫病由微小隐孢子虫携带。
65.根据权利要求53所述的方法，其中所述受试者是人类。
66.根据权利要求53所述的方法，其中所述受试者不是人类。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述受试者是小鼠、大鼠、兔、非人类灵长动物、蜥蜴、壁虎、母牛、牛犊、绵羊、羊羔、马、马驹、猪或仔猪。
68.一种治疗或预防受试者的寄生虫病的方法，包含向所述受试者给药根据权利要求
47至52所述的医药组合物的步骤。
69.根据权利要求68所述的方法，其中所述寄生虫病是疟疾。
70.根据权利要求68所述的方法，其中所述疟疾是耐药性疟疾。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述耐药性疟疾对于氯喹、奎宁、乙胺嘧啶、磺胺多辛、甲氟奎、蒿甲醚、本芴醇、青蒿琥酯、阿莫地喹、双氢青蒿素、哌喹、氯胍、强力霉素、克林霉素、青蒿素、阿托伐醌或其任意组合具有耐药性。
72.根据权利要求68所述的方法，其中所述疟疾是肝脏阶段疟疾。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述受试者的肝脏被造成疟疾的寄生虫感染，且所述治疗防止了所述感染从其肝脏扩散。
74.根据权利要求68所述的方法，其中所述疟疾是血液阶段疟疾。
75.根据权利要求68所述的方法，其中所述疟疾是传播阶段疟疾。
76.根据权利要求68所述的方法，其中所述疟疾由蚊类体内的选自恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫、伯氏鼠疟原虫、夏氏疟原虫、文氏疟原虫或约氏疟原虫者携带。
77.根据权利要求68所述的方法，其中所述蚊类是恶性疟原虫。
78.根据权利要求68所述的方法，其中所述寄生虫病是隐孢子虫病。
79.根据权利要求78所述的方法，其中所述隐孢子虫病由微小隐孢子虫携带。
80.根据权利要求68所述的方法，其中所述受试者是人类。
81.根据权利要求68所述的方法，其中所述受试者不是人类。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述受试者是小鼠、大鼠、兔、非人类灵长动物、蜥蜴、壁虎、母牛、牛犊、绵羊、羊羔、马、马驹、猪或仔猪。
用于治疗寄生虫病的化合物和方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请主张2017年3月20日提交的美国临时申请62/473,771的优先权，其内容通过引用而以其整体并入本文。
背景技术
[0003] 疟疾是由原生动物寄生虫造成的虫媒传染病，且在包括美洲、亚洲和非洲的一部分在内的热带和亚热带地区广泛扩散。可感染人类的五个疟原虫物种(恶性疟原虫(P.falciparum)、间日疟原虫(P.vivax)、卵形疟原虫(P.ovale)、三日疟原虫(P.malariae)和诺氏疟原虫(P.knowlesi))中，最严重形式的疾病由恶性疟原虫和间日疟原虫造成。此外，多个疟原虫物种感染除人类之外的哺乳动物。例如，伯氏鼠疟原虫(P.berghei)、夏氏疟原虫(P.chabaudi)、文氏疟原虫(P.vinckei)和约氏疟原虫(P.yoelii)可在某些啮齿动物体内造成疟疾。
[0004] 每年有大约51,500万人罹患疟疾，其这些人中的100万至300万人死于该疾病。目前，大多数抗疟药以复制无性血液阶段为靶点，此时寄生虫存活于红细胞中。即使肝脏和传播阶段的寄生虫并不造成疟疾症状，但对于积极预防该疾病的流行和保护脆弱人群来说，预防性药物和传播阻断性药物是必要的。目前已核准的抗疟药武器诸如氯喹(chloroquine)、阿托伐醌(atovaquone)、乙胺嘧啶(pyrimethamine)和磺胺多辛
(sulfadoxine)仅仅用于人类疟疾寄生虫范围内的有限靶点，而日益增长的广泛耐药性正在促使具有新的生物模板的新抗疟药的研发。
(sulfadoxine)仅仅用于人类疟疾寄生虫范围内的有限靶点，而日益增长的广泛耐药性正在促使具有新的生物模板的新抗疟药的研发。
[0005] 隐孢子虫病是另一种寄生虫病，由顶复门原生动物寄生虫属的隐孢子虫造成。隐孢子虫病最常见的肇因是细胞内顶复门寄生虫微小隐孢子虫(C.parvum)和人隐孢子虫(C.hominis)。隐孢子虫病也可能由犬隐孢子虫(C.canis)、猫隐孢子虫(C.felis)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)和鼠隐孢子虫(C.muris)造成。隐孢子虫病影响远端小肠，且可影响免疫活性个体和免疫低下个体的呼吸道。隐孢子虫病是最常见的水媒疾病之一，且在世界范围内均有发现。隐孢子虫病也可传播至其它动物，包括牛、绵羊、猪、马、山羊和壁虎。硝唑尼特(nitazoxanide)是目前用于隐孢子虫病护理的标准药物，但该药物仅在儿童体内显现部分效力，而在AIDS患者体内并不比安慰剂有效。发明内容
[0006] 本文公开治疗和预防包括疟疾和隐孢子虫病在内的寄生虫病的化合物、医药组合物和方法，包括/使用上文和本文中其它处所述的化合物。
[0007] 在一些具体实施例中，这些医药组合物配制为用于除人类之外的受试者的兽药组合物。
[0008] 该化合物可具有式(I)的结构：
[0009]
[0010] 其中“虚线”键可以是单键或双键；
[0011] R1是任选经取代的芳基或杂芳基；
[0013] R3是氢或-CH2-X；
[0014] R4与R5独立为氢、-X或-CH2-X，R4和R5可一起形成5或6元稠环，且R4和R5中至少一者不是氢；
[0015] R6与R7独立为氢或R；以及
[0016] z1至z8在每次出现时独立选自CH或N；其中
[0017] -X在每次出现时独立选自-OH、-OR、-S(O)R、-S(O)2R、-N(R)-S(O)2R、-S(O)2-N(R)(R)、-S(O)2-NHR、-N(R)-C(O)-R或-N(R)(R)；以及
[0018] R在每次出现时独立选自任选经取代的C1-C12烷基；
[0019] 或其药学可接受的盐。-X在每次出现时可独立选自-OH、-NH2或-N(R)(R)。在一些具体实施例中，R4和/或R5中的-X基团(包括当R4和/或R5为-CH2-X时的-X基团)可选自-OH、NH2或-N(R)(R)。另外，R在每次出现时可独立选自C1-4线性或支链烃。
[0020] 在一些具体实施例中，R6和R7各自为氢。在一些具体实施例中，R4和R5可以是选自-X或-CH2-X的相同官能团(例如，R4是-OH且R5是-OH，R4是-NH2且R5是-NH2，R4是-OCH3且R5是-OCH3，等等)。在其它具体实施例中，R5是氢且R4是-X或-(CH2)-X。在其它具体实施例中，R4是氢且R5是-X或-(CH2)-X。在一些具体实施例中，R4和R5独立选自-OH和-OR，以及R4和R5一起形成6元稠环。在一些具体实施例中，R6是C1-4线性或支链烃。在其它具体实施例中，R6是氢。R1可为任选经取代的C6芳基或杂芳基(例如，苯基、氟苯基、二氟苯基、吡啶基等)。在一些具体实施例中，R2是C1-4线性或支链烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等)。在一些具体实施例中，R2是经一个或多个F取代的C1-4线性或支链烷氧基(例如，-OCF3、-OCHF2或-OCH2F)。在其它具体实施例中，R2是C3-6杂环基(例如，吖丙啶基、环氧乙烷基、环硫乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、硫化环丙烷基(thietanyl)、二氮杂环丁烷基、二氧杂环丁烷基、二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、咪唑基、吡唑基、恶唑基等)。在优选的具体实施例中，R2是氧杂环丁烷基或氮杂环丁烷基。在其它具体实施例中，R2是C3-6环烷氧基(例如，环丙氧基)。在一些具体实施例中，R3是-CH2-X且-X是N(R)(R)。
[0021] z1至z8可各自为CH。在一些具体实施例中，z1至z4中的一者为N，其余为CH。在一些具体实施例中，z5至z8中的一者为N，其余为CH。在一些具体实施例中，z1和z4各自为N，且z3和z2各自为CH。在一些具体实施例中，z5和z7各自为N，且z6和z8各自为CH。
[0022] 式(I)结构中的任何立体中心可为任意构型，或可作为各自立体中心的外消旋混合物而存在(例如，立体异构体、非对映异构体等)。在一些具体实施例中，该化合物具有式(II)的结构：
[0023]
[0024] 在一些具体实施例中，该化合物具有式(IIb)的结构：
[0025]
[0026] 在一些具体实施例中，该化合物具有式(IIa)的结构：
[0027]
[0028] 该化合物也可具有式(III)的结构：
[0029]
[0030] 其中“虚线”键可以是单键或双键；
[0031] R1是任选经取代的芳基或杂芳基；
[0032] R2是任选经取代的烷氧基、环烷氧基或杂环基；
[0033] R3是氢或-CH2-X；
[0034] R6与R7独立为氢或R；以及
[0035] z1至z8在每次出现时独立选自CH或N；其中
[0036] -X在每次出现时独立选自-OH、-OR、-S(O)R、-S(O)2R、-N(R)-S(O)2R、-S(O)2-N(R)(R)、-S(O)2-NHR、-N(R)-C(O)-R或-N(R)(R)；以及
[0037] R在每次出现时独立选自任选经取代的C1-C12烷基；
[0038] 条件是，在R6是氢的情况下，R3是-CH2-N(R)(R)且所述“虚线”键是双键。在一些具体实施例中，该“虚线”键是双键。在其它实施方式中，该“虚线”键是单键。-X在每次出现时可独立选自-OH、-NH2或-N(R)(R)。另外，R在每次出现时可独立选自C1-4线性或支链烃。
[0039] z1至z8可各自为CH。在一些具体实施例中，z1至z4中的一者为N，其余为CH。在一些具体实施例中，z5至z8中的一者为N，其余为CH。在一些具体实施例中，z1和z4各自为N，且z3和z2各自为CH。在一些具体实施例中，z5和z7各自为N，且z6和z8各自为CH。
[0040] 在一些具体实施例中，R6和R7各自为氢。在一些具体实施例中，R6是低级烷基(例如，甲基、乙基等)。在一些具体实施例中，R6是C1-4线性或支链烃。在其它具体实施例中，R6是氢。R1可为任选经取代的C6芳基或杂芳基(例如，苯基、氟苯基、二氟苯基、吡啶基等)。在一些具体实施例中，R2是C1-4线性或支链烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等)。在一些具体实施例中，R2是经一个或多个F取代的C1-4线性或支链烷氧基(例如，-OCF3、-OCHF2或-OCH2F)。在其它具体实施例中，R2是C3-6杂环基(例如，吖丙啶基、环氧乙烷基、环硫乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、硫化环丙烷基、二氮杂环丁烷基、二氧杂环丁烷基、二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、咪唑基、吡唑基、恶唑基等)。在优选的具体实施例中，R2是氧杂环丁烷基或氮杂环丁烷基。在其它具体实施例中，R2是C3-6环烷氧基(例如，环丙氧基)。
[0041] 在一些具体实施例中，该化合物可具有式(IV)的结构：
[0042]
[0043] 在一些具体实施例中，该化合物是化合物E1至E38中任一者或其药学可接受的盐。
[0044] 任何上述化合物可用于医药组合物中。在一些具体实施例中，该医药组合物可包含药学可接受的赋形剂和具有式(I)结构的化合物：
[0045]
[0046] 其中“虚线”键可以是单键或双键；
[0047] R1是任选经取代的芳基或杂芳基；
[0048] R2是任选经取代的烷氧基、环烷氧基或杂环基；
[0049] R3是氢或-CH2-X；
[0050] R4与R5独立为氢、-X或-CH2-X，R4和R5可一起形成5或6元稠环，且R4和R5中至少一者不是氢；
[0051] R6与R7独立为氢或R；以及
[0052] z1至z8在每次出现时独立选自CH或N；其中
[0053] -X在每次出现时独立选自-OH、-OR、-S(O)R、-S(O)2R、-N(R)-S(O)2R、-S(O)2-N(R)(R)、-S(O)2-NHR、-N(R)-C(O)-R或-N(R)(R)；以及
[0054] R在每次出现时独立选自任选经取代的C1-C12烷基；
[0055] 或其药学可接受的盐。-X在每次出现时可独立选自-OH、-NH2或-N(R)(R)。在一些具体实施例中，R4和/或R5中的-X基团(包括当R4和/或R5为-CH2-X时的-X基团)可选自-OH、NH2或-N(R)(R)。另外，R在每次出现时可独立选自C1-4线性或支链烃。
[0056] 在一些具体实施例中，该医药组合物可包含药学可接受的赋形剂和具有式(III)结构的化合物：
[0057]
[0058] 其中“虚线”键可以是单键或双键；
[0059] R1是任选经取代的芳基或杂芳基；
[0060] R2是任选经取代的烷氧基、环烷氧基或杂环基；
[0061] R3是氢或-CH2-X；
[0062] R6与R7独立为氢或R；以及
[0063] z1至z8在每次出现时独立选自CH或N；其中
[0064] -X在每次出现时独立选自-OH、-OR、-S(O)R、-S(O)2R、-N(R)-S(O)2R、-S(O)2-N(R)(R)、-S(O)2-NHR、-N(R)-C(O)-R或-N(R)(R)；以及
[0065] R在每次出现时独立选自任选经取代的C1-C12烷基；
[0066] 条件是，在R6是氢的情况下，R3是-CH2-N(R)(R)且所述“虚线”键是双键。在一些具体实施例中，该“虚线”键是双键。在其它实施方式中，该“虚线”键是单键。-X在每次出现时可独立选自-OH、-NH2或-N(R)(R)。另外，R在每次出现时可独立选自C1-4线性或支链烃。在一些具体实施例中，该化合物以有效的量存在于医药组合物中。例如，该化合物可以对于治疗或预防疟疾为有效的量存在。在一些具体实施例中，该化合物可以对于治疗或预防由来自隐孢子虫属的寄生虫造成的疾病(例如，隐孢子虫病)有效的量存在。在一些具体实施例中，该医药组合物可配制为用于治疗疟疾和隐孢子虫病。
[0067] 也公开了治疗或预防受试者疾病的相关方法。在一些具体实施例中，治疗或预防受试者的寄生虫病的方法包含向所述受试者给药有效量的本文公开化合物的步骤。在一些具体实施例中，将有效量的化合物配制在医药组合物(例如，兽药组合物等)中。
[0068] 该寄生虫病可能是疟疾。在一些具体实施例中，疟疾是耐药性疟疾(例如，对于氯喹、奎宁、乙胺嘧啶、磺胺多辛、甲氟奎、蒿甲醚、本芴醇、青蒿琥酯、阿莫地喹、双氢青蒿素、哌喹、氯胍、强力霉素、克林霉素、青蒿素、阿托伐醌或其任意组合等具有耐药性的疟疾)。在一些具体实施例中，疟疾是血液阶段疟疾。在一些具体实施例中，疟疾是传播阶段疟疾。在一些具体实施例中，疟疾是肝脏阶段疟疾。在一些具体实施例中，受试者被造成疟疾的寄生虫感染，且所述治疗防止了所述感染从他们的肝脏扩散。在一些具体实施例中，疟疾由蚊类体内的选自恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫、伯氏鼠疟原虫、夏氏疟原虫、文氏疟原虫或约氏疟原虫者携带。在优选的具体实施例中，蚊类携带恶性疟原虫(尤其是当受试者是人类时)。
[0069] 该寄生虫病可能是隐孢子虫病。在一些具体实施例中，隐孢子虫病由微小隐孢子虫携带。
[0070] 在一些具体实施例中，受试者是人类。在其它具体实施例中，受试者不是人类(例如，该医药组合物被配制为兽药组合物)。在一些具体实施例中，受试者是小鼠、大鼠、兔、非人类灵长动物、蜥蜴、壁虎、母牛、牛犊、绵羊、羊羔、马、马驹、猪或仔猪。
[0071] 该领域技术人员从下述具体实施方式将明了本发明的这些和其它方面，该具体实施方式以示例途径简化说明了实施用于实现本发明的多种模式。应了解，本发明存在额外的、不同的、显而易见的方面，这些方面均不悖离本发明。据此，说明书本质上是示例性的而非限制性的。
具体实施方式
[0072] 定义
[0073] 应理解，本文采用的技术用于揭示特定具体实施例的目的，而非试图限制。再者，尽管与本文中揭示者类似或等效的方法和材料可用于实践或测试本揭示内容，但现在揭示优选的方法和材料。
[0074] 如本文中所用，术语“酰基”表示氢或如本文中定义的烷基通过如本文中定义的羰基附接至母体分子基团，示例如甲酰基(即，甲醛基)、乙酰基、三氟乙酰基、丙酰基和丁酰基。例示性的未取代酰基包括1至6个、1至11个、或1至21个碳。在一些具体实施例中，烷基进一步经1、2、3或4个如本文所述的取代基取代。
[0075] 如本文中所用，术语“烷基”，单独使用或与其它基团合用，是指1至20个碳原子(例如，1至16个碳原子，1至12个碳原子，1至10个碳原子，或1至6个碳原子，等等)的支链或直链单价饱和脂肪族烃基。
[0076] 如本文中所用，术语“亚烷基”表示通过移除两个氢原子而衍生自直链或支链饱和烃的饱和二价烃基，示例如亚甲基、亚乙基和亚异丙基。在一些具体实施例中，亚烷基进一步经1、2、3或4个如本文所定义烷基的取代基取代。
[0077] 如本文中所用，术语“烯基”，单独使用或与其它基团合用，是指具有烯键的直链或支链烃残基。
[0078] 如本文中所用，术语“胺基”表示-N(RN1)2，其中RN1各自独立为H、OH、NO2、N(RN2)2、SO2ORN2、SO2RN2、SORN2、N-保护基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、烷芳基、环烷基、烷基环烷基、羧基烷基(例如，任选经O-保护基取代，诸如任选经取代的芳基烷氧基羰基或本文所述的任何羧基烷基)、磺烷基、酰基(例如，乙酰基、三氟乙酰基、或本文所述的其它酰基)、烷氧基羰基烷基(例如，任选经O-保护基取代，诸如任选经取代的芳基烷氧基羰基或本文所述的任何烷氧基羰基烷基)、杂环基(例如，杂芳基)、或杂环基烷基(例如，杂芳基烷基)，其中这N1 N1些引述的R 基团各自可任选经取代，如本文中对于各基团所定义；或两个R 组合以形成杂环基或N-保护基，以及，其中RN2各自独立为H、烷基或芳基。该胺基可以是未取代的氨基(即，-NH2)或经取代的胺基(即，-N(RN1)2)。在优选的具体实施例中，胺基是-NH2或-NHRN1，其中RN1独立为OH、NO2、NH2、NRN22、SO2ORN2、SO2RN2、SORN2、烷基、羧基烷基、磺烷基、酰基(例如，乙酰基、三氟乙酰基、或本文所述的其它酰基)、烷氧基羰基烷基(例如，叔丁氧基羰基烷基)或芳基，且RN2可各自为H、C1-20烷基(例如，C1-6烷基)、或C6-10芳基。
[0079] 术语“芳基”是指具有至少一个芳环的6至12个碳原子的芳族单环或多环基团。此类基团的示例包括但不限于，苯基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、1,2-二氢萘基、茚满基和1H-茚基。
[0080] 如本文中所用，“芳基烷基”表示如本文中定义的芳基通过如本文中定义的亚烷基附接至母体分子基团。例示性的未取代芳基烷基是7至30个碳原子(例如，7至16个或7至20个碳原子，诸如C6-10芳基C1-6烷基、C6-10芳基C1-10烷基、或C6-10芳基C1-20烷基)。在一些具体实施例中，亚烷基和芳基各自可进一步经1、2、3或4个如本文对于各基团所定义的取代基取代。
[0081] 烷基、碳环基、和芳基可以是经取代的或未取代的。当它们是经取代的时，通常将存在1至4个取代基。这些取代基可任选地与它们所连接的烷基、碳环基或芳基形成环。取代基可包括，举例而言：含碳的基团，诸如烷基、芳基、芳基烷基(例如，经取代的和未取代的苯基、经取代的和未取代的苄基)；卤素原子和含有卤素的基团，诸如卤代烷基(例如，三氟甲基)；含氧的基团，诸如醇类(例如，羟基、羟基烷基、芳基(羟基)烷基)、醚类(例如，烷氧基、环烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、芳氧基烷基，更优选地，举例而言，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基等)、醛类(例如，甲醛)、酮类(例如，烷基羰基、烷基羰基烷基、芳基羰基、芳基烷基羰基、芳基羰基烷基)、酸类(例如，羧基、羧基烷基)、酸衍生物诸如酯类(例如，烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基羰氧基、烷基羰氧基烷基)、酰胺类(例如，胺基羰基、单烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、胺基羰基烷基、单烷基胺基羰基烷基、二烷基胺基羰基烷基、芳基胺基羰基)、胺基甲酸酯类(例如，烷氧基羰基胺基、芳氧基羰基胺基、胺基羰氧基、单烷基胺基羰氧基、二烷基胺基羰氧基、芳基胺基羰氧基)和脲类(例如，单烷基胺基羰基胺基、二烷基胺基羰基胺基、或芳基胺基羰基胺基)；含氮的基团，诸如胺类(例如，氨基、单烷基胺基、二烷基胺基、氨基烷基、单烷基胺基烷基、二烷基胺基烷基)、叠氮化物、腈类(例如，氰基、氰基烷基)、硝基；含硫的基团，诸如硫醇类、硫醚类、亚砜类和砜类(例如，烷硫基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷硫基烷基、烷基亚磺酰基烷基、烷基磺酰基烷基、芳硫基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、芳硫基烷基、芳基亚磺酰基烷基、芳基磺酰基烷基)；杂环杂烷基；以及含有一个或多个杂原子的杂环基(例如，噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、恶唑基、恶二唑基、噻二唑基、吖丙啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、四氢呋喃基、吡喃基、吡喃酮基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌啶基、六氢吖庚因基、哌嗪基、吗啉基、硫茚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、吲哚基、羟吲哚基、异吲哚基、吲唑基、吲哚啉基、7-氮杂吲哚基、苯并吡喃基、香豆素基(coumarinyl)、异香豆素基、喹啉基、异喹啉基、二氢萘基、噌啉基、喹唑啉基、吡啶并吡啶基、苯并恶嗪基、喹恶啉基、色烯基(chromenyl)、色烷基(chromanyl),异色烷基、酞嗪基和咔啉基)。
[0082] 术语“叠氮基”表示-N3基，且亦可表示为-N＝N＝N。
[0083] 如本文中所用，术语“碳环”和“碳环基”是指任选经取代的非芳族C3-12单环、双环或三环结构，其中该环由碳原子形成。碳环结构包括环烷基、环烯基和环炔基。
[0084] 术语“环烷基”是指3至10个，优选3至6个碳原子的一价单碳环或多碳环基团。这一术语进一步示例为诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片基、金刚烷基和茚满基等基团。在优选的具体实施例中，“环烷基”部分可任选地经1、2、3或4个取代基取代。除非明确指定，否则取代基可各自独立为烷基、烷氧基、卤素、胺基、羟基或氧。环烷基部分的实例包括但不限于，任选经取代的环丙基、任选经取代的环丁基、任选经取代的环戊基、任选经取代的环戊烯基、任选经取代的环己基和任选经取代的环庚基、或本文中具体例示的那些。
[0085] 如本文中所用，术语“氰基”表示-CN基团。
[0086] 如本文中所用，术语“卤代”或“卤素”意为氟(氟代)、氯(氯代)、溴(溴代)或碘(碘代)基团。
[0087] 如本文中所用，术语“杂烷基”是指如本文中定义的烷基，其中一个或多个构造碳原子已经各自被替换为氮、氧或硫。在一些具体实施例中，杂烷基进一步经1、2、3或4个如本文所定义烷基的取代基取代。杂烷基的实例是“烷氧基”，如本文中所用，其是指烷基-O-；以及“烷酰基”，如本文中所用，其是指烷基-CO-。烷氧基取代基或含有烷基的取代基可经例如一个或多个烷基取代。
[0088] 术语“杂芳基”是指具有至少一个芳环的5至12个原子的芳族单环或多环基团，该芳环含有1、2或3个选自N、O和S的环杂原子且剩余环原子为C。杂芳基的一个或两个环碳原子可被替换为羰基。杂芳基的实例是吡啶基、苯并恶唑基、苯并咪唑基和苯并噻唑基。
[0089] 术语“杂环”或“杂环基”表示单环或多环烷基环，其中碳环原子中的1、2或3个被替换为杂原子诸如N、O或S。杂环基的实例包括但不限于，氧杂环丁烷基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基和1,3-二氧六环基。杂环基可以是未取代的或经取代的，且可通过其碳框或通过其杂原子而适宜的附接。
[0090] 术语“杂环杂烷基”是指如本文中定义的杂环基通过杂烷基(例如，醚或烷氧基)附接至母体分子基团。杂环杂烷基的一个实例是-OCH2CH2基团(吗啉基)。
[0091] 上述杂环基和杂芳基可以独立将1、2、3或更多个取代基取代。取代基可包括，举例而言：含碳的基团，诸如烷基、芳基、芳基烷基(例如，经取代的和未取代的苯基、经取代的和未取代的苄基)；卤素原子和含有卤素的基团，诸如卤代烷基(例如，三氟甲基)；含氧的基团，诸如醇类(例如，羟基、羟基烷基、芳基(羟基)烷基)、醚类(例如，烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、芳氧基烷基)、醛类(例如，甲醛)、酮类(例如，烷基羰基、烷基羰基烷基、芳基羰基、芳基烷基羰基、芳基羰基烷基)、酸类(例如，羧基、羧基烷基)、酸衍生物诸如酯类(例如，烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基羰氧基、烷基羰氧基烷基)、酰胺类(例如，胺基羰基、单烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、胺基羰基烷基、单烷基胺基羰基烷基、二烷基胺基羰基烷基、芳基胺基羰基)、胺基甲酸酯类(例如，烷氧基羰基胺基、芳氧基羰基胺基、胺基羰氧基、单烷基胺基羰氧基、二烷基胺基羰氧基、芳基胺基羰氧基)和脲类(例如，单烷基胺基羰基胺基、二烷基胺基羰基胺基、或芳基胺基羰基胺基)；含氮的基团，诸如胺类(例如，氨基、单烷基胺基、二烷基胺基、氨基烷基、单烷基胺基烷基、二烷基胺基烷基)、叠氮化物、腈类(例如，氰基、氰基烷基)、硝基；含硫的基团，诸如硫醇类、硫醚类、亚砜类和砜类(例如，烷硫基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷硫基烷基、烷基亚磺酰基烷基、烷基磺酰基烷基、芳硫基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、芳硫基烷基、芳基亚磺酰基烷基、芳基磺酰基烷基)；以及含有一个或多个杂原子的杂环基(例如，噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、恶唑基、恶二唑基、噻二唑基、吖丙啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、四氢呋喃基、吡喃基、吡喃酮基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌啶基、六氢吖庚因基、哌嗪基、吗啉基、硫茚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、吲哚基、羟吲哚基、异吲哚基、吲唑基、吲哚啉基、7-氮杂吲哚基、苯并吡喃基、香豆素基、异香豆素基、喹啉基、异喹啉基、二氢萘基、噌啉基、喹唑啉基、吡啶并吡啶基、苯并恶嗪基、喹恶啉基、色烯基、色烷基、异色烷基、酞嗪基、苯并噻唑基和咔啉基)。
[0092] 如本文中所用，术语“羟基”表示-OH基团。在一些具体实施例中，该羟基可经如本文中定义的O-保护基取代。
[0093] 如本文中所用，术语“N-保护基”表示那些旨在保护胺基以使其免于在合成过程中进行不希望的反义的基团。常用的N-保护基在格林(Greene)所著的《有机合成中的保护基(第三版)》(“Protective Groups inOrganic Synthesis,”3rd Edition(John Wiley&Sons,New York,1999))中公开，该书通过引用并入本文。如本文中所用，术语“O-保护基”表示那些旨在保护含氧的基团(例如，酚、羟基或羰基)以使其免于在合成过程中进行不希望的反义的基团。常用的O-保护基在格林(Greene)所著的《有机合成中的保护基(第三版)》(“Protective Groups in Organic Synthesis,”3rd Edition(John Wiley&Sons,New York,1999))中公开，该书通过引用并入本文。如本文中所用，术语“全氟烷基”表示如本文中定义的烷基，其种键结至该烷基的各氢已经被替换为氟。举例而言，全氟烷基的实例为三氟甲基和五氟乙基。
[0094] 如本文中所用，术语“磺酰基”表示-S(O)2-基团。
[0095] “经取代的”烃可具有作为取代基的一个或多个烃基、经取代的烃基，或可包含一个或多个杂原子。经取代的烃基的实例包括而不限于杂环诸如杂芳基。除非具体排除，否则经一个或多个杂原子取代的烃将包含1至20个杂原子。在其它具体实施例中，经一个或多个杂原子取代的烃将包含1至12个、或1至8个、或1至6个、或1至4个、或1至3个、或1至2个杂原子。杂原子的实例包括但不限于，氧、氮、硫、磷、卤素(F、Cl、Br、I等)、硼、硅等。在一些具体实施例中，杂原子将选自氧、氮、硫、磷和卤素(F、Cl、Br、I等)组成的组。在一些具体实施例中，杂原子或基团可取代碳。在一些具体实施例中，杂原子或基团可取代氢。在一些具体实施例中，经取代的烃可在分子的骨架或链中包含一个或多个杂原子(例如，插在两个碳原子之间，如在“氧杂”中)。在一些具体实施例中，经取代的烃可包含位于该分子骨架或链的侧链中的一个或多个杂原子(例如，共价键结至该链或骨架中的碳原子以替换该骨架或链中的氢，如在“氧代”中，等等)。
[0096] 术语“取代基”是指“取代”在例如烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、杂环烯基、环烯基、芳基或杂芳基的任意原子处以替代该基团内一个或多个氢原子的基团。一方面，基团上的取代基位于独立的任何一个原子上，或位于被划定用于该取代基的可允许的原子或原子组中两个或更多个的任意组合上。另一方面，取代基可自身经任何一个上述取代基取代。再者，如本文中所用，短语“任选经取代的”意为未取代的(例如，被H取代)或经取代的。应理解，在给定原子处的取代受限于价态。常用的取代基包括卤代、C1-12直链或支链烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C3-12环烷基、C6-12芳基、C3-12杂芳基、C3-12杂环基、C1-12烷基磺酰基、硝基、氰基、-COOR、-C(O)NRR’、-OR、-SR、-NRR’、以及氧代，诸如以诸如三氟甲氧基、氯、溴、氟、甲基、甲氧基、吡啶基、呋喃基、三唑基、哌嗪基、吡唑基、咪唑基等部分进行的单取代、二取代或三取代，这些取代基各自任选含有一个或多个杂原子诸如卤素、N、O、S和P。R和R’独立为氢、C1-12烷基、C1-12卤代烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C3-12环烷基、C4-24环烷基烷基、C6-12芳基、C7-24芳烷基、C3-12杂环基、C3-24杂环基烷基、C3-12杂芳基、或C4-24杂芳基烷基。除非明确排除，本文所述的所有基团任选地含有一个或多个常用取代基，程度为价态所允许。再者，如本文中所用，短语“任选经取代的”意为未取代的(例如，被H取代)或经取代的。如本文中所用，术语“经取代的”意为氢原子被移除并替换为取代基(例如，常用的取代基)。化学领域技术人员理解，在给定原子处的取代受限于价态。使用没有修饰语“任选经取代的”或“经取代的”的取代基(基团)前缀名称诸如烷基，理解为意为特定取代基是未取代的。但是，使用没有修饰语“任选经取代的”或“经取代的”的“卤代烷基”仍理解为意为烷基，其中至少一个氢原子被替换为卤素。
[0097] 应理解，本文中对化合物的说明受限于该领域技术人员已知的化学键结原则。据此，若基团可被大量取代基中的一个或多个取代，则选择此类取代以符合与价态等等相关的化学键结原则，并给出并非本质上不稳定的化合物。
[0098] 本文中提供的化合物可具有一个或多个不对称碳原子，且其存在形式可为光学纯对映异构体、对映异构体混合物诸如外消旋物、光学纯非对映异构体、非对映异构体混合物、非对映异构体外消旋物、或非对映异构体外消旋物的混合物。举例而言，光学活性形式可通过外消旋物的拆分、不对称合成或不对称色谱(使用手性吸附剂或洗脱剂的色谱)获得。换言之，某些所公开的化合物可以多种立体异构的形式存在。立体异构体是仅在其空间排列上有所差异的化合物。对映异构体是一对立体异构体，它们的镜像可重合，最常见的原因是它们含有作为手性中心的经不对称取代的碳原子。“一个对映异构体”意为一对彼此互为镜像且不可重合的分子中的一个。非对映异构体是镜像之间没有联系的立体异构体，最常见的原因是它们含有两个或更多个经不对称取代的碳原子且表现出环绕一个或多个手性碳原子的取代基构型。举例而言，化合物的对映异构体可通过使用一种或多种周知技术和方法诸如手性色谱和基于手性色谱的分离方法从外消旋物分离一个对映异构体而制备。适用于从外消旋混合物分离本文所述化合物的一个对映异构体的技术和/或方法可轻易地由该领域技术人员决定。“外消旋物”或“外消旋混合物”意为含有两个对映异构体的混合物，其中此类混合物不显现光学活性，即，它们不旋转偏振光的平面。“几何异构体”意为取代基原子的取向上有所差异的异构体(例如，相对于碳-碳双键的取向、相对于环烷基环的取向、相对于桥双环系统的取向、等等)。位于碳-碳双键各侧的原子(除H以外)可以是E(取代基位于该碳-碳双键的相反侧)构型或Z(取代基位于相同侧)构型。“R”、“S”、“S*”、“R*”、“E”、“Z”、“顺式”和“反式”表明相对于核心分子的构型。某些所公开的化合物可以阻旋立体异构的形式存在。阻旋异构体是关于单键的旋转受阻所致的立体异构体，其中旋转的立体应变障碍足够高以致于构象异构体可以分离。本文中公开的化合物可通过异构体特异性合成或从异构体混合物拆分而制备为独立的异构体。传统拆分技术包括，使用光学活性的酸形成一对异构体中每个异构体的游离碱的盐(之后分级结晶并再生该游离碱)；使用光学活性的胺形成一对异构体中每个异构体的游离酸的盐(之后分级结晶并再生该游离酸)；使用光学纯的酸、胺或醇形成一对异构体中每个异构体的酯或酰胺(之后色谱分离并移除手性助剂)；或使用多种周知的色谱方法拆分起始材料或最终产物的异构体混合物。当所公开化合物的立体化学以结构命名或说明时，以重量计，所命名或说明的立体异构体相对于另一立体异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。当以结构命名或说明单个对映异构体时，以重量计，所说明或命名的立体异构体的光学纯度为至少60％、70％、80％、90％、
99％或99.9％。当以结构命名或说明单个非对映异构体时，以重量计，所说明或命名的非立体异构体的纯度为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。光学纯度百分比是该对映异构体的重量与该对映异构体的重量加上其光学异构体的重量之和的比。以重量计的非对映异构体纯度是一个非对映异构体的重量与所有非对映异构体的重量之和的比。当所公开化合物的立体化学以结构命名或说明时，以摩尔分数纯度计，所命名或说明的立体异构体相对于另一立体异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。当以结构命名或说明单个对映异构体时，以摩尔分数计，所说明或命名的对映异构体的纯度为至少60％、70％、
80％、90％、99％或99.9％。当以结构命名或说明单个非对映异构体时，以摩尔分数计，所说明或命名的非对映异构体的纯度为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。摩尔分数纯度百分比是该对映异构体的摩尔数与该对映异构体的摩尔数加上其光学异构体的摩尔数之和的比。同样，摩尔分数纯度百分比是该非对映异构体的摩尔数与该非对映异构体的摩尔数加上其异构体的摩尔数之和的比。当所公开的化合物以结构命名或说明而不指明立体化学且该化合物具有至少一个手性中心时，理解为该名称或结构涵盖不含相应光学异构体的该化合物的一个对映异构体、该化合物的外消旋混合物、或一个对映异构体相对于其相应光学异构体富集的混合物。当所公开的化合物以及结构命名或说明而不知名立体化学且该化合物具有两个或更多个手性中心时，理解为该命名或结构涵盖不含其它非对映异构体的一个对映异构体、不含其它非对映异构体对的多个非对映异构体、非对映异构体的混合物、非对应异构体对的混合物、其中一个非对映体相对于其它非对映异构体富集的非对映异构体混合物、或其中一个或多个非对映异构体相对于其它非对映异构体富集的非对映异构体混合物。本揭示内容囊括了所有这些形式。
99％或99.9％。当以结构命名或说明单个非对映异构体时，以重量计，所说明或命名的非立体异构体的纯度为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。光学纯度百分比是该对映异构体的重量与该对映异构体的重量加上其光学异构体的重量之和的比。以重量计的非对映异构体纯度是一个非对映异构体的重量与所有非对映异构体的重量之和的比。当所公开化合物的立体化学以结构命名或说明时，以摩尔分数纯度计，所命名或说明的立体异构体相对于另一立体异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。当以结构命名或说明单个对映异构体时，以摩尔分数计，所说明或命名的对映异构体的纯度为至少60％、70％、
80％、90％、99％或99.9％。当以结构命名或说明单个非对映异构体时，以摩尔分数计，所说明或命名的非对映异构体的纯度为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。摩尔分数纯度百分比是该对映异构体的摩尔数与该对映异构体的摩尔数加上其光学异构体的摩尔数之和的比。同样，摩尔分数纯度百分比是该非对映异构体的摩尔数与该非对映异构体的摩尔数加上其异构体的摩尔数之和的比。当所公开的化合物以结构命名或说明而不指明立体化学且该化合物具有至少一个手性中心时，理解为该名称或结构涵盖不含相应光学异构体的该化合物的一个对映异构体、该化合物的外消旋混合物、或一个对映异构体相对于其相应光学异构体富集的混合物。当所公开的化合物以及结构命名或说明而不知名立体化学且该化合物具有两个或更多个手性中心时，理解为该命名或结构涵盖不含其它非对映异构体的一个对映异构体、不含其它非对映异构体对的多个非对映异构体、非对映异构体的混合物、非对应异构体对的混合物、其中一个非对映体相对于其它非对映异构体富集的非对映异构体混合物、或其中一个或多个非对映异构体相对于其它非对映异构体富集的非对映异构体混合物。本揭示内容囊括了所有这些形式。
[0099] 如本文中所用，术语“有效量”或“治疗有效量”的剂是指，该量足以产生有益效果或想要的结果诸如临床结果，且因此“有效量”取决于其被施加的情境。举例而言，在给药抗疟剂的情境中，该剂的有效量为例如足以实现下列的量：与不给药该剂所获得的应答相比且无论可检测或不可检测，一种或多种症状或病症的缓解、改善、阻止或预防；疾病、病变或病症程度的衰减；疾病、病变或病症的状态的稳定化(即，不恶化)；阻止疾病、病变或病症的扩散(例如，阻止疟原虫感染扩散超出肝脏、阻止全身性疾病、阻止疟疾的症状阶段、阻止疟原虫感染的建立、和/或通过阻止传播回蚊而阻止疾病的进一步扩散、等等)；推迟或减缓疾病、病变或病症的进展；疾病、病变或病症的改善或缓和；以及减轻(无论部分地或总体地)。
[0100] 如本文中所用，术语“医药组合物”表示含有本文所述化合物以及与之配伍的药学可接受的赋形剂的组合物。在一些具体实施例中，该医药组合物在政府监管机构批准下制造和贩售，作为治疗哺乳动物疾病的治疗方案的一部分。医药组合物可配制为，例如，用于以单位剂型口服给药(例如，片剂、胶囊剂、囊片剂、囊形片剂或糖浆剂)；用于外用给药(例如，作为乳霜剂、凝胶剂、洗剂或油膏剂)；用于静脉给药(例如，作为不含微粒栓的无菌溶液或适用于静脉使用的溶剂系统中)；或本文所述的任意其它制剂(见下文)。
[0101] 可用于制备本文组合物的医药载剂可以是固体、液体或气体。因此，该组合物的形式可以是片剂、丸剂、胶囊剂、栓剂、粉末剂、肠溶包衣制剂或其它保护制剂(例如，结合在离子交换树脂上或封装在脂质-蛋白质媒介物中)、持续释放制剂、溶液剂、悬浮体、酏剂和气雾剂。载剂可选自多种油类，包括源自石油、动物、植物或合成的那些，例如，花生油、大豆油、矿物油和芝麻油。水、盐水、葡萄糖水溶液和二醇类是优选的液体载剂，尤其是(当与血液等渗时)用于可注射溶液。举例而言，用于静脉给药的制剂包含活性成分的无菌水溶液，其通过将固体活性成分溶解于水中以产生水溶液并使该溶液无菌化而制备。合适的医药赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、滑石、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、氧化硅、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水和乙醇。该组合物可含有传统的医药添加剂诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、用于调节渗透压的盐类、和缓冲剂。适当的医药载剂及其配方揭示在E.W.Martin所著的《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)中。无论如何，此类组合物将含有有效量的活性化合物以及与之一起的合适载剂以制备用于给药至接纳者的适宜剂型。
[0102] 如本文中所用，术语“药学可接受的盐”是指处于健全医疗判断范畴内的任何本文所述化合物的盐，其适合与人体和动物组织接触使用而不带来毒性、刺激、过敏反应且具有合理的效益/风险比。药学可接受的盐是该领域中周知的。例如，药学可接受的盐在下列文献中有所描述：Berge et al.,J.Pharmaceutical Sciences 66:1-19,1977；以及《药用盐：性质、选择和用途》(Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,
(Eds.P.H.Stahl and C.G.Wermuth),Wiley-VCH,2008)。盐可从药学可接受的无毒酸和碱制备，该酸和碱包括无机酸、有机酸、无机碱和有机碱。代表性的酸加成盐包括醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、枸橼酸盐、环戊丙酸盐、二氯乙酸盐、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、羟乙基磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、粘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐和戊酸盐。代表性的碱性盐包括，碱金属或碱土金属盐，包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐；以及非毒性铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、咖啡因和乙胺。
(Eds.P.H.Stahl and C.G.Wermuth),Wiley-VCH,2008)。盐可从药学可接受的无毒酸和碱制备，该酸和碱包括无机酸、有机酸、无机碱和有机碱。代表性的酸加成盐包括醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、枸橼酸盐、环戊丙酸盐、二氯乙酸盐、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、羟乙基磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、粘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐和戊酸盐。代表性的碱性盐包括，碱金属或碱土金属盐，包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐；以及非毒性铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、咖啡因和乙胺。
[0103] 如本文中所用，术语“受试者”是指可对其给药根据本揭示内容的组合物的任何有机体，例如，用于实验、诊断、预防和/或治疗目的。典型的受试者包括任何动物(例如，哺乳动物诸如小鼠、大鼠、兔、非人类灵长动物、和人类、蜥蜴、壁虎等)。受试者可以是驯养动物(例如，母牛、牛犊、绵羊、羊羔、马、马驹、猪、仔猪等)，或鼠科动物(例如，大鼠、小鼠等)。受试者可能寻求治疗或有治疗需求、需要治疗、正在接受治疗、可能在未来接受治疗，或是处于对于特定疾病或病症训练有素的专业人员护理下的人类或动物。
[0104] 如本文中所用以及如该领域中所理解，“以治疗”病症或“治疗”病症(例如，本文所述病症诸如疟疾)是用于获得有益或想要的结果诸如临床结果的途径。有益或想要的结果可包括但不限于，一种或多种症状或病症的缓解或改善；疾病、病变或病症程度的衰减；疾病、病变或病症的状态的稳定化(即，不恶化)；阻止疾病、病变或病症的扩散(例如，阻止疟原虫感染扩散超出肝脏或阻止传播回蚊、阻止全身性疾病、阻止疟疾的症状阶段、和/或阻止疟原虫感染的建立)；推迟或减缓疾病、病变或病症的进展；疾病、病变或病症的改善或缓和；以及减轻(无论部分地或总体地)，无论可检测或不可检测。“缓和”疾病、病变或病症意为，与不进行治疗的程度或时间进程相比，该疾病、病变或病症的程度和/或不希望的临床表现被减少和/或进展的时间进程被减缓或延长。
[0105] 术语“单位剂型”是指适合作为单元剂量用于人类受试者和其它哺乳动物的物理离散单位，每个单位含有预设数量的活性材料，该数量计算为产生想要的疗效，且活性材料与任何合适的一种或多种医药赋形剂相关联。示例性的、非限制的单位剂型包括片剂(例如，咀嚼片)、囊片剂、胶囊剂(例如，硬胶囊或软胶囊)、锭剂、膜剂、长片剂、囊形片剂和糖浆剂(也见下文)。
[0107] 化合物
[0108] 本揭示内容提供可用于治疗疟疾的新颖化合物和医药组合物。本揭示内容也提供使用这些化合物和组合物的方法。
[0109] 在一些具体实施例中，该化合物可以是表1中列出的任何化合物。
[0110] 表1
[0111]
[0112]
[0113]
[0114]
[0115]
[0116]
[0117]
[0118]
[0119]
[0120] *如示例性合成中所述分离每个立体异构体，并入下文所述用于任何生物实验中。但是，尽管每个非对映异构体(即，异构体1或异构体2)均如所述者分离且不作为组合物存在，C3或C4位置处的立体化学仍不能确定。
[0121] 应理解，若化学名称与分子式之间存在任何不一致，则具有所指明名称的化合物和具有所指明化学结构的化合物均应视作为本发明所囊括。
[0122] 本发明的化合物包括该化合物本身，以及，若可用，它们的盐和它们的前药。举例而言，可在阴离子与本文所述化合物上的带正电取代基(例如，胺基)之间形成盐。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硝酸根、磷酸根、枸橼酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根和醋酸根。同样，也可在阳离子与本文所述化合物上的带负电取代基(例如，羧酸根)之间形成盐。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵阳离子诸如四甲基铵离子。前药的实例包括羧酸基团的C1-6烷基酯，当给药至受试者时，该前药能提供活性化合物。
[0123] 本揭示内容化合物的药学可接受的盐包括衍生自药学可接受的无机酸、无机碱、有机酸和有机碱的那些。如本文中所用，术语“药学可接受的盐”是指通过将药学可接受的酸或碱加成至本文所公开化合物而形成的盐。如本文所用，短语“药学可接受的”是指，在毒理学角度上在医药应用中可接受且不与活性成分发生负面作用的物质。
[0124] 合适的酸盐的实例包括醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、枸橼酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。其它酸类诸如草酸，尽管其自身不是药学可接受的，亦可用于制备可用作获得本发明化合物及其药学可接受的酸加成盐的中间体的盐。衍生自适宜的碱的盐包括碱金属(例如，+钠)盐、碱土金属(例如，镁)盐、铵盐和N-(烷基)4盐。本发明也预想本文所公开化合物的任何碱性含氮基团的季胺化。通过此季胺化可获得水溶性、油溶性或可分散的产物。本文中任意式的化合物的盐形式可以是羧基的氨基酸盐(例如，L-精氨酸盐、L-赖氨酸盐、L-组氨酸盐)。
[0125] 合适的盐的列举可见于《雷明顿药物科学(第十七版)》(Remington's Pharmaceutical Sciences,17th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418)、Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)、和《药用盐手册：性质、选自和用途》(Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use A Handbook；Wermuth,C.G.and Stahl,P.H.(eds.)Verlag Helvetica Chimica Acta,Zurich,2002[ISBN 3-
906390-26-8])，各自通过引用而以其整体并入本文。
906390-26-8])，各自通过引用而以其整体并入本文。
[0126] 通过以传统方式令该盐与间或酸接触并分离母体化合物，可再生中性形式的化合物。母型化合物与多种盐形式在某些物理性质上有所差异，诸如在极性溶剂中的溶解度，但对于本发明的目的而言，该盐与母型等效。
[0127] 除了盐形式之外，本发明还提供前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是下述化合物，它们在生理学条件下进行化学变化以提供本发明的化合物。此外，可通过化学或生物化学方法在间接体内环境中将前药转化为本发明的化合物。举例而言，当将前药置于具有合适的酶或化学试剂的透皮贴剂蓄积池中时，前药可缓慢地转化为本发明的化合物。前药一般是可用的，因为在某些情况下它们可能比母型药物更容易给药。例如，通过口服给药，它们的生物利用性可能比母型药物更高。前药在药理学组合物中的溶解度也可能比母型药物有所改善。多种前药衍生物是该领域中已知的，诸如依赖于该前药的水解性裂解或氧化性激活的那些。前药的一个非限制性实例是作为酯(“前药”)给药的本发明化合物，但随即被代谢性地水解为活性实体——羧酸。其它实例包括本发明化合物的肽基衍生物。
[0128] 本发明也包含化合物的多种水合物和溶剂合物形式。
[0129] 本发明的化合物也可在构建此类化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的同位素。举例而言，可使用放射性同位素诸如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)对该化合物进行放射性标记。本发明化合物的所有同位素变更，无论是否为放射性，旨在为本发明范畴所涵盖。
[0130] 方法
[0131] 本文所述化合物可用于本文提供的方法中，不欲受缚于任何特定理论，据信该化合物通过它们抑制造成疟疾的寄生性原生动物(例如，恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫和/或诺氏疟原虫)和/或隐孢子虫病的寄生性原生动物(例如，微小隐孢子虫、人隐孢子虫、犬隐孢子虫、猫隐孢子虫、火鸡隐孢子虫和鼠隐孢子虫)生长或杀死这些寄生性原生动物的能力而发挥它们的所希望的作用。在一些具体实施例中，该治疗包括病因预防，诸如阻止疟原虫和/或隐孢子虫感染扩散超出肝脏范围、阻止全身性疾病、阻止疟疾的症状性阶段、阻止感染的建立、和/或组织进一步的传播(例如，传播至蚊)。在一些具体实施例中，疟疾的治疗是指旨在实现治愈(例如，间日疟或三日疟)的治疗，例如，彻底治愈(即，从肝脏清除休眠子)的治疗。在各种实例中，该方法包括组织造成疟疾的寄生虫感染从肝脏扩散。在一些具体实施例中，隐孢子虫病的治疗包括病因预防，诸如组织隐孢子虫扩散超出受试者的感染部位(例如，肝脏、肠、呼吸道等)。
[0132] 该化合物可用于治疗耐药性疟疾，诸如对于氯喹、奎宁、乙胺嘧啶、磺胺多辛、甲氟奎、蒿甲醚、本芴醇、青蒿琥酯、阿莫地喹、双氢青蒿素、哌喹、氯胍、强力霉素、克林霉素、青蒿素、阿托伐醌、及其任意组合具有耐药性的疟疾。
[0133] 药物组合物
[0134] 1.配方
[0135] 对于在本文所述方法中的用途，该化合物可配制为医药组合物或兽药组合物。所选择的配方可根据待治疗的受试者、给药模型、和所希望的治疗类型(例如，阻止、预防、或治疗)而变。配方技术的汇总可见于《雷明顿：药物科学与实践(第二十一版)》(Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Edition,Lippincott Williams&
Wilkins,(2005))以及J.Swarbrick和J.C.Boylan编撰的《药物技术百科全书》
(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,
1988-1999,Marcel Dekker,New York)，各自通过引用并入本文。例示性的给药和配制途径描述如下。
Wilkins,(2005))以及J.Swarbrick和J.C.Boylan编撰的《药物技术百科全书》
(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,
1988-1999,Marcel Dekker,New York)，各自通过引用并入本文。例示性的给药和配制途径描述如下。
[0136] 在所公开方法的实践中，该化合物(或其药学可接受的盐)或组合物可通过该领域中已知的任何常见且可接受的途径和方法给药。举例而言，该化合物或组合物因此可通过肠或胃肠途径(例如，口服或经直肠)给药、外用给药(例如，至皮肤或可抵达的黏膜(例如，口内(例如，舌下或颊膜)、鼻内、直肠内或泌尿生殖器表面))、非胃肠道(例如，肌肉内、静脉内、皮下、关节内、囊内、鞘膜内、硬膜内、眼内、或耳内施加或注射)给药、透皮给药、或通过吸入(例如，通过气雾剂)给药。
[0137] 该组合物可以是固体、液体或气体形式，如由该领域技术人员决定为适宜的形式。因此，作为通常实例，该医药组合物的形式可以是片剂、胶囊剂、糖浆剂、烷基、肠溶包衣或其它保护配方、持续释放配方、酏剂、粉末剂、颗粒剂、悬浮体、乳液剂、溶液剂、凝胶剂(例如，水溶胶剂)、糊剂、油膏剂、乳霜剂、膏泥剂、透皮贴剂、浸湿剂(drenches)、栓剂、灌肠剂、注射剂、植入剂、喷雾剂或气雾剂。
[0138] 通常，该组合物包括有效量的本文所述化合物以及一种或多种药学可接受的载剂或赋形剂，如该领域中所周知。该组合物因此可包括一种或多种稀释剂、缓冲剂、防腐剂、盐、碳水化合物、氨基酸、载剂蛋白、脂肪酸、脂质等。基于该组合物的总重量且以重量计，本文所述的化合物可以总计例如1％至95％的量存在。
[0139] 对于注射，配方可制备为传统形式如溶液或悬浮液，适用于在注射前形成溶液或悬浮液的固体形式，或乳液。适用于这些配方的赋形剂包括，例如，水、盐水、葡萄糖和甘油。此类组合物亦可含有无毒佐剂物质，诸如润湿剂或乳化剂，以及pH缓冲剂诸如醋酸钠、失水山梨醇单月桂酸酯等。
[0140] 用于口服的配方包括含有化合物与一种或多种无毒的药学可接受的赋形剂的混合物的片剂。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨醇、糖、甘露醇、微晶纤维素、包括马铃薯淀粉在内的淀粉类、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；颗粒化剂和崩解剂(例如，包括微晶纤维素在内的纤维素衍生物、包括马铃薯淀粉在内的淀粉类、交联羧甲基纤维素钠、藻酸盐或藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨醇、阿拉伯树胶、藻酸、藻酸钠、明胶、淀粉、预胶凝淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂、助滑剂和抗结合剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、氧化硅、氢化植物油或滑石)。其它药学可接受的赋形剂可以是着色剂、芳香剂、增塑剂、保湿剂和缓冲剂。
[0141] 用于口服的配方可提供为咀嚼片剂；或硬凝胶胶囊剂，其中或活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或作为软凝胶胶囊剂，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。可使用上述在片剂和胶囊剂下提及的成分，以传统的方式，使用例如混合机、流体床装置或喷雾干燥设备制备粉末剂、颗粒剂和微丸剂。
[0142] 可通过适宜地涂覆化合物的片剂、胶囊剂、微丸剂或颗粒剂，或通过将该化合物并入适宜的基质中，实现溶解或扩散控制的释放。控释涂层可包括一种或多种上述包衣物质和/或，例如，虫胶、蜂蜡、糖蜡、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、甘油单硬脂酸酯、甘油二硬脂酸酯、甘油棕榈酸硬脂酸酯、乙基纤维素、丙烯酸类树脂、dl-聚乳酸、醋丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、乙酰基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-强甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1,3-丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯、和/或聚乙二醇。在控释基质配方中，基质材料亦可包括，例如，水合甲基纤维素、水合巴西棕榈蜡、水合硬脂醇、carbopol 934、硅酮、甘油三硬脂酸酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯、和/或卤化的氟碳化合物。
[0143] 可将该化合物和组合物并入其中进行口服给药的液体形式包括水溶液；适当芳香化的糖浆；水性或油性悬浮液；使用食用油诸如棉籽油、芝麻油、可可油或花生油的芳香化乳液；以及酏剂和类似的药学媒介物。
[0144] 医药组合物也可配制为旨在用于除人类之外的受试者的兽药组合物。根据本发明的兽药组合物可以是任何适宜的形式，以适应所需的给药模式，例如，鼻腔给药、口服给药、真皮内给药、皮肤给药或非胃肠道给药。在优选的具体实施例中，该组合物为用于口服给药的形式，且在例如家畜食用时，或与食物混合或在餐后直接置于口内。本发明的兽药组合物的形式为鼻内、口服或可注射的悬浮液或溶液；或固体或半固体形式，诸如粉末剂、微丸剂、胶囊剂、颗粒剂、糖衣丸剂、软胶囊剂、喷雾剂、扁囊剂、丸剂、片剂、贴剂、植入剂或凝胶剂。在特定具体实施例中，该组合物是口服固体形式，优选片剂。在一些具体实施例中，该兽药组合物可具有有效量的用于具体动物物种(例如，牛、羊羔、山羊、马等)的化合物。
[0145] 在优选的具体实施例中，本发明的组合物配制为用于口服给药的丸剂或片剂。根据这一类型的配方，它们包含一水合乳糖、微晶纤维素、交聚维酮/聚维酮、芳香物、可压缩的糖和硬脂酸镁作为赋形剂。当该组合物是丸剂或片剂形式时，它们是例如1mg、2mg或4mg的托拉塞米(torasemide)丸剂或片剂。此类丸剂或片剂是可分割的，因此它们能被切成适用于根据本发明的每日服用一次或两次的剂量学。在进一步优选的具体实施例中，本发明的组合物配制为用于非胃肠道给药的可注射溶液或悬浮液。通过根据传统方法将治疗有效数量的托拉塞米与pH调节剂、缓冲剂、悬浮剂、溶液化剂、稳定剂、张度剂和/或防腐剂混合，并通过将该混合物转变为静脉内、皮下、肌肉内注射或输注的形式，生产可注射的组合物。可能地，可注射的组合物可根据传统方法冻干。悬浮剂的实例包括甲基纤维素、聚山梨醇酯
80、羟乙基纤维素、黄原胶、羧甲基纤维素钠和聚乙氧基化失水山梨醇单月桂酸酯。溶液化剂的实例包括聚氧乙烯固化的蓖麻油、聚山梨醇酯80、烟酰胺、聚氧乙基化失水山梨醇单月桂酸酯、聚乙二醇(macrogol)、和蓖麻油脂肪酸的乙酯。此外，稳定剂包括亚硫酸钠、偏亚硫酸氢钠和醚，而防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚和氯甲酚。张度剂的一个实例是甘露醇。当制备可注射的悬浮液或溶液时，想要的是确保它们是与血液等渗的。
80、羟乙基纤维素、黄原胶、羧甲基纤维素钠和聚乙氧基化失水山梨醇单月桂酸酯。溶液化剂的实例包括聚氧乙烯固化的蓖麻油、聚山梨醇酯80、烟酰胺、聚氧乙基化失水山梨醇单月桂酸酯、聚乙二醇(macrogol)、和蓖麻油脂肪酸的乙酯。此外，稳定剂包括亚硫酸钠、偏亚硫酸氢钠和醚，而防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚和氯甲酚。张度剂的一个实例是甘露醇。当制备可注射的悬浮液或溶液时，想要的是确保它们是与血液等渗的。
[0146] 2.试剂盒
[0147] 该化合物和组合物可封装在试剂盒内，任选具有一种或多种其它药剂(见下文)。试剂盒的非限制性实例包括那些含有例如在一个小瓶中含有两丸或更多丸、一微丸和粉末、一栓剂和一液体者，或含有两种外用乳霜剂者。试剂盒可包括辅助将单位剂量给药至受试者的任选组分，诸如用于重构粉末形式的小瓶、用于注射的针筒、定制的IV递送系统、或吸入器。此外，单位剂量试剂盒可含有制备和给药该组合物的使用说明书。试剂盒可制造为用于一个受试者的一次使用的单位剂量、用于特定受试者的多次使用(以恒定剂量使用，或其中每种化合物可随着治疗进展而潜在地变动)；或试剂盒可含有适用于给药至多个受试者的多个剂量(“大包装”)。试剂盒组分可组装在舱、罩板包装、瓶和管内。
[0148] 3.剂量
[0149] 化合物的剂量取决于诸多因素，诸如给药方式、受试者的年龄和体重、以及待治疗的受试者的身体情况，且最终由主治医生或兽医决定。这一化合物的量，如有主治医生或兽医所决定的，在本文中和权利要求书中称为“治疗有效的量”。举例而言，本文中公开的化合物的剂量典型为每天约1mg至1000mg的范围。优选地，该治疗有效的量是每天约1mg至约500mg的量。
[0150] 如本文所述，每种药物的给药可独立为每天1至4次，给药1天至1年，且甚至可在该受试者余生中均给药。可指示慢性的长期给药。
[0151] 4.组合疗法
[0152] 该化合物和医药组合物可与疗法配伍并合用，换句话说，该化合物和医药组合物可与一种或多种所希望的治疗剂或医疗过程配伍或与后者并行给药、先于后者给药或在后者之后接续给药。组合方案中采用的特定疗法(治疗剂或过程)组合将考虑到所希望的治疗剂和/或过程与待实现的所希望疗效的相容性。应知悉，所采用的疗法可实现对相同病变的所希望的效果，或他们可实现不同的效果(例如，控制任意副作用)。
[0153] 待与本文所述化合物组合的其它药物的实例包括用于治疗疟疾的药物(例如，氯喹、奎宁、乙胺嘧啶、磺胺多辛、甲氟奎、蒿甲醚、本芴醇、青蒿琥酯、阿莫地喹、双氢青蒿素、哌喹、氯胍、强力霉素、克林霉素、青蒿素、阿托伐醌、被批准用于治疗疟疾的任何其它治疗剂、及其任意组合)和/或用于治疗隐孢子虫病的药物(例如，硝唑尼特)。待与本文所述化合物组合的药物的其它实例包括用于治疗不同的但具有关联或相关症状或体征的疾病的药物。组合方法可牵涉使用配伍在一起或单独使用的两种(或更多种)剂，如该领域技术人员确定为适宜者。在一个实施例中，两种或更多种药物配制在一起，用于该些剂的同步给药或接近同步给药。
[0154] [实施例]
[0155] 下述实施例示出了大量代表性化合物的合成及这些化合物在治疗疟疾中的用途。据此，这些实施例旨在例示性说明但不限制本揭示内容。未具体例示的其它化合物可使用传统方法与本文所述方法组合而合成。
[0156] 化合物的合成
[0157] 材料和方法
[0158] 所有反应均在N2或氩气氛下进行。所有试剂和溶剂均自商业供应商购得并直接使用，或根据附注参考文献合成。NMR光谱使用Bruker300(300MHz 1H，75MHz 13C)和Bruker 400(400MHz 1H，100MHz 13C)光谱仪获取。质子化学位移记录为相对于NMR溶剂的ppm(6)。数据记录如下：化学位移，多重性(br＝宽峰，s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，p＝五重峰，m＝多重峰；以Hz计的耦合常数；积分)。除非明确指出，否则NMR数据在25℃采集。使用
40-60pirn硅胶( 目)在Teledyne Isco Combiflash Rf上实施快速色谱。对于纯度分析，通过在210nm的紫外吸收测量所有实施例的纯度，并通过正电喷雾离子化在SQ质谱仪上进行结构鉴定。使用下述方法：在Waters2795分离模块和3100质量检测器上实施串联液相色谱/质谱(LCMS)分析。流动相A由甲酸在水中的0.01％溶液组成，而流动相B由甲酸在乙腈中的0.01％溶液组成。梯度为在2.5、5或7.5分钟时间上从5％变至95％的流动相B，流速
1.75mL/min(分钟)。使用Agilent Poroshell 120EC-C18,2.7mM,3.0x30mm柱，柱温维持在
40℃。进样量为2.1mL样品溶液。在EM Reagent 0.25mm硅胶60-F板上实施分析性TLC。使用高锰酸钾(KMnO4)水溶液染色并加热后，以紫外光执行可视化。使用Agilent 6230飞行时间质谱仪获得精确的质量测量值(M+H)+。化合物纯度和结构鉴定也通过UPLC-MS确定。通过在
210nm的紫外吸收测量纯度。在SQ质谱仪上通过正电喷雾离子化和负电喷雾离子化确定结构。流动相A由氢氧化铵在水中的0.1％溶液或三氟乙酸在水中的0.05％溶液组成，而流动相B由氢氧化铵在乙腈中的0.1％溶液或三氟乙酸在乙腈中的0.06％溶液组成。梯度为在
2.65分钟时间上从5％变至95％的流动相B，流速0.9mL/min。使用柱温维持在65℃的Acquity BEH C18,1.7um,2.1x50mm柱。将化合物溶解在DMSO中，标称浓度1mg/mL，并进样
1.0μL的这一溶液。通过SFC-MS实施手性分离。将Berger G600超临界流体色谱与以正APCI模式操作的Waters ZQ单四极质谱仪联合使用。使用以20异丙醇改性的液化CO2，以4.0mL/min流速在柱温维持在的4.6x100mm Chiralpak AD-H柱上进行5.0分钟的等度分离。将化合物溶解在甲醇中，标称浓度1mg/mL，并进样10μL的这一溶液。下述合成实施例并非具体限制，且其它合成本发明化合物的方法是该领域技术人员所周知的。
40-60pirn硅胶( 目)在Teledyne Isco Combiflash Rf上实施快速色谱。对于纯度分析，通过在210nm的紫外吸收测量所有实施例的纯度，并通过正电喷雾离子化在SQ质谱仪上进行结构鉴定。使用下述方法：在Waters2795分离模块和3100质量检测器上实施串联液相色谱/质谱(LCMS)分析。流动相A由甲酸在水中的0.01％溶液组成，而流动相B由甲酸在乙腈中的0.01％溶液组成。梯度为在2.5、5或7.5分钟时间上从5％变至95％的流动相B，流速
1.75mL/min(分钟)。使用Agilent Poroshell 120EC-C18,2.7mM,3.0x30mm柱，柱温维持在
40℃。进样量为2.1mL样品溶液。在EM Reagent 0.25mm硅胶60-F板上实施分析性TLC。使用高锰酸钾(KMnO4)水溶液染色并加热后，以紫外光执行可视化。使用Agilent 6230飞行时间质谱仪获得精确的质量测量值(M+H)+。化合物纯度和结构鉴定也通过UPLC-MS确定。通过在
210nm的紫外吸收测量纯度。在SQ质谱仪上通过正电喷雾离子化和负电喷雾离子化确定结构。流动相A由氢氧化铵在水中的0.1％溶液或三氟乙酸在水中的0.05％溶液组成，而流动相B由氢氧化铵在乙腈中的0.1％溶液或三氟乙酸在乙腈中的0.06％溶液组成。梯度为在
2.65分钟时间上从5％变至95％的流动相B，流速0.9mL/min。使用柱温维持在65℃的Acquity BEH C18,1.7um,2.1x50mm柱。将化合物溶解在DMSO中，标称浓度1mg/mL，并进样
1.0μL的这一溶液。通过SFC-MS实施手性分离。将Berger G600超临界流体色谱与以正APCI模式操作的Waters ZQ单四极质谱仪联合使用。使用以20异丙醇改性的液化CO2，以4.0mL/min流速在柱温维持在的4.6x100mm Chiralpak AD-H柱上进行5.0分钟的等度分离。将化合物溶解在甲醇中，标称浓度1mg/mL，并进样10μL的这一溶液。下述合成实施例并非具体限制，且其它合成本发明化合物的方法是该领域技术人员所周知的。
[0159] 缩写
[0160] 下述合成实施例通篇中采用各种缩写，而这些缩写是该领域技术人员所熟知的。表2示出了实施例通篇和相应参考文献中使用的缩写的多个实例。
[0161] 表2
[0162]
[0163]
[0164] 实施例1：(3S,4R,8R,9S,10S)-N-(4-环丙氧基苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]硅烷-6-甲酰胺(“E1”)[0165]
[0166]
[0167] 中间体1：((8R,9R,10S,Z)-9-(4-溴苯基)-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-10-基)甲醇
[0168] 将TFA(3.03g,26.60mmol,1.97mL)加入(8R,9R,10S,Z)-10-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-9-(4-溴苯基)-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯(2.00g,2.66mmol)(Journal of Organic Chemistry(2012),77(17),7187-7211；WO 2015070204)在DCM(27.00mL)中的溶液中。将混合物在15℃搅拌20小时。加入NaHCO3溶液(100mL)淬灭反应混合物，随后用DCM 180mL(3X 60mL)萃取。合并的有机层在[NaSO4]上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚:DCM＝1:1至DCM:MeOH＝
10:1)纯化得到黑色固体的中间体1(1.47g，粗产物)。通过NMR和LCMS证实反应产物的存在。
10:1)纯化得到黑色固体的中间体1(1.47g，粗产物)。通过NMR和LCMS证实反应产物的存在。
[0169] 中间体2：2-(((8R,9S,10S,Z)-9-(4-溴苯基)-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-10-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0170] 将三苯基膦(1.52g,5.78mmol)在THF(5mL)中的混合物脱气，并以N2吹扫，加入偶氮二甲酸二异丙酯(1.17g,5.78mmol,1.12mL)。在0℃和N2气氛下，向这一混合物加入将脱气并以N2吹扫的中间体1(1.47g,2.89mmol,1.00eq)与异吲哚啉-1,3-二酮(637.81mg,4.34mmol,1.50eq)在THF(5mL)中的混合物。将混合物在16℃和N2气氛下搅拌18小时。加入H2O(20mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(3X 20mL)萃取。合并的有机层在[Na2SO4]上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝5:1至2:1)纯化获得褐色固体的中间体2(1.26g,1.98mmol，产率68.39％)，通过NMR和LCMS证实。
[0171] 中间体3：2-(((8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0172] 将N-氧化-N-甲基吗啉(463.09mg,3.95mmol,417.20μL)加入中间体2(1.26g,1.98mmol)在丙酮/水(15.00mL)中的溶液中，随后加入OsO4(5.02mg,19.76μmol,1.03μL)。
将混合物在15℃搅拌1.5小时。将反应混合物在[Na2SO4]上干燥，过滤，减压浓缩。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1至0:1)纯化获得白色固体的中间体3(1.11g,
1.65mmol，产率83.48％)，通过NMR和LCMS证实。
将混合物在15℃搅拌1.5小时。将反应混合物在[Na2SO4]上干燥，过滤，减压浓缩。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1至0:1)纯化获得白色固体的中间体3(1.11g,
1.65mmol，产率83.48％)，通过NMR和LCMS证实。
[0173] 中间体4a和4b：2-(((3aR,6aR,7S,8R,10aS)-7-(4-溴苯基)-2,2-二甲基-5-((2-硝基苯基)磺酰基)八氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-8-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(中间体4a)和2-(((3aS,6aS,7S,8R,10aS)-7-(4-溴苯基)-2,2-二甲基-5-((2-硝基苯基)磺酰基)八氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-8-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(中间体4b)
[0174] 将TsOH(225.66mg,1.31mmol)加入中间体3(880.00mg,1.31mmol)和2,2-二甲氧基丙烷(272.97mg,2.62mmol,321.14μL)在DCM(10.00mL)中的溶液中。混合物在15℃搅拌。22小时后，将该反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到每种顺式二醇：白色固体的中间体4a(极性较低，53.00mg,74.48μmol,产率5.68％)和白色固体的中间体4b(极性较高，260.00mg,365.38μmol,产率27.88％)，通过NMR和LCMS证实。
[0175] 中间体5：((3aR,6aR,7S,8S,10aS)-7-(4-溴苯基)-2,2-二甲基-5-((2-硝基苯基)磺酰基)八氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-8-基)甲胺
[0176] 将水合肼(37.99mg,758.88μmol,36.88μL)加入中间体4b(360.00mg,505.92μmol)在乙醇(5.00mL)中的溶液中。在70℃搅拌1.5小时后，反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以得到黄色固体的中间体5(239.00mg,411.02μmol,产率81.24％)，通过NMR和LCMS证实。
[0177] 中间体6：1-((3aR,6aR,7S,8S,10aS)-7-(4-溴苯基)-2,2-二甲基-5-((2-硝基苯基)磺酰基)八氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-8-基)-N,N-二甲基甲胺
[0178] 将MgSO4(494.74mg,4.11mmol)和醋酸(49.36mg,822.04μmol,47.01μL)加入中间体5(239.00mg,411.02μmol)和甲醛(200.47mg,2.47mmol,183.92μL)在DCM(500μL)中的溶液中。20分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(60.32mg,1.23mmol)，再将混合物在15℃搅拌23小时。反应混合物通过硅藻土过滤，并减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到黄色油的中间体6(210.00mg,344.53μmol,产率83.82％)，通过LCMS证实。
[0179] 中间体7：1-((3aR,6aR,7R,8S,10aS)-7-(4-溴苯基)-2,2-二甲基八氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-8-基)-N,N-二甲基甲胺[0180] 将苯硫酚(17.08mg,155.04μmol,15.82μL)加入中间体6(210.00mg,344.53μmol)在CH3CN(2.00mL)中的溶液中，随后加入Cs2CO3(224.51mg,689.06μmol)。将混合物在40℃和N2气氛下搅拌1.5小时。加入H2O(5mL)淬灭反应混合物，随后用DCM 15mL(3X 5mL)萃取。合并的有机层在[Na2SO4]上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到黄色油的中间体7(72.00mg,169.66μmol,产率49.24％)，通过NMR和LCMS证实。
[0181] 中间体8：(3aR,6aR,7S,8S,10aS)-7-(4-溴苯基)-N-(4-环丙氧基苯基)-8-((二甲基胺基)甲基)-2,2-二甲基六氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-5(4H)-甲酰胺
[0182] 在N2气氛下，将TEA(5.72mg,56.55μmol,7.84μL)和1-(环丙氧基)-4-异氰基苯(23.78mg,135.73μmol)加入中间体7(48.00mg,113.11μmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中。在15℃搅拌22小时后，加入H2O(5mL)淬灭反应混合物，随后用DCM 15mL(3x 5mL)萃取。减压浓缩合并的有机层以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到灰白色油的中间体8(29.40mg,49.04μmol,产率43.35％)，通过LCMS证实。
[0183] 中间体9：(3aR,6aR,7S,8S,10aS)-N-(4-环丙氧基苯基)-8-((二甲基胺基)甲基)-2,2-二甲基-7-(4-(苯基乙炔基)苯基)六氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-5(4H)-甲酰胺
[0184] 在N2气氛下，将TEA(97.89mg,967.38μmol,134.09μL)、乙炔基苯(24.70mg,241.84μmol,26.56μL)和XPhos Pd G3(6.14mg,7.26μmol)的混合物加入中间体8(29.00mg,48.37μmol)在CH3CN(1.00mL)中的溶液中。在70℃搅拌1小时后，加入H2O(4mL)淬灭反应混合物，随后用DCM 15mL(3x 5mL)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出灰白色油的中间体9(30.00mg)，通过该LCMS证实。
[0185] E1的合成：(3S,4R,8R,9S,10S)-N-(4-环丙氧基苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]硅烷-6-甲酰胺
[0186] 将1M HCl(500.00μL)加入中间体9(20.00mg,32.22μmol)在CH3CN(500.00μL)中的溶液中。混合物在15℃搅拌18小时后，将该反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，得到黄色固体的化合物E1(8.20mg,14.12μmol,产率43.83％)。
[0187] 1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 0.73(d,J＝4.52Hz,4H)1.26(s,1H)2.32(s,6H)2.60-2.70(m,2H)2.86-2.92(m,1H)2.96-3.05(m,2H)3.22(br d,J＝15.56Hz,1H)3.52-
3.65(m,3H)3.65-3.75(m,2H)3.86(br s,2H)3.97-4.05(m,1H)4.13(br s,1H)4.31(br d,J＝9.54Hz,1H)6.95(d,J＝9.03Hz,2H)7.24(d,J＝9.03Hz,2H)7.32-7.46(m,6H)7.49-7.57(m,4H)8.37(br s,1H)8.56(br s,1H)。
3.65(m,3H)3.65-3.75(m,2H)3.86(br s,2H)3.97-4.05(m,1H)4.13(br s,1H)4.31(br d,J＝9.54Hz,1H)6.95(d,J＝9.03Hz,2H)7.24(d,J＝9.03Hz,2H)7.32-7.46(m,6H)7.49-7.57(m,4H)8.37(br s,1H)8.56(br s,1H)。
[0188] 实施例2：(3S,4R,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E2”)[0189]
[0190]
[0191] 中间体10：2-(((3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0192] 将中间体4a(170.00mg,238.90μmol)在CH3CN(2.00mL)和1M HCl(2.00mL)中的溶液在20℃搅拌18小时。反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到白色固体的中间体10(140.00mg,208.49μmol,产率87.27％)，通过NMR证实。
[0193] 中间体11：2-(((3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二甲氧基-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0194] 在0℃和N2气氛下，将三甲基氧鎓四氟硼酸盐(137.67mg,930.75μmol)和N1,N1,N8,N8-四甲基萘-1,8-二胺(239.36mg,1.12mmol)加入中间体10(125.00mg,186.15μmol)在DCM(4.00mL)中的溶液中。在室温(15℃)搅拌18小时后，将该反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，乙酸乙酯)纯化获得白色固体的中间体11(100.00mg,142.94μmol，产率76.79％)，通过NMR证实。
[0195] 中间体12：((3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二甲氧基-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基)甲胺
[0196] 将N2H4.H2O(10.73mg,214.42μmol,10.42μL)加入中间体11(100.00mg,142.94μmol)在乙醇(3.00mL)中的溶液中。在70℃搅拌1小时后，反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以得到黄色固体的粗中间体12(87.00mg)，通过NMR证实。
[0197] 中间体13：((3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二甲氧基-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基)-N,N-二甲基甲胺
[0198] 将HCHO(27.53mg,916.64μmol,25.25μL)、MgSO4(183.89mg,1.53mmol)、NaBH(OAc)3(97.14mg,458.32μmol)和AcOH(18.35mg,305.55μmol,17.47μL)加入中间体12(87.00mg,
152.77μmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中。在15℃搅拌3小时后，将该反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到白色固体的中间体13(46.00mg,76.98μmol,产率50.39％)。
152.77μmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中。在15℃搅拌3小时后，将该反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到白色固体的中间体13(46.00mg,76.98μmol,产率50.39％)。
[0199] 中间体14：((3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二甲氧基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基)甲胺
[0200] 将苯硫酚(12.72mg,115.48μmol,11.78μL)和Cs2CO3(50.17mg,153.97μmol)加入中间体13(46.00mg,76.98μmol)在CH3CN(2.00mL)中的溶液中。在N2气氛下在40℃搅拌1.5小时后，加入H2O(2mL)淬灭反应混合物，用DCM 15mL(3x 5mL)萃取。合并的有机层在[Na2SO4]上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到白色油的中间体14(17.00mg,41.23μmol,产率53.55％)，通过LCMS证实。
[0201] 中间体15：(3S,4R,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-3,4-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0202] 将TEA(2.09mg,20.61μmol,2.86μL)和1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(6.15mg,41.23μmol,5.30μL)加入中间体14(17.00mg,41.23μmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中。在N2气氛下在15℃搅拌2.5小时后，加入H2O(5mL)淬灭反应混合物，随后用DCM 15mL(3x 5mL)萃取。减压浓缩合并的有机层以给出残渣。残质通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化，以给出透明油的中间体15(33.00mg,粗产物)，通过LCMS证实。
[0203] E2的合成：(3S,4R,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二甲氧基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0204] 在N2气氛下，将TEA(118.94mg,1.18mmol,162.93μL)和XPhos Pd G3(7.46mg,8.82μmol)加入中间体15(33.00mg,58.77μmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中。在70℃搅拌1小时后，加入H2O(2mL)淬灭反应混合物，随后用DCM 15mL(3x 5mL)萃取。合并的有机层在[Na2SO4]上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，之后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体(4.4mg,7.55μmol,产率12.85％)。结构通过LCMS和NMR证实。
[0205] 1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.06(s,6H)2.39(br s,2H)2.58(br s,2H)3.03-3.14(m,1H)3.30(br s,1H)3.48(s,4H)3.51-3.58(m,2H)3.61-3.67(m,4H)3.78(s,
3H)3.89-4.12(m,3H)6.83(d,J＝8.91Hz,2H)7.18(d,J＝8.78Hz,2H)7.36(br d,J＝
5.40Hz,3H)7.43-7.47(m,2H)7.48-7.51(m,2H)7.52-7.56(m,2H)7.99(br s,1H)。
3H)3.89-4.12(m,3H)6.83(d,J＝8.91Hz,2H)7.18(d,J＝8.78Hz,2H)7.36(br d,J＝
5.40Hz,3H)7.43-7.47(m,2H)7.48-7.51(m,2H)7.52-7.56(m,2H)7.99(br s,1H)。
[0206] 实施例3：(4S,8R,9R,10S)-4-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E3”)
[0207]
[0208]
[0209] 中间体16：N-[(1S)-3-[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2-硝基苯基)磺酰基胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]-1-[[叔丁基(二苯基)硅基]氧甲基]丙基]胺基甲酸叔丁酯
[0210] 将MgSO4(2.07g,17.20mmol)和NaBH(OAc)3(729.07mg,3.44mmol)加入N-(((2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-((三苯甲氧基)甲基)氮杂环丁烷-2-基)甲基)-2-硝基苯磺酰胺(WO2015070204)(1.20g,1.72mmol)和(S)-(1-((数叔丁基二苯基硅基)氧)-4-氧代丁烷-2-基)胺基甲酸叔丁酯(US 20150266867)(911.52mg,2.06mmol)在DCM(40.00mL)中的溶液中。
在15℃搅拌2小时后，加入饱和NaHCO3水溶液(15mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(2x 5mL)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20:1至3:1)纯化获得白色固体的中间体16(2.00g)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.81-7.69(m,3H),7.66-7.58(m,6H),7.45-7.34(m,8H),7.15-7.04(m,
18H),4.87-4.76(m,2H),3.68-3.59(m,3H),3.50-3.42(m,3H),3.14(br.s.,1H),3.03-2.97(m,1H),2.95-2.82(m,2H),2.46(br.s.,2H),1.40(s,9H),1.05(s,9H)。
在15℃搅拌2小时后，加入饱和NaHCO3水溶液(15mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(2x 5mL)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20:1至3:1)纯化获得白色固体的中间体16(2.00g)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.81-7.69(m,3H),7.66-7.58(m,6H),7.45-7.34(m,8H),7.15-7.04(m,
18H),4.87-4.76(m,2H),3.68-3.59(m,3H),3.50-3.42(m,3H),3.14(br.s.,1H),3.03-2.97(m,1H),2.95-2.82(m,2H),2.46(br.s.,2H),1.40(s,9H),1.05(s,9H)。
[0211] 中间体17：((S)-4-((2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-((2-硝基苯基磺酰胺基)甲基)-4-((三苯甲氧基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-1-羟基丁烷-2-基)胺基甲酸叔丁酯
[0212] 在15℃将TBAF(174.42mg,667.11μmol)加入中间体16(500.00mg,444.74μmol)在THF(6mL)中的溶液中。混合物在15℃搅拌1小时后，将该反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝100:1至20:1)纯化，得到白色固体的中间体17
1
(300.00mg,338.65μmol,产率76.15％)：H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.83(dd,J＝
7.8,17.3Hz,2H),7.76-7.63(m,2H),7.22-7.12(m,15H),7.01(d,J＝8.0Hz,2H),5.05
(br.s.,1H),4.45(br.s.,1H),3.78-3.70(m,1H),3.59(br.s.,3H),3.43(d,J＝9.5Hz,1H),
3.33-3.16(m,2H),3.05(d,J＝6.0Hz,2H),2.96-2.87(m,1H),2.83-2.72(m,1H),2.58-2.48(m,1H),1.74(dd,J＝4.8,14.8Hz,1H),1.43(s,9H)。
1
(300.00mg,338.65μmol,产率76.15％)：H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.83(dd,J＝
7.8,17.3Hz,2H),7.76-7.63(m,2H),7.22-7.12(m,15H),7.01(d,J＝8.0Hz,2H),5.05
(br.s.,1H),4.45(br.s.,1H),3.78-3.70(m,1H),3.59(br.s.,3H),3.43(d,J＝9.5Hz,1H),
3.33-3.16(m,2H),3.05(d,J＝6.0Hz,2H),2.96-2.87(m,1H),2.83-2.72(m,1H),2.58-2.48(m,1H),1.74(dd,J＝4.8,14.8Hz,1H),1.43(s,9H)。
[0213] 中间体18：N-[[(2R,3R,4S)-1-[(3S)-3-氨基-4-羟基丁基]-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基-苯磺酰胺
[0214] 将TMSOTf(602.15mg,2.71mmol,489.55μL)和2,6-二甲基吡啶(387.06mg,3.61mmol,420.72μL,4eq)加入中间体17(800.00mg,903.08μmol)在DCM(16.00mL)中的溶液中。在15℃搅拌16小时后，将该反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝1:0至20:1)纯化，得到白色固体的中间体18(700mg,粗产物)(含有TEA)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.85(td,J＝2.3,4.7Hz,1H),7.76-7.72(m,1H),7.70-7.63(m,
2H),7.25-7.16(m,15H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),3.72-3.60(m,3H),3.52-3.42(m,3H),3.27(dd,J＝6.6,14.1Hz,1H),3.14-3.00(m,3H),2.83-2.68(m,2H),1.85-1.62(m,2H)。
2H),7.25-7.16(m,15H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),3.72-3.60(m,3H),3.52-3.42(m,3H),3.27(dd,J＝6.6,14.1Hz,1H),3.14-3.00(m,3H),2.83-2.68(m,2H),1.85-1.62(m,2H)。
[0215] 中间体19：N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-1-[(3S)-3-(二甲基胺基)-4-羟基丁基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基苯磺酰胺
[0216] 将HCHO(86.77mg,1.07mmol,79.61μL,37％纯度)、MgSO4(1.07g,8.91mmol)以及随后的NaBH(OAc)3(377.63mg,1.78mmol)分步加入中间体18(700.00mg,890.88μmol)在DCM(15.00mL)中的溶液中。在15℃搅拌1小时后，加入饱和NaHCO3水溶液(100mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(2x 30mL)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝1:0至15:1)纯化，得到白色固体的中间体19(500mg,
614.40μmol,产率68.97％)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.87(dd,J＝1.5,7.5Hz,
1H),7.78-7.73(m,1H),7.72-7.61(m,2H),7.23-7.12(m,18H),7.05(d,J＝8.0Hz,2H),
3.64-3.54(m,3H),3.22-3.06(m,4H),3.03-2.98(m,1H),2.87-2.70(m,2H),2.56(td,J＝
6.0,12.0Hz,1H),2.45(br.s.,1H),2.22(s,6H),1.57(d,J＝14.1Hz,1H),1.41(d,J＝
6.0Hz,1H)。
614.40μmol,产率68.97％)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.87(dd,J＝1.5,7.5Hz,
1H),7.78-7.73(m,1H),7.72-7.61(m,2H),7.23-7.12(m,18H),7.05(d,J＝8.0Hz,2H),
3.64-3.54(m,3H),3.22-3.06(m,4H),3.03-2.98(m,1H),2.87-2.70(m,2H),2.56(td,J＝
6.0,12.0Hz,1H),2.45(br.s.,1H),2.22(s,6H),1.57(d,J＝14.1Hz,1H),1.41(d,J＝
6.0Hz,1H)。
[0217] 中间体20：(4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-N,N-二甲基-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-胺
[0218] 在0℃将偶氮二甲酸二异丙酯(0.72mL,3.76mmol)缓慢地加入三苯基膦(1g,3.76mmol)在THF(19ml)中的溶液中。随后，在0℃将这一混合物加入中间体19(500mg,
614.40μmol)在THF(75mL)中的溶液中。在15℃搅拌4小时后，将该反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到白色固体的中间体20
(200.00mg,251.33μmol,产率40.91％)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.14(d,J＝
7.5Hz,1H),7.65-7.55(m,3H),7.25-7.19(m,19H),3.62-3.50(m,4H),3.42(br.s.,1H),
3.17-2.98(m,4H),2.85(dd,J＝7.1,9.3Hz,1H),2.69-2.60(m,1H),2.44-2.31(m,2H),2.04(br.s.,6H),1.89(br.s.,1H)。
614.40μmol)在THF(75mL)中的溶液中。在15℃搅拌4小时后，将该反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到白色固体的中间体20
(200.00mg,251.33μmol,产率40.91％)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.14(d,J＝
7.5Hz,1H),7.65-7.55(m,3H),7.25-7.19(m,19H),3.62-3.50(m,4H),3.42(br.s.,1H),
3.17-2.98(m,4H),2.85(dd,J＝7.1,9.3Hz,1H),2.69-2.60(m,1H),2.44-2.31(m,2H),2.04(br.s.,6H),1.89(br.s.,1H)。
[0219] 中间体21：(4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-N,N-二甲基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-胺
[0220] 将Cs2CO3(368.49mg,1.13mmol)和苯硫酚(83.07mg,753.96μmol,76.92μL)加入中间体20(150.00mg,188.49μmol)在乙腈(3.00mL)中的溶液中。在40℃搅拌16小时后，加入水(15mL)淬灭反应混合物，随后用乙酸乙酯(2x 5mL)萃取。合并的有机层以盐水(2x 5mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到直接使用的白色固体的中间体21(90.00mg,147.39μmol,产率78.20％)。
[0221] 中间体22：(4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-4-(二甲基胺基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0222] 将1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(26.38mg,176.87μmol)加入中间体21(90.00mg,147.39μmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中。在15℃搅拌1小时后，加水(15mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(2x 5mL)萃取。合并的有机层以盐水(2x 10mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到白色固体的中间体22(90.00mg,118.46μmol,产率80.37％)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.28-
7.18(m,21H),6.82(d,J＝8.8Hz,2H),4.15-4.06(m,1H),3.77(s,3H),3.64-3.47(m,4H),
3.18-2.98(m,3H),2.92-2.82(m,2H),2.70(d,J＝13.2Hz,1H),2.43-2.33(m,7H),2.10(br.s.,1H),1.95(br.s.,1H)。
7.18(m,21H),6.82(d,J＝8.8Hz,2H),4.15-4.06(m,1H),3.77(s,3H),3.64-3.47(m,4H),
3.18-2.98(m,3H),2.92-2.82(m,2H),2.70(d,J＝13.2Hz,1H),2.43-2.33(m,7H),2.10(br.s.,1H),1.95(br.s.,1H)。
[0223] 中间体23：(4S,8R,9R,10S)-4-(二甲基胺基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0224] 将XPhos Pd G3(7.13mg,8.42μmol)和Cs2CO3(54.89mg,168.47μmol)加入中间体22(64.00mg,84.24μmol)和乙炔基苯(25.81mg,252.71μmol)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(乙酸乙酯:甲醇＝10:1)纯化，以给出褐色固体的中间体23(47.00mg,60.18μmol,产率71.44％)。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.54(d,J＝4.8Hz,2H),7.38-7.35(m,7H),7.33-7.21(m,18H),6.83(d,J＝
8.8Hz,2H),4.13(s,1H),3.77(s,3H),3.61-3.52(m,4H),3.19-3.17(m,2H),2.94-2.90(m,
2H),2.73-2.44(m,1H),2.17-1.97(m,1H)。
8.8Hz,2H),4.13(s,1H),3.77(s,3H),3.61-3.52(m,4H),3.19-3.17(m,2H),2.94-2.90(m,
2H),2.73-2.44(m,1H),2.17-1.97(m,1H)。
[0225] E3的合成：(4S,8R,9R,10S)-4-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0226] 将TFA(58.40mg,512.17μmol,37.92μL)加入中间体23(40.00mg,51.22μmol)在DCM(1mL)中的溶液中。在25℃搅拌12小时后，通过饱和NaHCO3淬灭反应混合物，随后用DCM(3x 5mL)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的化合物E3(21.70mg,40.28μmol,产率78.6％)。HRMS(ESI)：
C33H38N4O3[M+H]+计算值为539.29，实测值为539.30。1H NMR:(400MHz,MeOD-d4)δ7.60(d,J＝
4.8Hz,2H),7.49-7.46(m,4H),7.38-7.36(m,2H),7.23-7.24(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝
8.8Hz,2H),3.76(s,3H),3.55-3.52(m,2H),3.48-3.3.42(m,6H),3.34-3.31(m,1H),3.19(s,1H),2.89(s,6H),2.62(s,1H),2.04(m,2H)。
C33H38N4O3[M+H]+计算值为539.29，实测值为539.30。1H NMR:(400MHz,MeOD-d4)δ7.60(d,J＝
4.8Hz,2H),7.49-7.46(m,4H),7.38-7.36(m,2H),7.23-7.24(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝
8.8Hz,2H),3.76(s,3H),3.55-3.52(m,2H),3.48-3.3.42(m,6H),3.34-3.31(m,1H),3.19(s,1H),2.89(s,6H),2.62(s,1H),2.04(m,2H)。
[0227] 实施例4：(3Z,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺(“E4”)
[0228]
[0229] 中间体24：(3Z,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯
[0230] 在25℃将Cs2CO3(260.41mg,799.25μmol)加入(8R,9R,10S,Z)-10-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-9-(4-溴苯基)-6-((2-硝基苯基)磺酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯和苯硫酚(132.09mg,1.20mmol,122.31μL)在乙腈(6mL)中的溶液中。在50℃搅拌12小时后，使用H2O(5mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(10mL)萃取以给出有机层。将有机层浓缩，并通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化为白色固体的中间体24(450mg,795.70μmol,产率99.56％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.26-7.16(m,19H),5.90-5.84(m,1H),5.67-5.60(m,1H),3.61-3.53(m,4H),3.61-3.52(m,4H),3.11-3.09(m,2H),
2.86-2.84(m,2H),2.48(d,J＝5.2Hz,1H)。
2.86-2.84(m,2H),2.48(d,J＝5.2Hz,1H)。
[0231] 中间体25：(3Z,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0232] 在0℃将1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(116.04mg,778.02μmol)滴加至中间体24(400mg,707.29μmol)和Et3N(196.08μL,1.41mmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌5小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体25(400mg,559.68μmol,产率79.13％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.31-7.19(m,19H),6.85-6.81(m,2H),6.04(s,1H),5.81-5.80(m,1H),5.73-5.68(m,1H),4.15(d,J＝16Hz,1H),5.72(d,J＝16Hz,1H),4.15-4.00(m,1H),3.99-3.70(m,
1H),3.66-3.56(m,5H),3.21-3.19(m,2H),3.19-3.00(m,1H),2.81-2.77(m,1H)。
1H),3.66-3.56(m,5H),3.21-3.19(m,2H),3.19-3.00(m,1H),2.81-2.77(m,1H)。
[0233] 中间体26：(3Z,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺
[0234] 在0℃将TFA(3mL,5037μmol)滴加至中间体25(360.00mg,503.71μmol)在DCM(1mL)中的溶液中。在25℃搅拌1小时后，使用饱和NaHCO3(3mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(5mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩，并通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，以给出白色固体的中间体26(210mg,444.57μmol,产率88.26％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.21(d,J＝9.6Hz,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),6.06(s,2H),5.85(s,1H),5.74-5.71(m,1H),4.26(m,1H),
4.03-3.95(m,1H),3.77-3.59(m,6H),3.28(m,1H),2.90(s,1H)。
4.03-3.95(m,1H),3.77-3.59(m,6H),3.28(m,1H),2.90(s,1H)。
[0235] 中间体27：(3Z,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺
[0236] 在25℃将DIAD(179.79mg,889.13μmol)滴加至中间体26(210.00mg,444.57μmol)、异吲哚啉-1,3-二酮(71.95mg,489.03μmol)和PPh3(233.21mg,889.13μmol)在THF(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌5小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体27(200mg,332.51μmol,产率74.79％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.80-7.67(m,17H),7.54-7.67(m,22H),7.25-7.20(m,2H),6.80(s,2H),6.06(s,2H),5.85(s,1H),5.74(s,1H),4.22(s,1H)4.02(m,1H),3.77-
3.75(m,4H),3.70-3.66(m,3H),3.50(s,3H),3.12(m,1H),2.88(s,1H)。
3.75(m,4H),3.70-3.66(m,3H),3.50(s,3H),3.12(m,1H),2.88(s,1H)。
[0237] 中间体28：(3Z,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺
[0238] 将2-氨基乙醇(60.33μL,997.52μmol)滴加至中间体27(60.00mg,99.75μmol)在MeOH(1mL)中的溶液中。在25℃搅拌3小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化，以给出白色固体的中间体28(33.00mg,70.01μmol,产率70.18％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.50(d,J＝13.6Hz,2H),7.46(m,2H),7.21(d,J＝5.5Hz,2H),6.82(d,J＝9.6Hz,1H),6.08(s,1H),5.83(s,1H),5.73(s,1H),4.22(m,2H),4.02-4.00(m,1H),3.77(s,3H),3.71-3.63(m,2H),3.55-3.50(m,1H),3.36-3.17(m,1H),
2.81-2.76(m,3H)。
2.81-2.76(m,3H)。
[0239] 中间体29：(3Z,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺
[0240] 在25℃将NaBH(OAc)3(51.70mg,243.96μmol)加入中间体28(23.00mg,48.79μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化，以给出白色固体的中间体29(20mg,40.04μmol,产率82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.31-7.26(m,2H),7.19(d,J＝8.8Hz,3H),6.82(d,J＝8.8Hz,3H),6.14(s,1H),5.83-5.86(m,2H),4.12-4.02(m,3H),3.90-3.59(m,9H),3.19(m,1H),3.01-2.80(m,2H),2.38(s,6H)。
[0241] E4的合成：(3Z,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺
[0242] 将XPhos Pd G3(3.39mg,4.00μmol)和Cs2CO3(26.09mg,80.09μmol)加入中间体29(20.00mg,40.04μmol)和乙炔基苯(12.27mg,120.13μmol,13.19μL)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(0.04％HCl/乙腈/H2O系统)纯化，以给出白色固体的(3Z,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺+(2.00mg,3.84μmol,产率9.59％)。HRMS(ESI)：C32H33N4O[M+H]计算值为489.27，实测值为
520.10。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.74(d,J＝5.5Hz,2H),7.67(d,J＝8.8Hz,2H),7.53(d,J＝3.6Hz,2H),7.20(d,J＝8.8Hz,2H),7.18(d,J＝8.8Hz,2H),6.13(d,J＝5.6Hz,1H),5.78(d,J＝12.4Hz,1H),4.33(s,2H),4.30-4.21(m,9H),3.90-3.75(m,5H),3.50-3.31(m,3H),
2.77(s,6H)。
520.10。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.74(d,J＝5.5Hz,2H),7.67(d,J＝8.8Hz,2H),7.53(d,J＝3.6Hz,2H),7.20(d,J＝8.8Hz,2H),7.18(d,J＝8.8Hz,2H),6.13(d,J＝5.6Hz,1H),5.78(d,J＝12.4Hz,1H),4.33(s,2H),4.30-4.21(m,9H),3.90-3.75(m,5H),3.50-3.31(m,3H),
2.77(s,6H)。
[0243] 实施例5：(3S,4R,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E5”)[0244]
[0245]
[0246] 中间体30a和30b：(3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-((1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基l)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(30a)和(3R,4S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-((1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基l)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(30b)
[0247] 在室温将NMO(17.53mg,149.62μmol)和OsO4(2.54mg,9.98μmol)在搅拌下加入中间体27(60mg,99.75μmol)在丙酮/H2O＝10:1(1mL)中的溶液中。在25℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:5)纯化，给出浅褐色固体的中间体30a(极性较低)(25mg,39.34μmol,产率39.44％)和浅褐色固体的中间体30b(极性较高)(25mg,39.34μmol,产率39.44％)。中间体30a 1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ
7.82(d,J＝2.8Hz,2H),7.81(d,J＝2.0Hz,2H),7.71-7.02(m,4H),7.26(m,2H),6.80(d,J＝
1.2Hz,2H),4.24-4.07(m,2H),3.93-3.81(m,2H),3.74(s,3H),3.62-3.54(m,3H),3.28-
1
2.88(m,1H),2.65-2.49(m,2H)。中间体30b H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.83(d,J＝2.8Hz,
2H),7.81(d,J＝2.0Hz,2H),7.73-7.47(m,4H),7.24(m,2H),6.80(d,J＝8.8Hz,2H),6.58(s,1H),3.96-3.90(m,2H),3.70-3.68(m,4H),3.56-3.50(m,3H),3.00(s,1H),2.87-2.76(m,2H)。
7.82(d,J＝2.8Hz,2H),7.81(d,J＝2.0Hz,2H),7.71-7.02(m,4H),7.26(m,2H),6.80(d,J＝
1.2Hz,2H),4.24-4.07(m,2H),3.93-3.81(m,2H),3.74(s,3H),3.62-3.54(m,3H),3.28-
1
2.88(m,1H),2.65-2.49(m,2H)。中间体30b H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.83(d,J＝2.8Hz,
2H),7.81(d,J＝2.0Hz,2H),7.73-7.47(m,4H),7.24(m,2H),6.80(d,J＝8.8Hz,2H),6.58(s,1H),3.96-3.90(m,2H),3.70-3.68(m,4H),3.56-3.50(m,3H),3.00(s,1H),2.87-2.76(m,2H)。
[0248] 中间体31a：(3S,4R,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0249] 在搅拌下将2-氨基乙醇(115.34mg,1.89mmol)加入中间体30a(120mg,188.83μmol)在MeOH(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝8:1)纯化，以给出白色固体的中间体31a(70mg,138.50μmol,产率73.35％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.47-7.43(m,3H),7.42-7.40(m,1H),7.35-7.20(m,3H),7.18-6.79(m,2H),4.31-4.27(m,1H),3.89(s,1H),3.89-3.79(m,5H),
3.76-3.23(m,2H),2.91-2.86(m,2H),2.72-2.61(m,2H)。
3.76-3.23(m,2H),2.91-2.86(m,2H),2.72-2.61(m,2H)。
[0250] 中间体32a：(3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0251] 在搅拌下将HCHO(112.41mg,1.39mmol,103.13μL,37％溶液)和MgSO4(166.72mg,1.39mmol)加入31a(70.00mg,138.50μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌0.5小时后，再加入NaBH(OAc)3(146.77mg,692.52μmol)。再搅拌1.5小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝5:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体32a(60mg,112.47μmol,产率81％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.48-7.43(m,4H),7.42-7.40(m,1H),7.27-7.20(m,2H),6.81-6.78(m,2H),4.26-4.03(m,3H),3.64-3.54(m,5H),3.27-
3.24(m,1H)。
3.24(m,1H)。
[0252] E5的合成：(3S,4R,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0253] 将XPhos Pd G3(3.39mg,4.00μmol,0.10eq)和Cs2CO3(26.09mg,80.09μmol)加入中间体32a(20.00mg,40.04μmol)和乙炔基苯(12.27mg,120.13μmol,13.19μL)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(3S,4R,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(2.00mg,3.84μmol,产率9.59％)。HRMS(ESI)：C33H38N4O4[M+H]+计算值为554.29，实测值为
554.20。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.59(s,4H),7.51(d,J＝3.6Hz,2H),7.38(s,3H),7.16(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),4.20-4.11(s,3H),3.85-3.82(m,4H),3.75(s,
3H),3.57-3.44(m,3H),3.12-2.97(m,4H),2.97-2.56(m,6H)。
554.20。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.59(s,4H),7.51(d,J＝3.6Hz,2H),7.38(s,3H),7.16(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),4.20-4.11(s,3H),3.85-3.82(m,4H),3.75(s,
3H),3.57-3.44(m,3H),3.12-2.97(m,4H),2.97-2.56(m,6H)。
[0254] 实施例6：(3R,4S,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E6”)[0255]
[0256] 中间体31b：(3R,4S,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0257] 在25℃，在搅拌下将2-氨基乙醇(28.84mg,472.10μmol)加入中间体30b(30mg,47.21μmol)在MeOH(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝8:1)纯化，以给出白色固体的中间体31b(20mg,
39.57μmol,产率83.82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.51-7.48(m,3H),7.46-7.43(m,
4H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),7.77-3.73(m,3H),3.65-3.51(m,2H),3.23-3.15(m,1H),2.80-
2.73(m,3H)。
39.57μmol,产率83.82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.51-7.48(m,3H),7.46-7.43(m,
4H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),7.77-3.73(m,3H),3.65-3.51(m,2H),3.23-3.15(m,1H),2.80-
2.73(m,3H)。
[0258] 中间体32b：(3R,4S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0259] 在25℃，在搅拌下将HCHO(16.06mg,197.90μmol,14.73μL,37％溶液)和MgSO4(23.82mg,197.90μmol)加入中间体31a(10mg,19.79μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌0.5小时后，再加入NaBH(OAc)3(20.97mg,98.95μmol)。在25℃再搅拌1.5小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝5:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体32b(10mg,18.75μmol,产率47.36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.54-7.46(m,4H),7.30-7.25(m,7H),6.83-6.80(d,J＝8.8Hz,2H),3.89-3.78(m,2H),3.67-3.63(m,6H),3.56-3.48(m,3H),2.74-2.64(m,3H),2.28(s,6H)。
[0260] E6的合成：(3R,4S,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0261] 将XPhos Pd G3(1.59mg,1.87μmol)和Cs2CO3(12.22mg,37.49μmol)加入中间体32b(10mg,18.75μmol)和乙炔基苯(5.74mg,56.24μmol,6.18μL)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(0.04％HCl/ACN/H2O系统)纯化，以给出白色固体的(3R,4S,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲+酰胺(2mg,3.61μmol,产率19.23％)。HRMS(ESI)：C33H38N4O4[M+H]计算值为554.29，实测值为554.2。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.62(s,4H),7.53-7.51(m,2H),7.40(d,J＝4.8Hz,
3H),7.24(d,J＝4.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,2H),4.18(s,3H),4.08(s,1H),3.94-3.93(m,3H),3.76(s,4H),3.56-3.52(m,2H),3.42-3.40(m,2H),3.23-3.21(m,2H),2.99-2.95(m,1H),3.70(s,6H)。
3H),7.24(d,J＝4.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,2H),4.18(s,3H),4.08(s,1H),3.94-3.93(m,3H),3.76(s,4H),3.56-3.52(m,2H),3.42-3.40(m,2H),3.23-3.21(m,2H),2.99-2.95(m,1H),3.70(s,6H)。
[0262] 实施例7至9
[0263] 根据实施例6，使用表3中所列的炔和具体的醛(若指明)与中间体(“Int.”)32a或32b起始制备下述实施例化合物(E7至E9)。
[0264] 表3
[0265]
[0266]
[0267] 实施例10：(3S,4R,8R,9S,10S)-3,4-二羟基-10-[[异丙基(甲基)胺基]甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E10”)
[0268]
[0269] 中间体33a：(3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-10-[(异丙基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0270] 将NaBH(OAc)3(125.80mg,593.58μmol)加入中间体31a(100.00mg,197.86μmol)、丙酮(68.95mg,1.19mmol,87.28μL)、AcOH(11.88mg,197.86μmol,11.31μL)和MgSO4(238.16mg,1.98mmol)在DCM(1.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌12小时后，反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以得到浅黄褐色固体的粗中间体33a(116.00mg)。
[0271] 中间体34a：(3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-10-[[异丙基(甲基)胺基]甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0272] 将NaBH(OAc)3(134.72mg,635.64μmol)加入中间体33a(116.00mg,211.88μmol)、甲醛(103.08mg,1.27mmol,94.57μL)、MgSO4(255.04mg,2.12mmol)和AcOH(12.72mg,211.88μmol,12.11μL)在DCM(1.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌2小时后，反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以得到深黄色固体的粗中间体34b(138.00mg,粗产物)。
[0273] E10的合成：(3S,4R,8R,9S,10S)-3,4-二羟基-10-[[异丙基(甲基)胺基]甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺[0274] 将Et3N(16.22mg,160.29μmol,22.22μL)和XPhos Pd G3(4.52mg,5.34μmol)加入中间体34a(30.00mg,53.43μmol)和乙炔基苯(10.91mg,106.86μmol,11.73μL)在CH3CN(1.00mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出浅黄色固体的(3S,4R,8R,9S,10S)-3,4-二羟基-10-[[异丙基(甲基)胺基]甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,
1
6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(11.20mg,17.81μmol,产率33.34％,甲酸盐)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.65-8.37(m,1H),7.57-7.52(m,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),
7.42-7.34(m,5H),7.25(d,J＝9.0Hz,2H),6.81(d,J＝9.0Hz,2H),4.36-4.21(m,1H),4.13(br.s.,1H),3.96(d,J＝14.1Hz,1H),3.84-3.73(m,5H),3.62-3.46(m,2H),3.21(d,J＝
15.6Hz,1H),2.83(d,J＝14.1Hz,4H),2.75-2.54(m,2H),2.11(br.s.,3H),0.99(d,J＝
5.5Hz,3H),0.71(d,J＝5.0Hz,3H)。
1
6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(11.20mg,17.81μmol,产率33.34％,甲酸盐)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.65-8.37(m,1H),7.57-7.52(m,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),
7.42-7.34(m,5H),7.25(d,J＝9.0Hz,2H),6.81(d,J＝9.0Hz,2H),4.36-4.21(m,1H),4.13(br.s.,1H),3.96(d,J＝14.1Hz,1H),3.84-3.73(m,5H),3.62-3.46(m,2H),3.21(d,J＝
15.6Hz,1H),2.83(d,J＝14.1Hz,4H),2.75-2.54(m,2H),2.11(br.s.,3H),0.99(d,J＝
5.5Hz,3H),0.71(d,J＝5.0Hz,3H)。
[0275] 实施例11：(3R,4S,8R,9S,10S)-3,4-二羟基-10-[[异丙基(甲基)胺基]甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E11”)
[0276] 使用实施例10中所述的合成，从中间体31b开始制备实施例11。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.73-8.47(m,1H),7.56-7.51(m,4H),7.41-7.34(m,5H),7.28(d,J＝8.9Hz,2H),6.81(d,J＝8.9Hz,2H),3.88(d,J＝5.4Hz,1H),3.80-3.74(m,5H),3.72-3.48(m,5H),3.24(dd,J＝6.8,14.1Hz,1H),2.88(t,J＝11.9Hz,1H),2.82-2.75(m,1H),2.72(d,J＝14.2Hz,2H),2.65-2.56(m,1H),2.09(s,3H),0.95(d,J＝6.5Hz,3H),0.71(d,J＝6.4Hz,
3H)。
3H)。
[0277] 实施例12：(3S,4R,8R,9S,10S)-9-[4-[2-(2,3-二氟苯基)乙炔基]苯基]-10-[(二甲基胺基)甲基]-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E12”)
[0278]
[0279] 中间体35a：(3S,4R,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-9-(4-乙炔基苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0280] 将Cs2CO3(131.93mg,404.92μmol)和XPhos Pd G3(8.57mg,10.12μmol)加入中间体32a(54.00mg,101.23μmol)和乙炔基三甲基硅烷(29.83mg,303.69μmol,42.01μL)在CH3CN(1.00mL)中的溶液中。在N2气氛下在70℃搅拌2小时后，反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以得到深黄色固体的粗产物2(78.00mg,粗产物)。
[0281] E12的合成：(3S,4R,8R,9S,10S)-9-[4-[2-(2,3-二氟苯基)乙炔基]苯基]-10-[(二甲基胺基)甲基]-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0282] 将Cs2CO3(29.41mg,90.26μmol)和XPhos Pd G3(3.82mg,4.51μmol)加入(3R,4S,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-9-(4-乙炔基苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(中间体35a)(21.60mg,45.13μmol)和1-溴-2,
3-二氟苯(8.71mg,45.13μmol,5.06μL)在CH3CN(500μL)中的溶液中。在N2气氛下在40℃搅拌1小时后，残渣通过制备型TLC(SiO2,DCM:MeOH＝8:1)纯化以移除催化剂，随后使用制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(3S,4R,8R,9S,10S)-9-[4-[2-(2,3-二氟苯基)乙炔基]苯基]-10-[(二甲基胺基)甲基]-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(2.00mg,3.14μmol,产率6.96％,甲酸盐)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝
8.48-8.27(m,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,2H),7.40(d,J＝7.9Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,3H),
7.22-7.13(m,1H),7.11-7.03(m,1H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),6.73(br.s.,1H),3.89
(br.s.,2H),3.77(s,4H),3.75-3.62(m,3H),3.61-3.48(m,2H),3.28(dd,J＝6.6,14.1Hz,
1H),2.89(d,J＝12.8Hz,3H),2.80(d,J＝14.6Hz,2H),2.68(d,J＝7.5Hz,1H),2.27(s,6H)。
3-二氟苯(8.71mg,45.13μmol,5.06μL)在CH3CN(500μL)中的溶液中。在N2气氛下在40℃搅拌1小时后，残渣通过制备型TLC(SiO2,DCM:MeOH＝8:1)纯化以移除催化剂，随后使用制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(3S,4R,8R,9S,10S)-9-[4-[2-(2,3-二氟苯基)乙炔基]苯基]-10-[(二甲基胺基)甲基]-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(2.00mg,3.14μmol,产率6.96％,甲酸盐)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝
8.48-8.27(m,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,2H),7.40(d,J＝7.9Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,3H),
7.22-7.13(m,1H),7.11-7.03(m,1H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),6.73(br.s.,1H),3.89
(br.s.,2H),3.77(s,4H),3.75-3.62(m,3H),3.61-3.48(m,2H),3.28(dd,J＝6.6,14.1Hz,
1H),2.89(d,J＝12.8Hz,3H),2.80(d,J＝14.6Hz,2H),2.68(d,J＝7.5Hz,1H),2.27(s,6H)。
[0283] 实施例13：(3R,4S,8R,9S,10S)-9-(4-(2-(2,3-二氟苯基)乙炔基)苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E13”)
[0284]
[0285] 中间体36b：(3R,4S,8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-9-(4-乙炔基苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0286] 将Cs2CO3(97.72mg,299.93μmol)和XPhos Pd G3(6.35mg,7.50μmol)加入(3R,4S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,
6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(中间体32b)(40.00mg,74.98μmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(22.09mg,224.95μmol,31.12μL)在CH3CN(1.00mL)中的溶液中。在N2气氛下在70℃搅拌1小时后，将该反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1,Rf＝0.2)纯化，以给出灰白色固体的中间体36b(30.00mg,62.69μmol,产率83.60％)。
6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(中间体32b)(40.00mg,74.98μmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(22.09mg,224.95μmol,31.12μL)在CH3CN(1.00mL)中的溶液中。在N2气氛下在70℃搅拌1小时后，将该反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1,Rf＝0.2)纯化，以给出灰白色固体的中间体36b(30.00mg,62.69μmol,产率83.60％)。
[0287] 中间体37b：(3aS,6aR,7S,8S,10aR)-8-((二甲基胺基)甲基)-7-(4-乙炔基苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-2,2-二甲基六氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-5(4H)-甲酰胺
[0288] 将TsOH(1.08mg,6.27μmol)加入中间体36b(30.00mg,62.69μmol)在2,2-二甲氧基丙烷(500μL)在DCM(500μL)中的溶液中。在20℃搅拌1小时后，浓缩反应液，并通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到黄色油的中间体37b(20.00mg,38.56μmol,产率61.51％)。
[0289] 中间体38b：(3aS,6aR,7S,8S,10aR)-7-(4-((2,3-二氟苯基)乙炔基)苯基)-8-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-2,2-二甲基六氢-3aH-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,3]二氧杂环戊烷并[4,5-f][1,4]二氮芳辛-5(4H)-甲酰胺
[0290] 将Cs2CO3(50.25mg,154.24μmol)和XPhos Pd G3(3.26mg,3.86μmol)加入中间体37b(20.00mg,38.56μmol)和1-溴-2,3-二氟苯(22.33mg,115.68μmol,12.98μL)在CH3CN(500μL)中的溶液中。在N2气氛下在70℃搅拌1小时后，反应混合物通过制备型TLC(DCM:
MeOH＝10:1)纯化，得到黄色油的中间体38b(15.00mg,23.78μmol,产率61.68％)。
MeOH＝10:1)纯化，得到黄色油的中间体38b(15.00mg,23.78μmol,产率61.68％)。
[0291] E13的合成：(3R,4S,8R,9S,10S)-9-(4-(2-(2,3-二氟苯基)乙炔基)苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0292] 将1M HCl(500.00μL)加入中间体38b(15.00mg,23.78μmol,1.00eq)在CH3CN(500.00μL)中的混合物中。在15℃搅拌12小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣，残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(3S,4R,8R,9S,10S)-9-(4-(2-(2,3-二氟苯基)乙炔基)苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(11.00mg,17.28μmol,产率72.65％,甲酸盐)。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ＝8.69-8.45(m,1H),7.61(s,4H),7.40-7.29(m,2H),7.25-7.13(m,3H),6.85(d,J＝9.0Hz,2H),4.22(dd,J＝6.0,15.6Hz,1H),4.12(d,J＝6.0Hz,1H),3.87-3.80(m,2H),3.80-3.72(m,5H),3.53-3.46(m,1H),3.36(br.s.,1H),3.00-2.88(m,3H),2.84-
2.73(m,2H),2.41(s,6H)。
2.73(m,2H),2.41(s,6H)。
[0293] 实施例14：(4aR,7aR,8S,9S,11aS)-9-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-8-(4-(苯基乙炔基)苯基)八氢-2H-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,4]二氧杂环戊烷并[2,3-f][1,4]二氮芳辛-6(3H)-甲酰胺(“E14”)
[0294]
[0295] 中间体39a：(4aR,7aR,8S,9S,11aS)-8-(4-溴苯基)-9-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)八氢-2H-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,4]二氧杂环戊烷并[2,3-f][1,4]二氮芳辛-6(3H)-甲酰胺
[0296] 将中间体32a(30.00mg,56.24μmol)、NaOH(15.00mg,112.48μmol,180.30μL,30％m/v)和TBAB(3.63mg,11.25μmol)在DCE(1.00mL)中的混合物在55℃搅拌12h。LC-MS显示大约40％的反应剂1得以保留。检测到了一个新的具有所希望的中间体MS的峰。反应混合物以DCM 10mL稀释，并以H2O 15mL*5洗涤。随后以盐水3mL*2洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，并减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，以给出无色油的中间体39(10.00mg,17.87μmol,产率31.78％)。
[0297] E14的合成：(4aR,7aR,8S,9S,11aS)-9-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-8-(4-(苯基乙炔基)苯基)八氢-2H-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,4]二氧杂环戊烷并[2,3-f][1,4]二氮芳辛-6(3H)-甲酰胺
[0298] 将Cs2CO3(46.59mg,143.00μmol)和XPhos Pd G3(3.03mg,3.58μmol)加入中间体39a(20.00mg,35.75μmol)和乙炔基苯(10.95mg,107.25μmol,11.77μL)在CH3CN(500mL)中的溶液中。在N2气氛下在70℃搅拌1小时后，将反应混合物浓缩，并通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化以移除催化剂，随后使用制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(4aR,
7aR,8S,9S,11aS)-9-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-8-(4-(苯基乙炔基)苯基)八氢-2H-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,4]二氧杂环戊烷并[2,3-f][1,4]二氮芳辛-6(3H)-甲酰胺(甲酸盐,6.00mg,10.33μmol,产率28.90％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.26(br s,1H),7.55(dd,J＝2.0,7.0Hz,2H),7.51-7.42(m,4H),7.40-7.33(m,3H),7.20(d,J＝
9.0Hz,2H),6.83(d,J＝9.0Hz,2H),4.21(br d,J＝15.6Hz,1H),4.10(br d,J＝14.1Hz,
1H),4.06-3.94(m,3H),3.86-3.76(m,5H),3.66(br s,1H),3.59-3.52(m,2H),3.48-3.29(m,3H),2.89(br d,J＝13.1Hz,1H),2.60-2.33(m,3H),2.03(s,6H),1.83(br s,1H)。
7aR,8S,9S,11aS)-9-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-8-(4-(苯基乙炔基)苯基)八氢-2H-氮杂环丁烷并[1,2-a][1,4]二氧杂环戊烷并[2,3-f][1,4]二氮芳辛-6(3H)-甲酰胺(甲酸盐,6.00mg,10.33μmol,产率28.90％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.26(br s,1H),7.55(dd,J＝2.0,7.0Hz,2H),7.51-7.42(m,4H),7.40-7.33(m,3H),7.20(d,J＝
9.0Hz,2H),6.83(d,J＝9.0Hz,2H),4.21(br d,J＝15.6Hz,1H),4.10(br d,J＝14.1Hz,
1H),4.06-3.94(m,3H),3.86-3.76(m,5H),3.66(br s,1H),3.59-3.52(m,2H),3.48-3.29(m,3H),2.89(br d,J＝13.1Hz,1H),2.60-2.33(m,3H),2.03(s,6H),1.83(br s,1H)。
[0299] 实施例15：(3S,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E15”)
[0300]
[0301]
[0302] 中间体40：N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-1-[(2S)-4-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-2-羟基-丁基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基-苯磺酰胺
[0303] 将叔丁基-[2-[(2R)-氧杂环丙烷-2-基]乙氧基]-二苯基-硅烷(Organic Letters(2016),18(3),468-471)(373.88mg,1.15mmol)加入N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基-苯磺酰胺(400.00mg,572.56μmol)和LiClO4(121.83mg,1.15mmol,50.34μL)在CH3CN(4.00mL)中的溶液中。在80℃搅拌16小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂。残渣用H2O(20mL)稀释，用DCM(3X 20mL)萃取。合并的有机层以盐水(3x 10mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化，以给出浅黄色固体的中间体40(250.00mg,243.87μmol,产率42.59％)。
[0304] 中间体41：[(1S)-1-[[(2R,3R,4S)-2-[[乙酰基-(2-硝基苯基)磺酰基-胺基]甲基-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-[叔丁基(二苯基)硅基]样-丙基]醋酸酯
[0305] 将Ac2O(62.24mg,609.68μmol,57.10μL)加入N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-1-[(2S)-4-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-2-羟基-丁基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基-苯磺酰胺(中间体40)(250.00mg,243.87μmol)、Et3N(24.68mg,243.87μmol,33.81μL)和DMAP(2.98mg,24.39μmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中。在15℃搅拌16小时后，加入H2O(20mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(3x 15mL)萃取。合并的有机层以盐水(10mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝3/1，板2)纯化，以给出白色固体的中间体41(270.00mg,243.42μmol,产率99.81％)。
[0306] 中间体42：[(1S)-1-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2-硝基苯基)磺酰基胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-丙基]醋酸酯
[0307] 将LiOH.H2O(20.43mg,486.84μmol)加入[(1S)-1-[[(2R,3R,4S)-2-[[乙酰基-(2-硝基苯基)磺酰基-胺基]甲基-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-[叔丁基(二苯基)硅基]样-丙基]醋酸酯(中间体41)(270.00mg,243.42μmol)在THF(2mL)和H2O(2mL)中的溶液中。在15℃搅拌1小时后，反应混合物以H2O(30mL)稀释，用DCM(20mL*4)萃取。合并的有机层以盐水(20mL*3)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝3/1，板1)纯化，以给出白色固体的中间体42(200.00mg,187.41μmol,产率76.99％)。
[0308] 中间体43：[(1S)-1-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2-硝基苯基)磺酰基胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-羟基-丙基]醋酸酯
[0309] 将TBAF(98.00mg,374.82μmol)加入[(1S)-1-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2-硝基苯基)磺酰基胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-丙基]醋酸酯(中间体42)(200.00mg,187.41μmol)在THF(3mL)中的溶液中。在15℃搅拌2小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂。合并的有机层以DCM(30mL)稀释，以水(15mL*5)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝1/1，板1)纯化，以给出白色固体的中间体43(150.00mg,180.99μmol,产率96.57％)。
[0310] 中间体44：[(3S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯
[0311] 在N2气氛下，在0℃搅拌PPh3(94.94mg,361.98μmol,2.00eq)和DIAD(73.20mg,361.98μmol,70.38μL,2.00eq)在THF(2mL)中的混合物以给出牛奶状混合物。将[(1S)-1-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2-硝基苯基)磺酰基胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-羟基-丙基]醋酸酯(中间体43)(150.00mg,180.99μmol)在THF(1mL)中的溶液加入这一混合物中。在15℃搅拌16小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂。合并的有机层以DCM(30mL)稀释，以H2O(10mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝1/1，板1)纯化，以给出白色固体的中间体44(150.00mg,粗产物)。
[0312] 中间体45：[(3S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯
[0313] 将Cs2CO3(120.56mg,370.02μmol)和苯硫酚(30.58mg,277.52μmol,28.31μL)加入[(3S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯(中间体44)(150mg,185.01μmol)在CH3CN(3mL)中的溶液中。在40℃搅拌2小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂。残渣用H2O(30mL)稀释，用DCM(20mL*5)萃取。合并的有机层以盐水(20mL*3)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝1/1，板1)纯化，以给出黄色固体的中间体45(180.00mg,粗产物)。
[0314] 中间体46：[(3S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯
[0315] 将1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(42.91mg,287.73μmol,36.99μL)加入[(3S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯(中间体45)(180mg,287.73μmol)在DCM(3mL)中的溶液中。在15℃搅拌1小时后，再加入H2O(15mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(20mL*4)萃取。合并的有机层以NaHCO3溶液(15mL)、盐水(15mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝1/1，板1)纯化，以给出白色固体的中间体46(200mg,258.15μmol,产率89.72％)。
[0316] 中间体47：[(3S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯
[0317] 将TFA(294.34mg,2.58mmol,191.13μL)加入[(3S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯(中间体46)(200mg,258.15μmol,1.00eq)在DCM(3mL)中的溶液中。在15℃搅拌2小时后，再加入NaHCO3溶液(20mL)淬灭反应混合物，用DCM(20mL*5)萃取。合并的有机层以盐水(10mL*3)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝1/1，板1)纯化，以给出白色固体的中间体47(130.00mg,244.16μmol,产率94.58％)。
[0318] 中间体48：[(3S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯
[0319] 在N2气氛下，在0℃搅拌PPh3(128.08mg,488.32μmol,2.00eq)和DIAD(98.74mg,488.32μmol,94.94μL,2.00eq)在THF(1mL)中的混合物以给出牛奶状混合物。在0℃，将(3S,
8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯(中间体47)(130mg,244.16μmol)和异吲哚啉-1,3-二酮(53.88mg,366.24μmol)在THF(1mL)中的溶液加入这一混合物中。在15℃搅拌12小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂，随后通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝1/1,板
1)纯化，以给出黄色油的中间体48(200mg,粗产物)。
8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯(中间体47)(130mg,244.16μmol)和异吲哚啉-1,3-二酮(53.88mg,366.24μmol)在THF(1mL)中的溶液加入这一混合物中。在15℃搅拌12小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂，随后通过制备型TLC(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝1/1,板
1)纯化，以给出黄色油的中间体48(200mg,粗产物)。
[0320] 中间体49：(3S,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0321] 将N2H4.H2O(29.39μL,604.64μmol)加入[(3S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环
[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯(中间体48)(200mg,302.32μmol)在EtOH(2mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂。残渣用H2O(10mL)稀释，用DCM(10mL*5)萃取。合并的有机层以盐水(10mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，并减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,DCM:MeOH＝10:1至20:1)纯化，以给出白色固体的中间体49(60mg,122.60μmol,产率40.55％)。
[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯(中间体48)(200mg,302.32μmol)在EtOH(2mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物减压浓缩以移除溶剂。残渣用H2O(10mL)稀释，用DCM(10mL*5)萃取。合并的有机层以盐水(10mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，并减压浓缩以给出残渣，残渣通过制备型TLC(SiO2,DCM:MeOH＝10:1至20:1)纯化，以给出白色固体的中间体49(60mg,122.60μmol,产率40.55％)。
[0322] 中间体50：(3S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0323] 将NaBH(OAc)3(77.95mg,367.80μmol)加入(3S,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(中间体49)(60mg,122.60μmol)、甲醛(54.77μL,735.60μmol)、MgSO4(147.57mg,1.23mmol)和AcOH(0.70μL,12.26μmol)在DCM(3mL)中的溶液中。在15℃搅拌2小时后，将该反应混合物通过硅藻土过滤并用NaHCO3溶液(10mL*3)洗涤。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出白色固体的中间体50(50mg,96.63μmol,产率78.81％)。
[0324] E15的合成：(3S,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0325] 将Cs2CO3(125.94mg,386.52μmol)和XPhos Pd G3催化剂(8.18mg,9.66μmol)加入(3S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(中间体50)(50mg,96.63μmol)和乙炔基苯(29.61mg,
289.89μmol,31.84μL)在CH3CN(1mL)中的溶液中。在N2气氛下在70℃搅拌1小时后，反应混合物通过制备型TLC(SiO2,DCM:MeOH＝10:1,板1)纯化以移除催化剂，给出粗产物，粗产物进一步通过制备型HPLC(柱：Luna C18150*25 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体产物(3S,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(10mg,
17.10μmol,产率17.7％,甲酸盐))。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.44(br s,1H),
7.54(br d,J＝7.0Hz,4H),7.44-7.34(m,5H),7.29-7.24(m,2H),6.83(br d,J＝8.8Hz,
2H),6.29(s,1H),5.71(br s,1H),3.87(br s,2H),3.77(s,3H),3.75-3.62(m,4H),3.52-
3.38(m,1H),3.18(br dd,J＝6.1,13.6Hz,1H),2.93-2.79(m,1H),2.77-2.66(m,2H),2.66-
2.58(m,1H),2.19(s,6H),2.08-1.97(m,1H),1.96-1.85(m,1H)。
289.89μmol,31.84μL)在CH3CN(1mL)中的溶液中。在N2气氛下在70℃搅拌1小时后，反应混合物通过制备型TLC(SiO2,DCM:MeOH＝10:1,板1)纯化以移除催化剂，给出粗产物，粗产物进一步通过制备型HPLC(柱：Luna C18150*25 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体产物(3S,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(10mg,
17.10μmol,产率17.7％,甲酸盐))。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.44(br s,1H),
7.54(br d,J＝7.0Hz,4H),7.44-7.34(m,5H),7.29-7.24(m,2H),6.83(br d,J＝8.8Hz,
2H),6.29(s,1H),5.71(br s,1H),3.87(br s,2H),3.77(s,3H),3.75-3.62(m,4H),3.52-
3.38(m,1H),3.18(br dd,J＝6.1,13.6Hz,1H),2.93-2.79(m,1H),2.77-2.66(m,2H),2.66-
2.58(m,1H),2.19(s,6H),2.08-1.97(m,1H),1.96-1.85(m,1H)。
[0326] 实施例16至17：(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺的异构体
[0327]
[0328] 中间体51：(8R,9S,10S)-10-三苯甲氧基甲基-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-溴苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0329] 在0℃将BH3-Me2S(10M,686μL,5.00eq)加入(3Z,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(中间体25,980.00mg,1.37mmol,1.00eq)在THF(1.00mL)中的溶液中，将该反应混合物在25℃搅拌3小时。缓慢加入H2O(1.24g,68.56mmol,1.24mL,50.00eq)，将反应混合物在25℃搅拌30分钟。随后向该反应溶液加入NaOH/H2O(18.27g,68.50mmol,15％纯度,50.00eq)和H2O2(6.66g,68.56mmol,5.65mL,35％纯度,50.00eq)。将所得反应混合物在25℃搅拌3小时。以H2O(10mL)淬灭反应，并用DCM(50mL)萃取。合并的有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出白色固体的粗产物(混合物)，该粗产物不经进一步纯化而直接用于下一步。
[0330] 中间体52：[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯
[0331] 在0°将Ac2O(334.86mg,3.28mmol)加入中间体51(1.2g,1.64mmol)、Et3N(497.85mg,4.92mmol)和MAP(20.04mg,164μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌3小时后，使用H2O(10mL)淬灭反应，并用DCM(20mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出[(8R,9R,
10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯的两种异构体。通过制备型TLC分离每种异构体，以产生白色固体的异构体1(126mg,产率9.92％,Rf＝0.5)、白色固体的异构体2(197mg,产率
15.50％,Rf＝0.4)、以及白色固体的混合部分[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯(624mg,产率49.11％,Rf＝0.3)。尽管每种立体异构体均独立分离，但每种化合物的4位的立体化学仍不能确定。
10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯的两种异构体。通过制备型TLC分离每种异构体，以产生白色固体的异构体1(126mg,产率9.92％,Rf＝0.5)、白色固体的异构体2(197mg,产率
15.50％,Rf＝0.4)、以及白色固体的混合部分[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯(624mg,产率49.11％,Rf＝0.3)。尽管每种立体异构体均独立分离，但每种化合物的4位的立体化学仍不能确定。
[0332] 异构体1：1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ8.25(s,1H),7.47(d,J＝8.8Hz,2H),7.19-7.11(m,23H),6.77(d,J＝8.8Hz,2H),4.62(s,1H),3.92-3.88(m,1H),3.74-3.70(m,1H),
3.56-3.55(m,4H),3.45-3.41(m,1H),3.30-3.29(m,1H),3.08-3.07(m,3H),2.89-2.87(m,
1H),2.73-2.70(m,1H),2.55-2.52(m,1H),2.43(s,1H),2.06(s,3H),1.92-1.88(m,2H),
1.12-1.1.10(m,3H),0.9-0.87(m,3H)。
3.56-3.55(m,4H),3.45-3.41(m,1H),3.30-3.29(m,1H),3.08-3.07(m,3H),2.89-2.87(m,
1H),2.73-2.70(m,1H),2.55-2.52(m,1H),2.43(s,1H),2.06(s,3H),1.92-1.88(m,2H),
1.12-1.1.10(m,3H),0.9-0.87(m,3H)。
[0333] 异构体2：1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.34-7.22(m,23H),7.09(d,J＝8Hz,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),5.07-5.04(m,1H),3.92-3.88(m,1H),3.77(m,5H),3.65-3.58(m,
3H),3.25-3.27(m,2H),3.03-3.00(m,1H),3.02-2.99(m,1H),2.61-2.57(m,1H),2.45-2.44(m,1H),2.16(s,3H),2.08-2.05(m,1H),1.74-1.71(m,2H),1.00-0.95(m,1H)。
3H),3.25-3.27(m,2H),3.03-3.00(m,1H),3.02-2.99(m,1H),2.61-2.57(m,1H),2.45-2.44(m,1H),2.16(s,3H),2.08-2.05(m,1H),1.74-1.71(m,2H),1.00-0.95(m,1H)。
[0334] 混合部分：1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.52-7.17(m,21H),6.84-6.82(m,3H),4.81(s,1H),4.29-4.16(m,1H),3.99-3.77(m,1H),3.67-3.66(m,1H),3.65-3.63(m,6H),3.63-3.56(m,5H),3.40-3.39(m,3H),3.16-3.12(m,2H),2.96-2.94(m,1H),2.63-.59(m,1H),
2.28-2.25(m,1H),1.97(s,3H),1.89-1.86(m,1H),1.28-1.25(m,2H),0.88-0.84(m,1)。
2.28-2.25(m,1H),1.97(s,3H),1.89-1.86(m,1H),1.28-1.25(m,2H),0.88-0.84(m,1)。
[0335] 中间体53：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-6-((4-甲氧基苯基)胺基甲酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基醋酸酯
[0336] 将TFA(918.35mg,8.05mmol,596.33μL)加入[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯(624mg,805.43μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌3小时后，通过NaHCO3(10mL)淬灭反应混合物，并用DCM(20mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣，并通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体53(265mg,产率61.80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.46(d,J＝8Hz,2H),7.38(d,J＝8Hz,2H),7.26(d,J＝8Hz,2H),6.83(d,J＝8Hz,2H),6.47(s,1H),4.80(s,1H),3.81-3.77(m,
4H),3.64-3.57(m,5H),3.52-3.47(m,3H),3.25-3.22(m,1H),3.21(s,1H),2.97-2.84(m,
1H),22.33-2.23(m,2H),2.24(s,2H),2.15-1.96(m,2H)。
4H),3.64-3.57(m,5H),3.52-3.47(m,3H),3.25-3.22(m,1H),3.21(s,1H),2.97-2.84(m,
1H),22.33-2.23(m,2H),2.24(s,2H),2.15-1.96(m,2H)。
[0337] 中间体54：[(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯
[0338] 在25℃将DIAD(156.66mg,774.75μmol)滴加至中间体53(275mg,516.5μmol)、异吲哚啉-1,3-二酮(83.59mg,568.15μmol)和PPh3(203.21mg,774.75μmol)在THF(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌5小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出浅黄色固体的中间体54(460mg,粗产物)。1H NMR(4400MHz,CDCl3-d1)δ7.79(s,2H),7.70-7.65(m,20H),7.55-7.53(m,20H),7.48-7.45(m,30H),6.86(m,3H),6.62(s,1H),4.76(s,2H),3.86-3.83(m,6H),3.79-7.77(m,3H),3.65-3.64(m,3H),
3.54-3.49(m,1H),3.09-3.04(m,1H),2.85-2.81(m,1H),2.56-2.53(m,1H),3.37-3.14(m,
1H),2.21-2.14(m,1H)。
3.54-3.49(m,1H),3.09-3.04(m,1H),2.85-2.81(m,1H),2.56-2.53(m,1H),3.37-3.14(m,
1H),2.21-2.14(m,1H)。
[0339] 中间体55：[(8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)氨基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]醋酸酯
[0340] 将水合肼(53.28mg,1.04mmol,51.73μL)加入中间体54(460mg,695.35μmol)在EtOH(1mL)中的溶液中。在80℃搅拌2小时后，将反应混合物过滤并浓缩以给出褐色液体的+中间体55(500mg,粗产物)，其不经纯化而直接用于下一步。HRMS(ESI)：C24H28BrN4O3[M+H]计算值为531.15，实测值为531.1。
[0341] 中间体56：(8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0342] 将LiOH.H2O(47.37mg,1.13mmol)加入中间体55(300mg,564.50μmol)在EtOH:H2O＝2:1(1mL)中的溶液中。在40℃搅拌2小时后，将反应混合物用H2O(3mL)稀释，用DCM(10mL)萃取以给出有机层。将有机层浓缩，并通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，以给出白色固体的中间体56(90mg,产率32.58％)。1H NMR(4400MHz,CDCl3-d1)δ7.52-7.47(m,2H),
7.34-7.32(m,18H),7.27-7.22(m,3H),6.84(d,J＝9.2Hz,2H),6.17(s,1H),3.87-3.84(m,
1H),3.78-3.74(m,3H),3.70-3.66(m,3H),3.57-3.55(m,2H),3.13-3.10(m,1H),2.77-2.71(m,1H),2.04-1.88(m,5H)。
7.34-7.32(m,18H),7.27-7.22(m,3H),6.84(d,J＝9.2Hz,2H),6.17(s,1H),3.87-3.84(m,
1H),3.78-3.74(m,3H),3.70-3.66(m,3H),3.57-3.55(m,2H),3.13-3.10(m,1H),2.77-2.71(m,1H),2.04-1.88(m,5H)。
[0343] 中间体57：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0344] 在搅拌下将HCHO(149.26mg,1.84mmol,136.93μL,37％溶液)和MgSO4(442.72mg,3.68mmol)加入中间体56(90mg,183.9μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌0.5小时后，加入NaBH(OAc)3(194.88mg,919.49μmol)。在25℃搅拌1.5小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体57(58mg,产率60.95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.51-7.44(m,2H),7.30-7.23(m,
5H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),6.15(s,1H),3.89-3.87(m,2H),3.83-3.78(m,3H),3.73-3.67(m,4H),3.20-3.15(m,1H),2.72-2.69(m,2H),2.60-2.51(m,2H),2.14(s,5H),2.05-2.026(m,4H),2.00-1.91(m,1H)。
5H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),6.15(s,1H),3.89-3.87(m,2H),3.83-3.78(m,3H),3.73-3.67(m,4H),3.20-3.15(m,1H),2.72-2.69(m,2H),2.60-2.51(m,2H),2.14(s,5H),2.05-2.026(m,4H),2.00-1.91(m,1H)。
[0345] E16和E17的合成：(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺，异构体1(E16)和异构体2(E17)
[0346] 将XPhos Pd G3(8.18mg,9.66μmol)和Cs2CO3(62.97mg,193.26μmol)加入中间体57(50mg,96.63μmol)和乙炔基苯(29.61mg,289.89μmol)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺的每种立体异构体。分离每种异构体以产生白色固体的异构体1(5.1mg,产率9.80％)和异构体2(17.1mg,产率32.85％)。
[0347] E16：异构体1：HRMS(ESI)：C32H35N4O2[M+H]+计算值为539.29，实测值为529。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.60-7.50(m,6H),7.39-7.37(m,3H),7.36-7.18(m,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),3.83-3.80(m,2H),3.76(s,3H),3.69-3.68(m,2H),3.55-3.52(m,3H),3.15-
3.09(m,2H),3.01-3.00(m,2H),3.41-3.34(m,2H),2.26(m,6H),1.75-1.72(m,1H)。
3.09(m,2H),3.01-3.00(m,2H),3.41-3.34(m,2H),2.26(m,6H),1.75-1.72(m,1H)。
[0348] E17：异构体2：HRMS(ESI)：C32H35N4O2[M+H]+计算值为539.29，实测值为529.40。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.61-7.54(m,6H),7.50(d,J＝1.6Hz,3H),7.38-7.36(m,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),3.84-3.80(m,3H),3.75(s,3H),3.67-3.61(m,2H),3.55-3.51(m,1H),3.08-3.05(m,2H),2.83-2.80(m,1H),2.74-2.68(m,3H),2.26(s,6H),2.03-1.94(m,2H)。
[0349] 实施例18至19：(8R,9R,10S)-4-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺，异构体1(“E18”)和异构体2(“E19”)
[0350]
[0351] 中间体58：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-3-氧代-10-((三苯甲氧基)甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0352] 将Dess-Martin(347.32mg,818.89μmol)加入中间体51(500.00mg,682.41μmol,1eq)在DCM(5mL)中的溶液中。在25℃搅拌3小时后，通过饱和Na2SO3(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL)萃取以给出有机层。将有机相浓缩，并通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝
1:1)纯化，以给出褐色固体的中间体58(280mg,产率56.15％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ
7.37-7.19(m,30H),6.86-6.82(m,2H),6.20(s,1H),4.27-4.20(m,3H),4.07-3.81(m,1H),
3.79-3.77(m,3H),3.70-3.66(m,3H),3.54-3.31(m,1H),3.06-3.04(m,1H),2.98-2.94(m,
2H),2.76-2.73(m,1H),2.72-2.45(m,1H)。
1:1)纯化，以给出褐色固体的中间体58(280mg,产率56.15％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ
7.37-7.19(m,30H),6.86-6.82(m,2H),6.20(s,1H),4.27-4.20(m,3H),4.07-3.81(m,1H),
3.79-3.77(m,3H),3.70-3.66(m,3H),3.54-3.31(m,1H),3.06-3.04(m,1H),2.98-2.94(m,
2H),2.76-2.73(m,1H),2.72-2.45(m,1H)。
[0353] 中间体59：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3-(二甲基胺基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-((三苯甲氧基)甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0354] 在搅拌下将N甲基甲胺(2M,1.71mL)和CH3COOH(205.46mg,3.42mmol)加入中间体58(250mg,342.14μmol)在MeOH(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌0.5小时后，加入NaBH3CN(21.50mg,342.14μmol)。在25℃搅拌1.5小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体59(120mg,产率+
46.16％)。HRMS(ESI)：C32H33N4O[M+H]计算值为759.28，实测值为759.2。
46.16％)。HRMS(ESI)：C32H33N4O[M+H]计算值为759.28，实测值为759.2。
[0355] 中间体60：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0356] 在搅拌下将TFA(172.58mg,1.51mmol)加入中间体59(115mg,151.36μmol)在DCM(1mL)中的溶液中。在25℃搅拌12小时后，使用饱和NaHCO3(5mL)淬灭反应混合物，随后用DCM(5mL)萃取以给出有机层。收集有机溶液，浓缩，随后通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体60(45.00mg,产率57.45％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.47-7.43(m,2H),7.38-7.31(m,4H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),3.99(s,1H),3.77(s,
5H),3.63-3.61(m,5H),3.59-3.57(m,5H),3.48-3.46(m,2H),3.32-3.13(m,3H),2.76(s,
6H),2.48-2.34(m,4H),2.04-2.00(m,1H)。
5H),3.63-3.61(m,5H),3.59-3.57(m,5H),3.48-3.46(m,2H),3.32-3.13(m,3H),2.76(s,
6H),2.48-2.34(m,4H),2.04-2.00(m,1H)。
[0357] E18和E19的合成：(8R,9R,10S)-4-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺，异构体1(E18)和异构体2(E19)
[0358] 将XPhos Pd G3(4.91mg,5.80μmol)和Cs2CO3(37.78mg,115.96μmol)加入中间体59(30mg,57.98μmol)和乙炔基苯(17.76mg,173.94μmol)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出(8R,9R,10S)-4-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺的每种立体异构体，分离为白色固体的异构体
1(E18)(2.60mg,产率8.32％)和异构体2(E19)(11.40mg,产率36.50％)。
1(E18)(2.60mg,产率8.32％)和异构体2(E19)(11.40mg,产率36.50％)。
[0359] E18：异构体1，HRMS(ESI)：C33H38N4O3[M+H]+计算值为539.29，实测值为539.4。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.34(s,1H),7.56-7.51(m,2H),7.50-7.48(m,4H),7.37(d,J＝5.2Hz,2H),7.26(d,J＝9.6Hz,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,1H),4.09-4.05(m,1H),3.75-3.72(m,3H),3.66-3.65(m,1H),3.52-3.46(m,4H),3.26-3.20(m,2H),2.64(s,6H),2.55-2.52(m,1H),1.97(s,2H)。
[0360] E19：异构体2，HRMS(ESI)：C33H38N4O3[M+H]+计算值为539.29，实测值为539.4。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.55(s,1H),7.61(d,J＝8Hz,2H),7.51-7.49(m,4H),7.38-7.36(m,3H),7.23(d,J＝8.8Hz,2H),6.86(d,J＝8.8Hz,2H),4.21-4.11(m,1H),3.76-3.73(m,5H),
3.76-3.73(m,2H),3.62-3.40(m,3H),3.31-3.13(m,3H),2.81-2.77(s,6H),2.64(s,1H),
2.46(s,1H),2.06-2.03(m,1H)。
3.76-3.73(m,2H),3.62-3.40(m,3H),3.31-3.13(m,3H),2.81-2.77(s,6H),2.64(s,1H),
2.46(s,1H),2.06-2.03(m,1H)。
[0361] 实施例20至21：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-4-(二甲基胺基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺，异构体1(“E20”)和异构体2实施例21(“E21”)
[0362]
[0363] 中间体61：(8R,9S,10S)-3-(二甲基胺基)-10-((1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0364] 将DIAD(96.72mg,478.30μmol)滴加至实施例18和19的混合物(165mg,318.87μmol,1eq)、异吲哚啉-1,3-二酮(51.61mg,350.75μmol)和PPh3(125.45mg,478.30μmol)在THF(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌12小时后，残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝0:1)纯化，以给出浅黄色固体的中间体61(184mg,产率89.25％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.83-7.81(m,1H),7.73-7.72(m,2H),7.55-7.26(m,5H),6.82-6.79(m,2H),3.94-3.74(m,
2H),3.72(s,3H),3.67-3.56(m,5H),3.54-3.55(m,2H),3.35-3.06(m,1H),2.77(s,6H),
1.26(s,1H)。
2H),3.72(s,3H),3.67-3.56(m,5H),3.54-3.55(m,2H),3.35-3.06(m,1H),2.77(s,6H),
1.26(s,1H)。
[0365] 中间体62：(8R,9S,10S)-10-(胺基甲基)-3-(二甲基胺基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0366] 将水合肼(19.96mg,390.84μmol)加入中间体61(174mg,260.56μmol)在EtOH(1mL)中的溶液中。在80℃搅拌2小时后，将该反应混合物过滤并浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝6:1)纯化，以给出褐色液体的中间体62(50.00mg,产率35.69％)。+
HRMS(ESI)：C33H39N5O2[M+H]计算值为538.31，实测值为538.2。
HRMS(ESI)：C33H39N5O2[M+H]计算值为538.31，实测值为538.2。
[0367] E20和E21的合成：(4S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-4-(二甲基胺基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E20)和(4R,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-4-(二甲基胺基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,
6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E21)
6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E21)
[0368] 在搅拌下将HCHO(78.57mg,968.10μmol,72.08μL)和MgSO4(116.53mg,968.10μmol)加入中间体61(50mg,96.81μmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中。在25℃搅拌0.5小时后，加入CH3COOH(5.81mg,96.81μmol)和NaBH(OAc)3(102.59mg,484.05μmol)。在25℃搅拌1.5小时后，使用H2O(5mL)淬灭反应混合物，用DCM(20mL*3)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC纯化，以给出并分离(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-4-(二甲基胺基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺的浅褐色固体的异构体1(E20)(2.90mg,5.33μmol,产率5.51％)(HRMS(ESI)：C35H43N5O2[M+H]+计算值为566.34，实测值为566.4；1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.61-7.51(m,5H),7.44-7.38(m,4H),7.37-7.23(m,2H),6.87-6.85(m,2H),4.05-3.77(m,
1H),3.77(s,3H),3.66-3.51(m,2H),3.19-3.16(m,1H),2.50-2.47(m,1H),2.35-2.19(m,
1H),1.86-1.80(m,1H)))和浅褐色固体的异构体2(E21)(15.20mg,27.91μmol,产率
28.83％)(1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.56-7.54(m,6H),7.52-7.51(m,3H),7.23-7.22(m,
2H),6.83-6.84(m,2H),4.14-4.12(m,1H),3.87-3.81(m,1H),3.76(s,3H),3.67-3.48(m,
2H),3.24-3.22(m,2H),2.77(s,6H),2.71-2.60(m,4H),2.32-2.31(m,2H),2.31-2.30(m,
1H))。
1H),3.77(s,3H),3.66-3.51(m,2H),3.19-3.16(m,1H),2.50-2.47(m,1H),2.35-2.19(m,
1H),1.86-1.80(m,1H)))和浅褐色固体的异构体2(E21)(15.20mg,27.91μmol,产率
28.83％)(1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.56-7.54(m,6H),7.52-7.51(m,3H),7.23-7.22(m,
2H),6.83-6.84(m,2H),4.14-4.12(m,1H),3.87-3.81(m,1H),3.76(s,3H),3.67-3.48(m,
2H),3.24-3.22(m,2H),2.77(s,6H),2.71-2.60(m,4H),2.32-2.31(m,2H),2.31-2.30(m,
1H))。
[0369] 实施例22：(3S,4R,8R,9R,10S)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(吡啶-3-基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E22”)
[0370]
[0371] 中间体63a和63b：(3S,4R,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(63a)和(3R,4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(63b)
[0372] 在25℃将OsO4(7.83mg,30.78μmol)加入中间体25(220mg,307.83μmol)和NMO(43.27mg,369.4μmol)在丙酮/H2O＝10:1(1mL)中的溶液中。在25℃搅拌12小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:5)纯化，以给出白色固体的中间体63a(120mg,产率52.07％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.31-7.05(m,23H),6.85-6.81(m,2H),6.82(d,J＝8Hz,2H),4.23-4.19(m,1H),3.99(s,1H),3.76-3.73(m,6H),
3.50-3.43(m,2H),3.19-3.13(m,2H),2.98-2.96(m,1H),2.86-2.84(m,1H),2.78-2.59(m,
1H))and Intermediate 63b(134mg,58.14％yield)as a white solid(1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.39-7.24(m,23H),7.09-7.05(m,2H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),3.85-3.78(m,
5H),3.69-3.61(m,4H),3.45-3.40(m,3H),3.14-3.13(m,1H),3.05-3.04(m,1H),2.78-2.75(m,1H))。
3.50-3.43(m,2H),3.19-3.13(m,2H),2.98-2.96(m,1H),2.86-2.84(m,1H),2.78-2.59(m,
1H))and Intermediate 63b(134mg,58.14％yield)as a white solid(1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.39-7.24(m,23H),7.09-7.05(m,2H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),3.85-3.78(m,
5H),3.69-3.61(m,4H),3.45-3.40(m,3H),3.14-3.13(m,1H),3.05-3.04(m,1H),2.78-2.75(m,1H))。
[0373] 中间体64a：(3S,4R,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0374] 将TFA(91.37mg,801.39μmol)加入中间体63a(60mg,80.14μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌3小时后，使用NaHCO3(10mL)淬灭反应，并用DCM(20mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯)纯化，以给出白色固体的中间体64a(35mg,产率86.24％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.43(d,J＝7.6Hz,2H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(d,J＝8.8Hz,2H),6.82(d,J＝8.8Hz,2H),4.32-4.28(m,1H),4.13-4.06(m,2H),3.85(m,1H),3.76(s,3H),3.61(s,1H),3.48(s,3H),
3.22(m,1H),2.98-2.88(m,2H),2.77-2.70(m,2H),2.0(s,1H)。
3.22(m,1H),2.98-2.88(m,2H),2.77-2.70(m,2H),2.0(s,1H)。
[0375] E22的合成：(3S,4R,8R,9R,10S)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(吡啶-3-基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0376] 将XPhos Pd G3(3.34mg,3.95μmol)和Cs2CO3(25.74mg,78.99μmol)加入中间体64a(20mg,39.5μmol)和3-乙炔基吡啶(8.15mg,78.99μmol)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌1小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge PrepOBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(3S,4R,8R,9R,10S)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(吡啶-3-基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(6.8mg,产率29.69％)(HRMS(ESI)：C30H32N4O5[M+H]+计算值为529.24，实测值为529.30；1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.69(s,1H),8.51(d,J＝4Hz,1H),7.98(d,J＝8Hz,1H),7.60-7.52(m,4H),7.48-7.45(m,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,2H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),4.16-4.11(m,2H),3.84-3.82(m,2H),3.75(s,3H),3.64-3.58(m,4H),3.39-3.60(m,2H),2.88-2.79(m,3H))。
[0377] 实施例23：(3R,4S,8R,9R,10S)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(吡啶-3-基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E23”)
[0378]
[0379] 中间体64b：(3R,4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0380] 将TFA(197.98mg,1.74mmol)加入中间体63b(130mg,173.63μmol)在DCM(2mL)中的溶液中。在25℃搅拌3小时后，使用NaHCO3(10mL)淬灭反应，并用DCM(20mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯)纯化，以给出白色固体的中间体64b(75mg,产率85.30％)(1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.48(d,J＝7.6Hz,2H),7.09-7.28(m,7H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),3.78(d,J＝10.8Hz,1H),3.72-3.66(m,4H),3.59-3.57(m,5H),3.53-3.51(m,4H),3.27-3.25(m,1H),2.88-2.74(m,
2H))。
2H))。
[0381] E23的合成：(3R,4S,8R,9R,10S)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(吡啶-3-基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0382] 将XPhos Pd G3(3.34mg,3.95μmol)和Cs2CO3(25.74mg,78.99μmol)加入中间体64b(20mg,39.50μmol)和3-乙炔基吡啶(8.15mg,78.99μmol)在乙腈(1mL)中的溶液中。在70℃搅拌2小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(3R,4S,8R,9R,10S)-3,4-二羟基-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(吡啶-3-基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(7.4mg,产率29.69％)。HRMS(ESI)：C30H32N4O5[M+H]+计算值为529.24，实测值为529.30。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.69(s,1H),8.52(d,J＝5.2Hz,1H),7.98(d,J＝8Hz,1H),7.61-7.56(m,4H),7.48-7.46(m,1H),7.23(d,J＝8.8Hz,2H),6.86(d,J＝9.2Hz,2H),3.84-3.80(m,3H),3.76(s,3H),3.65-3.50(m,7H),3.31-3.28(m,1H),3.08-3.26(m,1H),2.74-2.71(m,1H)。
[0383] 中间体A5的合成：[(1S)-1-[[叔丁基(二苯基)硅基]氧甲基]-3-氧代-苯基]醋酸酯
[0384]
[0385] 中间体A2：叔丁基-[[(2S)-氧杂环丙烷-2-基]甲氧基]二苯基硅烷
[0386] 在0℃将TBDPSCl(13.36g,48.60mmol,12.48mL)加入(R)-氧杂环丙烷-2-基甲醇(3.00g,40.50mmol,2.68mL)和咪唑(5.51g,80.99mmol)在DCM(80mL)中的溶液中。在25℃搅拌12小时后，使用H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用DCM(60mL)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，以给出无色液体的中间体A2(12.66g,产率100.00％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.69-7.68(m,4H),7.46-7.40(m,5H),8.87-3.85(m,1H),3.73-3.70(m,1H),3.14-3.13(m,1H),2.76-2.74(m,1H),1.05(s,9H)。
[0387] 中间体A3：[(2S)-1-[叔丁基(二苯基)硅基]氧戊-4-烯-2-醇
[0388] 在氮气氛下将CuI(1.83g,9.60mmol,1.5eq)置于三颈烧瓶中，随后加入无水THF(20mL)。将所得混合物冷却至-78℃，随后滴加溴化镁(1M,22.40mL,3.5eq)，同时将内部温度维持在低于-78℃。将该非均质混合物升温至-20℃，并在这一温度搅拌30分钟。将溶液冷却回-78℃后，滴加中间体A2(2.00g,6.40mmol,1eq)。搅拌混合物，令其逐渐升温至20℃，保持12小时。使用H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用DCM(60mL*2)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝7:1)纯化，以给出无色液体的中间体A3(2.18g,产率100.00％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.67-7.65(m,4H),7.44-7.37(m,7H),5.82-5.76(m,1H),5.10-4.90(m,2H),3.81-3.78(m,1H),3.68-3.65(m,1H),3.57-3.54(m,1H),2.46-2.44(m,1H),2.25-2.22(m,1H),1.05(m,9H)。
[0389] 中间体A4：[(1S)-1-[[叔丁基(二苯基)硅基]氧甲基]丁-3-烯基]醋酸酯
[0390] 在0℃将醋酸酐(980.06mg,9.60mmol,1.5eq)加入中间体A3(2.18g,6.40mmol,1eq)、Et3N(1.94g,19.21mmol,3eq)和DMAP(78.21mg,640.18μmol,0.1eq)在DCM(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌3小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)显示反应完全，使用H2O(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(20mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，以给出无色液体的中间体A4(2.30g,产率93.94％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.67-7.65(m,4H),
7.40-7.26(m,6H),5.77-5.69(m,1H),5.11-5.01(m,3H),3.73-3.66(m,2H),2.48-2.32(m,
1H),2.02(m,3H),1.09(m,9H)。
7.40-7.26(m,6H),5.77-5.69(m,1H),5.11-5.01(m,3H),3.73-3.66(m,2H),2.48-2.32(m,
1H),2.02(m,3H),1.09(m,9H)。
[0391] 中间体A5：[(1S)-1-[[叔丁基(二苯基)硅基]氧甲基]-3-氧代-苯基]醋酸酯
[0392] 在-78℃，用O3在O2中的气流处理中间体A4(1.70g,4.44mmol,1eq)在DCM/MeOH＝1:1(30mL)中的溶液，直至溶液变为蓝色。随后将N2鼓泡通过该溶液，直到颜色消失。所得溶液以Me2S(2.76g,44.44mmol,10eq)处理，升温至20℃，并搅拌2小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝
5:1)显示反应完全，使用DCM(50mL)稀释反应混合物，用H2O(10mL)洗涤以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩，以给出无色液体的中间体A5(1.70g,粗产物)，其不经进一步纯化。
5:1)显示反应完全，使用DCM(50mL)稀释反应混合物，用H2O(10mL)洗涤以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩，以给出无色液体的中间体A5(1.70g,粗产物)，其不经进一步纯化。
[0393] 实施例24：(4S,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E24”)
[0394]
[0395]
[0396] 中间体69：[(1S)-3-[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2-硝基苯基)磺酰基胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]-1-[[叔丁基(二苯基)硅基]氧甲基]丙基]醋酸酯
[0397] 在25℃，在搅拌下将中间体A5(1.46g,3.78mmol,2.2eq)和CH3COOH(103.29mg,1.72mmol,1eq)加入N-(((2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-((三苯甲氧基)甲基)氮杂环丁烷-
2-基)甲基)-2-硝基苯磺酰胺(WO2015070204)(1.20g,1.72mmol,1eq)在DCM(12mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌0.5小时。将NaBH(OAc)3(1.09g,5.16mmol,3eq)加入混合物中。将所得反应混合物在25℃搅拌1.5小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体69(1.67g,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ5.15-5.11(m,`H),4.96-4.95(m,1H),4.10-
4.07(m,1H),3.62-3.44(m,4H),3.17-3.12(m,1H),2.88-2.81(m,3H),2.51-2.44(m,2H),
2.06-2.08(m,3H)。
2-基)甲基)-2-硝基苯磺酰胺(WO2015070204)(1.20g,1.72mmol,1eq)在DCM(12mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌0.5小时。将NaBH(OAc)3(1.09g,5.16mmol,3eq)加入混合物中。将所得反应混合物在25℃搅拌1.5小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体69(1.67g,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ5.15-5.11(m,`H),4.96-4.95(m,1H),4.10-
4.07(m,1H),3.62-3.44(m,4H),3.17-3.12(m,1H),2.88-2.81(m,3H),2.51-2.44(m,2H),
2.06-2.08(m,3H)。
[0398] 中间体70：[(1S)-3-[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2-硝基苯基)磺酰基胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]-1-(羟基甲基)丙基]醋酸酯
[0399] 在搅拌下将TBAF(1.22g,4.68mmol,3eq)加入中间体69(1.67g,1.56mmol,1eq)在DCM(16mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体70(920.00mg,产率71.16％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.85-7.66(m,10),7.26-6.97(m,20H),5.02(m,1H),4.85-4.82(m,1H),4.05-3.76(m,1H),3.70-3.52(m,3H),
3.12-2.86(m,3H),2.03(s,5H),1.52-1.46(m,2H)。
3.12-2.86(m,3H),2.03(s,5H),1.52-1.46(m,2H)。
[0400] 中间体71：[(4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯
[0401] 在搅拌下将PPh3(835.51mg,3.19mmol,4eq)和DIAD(644.13mg,3.19mmol,619.35μL,4eq)的混合物加入中间体70(660.00mg,796.36μmol,1eq)在THF(20mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体71(445.00mg,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.92-7.90(m,1H),7.69-7.61(m,3H),7.26-7.16(m,20H),4.42-4.40(m,2H),4.14-4.10(m,1H),3.57(s,3H),3.56-3.45(m,1H),3.10-3.03(m,3H),
2.85-2.84(m,1H),2.37-2.31(m,1H),2.13-1.98(m,1H),1.87-1.54(m,1H),01.28-1.26(m,
3H)。
2.85-2.84(m,1H),2.37-2.31(m,1H),2.13-1.98(m,1H),1.87-1.54(m,1H),01.28-1.26(m,
3H)。
[0402] 中间体72：[(4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯
[0403] 在搅拌下将PPh3(835.51mg,3.19mmol,4eq)和DIAD(644.13mg,3.19mmol,619.35μL,4eq)的混合物加入中间体71(660.00mg,796.36μmol,1eq)在THF(20.00mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体72(445.00mg,
1
粗产物)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.26-7.22(m,25H),4.01-4.00(m,1H),3.83-3.81(m,
1H),3.62-3.47(m,1H),3.51-3.47(m,1H),3.49-3.48(m,1H),3.21-3.11(m,1H),2.92-2.88(m,1H),2.49-2.47(m,2H),2.05(s,3H),1.85-1.084(m,1H),1.60(s,3H)。
1
粗产物)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.26-7.22(m,25H),4.01-4.00(m,1H),3.83-3.81(m,
1H),3.62-3.47(m,1H),3.51-3.47(m,1H),3.49-3.48(m,1H),3.21-3.11(m,1H),2.92-2.88(m,1H),2.49-2.47(m,2H),2.05(s,3H),1.85-1.084(m,1H),1.60(s,3H)。
[0404] 中间体73：[(4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯
[0405] 在搅拌下将1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(40.39mg,270.78μmol,34.82μL,1.1eq)加入中间体72(154.00mg,246.17μmol,1eq)和Et3N(49.82mg,492.34μmol,68.25μL,2eq)在DCM(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(2mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体73(169mg,产率88.61％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.33-7.23(m,20H),6.83-6.82(m,2H),4.59-4.57(m,1H),4.30-4.27(m,1H),3.78-3.75(m,4),3.63-3.3.62(m,1H),3.54-
3.53(m,1H),3.15-3.13(m,2H),2.92-2.90(m,2H),2.08-2.00(m,3H),1.89-1.85(s,2H),
1.57(m,1H)。
3.53(m,1H),3.15-3.13(m,2H),2.92-2.90(m,2H),2.08-2.00(m,3H),1.89-1.85(s,2H),
1.57(m,1H)。
[0406] 中间体74：[(4S,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯
[0407] 在搅拌下将TFA(248.72mg,2.18mmol,10eq)加入中间体73(169.00mg,218.14μmol,1eq)在DCM(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，通过NaHCO3淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，以给出白色固体的中间体74(81.00mg,152.13μmol,产率69.74％)。HRMS(ESI)：C25H30BrN3O5[M+H]+计算值为532.14，实测值为534.1。
[0408] 中间体75：[(4S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]醋酸酯
[0409] 在25℃，在N2气氛下将DIAD(31.71mg,156.82μmol,30.49μL,1.5eq)滴加至中间体74(81.00mg,104.55μmol,1eq)、异吲哚啉-1,3-二酮(16.92mg,115.01μmol,1.1eq)和PPh3(41.13mg,156.82μmol,1.5eq)在THF(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出黄色固体的中间体75(58.00mg,产率83.86％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.83-7.81(m,2H),7.73-7.71(m,2H),7.51-7.49(m,4H),7.25-7.23(m,2H),
6.89-6.84(m,2H),6.56(s,1H),4.59-4.55(m,1H),4.28-4.27(m,1H),3.82-3.78(m,4H),
3.58-3.55(m,3.50H),3.50-3.25(m,2H),2.99-2.98(m,1H),2.37-2.12(m,1H),2.08(s,
5H)。
6.89-6.84(m,2H),6.56(s,1H),4.59-4.55(m,1H),4.28-4.27(m,1H),3.82-3.78(m,4H),
3.58-3.55(m,3.50H),3.50-3.25(m,2H),2.99-2.98(m,1H),2.37-2.12(m,1H),2.08(s,
5H)。
[0410] 中间体76：(4S,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-6-((4-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基醋酸酯
[0411] 在25℃，在N2气氛下将水合肼(6.72mg,131.51μmol,6.52μL,98％纯度,1.5eq)加入中间体75(58.00mg,87.67μmol,1eq)在EtOH(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物，不经进一步纯化而给出残渣中间体76。HRMS(ESI)：C25H31BrN4O4[M+H]+计算值为531.15，实测值为531.1。
[0412] 中间体77：(4S,8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-4-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0413] 在25℃将LiOH.H2O(7.26mg,173.12μmol,2eq)加入中间体76(46.00mg,86.56μmol,1eq)在EtOH:H2O＝1:1(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(2mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩，以给出白色固体的中间体77(80.00mg,粗产物)。HRMS(ESI)：ET6538-397-P1P，C23H29BrN4O3[M+H]+计算值为489.14，实测值为491.1。
[0414] 中间体78：(4S,8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-4-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0415] 在25℃，在N2气氛下将DIAD(307.49mg,1.52mmol,1.5eq)滴加至中间体77(757.00mg,1.01mmol,1eq)、异吲哚啉-1,3-二酮(164.07mg,1.12mmol,1.1eq)和
(398.85mg,1.52mmol,1.5eq)在THF(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出黄色固体的中间体78(1.13g,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ
7.45-7.44(m,3H),7.39-7.37(m,2H),6.83-6.81(m,2H),4.08-3.97(m,2H),3.77-3.76(m,
2H),3.45-3.44(m,1H),3.29-3.10(m,3H),2.02(s,6H),0.87(s,2H)。
(398.85mg,1.52mmol,1.5eq)在THF(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出黄色固体的中间体78(1.13g,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ
7.45-7.44(m,3H),7.39-7.37(m,2H),6.83-6.81(m,2H),4.08-3.97(m,2H),3.77-3.76(m,
2H),3.45-3.44(m,1H),3.29-3.10(m,3H),2.02(s,6H),0.87(s,2H)。
[0416] E24的合成：(4S,8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E24)
[0417] 将XPhos Pd G3(6.54mg,7.73μmol,0.1eq)和Cs2CO3(50.37mg,154.60μmol,2eq)加入中间体78(40.00mg,77.30μmol,1eq)和乙炔基苯(23.68mg,231.90μmol,25.47μL,3.00eq)在乙腈(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌2小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18
150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(4S,8R,
9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(6.10mg,产率9.59％)。HRMS(ESI)：C33H38N4O3[M+H]+计算值为539.29，实测值为539.4。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.55-7.50(m,2H),
7.49-7.37(m,4H),6.86-6.84(m,2H),4.18-4.05(m,1H),4.02-4.00(m,1H),3.75(s,3H),
3.64-3.31(m,1H),2.90-2.85(m,3H),2.43(s,6H),2.35-2.34(m,1H),2.34-2.06(m,1H)。
150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的(4S,8R,
9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(6.10mg,产率9.59％)。HRMS(ESI)：C33H38N4O3[M+H]+计算值为539.29，实测值为539.4。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.55-7.50(m,2H),
7.49-7.37(m,4H),6.86-6.84(m,2H),4.18-4.05(m,1H),4.02-4.00(m,1H),3.75(s,3H),
3.64-3.31(m,1H),2.90-2.85(m,3H),2.43(s,6H),2.35-2.34(m,1H),2.34-2.06(m,1H)。
[0418] 实施例25：(8R,9S,10S)-3,10-双[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E25”)
[0419]
[0420]
[0421]
[0422] 中间体79：N-[[(2R,3R,4S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-N-(2-硝基苯基)磺酰基-胺基甲酸叔丁酯
[0423] 将BOC2O(2.76g,12.66mmol,1.1eq)加入N-(((2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-((三苯甲氧基)甲基)氮杂环丁烷-2-基)甲基)-2-硝基苯磺酰胺(WO2015070204)(8.50g,11.51mmol,1eq)、DMAP(140.58mg,1.15mmol,0.1eq)和Et3N(3.49g,34.52mmol,4.79mL,
3eq)在DCM(60mL)中的溶液中，将反应混合物在25℃搅拌4小时。TLC(石油醚:DCM＝3:1)显示反应完全，以H2O(100mL)淬灭反应，并用DCM(300mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，以给出
1
褐色固体的中间体79(8.19g,产率84.83％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ8.20(d,J＝4.4Hz,
1H),7.70(s,3H),7.35-7.32(m,5H),7.19-7.13(m,10H),7.11(m,7H),5.73-5.63(m,1H),
5.09-5.05(m,1H),4.90-4.87(m,1H),3.95-3.91(m,1H),3.65-3.64(m,3H),3.54-3.49(m,
1H),3.09-3.04(m,1H),2.85-2.81(m,1H),2.56-2.53(m,1H),3.06-3.05(m,1H),2.94-2.89(m,1H)。
3eq)在DCM(60mL)中的溶液中，将反应混合物在25℃搅拌4小时。TLC(石油醚:DCM＝3:1)显示反应完全，以H2O(100mL)淬灭反应，并用DCM(300mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，以给出
1
褐色固体的中间体79(8.19g,产率84.83％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ8.20(d,J＝4.4Hz,
1H),7.70(s,3H),7.35-7.32(m,5H),7.19-7.13(m,10H),7.11(m,7H),5.73-5.63(m,1H),
5.09-5.05(m,1H),4.90-4.87(m,1H),3.95-3.91(m,1H),3.65-3.64(m,3H),3.54-3.49(m,
1H),3.09-3.04(m,1H),2.85-2.81(m,1H),2.56-2.53(m,1H),3.06-3.05(m,1H),2.94-2.89(m,1H)。
[0424] 中间体80：N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-N-(2-硝基苯基)磺酰基-胺基甲酸叔丁酯
[0425] 将1,3-二甲基六氢嘧啶-2,4,6-三酮(2.15g,13.77mmol,1.5eq)和Pd(PPh3)4(1.06g,917.98μmol,0.1eq)加入中间体79(7.70g,9.18mmol,1eq)在EtOH(10mL)中的溶液中，将反应混合物在40℃搅拌2小时。LCMS显示反应完全，以10％NaOH(20mL)淬灭反应，并用DCM(500mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，以给出浅褐色固体的中间体80(6.44g,8.06mmol,产率87.83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ8.24-8.22(m,1H),7.72-7.65(m,3H),7.33(s,4H),
7.22-7.19(m,16H),7.42-7.34(m,2H),3.95-3.89(m,1H),3.06-3.04(m,1H),3.02-2.95(m,
1H),2.05(s,1H),1.03(s,9H)。
7.22-7.19(m,16H),7.42-7.34(m,2H),3.95-3.89(m,1H),3.06-3.04(m,1H),3.02-2.95(m,
1H),2.05(s,1H),1.03(s,9H)。
[0426] 中间体81：N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-1-[2-(羟基甲基)烯丙基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-N-(2-硝基苯基)磺酰基-胺基甲酸叔丁酯
[0427] 在25℃将2-(溴甲基)丙-2-烯-1-醇(1.83g,12.09mmol,1.5eq)加入中间体80(6.44g,8.06mmol,1eq)和K2CO3(3.34g,24.18mmol,3eq)在DMF(60mL)中的溶液中，将反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，以H2O(50mL)淬灭反应，并用DCM(100mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶层析(石油醚:
乙酸乙酯＝2:1)纯化，以给出白色固体的中间体81(5.52g,产率78.83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ8.20(d,J＝4.8Hz,2H),8.02(s,1H),7.72-7.67(m,3H),7.42-7.40(m,2H),
7.30-7.26(m,2H),7.18-7.16(m,10H),7.08-7.07(m,7H),4.80(s,1H),4.65(s,1H),4.06-
3.98(m,3H),3.84(m,1H),3.65-3.62(m,2H),3.55-3.51(m,2H),3.03-3.00(m,2H),1.30(s,
9H)。
乙酸乙酯＝2:1)纯化，以给出白色固体的中间体81(5.52g,产率78.83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ8.20(d,J＝4.8Hz,2H),8.02(s,1H),7.72-7.67(m,3H),7.42-7.40(m,2H),
7.30-7.26(m,2H),7.18-7.16(m,10H),7.08-7.07(m,7H),4.80(s,1H),4.65(s,1H),4.06-
3.98(m,3H),3.84(m,1H),3.65-3.62(m,2H),3.55-3.51(m,2H),3.03-3.00(m,2H),1.30(s,
9H)。
[0428] 中间体82：N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-1-[2-(羟基甲基)-烯丙基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基苯磺酰胺
[0429] 将K2CO3(3.97g,28.75mmol,5eq)加入中间体81(5.00g,5.75mmol,1eq)在MeOH(50mL)中的溶液中，将反应混合物在80℃搅拌3小时。LCMS显示反应完全，以H2O(100mL)淬灭反应，并用DCM(300mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体82(2.50g,
3.25mmol,产率56.56％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.82-7.78(m,2H),7.71-7.69(m,1H),
7.18-7.13(m,18H),5.10(s,1H),5.01-4.97(m,2H),4.12-4.07(m,2H),3.70-3.58(m,3H),
3.34-3.23(m,1H),3.07-3.06(m,1H),2.93-2.89(m,2H)。
3.25mmol,产率56.56％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.82-7.78(m,2H),7.71-7.69(m,1H),
7.18-7.13(m,18H),5.10(s,1H),5.01-4.97(m,2H),4.12-4.07(m,2H),3.70-3.58(m,3H),
3.34-3.23(m,1H),3.07-3.06(m,1H),2.93-2.89(m,2H)。
[0430] 中间体83：N-烯丙基-N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-1-[2-(羟基甲基)-烯丙基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基苯磺酰胺
[0431] 在25℃将3-溴丙-1-烯(590.18mg,4.88mmol,1.5eq)和K2CO3(1.35g,9.76mmol,3eq)加入中间体82(2.50g,3.25mmol,1eq)在DMF(1.00mL)中的溶液中，将反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，以H2O(100mL)淬灭反应，并用DCM(500mL)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体83(2.62g,产率99.68％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ8.02(s,1H),7.66-7.53(m,1H),7.37-7.35(m,3H),7.15-7.11(m,19H),5.43-5.36(m,1H),
5.00-4.98(m,1H),4.88(s,1H),4.80-4.76(m,2H),4.04-(s,2H),3.82-3.79(m,2H),3.52-
3.32(m,3H),3.16(m,1H),3.06-3.02(m,2H),2.96-2.88(m,2H)。
5.00-4.98(m,1H),4.88(s,1H),4.80-4.76(m,2H),4.04-(s,2H),3.82-3.79(m,2H),3.52-
3.32(m,3H),3.16(m,1H),3.06-3.02(m,2H),2.96-2.88(m,2H)。
[0432] 中间体84：[(3E,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-3-基]甲醇
[0433] 将[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-亚基]-二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌(第二代Hoyveda-Grubbs催化剂)(426.12mg,680.04μmol,0.25eq)加入中间体83(2.20g,2.72mmol,1eq)在DCM(20mL)中的溶液中，将反应混合物在40℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体84(2.12g,产率100.00％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.89-7.87(m,1H),7.70-7.61(m,3H),7.26-7.22(m,17H),7.11-7.08(m,2H),5.68-5.64(m,
1H),4.15-4.05(m,1H),3.99-3.64(m,2H),3.53-3.52(m,1H),3.31-3.22(m,2H),3.12-3.09(m,2H),2.85-2.84(m,1H),2.17(s,1H)。
1H),4.15-4.05(m,1H),3.99-3.64(m,2H),3.53-3.52(m,1H),3.31-3.22(m,2H),3.12-3.09(m,2H),2.85-2.84(m,1H),2.17(s,1H)。
[0434] 中间体85：[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲醇
[0435] 将2-硝基苯磺酰肼(2.09g,9.61mmol,10eq)加入中间体84(750.00mg,960.65μmol,1eq)和Et3N(1.94g,19.21mmol,2.66mL,20eq)在THF(15mL)中的溶液中，将反应混合物在40℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，以H2O(3mL)淬灭反应，并用DCM(10mL*2)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出黄色固体的中间体85(1.50g,产率100.00％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.76-7.74(d,J＝5.6Hz,2H),7.65-7.55(m,4H),7.26-7.22(m,19H),7.10-7.08(d,J＝8.4Hz,2H),3.75-3.61(m,6H),3.26-3.22(m,1H),3.16-3.12(m,1H),3.00-2.99(m,2H),2.89-2.87(m,2H),2.72-2.69(m,1H),2.17(s,1H),1.97-1.90(m,3H),1.40-1.26(m,
2H)。
2H)。
[0436] 中间体86：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0437] 在0℃将醋酸酐(387.94mg,3.80mmol,355.91μL,2eq)加入中间体85(1.49g,1.90mmol,1eq)、Et3N(576.78mg,5.70mmol,3eq)和DMAP(23.21mg,190.00μmol,0.1eq)在DCM(15mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌3小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(10mL)淬灭反应混合物，并用DCM(30mL*2)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体86(1.51g,产率96.32％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.80-7.76(m,1H),7.61-7.56(m,
3H),7.27-7.22(m,15H),7.13-7.11(d,J＝8.4Hz,2H),4.01-3.99(m,2H),3.69-3.63(m,
4H),3.22-3.12(m,3H),2.94-2.88(m,2H),2.62-2.61(m,1H),2.20-2.05(m,1H),1.92(s,
1H),1.82(s,3H),1.32-1.27(m,1H)。
3H),7.27-7.22(m,15H),7.13-7.11(d,J＝8.4Hz,2H),4.01-3.99(m,2H),3.69-3.63(m,
4H),3.22-3.12(m,3H),2.94-2.88(m,2H),2.62-2.61(m,1H),2.20-2.05(m,1H),1.92(s,
1H),1.82(s,3H),1.32-1.27(m,1H)。
[0438] 中间体87：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0439] 在25℃将Cs2CO3(1.19g,3.66mmol,2eq)滴加至中间体86(1.51g,1.83mmol,1eq)和苯硫酚(302.57mg,2.75mmol,280.16μL,1.5eq)在乙腈(15mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(10mL)淬灭反应混合物，并用DCM(20mL*3)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，以给出白色固体的中间体87(1.09g,粗产物)。HRMS(ESI)：
C37H39BrN2O3[M+H]+计算值为639.21，实测值为639.1。
C37H39BrN2O3[M+H]+计算值为639.21，实测值为639.1。
[0440] 中间体88：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0441] 在0℃将1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(278.91mg,1.87mmol,1.1eq)加入中间体87和Et3N(344.05mg,3.40mmol,2eq)在DCM(10mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌3小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用DCM(50mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体87(1.10g,产率81.76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.30-7.23(m,20H),6.84-6.82(m,2H),6.09(s,1H),4.07-4.03(m,1H),3.79-3.78(m,3H),3.72(m,1H),3.62-3.55(m,3H),3.19-3.17(m,1H),3.00-2.94(m,2H),2.55-2.54(m,1H),
2.52-2.50(m,1H),2.00(s,1H),1.87(s,3H),1.86-1.77(m,1H)。
2.52-2.50(m,1H),2.00(s,1H),1.87(s,3H),1.86-1.77(m,1H)。
[0442] 中间体89：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0443] 将K2CO3(394.25mg,2.85mmol,3eq)加入中间体88(750.00mg,950.85μmol,1eq)在MeOH(7mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，过滤反应混合物以给出滤液，并浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体88(757.00mg,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.29-7.23(m,24H),7.09-7.07(m,1H),6.84-6.81(m,2H),3.77(s,3H),3.66-3.63(m,2H),3.62(m,4H),3.15-3.07(m,1H),2.82-2.79(m,1H),2.66-2.64(m,1H),1.77(s,1H),1.28-1.25(s,
2H)。
2H)。
[0444] 中间体90：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0445] 在25℃，在N2气氛下将DIAD(307.49mg,1.52mmol,1.5eq)滴加至中间体89(757.00mg,1.01mmol,1eq)、异吲哚啉-1,3-二酮(164.07mg,1.12mmol,1.1eq)和
(398.85mg,1.52mmol,1.5eq)在THF(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出黄色固体的中间体90(1.13g,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ
7.70-7.68(m,3H),7.68-7.65(m,8H),7.49-7.47(m,3H),7.22-7.17(m,3H),6.74-6.72(m,
2H),5.99(s,1H),3.84-3.77(m,2H),3.75(s,3H),3.64-3.60(m,4H),3.54-3.50(m,3H),
3.16(s,1H),3.05(s,1H),2.94(s,1H),2.64-2.62(m,1H),1.88(s,1H)。
(398.85mg,1.52mmol,1.5eq)在THF(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出黄色固体的中间体90(1.13g,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ
7.70-7.68(m,3H),7.68-7.65(m,8H),7.49-7.47(m,3H),7.22-7.17(m,3H),6.74-6.72(m,
2H),5.99(s,1H),3.84-3.77(m,2H),3.75(s,3H),3.64-3.60(m,4H),3.54-3.50(m,3H),
3.16(s,1H),3.05(s,1H),2.94(s,1H),2.64-2.62(m,1H),1.88(s,1H)。
[0446] 中间体91：(8R,9R,10S)-3-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0447] 将NH2NH2.H2O(98.86mg,1.94mmol,98％纯度,1.5eq)滴加至中间体90(1.13g,1.29mmol,1eq)在EtOH(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(2mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化，以给出白色固体的中间体91(586.00mg,产率60.91％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.21-7.14(m,
20H),7.12-7.09(m,3H),6.81-6.78(m,2H),3.76-3.70(m,5H),3.59-3.51(m,5H),3.17-
3.14(m,1H),3.00-2.99(m,1H),2.77-2.72(m,1H),2.68-2.46(m,3H),1.91(m,2H),1.69(s,
1H),1.63(s,1H)。
20H),7.12-7.09(m,3H),6.81-6.78(m,2H),3.76-3.70(m,5H),3.59-3.51(m,5H),3.17-
3.14(m,1H),3.00-2.99(m,1H),2.77-2.72(m,1H),2.68-2.46(m,3H),1.91(m,2H),1.69(s,
1H),1.63(s,1H)。
[0448] 中间体92：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0449] 在搅拌下将HCHO(637.77mg,7.86mmol,585.11μL,10eq)和MgSO4(945.86mg,7.86mmol,10eq)加入中间体91(586.00mg,785.80μmol,1eq)在DCM(6mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌0.5小时。将CH3COOH(47.19mg,785.80μmol,1eq)和NaBH(OAc)3(832.71mg,3.93mmol,5eq)加入混合物中。将所得反应混合物在25℃搅拌1.5小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(20mL*3)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化，
1
以给出浅褐色固体的中间体92(370.00mg,产率60.85％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.34-
7.29(m,2H),7.76-7.22(m,10H),7.14-7.12(m,2H),6.83(s,1H),6.83-6.79(m,2H),3.76-
3.67(m,4H),3.63-3.60(m,4H),3.15-3.14(m,1H),2.97-2.96(m,1H),2.73-2.64(m,3H),
2.73-2.65(m,1H),2.02-1.88(m,3H)。
1
以给出浅褐色固体的中间体92(370.00mg,产率60.85％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.34-
7.29(m,2H),7.76-7.22(m,10H),7.14-7.12(m,2H),6.83(s,1H),6.83-6.79(m,2H),3.76-
3.67(m,4H),3.63-3.60(m,4H),3.15-3.14(m,1H),2.97-2.96(m,1H),2.73-2.64(m,3H),
2.73-2.65(m,1H),2.02-1.88(m,3H)。
[0450] 中间体93：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3-[(二甲基胺基)甲基]-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0451] 在搅拌下将TFA(545.20mg,4.78mmol,10eq)加入中间体92(370.00mg,478.16μmol,1eq)在DCM(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，通过NaHCO3(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝8:1)纯化，以给出浅1
褐色固体(172.00mg,产率67.68％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.44(d,J＝8.0Hz,2H),
7.35(d,J＝8.0Hz,2H),7.28-7.25(m,3H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),3.78-3.73(m,4H),3.70-
3.61(m,1H),3.60-3.56(m,4H),3.51-3.39(m,1H),3.23-3.14(m,1H),2.89-2.63(m,1H),
2.29(m,6H),2.17-2.12(m,1H),1.89(s,2H),1.64-1.61(m,1H)。
褐色固体(172.00mg,产率67.68％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.44(d,J＝8.0Hz,2H),
7.35(d,J＝8.0Hz,2H),7.28-7.25(m,3H),6.84(d,J＝8.8Hz,2H),3.78-3.73(m,4H),3.70-
3.61(m,1H),3.60-3.56(m,4H),3.51-3.39(m,1H),3.23-3.14(m,1H),2.89-2.63(m,1H),
2.29(m,6H),2.17-2.12(m,1H),1.89(s,2H),1.64-1.61(m,1H)。
[0452] 中间体94：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3-[(二甲基胺基)甲基]-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺[0453] 在25℃，在N2气氛下将DIAD(98.16mg,485.43μmol,1.5eq)滴加至中间体93(172.00mg,323.62μmol,1eq)、异吲哚啉-1,3-二酮(52.38mg,355.98μmol,1.1eq)和PPh3(127.32mg,485.43μmol,1.5eq)在THF(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，以给出黄色固体的中间体94(152.00mg,产率71.10％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.81(d,J＝4.8Hz,2H),7.70(d,J＝4.8Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.26-7.23(m,3H),6.82(d,J＝8.8Hz,2H),3.92-3.89(m,1H),3.76(s,3H),
3.70-3.68(m,2H),3.66-3.64(m,2H),3.57-3.53(m,4H),2.79(m,1H),2.67-2.61(m,1H),
2.39-2.38(m,1H),2.36(m,3H),2.16-1.99(m,1H),1.26(s,1H)。
3.70-3.68(m,2H),3.66-3.64(m,2H),3.57-3.53(m,4H),2.79(m,1H),2.67-2.61(m,1H),
2.39-2.38(m,1H),2.36(m,3H),2.16-1.99(m,1H),1.26(s,1H)。
[0454] 中间体95：(8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-3-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0455] 将NH2NH2.H2O(17.63mg,345.14μmol,17.12μL,98％纯度,1.5eq)滴加至中间体94(152.00mg,230.09μmol,1eq)在EtOH(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(2mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝5:1)纯化，以给出白色固体的中间体95(80.00mg,产率65.54％)。HRMS(ESI)：C26H36BrN5O2[M+H]+计算值为530.21，实测值为530.1。
[0456] 中间体96：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-3,10-双[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0457] 在搅拌下将HCHO(183.43mg,2.26mmol,168.28μL,10eq)和MgSO4(272.28mg,2.26mmol,10eq)加入中间体95(120.00mg,226.20μmol,1eq)在DCM(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌0.5小时。将CH3COOH(13.58mg,226.20μmol,1eq)和NaBH(OAc)3(239.71mg,1.13mmol,5eq)加入混合物中。将所得反应混合物在25℃搅拌1.5小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(20mL*3)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝2:1)纯化，以给出白色固体(100.00mg,产率79.15％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.46(d,J＝8.4Hz,
2H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(d,J＝12.8Hz,2H),6.83(d,J＝8.4Hz,2H),6.12(s,1H),
3.77(s,3H),3.61-3.59(m,2H),3.57-3.55(m,2H),3.41-3.39(m,2H),2.78-2.75(m,1H),
2.42-2.38(m,1H),2.28-2.26(m,2H),2.16(s,6H),2.00(m,1H),1.76(m,1H)。
2H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(d,J＝12.8Hz,2H),6.83(d,J＝8.4Hz,2H),6.12(s,1H),
3.77(s,3H),3.61-3.59(m,2H),3.57-3.55(m,2H),3.41-3.39(m,2H),2.78-2.75(m,1H),
2.42-2.38(m,1H),2.28-2.26(m,2H),2.16(s,6H),2.00(m,1H),1.76(m,1H)。
[0458] E25的合成：(8R,9S,10S)-3,10-双[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E25)
[0459] 将XPhos Pd G3(7.58mg,8.95μmol,0.1eq)和Cs2CO3(58.33mg,179.04μmol,2eq)加入中间体96(50.00mg,89.52μmol,1eq)和乙炔基苯(27.43mg,268.55μmol,29.49μL,3eq)在乙腈(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌2小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的实施例25(10.00mg,17.25μ+ 1mol,产率19.27％)。HRMS(ESI)：C36H45N5O2[M+H] 计算值为580.36，实测值为580.5。H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.56-7.51(m,6H),7.38-7.37(m,2H),7.37(d,J＝13.2Hz,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),4.02-3.98(m,2H),3.853-3.82(m,2H),3.75(s,3H),3.54-3.51(m,1H),
2.99-2.91(m,3H),2.87(m,1H),2.71(s,6H),2.44(s,6H),2.02(m,2H),1.84-1.81(m,1H)。
2.99-2.91(m,3H),2.87(m,1H),2.71(s,6H),2.44(s,6H),2.02(m,2H),1.84-1.81(m,1H)。
[0460] 实施例26：(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E26”)
[0461]
[0462] 中间体97：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0463] 在搅拌下将TFA(2.28mmol,168.96μL,10eq)加入中间体88(180.00mg,228.20μmol,1eq)在DCM(3.6mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，通过饱和NaHCO3(10mL)淬灭反应混合物，并用DCM(50mL*3)萃取以给出有机层，并浓缩该层以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化，以给出白色固体的中间体97(300.00mg,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.47-7.45(m,1H),7.38-7.32(m,2H),7.26-7.22(m,3H),6.84-6.82(d,J＝8.8Hz,2H),6.08(s,1H),4.24-4.20(m,1H),4.11-
4.07(m,1H),3.80-3.77(m,4H),3.65(s,4H),3.55-3.54(m,2H),3.48-3.43(m,1H),2.97(s,
1H),2.83(s,1H),2.08-2.03(m,4H),1.96-1.94(m,1H),1.86-1.84(m,1H)。
4.07(m,1H),3.80-3.77(m,4H),3.65(s,4H),3.55-3.54(m,2H),3.48-3.43(m,1H),2.97(s,
1H),2.83(s,1H),2.08-2.03(m,4H),1.96-1.94(m,1H),1.86-1.84(m,1H)。
[0464] 中间体98：醋酸[(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0465] 在25℃将DIAD(166.52mg,823.50μmol,1.5eq)滴加至中间体97(300.00mg,549.00μmol,1eq)、异吲哚啉-1,3-二酮(88.85mg,603.90μmol,1.1eq)和PPh3(216.00mg,823.50μmol,1.5eq)在THF(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出黄色固体的中间体98(458.00mg,粗产物)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.80-7.70(m,2H),7.68-7.65(m,12H),7.49-7.46((m,19H),7.46-7.44(m,3H),6.85-6.80(m,3H),6.06(s,1H),4.12-4.06(m,2H),3.84-3.77(m,1H),3.67-3.65(m,4H),3.59-3.55(m,5H),2.87-
2.83(m,2H),2.46-2.42(m,1H),1.98(s,3H),1.30-1.26(m,3H)。
2.83(m,2H),2.46-2.42(m,1H),1.98(s,3H),1.30-1.26(m,3H)。
[0466] 中间体99：醋酸[(8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)氨基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0467] 将NH2NH2.H2O(51.95mg,1.02mmol,98％纯度,1.5eq)滴加至中间体98(458.00mg,677.95μmol,1eq)在EtOH(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(2mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化，以给出白色固体的中间体99(180.00mg,产率48.67％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.47-7.45(m,3H),7.38-7.34(m,2H),7.24-7.22(m,2H),6.84-6.81(m,2H),6.07(s,1H),4.20-4.18(m,1H),4.10-4.09(m,1H),3.77-3.62(m,5H),3.60-3.57(m,3H),3.45-3.33(m,2H),3.35-
3.32(m,2H),2.95-2.92(m,1H),2.77-2.76(m,2H),2.55-2.54(m,1H),2.03(s,3H),1.94-
1.74(m,2H),1.27-1.24(m,2H)。
3.32(m,2H),2.95-2.92(m,1H),2.77-2.76(m,2H),2.55-2.54(m,1H),2.03(s,3H),1.94-
1.74(m,2H),1.27-1.24(m,2H)。
[0468] 中间体100：醋酸[(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0469] 在搅拌下将HCHO(267.83mg,3.30mmol,245.71μL,10eq)和MgSO4(397.21mg,3.30mmol,10eq)加入中间体99(180.00mg,329.99μmol,1eq)在DCM(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌0.5小时。将CH3COOH(19.82mg,329.99μmol,1eq)和NaBH(OAc)3(349.69mg,1.65mmol,5eq)加入混合物中。将所得反应混合物在25℃搅拌1.5小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(20mL*3)萃取以给出有机层。有机层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝12:1)纯化，
1
以给出白色固体的中间体100(134.00mg,产率70.80％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.49-
7.47(m,2H),7.35-7.26(m,2H),7.24-7.22(m,2H),6.84-6.81(m,2H),6.08(s,1H),4.23-
4.19(m,1H),3.77(s,4H),3.73-3.58(m,4H),3.60-3.58(m,1H),2.98-2.93(m,1H),2.95-
2.93(m,1H),2.76(m,2H),2.56-2.51(m,2H),2.05(s,6H),1.92-1.88(m,2H)。
1
以给出白色固体的中间体100(134.00mg,产率70.80％)。H NMR(400MHz,CDCl3-d1)δ7.49-
7.47(m,2H),7.35-7.26(m,2H),7.24-7.22(m,2H),6.84-6.81(m,2H),6.08(s,1H),4.23-
4.19(m,1H),3.77(s,4H),3.73-3.58(m,4H),3.60-3.58(m,1H),2.98-2.93(m,1H),2.95-
2.93(m,1H),2.76(m,2H),2.56-2.51(m,2H),2.05(s,6H),1.92-1.88(m,2H)。
[0470] 中间体101：醋酸[(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]甲酯
[0471] 将XPhos Pd G3(8.86mg,10.46μmol,0.1eq)和Cs2CO3(68.17mg,209.23μmol,2eq)加入中间体100(60.00mg,104.62μmol,1eq)和乙炔基苯(32.05mg,313.85μmol,34.47μL,3eq)在乙腈(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌2小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝7:1)纯化，以给出褐色固+
体的中间体101(42.00mg,产率67.50％)。HRMS(ESI)：C36H42N4O4[M+H] 计算值为595.32，实测值为565.2。
体的中间体101(42.00mg,产率67.50％)。HRMS(ESI)：C36H42N4O4[M+H] 计算值为595.32，实测值为565.2。
[0472] E26的合成：(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-3-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E26)
[0473] 将K2CO3(29.28mg,211.86μmol,3eq)加入中间体101(42.00mg,70.62μmol,1eq)在MeOH(2mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，通过H2O(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的化合物E26(10.80mg,40.28μmol,产率27.67％)。HRMS(ESI)：C34H40N4O3[M+H]+计算值为553.31，实测值为553.4。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.57-7.51(m,6H),7.39-7.38(m,3H),6.85-6.83(m,2H),3.91-3.82(m,1H),3.76-3.71(m,1H),3.71-3.69(m,4H),3.76(m,2H),3.03-2.94(m,3H),2.59-2.47(m,
4H),1.95-1.92(m,1H),1.91-1.82(m,2H)。
4H),1.95-1.92(m,1H),1.91-1.82(m,2H)。
[0474] 实施例27：(8R,9R,10S)-3-[(二甲基胺基)甲基]-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E27”)
[0475]
[0476] 中间体102：(8R,9R,10S)-3-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0477] 将XPhos Pd G3(3.28mg,3.88μmol,0.1eq)和Cs2CO3(25.26mg,77.54μmol,2eq)加入中间体92(30.00mg,38.77μmol,1eq)和乙炔基苯(11.88mg,116.31μmol,12.77μL,3eq)在乙腈(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在70℃搅拌2小时。LCMS显示反应完全，浓缩反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝7:1)纯化，以给出褐色固体的中间体102(50.00mg,粗产物)。HRMS(ESI)：C53H54N4O3[M+H]+计算值为795.42，实测值为795.4。
[0478] E27的合成：(8R,9R,10S)-3-[(二甲基胺基)甲基]-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E27)
[0479] 在搅拌下将TFA(71.71mg,628.91μmol,46.56μL,10.00eq)加入中间体102(50.00mg,62.89μmol,1eq)在DCM(1mL)中的溶液中。将所得反应混合物在25℃搅拌12小时。
LCMS显示反应完全，通过NaHCO3(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的化合物E27(4.70mg,40.28μmol,产率13.52％)。HRMS(ESI)：C33H37N4O2[M+H]+计算值为
1
553.29，实测值为553.4。H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.544-7.51(m,6H),7.39-7.37(m,3H),
7.34-7.22(m,2H),6.86-6.81(m,2H),4.02-3.99(m,1H),3.76-3.72(m,4H),3.70-3.66(m,
1H),3.41-3.40(m,1H),3.38-3.35(m,1H),3.12(m,1H),2.85-2.75(m,1H),2.16-2.09(m,
2H),1.81-1.77(m,1H)。
LCMS显示反应完全，通过NaHCO3(5mL)淬灭反应混合物，并用DCM(10mL*3)萃取以给出有机层。该层在无水Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的化合物E27(4.70mg,40.28μmol,产率13.52％)。HRMS(ESI)：C33H37N4O2[M+H]+计算值为
1
553.29，实测值为553.4。H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.544-7.51(m,6H),7.39-7.37(m,3H),
7.34-7.22(m,2H),6.86-6.81(m,2H),4.02-3.99(m,1H),3.76-3.72(m,4H),3.70-3.66(m,
1H),3.41-3.40(m,1H),3.38-3.35(m,1H),3.12(m,1H),2.85-2.75(m,1H),2.16-2.09(m,
2H),1.81-1.77(m,1H)。
[0480] 实施例28：(3R,8R,9R,10S)-3-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E28”)
[0481]
[0482] 中间体103：N-[[(2R,3R,4S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2,2,2-三氟-乙酰胺
[0483] 将TEA(25.59g,252.92mmol,35.06mL,8.00eq)加入[(2R,3R,4S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲胺(J.O.C.(2012),77(17),7187-7211)(25.00g,31.62mmol,1.00eq)在DCM(250.00mL)中的溶液中，随后冷却至0℃。将TFAA(26.56g,126.46mmol,17.59mL,4.00eq)滴加至反应混合物中。在20℃搅拌16小时后，通过NaHCO3溶液(100mL)淬灭反应混合物，用DCM(50mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至1:1)纯化，获得黄色固体的中间体103(11.00g,16.94mmol，产率53.56％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.87-3.08(m,2H)3.09-3.24(m,2H)3.30-3.51(m,3H)3.57-3.69(m,2H)5.10(br d,J＝10.14Hz,1H)
5.18-5.33(m,1H)5.80(dddd,J＝17.28,10.01,7.44,5.40Hz,1H)6.11(br s,1H)7.17-7.23(m,16H)7.33(d,J＝8.38Hz,2H)。
5.18-5.33(m,1H)5.80(dddd,J＝17.28,10.01,7.44,5.40Hz,1H)6.11(br s,1H)7.17-7.23(m,16H)7.33(d,J＝8.38Hz,2H)。
[0484] 中间体104：N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2,2,2-三氟-乙酰胺
[0485] 在N2气氛下，将1,3-二甲基巴比妥酸(3.97g,25.41mmol,1.50eq)和Pd(PPh3)4(1.96g,1.69mmol,0.10eq)加入中间体103(11.00g,16.94mmol,1.00eq)在EtOH(169.00mL)中的溶液中。将混合物在40℃搅拌16小时。通过NaHCO3溶液(200mL)淬灭反应混合物，用DCM(50mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5:1)纯化，获得黄色固体的中间体104(7.80g,12.80mmol，产率75.55％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.26(br s,1H)2.20-2.31(m,1H)2.99-3.07(m,1H)3.10-3.23(m,2H)3.30-3.39(m,1H)3.76(br t,J＝7.28Hz,1H)4.27-4.49(m,2H)6.10(br s,1H)
7.17-7.24(m,16H)7.32-7.38(m,2H)。
7.17-7.24(m,16H)7.32-7.38(m,2H)。
[0486] 中间体105：N-[(1R)-1-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2,2,2-三氟乙酰基)胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-[[叔丁基(二苯基)硅基]氧-丙基]胺基甲酸叔丁酯
[0487] 将MgSO4(158.00mg,1.31mmol,20.00eq)和NaBH(OAc)3(139.10mg,656.30μmol,10.00eq)加入中间体104(4.00g,6.56mmol,1.00eq)、N-[(1R)-3-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-1-甲酰基-丙基]胺基甲酸叔丁酯(如Bioorganic&Medicinal Chemistry(2006),14(1),
214-236中所述合成，该文献通过引用而以其整体并入本文)(2.90g,6.56mmol,1.00eq)在DCM(50.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌16小时后，加入N-[(1R)-3-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-1-甲酰基-丙基]胺基甲酸叔丁酯(1g)。又0.5小时后，通过NaHCO3溶液(200mL)淬灭反应混合物，用DCM(50mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10:1)纯化，获得黄色胶状的中间体105(4.20g,4.06mmol，产率
61.85％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.01-1.05(m,9H)1.41-1.47(m,10H)1.63-
1.78(m,1H)1.82-1.92(m,1H)2.65-2.76(m,1H)2.82-3.01(m,2H)3.13(br dd,J＝9.60,
6.09Hz,1H)3.29-3.79(m,7H)4.67(br d,J＝9.29Hz,1H)7.11-7.25(m,17H)7.31-7.50(m,
8H)7.63(td,J＝7.37,1.44Hz,4H)8.40-8.73(m,1H)。
214-236中所述合成，该文献通过引用而以其整体并入本文)(2.90g,6.56mmol,1.00eq)在DCM(50.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌16小时后，加入N-[(1R)-3-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-1-甲酰基-丙基]胺基甲酸叔丁酯(1g)。又0.5小时后，通过NaHCO3溶液(200mL)淬灭反应混合物，用DCM(50mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10:1)纯化，获得黄色胶状的中间体105(4.20g,4.06mmol，产率
61.85％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.01-1.05(m,9H)1.41-1.47(m,10H)1.63-
1.78(m,1H)1.82-1.92(m,1H)2.65-2.76(m,1H)2.82-3.01(m,2H)3.13(br dd,J＝9.60,
6.09Hz,1H)3.29-3.79(m,7H)4.67(br d,J＝9.29Hz,1H)7.11-7.25(m,17H)7.31-7.50(m,
8H)7.63(td,J＝7.37,1.44Hz,4H)8.40-8.73(m,1H)。
[0488] 中间体106：N-[(1R)-1-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2,2,2-三氟乙酰基)胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-羟基-丙基]胺基甲酸叔丁酯[0489] 将TBAF(1.59g,6.09mmol,1.50eq)加入中间体105(4.20g,4.06mmol,1.00eq)在DCM(50.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌16小时后，将该反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至2:1)纯化，获得黄色固体的中间体106(2.30g,2.89mmol，产率71.23％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.41(s,3H)1.45-1.53(m,
9H)1.58-1.77(m,2H)2.49(br dd,J＝12.74,4.33Hz,2H)2.82(t,J＝12.17Hz,1H)2.88-
2.98(m,2H)3.08-3.29(m,3H)3.47(td,J＝7.87,3.20Hz,1H)3.60-3.72(m,1H)4.51(br d,J＝9.41Hz,1H)7.12(d,J＝8.41Hz,1H)7.09-7.14(m,1H)7.16-7.26(m,17H)7.34(d,J＝
8.41Hz,1H)8.13(br s,1H)。
9H)1.58-1.77(m,2H)2.49(br dd,J＝12.74,4.33Hz,2H)2.82(t,J＝12.17Hz,1H)2.88-
2.98(m,2H)3.08-3.29(m,3H)3.47(td,J＝7.87,3.20Hz,1H)3.60-3.72(m,1H)4.51(br d,J＝9.41Hz,1H)7.12(d,J＝8.41Hz,1H)7.09-7.14(m,1H)7.16-7.26(m,17H)7.34(d,J＝
8.41Hz,1H)8.13(br s,1H)。
[0490] 中间体107：N-[(1R)-1-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-2-[[(2,2,2-三氟乙酰基)胺基]甲基]-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-1-基]甲基]-3-氧代-丙基]胺基甲酸叔丁酯[0491] 在0℃，在N2气氛下将DMP(2.45g,5.78mmol,1.79mL,2.00eq)加入中间体106(2.30g,2.89mmol,1.00eq)在DCM(30.00mL)中的溶液中。将混合物在0℃搅拌1小时。LCMS显示反应物106完全耗尽且大部分为所希望的产物，通过NaHCO3(2.5g)和Na2SO3(2.5g)在H2O(20mL)中的溶液淬灭反应混合物，用DCM(20mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝2/1至0:1)纯化，获得黄色固体的中间体107(1.80g,2.27mmol，
1
产率78.37％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.47(s,9H)1.51-1.69(m,3H)2.46-2.54(m,2H)2.78-2.88(m,1H)2.89-3.00(m,2H)3.08-3.20(m,2H)3.49-3.69(m,4H)3.91-4.07(m,
1H)4.50-4.76(m,1H)7.08-7.13(m,3H)7.17-7.26(m,22H)8.25(br s,1H)9.63(s,1H)。
1
产率78.37％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.47(s,9H)1.51-1.69(m,3H)2.46-2.54(m,2H)2.78-2.88(m,1H)2.89-3.00(m,2H)3.08-3.20(m,2H)3.49-3.69(m,4H)3.91-4.07(m,
1H)4.50-4.76(m,1H)7.08-7.13(m,3H)7.17-7.26(m,22H)8.25(br s,1H)9.63(s,1H)。
[0492] 中间体108：N-[(3R,5Z,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-5-烯-3-基]胺基甲酸叔丁酯
[0493] 将K2CO3(591.32mg,4.28mmol,2.00eq)加入中间体107(1.70g,2.14mmol,1.00eq)在MeOH(20.00mL)和H2O(77.13mg,4.28mmol,77.13μL,2.00eq)中的溶液中。在20℃搅拌16小时后，再加入K2CO3(200mg)。又2小时后，将反应混合物溶解在水(30mL)中，用DCM(20mL x 3)萃取，有机层在Na2SO4上干燥，随后浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至0:1)纯化，获得黄色固体的中间体108(750.00mg,771.30μmol,产率45.05％,70％纯度)。
[0494] 中间体109：N-[(3R,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]胺基甲酸叔丁酯
[0495] 将AcOH(66.17mg,1.10mmol,63.02μL,1.00eq)和NaBH(OAc)3(2.34g,11.02mmol,10.00eq)加入中间体108(750.00mg,1.10mmol,1.00eq)在DCM(18.00mL)中的溶液中。将混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示反应物108完全耗尽且大部分为所希望的产物，通过NaHCO3溶液(20mL)淬灭反应混合物，以DCM(10mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出黄色固体的中间体109(750mg,粗产物)，其直接用于下一步。
[0496] 中间体110：N-[(3R,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-3-基]胺基甲酸叔丁酯
[0497] 将TEA(38.91mg,384.51μmol,53.30μL,0.50eq)和1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(137.64mg,922.82μmol,118.66μL,1.20eq)加入中间体109(750.00mg,769.02μmol,1.00eq)在DCM(10.00mL)中的溶液中。将混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示反应物109完全耗尽，且大部分为所希望的产物。反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯)纯化，通过制备型HPLC(柱：Waters XbridgePrep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)进一步纯化。获得白色固体的中间体110
1
(150.00mg,180.33μmol,产率23.45％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.45(br d,J＝6.15Hz,9H)2.18(br s,2H)3.20-3.68(m,3H)3.72-4.51(m,11H)5.14-5.42(m,1H)6.78(br s,1H)6.88(br t,J＝7.97Hz,2H)7.22-7.38(m,20H)7.47-7.53(m,1H)。
1
(150.00mg,180.33μmol,产率23.45％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.45(br d,J＝6.15Hz,9H)2.18(br s,2H)3.20-3.68(m,3H)3.72-4.51(m,11H)5.14-5.42(m,1H)6.78(br s,1H)6.88(br t,J＝7.97Hz,2H)7.22-7.38(m,20H)7.47-7.53(m,1H)。
[0498] 中间体111：(3R,8R,9R,10S)-3-氨基-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0499] 在0℃将TFA(1.54g,13.51mmol,1.00mL,93.63eq)加入中间体110(120.00mg,144.26μmol,1.00eq)在DCM(3.00mL)中的溶液中。将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应物
110完全耗尽，大部分为所希望的产物，通过NaHCO3溶液(20mL)淬灭反应混合物，随后用NH3.H2O(1mL)洗涤，用DCM(10mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，以给出白色固体的中间体111(60.00mg,122.60μmol,产率84.98％)。
110完全耗尽，大部分为所希望的产物，通过NaHCO3溶液(20mL)淬灭反应混合物，随后用NH3.H2O(1mL)洗涤，用DCM(10mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，以给出白色固体的中间体111(60.00mg,122.60μmol,产率84.98％)。
[0500] 中间体112：(3R,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-3-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0501] 在20℃将MgSO4(147.57mg,1.23mmol,10.00eq)和NaBH(OAc)3(259.84mg,1.23mmol,10.00eq)加入中间体111(60.00mg,122.60μmol,10.00eq)和HCHO(99.50mg,
1.23mmol,91.28μL,10.00eq)在DCM(3.00mL)中的溶液中。将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应物111完全耗尽，大部分为所希望的产物，通过NaHCO3溶液(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，以给出黄色固体的中间体112(38.00mg,73.44μmol,产率59.90％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.84-1.99(m,1H)2.49(br s,6H)2.55(br d,J＝9.26Hz,
2H)2.88(br d,J＝11.69Hz,1H)3.02-3.16(m,3H)3.41(br dd,J＝11.58,4.52Hz,1H)3.51-
3.61(m,3H)3.62-3.86(m,6H)3.98-4.17(m,1H)4.73(s,1H)6.78-6.91(m,2H)7.23(d,J＝
8.82Hz,2H)7.34-7.53(m,4H)。
1.23mmol,91.28μL,10.00eq)在DCM(3.00mL)中的溶液中。将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应物111完全耗尽，大部分为所希望的产物，通过NaHCO3溶液(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL x 3)萃取，将合并的有机层浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，以给出黄色固体的中间体112(38.00mg,73.44μmol,产率59.90％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.84-1.99(m,1H)2.49(br s,6H)2.55(br d,J＝9.26Hz,
2H)2.88(br d,J＝11.69Hz,1H)3.02-3.16(m,3H)3.41(br dd,J＝11.58,4.52Hz,1H)3.51-
3.61(m,3H)3.62-3.86(m,6H)3.98-4.17(m,1H)4.73(s,1H)6.78-6.91(m,2H)7.23(d,J＝
8.82Hz,2H)7.34-7.53(m,4H)。
[0502] E28的合成：(3R,8R,9R,10S)-3-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E28)
[0503] 在N2气氛下将Cs2CO3(47.22mg,144.93μmol,3.00eq)和XPhos Pd G3(4.09mg,4.83μmol,0.10eq)加入中间体112(25.00mg,48.31μmol,1.00eq)和乙炔基苯(14.80mg,144.93μmol,15.91μL,3.00eq)在CH3CN(350.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌3小时。LCMS显示反应物1完全耗尽，大部分为所希望的产物，将反应混合物溶解在水(2mL)中，用DCM(2mL x 3)萃取，将有机层在Na2SO4上干燥，随后浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，之后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；
流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)进一步纯化，以给出白色固体的化合物E28(13.00mg,24.13μmol,作为甲酸盐的产率49.95％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm
1.88(br d,J＝7.65Hz,1H)2.38(s,7H)2.49(br dd,J＝13.30,9.29Hz,3H)2.71(br s,1H)
2.79-2.96(m,1H)3.09(br d,J＝15.94Hz,1H)3.25(br dd,J＝13.30,5.02Hz,1H)3.41-
3.73(m,6H)3.78(s,3H)3.90-4.03(m,1H)6.84(d,J＝8.91Hz,2H)7.21(d,J＝8.91Hz,2H)
7.32-7.40(m,3H)7.46-7.57(m,6H)。
流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)进一步纯化，以给出白色固体的化合物E28(13.00mg,24.13μmol,作为甲酸盐的产率49.95％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm
1.88(br d,J＝7.65Hz,1H)2.38(s,7H)2.49(br dd,J＝13.30,9.29Hz,3H)2.71(br s,1H)
2.79-2.96(m,1H)3.09(br d,J＝15.94Hz,1H)3.25(br dd,J＝13.30,5.02Hz,1H)3.41-
3.73(m,6H)3.78(s,3H)3.90-4.03(m,1H)6.84(d,J＝8.91Hz,2H)7.21(d,J＝8.91Hz,2H)
7.32-7.40(m,3H)7.46-7.57(m,6H)。
[0504] 实施例29：(3S,8R,9R,10S)-3-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E29”)
[0505] 类似于实施例28中在中间体105的合成(中间体105)之后所述，使用对映体[(1S)-3-[叔丁基(二苯基)硅基]氧-1-甲酰基-丙基]胺基甲酸叔丁酯(Bioorganic&Medicinal Chemistry(2006))替代中间体105，实施合成。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.64-
7.46(m,6H),7.44-7.34(m,3H),7.33-7.29(m,1H),7.29-7.25(m,2H),6.85(d,J＝8.9Hz,
2H),6.29(br s,1H),3.86(br d,J＝10.8Hz,1H),3.80(s,3H),3.78-3.72(m,2H),3.72-
3.65(m,1H),3.65-3.54(m,4H),3.21-3.11(m,1H),2.99-2.87(m,1H),2.72-2.60(m,2H),
2.37(s,6H),2.15(br s,1H),2.01(br d,J＝7.9Hz,1H)。
7.46(m,6H),7.44-7.34(m,3H),7.33-7.29(m,1H),7.29-7.25(m,2H),6.85(d,J＝8.9Hz,
2H),6.29(br s,1H),3.86(br d,J＝10.8Hz,1H),3.80(s,3H),3.78-3.72(m,2H),3.72-
3.65(m,1H),3.65-3.54(m,4H),3.21-3.11(m,1H),2.99-2.87(m,1H),2.72-2.60(m,2H),
2.37(s,6H),2.15(br s,1H),2.01(br d,J＝7.9Hz,1H)。
[0506] 实施例30：(4R,8R,9R,10S)-4-(二甲基胺基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E30”)
[0507] 如实施例3中所示，使用对映体R)-(1-((叔丁基二甲基硅基)氧)-4-氧代丁烷-2-基)胺基甲酸叔丁酯(US 20150266867)作为起始材料实施合成。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.59-7.54(m,2H),7.52-7.45(m,4H),7.41-7.30(m,5H),6.89-6.80(m,2H),3.80(s,3H),3.77-3.58(m,5H),3.57(br d,J＝8.2Hz,1H),3.51-3.43(m,2H),3.29(br d,J＝13.6Hz,
1H),3.02(br s,1H),2.67-2.44(m,2H),2.34(s,6H),1.81(br s,1H),1.66(br s,1H)。
1H),3.02(br s,1H),2.67-2.44(m,2H),2.34(s,6H),1.81(br s,1H),1.66(br s,1H)。
[0508] 实施例31：(8R,9R,10S)-4-((二甲基胺基)甲基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(2-苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E31”)
[0509]
[0510]
[0511] 中间体113：N-[[(2R,3R,4S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-N-[2-(羟基甲基)烯丙基]-2-硝基-苯磺酰胺
[0512] 将K2CO3(2.11g,15.23mmol,2.25eq)加入N-[[(2R,3R,4S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)-4-(三苯甲氧基甲基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基-苯磺酰胺WO2015070204)(5.00g,6.77mmol,1.00eq)在DMF(62.5mL)中的溶液中，并冷却至0℃，再加入2-(溴甲基)丙-2-烯-1-醇(2.04g,13.54mmol,2.00eq)在DMF(7.5mL)中的溶液。将混合物在20℃搅拌16小时。LC-MS显示反应物113完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(300mL)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(100mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至2:1)纯化，获得白色固体的中间体113(5.00g,6.18mmol，产率91.32％)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.00(s,1H),7.68-7.62(m,1H),7.60-7.46(m,3H),7.30-7.23(m,3H),7.19-7.12(m,
10H),7.07(dd,J＝2.9,6.8Hz,6H),5.57(tdd,J＝6.6,10.4,17.0Hz,1H),5.10-5.00(m,
2H),4.89(d,J＝10.1Hz,1H),4.69(s,1H),3.91(d,J＝8.8Hz,3H),3.70-3.61(m,1H),3.54-
3.38(m,3H),3.26-3.14(m,3H),2.98(dd,J＝4.4,9.3Hz,1H),2.85-2.73(m,2H)。
10H),7.07(dd,J＝2.9,6.8Hz,6H),5.57(tdd,J＝6.6,10.4,17.0Hz,1H),5.10-5.00(m,
2H),4.89(d,J＝10.1Hz,1H),4.69(s,1H),3.91(d,J＝8.8Hz,3H),3.70-3.61(m,1H),3.54-
3.38(m,3H),3.26-3.14(m,3H),2.98(dd,J＝4.4,9.3Hz,1H),2.85-2.73(m,2H)。
[0513] 中间体114：[(3E,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-4-基]甲醇
[0514] 将第二代Hoveyda-Grubbs催化剂(774.77mg,1.24mmol,0.20eq)加入中间体113(5.00g,6.18mmol,1.00eq)在DCM(500.00mL)中的溶液中。将混合物在55℃搅拌2小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)显示中间体113完全耗尽，并检测到所希望的MS。反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至1:1)纯化，获得褐色固体的中间体114(4.00g,5.12mmol，产率82.90％)：1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.88-7.83(m,1H),7.64-7.51(m,3H),7.18(d,J＝6.0Hz,2H),7.13(s,14H),7.06(d,J＝8.5Hz,
2H),5.81(t,J＝6.3Hz,1H),4.07-4.02(m,3H),3.96-3.88(m,1H),3.59-3.32(m,6H),3.19(d,J＝14.1Hz,1H),3.09-2.93(m,3H),2.83-2.79(m,1H)。
2H),5.81(t,J＝6.3Hz,1H),4.07-4.02(m,3H),3.96-3.88(m,1H),3.59-3.32(m,6H),3.19(d,J＝14.1Hz,1H),3.09-2.93(m,3H),2.83-2.79(m,1H)。
[0515] 中间体115：[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲醇
[0516] 将2-硝基苯磺酰肼(5.56g,25.60mmol,4.00eq)和TEA(5.18g,51.23mmol,7.10mL,10.00eq)加入中间体114(4.00g,5.12mmol,1.00eq)在THF(51.00mL)中的溶液中。在40℃搅拌16小时后，加入水(100mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(50mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝
10/1至1:1)纯化，获得白色固体的中间体115(3.60g,粗产物)。
10/1至1:1)纯化，获得白色固体的中间体115(3.60g,粗产物)。
[0517] 中间体116：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0518] 在0℃将DMAP(56.19mg,460.00μmol,0.1eq)和TEA(465.40mg,4.60mmol,637.53μL,1.00eq)加入中间体115(3.60g,4.60mmol,1.00eq)在DCM(80.00mL)中的溶液中，随后加入Ac2O(939.07mg,9.20mmol,861.53μL,2.00eq)。在20℃搅拌2小时后，加入饱和NaHCO3水溶液(150mL)淬灭反应混合物，用DCM(50mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝30/1至1:1)纯化，获得白色固体的中间体116(3.00g,3.64mmol，产率79.07％)。
[0519] 中间体117：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0520] 在0℃将Cs2CO3(1.42g,4.37mmol,1.20eq)和苯硫酚(“PhSH”)(601.14mg,5.46mmol,1.50eq)加入中间体116 6(3.00g,3.64mmol,1.00eq)在乙腈(80.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌16小时后，加入水(100mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(30mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(50mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10:1至1:1)纯化，获得白色固体的中间体117(2.00g,
3.13mmol，产率85.90％)。
3.13mmol，产率85.90％)。
[0521] 中间体118：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0522] 在0℃将1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(560.21mg,3.76mmol,1.20eq)加入中间体117(2.00g,3.13mmol,1.00eq)在DCM(50.00mL)中的溶液中。将混合物在15℃搅拌2小时。LC-MS显示中间体117完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(100mL)淬灭反应混合物，用DCM(30mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝100:1至20:1)纯化，得到白色固体的中间体118(2.20g,2.79mmol,产率1
89.11％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.28-7.16(m,23H),6.83(d,J＝9.0Hz,2H),
4.01-3.95(m,1H),3.92-3.85(m,1H),3.80-3.73(m,5H),3.63-3.54(m,2H),3.42(t,J＝
8.0Hz,1H),3.20-2.90(m,5H),2.74(dd,J＝11.0,14.1Hz,1H),2.50-2.40(m,1H),2.06(s,
3H),1.66(dd,J＝6.8,13.8Hz,1H),1.53-1.45(m,1H)。
89.11％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.28-7.16(m,23H),6.83(d,J＝9.0Hz,2H),
4.01-3.95(m,1H),3.92-3.85(m,1H),3.80-3.73(m,5H),3.63-3.54(m,2H),3.42(t,J＝
8.0Hz,1H),3.20-2.90(m,5H),2.74(dd,J＝11.0,14.1Hz,1H),2.50-2.40(m,1H),2.06(s,
3H),1.66(dd,J＝6.8,13.8Hz,1H),1.53-1.45(m,1H)。
[0523] 中间体119：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-4-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0524] 将K2CO3(175.22mg,1.27mmol,5.00eq)加入中间体118(200.00mg,253.56μmol,1.00eq)在DCM(1.00mL)和MeOH(1mL)中的溶液中。将混合物在15℃搅拌4小时。LC-MS显示中间体118完全耗尽，并检测到一个具有所希望的MS的主峰。加入水(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10:1至1:1)纯化，获得白色固体的中间体119(150.00mg,
200.88μmol,产率79.22％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.37(d,J＝8.5Hz,2H),
7.27(s,4H),7.22(s,15H),6.80(d,J＝8.5Hz,2H),3.90(d,J＝16.1Hz,2H),3.77(s,3H),
3.70-3.57(m,3H),3.43-3.32(m,2H),3.19-3.07(m,2H),3.05-2.94(m,2H),2.75(d,J＝
11.5Hz,1H),2.47(t,J＝12.0Hz,1H),1.89(br.s.,1H),1.52-1.38(m,2H)。
200.88μmol,产率79.22％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.37(d,J＝8.5Hz,2H),
7.27(s,4H),7.22(s,15H),6.80(d,J＝8.5Hz,2H),3.90(d,J＝16.1Hz,2H),3.77(s,3H),
3.70-3.57(m,3H),3.43-3.32(m,2H),3.19-3.07(m,2H),3.05-2.94(m,2H),2.75(d,J＝
11.5Hz,1H),2.47(t,J＝12.0Hz,1H),1.89(br.s.,1H),1.52-1.38(m,2H)。
[0525] 中间体120：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-4-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0526] 在0℃将DIAD(0.11mL)加入PPh3(0.15g)在3mL THF中的溶液中。5分钟后，在0℃将这一混合物加入中间体119(20.00mg,26.78μmol,1.00eq)和异吲哚啉-1,3-二酮(5.91mg,40.17μmol,1.50eq)在THF(1mL)中的溶液中。将混合物在15℃搅拌16小时。LC-MS显示中间体119完全耗尽，并检测到所希望的MS。反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出白色固体的中间体120(10.00mg,11.42μmol,产率42.63％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.87(dd,J＝3.0,5.5Hz,1H),7.75(dd,J＝
3.3,5.3Hz,2H),7.32-7.28(m,7H),7.27-7.20(m,15H),6.80(d,J＝9.0Hz,2H),6.17(s,
1H),3.83-3.75(m,3H),3.74-3.56(m,5H),3.52(d,J＝7.5Hz,1H),3.24-3.12(m,3H),3.03-
2.96(m,1H),2.83-2.74(m,1H),2.45-2.30(m,2H),1.83(d,J＝7.5Hz,1H)。
3.3,5.3Hz,2H),7.32-7.28(m,7H),7.27-7.20(m,15H),6.80(d,J＝9.0Hz,2H),6.17(s,
1H),3.83-3.75(m,3H),3.74-3.56(m,5H),3.52(d,J＝7.5Hz,1H),3.24-3.12(m,3H),3.03-
2.96(m,1H),2.83-2.74(m,1H),2.45-2.30(m,2H),1.83(d,J＝7.5Hz,1H)。
[0527] 中间体121：(8R,9R,10S)-4-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0528] 将N2H4.H2O(28.58mg,570.87μmol,27.75μL,1.00eq)加入中间体120(500.00mg,570.87μmol,1.00eq)在EtOH(10.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体120耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(30mL)淬灭反应混合物，用DCM(10mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(10mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝100:1至10:1)纯化，得到含有Ph3PO的黄色固体的中间体121(150.00mg,粗产物)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.64-7.56(m,4H),7.51-7.45(m,
3H),7.39(dt,J＝2.8,7.4Hz,5H),7.14(s,13H),6.71(d,J＝9.0Hz,2H),3.79-3.62(m,4H),
3.56-3.46(m,2H),3.31(br.s.,1H),3.11-2.85(m,5H),2.74(d,J＝12.5Hz,1H),2.44-2.18(m,2H),1.62-1.39(m,3H)。
3H),7.39(dt,J＝2.8,7.4Hz,5H),7.14(s,13H),6.71(d,J＝9.0Hz,2H),3.79-3.62(m,4H),
3.56-3.46(m,2H),3.31(br.s.,1H),3.11-2.85(m,5H),2.74(d,J＝12.5Hz,1H),2.44-2.18(m,2H),1.62-1.39(m,3H)。
[0529] 中间体122：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-4-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-10-((三苯甲氧基)甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0530] 将MgSO4(290.53mg,2.41mmol,12.00eq)和HCHO(98.21mg,1.21mmol,90.10μL,37％纯度,6.02eq)加入中间体121(150.00mg,201.14μmol,1.00eq)在DCM(5.00mL)中的溶液中，随后加入NaBH(OAc)3(639.44mg,3.02mmol,15.00eq)。将混合物在15℃搅拌16小时。
LC-MS显示中间体121耗尽，并检测到一个所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到黄色固体的中间体122
(60.00mg,77.54μmol,产率38.55％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.24-7.08(m,
24H),6.72(d,J＝9.0Hz,2H),3.88(d,J＝14.1Hz,1H),3.67(s,3H),3.57-3.48(m,3H),
3.33-3.25(m,1H),3.10-2.86(m,5H),2.64(dd,J＝10.8,14.3Hz,1H),2.44-2.36(m,1H),
2.21(s,6H),1.90(d,J＝12.0Hz,1H),1.51(br.s.,2H),1.36(d,J＝4.5Hz,2H)。
LC-MS显示中间体121耗尽，并检测到一个所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到黄色固体的中间体122
(60.00mg,77.54μmol,产率38.55％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.24-7.08(m,
24H),6.72(d,J＝9.0Hz,2H),3.88(d,J＝14.1Hz,1H),3.67(s,3H),3.57-3.48(m,3H),
3.33-3.25(m,1H),3.10-2.86(m,5H),2.64(dd,J＝10.8,14.3Hz,1H),2.44-2.36(m,1H),
2.21(s,6H),1.90(d,J＝12.0Hz,1H),1.51(br.s.,2H),1.36(d,J＝4.5Hz,2H)。
[0531] 中间体123：(8R,9R,10S)-4-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-10-(三苯甲氧基甲基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0532] 将乙炔基苯(23.76mg,232.62μmol,25.55μL,3.00eq)、Cs2CO3(101.06mg,310.16μmol,4.00eq)和Xphos Pd G3(6.56mg,7.75μmol,0.1eq)加入中间体122(60.00mg,77.54μmol,1.00eq)在乙腈(1.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌2小时。LC-MS显示反应物完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(5mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到黄色固体的中间体123(50.00mg,62.89μmol,产率81.11％)。
[0533] E31的合成：(8R,9R,10S)-4-((二甲基胺基)甲基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-(4-(2-苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E31)
[0534] 将TFA(71.71mg,628.90μmol,46.56μL,10.00eq)加入中间体123(50.00mg,62.89μmol,1.00eq)在DCM(1.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体123完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到白色固体的化合物E31(4.50mg,8.14μmol,产率12.95％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.54(dd,J＝2.0,7.5Hz,2H),7.48(s,4H),
7.37-7.29(m,5H),6.82(d,J＝9.0Hz,2H),4.05(d,J＝14.1Hz,1H),3.78(s,3H),3.73-3.62(m,4H),3.60-3.52(m,2H),3.46(t,J＝8.5Hz,1H),3.15(dd,J＝5.3,16.3Hz,2H),2.86(dd,J＝10.5,14.6Hz,1H),2.58(br.s.,1H),2.32(s,6H),2.25(t,J＝12.3Hz,2H),2.03(d,J＝
12.5Hz,1H),1.59(br.s.,2H),1.53(br.s.,1H)。
7.37-7.29(m,5H),6.82(d,J＝9.0Hz,2H),4.05(d,J＝14.1Hz,1H),3.78(s,3H),3.73-3.62(m,4H),3.60-3.52(m,2H),3.46(t,J＝8.5Hz,1H),3.15(dd,J＝5.3,16.3Hz,2H),2.86(dd,J＝10.5,14.6Hz,1H),2.58(br.s.,1H),2.32(s,6H),2.25(t,J＝12.3Hz,2H),2.03(d,J＝
12.5Hz,1H),1.59(br.s.,2H),1.53(br.s.,1H)。
[0535] 实施例32：(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E32”)
[0536]
[0537] 中间体124：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-4-[(二甲基胺基)甲基]-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0538] 将TFA(589.40mg,5.17mmol,382.73μL,10.00eq)加入中间体122(400.00mg,516.93μmol,1.00eq)在DCM(10.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体122完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝100:1至10:1)纯化，得到黄色固体的中间体124(130.00mg,粗产物)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.47(d,J＝8.8Hz,1H),7.39-7.32(m,3H),7.32-
7.26(m,9H),7.23(d,J＝9.3Hz,3H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),3.93(d,J＝14.1Hz,1H),3.69(s,3H),3.60-3.52(m,4H),3.04(d,J＝14.1Hz,2H),2.75-2.63(m,2H),2.23(s,6H),2.15(d,J＝11.9Hz,1H),1.65-1.46(m,4H)。
7.26(m,9H),7.23(d,J＝9.3Hz,3H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),3.93(d,J＝14.1Hz,1H),3.69(s,3H),3.60-3.52(m,4H),3.04(d,J＝14.1Hz,2H),2.75-2.63(m,2H),2.23(s,6H),2.15(d,J＝11.9Hz,1H),1.65-1.46(m,4H)。
[0539] 中间体125：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-4-[(二甲基胺基)甲基]-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺[0540] 在0℃将DIAD(0.11mL)加入PPh3(0.15g)在3mL THF中的溶液中。在0℃将这一混合物(1.16mL)加入中间体124(30.00mg,56.45μmol,1.00eq)和异吲哚啉-1,3-二酮(12.46mg,84.67μmol,1.50eq)在THF(1.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌16小时。LC-MS显示中间体124完全耗尽，并检测到所希望的MS。反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到含有Ph3PO的白色固体的中间体125(30.00mg,粗产物)。
[0541] 中间体126：(8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-4-[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0542] 将N2H4.H2O(7.58mg,151.38μmol,7.36μL,1.00eq)加入中间体125(100.00mg,151.38μmol,1.00eq)在EtOH(2.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体125完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(5mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝8:1)纯化，得到黄色固体的中间体126(90.00mg,粗产物)。
[0543] 中间体127：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-4,10-双[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0544] 将HCHO(41.31mg,508.98μmol,37.90μL,37％溶液,6.00eq)和MgSO4(122.53mg,1.02mmol,12.00eq)加入中间体126(45.00mg,84.83μmol,1.00eq)在DCM(2.00mL)中的溶液中，搅拌30分钟后，加入NaBH(OAc)3(269.68mg,1.27mmol,15.00eq)。将混合物在15℃搅拌
16小时。LC-MS显示中间体126完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(3mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(3mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到黄色固体的中间体127(20.00mg,35.81μmol,产率42.21％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.46-7.40(m,2H),7.37-7.33(m,2H),7.30(d,J＝9.0Hz,2H),6.81(d,J＝9.0Hz,2H),
3.97(d,J＝14.1Hz,1H),3.77(s,3H),3.67(d,J＝15.6Hz,1H),3.60-3.54(m,1H),3.45-
3.32(m,2H),3.15-3.03(m,2H),2.74(dd,J＝10.8,14.3Hz,1H),2.47-2.34(m,4H),2.30(s,
6H),2.25-2.17(m,1H),2.02(s,6H),1.62-1.48(m,3H)。
16小时。LC-MS显示中间体126完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(3mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(3mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到黄色固体的中间体127(20.00mg,35.81μmol,产率42.21％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.46-7.40(m,2H),7.37-7.33(m,2H),7.30(d,J＝9.0Hz,2H),6.81(d,J＝9.0Hz,2H),
3.97(d,J＝14.1Hz,1H),3.77(s,3H),3.67(d,J＝15.6Hz,1H),3.60-3.54(m,1H),3.45-
3.32(m,2H),3.15-3.03(m,2H),2.74(dd,J＝10.8,14.3Hz,1H),2.47-2.34(m,4H),2.30(s,
6H),2.25-2.17(m,1H),2.02(s,6H),1.62-1.48(m,3H)。
[0545] E32的合成：(8R,9S,10S)-4,10-双[(二甲基胺基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E32)
[0546] 将乙炔基苯(10.97mg,107.42μmol,25.55μL,3.00eq)、Xphos Pd G3(2.27mg,2.69μmol,0.10eq)和Cs2CO3(35.00mg,107.42μmol,4.00eq)加入中间体127(15.00mg,26.86μmol,1.00eq)在乙腈(1.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体127完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(10mL)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(3mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(3mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝8:1)纯化，得到黄色固体的化合物E31(4.30mg,7.42μmol,产率27.61％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝7.50-7.44(m,2H),7.44-7.36(m,4H),
7.31-7.21(m,5H),6.74(d,J＝8.5Hz,2H),3.93(d,J＝14.6Hz,1H),3.70(s,3H),3.63-3.52(m,2H),3.42-3.28(m,2H),3.09-2.99(m,2H),2.72(dd,J＝10.5,14.1Hz,1H),2.36(d,J＝
10.0Hz,3H),2.23(s,6H),2.16(t,J＝12.5Hz,2H),1.96(br.s.,6H),1.54(br.s.,1H),1.45(br.s.,2H)。
7.31-7.21(m,5H),6.74(d,J＝8.5Hz,2H),3.93(d,J＝14.6Hz,1H),3.70(s,3H),3.63-3.52(m,2H),3.42-3.28(m,2H),3.09-2.99(m,2H),2.72(dd,J＝10.5,14.1Hz,1H),2.36(d,J＝
10.0Hz,3H),2.23(s,6H),2.16(t,J＝12.5Hz,2H),1.96(br.s.,6H),1.54(br.s.,1H),1.45(br.s.,2H)。
[0547] 实施例33：(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E33”)
[0548]
[0549] 中间体128：醋酸[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0550] 将TFA(867.33mg,7.61mmol,563.20μL,10.00eq)加入中间体118(600.00mg,760.68μmol,1.00eq)在DCM(10.00mL)中的溶液中。将混合物在20℃搅拌2小时。LC-MS显示中间体118耗尽，并检测到所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(30mL)淬灭反应混合物，用DCM(10mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM/MeOH＝1:0至20:1)纯化，获得白色固体的中间体128(300.00mg,549.00μmol,产率72.17％)。
[0551] 中间体129：醋酸[(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0552] 在0℃将DIAD(0.73mL,3.76mmol)缓慢地加入三苯基膦(1g,3.76mmol)在THF(19ml)中的溶液中。在0℃将这一制备的混合物(11mL)加入中间体128(300.00mg,549.00μmol,1.00eq)和异吲哚啉-1,3-二酮(121.16mg,823.50μmol,1.50eq)在THF(15.00mL)中的溶液中，随后将混合物在25℃和N2气氛下搅拌16小时。LC-MS显示中间体128完全耗尽，并检测到所希望的MS。反应混合物减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到含有Ph3PO的黄色固体的中间体129(400.00mg,粗产物)。
[0553] 中间体130：醋酸[(8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-6-[(4-甲氧基苯基)氨基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0554] 将N2H4.H2O(29.64mg,592.09μmol,28.78μL,1.00eq)加入中间体129(400.00mg,592.09μmol,1.00eq)在EtOH(10.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌2小时。加入水(30mL)淬灭反应混合物，用DCM(30mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(30mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM:MeOH＝1:0至20:1)纯化，得到白色固体的中间体130(280.00mg,513.32μmol,产率86.70％)。
[0555] 中间体131：醋酸[(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(二甲基胺基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0556] 将MgSO4(370.73mg,3.08mmol,12.00eq)和HCHO(124.99mg,1.54mmol,114.67μL,37％溶液,6.00eq)以及随后的NaBH(OAc)3(815.95mg,3.85mmol,15.00eq)分步加入中间体
130(140.00mg,256.66μmol,1.00eq)在DCM(5.00mL)中的溶液中。将混合物在15℃搅拌16小时。LC-MS显示中间体130耗尽，并检测到一个所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到白色固体的中间体131
(73.00mg,127.28μmol,产率49.59％)。
130(140.00mg,256.66μmol,1.00eq)在DCM(5.00mL)中的溶液中。将混合物在15℃搅拌16小时。LC-MS显示中间体130耗尽，并检测到一个所希望的MS。加入饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝20:1)纯化，得到白色固体的中间体131
(73.00mg,127.28μmol,产率49.59％)。
[0557] 中间体132：醋酸[(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-6-[(4-甲氧基苯基)胺基甲酰基]-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-4-基]甲酯
[0558] 将乙炔基苯(39mg,381.85μmol,3.00eq)、Xphos Pd G3(10.77mg,12.73μmol,0.10eq)和Cs2CO3(165.89mg,509.14μmol,4.00eq)加入中间体131(73.00mg,127.28μmol,
1.00eq)在乙腈(4.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体131完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(10mL)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(3mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(3mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到褐色固体的中间体132(30.00mg,50.44μmol,产率39.63％)。
1.00eq)在乙腈(4.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体131完全耗尽，并检测到所希望的MS。加入水(10mL)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(3mL*2)萃取。合并的有机层以盐水(3mL*2)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到褐色固体的中间体132(30.00mg,50.44μmol,产率39.63％)。
[0559] E33的合成：(8R,9S,10S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E33)
[0560] 将K2CO3(34.86mg,252.20μmol,5.00eq)加入中间体132(30.00mg,50.44μmol,1.00eq)在MeOH(500.00μL)/DCM(0.5mL)中的溶液中。将混合物在15℃搅拌1小时。LC-MS显示中间体132完全耗尽，并检测到一个具有所希望的MS的主峰。加入水(10mL)淬灭反应混合物，用DCM(5mL*2)萃取。合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Luna C18 150*25 5u；流动相：[水(0.225％甲酸)-乙腈]；B％：25％至
45％，12min)纯化，得到白色固体的化合物E33(11.00mg,18.37μmol,产率36.42％,甲酸盐)。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ＝7.58-7.49(m,6H),7.38(d,J＝3.5Hz,3H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),6.81(d,J＝9.3Hz,2H),3.92(d,J＝15.4Hz,1H),3.82-3.71(m,5H),3.59(d,J＝6.2Hz,2H),3.45(t,J＝9.0Hz,1H),3.20-3.05(m,2H),3.01-2.91(m,2H),2.88-2.81(m,
1H),2.48(t,J＝12.1Hz,1H),2.40-2.29(m,6H),1.83(br.s.,1H),1.67-1.48(m,2H)。
45％，12min)纯化，得到白色固体的化合物E33(11.00mg,18.37μmol,产率36.42％,甲酸盐)。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ＝7.58-7.49(m,6H),7.38(d,J＝3.5Hz,3H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),6.81(d,J＝9.3Hz,2H),3.92(d,J＝15.4Hz,1H),3.82-3.71(m,5H),3.59(d,J＝6.2Hz,2H),3.45(t,J＝9.0Hz,1H),3.20-3.05(m,2H),3.01-2.91(m,2H),2.88-2.81(m,
1H),2.48(t,J＝12.1Hz,1H),2.40-2.29(m,6H),1.83(br.s.,1H),1.67-1.48(m,2H)。
[0561] 实施例34：(8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E34”)
[0562]
[0563] 中间体133：(2R,3R,4S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)-4-(羟基甲基)氮杂环丁烷-2-甲腈
[0564] 在25℃将TFA(33.20g,291.20mmol,21.56mL,10.00eq)加入中间体(2R,3R,4S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)-4-((三苯甲氧基)甲基)氮杂环丁烷-2-甲腈(J.O.C(2012),77(17),7187-7211)(16.00g,29.12mmol,1.00eq)在DCM(291.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌16小时。TLC显示反应物完全耗尽且观察到所希望的产物，以NaHCO3溶液(500mL)淬灭，用DCM(200mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出黄色固体的残渣(8.95g,粗产物)，粗产物直接用于下一步。
[0565] 中间体134：(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-(羟基甲基)氮杂环丁烷-2-甲腈
[0566] 以N2将中间体133(8.95g,29.14mmol,1.00eq)、1,3-二甲基巴比妥酸(6.82g,43.71mmol,1.50eq)、Pd(PPh3)4(3.37g,2.91mmol,0.10eq)在EtOH(290.00mL)中的混合物脱气并吹扫3次，随后将混合物在40℃和N2气氛下搅拌16小时。LCMS显示反应物133完全耗尽且观察到所希望的MS，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：乙腈)纯化，以给出橙色固体的中间体134(4.70g,17.25μmol,产率60.38％)。
[0567] 中间体135：(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-(羟基甲基)-1-(1-甲基烯丙基)氮杂环丁烷-2-甲腈
[0568] 将P(OEt)3(39.81mg,239.59μmol,41.04μL,0.04eq)、(E)-醋酸丁-2-烯-1-酯(724.70mg,6.35mmol,1.06eq)、烯丙基(氯)钯(21.92mg,59.90μmol,0.01eq)和DBU(911.89mg,5.99mmol,902.86μL,1.00eq)加入中间体134(1.60g,5.99mmol,1.00eq)在THF(3.50mL中的溶液中，将混合物以N2脱气并吹扫3次，随后将混合物在40℃和N2气氛下搅拌16小时。用水(15mL)淬灭反应，用DCM(20mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至0:1)纯化，获得白色固体的中间体135(150.00mg,466.98μmol,产率7.80％)。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ＝1.20(dd,J＝
11.04,6.53Hz,3H)3.11(quin,J＝7.03Hz,1H)3.43-3.55(m,2H)3.59-3.67(m,1H)3.80-
3.92(m,1H)4.04-4.15(m,1H)4.35(d,J＝8.53Hz,1H)4.41(d,J＝8.53Hz,1H)5.05-5.41(m,
2H)5.64-5.91(m,1H)7.47-7.52(m,2H)7.52-7.56(m,2H)。
11.04,6.53Hz,3H)3.11(quin,J＝7.03Hz,1H)3.43-3.55(m,2H)3.59-3.67(m,1H)3.80-
3.92(m,1H)4.04-4.15(m,1H)4.35(d,J＝8.53Hz,1H)4.41(d,J＝8.53Hz,1H)5.05-5.41(m,
2H)5.64-5.91(m,1H)7.47-7.52(m,2H)7.52-7.56(m,2H)。
[0569] 中间体136：(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-[[叔丁基(二甲基)硅基]氧甲基]-1-(1-甲基烯丙基)氮杂环丁烷-2-甲腈
[0570] 将咪唑(1.56g,22.98mmol,6.00eq)和TBSCl(2.31g,15.32mmol,1.88mL,4.00eq)加入中间体135(1.23g,3.83mmol,1.00eq)在THF(6.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全耗尽且观察到所希望的MS，用水(30mL)洗涤，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1至10:1)纯化，以给出得白色固体的中间体136(1.60g,3.67mmol，产率95.93％)。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δppm-0.36--0.13(m,7H)0.69-0.77(m,9H)1.19(dd,J＝18.57,6.53Hz,3H)3.04-3.17(m,1H)3.39-3.47(m,1H)3.53-3.59(m,1H)3.61-3.72(m,1H)3.82-
3.92(m,1H)4.33-4.44(m,1H)5.07-5.35(m,2H)5.61-5.85(m,1H)7.46-7.50(m,2H)7.52-
7.56(m,2H)。
3.92(m,1H)4.33-4.44(m,1H)5.07-5.35(m,2H)5.61-5.85(m,1H)7.46-7.50(m,2H)7.52-
7.56(m,2H)。
[0571] 中间体137：[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-[[叔丁基(二甲基)硅基]氧甲基]-1-(1-甲基烯丙基)氮杂环丁烷-2-基]甲胺
[0572] 在0℃，在N2气氛下将LiBHEt3(1M,5.06mL,10.00eq)加入中间体136(1.85g,4.25mmol,1.00eq)在DCM(200.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应物136完全耗尽且观察到所希望的MS，用H2O(100mL)淬灭，用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM/MeOH＝1/0至10:1)纯化，获得油状的中间体
137(1.40g,3.19mmol,产率74.95％)。
137(1.40g,3.19mmol,产率74.95％)。
[0573] 中间体138：N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-[[叔丁基(二甲基)硅基]氧甲基]-1-(1-甲基烯丙基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基苯磺酰胺
[0574] 在0℃将TEA(9.91g,97.95mmol,13.58mL,31.70eq)和2-硝基苯磺酰氯(2.05g,9.27mmol,3.00eq)加入中间体137(1.36g,3.09mmol,1.00eq)在DCM(55.00mL)中的溶液中。
将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应物137完全耗尽且观察到所希望的MS，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至5:1)纯化，以给出黄色油的中间体138(1.93g,粗产物)。
将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示反应物137完全耗尽且观察到所希望的MS，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至5:1)纯化，以给出黄色油的中间体138(1.93g,粗产物)。
[0575] 中间体139：N-烯丙基-N-[[(2R,3R,4S)-3-(4-溴苯基)-4-[[叔丁基(二甲基)硅基]氧甲基]-1-(1-甲基烯丙基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基苯磺酰胺
[0576] 将K2CO3(647.17mg,4.68mmol,1.50eq)加入中间体138(1.95g,3.12mmol,1.00eq)在DMF(15.00mL)中的溶液中，随后加入3-溴丙-1-烯(1.13g,9.36mmol,808.84μL,3.00eq)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应物138完全耗尽且观察到所希望的MS，用盐水(20mL x 3)洗涤，用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至5:1)纯化，获得黄色胶状的中间体139(1.90g,
2.86mmol，产率91.61％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝ppm-0.34--0.27(m,3H)-
0.23--0.18(m,3H)0.70-0.75(m,9H)1.14(dd,J＝16.76,6.62Hz,3H)3.11-3.42(m,5H)
3.15-3.79(m,6H)4.69-4.82(m,1H)4.93-5.04(m,1H)5.05-5.22(m,2H)5.28-5.50(m,1H)
5.67-5.81(m,1H)7.32(d,J＝8.38Hz,2H)7.43(dd,J＝8.38,1.32Hz,2H)7.52-7.62(m,3H)
7.62-7.70(m,1H)。
2.86mmol，产率91.61％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝ppm-0.34--0.27(m,3H)-
0.23--0.18(m,3H)0.70-0.75(m,9H)1.14(dd,J＝16.76,6.62Hz,3H)3.11-3.42(m,5H)
3.15-3.79(m,6H)4.69-4.82(m,1H)4.93-5.04(m,1H)5.05-5.22(m,2H)5.28-5.50(m,1H)
5.67-5.81(m,1H)7.32(d,J＝8.38Hz,2H)7.43(dd,J＝8.38,1.32Hz,2H)7.52-7.62(m,3H)
7.62-7.70(m,1H)。
[0577] 中间体140：[(3Z,8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-2-甲基-6-(2-硝基苯基)磺酰基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-10-基]甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷
[0578] 将第一代Hoveyda-Grubbs催化剂(569.51mg,692.50μmol,0.25eq)加入中间体139(1.84g,2.77mmol,1.00eq)在DCE(368.00mL)中的溶液中。将混合物在90℃搅拌16小时。将反应混合物过滤，并减压浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化。得到浅黑色固体的中间体140(1.25g,1.96mmol,产率70.88％)。
[0579] 中间体141：[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-2-甲基-6-(2-硝基苯基)磺酰基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基]甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷
[0580] 将TEA(1.43g,14.13mmol,1.96mL,9.00eq)和2-硝基苯磺酰肼(1.02g,4.71mmol,3.00eq)加入中间体140(1.00g,1.57mmol,1.00eq)在THF(40.00mL)中的溶液中。将混合物在40℃搅拌16小时。LCMS显示反应物140完全耗尽，且大部分为所希望的产物。用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭反应混合物，用乙酸乙酯萃取三次(30mL*3)。合并的有机萃取液在MgSO4上干燥，过滤，减压浓缩以提供粗产物。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝20/
1至5:1)纯化，获得黄色固体的中间体141(830.00mg,1.04mmol,产率66.22％,80％纯度)。
1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝ppm-0.29--0.08(m,6H)0.75(d,J＝14.05Hz,9H)1.03-
1.17(m,2H)1.36-1.48(m,1H)1.71-2.17(m,3H)2.62(br.s.,1H)2.75-2.94(m,1H)3.00-
3.29(m,2H)3.37-3.48(m,1H)3.49-3.67(m,3H)3.69-3.87(m,2H)7.28-7.46(m,4H)7.53-
7.66(m,3H)7.78(d,J＝6.02Hz,1H)。
1至5:1)纯化，获得黄色固体的中间体141(830.00mg,1.04mmol,产率66.22％,80％纯度)。
1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝ppm-0.29--0.08(m,6H)0.75(d,J＝14.05Hz,9H)1.03-
1.17(m,2H)1.36-1.48(m,1H)1.71-2.17(m,3H)2.62(br.s.,1H)2.75-2.94(m,1H)3.00-
3.29(m,2H)3.37-3.48(m,1H)3.49-3.67(m,3H)3.69-3.87(m,2H)7.28-7.46(m,4H)7.53-
7.66(m,3H)7.78(d,J＝6.02Hz,1H)。
[0581] 中间体142：[(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-2-甲基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-10-基]甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷
[0582] 将Cs2CO3(508.28mg,1.56mmol,1.20eq)和苯硫酚(214.77mg,1.95mmol,198.86μL,1.50eq)加入中间体141(830.00mg,1.30mmol,1.00eq)在CH3CN(8.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌16小时后，用水(15mL)稀释反应，用乙酸乙酯(15mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化，获得黄色固体的中间体142(580.00mg,1.02mmol,产率78.70％,80％纯度)。
[0583] 中间体143：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[[叔丁基(二甲基)硅基]氧甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0584] 在0℃将TEA(61.36mg,606.35μmol,84.05μL,0.50eq)和1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(180.88mg,1.21mmol,155.93μL,1.00eq)加入中间体142(550.00mg,1.21mmol,1.00eq)在DCM(10.00mL)中的溶液中。在20℃搅拌3小时后，用水(10mL)稀释反应，用DCM(20mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5:1)纯化，获得黄色固体的中间体143(700.00mg,1.16mmol，产率95.99％)。
[0585] 中间体144：(8R,9R,10S)-9-(4-溴苯基)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0586] 将TBAF(596.13mg,2.28mmol,2.00eq)加入中间体143(690.00mg,1.14mmol,1.00eq)在DCM(10.00mL)中的溶液中。将混合物在50℃搅拌16小时。LCMS显示反应物143完全耗尽且观察到所希望的产物，用水(10mL x3)洗涤，用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM/MeOH＝1/0至20:1)纯化，以给出黄色固体的中间体144(440.00mg,900.86μmol,产率79.02％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝ppm 1.09(d,J＝6.53Hz,3H)1.40(d,J＝16.56Hz,1H)1.77-1.99(m,2H)2.72-2.90(m,2H)
3.51(d,J＝6.02Hz,1H)3.57-3.69(m,4H)3.71-3.80(m,4H)3.81-3.94(m,2H)6.02-6.08(m,
1H)6.79-6.87(m,2H)7.24(d,J＝9.03Hz,2H)7.36-7.43(m,2H)7.43-7.49(m,2H)。
3.51(d,J＝6.02Hz,1H)3.57-3.69(m,4H)3.71-3.80(m,4H)3.81-3.94(m,2H)6.02-6.08(m,
1H)6.79-6.87(m,2H)7.24(d,J＝9.03Hz,2H)7.36-7.43(m,2H)7.43-7.49(m,2H)。
[0587] 中间体145：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-[(1,3-二氧代-3a,7a-二氢异吲哚-2-基)甲基]-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0588] 在0℃将异吲哚啉-1,3-二酮(189.78mg,1.29mmol,1.50eq)、PPh3(451.09mg,1.72mmol,2.00eq)和DIAD(347.77mg,1.72mmol,334.39μL,2.00eq)加入中间体144
(420.00mg,859.92μmol,1.00eq)在THF(18.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应物144完全耗尽且大部分是所希望的产物，用水(10mL)洗涤，用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1:1)纯化，获得褐色胶状的中间体145(800.00mg,645.63μmol,产率75.08％,
50％纯度)。
(420.00mg,859.92μmol,1.00eq)在THF(18.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应物144完全耗尽且大部分是所希望的产物，用水(10mL)洗涤，用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1:1)纯化，获得褐色胶状的中间体145(800.00mg,645.63μmol,产率75.08％,
50％纯度)。
[0589] 中间体146：(8R,9S,10S)-10-(氨基甲基)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0590] 将NH2NH2.H2O(30.30mg,605.28μmol,29.42μL,1.00eq)加入中间体145(750.00mg,605.28μmol,1.00eq)在EtOH(14.00mL)中的溶液中。将混合物在80℃搅拌2小时。LCMS显示中间体145完全耗尽且大部分是所希望的产物(中间体146)，用水(40mL)洗涤，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，DCM/MEOH＝0/1至10:1)纯化，以给出(10S,10aR)-9-氨基-10-(4-溴苯基)-N-(4-己氧基苯基)-6-甲基八氢吡咯并[1,2-a][1,4]二氮芳辛-2(1H)-甲酰胺(“R146”)(190mg)(1H NMR(400MHz,
CHLOROFORM-d)δ＝ppm 0.97(d,J＝6.02Hz,1H)1.14(d,J＝8.03Hz,2H)1.25-1.48(m,2H)
1.87-2.09(m,2H)2.72-2.84(m,1H)3.01(d,J＝10.04Hz,1H)3.15-3.23(m,1H)3.28(d,J＝
6.02Hz,1H)3.45(br.s.,1H)3.62-4.11(m,7H)6.82(d,J＝10.04Hz,2H)7.18-7.25(m,2H)
7.29(d,J＝8.03Hz,2H)7.49(d,J＝8.03Hz,2H))的黄色固体混合物，以及黄色固体的中间体146(40mg)(1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)＝ppm0.99-1.16(m,3H)1.44(d,J＝11.04Hz,
1H)1.87(br.s.,3H)2.66(br.s.,1H)2.80-2.91(m,1H)2.92-3.00(m,1H)3.01-3.15(m,1H)
3.38(br.s.,1H)3.59(d,J＝12.55Hz,2H)3.67-3.84(m,6H)6.14(s,1H)6.81(d,J＝8.53Hz,
2H)7.20(d,J＝8.53Hz,2H)7.34(d,J＝8.03Hz,2H)7.46(d,J＝8.03Hz,2H))。
CHLOROFORM-d)δ＝ppm 0.97(d,J＝6.02Hz,1H)1.14(d,J＝8.03Hz,2H)1.25-1.48(m,2H)
1.87-2.09(m,2H)2.72-2.84(m,1H)3.01(d,J＝10.04Hz,1H)3.15-3.23(m,1H)3.28(d,J＝
6.02Hz,1H)3.45(br.s.,1H)3.62-4.11(m,7H)6.82(d,J＝10.04Hz,2H)7.18-7.25(m,2H)
7.29(d,J＝8.03Hz,2H)7.49(d,J＝8.03Hz,2H))的黄色固体混合物，以及黄色固体的中间体146(40mg)(1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)＝ppm0.99-1.16(m,3H)1.44(d,J＝11.04Hz,
1H)1.87(br.s.,3H)2.66(br.s.,1H)2.80-2.91(m,1H)2.92-3.00(m,1H)3.01-3.15(m,1H)
3.38(br.s.,1H)3.59(d,J＝12.55Hz,2H)3.67-3.84(m,6H)6.14(s,1H)6.81(d,J＝8.53Hz,
2H)7.20(d,J＝8.53Hz,2H)7.34(d,J＝8.03Hz,2H)7.46(d,J＝8.03Hz,2H))。
[0591] 中间体147：(8R,9S,10S)-9-(4-溴苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺
[0592] 将HCHO(17.48mg,215.42umol,16.04uL,37％purity,10.00eq)和MgSO4(51.86mg,430.83umol,20.00eq)加入中间体146(15.00mg,21.54μmol,1.00eq)在DCM(3.00mL)中的溶液中，之后加入NaBH(OAc)3(45.66mg,215.42umol,10.00eq)。将混合物在20℃搅拌2小时后，将所得混合物过滤并浓缩滤液。残渣通过制备型TLC(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，以给出浅黄色固体的化合物147(5.00mg,7.76umol,产率36.02％,80％纯度)。
[0593] E34的合成：(8R,9S,10S)-10-((二甲基胺基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E34)
[0594] 将乙炔基苯(2.97mg,29.10μmol,3.19μL,3.00eq)、Cs2CO3(12.64mg,38.80μmol,4.00eq)加入中间体147(5.00mg,9.70μmol,1.00eq)在CH3CN(500.00μL)中的溶液中，以N2脱气3次，随后加入XPhos Pd G3(821.04ug,0.97μmol,0.10eq)。在70℃搅拌3小时后，用水(3mL)稀释反应，用乙酸乙酯(5mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，以给出浅黄色色固体的化合物E34(5.00mg,
9.32μmol,产率96.04％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝ppm 1.16(d,J＝6.17Hz,3H)
1.70-1.94(m,4H)2.01(br.s.,6H)2.42-2.66(m,3H)2.83-2.94(m,1H)3.47(br.s.,2H)
3.53-3.62(m,1H)3.65-3.82(m,6H)6.04(s,1H)6.83(d,J＝8.82Hz,2H)7.24(d,J＝8.82Hz,
2H)7.33-7.39(m,3H)7.39-7.44(m,2H)7.50(d,J＝7.94Hz,2H)7.53-7.57(m,2H)。
9.32μmol,产率96.04％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝ppm 1.16(d,J＝6.17Hz,3H)
1.70-1.94(m,4H)2.01(br.s.,6H)2.42-2.66(m,3H)2.83-2.94(m,1H)3.47(br.s.,2H)
3.53-3.62(m,1H)3.65-3.82(m,6H)6.04(s,1H)6.83(d,J＝8.82Hz,2H)7.24(d,J＝8.82Hz,
2H)7.33-7.39(m,3H)7.39-7.44(m,2H)7.50(d,J＝7.94Hz,2H)7.53-7.57(m,2H)。
[0595] 实施例35：(8R,9R,10S)-10-(羟基甲基)-N-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E35”)
[0596]
[0597] 将乙炔基苯(12.55mg,122.85μmol,13.49μL,3.00eq)、Cs2CO3(53.37mg,163.80μmol,4.00eq)加入中间体144(20.00mg,40.95μmol,1.00eq)在CH3CN(1.00mL)中的溶液中，以N2脱气3次，随后加入XPhos Pd G3(3.47mg,4.10μmol,0.10eq)。将混合物在70℃搅拌16小时。LCMS显示反应物144完全耗尽且大部分是所希望的产物，用水(10mL)洗涤，用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取，在Na2SO4上干燥，浓缩以给出残渣。残渣通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18150*30 5u；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：乙腈)纯化，以给出白色固体的化合物E35(8.30mg,16.29μmol,产率39.77％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝1.10(d,J＝6.02Hz,3H)1.40(d,J＝13.55Hz,1H)1.76-2.01(m,3H)2.72-3.03(m,1H)2.76(br.s.,1H)3.43-3.81(m,9H)3.82-3.96(m,2H)6.03-6.11(m,1H)6.80-6.88(m,2H)
7.24(d,J＝9.03Hz,2H)7.32-7.40(m,3H)7.48-7.56(m,6H)。
7.24(d,J＝9.03Hz,2H)7.32-7.40(m,3H)7.48-7.56(m,6H)。
[0598] 实施例36：(3S,4R,8R,9S)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E36”)
[0599]
[0600]
[0601] 中间体150：(R)-2-(烯丙基胺基)-1-(4-溴苯基)-1-乙醇
[0602] 将烯丙胺(12.03ml,161mmol)加入含有(R)-2-溴苯基)氧杂环丙烷(8.0g,40.2mmol)的烧瓶内。将混合物在55℃搅拌20小时。在此时间之后的LCMS分析表明反应完全，将混合物冷却至室温，并在减压下蒸发有机溶剂。当将己烷加入残渣时形成白色固体，过滤并在高真空下干燥2小时，以获得所希望的白色固体产物(R)-2-(烯丙基胺基)-1-(4-溴苯基)-1-乙醇(9.66g,37.7mmol,产率94％)。反应不经进一步纯化而直接进行下一步。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.53-7.36(m,2H),7.29-7.13(m,2H),5.96-5.72(m,1H),5.28-5.02(m,2H),4.67(dd,J＝9.0,3.6Hz,1H),3.41-3.18(m,2H),2.87(dd,J＝12.2,3.6Hz,1H),
2.66(dd,J＝12.2,8.9Hz,1H)。
2.66(dd,J＝12.2,8.9Hz,1H)。
[0603] 中间体151：(R)-2-(烯丙基-(2-(4-溴苯基)-2-羟基乙基)胺基)乙腈
[0604] 在室温将K2CO3(7.82g,56.6mmol)和2-溴乙腈(7.88ml,113mmol)加入(R)-2-(烯丙基胺基)-1-(4-溴苯基)-1-乙醇(9.66g,37.7mmol)在无水乙腈(60ml)中的溶液中。将该异质混合物在氮气氛下在85℃搅拌18小时。在此时间之后的LCMS分析表明反应完全，将混合物冷却至室温。在减压下蒸发有机溶剂，以水(50ml)稀释，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机成分在Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩。残渣通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯/己烷＝20％至30％)纯化以给出浅黄色固体的(R)-2-(烯丙基-(2-(4-溴苯基)-2-羟基乙基)胺基)乙腈(9g,30.5mmol,产率81％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.54-7.40(m,2H),7.31-7.16(m,2H),
5.91-5.66(m,1H),5.43-5.22(m,2H),4.78-4.65(m,1H),3.79-3.54(m,2H),3.45-3.30(m,
1H),3.27-3.11(m,2H),2.86-2.74(m,1H),2.68-2.54(m,1H)。
5.91-5.66(m,1H),5.43-5.22(m,2H),4.78-4.65(m,1H),3.79-3.54(m,2H),3.45-3.30(m,
1H),3.27-3.11(m,2H),2.86-2.74(m,1H),2.68-2.54(m,1H)。
[0605] 中间体152：(R)-2-(烯丙基-(2-(4-溴苯基)-2-氯乙基)胺基)乙腈
[0606] 在0℃将亚硫酰氯(4.38ml,60.3mmol)滴加至吡啶(12.1ml,151mmol)在无水DMF(100ml)的溶液中。将混合物在0℃搅拌15分钟。在5分钟时间内，将在DCM(10ml)中的(R)-2-(烯丙基-(2-(4-溴苯基)-2-羟基乙基)胺基)乙腈(8.9g,30.2mmol)加入这一溶液中。将这一混合物在0℃搅拌30分钟，次数TLC表明反应完全。将饱和NaHCO3水溶液加入反应混合物中，将所得溶液剧烈搅拌10分钟，再转移到分液漏斗中。分离各层，水相以DCM萃取，合并的有机萃取物用盐水洗涤，以MgSO4干燥，过滤，并检验浓缩以获得粗产物。残渣通过柱层析(SiO2，乙酸乙酯/己烷＝0至20％)纯化，给出褐色固体的中间体(5.00g,9.87mmol,产率92％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 7.57-7.42(m,2H),7.32-7.23(m,2H),5.84-5.58(m,
1H),5.37-5.14(m,2H),4.91-4.71(m,1H),3.65-3.38(m,2H),3.26-2.94(m,4H)。
1H),5.37-5.14(m,2H),4.91-4.71(m,1H),3.65-3.38(m,2H),3.26-2.94(m,4H)。
[0607] 中间体153：(2R,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-甲腈
[0608] 将(R)-2-(烯丙基-(2-(4-溴苯基)-2-氯乙基)胺基)乙腈(0.55g,1.754mmol)和无水THF(10ml)充入100mL圆底烧瓶内以给出浅黄色溶液。将该烧瓶完全浸没在干冰/丙酮域中并冷却至-50℃。将LiHMDS(1M,THF溶液)滴加到这一冷冻过的溶液中。完成加入后，将反应在-50℃搅拌1小时。LCMS和TLC分析(EtOAc在己烷中的20％溶液，KMnO4染色)表明起始材料完全消失。用饱和NH4Cl水溶液处理反应混合物中，将所得溶液剧烈搅拌10分钟，再转移到分液漏斗中。分离各层，水机相以EtOAc萃取，合并的有机萃取物用盐水洗涤，以MgSO4干燥，过滤，并检验浓缩以获得粗产物。残渣通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯/己烷＝0至20％)纯化以给出两组主要馏分。第一组馏分(0.16g,0.577mmol,产率33％)给出副产物(2S,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-甲腈。第二组馏分(0.17g,0.613mmol,产率35％)在静置时固化，以给出所希望的产物(2R,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-甲腈。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59-7.45(m,2H),7.36-7.28(m,2H),5.91-5.69(m,1H),5.36-5.14(m,2H),4.39-4.26(m,1H),3.87-3.75(m,1H),3.60-3.40(m,2H),3.31-3.18(m,2H)。
[0609] 中间体154：((2R,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-基)甲胺
[0610] 在搅拌下，将DIBAL-H(2.41ml,13.51mmol)经由注射器缓慢地加入冷却至0℃的(2R,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-甲腈在DCM(23ml)中的溶液中。15分钟后，令反应在45分钟内回暖至室温。这一时间后，LCMS分析表明反应完全，将反应冷却至0℃，缓慢加入甲醇(1.366ml,33.8mmol)。将罗谢尔溶液(Rochelle's solution)(100mL)缓慢(需要小心，放热)加入这一混合物中。水相用DCM萃取，合并的有机相在MgSO4上干燥并减压浓缩以给出黄色油的(2R,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-甲腈，其不经纯化而直接用于下一步。
[0611] 中间体155：N-(((2R,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-基)甲基)-2-硝基苯磺酰胺
[0612] 将2,6-二甲基吡啶(1.797ml,15.51mmol)以及随后的2-硝基苯-1-磺酰氯(1.261g,5.69mmol)一次性加入冷却至0℃的中间体154(1.454g,5.171mmol)在DCM(26ml)中的溶液中。随后令该溶液回暖至室温并搅拌16小时。将水加入反应混合物中，并用DCM萃取水层。合并的有机萃取液在MgSO4上干燥，过滤，减压浓缩以提供粗产物。残渣通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯/己烷＝0至20％)纯化以给出中间体155(2.4g,产率100％)。
[0613] 中间体156：N-烯丙基-N-[[(2R,3S)-1-烯丙基-3-(4-溴苯基)氮杂环丁烷-2-基]甲基]-2-硝基苯磺酰胺
[0614] 将K2CO3(2.22g,16.08mmol,1.50eq)和3-溴丙-1-烯(1.95g,16.08mmol,1.39μL,1.50eq)加入中间体155(5.00g,10.72mmol,1.00eq)在DMF(10.00mL)中的溶液中。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应物156完全耗尽，大部分为所希望的产物，将反应混合物溶解在水(100mL)中，用DCM(20mL x 3)萃取，将有机层在Na2SO4上干燥，随后浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5:1)纯化，获得褐色固体的中间体
156(5.00g,9.87mmol，产率92.10％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.53(s,1H)
2.90(dd,J＝13.80,6.65Hz,1H)2.94-3.11(m,2H)3.18-3.26(m,1H)3.33(dd,J＝7.34,
2.20Hz,1H)3.41(dd,J＝13.80,5.14Hz,1H)3.47-3.63(m,2H)3.65-3.75(m,1H)3.88(dd,J＝16.00,5.96Hz,1H)4.95(dd,J＝17.07,1.13Hz,1H)5.03-5.14(m,2H)5.21(dd,J＝17.19,
1.51Hz,1H)5.48(ddt,J＝16.89,10.43,6.23,6.23Hz,1H)5.64-5.87(m,1H)7.35-7.40(m,
2H)7.42-7.49(m,2H)7.55-7.62(m,2H)7.64-7.72(m,2H)。
156(5.00g,9.87mmol，产率92.10％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.53(s,1H)
2.90(dd,J＝13.80,6.65Hz,1H)2.94-3.11(m,2H)3.18-3.26(m,1H)3.33(dd,J＝7.34,
2.20Hz,1H)3.41(dd,J＝13.80,5.14Hz,1H)3.47-3.63(m,2H)3.65-3.75(m,1H)3.88(dd,J＝16.00,5.96Hz,1H)4.95(dd,J＝17.07,1.13Hz,1H)5.03-5.14(m,2H)5.21(dd,J＝17.19,
1.51Hz,1H)5.48(ddt,J＝16.89,10.43,6.23,6.23Hz,1H)5.64-5.87(m,1H)7.35-7.40(m,
2H)7.42-7.49(m,2H)7.55-7.62(m,2H)7.64-7.72(m,2H)。
[0615] 中间体157：(3Z,8R,9S)-9-(4-溴苯基)-6-(2-硝基苯基)磺酰基-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯
[0616] 在N2气氛下，将第一代Hoveyda-Grubbs催化剂(812mg)加入中间体156(5.00g,9.87mmol,1.00eq)在甲苯(500.00mL)中的溶液中。将混合物在60℃油浴中搅拌16小时。另外加入第一代Hoveyda-Grubbs催化剂(1218mg)，再搅拌16小时。反应混合物浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至0:1)纯化，以给出黑色固体的中间体
157(1.20g,1.25mmol,产率12.71％,50％纯度)以及回收的SM(2.2g)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.62(br s,1H)3.15-3.31(m,2H)3.38(br s,1H)3.52(br d,J＝
16.98Hz,1H)3.60-3.79(m,3H)3.82-3.95(m,1H)4.03(br dd,J＝14.33,6.62Hz,1H)5.58-
5.67(m,1H)5.68-5.81(m,1H)7.30(br d,J＝7.94Hz,2H)7.45(br d,J＝8.16Hz,2H)7.56(br d,J＝7.28Hz,1H)7.61-7.67(m,2H)7.83(br d,J＝7.50Hz,1H)。
157(1.20g,1.25mmol,产率12.71％,50％纯度)以及回收的SM(2.2g)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.62(br s,1H)3.15-3.31(m,2H)3.38(br s,1H)3.52(br d,J＝
16.98Hz,1H)3.60-3.79(m,3H)3.82-3.95(m,1H)4.03(br dd,J＝14.33,6.62Hz,1H)5.58-
5.67(m,1H)5.68-5.81(m,1H)7.30(br d,J＝7.94Hz,2H)7.45(br d,J＝8.16Hz,2H)7.56(br d,J＝7.28Hz,1H)7.61-7.67(m,2H)7.83(br d,J＝7.50Hz,1H)。
[0617] 中间体158：(3Z,8R,9S)-9-(4-溴苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯
[0618] 将苯硫酚(293.67mg,2.67mmol,271.92μL,1.50eq)和Cs2CO3(694.74mg,2.13mmol,1.20eq)加入中间体157(1.70g,1.78mmol,1.00eq)在CH3CN(17.00mL)中的溶液中。在40℃搅拌16小时后，将反应混合物溶解在水(100mL)中，用DCM(30mL x 3)萃取，有机层在Na2SO4上干燥，随后浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至二氯甲烷:
甲醇＝10:1)纯化，以给出黑色油的中间体158(650.00mg,1.55mmol,产率87.18％,70％纯度)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.42-2.50(m,1H)2.52-2.61(m,1H)2.77-3.10(m,3H)3.22(br dd,J＝16.22,4.38Hz,1H)3.36-3.50(m,3H)3.53-3.69(m,3H)3.77(br t,J＝8.99Hz,1H)5.67-5.86(m,2H)7.21-7.28(m,2H)7.44(d,J＝8.33Hz,2H)。
甲醇＝10:1)纯化，以给出黑色油的中间体158(650.00mg,1.55mmol,产率87.18％,70％纯度)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.42-2.50(m,1H)2.52-2.61(m,1H)2.77-3.10(m,3H)3.22(br dd,J＝16.22,4.38Hz,1H)3.36-3.50(m,3H)3.53-3.69(m,3H)3.77(br t,J＝8.99Hz,1H)5.67-5.86(m,2H)7.21-7.28(m,2H)7.44(d,J＝8.33Hz,2H)。
[0619] 中间体159：(3Z,8R,9S)-9-(4-溴苯基)-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸-3-烯-6-甲酰胺
[0620] 在N2气氛下，在20℃将TEA(78.52mg,775.92μmol,107.56μL,0.50eq)和随后的1-异氰酸酯基-4-甲氧基苯(277.75mg,1.86mmol,239.44μL,1.20eq)加入中间体158(650.00mg,1.55mmol,1.00eq)在DCM(10.00mL)中的溶液中。将混合物在20℃搅拌1小时。
LCMS显示反应物158完全耗尽，大部分为所希望的产物，将反应混合物溶解在水(10mL)中，用DCM(5mL x 3)萃取，将有机层在Na2SO4上干燥，随后浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1:1)纯化，以给出得白色固体的中间体159(560.00mg,
1.27mmol，产率81.84％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.37-2.56(m,1H)3.24-
3.33(m,1H)3.34-3.41(m,1H)3.42-3.53(m,1H)3.54-3.64(m,2H)3.68-3.74(m,2H)3.77(s,
3H)3.86(br dd,J＝15.88,7.28Hz,1H)4.17(br d,J＝15.44Hz,1H)5.64(br d,J＝
11.69Hz,1H)5.74-5.91(m,1H)6.06(s,1H)6.82(d,J＝8.82Hz,2H)7.22(d,J＝9.04Hz,2H)
7.34(d,J＝8.16Hz,2H)7.48(d,J＝8.38Hz,2H)。
LCMS显示反应物158完全耗尽，大部分为所希望的产物，将反应混合物溶解在水(10mL)中，用DCM(5mL x 3)萃取，将有机层在Na2SO4上干燥，随后浓缩以给出残渣。残渣通过柱层析(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1:1)纯化，以给出得白色固体的中间体159(560.00mg,
1.27mmol，产率81.84％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.37-2.56(m,1H)3.24-
3.33(m,1H)3.34-3.41(m,1H)3.42-3.53(m,1H)3.54-3.64(m,2H)3.68-3.74(m,2H)3.77(s,
3H)3.86(br dd,J＝15.88,7.28Hz,1H)4.17(br d,J＝15.44Hz,1H)5.64(br d,J＝
11.69Hz,1H)5.74-5.91(m,1H)6.06(s,1H)6.82(d,J＝8.82Hz,2H)7.22(d,J＝9.04Hz,2H)
7.34(d,J＝8.16Hz,2H)7.48(d,J＝8.38Hz,2H)。
[0621] 中间体160a和160b：(3S,4R,8R,9S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(160a)；
[0622] (3R,4S,8R,9S)-9-(4-溴苯基)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(160b)
[0623] 在-78℃将NMO(198.63mg,1.69mmol,178.95μL,1.50eq)和OsO4(2.87mg,11.30μmol,0.59μL,0.01eq)加入中间体159(500.00mg,1.13mmol,1.00eq)在丙酮(5.00mL)和H2O(500.00μL)中的溶液中。随后将所得反应混合物在20℃搅拌0.5小时。TLC显示反应物完全耗尽，观察到两个所希望的产物，浓缩该反应混合物以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，石油醚/乙酸乙酯)纯化。获得白色固体的中间体160a(100.00mg,209.93μmol,产率61.92％)(1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.17-2.37(m,1H)2.63(br d,J＝13.16Hz,
1H)2.90(br dd,J＝13.37,8.55Hz,1H)3.23(br d,J＝15.79Hz,1H)3.39-3.45(m,1H)3.46-
3.52(m,2H)3.58(br d,J＝5.26Hz,2H)3.73-3.83(m,5H)3.95(br s,1H)4.11(br dd,J＝
15.57,5.04Hz,1H)4.25(br s,1H)6.81(d,J＝8.77Hz,2H)7.16(d,J＝8.77Hz,2H)7.32(d,J＝8.33Hz,2H)7.44(d,J＝8.33Hz,2H)7.92(br s,1H))和白色固体的中间体160b
(275.00mg,577.29μmol,产率72.98％)(1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.27(br s,
1H)2.79(br d,J＝14.03Hz,1H)2.93-3.05(m,1H)3.27-3.52(m,1H)3.45-3.52(m,3H)3.54-
3.70(m,5H)3.73-3.82(m,4H)6.79(d,J＝9.21Hz,2H)7.21(d,J＝8.77Hz,2H)7.25-7.30(m,
1H)7.27(d,J＝6.82Hz,1H)7.28-7.31(m,1H)7.47(d,J＝8.33Hz,2H))。
1H)2.90(br dd,J＝13.37,8.55Hz,1H)3.23(br d,J＝15.79Hz,1H)3.39-3.45(m,1H)3.46-
3.52(m,2H)3.58(br d,J＝5.26Hz,2H)3.73-3.83(m,5H)3.95(br s,1H)4.11(br dd,J＝
15.57,5.04Hz,1H)4.25(br s,1H)6.81(d,J＝8.77Hz,2H)7.16(d,J＝8.77Hz,2H)7.32(d,J＝8.33Hz,2H)7.44(d,J＝8.33Hz,2H)7.92(br s,1H))和白色固体的中间体160b
(275.00mg,577.29μmol,产率72.98％)(1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.27(br s,
1H)2.79(br d,J＝14.03Hz,1H)2.93-3.05(m,1H)3.27-3.52(m,1H)3.45-3.52(m,3H)3.54-
3.70(m,5H)3.73-3.82(m,4H)6.79(d,J＝9.21Hz,2H)7.21(d,J＝8.77Hz,2H)7.25-7.30(m,
1H)7.27(d,J＝6.82Hz,1H)7.28-7.31(m,1H)7.47(d,J＝8.33Hz,2H))。
[0624] E36的合成：(3S,4R,8R,9S)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(E36)
[0625] 在N2气氛下将Cs2CO3(27.36mg,83.96μmol,4.00eq)和Xphos Pd G3(1.78mg,2.10μmol,0.10eq)加入中间体160a(10.00mg,20.99μmol,1.00eq)和乙炔基苯(6.43mg,62.97μmol,6.91μL,3.00eq)在CH3CN(150.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示反应物1完全耗尽，且大部分为所希望的产物。过滤反应混合物，滤饼用DCM(10mL)洗涤，浓缩滤液以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化，通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动1
相B：乙腈)进一步纯化，以给出白色固体的化合物E36(4.00mg,8.04μmol,产率38.30％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.31-2.44(m,1H)2.73(br d,J＝13.45Hz,1H)2.92-2.99(m,1H)3.33(br d,J＝15.66Hz,1H)3.57(br t,J＝7.39Hz,2H)3.70(br d,J＝4.63Hz,1H)
3.75-3.85(m,4H)3.87-3.94(m,1H)4.00(br s,1H)4.16(br d,J＝16.32Hz,1H)6.83(br d,J＝8.82Hz,2H)7.21(br d,J＝8.82Hz,2H)7.35(br s,3H)7.44(br d,J＝7.94Hz,2H)7.49-
7.59(m,4H)7.82(br s,1H)。
相B：乙腈)进一步纯化，以给出白色固体的化合物E36(4.00mg,8.04μmol,产率38.30％)。H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.31-2.44(m,1H)2.73(br d,J＝13.45Hz,1H)2.92-2.99(m,1H)3.33(br d,J＝15.66Hz,1H)3.57(br t,J＝7.39Hz,2H)3.70(br d,J＝4.63Hz,1H)
3.75-3.85(m,4H)3.87-3.94(m,1H)4.00(br s,1H)4.16(br d,J＝16.32Hz,1H)6.83(br d,J＝8.82Hz,2H)7.21(br d,J＝8.82Hz,2H)7.35(br s,3H)7.44(br d,J＝7.94Hz,2H)7.49-
7.59(m,4H)7.82(br s,1H)。
[0626] 实施例37：(3R,4S,8R,9S)-3,4-二羟基-N-(4-甲氧基苯基)-9-[4-(2-苯基乙炔基)苯基]-1,6-二氮杂双环[6.2.0]癸烷-6-甲酰胺(“E37”)
[0627]
[0628] 在N2气氛下，在搅拌下将Cs2CO3(27.36mg,83.97μmol,4.00eq)和Xphos Pd G3(1.78mg,2.10μmol,0.10eq)加入中间体160b(10.00mg,20.99μmol,1.00eq)和乙炔基苯(6.43mg,62.98μmol,6.92μL,3.00eq)在CH3CN(150.00mL)中的溶液中。将混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示反应物160b完全耗尽，且大部分为所希望的产物。过滤反应混合物，滤饼用DCM(5mL)洗涤，浓缩滤液以给出残渣。残渣通过制备型TLC(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化，通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u；流动相A：水(0.225％甲酸)，流动相B：乙腈)进一步纯化，以给出白色固体的化合物E37(5.00mg,10.05μmol,产率47.87％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 2.32(br s,1H)2.60(br s,2H)
2.87(br d,J＝14.11Hz,1H)3.06(dd,J＝14.00,6.95Hz,1H)3.29-3.48(m,2H)3.57-3.65(m,2H)3.71(br d,J＝5.51Hz,4H)3.77(s,3H)3.80-3.84(m,1H)6.66(br s,1H)6.82(d,J＝
8.82Hz,2H)7.20-7.26(m,2H)7.27(s,1H)7.33-7.43(m,5H)7.49-7.57(m,4H)。
2.87(br d,J＝14.11Hz,1H)3.06(dd,J＝14.00,6.95Hz,1H)3.29-3.48(m,2H)3.57-3.65(m,2H)3.71(br d,J＝5.51Hz,4H)3.77(s,3H)3.80-3.84(m,1H)6.66(br s,1H)6.82(d,J＝
8.82Hz,2H)7.20-7.26(m,2H)7.27(s,1H)7.33-7.43(m,5H)7.49-7.57(m,4H)。
[0629] 实施例38：(3R,4S,8R,9S,10S)-N-(4-环丙氧基苯基)-10-((二甲基胺基)甲基)-3,4–二羟基-9-(4-(苯基乙炔基)苯基)-1,6-二氮杂双环[6.2.0]硅烷-6-甲酰胺(E38)[0630] 以与化合物E1的合成相同的其它途径实施化合物E38的合成，但使用中间体4b替代中间体4a。随后进行如上所述的相同反应步骤。
[0631] 生物学活性的测量
[0632] 实施例39：恶性疟原虫血液阶段体外培养和检验
[0633] 从疟疾研究和参考试剂研究中心(Malaria Research and Reference Reagent Resource Center)(MR4)获得恶性疟原虫株(Dd2、3D7、D6、K1、NF54、V1/3、HB3、7G8、FCB和TM90C2B)。在93％N2、4％CO2、3％O2的气氛下，在37℃的完全培养基(10.4g/L RPMI 1640、5.94g/L HEPES、5g/L albumax II、50mg/L次黄嘌呤、2.1g/L碳酸氢钠、10％人类血清和
43mg/L庆大霉素)中，用O型人血维持疟原虫分离物。在培养基中培养寄生虫，直到寄生虫血症达到3％至8％。通过检查来自吉姆沙染色剂(Giemsa)染色的血液拭片的至少500个血红细胞，确定寄生虫血症。对于所筛查的化合物，使用培养基创建2.0％寄生虫血症和2.0％红细胞比容的寄生虫稀释物。将25μl的培养基分配到黑色、透明底的384孔板内，将每一化合物在DMSO中的100nl溶液与对照化合物(甲氟喹)一起转移到检验板内。之后，将寄生虫在培养基中的25μl悬浮液分配到检验板中，给定的最终寄生虫血症为1％且最终红细胞比容为
1％。将检验板在37℃温育72小时。将由10×SYBR Green I(Invitrogen；以10,000×浓度供给)在裂解缓冲液(20mM Tris-HCl、5mM EDTA,0.16％(w/v)皂素、1.6％(v/v)Triton X-
100)中组成的10μl检测试剂分配到检验板内。为实现最优染色，将检验板在黑暗中在室温放置24小时。使用具备具有485nm激发和530nm发射设定的505分色镜的Envision
(PerkinElmer)读取检验板。
43mg/L庆大霉素)中，用O型人血维持疟原虫分离物。在培养基中培养寄生虫，直到寄生虫血症达到3％至8％。通过检查来自吉姆沙染色剂(Giemsa)染色的血液拭片的至少500个血红细胞，确定寄生虫血症。对于所筛查的化合物，使用培养基创建2.0％寄生虫血症和2.0％红细胞比容的寄生虫稀释物。将25μl的培养基分配到黑色、透明底的384孔板内，将每一化合物在DMSO中的100nl溶液与对照化合物(甲氟喹)一起转移到检验板内。之后，将寄生虫在培养基中的25μl悬浮液分配到检验板中，给定的最终寄生虫血症为1％且最终红细胞比容为
1％。将检验板在37℃温育72小时。将由10×SYBR Green I(Invitrogen；以10,000×浓度供给)在裂解缓冲液(20mM Tris-HCl、5mM EDTA,0.16％(w/v)皂素、1.6％(v/v)Triton X-
100)中组成的10μl检测试剂分配到检验板内。为实现最优染色，将检验板在黑暗中在室温放置24小时。使用具备具有485nm激发和530nm发射设定的505分色镜的Envision
(PerkinElmer)读取检验板。
[0634] 遵循上述方案，测量化合物E1至E38对抗恶性疟原虫Dd2的50％有效浓度(EC50)，结果显示在下表4中，+++对应于EC50小于50nM，++对应于EC50从50nM至250nM，而+对应于EC50>250nM。
[0635] 表4
[0636]
[0637]
[0638] 实施例40：鼠疟原虫肝脏阶段体外检验
[0639] 在标准组培温育箱(37℃，5％CO2)中，将HepG2细胞(ATCC)在DMEM、10％(v/v)FBS(Sigma)和1％(v/v)抗生素-抗霉菌素中维持。从纽约大学兰格尼医学中心昆虫馆(New York University Langone Medical Center Insectary)获得感染恶性疟原虫(ANKA GFP–luc)的斯氏按蚊(A.Stephensi)。以每孔约17,500个将HepG2细胞加入384孔微量滴定板中用于检验，进行两个平行实验。在37℃温育18至24小时后，更换培养基并加入化合物。1小时后，将从现解剖的蚊子获得的寄生虫加入该板(每孔4,000个寄生虫)，将板以1,000r.p.m.旋转10分钟，随后在37℃温育。最终检验体积为30μl。在37℃温育48小时后，将Bright-Glo(Promega)加入寄生虫板以测量相对发光强度。使用EnVision(PerkinElmer)系统评估各板的相对信号强度。
[0640] 实施例41：恶性疟原虫肝脏阶段体外检验
[0641] 微图案共培养(Micropatterned co-culture,MPCC)是原代人类肝细胞组织化为集落并被支持间质细胞环绕的体外共培养系统。这一格式的肝细胞维持功能表型长达4至6周而不增殖，如通过主要的肝特异性功能和基因表达所测。简单地说，用鼠尾I型胶原蛋白(50μg/mL)均质地涂覆96孔板，对该板进行软光刻处理以将胶原蛋白图案化为介导选择性肝细胞粘附的500μm岛状微域。为了创建MPCC，通过在4℃以100g将低温冻存的原代人类肝细胞(BioreclamationIVT)离心6分钟而形成球丸，使用台盼蓝(Trypan blue)排除法评定存活率(典型为70％至90％)，并种植在微图案胶原蛋白板上(每孔含有组织化为500μM集落的大约10,000个肝细胞)的具有1％青霉素-链霉素的无血清DMEM中。2至3小时后，用具有1％青霉素-链霉素的无血清DMEM洗涤细胞，并替换为人类肝细胞培养基48。在肝细胞种植
24小时后，种植3T3-J2小鼠胚胎成纤维细胞(每孔7,000个细胞)。
24小时后，种植3T3-J2小鼠胚胎成纤维细胞(每孔7,000个细胞)。
[0642] 在肝细胞种植1天后，用75,000个孢子体(NF54)(Johns HopkinsUniversity)感染MPCC。在37℃和5％CO2温育3小时后，用PBS洗涤一次孔，并加入对应的化合物。每天投放培养基。在感染3.5天后固定样品。对于免疫荧光染色，在4℃用-20℃甲醇将MPCC固定10分钟，用PBS洗涤两次，用在PBS中的2％BSA溶液封闭，用鼠抗恶性疟原虫Hsp70抗体(克隆体4C9，2μg/mL)在室温下温育1小时。样品用PBS洗涤，随后用偶联有Alexa 488的二级山羊抗鼠在室温下温育1小时。样品用PBS洗涤，使用DNA染料Hoechst 33258(Invitrogen；1:1,000)复染，并使用封片剂(fluoromount G(Southern Biotech))封固到载玻片上。用Nikon Eclipse Ti荧光显微镜抓取图像。测量发育中的肝脏阶段寄生虫的直径，并用来计算对应的面积。
[0643] 实施例42：恶性疟原虫细胞质PheRS生化检验
[0644] 从PlasmoDB(http://plasmodb.org/plasmo/)获得恶性疟原虫细胞质PheRS的α-亚基(PF3D7_0109800)和β-亚基(PF3D7_1104000)的蛋白质序列。使用Nco1和Kpn1位点将被优化用于大肠杆菌表达的全长度α-亚基和β-亚基基因序列克隆入pETM11(卡那霉素抗药性)和pETM20(氨苄西林抗药性)表达载体内，并共转化为大肠杆菌B834细胞。通过加入0.5mM的异丙基β-d-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱发蛋白质表达，令细胞在37℃生长，直到OD600为0.6至0.8为止。在诱发之后，令它们在18℃再生长20小时。通过在5,000g离心20分钟而分离细胞，将细菌球丸悬浮在由50mM Tris–HCl(pH 7.5)、200mM NaCl、4mMβ-巯基乙醇、15％(v/v)甘油、0.1mg/mL溶菌酶和1mM苯基甲基磺酰氟(PMSF)组成的缓冲液中。通过超声处理裂解细胞，以20,000g离心1小时澄清。将上清液施加到预封装的NiNTA柱(GE Healthcare)，使用洗脱缓冲液(50mM Tris–HCl(pH 7.5)、80mM NaCl、4mMβ-巯基乙醇、15％(v/v)甘油、1M咪唑)进行梯度混合物洗脱而洗出结合蛋白。蓄积纯馏分，并加载到肝素柱上进行进一步纯化。再一次使用梯度肝素洗脱缓冲液(50mM Tris–HCl(pH 7.5)、1M NaCl、4mMβ-巯基乙醇、15％(v/v)甘油)洗出结合蛋白。再一次蓄积纯馏分，在含有50mM Tris–HCl(pH
7.5)、200mM NaCl、4mMβ-巯基乙醇、1mM DTT和0.5mM EDTA的缓冲液中透析过夜。将TEV蛋白酶(蛋白酶与蛋白质的比率为1:50)加入蛋白质样品中，在20℃温育24小时以移除多组氨酸标签。通过使用GE HiLoad 60/600Superdex柱的凝胶渗透色谱进一步纯化在50mM Tris–HCl(pH 7.5)、200mM NaCl、4mMβ-巯基乙醇、1mM MgCl2中的蛋白质。收集洗出的蛋白质(恶性疟原虫cPheRS的异质二聚体)，通过SDS–PAGE测定纯度，并在-80℃储存。
7.5)、200mM NaCl、4mMβ-巯基乙醇、1mM DTT和0.5mM EDTA的缓冲液中透析过夜。将TEV蛋白酶(蛋白酶与蛋白质的比率为1:50)加入蛋白质样品中，在20℃温育24小时以移除多组氨酸标签。通过使用GE HiLoad 60/600Superdex柱的凝胶渗透色谱进一步纯化在50mM Tris–HCl(pH 7.5)、200mM NaCl、4mMβ-巯基乙醇、1mM MgCl2中的蛋白质。收集洗出的蛋白质(恶性疟原虫cPheRS的异质二聚体)，通过SDS–PAGE测定纯度，并在-80℃储存。
[0645] 使用如Nature 538,344–349(20October 2016)doi:10.1038/nature19804所述的体外转录方法合成来自恶性疟原虫的核编码tRNAPhe。如Biochem.J.465,459–469(2015)中所述，实施对恶性疟原虫细胞质PheRS的氨酰化和酶抑制检验。在3℃，在含有30mM HEPES(pH 7.5)、150mM NaCl、30mM KCl、50mM MgCl2、1mM DTT、100μM ATP、100μM L-苯丙氨酸、15μM恶性疟原虫tRNAPhe、2U/mL大肠杆菌无机焦磷酸酶(NEB)和500nM重组恶性疟原虫PheRS的缓冲液中实施酶学检验。通过加入40mM EDTA并随之转移到冰上而在不同的时间点终止反应。使用重组麦芽糖结合蛋白作为阴性对照。实施cPheRS抑制检验，在检验缓冲液中使用的抑制剂浓度为：对于强结合剂，0.01nM、0.1nM、1nM、10nM、100nM、1μM、5μM和10μM；对于若结合剂，1nM、10nM、100nM、1μM、10μM、100μM和500μM。实施两次酶学实验和抑制实验，每次三组平行实验。
[0646] 实施例43：哺乳动物细胞的细胞毒性检验
[0647] 从ATCC获得哺乳动物细胞(HepG2、A549和HEK293)，在具有10％FBS和1％(v/v)抗生素-抗霉菌素的DMEM中进行常规培养。对于细胞毒性检验，将1×106细胞种植在384孔板中，1天后用化合物处理。用递增剂量的化合物将细胞处理72小时，使用Cell-Titer Glo(Promega)测量存活率。所有细胞系均使用通用支原体检测试剂盒(ATCC)测试其支原体污染。
[0648] 实施例44：体外ADME/PK和安全性检验
[0649] 根据工业标准技术，实施体外表征检验(蛋白质结合、微粒体稳定性、肝细胞稳定性、细胞色素P450(CYP)抑制、以及水溶性)。使用标准技术，使用Q-Patch系统实施离子通道抑制研究。
[0650] 实施例45：鼠疟原虫血液阶段体内检验
[0651] 在治疗之前24小时，向CD-1小鼠(每个实验组n＝4；雌性；6至7周龄；20至24g，查尔斯河实验室(Charles River))静脉注射接种大约1×105个鼠疟原虫(ANKA GFP-luc)血液阶段寄生虫，并口服给药化合物(在第0小时)。通过体内成像系统(IVIS SpectrumCT,PerkinElmer)撷取生物发光信号(在成像之前大约10分钟，静脉注射150mg/kg的荧光素)，从而监控寄生虫血症。此外，周期性地从每只小鼠获取血液拭片，以Giemsa染色，在显微镜下观察进行血液寄生虫血症的目视检测。对寄生虫血症超过25％的动物实施人类道安乐死。
[0652] 实施例46：鼠疟原虫病因预防体内检验
[0653] 向CD-1小鼠(每个实验组n＝4；雌性；6至7周龄；20至24g，查尔斯河实验室(Charles River))静脉注射接种大约1×105个来自现解剖的斯氏按蚊的鼠疟原虫(ANKA GFP-luc)孢子体。感染之后，立即用一次口服剂量的化合物治疗小鼠；如用于鼠疟原虫红血球阶段检验所述监控感染。对于时程实验，将化合物治疗(一次口服剂量为10mg/kg)的时间在从感染之前5天到感染之后2天范围内变动。
[0654] 实施例47：鼠疟原虫传播阶段体内检验
[0655] 在使用媒介物或化合物(在第0天)治疗之前，用鼠疟原虫(ANKA GFP-luc)将CD-1小鼠(每个实验组n＝3；雌性；6至7周龄；21至24g，查尔斯河实验室(Charles River))感染96小时。在第2天，允许雌性斯氏按蚊叮咬小鼠20分钟。1周后(第9天)，解剖取出蚊子的中肠，在显微镜下点数卵囊(12.5×放大)。
[0656] 实施例48：恶性疟原虫血液阶段体内检验
[0657] 如PLoS One 3,e2252(2008)所述，选择适用于体内的恶性疟原虫(3D7HLH/BRD)。简单地说，每天向NSG小鼠(每个实验组n＝2；雌性；4至5周龄；19至21g；杰克逊实验室(The Jackson Laboratory))腹膜注射1ml的人类红细胞(O型，50％血细胞比容，具有5％albumax的50％RPMI 1640)，以生成具有人类源化循环红细胞的小鼠(huRBC NSG)。用大约2×107个血液阶段的疟原虫3D7HLH/BRD(FASEB J.25,3583–3593(2011))经静脉感染huRBC NSG小鼠，在感染5周后达到>1％寄生虫血症。三次体内传代后，冷冻寄生虫并用于实验中。用1×
107个血液阶段的恶性疟原虫3D7HLH/BRD感染大约48小时后，平均寄生虫血症为大约
0.4％。经口服一次剂量的化合物而治疗huRBC NSG小鼠，并通过IVIS撷取生物发光信号(在成像之前大约10分钟，腹膜注射150mg/kg的荧光素)而对寄生虫血症进行30天的监控。
107个血液阶段的恶性疟原虫3D7HLH/BRD感染大约48小时后，平均寄生虫血症为大约
0.4％。经口服一次剂量的化合物而治疗huRBC NSG小鼠，并通过IVIS撷取生物发光信号(在成像之前大约10分钟，腹膜注射150mg/kg的荧光素)而对寄生虫血症进行30天的监控。
[0658] 实施例49：恶性疟原虫传播阶段体内检验
[0659] 使用血液阶段的恶性疟原虫将huRBCNSG小鼠(每个实验组n＝2；雌性；4至5周龄；18至20g；Jackson Laboratory)感染2周，以允许成熟的配子母细胞发育。然后，用一次口服剂量的化合物治疗小鼠。进行11天的血液样本采集。对于寄生虫阶段的分子检测，从对照小鼠和治疗小鼠获得40μl血液。简单地说，使用具有基因组DNA消除柱的RNeasy Plus试剂盒从血液样本分离总RNA。使用SuperScript III第一链合成系统(Life Technologies)从所提取的RNA实施第一链cDNA合成。使用Sci.Transl.Med.6,244re5(2014)中所述的阶段特异性qRT-PCR检验将寄生虫阶段定性。设计引物以测量PF3D7_0501300(环阶段的寄生虫)、PF3D7_1477700(不成熟的配子母细胞)和PF3D7_1031000(成熟的配子母细胞)的转录水平。
将用于PF3D7_1120200(恶性疟原虫UCE)转录的引物用作被持续表达的寄生虫标记物。使用cDNA在含有最终浓度为250nM的各基因引物的20μl总反应体积实施检验。在Viia7qRT–PCR机(Life Technologies)上使用SYBR Green预混物(Applied Biosystems)在下述反应条件下实施扩增：在95℃的1个循环×10分钟，；以及，在95℃的40个循环×1秒和在60℃的20秒。
每个cDNA样本进行三次平行实验，并使用Ct均值进行分析。在每种标记物截留点(阴性对照)之上获得的Ct值视为对于特异性转录物的存在来说为阴性。也使用相同的成套引物测试来自接种寄生虫之前的各小鼠的血液样本的“背景噪声”。从任何样本中均未检出扩增。
将用于PF3D7_1120200(恶性疟原虫UCE)转录的引物用作被持续表达的寄生虫标记物。使用cDNA在含有最终浓度为250nM的各基因引物的20μl总反应体积实施检验。在Viia7qRT–PCR机(Life Technologies)上使用SYBR Green预混物(Applied Biosystems)在下述反应条件下实施扩增：在95℃的1个循环×10分钟，；以及，在95℃的40个循环×1秒和在60℃的20秒。
每个cDNA样本进行三次平行实验，并使用Ct均值进行分析。在每种标记物截留点(阴性对照)之上获得的Ct值视为对于特异性转录物的存在来说为阴性。也使用相同的成套引物测试来自接种寄生虫之前的各小鼠的血液样本的“背景噪声”。从任何样本中均未检出扩增。
[0660] 实施例50：恶性疟原虫肝脏阶段体内检验
[0661] 向FRG敲除的C57BL/6(人体培育，>70％)小鼠(huHep FRG敲除；每个实验组n＝2；雌性；5.5至6月龄；19至21g；Yecuris)静脉接种大约1×105个恶性疟原虫(NF54HT-GFP-luc)孢子体，并在接种一天后给药一次10mg/kg口服剂量的化合物。通过IVIS每天监控感染。在接种5天后，启动人类红细胞(0.4ml，O型，50％血细胞比容，具有5％albumax的50％RPMI 1640)的每天移植。对于qPCR分析，在接种7天后采集血液样本(40μl)。对于血液阶段寄生虫的分子检测，从对照小鼠和治疗小鼠获得40μl血液。简单地说，使用具有基因组DNA消除柱的RNeasy Plus试剂盒从血液样本分离总RNA。使用SuperScript III第一链合成系统(Life Technologies)从所提取的RNA实施第一链cDNA合成。使用如PLOS
Comput.Biol.9,e1003392(2013)中所述的高度阶段特异性qRT–PCR检验来量化血液阶段寄生虫的存在。设计引物以测量PF3D7_1120200(恶性疟原虫UCE)的转录水平。使用cDNA在含有最终浓度为250nM的各基因引物的20μl总反应体积内实施检验。在Viia7 qRT–PCR机(Life Technologies)上使用SYBR Green预混物(Applied Biosystems)实施扩增，下述反应条件如下：在95℃的1个循环×10分钟，；以及，在95℃的40个循环×1秒和在60℃的20秒。
每个cDNA样本进行三次平行实验，并使用Ct均值进行分析。在每种标记物截留点(阴性对照)之上获得的Ct值视为对于特异性转录物的存在来说为阴性。在接种寄生虫之前，也使用相同的成套引物测试来自各小鼠的血液样本的“背景噪声”。从任何样本中均未检出扩增。
Comput.Biol.9,e1003392(2013)中所述的高度阶段特异性qRT–PCR检验来量化血液阶段寄生虫的存在。设计引物以测量PF3D7_1120200(恶性疟原虫UCE)的转录水平。使用cDNA在含有最终浓度为250nM的各基因引物的20μl总反应体积内实施检验。在Viia7 qRT–PCR机(Life Technologies)上使用SYBR Green预混物(Applied Biosystems)实施扩增，下述反应条件如下：在95℃的1个循环×10分钟，；以及，在95℃的40个循环×1秒和在60℃的20秒。
每个cDNA样本进行三次平行实验，并使用Ct均值进行分析。在每种标记物截留点(阴性对照)之上获得的Ct值视为对于特异性转录物的存在来说为阴性。在接种寄生虫之前，也使用相同的成套引物测试来自各小鼠的血液样本的“背景噪声”。从任何样本中均未检出扩增。
[0662] 实施例51：微小隐孢子虫体内检验
[0663] 使用慢性无症状微小隐孢子虫感染的NOD SCID gamma小鼠模型测试化合物的体5
内效能。通过在断奶后5至7天口服灌胃而使用约1x10 微小隐孢子虫卵囊感染NOD SCID gamma小鼠。感染1周后，被感染动物的粪便中开始出现脱除的卵囊，者通过定量PCR(qPCR)测量。基于正对照化合物巴龙霉素的经验，每个实验组需要四只小鼠以实现80％有效，从而检测在给药化合物4天后寄生虫脱除的80％减少量。除了实验药物方案组之外，每个实验还包括额外的阴性对照组(管饲DMSO/甲基纤维素载剂)和阳性对照组(巴龙霉素，2000mg/kg，每天一次)。在断奶(第-6天)5至7天后感染小鼠，在1周后(第0天)证实感染，在第1至4天通过口服灌胃给药实验化合物。给药频率如标注。在第5天通过qPCR测量粪便中的脱除卵囊，从而评估治疗效力。
内效能。通过在断奶后5至7天口服灌胃而使用约1x10 微小隐孢子虫卵囊感染NOD SCID gamma小鼠。感染1周后，被感染动物的粪便中开始出现脱除的卵囊，者通过定量PCR(qPCR)测量。基于正对照化合物巴龙霉素的经验，每个实验组需要四只小鼠以实现80％有效，从而检测在给药化合物4天后寄生虫脱除的80％减少量。除了实验药物方案组之外，每个实验还包括额外的阴性对照组(管饲DMSO/甲基纤维素载剂)和阳性对照组(巴龙霉素，2000mg/kg，每天一次)。在断奶(第-6天)5至7天后感染小鼠，在1周后(第0天)证实感染，在第1至4天通过口服灌胃给药实验化合物。给药频率如标注。在第5天通过qPCR测量粪便中的脱除卵囊，从而评估治疗效力。
[0664] 实施例52：微小隐孢子虫体外EC50检验
[0665] 从ATCC获得人类回盲肠腺癌(HCT-8)细胞，并用RPMI 1640培养基维持在T-75组培烧瓶中，该培养基具有HEPES、丙酮酸钠(1mM)和L-谷氨酰胺(ATCC)并用10％马血清(ATCC)和120U/ml青霉素和120μg/ml链霉素补充。将细胞以8,850细胞/孔的密度植入384孔微孔、经组培处理的、黑色壁透明底的微孔板(BD Falcon)中，并令其生长至汇合。随后用悬浮在接种基质(没有马血清的RPMI 1640)中的5.5x 103个准备好的微小隐孢子虫卵囊(Bunchgrass Farms,Deary,ID)接种。通过下述先前所述方案(J.Eukaryot.Microbiol.46:
56S–57S)，将卵囊做好脱除准备。简单地说，将卵囊在37℃用10mM Hcl处理10分钟，离心，用牛磺胆酸钠在具有Ca2+和Mg2+的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的2mM溶液(Sigma-Aldrich)处理。
将悬浮液在16℃温育10分钟，随后在接种基质中稀释，并加入各孔中。将被感染的细胞在37℃温育3小时，此时加入等体积的含有20％马血清的生长基质(总血清浓度20％)。稀释化合物，并以0.12、0.37、1.1、3.3和10μM的固定剂量(每个浓度，n＝14)检验化合物以生成EC50曲线。就最终EC50曲线而言，留下三个孔不进行感染但用各自对应浓度的化合物处理以评估背景染色。所有曲线均使用log[抑制剂]vs.应答_可变斜率方程在GraphPad Prism(方程式3)中生成，将下限设定为等于0。
56S–57S)，将卵囊做好脱除准备。简单地说，将卵囊在37℃用10mM Hcl处理10分钟，离心，用牛磺胆酸钠在具有Ca2+和Mg2+的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的2mM溶液(Sigma-Aldrich)处理。
将悬浮液在16℃温育10分钟，随后在接种基质中稀释，并加入各孔中。将被感染的细胞在37℃温育3小时，此时加入等体积的含有20％马血清的生长基质(总血清浓度20％)。稀释化合物，并以0.12、0.37、1.1、3.3和10μM的固定剂量(每个浓度，n＝14)检验化合物以生成EC50曲线。就最终EC50曲线而言，留下三个孔不进行感染但用各自对应浓度的化合物处理以评估背景染色。所有曲线均使用log[抑制剂]vs.应答_可变斜率方程在GraphPad Prism(方程式3)中生成，将下限设定为等于0。
[0666] 遵循上述方案，测量了几种具有式(I)结构的化合物对抗微小隐孢子虫的50％有效浓度(EC50)，结果显示在下表5中。
[0667] 表5
[0668]
[0669]
[0670] 其它具体实施例
[0671] 本文中引用的每一篇专利、专利申请和公开的公开内容通过引用而以其整体并入本文。美国专利公开2016/0289235也通过引用并入本文。在特定的具体实施例中，本发明的化合物不是美国专利公开2016/0289235的表1中描述的化合物。
[0672] 尽管公开内容提供了具体的具体实施例，但应理解，该公开内容可进一步修订且本申请旨在涵盖以下本文所述原理的任何变更、用途或使用，该原理通常还包括进入本揭示内容所属领域内的已知或自定义实践且可用于前文详述的基本特征的对本揭示内容的悖离。
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