本发明一般涉及通过施用杀细菌/通透性增加(BPI)蛋白产物治疗 创伤出血病人的方法和材料。

通常需要立即外科手术参与的急性创伤出血在美国占发病率和死亡 率的很大比例。[Bickell等，New Eng.J.Med.311:1105-1109(1994), Tran等，Surgery,114:21-30(1993)。]在1982年，美国有大约165,000 人死于创伤，另外对于每一例死亡还有至少二例永久性残疾。由于直接 损伤中枢神经系统，心脏，或主要血管之一，50％的损伤立即导致死亡。 还有大约30％的早期死亡，常常由于无法控制的出血而在损伤后几小时 之内死亡。剩下20％的死亡称之为“晚期死亡”，出现在损伤后几天到 几星期的时期内，这种死亡是由于创伤出血导致的并发症，其中大约80 ％的病例包括感染或多器官系统衰竭(MOSF)。[Trunkey，美国科学， 249:28-35(1983),Turkey,New Eng.J.Med.,324:1259-1263(1991)。]

在立即抢救的外科手术干预下存活的病人中，大约10-40％患有 一系列疾病，包括，例如，系统性炎症，伤口感染，肺炎，脓毒症，呼 吸衰竭，肾衰竭，凝血症，和胰腺炎。出血和输血的需要可能特定地连 带增加手术后感染，呼吸并发症，和多器官系统衰竭的危险[Agarwal 等.Arch.Surg.,128:171-177(1993),Duke等，Arch,Surg.,128:1125- 1132(1993),Tran等，同上]。

由创伤出血导致的这些并发症的原因是多因素和互相相关的。很多 疾病可能与受伤后系统炎症有关。已假设对组织的物理损伤，直接组织 流血灌注不足，和内生孢子细菌的转移及从胃腔吸收内毒素(由于流血 灌注不足和/或其它对胃肠道的损伤)可能在这些并发症的致病机制中起 作用。然而这些提及的因素在与人体中急性失血休克相关的疾病和晚期 残废的病理生理学中的关联仍不清楚。

尽管急性创伤出血是血容量减少休克(即由于减少了血管容量的休 克)的一个潜在原因，但也有大量的潜在原因，如内出血，例如胃肠出 血，腹膜内或腹膜后腔出血，出血到股骨腔中，胸内出血，分割性主动 脉瘤和破裂的主动脉瘤；过度体液流失，例如由于肠或幽门梗阻而严重 呕吐，严重腹泻，出汗，脱水，过度排尿[由于DM糖尿病，DI糖尿病 (diabetes insipidus)，过度多尿，或急性肾衰竭的多尿期]，腹膜炎， 胰腺炎，局部缺血(planchnic ischemia)，坏疽，烧伤；血管舒张，例 如由于神经系统损伤，麻醉，神经节的和肾上腺素能的阻滞剂，巴比士 酸盐过量，毒药；和代谢的，有毒的或体液的血管舒张，如急性肾上腺 功能不全，或过敏反应。其它与循环血量流失无关的休克原因包括心源 性休克(例如急性心肌梗死，心压塞)和梗阻休克(例如急性肺栓塞)。 [参见，例如医疗手册，第28版，Ewald等编辑，Little,Brown and Company,Boston(1995)；塞西尔医药手册，第17版，wyngaarden等 编辑，W.B.Saunders公司，费城(1985)。]

如以下表Ⅰ列出的，正常人体可以很快地失去20％的血量而不表现 任何体征或症状。当失去多达30％血量时会出现有限的心血管窘迫，当 失血30-40％血量时，一般出现血量减少休克的体征和症状。

表1 血量流失的百分率   流失体积     (ml)            临床表现     10-20％    500-1000 通常没有症状，也许在5％的病例中 会对运动有温和的体位性低血压和心 动过速反应     20-30％   1000-1500 仰卧几乎无变化，当直立时常常出现 轻微的头部和直立性低血压；对劳累 有心动过速反应     30-40％   1500-2000 即使仰卧时，血压，心输出量，中心 静脉压，和尿量也会减少，可注意到 渴感，呼吸短促，皮肤冷湿，出汗， 意识模糊和快速较弱的脉搏。     40-50％   2000-2500 严重休克，常常导致死亡

病人常常少尿，每小时尿排出量少于20ml。一般地，身体发现如 休克按照渐进的模式从早期代偿期向进一步阶段演化。在阶段Ⅰ，生理代 偿机制，如增加心输出量或提高系统血管抗性是有效的，只观察到最小 的临床症状和体征。在阶段Ⅱ，这些机制不能有效地代偿血量流失，而 病人可能表现低血压，心动过速和过度呼吸。重要器官灌注减少可能导 致精神状态改变，从焦虑到迷睡到昏迷；尿排出量减少，和心肌缺血(患 冠状动脉疾病的病人中)。病人的外表发紫，发冷和皮肤湿冷反映了过 度的交感神经作用。在阶段Ⅲ，可能是不可逆的，过度和长期减少组织 灌注导致细胞膜功能明显改变，血细胞凝聚，和毛细血管中沉积。在更 不重要的器官中为了保持血压发生的血管收缩这时已经过度，流量减少 到出现细胞损伤的程度。

在创伤出血后，传统的治疗针对止血，防止休克和恢复血容量。优 选地通过插入外周大静脉的大导管得到迅速的体液复苏。充气抗休克外 衣，腿部和腹腔连续充气到15-40mmHg，可以临时地通过提高外周 系统血管抗性稳定病人。可以通过静脉输注电解质溶液；血浆蛋白白蛋 白，或葡聚糖的蚀性溶液；或新鲜全血进行血容量恢复。在紧急情况下， 优选电解质溶液，白蛋白或葡聚糖而不是新鲜全血，这是因为需要大量 的体液，而在输血中如果进行定型和交叉配血可能发生耽搁，并且有输 血过敏反应的可能性。当由于失血休克时，应尽可以快地施用单独包装 的红血细胞。当失血量很大时，血型特异的未配血的血可以安全地使用。 很少见地，可以使用O型血。

失血后林格乳酸盐注射液或生理盐水的快速灌注是最广泛使用的体 液治疗。开始进行估计血流失量的2-3倍的灌注。因为这些溶液迅速 地分布到内管内和血管外空隙，所以必需用蚀性溶液补充。当灌注大量 的电解质溶液时，病人常常产生外周水肿，老年病人可能产生肺水肿。

广泛使用的蚀性溶液包括6％高分子量葡聚糖(葡聚糖70)溶液， 10％低分子量葡聚糖(葡聚糖40)溶液，和生理盐水中含5％白蛋白的 溶液。输注葡聚糖70产生的起始用量影响稍多于输注总量影响。葡聚糖 在1-2天期间缓慢清除，使正常生理机制有时间补充血量流失。葡聚 糖40的起始用量影响是输注总量影响的几乎两倍。然而低分子量物质更 快被清除，用量延续的影响在24小时内，正常血量补充机制达到最高前 即被消除。在一些接受葡聚糖40的病人中出现急性肾衰竭。施用超过1 升用量的任一葡聚糖溶液可能干扰血小板粘连和正常的凝血连锁过程。 在生理盐水中含5％白蛋白的溶液在血容量减少的病人中产生已知的用 量效应的优势，但这种制品相对更贵并且制备时耗时。每升含120毫当 量乳酸钠，120毫当量氯化钠和12.5g白蛋白的高渗白蛋白制品提供期望 的用量效应并将间隙流失减到最小。高渗溶液的使用需要认真地监测动 脉和中心静脉压以避免体液过量。必须严格监测共同存在的问题如充血 性心衰竭，心瓣膜疾病，心肌缺血，或肾功能不全，并且必须考虑急性 处理时外来的血液动力学控制。相关的凝血病和电解质不平衡也必须得 到调整。

BPI是一种从哺乳动物多形核白细胞(PMNs或中性粒细胞)的颗 粒中分离出来的蛋白，PMNs是抵抗外来微生物的必要的血细胞。人BPI 蛋白通过酸抽提结合离子交换层析[Elsbach，生物化学杂志， 254:11000(1979)]或大肠杆菌亲和层析[weiss等，血液，69:652(1987)]从 PMNs中分离。通过此处提及的这种方法获得的BPI为天然的BPI，并 表明其具有针对广谱革兰氏阴性细菌的杀菌活性。人BPI的分子量是大 约55,000道尔顿(55KD)。完整的人BPI的氨基酸序列和编码蛋白的 DNA核苷酸序列已有报导，见图1,Gray等，生物化学杂志，264:9505 (1989)，此处引用作为参考。Gray等测定的氨基酸序列在本说明书的 SEQ ID No:1中列出。美国专利号5,198,541公开了编码BPI蛋白的重 组基因及表达BPI蛋白的方法，其中包括BPI全蛋白和BPI的片段。

BPI是一种强正电蛋白。BPI分子的N端部分带大量净正电荷。分 子C端部分带-3的净负电荷。[Elsbach and weiss(1981)，同上]。蛋 白水解的分子量大约25KD的BPI的N端片段基本上具有天然来源的 55KD人BPI全蛋白的所有抗菌效力。[Ooi等，生物化学杂志 262:14891-14894(1987)]。与N-端部分相反，分离的人BPI蛋白的C 端只显示轻微的可检测到的对革兰氏阴性细菌的抗菌活性。[Ooi等，J. Exp.Med,174:649(1991)]大约23KD的BPIN端片段，称为rBPI23，已 通过重组方法得到，并且也保留了对革兰氏阴性细菌的抗菌活性。 Gazzano-Santoro等，Infect,Immun,60:4754-4761(1992)。

已有报道BPI的杀菌效力对革兰氏阴性细菌高度特异，如，见 Elsbach和Weiss，炎症：基本原理和临床联系，Gallin等编，第三十章， Raven出版公司(1992)。BPI杀革兰氏阴性细菌的精确机制还不完全 清楚，但已确认，首先BPI必需通过带正电的BPI蛋白和细菌脂多糖上 带负电位点间的静电和疏水作用结合到细菌表面上。认为在敏感的革兰 氏阴性细菌中，BPI的结合破坏LPS结构，导致细菌内降解磷脂和肽糖 的酶的活化，改变细胞外膜的通透性，并起动最终导致细菌死亡的事件。 [Elsbach和Weiss(1992)，同上]。因为LPS刺激有力的炎症反应，所以被 称为内毒素，即宿主炎症细胞所释放的介质可最终导致不可逆的内毒素 性休克。BPI可结合脂质A，而根据报道脂质A是LPS中毒性最强和 生物活性最高的成分。

BPI蛋白从来没有被用于治疗患创伤出血或与创伤失血相关的休 克(即低血容量休克)的病人。Bahrami等，在维也那国际内毒素协会 会议的发言，1992年8月，报道了对出血大鼠施用BPI蛋白。Yao等， Ann.Surg.,221:398-405(1995)，报道了对受180分钟长期出血损伤的 大鼠施用rBPI21(下述)而后复苏。美国专利号5,171,739、5,089,724 和5,234,912报道了BPI在不同的体外和体内动物模式研究中的应用，这 些研究被认为与治疗内毒素相关疾病有关，包括内毒素相关的休克。在 共同拥有，共同未决的1995年1月24日递交的美国申请系列号 08/378,228,1994年8月16日递交的08/291,112，和1994年1月24日 递交的08/188,221中；此处引用作为参考，描述了BPI蛋白产物与循环 中内毒素一起施用给人体。[也见von der M_hlen等，J.Infect.Dis. 172:144-151(1995)；von der M_hlen等，血液85:3437-3443(1995)；de Winter等，J.Inflam.45:193-206(1995)]。在共同拥有，共用未决的1995 年5月10日递交的美国申请系列号08/644,287中，描述了BPI蛋白产物 施用给患严重脑膜炎球菌血症的病人。

尽管有抗生素治疗和本领域重症监护医疗疗法，但是与创伤出血相 关的死亡率和病态仍然很严重，这一难题尚未由现行的治疗方法解决。 需要新的治疗方法以降低或改善这些不幸事件和改进这些病人的临床结 果。

发明概述

本发明提供治疗患创伤出血的病人的新方法，涉及施用BPI蛋白产 物以达到临床上可证实地减轻这种疾病状态的不良后果或相关并发症， 包括死亡率和并发症或病态。

根据本发明，BPI蛋白产物和rBPI23以足以降低或防止死亡率和/ 或降低发病率或并发症或病态的严重性的用量施用给患创伤出血的病 人，并发症或病态包括感染(例如外科手术部位感染)或器官功能障碍 (例如弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫，急性肾衰竭，或肝胆衰竭)。

本发明也包括BPI蛋白产物在用于治疗患创伤出血的病人的医药制 品中的应用。

在考虑以下描述目前优选实施方案的发明详述的基础上，对于本领 域里技术人员，本发明的很多其它方面和优点将变得很清楚。

附图简述

图1表示在rPBI21和无效对照治疗群体中不良事件的发生率。

发明详述

急性创伤出血是危及生命的疾病，即使本领域重症监护医疗，也有 很严重的死亡率和病态。期望给患由于急性外伤损伤(如刺伤和/或钝伤) 而出血的病人施用BPI蛋白能有效地减少死亡率和降低与创伤出血有关 或由创伤出血导致的并发症或病态的严重性。并发病包括感染(例如在 外科手术部位，伤口器官，解剖空间，血流，尿道，或肺炎)或器官功 能障碍[例如弥散性血管内凝血(ARDS)，急性呼吸窘迫，急性肾衰竭， 或肝胆衰竭]，并且可以包括严重的并发症。其它的并发症可以是肺功能 障碍，包括ARDS和肺炎。这些对死亡率和与创伤出血有关或由创伤出 血导致的并发症的未预料到的影响表明BPI蛋白产物有效地干扰或阻断 很多导致疾病不良后果的尚不清楚的多种病理生理过程。在治疗或预防 器官功能障碍和严重感染中可以使用BPI蛋白作为辅助治疗。预期BPI 蛋白产物对患创伤出血的病人提供有利影响，如减少损伤严重程度，减 少氧气支持和肌收缩力(作用于血管的)治疗的时间长度，减少伴发凝 血病的持续时间或严重性，缩短在重症监护室(ICU)中停留时间，减 少住院时间，并减少并发症如凝血症，呼吸衰竭，肝功能衰竭，昏迷或 不正常的精神状态，肾上腺皮质坏死，和严重感染的发病率和持续时间， 包括在伤口，器官，解剖空间，血流，尿道或肺炎中的严重感染。

含有BPI蛋白产物的治疗组合物可系统给药或局部给药。系统给药 途径包括口服，静脉内，肌肉内，皮下注射(包括注射入贮存脂肪以长 期释放)，眼内和眼球后，鞘内，腹膜内(如腹腔灌洗)给药，使用气 化的或雾化的药物肺内给药，或经皮肤给药。优选的途径是静脉注射。 当肠胃外给药时，BPI蛋白产物组合物通常的注射剂量是每天1μg/kg- 100mg/kg，优选的剂量是每天0.1mg/kg-20mg/kg，更优选的剂量是每 天1-20mg/kg，最优选的剂量是每天2-10mg/kg。治疗可以在受伤后立 即开始或受伤后一段时间内进行(包括，例如受伤后6,12，或24小 时内，或由治疗医生决定的临床上合理的时间期限内，例如，受伤后48 至72小时)。最近优选地是以每天4-6mg/kg的剂量静脉输入BPI蛋白， 连续48-72小时。治疗可通过连续输注或间歇注射或输注持续给药， 同时每天减少或增加剂量，例如治疗1～3天，并且其它的按照治疗医 生的决定。可选择地，BPI蛋白产物大剂量起始静脉注射后连续输注， 这样的一次治疗方案是1-20mg/kg静脉大剂量BPI蛋白产物后以1- 20mg/kg/日的剂量静脉输注，持续多达1周。另一个这样的剂量方案是 2-10mg/kg起始剂量后以2-10mg/kg/日的剂量静脉输注，继续72小时。 局部途径包括以灌洗液给药，例如冲洗伤口，或胸内，或皮下腔。其它 局部途径包括以软膏、滴眼液、滴耳液，或药用洗发液形式给药。例如 对于以滴液形式的局部给药，根据治疗医生决定的每天一次或多次地施 用大约10-200μl的BPI蛋白产物组合物。本领域的技术人员可以容易地 根据由良好的医疗实践和个别病人的临床状况决定的优化含BPI蛋白产 物的治疗组合物的有效剂量和给药方案。

如此处所用的，“BPI产物”包含天然的和重组产生的BPI蛋白； 天然的、合成的和重组的BPI具生物活性的蛋白多肽片段；BPI蛋白或 其片段的生物活性多肽变体，包括杂交融合蛋白和二聚体；BPI蛋白或 其片段或其变体的生物活性多肽类似物，包括半胱氨酸置换类似物；和 BPI衍生肽，根据本发明施用的BPI蛋白产物可通过本领域已知的任何 方法制备和/或分离。美国专利号5,198,541,此处引用其公开文本作为参 考，公开了编码BPI蛋白的重组基因和表达BPI蛋白包括重组的BPI全 蛋白，称为rBPI50(或rBPI)和BPI的重组片段的方法。共同拥有的， 共同未决的美国专利申请系列号07/885,501和它的部分继续申请，1993 年5月19日递交的美国专利申请系列号08/072,063和对应的1993年5 月19日递交的PCT申请系列号93/04752，此处引用所有这些作为参考， 公开了新的纯化在基因转化的哺乳动物宿主细胞中表达并从中分泌的重 组BPI蛋白产物的方法，并且公开了怎样可以生产大量的适于掺入稳定 均一药物制品的重组BPI产物的方法。

BPI的生物活性片段(BPI片段)包括具有与天然的人BPI全蛋白 相同或相似氨基酸序列的生物活性分子，只是该片段分子缺少全蛋白的 氨基端氨基酸，内部氨基酸，和/或羧基端氨基酸。在Ooi等，J.Exp.Med, 174:649(1991)中描述了包括天然人BPI的N-端，大约25KD的这样的 片段的非限制性例子，并且在Gazzano-Santoro等，Infect.Immun. 60:4754-4701(1992)中描述了编码天然人BPI从1到大约193或199位 N-端氨基酸的DNA的重组表达产物，称rPBI23。在此公开文本中，使 用表达载体作为编码重组表达产物(rBPI23)的DNA的来源，该表达载 体有31个残基的信号序列和成熟的人BPI N-端的前199个氨基酸，如 Gray等，同上，图1中列出的，除了151位Val由GTG而不是GTC限 定和残基185是谷氨酸(由GAG限定)而不是赖氨酸(由AAG限定)。 已生产了具有在Gray等，同上，图1中列出的序列(SEQ ID NOs:1和 2)的重组的全蛋白(rBPI50)，除了有已知的rBPI23中的不同外，还 有471残基是丙氨酸(由GCT限定)而不是缬氨酸(由GTT限定)。 其它例子包括BPI片段的二聚体形式，描述于共同拥有的，共同未决的 1994年3月11日递交的美国专利申请系列号08/212,132和对应的PCT 申请No.PCT/US95/03125，此处引用这些公开文本作为参考。优选的二 聚体产物包括其中单体是具有BPI全蛋白的N端从大约1到175或大约 1到199位残基的BPI片段的二聚体BPI蛋白产物，特别优选的二聚体 产物是具有N-端1到193位残基的BPI片段的二聚体形式，称为rBPI42 二聚体。

BPI的生物活性变体(BPI变体)包括但不局限于包含BPI全蛋白 或其生物活性片段和至少一种其它多肽的至少一部分的重组的杂交融合 蛋白，和BPI变体的二聚体形式。这样的杂交融合的和二聚体形式的例 子由Theofan等在共同拥有的，共同未决的美国专利申请系列号 07/885,911和1993年5月19日递交的其部分继续申请美国专利申请系 列号08/064,693和1993年5月19日递交的对应的PCT申请号 US93/04754中描述，此处引用所有这些作为参考，这些例子包括在氨基 端含BPI蛋白或其生物活性片段和在羧基端含免疫球蛋白的重链的至少 一个恒定区或其等位变体的杂交融合蛋白。包含部分或全部的脂多糖结 合蛋白(LBP)的相似构象的杂交融合蛋白，也考虑在本发明中使用。

BPI的生物活性类似物(BPI类似物)包括但不限于其中1个或多 个氨基酸残基被不同的氨基酸置换的BPI蛋白产物。例如共同拥有、共 同未决的1993年2月2日递交的美国专利申请系列号08,013,801和1994 年2月2日递交的对应的PCT申请系列号US94/01235公开了其中半胱 氨酸残基被一个不同的氨基酰残基置换的BPI和BPI片段的多肽类似 物，此处引用这些公开文本作为参考。由此申请描述的优选的BPI蛋白 产物是编码BPI全蛋白N端从1到大约193或199位氨基酸的DNA的 表达产物，其中在132位残基上半胱氨基被丙氨酸替换，该产物命名为 rBPI21 ΔACys或rBPI21。其它的例子包括BPI类似物的二聚体形式；如 共同拥有和共同未决的1994年3月11日递交的美国专利申请系列号 08/212,132，和对应的PCT申请号PCT/US95/03125，此处引用这些公 开文本作为参考。

根据本发明的方法所述的其它有用的BPI蛋白产物是来自或以通过 重组或合成的方式合成的BPI为基础的肽(即BPI衍生肽)，如在对应 于1994年9月15日递交的美国专利申请号08/306,473和1994年3日11 日递交的美国专利申请号08/209,762的共同拥有和共同未决的1995年7 月20日递交的美国专利申请系列号08/504,841和共同拥有和共同未决的 1994年9月15日递交的PCT申请号PCT/US94/10427中描述的。1994 年3月11日递交的美国专利申请号08/209,762是1994年1月14日递 交的美国专利申请号08/183,222的部分继续申请，这一部分继续申请又 是1993年7月15日递交的美国专利申请号08/093,202的部分继续申请 (与之对应的国际申请是1994年3月11日递交的PCT申请号 US94/02401)，这一部分继续申请又是1993年3月12日递交美国专利 申请系列号08/030,644的部分继续申请，此处引用所有这些公开文本作 为参考。

目前优选的BPI蛋白产物包括重组生产的BPI N端片段，尤其是那 些分子量大约在21-25KD之间那些BPI蛋白产物如rBPI23或rBPI21， 或这些N端片段的二聚体形式(如rBPI42二聚体)。另外，优选的BPI 蛋白产物包括rBPI50和BPI衍生肽。特别优选的是rBPI21。

BPI蛋白产物的给药优选地用含有BPI蛋白产物和药学上可接受的 稀释剂，佐剂，或载体的药物组合物完成。BPI蛋白产物可单独施用或 结合已知表面活性剂、其它化学治疗药物或其它已知的抗微生物试剂施 用。一种含BPI蛋白产物(如rBPI50,rBPI23)的药物组合物包含在柠 檬酸盐缓冲液(5或20mM柠檬酸，150mM NaCl,pH5.0)中浓度为 1mg/ml的BPI蛋白产物，按重量比0.1％的泊洛沙姆188(Pluronic F-68,BASF Wyandotte,Parsippany,NJ)和0.002％的聚山梨酯 (Tween 80,ICI Americas Inc.,Wilmington,DE)。另一种含BPI蛋 白产物(例如rBPI21)的药物组合物在5mM柠檬酸，150mM NaCl,0.2 ％泊洛沙姆188,0.002％的聚山梨酯中含浓度为2mg/ml的BPI蛋白产 物。这样的组合描述于共同拥有和共同未决的1994年2月2日递交的 PCT申请号US94/01239中，这一申请对应于1994年2月2日递交的美 国专利申请序号No.08/190,869和1993年2月2日递交的美国专利申请 号08/012,360，此处引用所有这些公开文本作为参考。

通过考虑以下说明的实施例，可了解本发明的其它方面和优点。实 施例1指出在人体中施用BPI蛋白产物对与创伤出血相关的死亡率的影 响。 实施例1 临床实验方案-BPI蛋白产物的治疗效果

设计人体临床实验以检查典型BPI蛋白产物(rBPI21)在治疗急性 创伤出血病人中的效果。因此，进行多中心的，随机的，双盲的，具无 效对照的实验，以比较在急性创伤出血病人中48小时期间无效对照处理 和rBPI21处理的情况。大约400位患急性创伤出血并需要输至少两单位 血的紧救室病人以1∶1比例随机分开分别用rBPI21或无效剂处理。除了 标准治疗，每个病人通过连续静脉输注在48小时期间接受8mg/kg rBPI21 或相同量的无效剂。在大多数情况下，病人的体重以kg进行测定作为最 佳估计值。

从第1天到第15天通过跟踪病人并发症如受损器官功能和感染的 产生，和存活来监测效率。通过在处理前和处理后系列化学和血液学参 数测试以及15天中每天对不良事件的评估来监测安全性。在第29天得 到存活和不良并发症的最终评估。

如果患急性创伤出血送进医院的病人符合以下包含标准和排除标 准，则选作实验的对象。包含标准是：(1)年龄(或承诺年龄)18- 75，含首尾年龄；(2)病人患创伤继发性急性出血；(3)实验药物 在创伤事件出现6或12小时内施用(如果事件的精确时间未知，可提供 最佳估计值)；(4)病人需要并已开始接受第二单位包装的红血细胞； 以及(5)病人提供口头通知的同意或最近的亲属提供书面通知的同意。 排除标准是：(1)允许进急救室按修正的伤员外伤评分(TRTS，评 分0-12)小于2，见下表2[Champion等，Crit.Care Med., 9(9):672-676(1981)；Greenfield等，第10章，Surgery Scientific Principles and Practices,J.B.Lippincott公司，费城，pp252-255 (1993)]；(2)严重头部创伤[Glasgow昏迷评分(GCS)≤5或等效的 证据]，见下表3[Teasdalet等，Lancet,1:81(1974)]；(3)单独的颅部 伤；(4)伴随麻痹的脊柱损伤；(5)身体表面积的至少20％二级烧 伤；(6)已知HIV阳性(进医院时非强迫性的化验)；(7)已知先 前已患肾病(肌酸酐＞2.0)；(8)已知先前已患心脏病(纽约心脏协 会分级大于Ⅲ，见下表4[Braunwald，于Branuwald等，心脏病，心血 管药物手册，第三版，W.B.Saunders公司，费城，PA，第12页 (1988)；J.Am.Med.Ass’n 249:539-544(1988)]；(9)已知先前已 患早期或转移的内脏器官癌症；(10)主动脉pH值(初期值)＜6.8或 碱短缺值＞15(如果已测量)；(11)已知的电流类固醇治疗(＞10mg 泼尼松/日，持续一个月)(12)已知已患肝硬变或活动性肝炎；(13) 怀孕或泌乳期；(14)在此前30天内有其它试验性药品(包括试验性 血液产物)参与；(15)体重(估计)超过120kg；以及(16)“不 能复苏”(DNR)或等效的指令。

表2修正的伤员外伤评分(TRTS)*   评估      方法              分类 呼吸频率   (RR) 检查15秒钟的呼   吸数并乘以4     10-29      ＞29      6-9      1-5       0 = = = = =     4     3     2     1     0 血收缩压   (SBP) 通过听诊器或触 诊在一手臂上测   量收缩腕压      ＞89     76-89     50-75      1-49       0 = = = = =     4     3     2     1     0  Glasgow  昏迷评分 根据下表Ⅲ计算 将GCS换算成   下列评分：     13-15      9-12      6-8      4-5      ＜4 = = = = =     4     3     2     1     0 *TRTS是RR,SBP和GCS分类的总结(范围0-12)

表3 Glasgow昏迷评分 睁眼 动作反应 语言反应 自发的 对声音反应 对疼痛反应 不反应 遵守指令 局部疼痛 正常弯曲(收回) 异常弯曲(皮质剥除) 无反应 定向 混淆的对话 不当的语言 难懂的声音 不反应 4 3 2 1 6 5 4 3 1 5 4 3 2 1 分数的范围从3到15。

表4修正的纽约心脏协会功能分级 ClassⅠ. 病人有心脏病，但不限制身体运动。一般的 身体运动不引起过度呼吸困难，咽痛，疲劳 或心悸。 ClassⅡS. 对肢体运动稍有限制的病人，在休息和中等 劳累时无不适感，仅在一般活动的较用力的 等级上感受到症状。 ClassⅡM. 对肢体运动有中等程度限制的病人，在休息 和轻度劳累时无不适感，在一般活动的中等 程度上感受到症状。 ClassⅢ. 对身体运动有明显限制的病人，在休息时无 不适感，但即使在一般活动的轻度级别上也 感受到症状。 ClassⅣ. 进行任何身体运动都会有不适感的病人，即 使在休息时也有心功能不全或绞痛综合症 的症状，且在活动时加重

对所有随机处理的病人记录以下情况：(1)事故的日期和估 计时间，以及送进急救室的日期和时间；(2)对于随机抽样且未 进行处理的病人，其未进行处理的原因；(3)从到达医院至手术 后的大约48个小时内，病人在诸如急救室、手术室、麻醉后临护 室或外科重症监护室之类的地方接受血液、血液制品和体液如包装 的红血细胞、全血、自身输血、血小板、新鲜冻血浆、类晶体或蚀 体的日期，时间，用量和部位，如果病人未做外科手术，在实验期 第1、2、3天内收集的上述内容是合适的；(4)施用第二单位 血的日期和时间(应在进外科前进行，以确定是由创伤而不是外科 手术引起的出血)，以及麻醉的日期和开始与终止时间；(5)外 科手术的日期，开始和结束时间，在手术室的估计出血量，以及在 麻醉后监护室的日期和时间；(6)实验药物输注开始和结束的日 期和时间，输注量，暂时中断或永久停止的原因；如果可能，如果 中断了，输注量；(7)直接病历(包括损伤的程度和性质，间发 病，导致失血的情况等)，个人情况和直接体检信息如性别、年龄、 体重(估计或测量)、身高(估计或测量)、重要体征、受伤的体 征；(8)筛选适当女病人(所有可能怀孕的妇女，即既未外科绝 育又未记录的绝经的所有妇女)时的怀孕测验结果；(9)在筛选 合格性时进行TRTS的结果(包括真实测量)。

开始输注第二单位的血后，研究者以连续编号顺序施用来自试 剂盒的未知的实验药物。每个试剂盒包含rBPI21或无效剂。rBPI21 作为在10毫升一次性使用的玻璃瓶中的澄清、无色、无菌、非致 热溶液提供，该溶液浓度为在5mM柠檬酸钠/0.15M氯化钠缓冲液 (pH5.0)中含2mg/ml，缓冲液中含有0.2％的泊洛沙姆 (poloxamer)188和0.002％聚山梨脂80，不含防腐剂，RBPI21 在施用前一直保存在冰箱中，温度为2～8℃。无效剂作为在10ml 一次性使用的玻璃瓶中的澄清、无色、无菌、非致热溶液提供。无 效剂在5mM柠酸钠/0.15M氯化钠缓冲液(pH=5.0)中含 0.2mg/m1人血清白蛋白，不含防腐剂。无效剂在施用前也一直保 存在冰箱中，温度为2-8℃。给每个病人使用的试剂盒包含了含 有对病人所有剂量的实验药物的足够药量的小瓶，每个小瓶含10 毫升测试物质。

试验如上所述分成两组(活性rBPI21和无效对照)。实验药 品药在输注前放在室温下，在整个剂量过程中，按照静脉注射的良 好无菌技术。实验药物在48小时时期通过静脉输注到中心或外周 静脉血管施用。24小时后将输注包/管这一套注射用品完全更换。 静脉注射口是否恰当由从注射口血顺畅回流以及静脉液体无渗入 的顺畅输注确定。在输注过程中这些实验药物是在选定部位施用的 唯一药剂，静脉注射部位不是肝素化的，而必须和生理盐水一起注 入。输注部位的任何反应症状都作为不良感受记录在病人的病情记 录表和备存档案中。

对在所选实验部位处理的病人进行如下评估：(1)rBPI21 的血中含量：用于评估rBPI21含量的血在以下时间抽取(仅在所 选研究部位)：输注开始前(输注开始前60分钟之内)，输注开 始后的以下时间：1、4、8、12、20、24、32、36、40小 时，48小时输注结束前的15分钟内，以及输注结束后的以下时 间：7分钟(48:07)、15分钟(48:15)、30分钟(48:30)、 1小时(49:00)、3小时(51:00)、6小时(54:00)和24小 时(72:00)；(2)抗rBPI21的抗体：用于评估抗rBPI21的抗 体的血液在所选实验部位在以下时间抽取：实验药物输注前一天， 以及如果病人仍在医院或返回诊所，则在第15和29天(实际抽取 时间可以在第10-20以第21-29天内变化)；以及(3)细胞 素，用于评估细胞素的血液在选定实验部位抽取。

在实验药物输注前一天、输注结束后的第3天和第8天评估下 列实验室安全化验指标，但是如果病人在第8天或之前离开，如果 可能，该评估在离开前进行：(1)血液学指标：血红蛋白、血细 胞比容、红细胞含量、白细胞含量和差异和血小板含量；(2)血 清化学指标：钠、钾、钙、氯、亚磷酸、血尿氮量、肌酸酐、尿酸、 葡萄糖(空腹)、肌酸磷酸激酶(CPK)、胆固醇、白蛋白、总 蛋白、天门冬氨酸转氨酶(AST,SGOT)、血清谷氨酸丙酮酸 转氨酶(ALT,SGPT)、胆红素(总)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、 乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶。

对所有处理的病人在实验药物输注后至第15天和/或第29天 记录下列情况：(1)不良事件(持续至第29天)；(2)存活 状态包括死亡的日期和原因(持续至第29天)；(3)在ICU的 日期(持续至第29天)；(4)在医院内的日期(持续至第29天)； (5)通气的日期(持续至第29天)；(6)用指定方法渗析或 血过滤的日期(持续至第29天)；(7)伴随药物包括每天输血 量(持续至第29天)；(8)进行主要外科手术过程，例如包括 再次手术但不包括如中心线、Swan-Ganz导管和主动脉线的替 换，腰部穿刺等过程(持续至第29天)；(29)在目前住院期间 进行基于诊断评估的创伤严重性评分(ISS)；(10)器官功能 障碍和存在感染的每日评估(持续至第15天)；(11)与每天最 高和最低温度相关的并包含每天最高和最低温度的每天重要体征 (持续至第15天)；以及(12)至少每八个小时对施用试验药品 的输注部位的监视，观察结果记录在进展笔记中或相应的地方。

使用下列定义评估器官功能障碍。在下列情况下病人被认为具 有弥散性血管内凝聚(DIC)：(1)血小板异常低值(或比原先 记录值有＞25％的减少)和增加的凝血酶原时间或增加的部分促凝 血酶时间和流血临床证据，或(2)如果得到，确认实验是阳性的 (FDP＞1∶40或D型二聚体(D-Dimers)＞2.0)。这些异常必 须在缺少医学上明显混淆因素，如肝衰竭，严重血肿，或抗凝聚治 疗时存在。

当病人具有以下情况时被认为有急性呼吸窘迫综合症 (CARDS)：两侧肺渗入与肺水肿一起存在，和PaO2/FiO2＜200。 这些体征必须在不存在出血性心衰竭或原发肺疾病如肺栓或肺炎 时出现。肺动脉楔形压力(PAWP)测量时必须＜18mmHg。

病人具有以下情况时被认为有急性肾衰竭(ARF):(1) 需要渗析或血渗透(对第一次分析使用的定义)(2)或血清肌酸 酐变得异常，在病人中比记录的正常基准肌酸酐增加≥2.0mg/dl， 或(3)血清肌酸酐在不知道有肾功能不全而且其基准肌酸酐未知 的病人中≥3.0mg/dl，或(4)血清肌酸酐是住院前2倍或者在已 患肾功能不全的病人中是rBPI21处理前含量的两倍。这些发现天 然情况下必须不是肾前的(例如：与脱水或胃肠出血相关的)或由 于横纹肌溶解的。

仅在没有原发肝病(如肝炎或肝硬化)、酒精中毒或胆病的病 人中才评估手术后肝胆功能障碍(HBD)。在下列情况下认为病 人具有肝胆功能障碍：胆红毒超过3.0mg/dl，以及碱性磷酸酶、γ -谷氨酰转移酶(GGT)、丙氨酸转氨酶(ALT，或SGPT)、 或天冬氨酸转氨酶(AST，或SGOT)超过正常上限值的两倍。 这些发现必须在不存在混淆疾病时出现。

也评估了病人的伤口、外科手术部位(表层和深层切口部位)、 器官、解部空间、血流(菌血症)、尿道或呼吸道(肺炎)的感染 情况。

向医生基础研究者提供了各个器官功能障碍的定义并要求他 们在处理前和第1-15天的每日记录下列情况：(a)根据提供 的定义各器官功能障碍是否“存在”、“临床上存在”、“不存在 但临床上存在”、或“未知”；以及(b)定义所要求的所有可得 到的真实实验或临床数据，看其是否满足定义。也向调查者提供了 感染的定义并要求他们记录(a)在第1～15天期间的任何时间 每种类型的感染是“存在”还是“不存在”以及(b)如果“存在” 定义所要求的真实的培养和临床数据。

为了提供这些终点的更客观的分析，并基于独立数据安全监测 板的推荐，在首次功效中期分析之前开发了计算机程序，以50％ 的精确度使用用于每个定义所需的真实实验、临床和培养数据进行 相同器官功能障碍和感染的定义。在预处理和第1-15天内的每 天该算法把每一种器官功能障碍定义为“存在”、“临床上存在”、 “不存在但临床上存在”还是“未知”。如果在某一天定义所需的 最低限度的评估没有提供，这一天的每个器官功能障碍就分类为 “不知道”。如果在所选日进行了所有评估且每一种评估都满足特 定器官功能障碍的相应标准，则定义为“存在”。因此，那些在所 选日缺少一种或多种所需评估的病人不能被分类为在那天对于那 种器官功能障碍是“存在”。在那些评估不完全的日期，如果每一 种未缺少的评估满足那种器官功能障碍的相应标准，这种器官功能 障碍就被分类为“临床上存在”。因此，“临床上存在”意味着基 于不完全的证据，当天可能存在器官功能障碍，且当天没有记录相 反的证据。由于严重的ARF定义为在第1～15天期间的至少一天 中使用了透析/血渗透，“临床上存在”不适用于严重的ARF。如 果那天不符合“存在”、“临床上存在”、“未知”的定义，器官 功能障碍就认为是“不存在或临床上存在”。被分类为其器官功能 障碍为“存在”、“临床上存在”的病人需要已经满足另一并发症 的主要终点的预处理，以使其已被分类为满足第1～15天内的主 要终点。

对于感染，在第1-15天期间算法把每一种感染都定义为“存 在”或“不存在”。每一次定义为“存在”的都根据所提供数据需 要至少在第1-15期间至少一天严格满足定义。如果病人不满足 感染“存在”定义，对于这种感染就被分类为“不存在”。

有下列严重感染发生时，定义为严重并发症：(1)外科手术 部位深层切口的感染；(2)器官或解剖空间感染；(3)继发性 血流感染；(4)原发血流感染；及(5)肺炎；或下列严重的器 官功能障碍：(1)弥散性血管内凝聚(DIC)或凝血病(2)急 性呼吸窘迫综合症(ARDS)；(3)需要透析/血渗透的急性肾 衰竭(ARF)以及(4)肝胆功能障碍(HBD)。不管并发症的 数目，把患并发证的病人算为一个。

检测19个部位，1411个病人并随机选取401个病人为被研究 组，并接受治疗。在401个病人中，199个接受无效剂处理，202 个接受rBPI21处理。31个病人(15个无效剂，16个rBPI21)未 接受实验药物的全部施用。12个病人(6个无效剂和6个 rBPI21)在第29天之前从研究中退出。来自所有接受任何用量的 实验药品的病人的数据都包含在所有安全和功效分析中，即使输注 是不完全的，也不管病人是否从研究中退出。

实验人群的平均年龄是35(范围：16-80岁)；80％的病 人在45岁以下。平均剂量体重为79kg(范围：45-145kg)。 77％的病人为男性。创伤来源分为：钝伤(50％)、刺伤(48 ％)或二者都有(2％)。在其它与创伤相关的特征中，平均TRTS 为10.6(范围：0-12)；平均GCS为13.2(范围：3-15)； 平均ISS(版本’90)为23.9(范围1-75天)；在实验药物输 注前开始的平均PRBC单位数为6.4(范围：0-57)；从创伤 事故到药物输注的平均时间为9.5小时(范围：1.3-21.8小时)。 处理组的年龄、体重、种族、创伤来源、TRTS、GCS和输注时 间无明显不同(对部位控制P＞0.10)，但无效剂组的女性比例稍 高(P-0.11，控制部位)。抽样进行rBPI21和无效剂处理的病人在 药物输注前输入的包装的红血细胞(PRBC)单位数是相似的。无 效对照病人的平均ISS(平均25.1)略差于rBPI21处理的病人(平 均22.7)(P=0.07，控制部位)。

预指定的原始功效分析集中在第0小时至第15天中任何时间 发生的死亡率原始终点或严重交发症(定义为如用算术方法评估的 严重器官功能障碍或严重感染)。在这个研究中的全部死亡率是低 的(约5-6％)。处理组用科克期线性回归比较、按部位分级且 未用斜方差修正。通过计算机算法使用“存在”的严格定义并随后 结合不完整证据(导致分类为“存在”或临床上存在)对结果进行 分析。不考虑算术方法，到第15天对于rBPI21病人的死亡率和严 重并发症比无效剂对照病人低7％。用两种算术方法对死亡和严重 并发症的事件率Kaplan-Meier评估总结在表5中表示。

表5         结果和统计计算     无效剂  (人数=199)    rBPI21 (人数=202) P值 由算法定义为    “存在” 实际事件百 分率(具有 事件病人数  /总病人    数)     46％   (91/199)     39％   (78/202) 15天内事件    率的  Kalan- Meier评估     46％     39％     0.17 由算法定义为 “存在/临床上     存在” 实际事件百    分率 (具有事件 病人数/总  病人数)     55％   (109/199)     48％   (97/202) 15天内事件     率的  Kalan- Meier评估     55％     48％     0.15

如从科克期线性回归的概率比值测得的，通过两种算术方法， 无效对照病人经受死亡或严重并发症的可能性比rBPI21处理的病 人大1.27倍(rBPI21对无效剂的概率比值为0.79；用“存在”时 对于死亡和严重并发症P=0.13；用“存在或临床上存在”时对于 死亡和严重并发症P=0.09，由中心分级)。

作为第二次分析，用校正的显著斜方差重复第一次分析，得到 下述概率比值：使用“存在”=0.79,P=0.14(根据年龄、损 伤来源和在药物输注前输入的ISS’90和单位PRBC调整)的rBPI21 对无效剂的概率比值；用“存在或临床上存在”=0.81,P=0.16 (根据年龄、在药物输注前输入ISS’90和单位PRBC调整)的概 率比值。对于每一次二次功效测量的事件发生率评估表示于图1。 分析这些二次功效测量表明：在用rBPI21处理的病人比用无效剂 制品处理的病人中出现下列并发症的频率更小：任何并发症、任何 严重并发症、任何器官障碍、任何严重器官障碍、任何感染、任何 严重感染和肺炎。还注意到由于rBPI21的处理，发病人发展成弥 散性血管内凝聚或凝血病，或原发或继发性血流感染和菌苗症的比 例略有下降。

在严重创伤的人群中无论用rBPI21还是用无效剂处理都会频 繁地出现不良事件。然而，与rBPI21处理组相比，无效对照组F 出现不良事件的百分率要高得多。而且，还发现，与rBPI21处理 组相比，无效对照组得到任何非常异常的处理后实验室结果的百分 率也更高。这些数据表明可能的附加有益效果。

总之，评估单剂量配方的这种对照的临床实验表明，在整个 15天内的原始死亡率终点或严重并发症方面rBPI21处理有良好的 疗效。还注意到并发症的病人的比例减少。这些结果结合起来表明 rBPI21对治疗创伤出血病人有良好的效果。

本领域的技术人员预料会出现对上面所描述的发明的大量改 良和变化，因此，只有如附加的权利要求中出现的限定才应起作 用。

序列表 (1)基本信息

(ⅰ)申请人：XOMA公司

(ⅱ)发明名称：BPI蛋白在创伤出血病人中的治疗用途

(ⅲ)序列数：2

(ⅳ)联系地址：

    (A)收信人：Marshall,O’Toole,Gerstein,Murray &

               Borun

    (B)街道：6300 Sears Tower,233 South Wacker Drive

    (C)城市：Chicago

    (D)州名：Illinois

    (E)国家：美国

    (F)邮政编号：60606-6402

(ⅴ)计算机可读形式

    (A)介质类型：软盘

    (B)计算机：IBM PC兼容机

    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS

    (D)软件：PatentIn Release#1.0，版本#1.25

(ⅵ)目前申请资料：

    (A)申请号

    (B)递交日

    (C)分类

(ⅶ)在先申请资料：

    (A)申请号：08/652,292

    (B)递交日：1996年5月23日

    (C)分类：

(ⅷ)律师/代理人信息

    (A)名称：Borun,Michael F.

    (B)登记号：25,447

    (C)参考/著录号：27129/33959 PCT

(ⅸ)电信信息：

    (A)电话：312/474-6300

    (B)传真：312/474-0448

     (C)电传：25-3856 (2)关于SEQ ID NO:1的信息

(ⅰ)序列特征

    (A)长度：1813个碱基对

    (B)类型：核酸

    (C)链型：单链

    (D)拓扑结构：线型

(ⅱ)分子类型：cDNA

(ⅸ)特征：

    (A)名称/关键：CDS

    (B)位置：31..1491

(ⅸ)特征：

    (A)名称/关键：mat-肽

    (B)位置：124..149l

(ⅸ)特征

    (A)名称/关键：misc-feature

    (B)其它信息：“rBPI”

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:1 CAGGCCTTGA GGTTTTGGCA GCTCTGGAGG ATG AGA GAG AAC ATG GCC AGG GGC    54

                             Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly

                             -31 -30                 -25 CCT TGC AAC GCG CCG AGA TGG GTG TCC CTG ATG GTG CTC GTC GCC ATA    102 Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile

        -20                 -15                 -10 GGC ACC GCC GTG ACA GCG GCC GTC AAC CCT GGC GTC GTG GTC AGG ATC    150 Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile

    -5                    1               5 TCC CAG AAG GGC CTG GAC TAC GCC AGC CAG CAG GGG ACG GCC GCT CTG    198 Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu  10                  15                  20                  25 CAG AAG GAG CTG AAG AGG ATC AAG ATT CCT GAC TAC TCA GAC AGC TTT    246 Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe

             30                  35                  40 AAG ATC AAG CAT CTT GGG AAG GGG CAT TAT AGC TTC TAC AGC ATG GAC    294 Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp

         45                  50                  55 ATC CGT GAA TTC CAG CTT CCC AGT TCC CAG ATA AGC ATG GTG CCC AAT    342 Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn

     60                  65                  70 GTG GGC CTT AAG TTC TCC ATC AGC AAC GCC AAT ATC AAG ATC AGC GGG    390 Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly

 75                  80                  85 AAA TGG AAG GCA CAA AAG AGA TTC TTA AAA ATG AGC GGC AAT TTT GAC    438 Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp  90                  95                 100                 105 CTG AGC ATA GAA GGC ATG TCC ATT TCG GCT GAT CTG AAG CTG GGC AGT    486 Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser

            110                 115                 120 AAC CCC ACG TCA GGC AAG CCC ACC ATC ACC TGC TCC AGC TGC AGC AGC    534 Ash Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser

        125                 130                 135 CAC ATC AAC AGT GTC CAC GTG CAC ATC TCA AAG AGC AAA GTC GGG TGG    582 His Ile Asn Ser Val His Val His Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp

    140                 145                 150 CTG ATC CAA CTC TTC CAC AAA AAA ATT GAG TCT GCG CTT CGA AAC AAG    630 Leu Ile Gln Leu Phe Hls Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys

155                 160                 165 ATG AAC AGC CAG GTC TGC GAG AAA GTG ACC AAT TCT GTA TCC TCC AAG    678 Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys 170                 175                 180                 185 CTG CAA CCT TAT TTC CAG ACT CTG CCA GTA ATG ACC AAA ATA GAT TCT    726 Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser

            190                 195                 200 GTG GCT GGA ATC AAC TAT GGT CTG GTG GCA CCT CCA GCA ACC ACG GCT    774 Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala

        205                 210                 215 GAG ACC CTG GAT GTA CAG ATG AAG GGG GAG TTT TAC AGT GAG AAC CAC    822 Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His

    220                 225                 230 CAC AAT CCA CCT CCC TTT GCT CCA CCA GTG ATG GAG TTT CCC GCT GCC    870 His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala 

235                 240                 245 CAT GAC CGC ATG GTA TAC CTG GGC CTC TCA GAC TAC TTC TTC AAC ACA    918 His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr 250                 255                 260                 265 GCC GGG CTT GTA TAC CAA GAG GCT GGG GTC TTG AAG ATG ACC CTT AGA    966 Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg

            270                 275                 280 GAT GAC ATG ATT CCA AAG GAG TCC AAA TTT CGA CTG ACA ACC AAG TTC   1014 Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe

        285                 290                 295 TTT GGA ACC TTC CTA CCT GAG GTG GCC AAG AAG TTT CCC AAC ATG AAG   1062 Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys

    300                 305                 310 ATA CAG ATC CAT GTC TCA GCC TCC ACC CCG CCA CAC CTG TCT GTG CAG   1110 Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln

315                 320                 325 CCC ACC GGC CTT ACC TTC TAC CCT GCC GTG GAT GTC CAG GCC TTT GCC   1158 Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala 330                 335                 340                 345 GTC CTC CCC AAC TCC TCC CTG GCT TCC CTC TTC CTG ATT GGC ATG CAC   1206 Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His

            350                 355                 360 ACA ACT GGT TCC ATG GAG GTC AGC GCC GAG TCC AAC AGG CTT GTT GGA   1254 Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly

        365                 370                 375 GAG CTC AAG CTG GAT AGG CTG CTC CTG GAA CTG AAG CAC TCA AAT ATT   1302 Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile

    380                 385                 390 GGC CCC TTC CCG GTT GAA TTG CTG CAG GAT ATC ATG AAC TAC ATT GTA   1350 Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val

395                 400                 405 CCC ATT CTT GTG CTG CCC AGG GTT AAC GAG AAA CTA CAG AAA GGC TTC   1398 Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe 410                 415                 420                 425 CCT CTC CCG ACG CCG GCC AGA GTC CAG CTC TAC AAC GTA GTG CTT CAG   1446 Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val Gln Leu Tyr Asn Val val Leu Gln

            430                 435                 440 CCT CAC CAG AAC TTC CTG CTG TTC GGT GCA GAC GTT GTC TAT AAA       1491 Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys

        445                 450                 455 TGAAGGCACC AGGGGTGCCG GGGGCTGTCA GCCGCACCTG TTCCTGATGG GCTGTGGGGC 1551 ACCGGCTGCC TTTCCCCAGG GAATCCTCTC CAGATCTTAA CCAAGAGCCC CTTGCAAACT 1611 TCTTCGACTC AGATTCAGAA ATGATCTAAA CACGAGGAAA CATTATTCAT TGGAAAAGTG   1671 CATGGTGTGT ATTTTAGGGA TTATGAGCTT CTTTCAAGGG CTAAGGCTGC AGAGATATTT   1731 CCTCCAGGAA TCGTGTTTCA ATTGTAACCA AGAAATTTCC ATTTGTGCTT CATGAAAAAA   1791 AACTTCTGGT TTTTTTCATG TG                                            1813 (2)关于SEQ ID NO:2的信息

(ⅰ)序列特征

    (A)长度：487个氨基酸

    (B)类型：氨基酸

    (D)拓扑结构：线型

(ⅱ)分子类型：蛋白质

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:2 Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val -31 -30                 -25                 -20 Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val -l5                 -10                  -5                   1 Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala

          5                  10                  15 Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys

     20                  25                  30 Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly

 35                  40                  45 His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser  50                  55                  60                  65 Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser

             70                  75                  80 Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe

         85                  90                  95 Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile

    100                 105                 l10 Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr

115                 120                 125 Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser His Ile Asn Ser Val His Val His 130                 135                 140                 145 Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys

            150                 155                 160 Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys

        165                 170                 175 Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu

    180                 185                 190 Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu

195                 200                 205 Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys 210                 215                 220                 225 Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro

            230                 235                 240 Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly

        245                 250                 255 Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala

    260                 265                 270 Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser

275                 280                 285 Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val 290                 295                 300                 305 Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser

            310                 315                 320 Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro

        325                 330                 335 Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala

    340                 345                 350 Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser

355                 360                 365 Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu 370                 375                 380                 385 Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu

            390                 395                 400 Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val

        405                 410                 415 Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val

    420                 425                 430 Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe

435                 440                 445 Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys 450                 455

这是1996年5月23日递交的美国专利系列号08/652,292的部分继 续申请，此处引用该申请作为参考。 发明背景