海鞘素743(ET-743)是从海洋背囊动物加勒比海海鞘 (Ecteinascidia turbinata)中分离的具有如下结构的四氢异喹啉生物 碱：

ET-743、其化学作用、作用机理和临床前和临床研究，可参见 Kesteren，Ch.Van等人，2003，Anti-Cancer Drugs，14(7)，487-502页： ″Yondelis(trabectedin，ET-743)：the development of an anticancer agent of marine origin″，并入此处作为参考。
ET-743对异种移植在无胸腺小鼠中的各种人类肿瘤具有有效抗肿 瘤活性，包括黑素瘤和卵巢和乳腺癌。
在ET-743的I期临床研究中，在患有肉瘤和乳腺和卵巢癌的患者 中观察到有前途的响应。因此，该新药正在患有各种肿瘤疾病的癌症 患者的II期临床试验中进行认真的研究。
ET-743具有髓中毒和肝毒性副作用。在24-72小时期间通过延长 输注接受ET-743的患者遭受了骨髓抑制，并且通常是急性的、虽然可 逆、转氨酶升高和亚临床胆管炎，其特征在于碱性磷酸酶(ALP)和/ 或胆红素的增加，例如参见Ryan D.P.等人，2001 Clin Cancer Res 7， 231：″Phase I and pharmacokinetic study of ecteinascidin 743 administered as a 72-hour continuous intravenous infusion in patients with solid malignancies″；Puchalski T.A.等人，2002，Cancer Chemother Pharmacol 50：309：″Pharmacokinetics of ecteinascidin 743 administered as a 24-h continuous intravenous infusion to adult patients with soft tissue sarcomas：associations with clinical characteristics， pathophysiological variables and toxicity″。
正如肝特定酶血浆浓度增加和胆管炎病理学特征所证明的那样， 在小鼠、大鼠、狗和猴中进行的临床急性毒性研究一致表明肝毒性为 ET-743的重要副作用。最近ET-743所致的雌性大鼠(其对ET-743的 肝毒性最为敏感)中肝胆管改变的特性和程度已经通过以下表征：组 织病例学、电子显微镜、免疫组织化学、血浆生物化学和DNA微矩阵 分析，参见Donald S.等人，2002，Cancer Research，62：4256 ″Hepatobiliary damage and changes in hepatic gene expression caused by the antitumor drug ecteinascidin 743(ET-743)in the female rat″。
此外，使用高剂量地塞米松的预治疗已经表明了在这些动物模型 中可以在不妨碍其抗癌活性的同时取消其ET-743介导的肝脏毒性，参 见Donald S.等人，2003，Cancer Research，63：5903-5908：″Complete protection by high-dose dexamethasone against the hepatotoxicity of the novel antitumor drug ecteinascidin-743(ET-743)in the rat″和WO 02 36135。使用地塞米松预治疗的保护伴随肝脏ET-743水平的显著降低， 实验性地表明肝脏ET-743清除的增加，这可能是经由减少的代谢酶 类，由于地塞米松产生有益影响的机制，亦即通过ET-743代谢解毒速 率的增加。
多柔比星是从Streptomyces peucetiiis var.caesius中分离的细胞毒 素蒽环类抗生素。当单独给药时，已知多柔比星主要产生骨髓中毒性。
对于ET-743与其它药物用于治疗癌症的组合物和用途，参见2002 年5月10日公开的WO 0236135，并入此处作为参考。体外测试中显 示了ET-743与几种其它药物组合的叠加效应。特别是显示了抗人类肉 瘤的体外协同作用。研究了ET-743与其它蒽环类抗生素多柔比星的组 合物和用途。在此研究中没有详细考虑毒性的组合。
其它对ET-743单独或组合的剂量、时间表和给药的指导在WO 00 69441、WO 0236135、WO 03039571和PCT/GB2004/002319中给出， 并以其全文并入此处作为参考。
仍然需要提供使用ET-743有效治疗哺乳动物特别是人类的其它疗 法，同时降低或消除其毒副作用并最小化其它副作用。
附图说明
图1表示输液开始后ET-743的平均血浆浓度对时间的函数(还称 为全部实施例的Trabectedin)，其中图1A涉及当前研究所得的结果， 并且图1B涉及Van Kestern等人中存在的结果(“Clinical Pharmacology of the novel marine-derived anticancer agent Ecteinascidm 743 administered as a 1-and 3-hour infusion in a phase I study；Anticancer Drugs；13(4)；381-393；2002”)。
发明概述
本发明涉及用于患有癌症的患者的组合产品、组合药物治疗和方 法，几乎没有或具有不严重的不想要的毒副作用。
根据本发明的一个方面，本发明提供了用于治疗人体癌症的方 法，所述方法包括与治疗有效量的ET-743结合给药治疗有效量的聚乙 二醇化(Pegylated)脂质体形式的蒽环类抗生素多柔比星(“PLD”)。 优选的哺乳动物为人。
本发明实施方案
已经令人吃惊地发现ET-743与PLD的组合能够引起提高的抗癌 能力，同时具有降低的骨髓中毒性和降低的心脏毒性。此外，ET-743 与PLD的组合具有协同作用。
PLD可为聚乙二醇化脂质体形式的多柔比星盐酸盐(HCI)。在 脂质体中封装使得其适于静脉内给药。脂质体为能够封装活性药物的 由磷脂双层组成的微观的囊泡。聚乙二醇化指的是脂质体与表面结合 的聚乙二醇甲醚(MPEG)一起配制。与未封装的药物相比，脂质体 封装可显著影响药物功能性。此外，不同脂质体药物制品可在化学组 成和脂质体外形方面彼此不同。这种差别可显著影响脂质体药物制品 的功能性。DoxilTM为聚乙二醇化脂质体多柔比星的市售形式实例。
与使用多柔比星和ET-743组合所观察到的毒性相比，PLD和 ET-743的组合具有有效降低的骨髓中毒性和肝脏毒性。
与单独使用ET的治疗相比增加了抗肿瘤效果。现已发现，PLD 和ET-743的组合对于延长的时间周期，药物可以全部或接近全部的治 疗剂量给药。
本发明的一个方面涉及用于治疗人体癌症的组合物，所述组合物 包括ET-743和PLD，其与使用多柔比星和ET-743组合所观察到的毒 性相比具有有效降低的毒性。特别是，ET-743和PLD的组合显示降低 的骨髓中毒性和肝脏中毒性。
本发明另一方面涉及用于将ET-743与PLD组合给药的医药试剂 盒，包括剂量单位形式的至少一个周期的ET-743供应，其中剂量单位 含有用于定义治疗的适量ET-743和药学上可接受的载体，以及用于根 据给药时间表给药ET-743的印刷说明。
本发明另一方面涉及ET-743在制备通过联合使用ET-743和PLD 有效治疗人体癌症的药物的应用。
在整个说明书中使用的术语“治疗”将意图包括以相同或分离药 物制剂、同时或在不同时期给药治疗剂。
本发明另一方面涉及PLD在制备通过联合使用ET-743和PLD有 效治疗人体癌症的药物的应用。该治疗具有有效降低的骨髓中毒性和 肝脏毒性，还显著在于没有粘膜炎和脱发。
本发明另一方面涉及在治疗人体癌症中增加ET-743抗肿瘤效果的 方法，包括与治疗有效量的PLD结合给药治疗有效量的ET-743。
本发明还提供了一种用于治疗人体癌症的方法，包括与治疗有效 量的ET-743结合给药治疗有效量的PLD。哺乳动物优选为人。
此处术语“ET-743”意图包括所有药学上可接受的盐、酯、溶剂 化物、水合物，或者在给药到受者时能够提供(直接或间接)此处所 述化合物的所有其它化合物。然而将能够理解的是，由于其可用于制 备药学上可接受的盐，非药学上可接受的盐也落在本发明范围之内。 盐、前体药物和衍生物的制备可通过本领域技术人员已知的方法进 行。
ET-743以无菌冻干制品的形式提供和储存，由ET-743和在制剂 中适于治疗应用的赋形剂组成，特别是含有甘露醇和调节pH的磷酸盐 缓冲液的制剂。
该方法组合物的给药合适地通过静脉内注射进行。给药可在最大 耐药量(MTD)范围内连续或周期进行。在整个说明书范围内，MTD 意图表示小于三分之一主体处于剂量极限毒性(DLT)的剂量水平的 最高剂量。
ET-743和PLD可以同时或不同时给药的分离药物的形式提供。 ET-743和PLD优选以不同时给药的分离药物的形式提供。当在不同时 期分离给药时，可以首先给药ET-743或PLD；然而，优选在PLD之 后给药ET-743。
输注时间通常高达72小时，更优选1-24小时，最优选1-6小时。 当ET-743和PLD在不同时期以分离药物给药时，每个的输注时间可 以不同。
PLD的输注时间通常高达6小时，更优选1-3小时，最优选1-2小 时。ET-743的输注时间通常高达24小时，更优选约1小时、约3小时 或约24小时。尤其优选无须整夜住院治疗的较短输注时间。
还应当理解的是，本发明这个方面组合物的确切剂量将根据特定 制剂、给药方式，并且特别是治疗位置、主体和肿瘤而变化。还应当 考虑其它因素，例如年龄、体重、性别、饮食、给药时间、排泄速率、 主体状况、联合给药、反应灵敏度和疾病严重程度。所有剂量以毫克 (mg)每平方米体表面积(m2)表示。由于在本发明方法中组合使用 PLD和ET-743，应当调节各个剂量以提供最佳临床反应。
在本发明方法中，PLD的剂量高达50mg/m2，更优选25-45 mg/m2，最优选30-40mg/m2，甚至最优选约30mg/m2。使用高达1.3 mg/m2的ET-743剂量，更优选0.4-1.2mg/m2，最优选约1.1mg/m2。
根据本发明这个方面的优选实施方案，静脉内给药25-45mg/m2的 PLD，然后静脉给药高达1.3mg/m2的ET-743。更优选在给药约30 mg/m2PLD后给药约1.1mg/m2的ET-743。PLD优选以高达6小时， 更优选1-2小时，最优选1小时的输注时间给药。ET-743优选以约1、 约3或约24小时的输注时间给药。
联合给药优选以本发明给药方法循环进行。PLD和ET-743的静脉 内输注通常每3周进行一次，在每个周期中允许患者一个休息阶段使 其得到恢复。每个周期的优选持续时间通常为3-4星期；根据需要可给 予多个周期。依据个体患者的治疗耐受性，根据需要可进行延迟给药 和/或降低剂量以及调节给药方案。
根据特别优选的实施方案，每三个星期，约30mg/m2PLD在约1 小时的输注时间内给药到患者，然后约1.1mg/m2的ET-743在约3小 时的输注时间内给药到患者。
通过使用这些优选实施方案中使用的给药方式，现已发现当全部 药物以全部或接近全部的治疗剂量在延长时间周期给药时，这种组合 被很好地耐受。
当以单一药剂在3小时内给药时，ET-743的全部剂量为1.3 mg/m2。当以单一药剂给药时，当前用于临床实践的PLD的全部剂量 为每星期10mg/m2。
下图表示与使用多柔比星相比，组合使用PLD和ET-743使得 ET-743的耐受剂量升高。在多柔比星(60mg/m2)与ET-743结合的I 阶段剂量增加研究中，3小时内给药仅仅支持0.7mg/m2的ET-743剂 量。在30mg/m2PLD与ET-743在3小时组合给药的I阶段剂量增加 研究中，ET-743剂量可增加到1.1mg/m2。
因此，本发明另一方面涉及在治疗人体癌症中最大化ET-743耐药 量的方法，包括与聚乙二醇化脂质体形式的多柔比星结合给药治疗有 效量的ET-743。
总之，ET-743和PLD的组合能够在人体中有效治疗癌症，同时降 低骨髓中毒性和肝脏中毒性。在使用ET-743和PLD的I阶段试验中， 可测量的反应表明了对患有软组织肉瘤、卵巢和头颈癌的患者临床益 处的证据。
显示的显著降低的肝脏中毒性表明本发明这个方面使用的组合可 以长期给药。并且由于没有粘膜炎和脱发，这种组合非常值得关注。
实施例1表示评价ET-743和30mg/m2 PLD组合的MTD的研究结 果，以及I阶段的试验结果。ET-743和30mg/m2 PLD组合的MTD在 治疗过程中确定为1.1mg/m2。
总之，本发明因此提供治疗方法、化合物在制备用于治疗癌症的 组合物的应用以及相关实施方案。本发明还涉及治疗方法中使用的本 发明的组合物。
本发明还涉及包括药学上可接受的载体的药物制剂，其中含有作 为活性组分的本发明化合物，还涉及其制备方法。
以下实施例进一步说明本发明。其不应解释为对本发明范围的限 制。
为提供更加简要的说明，此处给出的部分数量表达方式没有用术 语“约”限定。
当然，不管术语“约”是否明确使用，此处给出的每个量表示实 际给定值，并且其还表示基于本领域普通技术人员合理判断得到的这 种给定值的近似值，包括这些给定值由于试验和/或测量条件得到的等 价值和近似值。
本发明实施例
在全部实施例中，海鞘素743(ET-743)还称为Trabectedin。
实施例1
进行含有PLD和Trabectedin的I阶段试验。此项研究的目的在于 确定与30mg/m2PLD组合每21天给药的trabectedin的最大耐药量 (MTD)。其它目的在于评价这种药物组合的安全曲线，并评价组合 给药时trabectedin和PDL的药物动力学。最大耐药量(MTD)指的 是小于三分之一主体处于剂量极限毒性(DLT)的剂量水平的最高剂 量。
我们使用固定的在1小时内静脉内给药的30mg/m2PLD，然后立 即在3小时内静脉内给药六个trabectedin剂量(0.4、0.6、0.75、0.9、 1.1和1.3mg/m2)，设计了剂量确定试验。这种治疗每21天重复一次。
记录标准包括正常的肝功能试验、有限在先多柔比星暴露(剂量 小于250mg/m2)、正常的心脏功能和评价为0或1的东部肿瘤学合作 组织(ECOG)表现水平(Performance Status(PS))。
30个患者，其中14个患有肉瘤、2个患有卵巢癌、2个患有胰腺 癌、2个患有头颈癌、1个患有膀胱癌、1个患有乳腺癌、1个患有胃 癌、1个患有NSCLC、1个患有SCLC并且5个患有其它所述癌症(表 1)。
表1
基准疾病特征
  诊断后到第一次给药的时间，M0   N   平均(SD)   中值   范围   30   37.4(43.8)   25.5   1.2-216.0   上次化学疗法到第一次给药的时间，M0   N   平均(SD)   中值   范围   22   3.54(3.0)   2.6   0.9-12.8   显微解剖学   N   膀胱癌   乳腺癌   头颈癌   NSCLC   卵巢癌   胰腺癌   肉瘤   胃癌   SCLC   其它   30   1   1   2   1   2   2   14   1   1   5
30个患者中的9个具有评价为0的性能状态(PS)(完全活性， 能够无限制地带有全部疾病前特性)。表2表示治疗患者的统计数据。
表2统计数据
  总计 性别，n(％) N 女性 男性 种族     30   17(57)   13(43) N 黑人 白人 年龄 N 类别，n(％) 18-60 ＞60 平均(SD) 中值 范围 基准ECOG评价，n(％) N 0 1   30   1(3)   29(97)     30     25(83)   5(17)   51.5(13.8)   53.0   20-78     30   9(30)   21(70)
患者缓慢预处理：23/30已经进行1-5次在先化学疗法(中值3)， 15/30进行在先放射疗法，并且27/30进行外科切除术(表3)。
表3在先治疗
  N＝30 在先系统治疗，n(％) 否 是 在先手术治疗，n(％) 否 是 在先放射治疗，n(％) 否 是   7(23)   23(77)     3(10)   27(90)     15(50)   15(50)
表4a和表4b表示在各个ET-743剂量中暴露的患者的数量(N)、 治疗持续时间和剂量强度。
表4a：进行治疗：治疗持续时间和剂量强度
  ET743   0.4mg/m2   (N＝3)   ET743   0.6mg/m2   (N＝3)   ET743   0.75mg/m2   (N＝3)   总的治疗持续时间，星期   平均(SD)   中值   范围   39.4(37.4)   24.0   12.1-82.0   31.5(37.1)   14.4   6.0-74.0   24.2(31.7)   6.0   5.9-60.9   总的周期数   平均(SD)   中值   范围   13.0(12.3)   8.0   4-27   10.0(12.2)   4.0   2-24   7.7(9.8)   2.0   2-19   全部相对剂量强度ET-743   平均(SD)   中值   范围   1.1(0.2)   1.0   1.0-1.3   0.9(0.1)   1.0   0.8-1.0   1.0(0.0)   1.0   0.9-1.0   全部相对剂量强度PLD   平均(SD)   中值   范围   0.9(0.1)   1.0   0.8-1.0   0.9(0.1)   1.0   0.8-1.0   0.9(0.2)   1.0   0.7-1.0
表4b：进行治疗：治疗持续时间和剂量强度
  ET743   0.9mg/m2   (N＝3)   ET743   1.1mg/m2   (N＝12)   ET743   1.3mg/m2   (N＝6)   Total   (N＝30)   总的治疗持续时间，星期   平均(SD)   中值   范围   6.0(0.0)   6.0   6.0-6.0   14.6(11.1)   11.1   3.0-42.0   25.7(11.3)   25.5   7.1-39.9   21.1(20.5)   13.0   3.0-82.0   总的周期数   平均(SD)   中值   范围   2.0(0.0)   2.0   2-2   4.8(3.8)   3.5   1-14   8.2(3.8)   8.0   2-13   6.8(6.7)   4.0   1-27   全部相对剂量强度ET-743   平均(SD)   中值   范围   1.1(0.0)   1.0   0.9-1.0   0.9(0.1)   0.9   0.8-1.0   0.8(0.1)   0.7   0.7-1.0   0.9(0.1)   1.0   0.7-1.3   全部相对剂量强度PLD   平均(SD)   中值   范围   1.0(0.0)   1.0   0.9-1.0   0.9(0.1)   0.9   0.7-1.0   0.8(0.1)   0.7   0.7-0.9   0.9(0.1)   0.9   0.7-1.0
与最差的治疗药相关的等级为3和4的毒性已经最小化，限制在 中性白细胞减少和转氨酶上升。表5a和5b表示在至少5％主体中常常 报道的药物相关的3/4级不利事件。还报道了从预处理剂量到上次治疗 剂量30天后的任意时间报道的不利事件。为了规定毒性等级，使用了 NCI普通标准。
表5a药物相关的不利事件
  ET743   0.4mg/m2   (N＝3)   ET743   0.6mg/m2   (N＝3)   ET743   0.75mg/m2   (N＝3)  具有3/4级药物相关不  利事件的主体总数  肝脏和胆汁系统  SGPT增加  SGOT增加  其它  手掌-脚底  Erythrodysesthesia  变态反应  恶心   0   0   0   0   0     0   0   0   1   0   0   0   1     0   0   1   0   0   0   0   0     0   0   0
表5b药物相关的不利事件
  ET743   0.9mg/m2   (N＝3)   ET743   1.1mg/m2   (N＝12)   ET743   1.3mg/m2   (N＝6)   总共   (N＝30)   具有3/4级药物相关不   利事件的主体总数   肝脏和胆汁系统   SGPT增加   SGOT增加   其它   手掌-脚底   Erythrodysesthesia   变态反应   恶心   0   0   0   0   0     0   0   0   10   6   6   1   4     2   2   1   6   3   3＊   2＊   2     2   0   0   17   9   9   3   7     4   2   2
＊DLT(剂量限定毒性)：在周期1中2个患者感受4级SGPT上升。
此外，表6a和6b表示报道的与药物相关的严重不利事件
表6a与药物相关的严重不利事件
  ET743   0.4mg/m2   (N＝3)   ET743   0.6mg/m2   (N＝3)   ET743   0.75mg/m2   (N＝3)  具有SAE的主体总数  SAE  恶心/呕吐          0     0   0     0   0     0
表6b与药物相关的严重不利事件
  ET743   0.9mg/m2   (N＝3)   ET743   1.1mg/m2   (N＝12)   ET743   1.3mg/m2   (N＝6)   总共   (N＝30)  具有SAE的主体总数  SAE  恶心/呕吐   0     0   1     1   0     0   1     1
在18个终止治疗的主体中仅仅有一个主体是由于与药物相关的不 利事件终止治疗(表7a和7b)。
表7a主体处理/治疗停止的理由
  ET743   0.4mg/m2   (N＝3)   ET743   0.6mg/m2   (N＝3)   ET743   0.75mg/m2   (N＝3)   正在进行(周期)   终止   1(27+)   2   1(24+)   2   1(19+)   2   死亡     药物相关的AE   (手足综合症)   疾病进展     主体选择   0   0     2     0   0     0     1     1   0     0     2     0
表7b主体处理/治疗停止的理由
  ET743   0.9mg/m2   (N＝3)   ET743   1.1mg/m2   (N＝12)   ET743   1.3mg/m2   (N＝6)   总共   (N＝30)   正在进行(周期)   终止   0   3   6(8+)   6   3(13+)   3   12   18   死亡   药物相关的AE   (手足综合症)   疾病进展   主体选择   0   0   3   0   0   1   5   0   1   0   2   0   1   1   15   1
五个患者具有部分响应，其中三个患有软组织肉瘤，一个患有卵 巢癌，一个患有头颈癌。另外十四个患者(五个患有软组织肉瘤，其 它分别患有类癌瘤、胰腺癌、膀胱癌、头颈癌、甲状腺癌、乳腺癌、 胃癌、SCLC和卵巢癌)已经患有稳定疾病三个月以上(表8a和8b)。
表8a：最好的总体响应
  最好的响应   ET743   0.4mg/m2   (N＝3)   ET743   0.6mg/m2   (N＝3)   ET743   0.75mg/m2   (N＝3)   PR   SD   1肉瘤   1胰腺癌   1类癌瘤   0   1肉瘤   1膀胱癌   1头颈癌   0   1甲状腺癌
表8b：最好的总体响应
  最好的响应   ET743   0.9mg/m2   (N＝3)   ET743   1.1mg/m2   (N＝12) ET743 1.3mg/m2 (N＝6)      PR          SD          0          0            1肉瘤(PNET)     3肉瘤   1乳腺癌     1胃癌   1SCLC 1乳头状严重AC (Papillary serous AC)  1肉瘤 1头颈癌   1卵巢癌   1肉瘤  
PLD的伴随给药不会影响trabeetedin的药物动力学(PK)。基于 初步药物动力学分析，trabectedin CL(i.v.服药之后系统间隙)、t1/2 (半衰期)和Vss(稳态分布时的表观容积)值处于trabectedin单独 给药时的范围(历史对照数据)之内(图1，表9)。
表9：trabectedin的平均非间隔药物动力学参数
  剂量   (mg/m2)   N   Cmax   (ng/ml)   AUC∞   (ng*h/ml)  Cl  (l/hm2)   VSS   (l/m2)   T1/2   (h)   PLD 30   mg/m2   1小时输液   +ET-   7433   小时输液   0.9     1.1     1.3   3     3     2   6     6     7   39     42     31  23    26    44   1425     1113     962   93     65     47
从这些研究中我们可以总结出，当与PLD 30mg/m2结合给药时， trabectedin的MTD为1.1mg/m2。当全部药物在延长周期时间以完全 (或接近完全)治疗学剂量给药时，已经证实这种组合被很好地耐受。 这种组合治疗的推荐剂量为1.1mg/m2 trabectedin加上30mg/m2 PLD。
此外，已经表明trabectedin的药物动力学没有明显受到PDL伴随 给药的影响。