一种羧胺类化合物及其应用
阅读：72发布：2020-05-16
专利汇可以提供一种羧胺类化合物及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种羧胺类化合物及其应用，属于 预防 和 治疗 动物病毒性疫病药物制备技术领域。本发明所述羧胺类化合物为2-亚 氨 基-2H-色烯-3-甲酰胺。本发明所述羧胺类化合物无显著 生物 毒性，可以在低剂量有效控制 水 疱性口炎病毒在BHK21细胞中的增殖，延缓细胞病变的发生，在大剂量状态下可以完全阻断病毒的增殖，为 水疱性口炎 病毒 的流行病预防和控制争取到 时间窗 ，也为已患病个体的治疗提供了新药物。，下面是一种羧胺类化合物及其应用专利的具体信息内容。
一种羧胺类化合物及其应用
技术领域
背景技术
[0002] 水疱性口炎(Vesicular stomatitis)是由水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus)引起的一种急性、热性、人畜共患性传染病。其病原体VSV病毒为弹状病毒科(Rhabdoviridae)、水疱病毒属(Vesiculovirus)成员，病毒粒子呈子弹状或圆柱状，大小约为150～180nm×50～70nm。VSV病毒核衣壳外部有囊膜结构，囊膜上均匀密布有长约10nm的纤突。基因组为单链负链RNA，编码N、N S、M、G、L共5种主要结构蛋白。VSV病毒核衣壳为螺旋对称结构具有感染性，单纯的病毒RNA不具备感染性。病毒复制能力强，导致的急性疫病过程。VSV对理化因子的抵抗力与口蹄疫病毒(FMDV)相似，在56℃可见光、紫外线及脂溶剂(乙醚、氯仿)处理30min,均能使其灭活。4～6℃条件下，病毒可在土壤中存活若干天。
[0003] VSV病毒侵染后具有强烈的传染性，由于临诊症状与口蹄疫病毒病极其相似，难以区分，因此该病毒感染的个体常常被误当成口蹄疫病毒感染处理。目前国际上对于该疾病的防治措施主要是疫苗接种预防及对感染动物在限制性范围全面扑杀，焚烧。目前没有能够有效控制水疱性口炎病毒生长或增殖的药物。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于提供一种羧胺类化合物及其应用。本发明所述羧胺类化合物无显著生物毒性，可以在低剂量有效控制水疱性口炎病毒在BHK21细胞中的增殖，延缓细胞病变的发生，在高剂量状态下可以完全阻断病毒的增殖。
[0005] 本发明提供了一种羧胺类化合物，所述羧胺类化合物为2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺，结构式如式I所示：
[0006]
[0007] 本发明还提供了上述技术方案所述羧胺类化合物在制备干预或控制水疱性口炎病毒增殖的药物中的应用。
[0008] 本发明还提供了上述技术方案所述羧胺类化合物在制备干预或控制已感染水疱性口炎病毒的细胞病变的药物中的应用。
[0009] 本发明还提供了上述技术方案所述羧胺类化合物在制备预防或治疗水疱性口炎病毒所致水疱性口炎的药物中的应用。
[0010] 本发明提供了一种羧胺类化合物。本发明应用计算机辅助技术在大量的羧胺类化合物2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺。本发明所述羧胺类化合物，具有低生物毒性效应，在低剂量下可以有效控制已感染水疱性口炎病毒的细胞发生细胞病变，阻止病毒的增殖，且可以克服预防注射疫苗费用昂贵、染毒后强制性整体扑杀经济损失巨大等缺点，为水疱性口炎病毒的防治提供了新药物。附图说明
[0011] 图1为本发明提供的2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺的3D结构图；
[0012] 图2为本发明提供的2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺13C NMR化学位移图谱检测结果；
[0013] 图3为本发明提供的2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺GC-MS质谱检测结果；
[0014] 图4为本发明提供的2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺对BHK21细胞生长的影响；
[0015] 图5为本发明提供的以5μl/孔2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺处理的VSV感染BHK21后24小时细胞病变；
[0016] 图6为本发明提供的5μl/孔2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺处理的VSV感染BHK21后测定的半数组织细胞培养感染剂量TCID50；
[0017] 图7为本发明提供的以20μl/孔2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺处理的VSV感染BHK21后24小时细胞病变；
[0018] 图8为本发明提供的20μl/孔2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺处理的VSV感染BHK21后测定的半数组织细胞培养感染剂量TCID50；
[0019] 图9为本发明提供的以100μl/孔2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺处理的VSV感染BHK21后24小时细胞病变；
[0020] 图10为本发明提供的100μl/孔2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺处理的VSV感染BHK21后测定的半数组织细胞培养感染剂量TCID50。
具体实施方式
[0021] 本发明提供了一种羧胺类化合物，所述羧胺类化合物为2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺(2-Imino-2H-chromene-3-carboxamide)，结构式如式I所示：
[0022]
[0023] 本发明所述2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺的分子式为C10H8N2O2，分子量为188.186g/mol。3D结构如图1所示。
[0024] 在本发明中，所述2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺的化学、物理特性如表1、表2和图2～3所示，其中，表1为2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺基本的化学和物理特性。
[0025] 表1 2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺化学和物理特性
[0026]
[0027]
[0028] 表2为使用ACD/LabsPercepta平台-PhysChem模块生成的预测数据。
[0029] 表2 2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺预测属性
[0030]
[0031]
[0032] 图2为2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺13C核磁共振(NMR)化学位移图谱，结果显示各化学位移化学峰值如图2中标示，分析谱线的化学位移，分子中有10个C，与分子式中数目相同，说明C没有对称性，并且可以识别该分子结构中多为芳环碳和烯碳，并且含有一个羰基碳；图3为2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺GC-MS质谱检测结果，总峰值为99，m/z峰值由高到低分别为171、188、145，可得相对分子质量为188，M-17表示其取代基可能是OH2或NH3，结合13C NMR，可推测得其化学结构与式I所示相同。
[0033] 本发明所述羧胺类化合物2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺是以羧胺类化合物群为对象，通过计算机辅助筛选得到的，无生物毒性，在低剂量有效控制水疱性口炎病毒在BHK21细胞中的生长、增殖，延缓细胞病变的发生，在高剂量状态下可以完全阻断病毒的增殖。
[0034] 本发明还提供了上述技术方案所述羧胺类化合物在制备干预或控制水疱性口炎病毒增殖的药物中的应用。本发明以2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺在细胞感染水疱性口炎病毒2h后实行干预，获得了良好的控制该病毒在宿主细胞复制增殖的效果。本发明优选预先接种水疱性口炎毒至目的细胞乳仓鼠肾细胞(BHK21)，使其感染病毒；在接毒后两小时，以不同的剂量加入2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺进行处理，让目的细胞处于毒、药共存的环境中，研究其增殖状态和细胞病变。本发明以计算机辅助筛选出低毒的2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺为干预物，通过先接毒后处理的模式，研究该化合物对水疱性口炎病毒增殖的阻断作用。
[0035] 本发明还提供了上述技术方案所述羧胺类化合物在制备干预或控制已感染水疱性口炎病毒的细胞病变的药物中的应用。
[0036] 本发明还提供了上述技术方案所述羧胺类化合物在制备预防或治疗水疱性口炎病毒所致水疱性口炎的药物中的应用。
[0037] 下面结合具体实施例对本发明所述的一种羧胺类化合物及其应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
[0038] 实施例1
[0039] 乳仓鼠肾细胞(BHK21)在含10％胎牛血清的DMEM培养基、37℃、5％CO2环境下培养至90％融合时，然后以100μl/孔的剂量在6孔板中加入化合物2-imino-2H-chromene-3-carboxamide，观测24小时后该化合物对BHK21细胞生长的影响。图4为2-imino-2H-chromene-3-carboxamide对BHK21细胞生长的影响，其中图4-A为该羧胺类化合物组，图4-B为空白对照组。从图4中可以看出，加入该有羧胺类化合物后细胞的状态与完全空白组无显著区别，说明该化合物无生物毒性。
[0040] 实施例2
[0041] 乳仓鼠肾细胞(BHK21)在含10％胎牛血清的DMEM培养基、37℃、5％CO2环境下培养至90％融合时，于6孔板中分别加入水疱性口炎病毒20μl，继续培养2小时，然后以5μl/孔在6孔板中加入化合物2-imino-2H-chromene-3-carboxamide，在毒、药共存环境中继续培养，观测24小时后BHK21细胞的细胞病变以及病毒的增殖状态。
[0042] 图5为以5μl/孔化合物的剂量干预VSV感染BHK21后24小时细胞病变，其中，图5-A：毒、药(5μl/孔)共存24小时后细胞状态，图5-B：接毒未药物处理对照，图5-C：未接毒对照组：从图5可以看出，经低剂量2-imino-2H-chromene-3-carboxamide干预，BHK21细胞在染毒24小时后与接毒未药物处理对照相比，药物处理组仅有部分细胞出现细胞病变，而未加药物处理组则完全出现典型细胞病变，表明药物处理可以使VSV致细胞病变受到一定程度抑制。将上述细胞反复冻融后收集上清液，在BHK21细胞上进行病毒滴度测定，最后用Kaerber法计算其半数组织细胞培养感染剂量TCID50。结果显示，未加药物处理组，其病毒感染滴度范围为 lgTCID50/ml,而药物处理组其TCID50值为
lgTCID50/ml,表明相对于未加药物组,药物处理组病毒感染滴度显著低于未加药物组(图
6)。上述结果表明，低剂量药物可一定程度抑制病毒增值。
lgTCID50/ml,表明相对于未加药物组,药物处理组病毒感染滴度显著低于未加药物组(图
6)。上述结果表明，低剂量药物可一定程度抑制病毒增值。
[0043] 实施例3
[0044] 乳仓鼠肾细胞(BHK21)在含10％胎牛血清的DMEM培养基、37℃、5％CO2环境下培养至90％融合时，于6孔板中分别加入水疱性口炎病毒20μl，继续培养2小时，然后以20μl/孔在6孔板中加入化合物2-imino-2H-chromene-3-carboxamide，在毒、药共存环境中继续培养，观测24小时后BHK21细胞的细胞病变以及病毒的增殖状态。
[0045] 图7为以20μl/孔化合物的剂量干预VSV感染BHK21后24小时细胞病变，其中，图7-A：毒、药(5μl/孔)共存24小时后细胞状态，图7-B：接毒未药物处理对照，图7-C：未接毒对照组：从图7可以看出，经中剂量2-imino-2H-chromene-3-carboxamide干预，BHK21细胞在染毒24小时后与接毒未药物处理对照组相比，药物处理组仅有极少量感染细胞出现细胞病变，而未加药物组细胞则出现典型的细胞病变，表明药物处理可以使VSV致细胞病变效应受到明显抑制。将细胞反复冻融后收集上清液，在BHK21细胞上进行病毒滴度测定，最后用Kaerber法计算其半数组织细胞培养感染剂量TCID50。结果显示，未加药物处理组，其病毒感染滴度范围为 lgTCID50/ml,而药物处理组其病毒感染滴度范围为lgTCID50/ml,表明相对于未加药物组，药物处理组病毒感染滴度显著低于未加药物组(图8)。上述结果表明，中等剂量药物可基本抑制病毒增值。
[0046] 实施例4
[0047] 乳仓鼠肾细胞(BHK21)在含10％胎牛血清的DMEM培养基、37℃、5％CO2环境下培养至90％融合时，于6孔板中分别加入水疱性口炎病毒20μl，继续培养2小时，然后以100μl/孔在6孔板中加入化合物2-imino-2H-chromene-3-carboxamide，在毒、药共存环境中继续培养，观测24小时后BHK21细胞的细胞病变以及病毒的增殖状态。
[0048] 图9为以100μl/孔化合物的剂量干预VSV感染BHK21后24小时细胞病变，其中，图9-A：毒、药(5μl/孔)共存24小时后细胞状态，图9-B：接毒未药物处理对照，图9-C：未接毒对照组：从图9可以看出，经高剂量2-imino-2H-chromene-3-carboxamide干预，BHK21细胞在染毒24小时后与接毒未药物处理对照组相比，药物处理组未出现细胞病变，而未药物处理组则出现典型细胞病变，表明药物处理可以使细胞病变完全受到抑制。将细胞反复冻融后收集上清液，在BHK21细胞上进行病毒滴度测定，最后用Kaerber法计算其半数组织细胞培养感染剂量TCID50。结果显示，未加药物处理组，其病毒感染滴度范围为lgTCID50/ml,而药物处理组其病毒感染滴度范围为 lgTCID50/ml(未出现细胞病变时，利用该方法计算的最低值标注为0.5)，表明相对于未加药物组，药物处理组病毒感染滴度显著低于未加药物组(图10)。上述结果表明，高剂量药物可完全抑制病毒增值。
[0049] 上述结果表明，低剂量2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺可以有效控制水疱性口炎病毒在BHK21细胞中的增殖，延缓细胞病变的发生，在大剂量状态下可以完全阻断病毒的增殖。因此，2-亚氨基-2H-色烯-3-甲酰胺能够用于预防或治疗水疱性口炎病毒所致疫病的药物制备。
[0050] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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