脱敏治疗效果的评价监测方法及过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒及制备方法
专利汇可以提供脱敏治疗效果的评价监测方法及过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒及制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种用于脱敏 治疗 效果的评价监测方法及过敏原特异性IgG4的酶联 免疫 吸附 分析检测 试剂 盒 及其制备方法，在脱敏治疗结束后，通过检测血清内过敏原特异性IgG4 抗体 的含量，来判断所进行的脱敏治疗的疗效，当血清内过敏原特异性IgG4抗体上升显著，说明脱敏治疗效果显著，当血清内过敏原特异性IgG4抗体达到峰值后，说明脱敏治疗已经成功。本发明的有益效果在于：1、在患者通过脱敏治疗之后，提供了一种检测特异性IgG4抗体的方法，为脱敏治疗疗效提供了评价指标；2、具有灵敏度高、特异性好、使用快速方便的优点。，下面是脱敏治疗效果的评价监测方法及过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒及制备方法专利的具体信息内容。
1.用于脱敏治疗效果的评价监测方法，其特征在于通过检测血清内过敏原特异性IgG4抗体的含量，来判断所进行的脱敏治疗的疗效，当血清内过敏原特异性IgG4抗体上升显著，说明脱敏治疗效果显著，当血清内过敏原特异性IgG4抗体达到峰值后，说明脱敏治疗已经成功。
2.过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于包括有包被有致敏蛋白的酶标板、酶标抗体、底物显色液A、底物显色液B、样品稀释液、浓缩洗涤液和反应终止液。
3.按权利要求2所述的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于所述的包被有致敏蛋白的酶标板为包被有屋尘螨的预包被板、包被有狗毛皮屑的预包被板、包被有猫毛皮屑的预包被板、包被有短豚草的预包被板、包被有艾蒿的预包被板、包被有鸡蛋白的预包被板或包被有牛奶的预包被板。
4.按权利要求2或3所述的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体。
5.按权利要求2或3所述的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于所述的底物显色液A为3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。
6.按权利要求2或3所述的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于所述的底物显色液B为过氧化脲。
7.按权利要求2或3所述的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于所述的样品稀释液为含有牛血清白蛋白、细胞因子和TWEEN-20的溶液。
8.按权利要求2或3所述的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于所述的浓缩洗涤液为含有磷酸缓冲盐和TWEEN-20的溶液。
9.过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒的制备方法，其特征在于主要包括有以下步骤：
1）准备底物显色液A、底物显色液B、样品稀释液、浓缩洗涤液和反应终止液；
2）包被有致敏蛋白的酶标板的制备：a）致敏蛋白的制备：将过敏原蛋白粉末以1：
15-25（w/v）的量加入0.03-3mol/l的碳酸氢钠-氯化钠缓冲液，其中磁力搅拌器的转速
250转/分钟，于4℃下过夜，取上清液-20℃下保存；b）包被酶标板：①用包被液将各类致敏蛋白稀释成0.05ug/ml-10ug/ml的包被浓度，混匀得到稀释后的过敏原溶液，将酶标板上的每孔加入100ul稀释后的过敏原溶液；②将酶标板封膜后在4℃下反应过夜；③将酶标板内的稀释后的过敏原溶液倒出，洗板，酶标板的每孔加入200ul封闭液进行封闭，在4℃下反应过夜；④将酶标板内的封闭液倒出，拍干，真空干燥后密封入装有干燥剂的铝箔袋中，在4℃下贮存即可；
3）酶标抗体的制备：所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体，其制备方法是：
a）将单克隆细胞株注射到老鼠体内，产生腹水；
b）收集腹水，提取并纯化得到单克隆抗体溶液；
c）将单克隆抗体溶液用活化辣根过氧化物酶混合进行标记；
d）透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体。
10.按权利要求9所述的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述的包被液为pH9.0-9.8的碳酸氢钠缓冲溶液，所述的封闭液为含有
1-10%(w/v)的BSA的Tris-Hcl缓冲溶液。
脱敏治疗效果的评价监测方法及过敏原特异性IgG4抗体
检测试剂盒及制备方法
技术领域
背景技术
2）包被有致敏蛋白的酶标板的制备：a）致敏蛋白的制备：将过敏原蛋白粉末以1：
15-25（w/v）的量加入0.03-3mol/l的碳酸氢钠-氯化钠缓冲液（pH8.0-8.4），其中磁力搅拌器的转速250转/分钟，于4℃下过夜，取上清液-20℃下保存；b）包被酶标板：①用包被液将各类致敏蛋白稀释成0.05ug/ml-10ug/ml的包被浓度，混匀得到稀释后的过敏原溶液，将酶标板上的每孔加入100ul稀释后的过敏原溶液；②将酶标板封膜后在4℃下反应过夜；③将酶标板内的稀释后的过敏原溶液倒出，洗板，酶标板的每孔加入200ul封闭液进行封闭，在4℃下反应过夜；④将酶标板内的封闭液倒出，拍干，真空干燥后密封入装有干燥剂的铝箔袋中，在4℃下贮存即可；
3）酶标抗体的制备：所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体，其制备方法是：
a）将单克隆细胞株注射到老鼠体内，产生腹水；
b）收集腹水，提取并纯化得到单克隆抗体溶液；
c）将单克隆抗体溶液用活化辣根过氧化物酶混合进行标记；
d）透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体。
⑵洗涤液的准备：将浓缩洗涤液按照稀释倍数稀释；
⑶初次孵育：将实验所需的酶标板从包装内取出，编号或标记患者姓名，除空白每孔加入样品稀释液2滴（100ul）和血清1ul，注意每加一份样品就更换一个管嘴，混匀后于37℃孵育45min；
⑷洗板：倒尽酶标板中的液体，每孔加入200ul～300ul洗涤液，静置1min，倒尽液体，如此反复洗5次，轻轻晃动可以增强清洗效果；
⑸二次孵育：在每孔中加入2滴（100ul）酶标抗体，混匀后于37℃孵育45min；
⑹洗板：同步骤⑷；
⑺显色：每孔各加入一滴底物显色液A，一滴底物显色液B，混匀后于37℃孵育15min；
⑻终止：每孔加入一滴反应终止液，测量每孔OD值（吸光度）。
2、具有灵敏度高、特异性好、使用快速方便的优点：
灵敏度：检测灵敏度为1ng/ml
特异性：阴性符合率为95.1%
阳性符合率为98.3%
总符合率为96.7%
总检测时间不到2小时，操作步骤简便，能适应一般实验室检测。
具体实施方式
所述的底物显色液A为3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。
1-10%(w/v)的BSA的Tris-Hcl缓冲溶液；
3）酶标抗体的制备：所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体，其制备方法是：
a）将单克隆细胞株注射到老鼠体内，产生腹水；
b）收集腹水，提取并纯化得到单克隆抗体溶液；
c）将单克隆抗体溶液用活化辣根过氧化物酶混合进行标记；
d）透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体。
1）准备底物显色液A、底物显色液B、样品稀释液、浓缩洗涤液和反应终止液；
所述的底物显色液A为3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。
1-10%(w/v)的BSA的Tris-Hcl缓冲溶液；
3）酶标抗体的制备：所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体，其制备方法是：
a）将单克隆细胞株注射到老鼠体内，产生腹水；
b）收集腹水，提取并纯化得到单克隆抗体溶液；
c）将单克隆抗体溶液用活化辣根过氧化物酶混合进行标记；
d）透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体。
1）准备底物显色液A、底物显色液B、样品稀释液、浓缩洗涤液和反应终止液；
所述的底物显色液A为3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。
250转/分钟，于4℃下过夜，取上清液-20℃下保存；b）包被酶标板：①用包被液将各类致敏蛋白稀释成10ug/ml的包被浓度，混匀得到稀释后的过敏原溶液，将酶标板上的每孔加入100ul稀释后的过敏原溶液；②将酶标板封膜后在4℃下反应过夜；③将酶标板内的稀释后的过敏原溶液倒出，洗板，酶标板的每孔加入200ul封闭液进行封闭，在4℃下反应过夜；
④将酶标板内的封闭液倒出，拍干，真空干燥后密封入装有干燥剂的铝箔袋中，在4℃下贮存即可；所述的包被液为pH9.0-9.8的碳酸氢钠缓冲溶液，所述的封闭液为含有1-10%(w/v)的BSA的Tris-Hcl缓冲溶液；
3）酶标抗体的制备：所述的酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体，其制备方法是：
a）将单克隆细胞株注射到老鼠体内，产生腹水；
b）收集腹水，提取并纯化得到单克隆抗体溶液；
c）将单克隆抗体溶液用活化辣根过氧化物酶混合进行标记；
d）透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4单克隆抗体。
⑴平衡温度：使用前所有试剂及酶标板都应恢复到室温，试剂在使用前必须充分混匀；
⑵洗涤液的准备：将洗涤液按照稀释倍数稀释；
⑶初次孵育：将实验所需的酶标板从包装内取出，编号或标记患者姓名，除空白每孔加入样品稀释液2滴（100ul）和血清1ul，注意每加一份样品就更换一个管嘴，混匀后于37℃孵育45分钟；
⑷洗板：倒尽酶标板中的液体，每孔加入200ul～300ul洗涤液，静置1min，倒尽液体，如此反复洗5次，轻轻晃动可以增强清洗效果；
⑸二次孵育：在每孔中加入1滴（50ul）HRP标记的抗人IgG4抗体，混匀后于37℃孵育
45分钟；
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