一种猪瘟病毒表位疫苗及其制备方法
专利汇可以提供一种猪瘟病毒表位疫苗及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种表位 猪瘟 疫苗 ,它包括至少一个耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的含有至少一次重复的单表位或者至少一次重复的多表位的表位多肽,所述表位选自 猪瘟病毒 包膜蛋白E2上的中和表位及变异表位。制备猪瘟疫苗的方法为:(1)人工合成至少一条分别含有至少一次重复的猪瘟病毒包膜蛋白E2上 抗原 区中和单表位或多表位及变异表位的多肽;(2)将多肽分别耦联到载体上形成耦联物;(3)将耦联物配以佐剂制备成疫苗。本发明能有效对付猪瘟病毒的变异,具有广泛的经济及社会效益。，下面是一种猪瘟病毒表位疫苗及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种猪瘟病毒表位疫苗，它包括至少一个耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的含有至少一次重复的单表位或者至少一次重复的多表位的表位多肽，所述表位选自猪瘟病毒包膜蛋白E2上的中和表位以及变异表位。
2.根据权利要求1所述的猪瘟病毒表位疫苗，其特征在于：所述猪瘟病毒包膜蛋白E2上的中和表位及变异表位位于猪瘟病毒包膜蛋白E2上的抗原区。
3.根据权利要求2所述的猪瘟病毒表位疫苗，其特征在于：所述抗原区为猪瘟病毒包膜蛋白E2上的第690-866位氨基酸。
4.根据权利要求1或2或3所述的猪瘟病毒表位疫苗，其特征在于：所述中和表位选自于：RRYLASLHSVTFELDTSPVVKGKYNTDDFRFG所述变异表位选自于：KGALLTSKKALPTSKEALPTSYSHDLQYNHDLQYSODLQYNHNLQKGKYNTKAICVAKASCVAKAVCTA
5.根据权利要求4所述的猪瘟病毒表位疫苗，其特征在于：所述疫苗包括分别耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的下述多肽中的一个或几个：CRRYLASLHGRRYLASLHGRRYLASLHCSVTFELGSVTFELGSVTFELGSVTFELCDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVCKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCDDFRFGGDDFRFGGDDFRFGGDDFRFG
6.根据权利要求1或2或3或5所述的猪瘟病毒表位疫苗，其特征在于：疫苗中还包括可接受的药用佐剂。
7.根据权利要求4所述的猪瘟病毒表位疫苗，其特征在于：疫苗中还包括可接受的药用佐剂。
8.一种制备猪瘟病毒表位疫苗的方法，基本上包括以下步骤：(1)、人工合成至少一条含有至少一次重复的猪瘟病毒包膜蛋白E2上抗原区单个中和表位或单个变异表位或多个中和表位或多个变异表位或多个中和表位及变异表位的表位多肽；(2)、将上述表位多肽分别耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物；(3)、将上述耦联物配以可接受的佐剂制备成猪瘟病毒表位疫苗。
9.根据权利要求8所述的一种制备猪瘟病毒表位疫苗的方法，其特征在于：所述人工合成的多肽选自：CRRYLASLHGRRYLASLHGRRYLASLHCSVTFELGSVTFELGSVTFELGSVTFELCDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVCKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCDDFRFGGGDDFRFGGDDFRFGGDDFRFG
一种猪瘟病毒表位疫苗及其制备方法
本发明涉及用生物工程技术制备的疫苗及其制备方法，特别是涉及一种猪瘟病毒疫苗及其制备方法。
猪瘟是由猪瘟病毒(Classical Swine fever virus，CSFV或Hog Choleravirus，HCV)引发的恶性传染疾病，一旦爆发往往在短时间内带来巨大的经济损失。早在50年代，我国便研制出了猪瘟兔化弱毒疫苗，该疫苗是减毒活疫苗的一种，利用减毒后的活猪瘟病毒来诱导免疫防护，有效地控制了猪瘟在我国的大流行和散发，因其安全性和预防效果很好，许多国家也使用此疫苗。进入70年代后期，猪瘟的流行以散发和慢性感染为特征，并且普遍出现免疫失败现象。事实证明，现有的猪瘟兔化弱毒疫苗在预防已发生变异的猪瘟病毒引发的猪瘟流行时，存在着很大的困难。猪瘟病毒亚单位疫苗是目前国内外正在研制的一种猪瘟疫苗，该疫苗是利用基因重组的病毒包膜蛋白来诱导免疫防护。这种疫苗虽然在一定程度上能够对付猪瘟病毒的变异，但疫苗中只包含病毒的一个遗传信息，当病毒发生变异时，该疫苗即会失去效力，并且，该疫苗的生产成本目前仍然较高。
另一方面，猪瘟病毒包膜蛋白E2上的抗原区序列(第690-866位氨基酸残基)已被证实能诱导免疫防护，即能保护猪预防猪瘟病毒的感染(Vaccine 2000，18：2351；Vaccine 1999，17：433；J.Virology 1995，69：6479；Vaccine 2000，18：1374；J.Virology 1993，67：5435)。
同时，本发明的发明人研究发现，多表位的表位多肽能够诱导高滴度的、预先定义的、多中和表位以及变异表位表位特异性的中和抗体。
本发明的目的是提供一种能对付猪瘟病毒变异的猪瘟病毒表位疫苗。
本发明的另一个目的是提供一种生产上述猪瘟病毒表位疫苗的方法。
为实现上述目的，本发明采取以下设计方案：一种猪瘟病毒表位疫苗，它包括至少一个耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的含有至少一次重复的单表位或者至少一次重复的多表位的表位多肽，所述表位选自猪瘟病毒包膜蛋白E2上的中和表位以及变异表位。
所述猪瘟病毒包膜蛋白E2上的中和表位或变异表位位于猪瘟病毒包膜蛋白E2上的抗原区。
更具体地说，所述抗原区为猪瘟病毒包膜蛋白E2上的第690-866位氨基酸残基。
所述中和表位可以选自于：RRYLASLHSVTFEL
DTSPVVKGKYNTDDFRFG所述中和表位的变异表位可以选自于：KGALLTSKKALPTSKEALPTSYSHDLQYNHDLQYSODLQYNHNLQKGKYNTKAICVAKASCVAKAVCTA所述疫苗可以是包括分别耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的下述多肽中的一个或几个：CRRYLASLHGRRYLASLHGRRYLASLHCSVTFELGSVTFELGSVTFELGSVTFELCDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVCKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCDDFRFGGDDFRFGGDDFRFGGDDFRFG为了使疫苗能诱导更强的免疫力，疫苗中还包括可接受的药用佐剂。
一种制备上述猪瘟病毒表位疫苗的方法，基本上包括以下步骤：(1)、人工合成至少一条含有至少一次重复的猪瘟病毒包膜蛋白E2上抗原区单个中和表位或单个变异表位或多个中和表位或多个变异表位或多个中和表位及变异表位的表位多肽；(2)、将上述表位多肽分别耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物；(3)、将上述耦联物配以可接受的佐剂制备成猪瘟病毒表位疫苗。
所述人工合成的多肽可以选自：CRRYLASLHGRRYLASLHGRRYLASLHCSVTFELGSVTFELGSVTFELGSVTFELCDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVGDTSPVV
CKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCDDFRFGGDDFRFGGDDFRFGGDDFRFG本发明利用猪瘟病毒包膜蛋白E2上的中和表位能够诱导猪产生较强，而且时间较长的免疫防护的特性，针对猪瘟病毒变异较多的特点，运用多联疫苗使猪产生多种对猪瘟病毒的抗体，也就是说，当猪瘟病毒的一个或几个表位发生变异时，注射了疫苗的猪还有足以对付该变异猪瘟病毒的对应于其它未变异表位的抗体。本发明的疫苗具有以下优点：1、该疫苗是一种能刺激产生多种中和抗体的高效多联疫苗，能有效对付病毒的变异，进而克服已有猪瘟疫苗预防效果差甚至无效的缺点。2、该疫苗的有效成分是耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的包含有猪瘟病毒包膜蛋白E2上的中和表位或变异表位的表位多肽，这些表位多肽不需要减毒或灭活的病原体或病原体的天然蛋白，也不需要基因重组蛋白抗原以及病原体的核酸，能够直接诱导预先确定的、多个中和表位及变异表位特异性的免疫应答，没有猪瘟病毒的遗传物质及活性，不会产生因猪瘟病毒的遗传物质诱发的副作用，也没有灭活疫苗或减毒疫苗可能复性的危险，同时也可排除使用猪瘟弱毒疫苗(如猪瘟兔化弱毒疫苗)在种猪、母猪和肉猪体内诱导产生的猪瘟减毒活病毒的感染和复制，从而克服猪瘟减毒活病毒感染肉猪给人类带来的潜在的、目前未知的危害。3、能诱导很强的针对特定中和表位的免疫应答，是相应的亚单位疫苗诱导的特定中和抗体水平的10-20倍，针对特定中和表位的抗体量为10-240微克/毫升血清。4、根据猪瘟病毒的变异，可以很快生产出其相应类型的疫苗，不需进行长时间的试验，降低生产成本。该技术将对世界预防医学研究产生重大影响，将使猪瘟病毒疫苗的制备技术产生革命性变化，并且将带来巨大的经济效益和社会效益。
下面结合非限制性具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1、制备以猪瘟病毒E2蛋白为基础的单表位-猪瘟病毒表位疫苗：1.人工合成含有猪瘟病毒E2蛋白抗原区(第690-866位氨基酸残基)序列中和表位KGKYNT，并且重复4次的表位多肽：CKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNT2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)将该表位多肽与载体蛋白牛血清白蛋白耦联；3.将上述耦联物配以油佐剂制备成猪瘟病毒单表位-表位疫苗。
实施例2、制备以猪瘟病毒E2蛋白为基础的猪瘟病毒多联-表位疫苗：1.人工合成分别含有猪瘟病毒E2蛋白抗原区序列5个主要中和表位，并且多次重复的5个表位多肽：CRRYLASLHGRRYLASLHGRRYLASLH
CSVTFELGSVTFELGSVTFELGSVTFELCDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVGDTSPVVCKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCDDFRFGGDDFRFGGDDFRFGGDDFRFG2.利用戊二醛将5种表位多肽分别与载体蛋白BSA耦联；3.将上述耦联物配以油佐剂混合，制备成猪瘟病毒多联-表位疫苗。其中，5种耦联物的份数比可以根据不同年份统计学处理得出的各位点的变异机率进行调整。
实施例3、制备以猪瘟病毒E2蛋白为基础的猪瘟病毒多表位-表位疫苗：1.人工合成含有猪瘟病毒E2蛋白抗原区序列2个中和表位的重复表位多肽：CRRYLASLHGSVTFELCRRYLASLHGSVTFEL2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)将该表位多肽与载体蛋白鸡卵白蛋白耦联；3.将上述耦联物配以油佐剂制备成猪瘟病毒多表位-表位疫苗。
实施例4、制备以猪瘟病毒E2蛋白为基础的猪瘟病毒多表位-多联-表位疫苗：1.人工合成含有猪瘟病毒E2蛋白抗原区序列重复的不同主要中和表位的4个表位多肽：CRRYLASLHGSVTFELGRRYLASLHGSVTFELCSVTFELGDTSPVVGSVTFELGDTSPVVCKGKYNTGDDFRFGKGKYNTGDDFRFGCGDDFRFGSVTFELGDDFRFGSVTFEL2.利用戊二醛将4种表位多肽分别与载体蛋白鸡卵白蛋白耦联；3.将上述耦联物配以油佐剂混合，制备成多表位-多联-猪瘟表位疫苗。其中，4种耦联物的份数比可以根据不同年份统计学处理得出的各位点的变异机率进行调整。
实施例5、制备以猪瘟病毒E2蛋白为基础的猪瘟病毒抗变异-多联-表位疫苗，步骤为：1.人工合成含有猪瘟病毒E2蛋白抗原区序列重复的不同主要中和表位和其变异表位的13个表位多肽：CKGALLTSGKGALLTSGKGALLTSCKKALPTSGKKALPTSGKKALPTSCKEALPTSGKEALPTSGKEALPTSCYSHDLQGYSHDLQGYSHDLQGYSHDLQ
CYNHDLQGYNHDLQGYNHDLQGYNHDLQCYSQDLQGYSQDLQGYSQDLQGYSQDLQCYNHNLQGYNHNLQGYNHNLQGYNHNLQCKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTGKGKYNTCKAICVAGKAICVAGKAICVAGKAICVACKASCVAGKASCVAGKASCVAGKASCVACKAVCTAGKAVCTAGKAVCTAGKAVCTA2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)将上述表位多肽分别与载体蛋白牛血清白蛋白耦联；3.将上述耦联物配以油佐剂混合，制备成猪瘟病毒多表位-多联-表位疫苗。其中，13种耦联物的份数比可以根据不同年份统计学处理得出的各位点的变异机率进行调整。
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