一种提高植物乳杆菌在口香糖制备及贮藏过程中稳定性的方法
阅读：1发布：2020-06-26
专利汇可以提供一种提高植物乳杆菌在口香糖制备及贮藏过程中稳定性的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种提高 植物 乳杆菌在口香糖制备及贮藏过程中 稳定性 的方法，属于 微 生物 技术领域。此方法为在菌液冻干前进行热应激处理，增强菌种对环境的耐受能 力 ，同时添加保护剂和 包埋剂 ，减少菌种在冻干过程中的损伤；利用此方法制备得到的 预防 龋齿的 益生菌 制备存活率90％以上，且口香糖在室温下存储6个月后，存活率仍能达到50％以上。，下面是一种提高植物乳杆菌在口香糖制备及贮藏过程中稳定性的方法专利的具体信息内容。
1.一种提高植物乳杆菌在益生菌口香糖制备及贮藏过程中稳定性的方法，其特征在于，是先对添加保护剂的植物乳杆菌菌液进行热应激处理，再将热应激处理后的菌液与包埋剂混合。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述保护剂包含脱脂乳粉、海藻糖、葡萄糖、水苏糖、菊糖、果糖、麦芽糖、乳糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、硫酸镁、硫酸锰、碳酸氢钠、谷氨酸钠或抗坏血酸钠中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包埋剂包含壳聚糖、海藻酸钠、果胶、抗性淀粉、麦芽糊精、乳清分离蛋白或D-甘露糖中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述热应激温度为30～40℃，时间为5～
20min。
5.如权利要求1任一所述的方法，其特征在于，所述植物乳杆菌在口香糖中的添加量为
8 10
10～10 CFU/g。
6.如权利要求1或2任一所述的方法，其特征在于，所述保护剂在口香糖中的添加量占口香糖总质量的0.01％～0.8％。
7.如权利要求1或3任一所述的方法，其特征在于，所述包埋剂在口香糖中的添加量占口香糖总质量的0.1％～2％。
8.如权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将植物乳杆菌接种于MRS液体培养基中，传代培养至稳定期；
(2)将培养液进行离心，分离得到的菌体洗涤后，得到活性菌泥；
(3)将菌泥加入到保护剂中，混合均匀，得到添加保护剂的植物乳杆菌菌液1；
(4)将菌液1进行热应激处理；
(5)将菌液1和包埋剂混合均匀，加入漆酶混合后，用注射器挤入氯化钙溶液中，静置，过滤，用无菌水清洗，得到活性菌液2，并调节pH，冻干，得菌粉；
(6)将菌粉、增稠剂、糖浆混合进行混合，得到混合溶液；
(7)将胶基在水浴锅中进行软化；将软化后的的胶基与步骤(7)中获得的混合溶液进行混合，得到口香糖胚；将口香糖胚进行延展，切割，制成块状口香糖；将口香糖外面裹上糖醇粉，然后进行老化。
9.应用权利要求1-8任一所述的方法制备得到的预防龋齿的高活性益生菌口香糖。
10.权利要求1-8任一所述的方法在制备口香糖方面的应用。
一种提高植物乳杆菌在口香糖制备及贮藏过程中稳定性的
方法
技术领域
背景技术
[0002] 目前患有龋齿的人数越来越多，并且患者分布在各个年龄段。如不及时治疗，病变继续发展，形成龋洞，终至牙冠完全破坏消失。龋病是由含糖食物、致龋细菌和易感宿主在时间的催化下共同作用的结果饮食中含有的糖，特别是蔗糖，是导致龋齿最重要的饮食原因。含糖食物在口腔中保留时间过长，致龋细菌就会代谢这些糖类产生有机酸尤其是乳酸，侵蚀牙齿外围的牙釉质，破坏牙体结构。而食用一些不含糖或含有糖替代物的食物，比如木糖醇口香糖，可以显著减少甚至逆转牙齿的脱矿化作用。
[0003] 其中细菌是龋病发生的必要条件，一般认为致龋菌有两种类型，一种是产酸菌属，其中主要为变形链球菌、放线菌属和乳杆菌，可使碳水化合物分解产酸，导致牙齿无机质脱矿；另一种是革兰阳性球菌，可破坏有机质，经过长期作用可使牙齿形成龋洞。龋病理论上讲是口腔中菌群失调引起的，因此，尝试使用来恢复调节口腔中的菌群平衡不失为一种良好的选择。植物乳杆菌FB-T9是已被报道过对龋病有防治作用的菌株(见文献：黄银.植物乳杆菌FB-T9对龋病的防治作用研究[D].)
[0004] 目前通过真空冷冻干燥法来制备冻干粉，真空冷冻干燥(简称冻干)是制备和保存生物材料最有效的方法之一。冻干是冷冻和干燥技术的有机结合。由于细胞在冻干过程中要经受冷冻和干燥两种激烈因素的作用，不可避免会有所损伤，但若在冻干时采取一定的保护措施，加入适宜的保护剂系统可在很大程度上减轻或避免冷冻干燥对细胞带来的损伤。其机理在于保护剂可以改变生物样品冷冻干燥时的物理、化学环境，减轻或防止冷冻干燥或复水对细胞的损害，尽可能保持原有的各种生理生化特性和生物活性。然而，根据田芬等人(田芬,陈俊亮,霍贵成.益生菌冻干保护剂优化及菌粉保存稳定性研究[J].食品科技,2012,37(02):15-19.)的研究在加入保护剂后活菌数会下降1～2个数量级，死亡率过高。
[0005] 菌株热应激修饰方法是采用热处理对乳酸菌株进行定向改造的一种物理方法。筛选后的益生菌菌株经热应激修饰后，尽可能多的保留酶活力，热应激修饰菌株能够提高菌的存活率，同时在使用时操作简便，不需要增添额外的设备。但是对于热应激处理的时期和条件，还尚未得到很好的研究。
[0006] 利用微胶囊包埋技术保护益生菌也是目前国内外研究的热点。微胶囊包埋可保护益生菌免受噬菌体的侵害，提高其在冷冻干燥过程中的存活率，增加贮存过程中的稳定性。将益生菌用微胶囊技术包埋在壁材内，也可以降低外界环境对细胞的损伤。在包埋的微囊技术中，包埋不同的细胞或组织需要采用不同孔径的微囊，以满足不同分子量的物质通过的需要。因此，微囊孔径的大小是非常重要的指标。现有技术中的APA微囊的主要原料是海藻酸钠和聚赖氨酸，在海藻酸钠的分子量确定的条件下，APA微囊的孔径主要决定于聚赖氨酸的分子量。但是，由于聚赖氨酸的分子量不易控制，所以很难制备出不同孔径的APA微囊。
而且APA微囊的表面结构呈条索状，造成APA微囊的孔径分布不均匀，影响其通透性。此外，聚赖氨酸的制备工艺相当复杂，特别是在制备大量微囊细胞或组织时，其价格昂贵，难以在临床大量推广应用。并且海藻酸钠在实际使用过程中还受到一些条件的制约，在螯合剂(如磷酸、乳酸和柠檬酸)存在的情况下，由于螯合剂对钙的亲和性比海藻酸钙强，使得海藻酸钙不稳定，因此在囊化的益生菌培养过程中会遇到胶粒的稳定性问题，使得细胞从胶粒中释放出来。
而且APA微囊的表面结构呈条索状，造成APA微囊的孔径分布不均匀，影响其通透性。此外，聚赖氨酸的制备工艺相当复杂，特别是在制备大量微囊细胞或组织时，其价格昂贵，难以在临床大量推广应用。并且海藻酸钠在实际使用过程中还受到一些条件的制约，在螯合剂(如磷酸、乳酸和柠檬酸)存在的情况下，由于螯合剂对钙的亲和性比海藻酸钙强，使得海藻酸钙不稳定，因此在囊化的益生菌培养过程中会遇到胶粒的稳定性问题，使得细胞从胶粒中释放出来。
发明内容
[0007] 本发明的一种目的是提供一种提高植物乳杆菌在益生菌口香糖制备及贮藏过程中稳定性的方法，是先对添加保护剂的植物乳杆菌菌液进行热应激处理，再将热应激处理后的菌液与包埋剂混合。
[0008] 在本发明的一种实施方式中，所述植物乳杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)FB-T9，该菌株已在非专利文献(黄银.植物乳杆菌FB-T9对龋病的防治作用研究[D].)中公开，申请人同意在20年内向公众发放该菌株。
[0009] 在本发明的一种实施方式中，所述保护剂包含脱脂乳粉、海藻糖、葡萄糖、水苏糖、菊糖、果糖、麦芽糖、乳糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、硫酸镁、硫酸锰、碳酸氢钠、谷氨酸钠或抗坏血酸钠中的一种或多种。
[0011] 在本发明的一种实施方式中，所述热应激温度为30～40℃，时间为5～20min。
[0012] 在本发明的一种实施方式中，所述植物乳杆菌在口香糖中的添加量为108～1010CFU/g。
[0013] 在本发明的一种实施方式中，所述保护剂在口香糖中的添加量占口香糖总质量的0.01％～0.8％。
[0014] 在本发明的一种实施方式中，所述包埋剂在口香糖中的添加量占口香糖总质量的0.1％～2％。
[0015] 在本发明的一种实施方式中，包括如下步骤：
[0016] (1)将植物乳杆菌接种于MRS液体培养基中，传代培养至稳定期；
[0017] (2)将培养液进行离心，分离得到的菌体洗涤后，得到活性菌泥；
[0018] (3)将菌泥加入到保护剂溶液中，混合均匀，得到添加保护剂的植物乳杆菌菌液1；
[0019] (4)将菌液1进行热应激处理；
[0021] (6)将菌粉、增稠剂、糖浆混合进行混合，得到混合溶液；
[0024] 在本发明的一种实施方式中，所述糖浆包含玉米糖浆、麦芽糖浆、葡萄糖浆、蜂蜜、木糖醇浆、赤藓糖醇浆或低聚异麦芽糖浆中的一种或多种。
[0026] 在本发明的一种实施方式中，所述糖醇粉包含果糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、低聚异麦芽糖醇、赤藓糖醇或甘露糖醇中的一种或多种。
[0027] 在本发明的一种实施方式中，所述方法是将植物乳杆菌接种于MRS液体培养基中，在37℃恒温培养箱中培养12～24h，重复上述传代培养3～4次，最后一次传代培养至稳定期。5000g～10000g高速离心分离10～20min，分离得到的菌体使用无菌生理盐水洗涤1～2次，得到活性菌泥；称取保护剂，加入去离子水，振荡混匀并100～125℃灭菌10～25min，制得保护剂溶液；将菌泥加入到所得的保护剂溶液中，混合均匀，得到添加保护剂的植物乳杆菌菌液1；将菌液在35～45℃进行热应激处理10～20min；将包埋剂进行100～125℃灭菌10～25min，冷却至室温后备用。然后将菌液和包埋剂按比例混合均匀，加入漆酶混合后，用注射器挤入氯化钙溶液中，静止，过滤，用无菌水清洗2～3次，得到活性菌液2，并调节pH，放入真空冷冻干燥机中冻干12～24h得菌粉，放入冰箱中保藏。将菌粉、增稠剂、糖浆混合进行混合，得到混合溶液；将胶基在水浴锅中进行软化；将软化后的的胶基与上述混合溶液进行混合，得到口香糖胚；将口香糖胚进行延展，切割，制成块状口香糖；将口香糖外面裹上糖醇粉，然后进行老化12～24h。
[0028] 在本发明的一种实施方式中，菌种的接种量为1％～2％。
[0029] 在本发明的一种实施方式中，保护剂溶液中，保护剂：去离子水的质量比为1：(4～5)
[0030] 在本发明的一种实施方式中，菌粉、增稠剂、糖浆的质量比为1：(15～20)：(50～100)。
[0031] 在本发明的一种实施方式中，胶基与混合溶液的质量比为(0.5～2)：1。
[0032] 在本发明的一种实施方式中，益生菌菌泥的含菌量为5×1010～2×1012CFU/g。
[0033] 在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中菌泥与保护剂溶液的质量比为1：(3～5)[0034] 在本发明的一种实施方式中，菌粉的含菌量为5×1010～6×1012CFU/g，含水量为1～2％，水分活度为0.04～0.1。
[0035] 在本发明的一种实施方式中，所述离心为使用落地离心机、管式离心机或碟片式离心机进行高速离心。
[0036] 在本发明的一种实施方式中，所述高速离心的时间为10～30min。
[0037] 在本发明的一种实施方式中，步骤(5)中所述菌液和包埋剂的质量比为1：(8～10)。
[0038] 在本发明的一种实施方式中，所述氯化钙浓度为0.1M～0.3M。
[0039] 在本发明的一种实施方式中，步骤(5)中调节pH为6.0～6.5。
[0040] 在本发明的一种实施方式中，所述无菌生理盐水为0.9％的生理盐水。
[0041] 本发明的第二个目的是提供应用上述方法制备得到的预防龋齿的高活性益生菌口香糖。
[0042] 本发明的第三个目的是提供上述方法在制备口香糖方面的应用。
[0043] 本发明的有益效果：
[0045] (2)本发明的方法为在口香糖的制备过程中添加一定量的多羟基糖类物质对益生菌进行保护，并且还进行了热应激处理以及包埋，同时，使得口香糖中的益生菌处于糖与胶基的混合体系中，有效隔绝氧气，保持益生菌活性；
[0046] (3)利用本发明的方法制备得到的富含活性益生菌的口香糖在室温条件下存储6个月后，益生菌存活率仍可高达50％且活菌数仍可达到9×108CFU/g；
[0047] (4)本发明的方法步骤简单、操作方便，仅在现有口香糖制备工艺基础上进行了一定的改良，不需要大幅调整工艺生产线，转化应用可行性强；
[0049] 图1：添加了保护剂、包埋剂、进行了热应激处理的菌粉的口香糖在室温储藏条件下的益生菌活菌数变化曲线；
[0050] 图2：添加了保护剂、进行了热应激处理的菌粉的口香糖在室温储藏条件下的益生菌活菌数变化曲线；
[0051] 图3：添加了保护剂的菌粉的口香糖在室温储藏条件下的益生菌活菌数变化曲线。
具体实施方式
[0052] 下面结合具体实施例与对比例，对本发明进行进一步的阐述。
[0053] 下述实施例中所用的胶基购自无锡市越达胶基制造有限公司。
[0054] 麦芽糖浆购自山东跃启化工有限公司。
[0055] 阿拉伯胶购自环宇国辉(北京)国际贸易有限公司。
[0056] 赤藓糖醇购自郑州万搏化工有限公司，均为食品级原料。
[0057] 下述实施例中涉及的保护剂溶液制备方法如下：
[0058] 1.乳糖醇：准确称取0.95g乳糖醇、0.05g硫酸锰，加入5mL去离子水，振荡混匀并在115℃下灭菌15min，制得乳糖醇溶液。
[0059] 2.水苏糖：准确称取0.95g水苏糖、0.05g硫酸锰，加入5mL去离子水，振荡混匀并在115℃下灭菌15min，制得水苏糖溶液。
[0060] 3.菊粉：准确称取0.95g菊粉、0.05g硫酸锰，加入5mL去离子水，振荡混匀并在115℃下灭菌15min，制得菊粉溶液。
[0061] 下述实施例中涉及的培养基如下：
[0062] MRS液体培养基：葡萄糖20g/L，牛肉膏10g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，无水乙酸钠5g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，七水合硫酸镁0.58g/L，一水合硫酸锰0.25g/L，吐温-80 1mL/L。
[0063] MRS固体培养基：在MRS液体培养基的基础上加1.5％的琼脂粉。
[0064] 下述实施例中涉及的检测方法如下：
[0065] 活菌数的检测方法：采用国标《GB 4789.2-2016食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。
[0066] 实施例1
[0067] A.菌株活化
[0068] 将菌粉按照MRS液体培养基计1～2％接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃培养箱中培养24h，重复上述传代培养3次，最后一次传代培养至稳定期。在8000g的条件下高速离心分离15min，分离得到的菌体使用无菌生理盐水洗涤1～2次，得到活性菌泥。
[0069] B.添加保护剂
[0070] 制备保护剂溶液，将A.菌株活化步骤中所得活性菌泥，以菌泥与保护剂溶液的质量比为1：3的比例，加入到所得的保护剂溶液中，混合均匀，得到添加保护剂的菌液。
[0071] C.热应激
[0072] 将步骤B.中所得的添加保护剂的菌液分装5mL于试管，在40℃水浴锅中处理15min,使其产生热应激蛋白，从而提高口香糖制作耐受程度。
[0073] D.包埋
[0074] 将质量浓度为20g/L的海藻酸钠混合到质量浓度40g/L的壳聚糖溶液中，得到混合溶液1，然后置于115℃下灭菌15min，冷却至室温后，放于4℃下备用。然后将步骤C.中得到的菌液和混合溶液1按比例1：10混合均匀，加入漆酶，于4℃混匀，将其用注射器挤入0.1M的氯化钙溶液中，静止30min后，过滤，用无菌水清洗2～3次，得到活性菌液，并调节pH至6.0～6.5，放入-40℃，真空度3Pa的真空冷冻干燥机中冻干48h制得菌粉，放入-20℃冰箱中保藏。
[0075] E.口香糖的制作
[0076] 准确称取步骤D.中得到的菌粉1.2g，阿拉伯胶5.8g和60g的糖浆在25℃进行混合，得到混合溶液2；将50g胶基在60℃的水浴锅中进行软化；将软化后的的胶基与混合溶液2进行混合，得到口香糖胚；将口香糖胚进行延展，切割，制成边长为1cm的立方体块状口香糖；将口香糖外面裹上200目的赤藓糖醇粉，然后进行老化12～24h。
[0077] 所得菌粉的活菌数为1.7×1011CFU/g，水分含量为1.2％，水分活度为0.05。
[0078] 表1口香糖在储藏期间活菌数变化表
[0079]
[0080]
[0081] 经检测，使用菊粉为保护剂时，该益生菌口香糖活菌数达到1.7×1011CFU/g；于室温下放置180d，活菌数仍稳定在9×108CFU/g以上。
[0082] 实施例2
[0083] A.菌株活化
[0084] 将菌粉按照MRS液体培养基计1～2％接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃培养箱中培养24h，重复上述传代培养3次，最后一次传代培养至稳定期。在8000g的条件下高速离心分离15min，分离得到的菌体使用无菌生理盐水洗涤1～2次，得到活性菌泥。
[0085] B.添加保护剂
[0086] 准确称取0.95g乳糖醇、0.05g硫酸锰，加入5mL去离子水，振荡混匀并在115℃下灭菌15min，制得保护剂溶液；将A.菌株活化步骤中所得活性菌泥，以菌泥与保护剂溶液的质量比为1：3的比例，加入到所得的保护剂溶液中，混合均匀，得到添加保护剂的菌液。
[0087] C.热应激
[0088] 将步骤B.中所得的添加保护剂的菌液分装5mL于试管，在40℃水浴锅中处理20min,使其产生热应激蛋白，从而提高口香糖制作耐受程度。
[0089] D.包埋
[0090] 将质量浓度为20g/L的海藻酸钠混合到质量浓度40g/L的壳聚糖溶液中，得到混合溶液1，然后置于115℃下灭菌15min，冷却至室温后，放于4℃下备用。然后将步骤C.中得到的菌液和混合溶液1按比例1：10混合均匀，加入漆酶，于4℃混匀，将其用注射器挤入0.1M的氯化钙溶液中，静止30min后，过滤，用无菌水清洗2～3次，得到活性菌液，并调节pH至6.0～6.5，放入-40℃，真空度3Pa的真空冷冻干燥机中冻干48h制得菌粉，放入-20℃冰箱中保藏。
[0091] E.口香糖的制作
[0092] 准确称取步骤D中得到的菌粉1.2g，阿拉伯胶5.8g和60g的糖浆在25℃进行混合，得到混合溶液2；将50g胶基在60℃的水浴锅中进行软化；将软化后的的胶基与混合溶液2进行混合，得到口香糖胚；将口香糖胚进行延展，切割，制成边长为1cm的立方体块状口香糖；将口香糖外面裹上200目的赤藓糖醇粉，然后进行老化12～24h。
[0093] 所得菌粉的活菌数为1.6×1011CFU/g，水分含量为1.2％，水分活度为0.05。
[0094] 表2高活性益生菌口香糖在储藏期间活菌数变化表
[0095]储藏天数(天) 1 15 30 60 90 120 150 180
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.1 0.9 0.7
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.1 0.9 0.7
[0096] 经检测，该益生菌口香糖活菌数达到1.6×1011CFU/g；于室温下放置180d，活菌数仍稳定在7×108CFU/g以上。
[0097] 实施例3
[0098] A.菌株活化
[0099] 将植菌粉按照MRS液体培养基计1～2％接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃培养箱中培养24h，重复上述传代培养3次，最后一次传代培养至稳定期。在8000g的条件下高速离心分离15min，分离得到的菌体使用无菌生理盐水洗涤1～2次，得到活性菌泥。
[0100] B.添加保护剂
[0101] 准确称取0.95g乳糖醇、0.05g硫酸锰，加入5mL去离子水，振荡混匀并在115℃下灭菌15min，制得保护剂溶液；将A.菌株活化步骤中所得活性菌泥，以菌泥与保护剂溶液的质量比为1：3的比例，加入到所得的保护剂溶液中，混合均匀，得到添加保护剂的菌液；并调节pH至6.0～6.5，放入-40℃，真空度3Pa的真空冷冻干燥机中冻干48h制得菌粉，放入-20℃冰箱中保藏。
[0102] C.热应激
[0103] 将步骤B.中所得的添加保护剂的菌液分装5mL于试管，在40℃水浴锅中处理10min,使其产生热应激蛋白，从而提高口香糖制作耐受程度。
[0104] D.包埋
[0105] 将质量浓度为20g/L的海藻酸钠混合到质量浓度40g/L的壳聚糖溶液中，得到混合溶液1，然后置于115℃下灭菌15min，冷却至室温后，放于4℃下备用。然后将步骤C.中得到的菌液和混合溶液1按比例1：10混合均匀，加入漆酶，于4℃混匀，将其用注射器挤入0.1M的氯化钙溶液中，静止30min后，过滤，用无菌水清洗2～3次，得到活性菌液，并调节pH至6.0～6.5，放入-40℃，真空度3Pa的真空冷冻干燥机中冻干48h制得菌粉，放入-20℃冰箱中保藏。
[0106] E.口香糖的制作
[0107] 准确称取步骤B.中得到的菌粉1.2g，阿拉伯胶5.8g和60g的糖浆在25℃进行混合，得到混合溶液2；将50g胶基在60℃的水浴锅中进行软化；将软化后的的胶基与混合溶液2进行混合，得到口香糖胚；将口香糖胚进行延展，切割，制成边长为1cm的立方体块状口香糖；将口香糖外面裹上200目的赤藓糖醇粉，然后进行老化12～24h。
[0108] 所得菌粉的活菌数为1.8×1011CFU/g，水分含量为1.2％，水分活度为0.05。
[0109] 表3高活性益生菌口香糖在储藏期间活菌数变化表
[0110]储藏天数(天) 1 15 30 60 90 120 150 180
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.7 1.7 1.6 1.4 1.3 1.2 0.9 0.9
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.7 1.7 1.6 1.4 1.3 1.2 0.9 0.9
[0111] 经检测，该益生菌口香糖活菌数达到1.8×1011CFU/g；于室温下放置180d，活菌数仍稳定在9×108CFU/g以上。
[0112] 对比例1
[0113] A.菌株活化
[0114] 将菌粉按照MRS液体培养基计1～2％接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃培养箱中培养24h，重复上述传代培养3次，最后一次传代培养至稳定期。在8000g的条件下高速离心分离15min，分离得到的菌体使用无菌生理盐水洗涤1～2次，得到活性菌泥。
[0115] B.添加保护剂
[0116] 准确称取0.95g乳糖醇、0.05g硫酸锰，加入5mL去离子水，振荡混匀并在115℃下灭菌15min，制得保护剂溶液；将A.菌株活化步骤中所得活性菌泥，以菌泥与保护剂溶液的质量比为1：3的比例，加入到所得的保护剂溶液中，混合均匀，得到添加保护剂的菌液；并调节pH至6.0～6.5，放入-40℃，真空度3Pa的真空冷冻干燥机中冻干48h制得菌粉，放入-20℃冰箱中保藏。
[0117] C.热应激
[0118] 将步骤B.中所得的添加保护剂的菌液分装5mL于试管，在40℃水浴锅中处理15min,使其产生热应激蛋白，从而提高口香糖制作耐受程度。
[0119] D.口香糖的制作
[0120] 准确称取步骤B.中得到的菌粉1.2g，阿拉伯胶5.8g和60g的糖浆在25℃进行混合，得到混合溶液2；将50g胶基在60℃的水浴锅中进行软化；将软化后的的胶基与混合溶液2进行混合，得到口香糖胚；将口香糖胚进行延展，切割，制成边长为1cm的立方体块状口香糖；将口香糖外面裹上200目的赤藓糖醇粉，然后进行老化12～24h。
[0121] 所得菌粉的活菌数为1.6×1011CFU/g，水分含量为1.2％，水分活度为0.05。
[0122] 表4高活性益生菌口香糖在储藏期间活菌数变化表
[0123]储藏天数(天) 1 7 14 21 35 49 65
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.4 1.2 1.0 0.9 0.8 0.7 0.7
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.4 1.2 1.0 0.9 0.8 0.7 0.7
[0124] 经检测，该益生菌口香活菌数达到1.6×1011CFU/g；于室温下放置49d，活菌死亡数达到50％(图2)。
[0125] 对比例2
[0126] A.菌株活化
[0127] 将菌粉按照MRS液体培养基计1～2％接种量接种于MRS液体培养基中，在37℃培养箱中培养24h，重复上述传代培养3次，最后一次传代培养至稳定期。在8000g的条件下高速离心分离15min，分离得到的菌体使用无菌生理盐水洗涤1～2次，得到活性菌泥。
[0128] B.添加保护剂
[0129] 准确称取0.95g乳糖醇、0.05g硫酸锰，加入5mL去离子水，振荡混匀并在115℃下灭菌15min，制得保护剂溶液；将A.菌株活化步骤中所得活性菌泥，以菌泥与保护剂溶液的质量比为1：3的比例，加入到所得的保护剂溶液中，混合均匀，得到添加保护剂的菌液；并调节pH至6.0～6.5，放入-40℃，真空度3Pa的真空冷冻干燥机中冻干48h制得菌粉，放入-20℃冰箱中保藏。
[0130] C.口香糖的制作
[0131] 准确称取步骤B.中得到的菌粉1.2g，阿拉伯胶5.8g和60g的糖浆在25℃进行混合，得到混合溶液2；将50g胶基在60℃的水浴锅中进行软化；将软化后的的胶基与混合溶液2进行混合，得到口香糖胚；将口香糖胚进行延展，切割，制成边长为1cm的立方体块状口香糖；将口香糖外面裹上200目的赤藓糖醇粉，然后进行老化12～24h。
[0132] 所得菌粉的活菌数为1.4×1011CFU/g，水分含量为1.2％，水分活度为0.05。
[0133] 表5高活性益生菌口香糖在储藏期间活菌数变化表
[0134]储藏天数(天) 1 7 14 21 35 49
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.0 1.0 0.8 0.8 0.7 0.5
室温储藏活菌数(×109CFU/g) 1.0 1.0 0.8 0.8 0.7 0.5
[0135] 经检测，该益生菌口香糖活菌数达到1.4×1011CFU/g；于室温下放置49d，活菌死亡数达到50％(图3)。
[0136] 对比例3
[0137] 不添加保护剂，其余步骤同实施例3。经检测，该益生菌口香糖活菌数达到1.0×1011CFU/g；于室温下放置30d，活菌死亡数达到50％。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种蘸料用蒜香海鲜酱油及其制备方法 | 2020-11-06 | 1 |
| 一种薯类鲜叶下饭菜的生产方法 | 2022-02-27 | 1 |
| 一种杨木胶合板及其制备方法 | 2020-11-13 | 0 |
| 一种提高羊奶产量的养殖方法 | 2020-11-25 | 2 |
| 一种水稻的栽培方法 | 2020-08-31 | 1 |
| 一种泡沫喷雾干燥法制备雨生红球藻中虾青素微胶囊及其制备方法 | 2020-09-19 | 2 |
| 一种生物柴油的制备方法 | 2020-08-30 | 0 |
| 带电荷链接体及其在共轭反应上的应用 | 2021-03-29 | 0 |
| 一种基于二次挤压法制备的糖玻璃化香精油胶囊及其方法 | 2022-06-12 | 1 |
| 一种拟目乌贼苗种培育方法 | 2020-07-26 | 0 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈