含酶抑制剂的组合物的制剂及其用途
专利汇可以提供含酶抑制剂的组合物的制剂及其用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 包括一种方法，通过同时或联合抑制(I)丙 氨 酰氨基肽酶和二肽酰肽酶IV；(II)二肽酰肽酶IV和血管紧张素转换酶；(III)二肽酰肽酶IV和脯氨酰寡肽酶；以及(IV)二肽酰肽酶IV和X－脯氨酸－氨基肽酶的酶活性抑制单核细胞(MNZ)和T细胞的DNA合成和增殖，其抑制程度为通过单独使用这些酶 抑制剂 中的一种，即使用较高的剂量也不能获得同样的抑制作用。尽管上述抑制剂最终在如免疫细胞的DNA合成和因此而产生的 细胞增殖 中发挥同样的作用，但如果应用单一的抑制剂，这种作用不完全而且不会长期持续存在。由于酶活性功能上的重叠，通过同时抑制一种以上的上述酶获得了对DNA合成和增殖的附加/超加的抑制作用，如我们资料所示。本发明表明分别应用抑制上述酶的物质或相应的制剂和 给药 途径对于自身免疫性 疾病 和有炎性发病机制的慢性疾病的 治疗 以及对于移植后排异期的治疗是非常合适的。，下面是含酶抑制剂的组合物的制剂及其用途专利的具体信息内容。
1.二肽酰肽酶IV(DP IV)以及具有相同底物特异性(DP IV-类 似酶活性)的酶的抑制剂与丙氨酰氨基肽酶(氨基肽酶N，APN)以及 具有相同底物特异性(APN-类似酶活性)的酶、X-脯氨酸-氨基肽酶 (氨基肽酶P，APP)、血管紧张素转换酶(ACE)和/或脯氨酰寡肽酶(POP， 脯氨酰内肽酶，PEP)的抑制剂的结合用于超加抑制人T淋巴细胞和单 核细胞的活化、DNA合成和增殖中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的DP IV的抑制剂优 选Xaa-脯氨酸-二肽(Xaa＝α-氨基酸或支链-被护的衍生物)、相 应的衍生物，优选二肽膦酸二芳香基酯、二肽硼酸(如，Pro-boro-Pro) 及其盐，Xaa-Xaa-(Trp)-Pro-(Xaa)n-肽(Xaa＝α-氨基酸， n＝0-10)、相应的衍生物及其盐或氨基酸(Xaa)-酰胺、相应的衍生 物及其盐，其中所述的Xaa分别是α-氨基酸或支链-被护的衍生物， 优选Nε-4-硝基苄氧基羰基-L-赖氨酸、-L-脯氨酸、-L-色氨酸、 -L-异亮氨酸、-L-缬氨酸以及环胺，例如吡咯烷、哌啶、噻唑烷及 其作为酰胺结构的衍生物。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述的氨基酸酰胺，例如 Nε-4-硝基苄氧基羰基-L-赖氨酸-噻唑酰胺(thiazolidid)，-吡 咯酰胺和嘧啶酰胺以及相应的2-氰噻唑酰胺，2-氰-吡咯酰胺和2- 氰-嘧啶酰胺衍生物，优选用作DP IV的抑制剂。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述的放线酰胺素、 Leuhistin、Phebestin、Amastin、Probestin、β-氨基硫醇、α- 氨基次磷酸、α-氨基次磷酸衍生物，优选D-Phe-ψ-[PO(OH)-CH2] -Phe-Phe及其盐，优选作为APN的抑制剂；
Apstatin、(2S，3R)-HAMH-L-脯氨酸、(2S，3R)-HAPB-L-脯 氨酸、相应L-脯氨酸甲基酯、(2S，3R)-HAMH/(2S，3R)-HAPB-吡 咯酰胺、-噻唑酰胺(HAMH＝3-氨基-2-羟基-5-甲基己酰、HAPB＝3 -氨基-2-羟基-4-苯基丁酰)及其盐优选作为APP的抑制剂；
卡托普利、依纳普利、Lisinopril、Cilazopril及其盐优选作为 ACE的抑制剂；
Postatin、Eurystatin A或B，Nε-被护肽醛，优选苄氧基-羰基 -L-脯氨酰-L-脯氨醛或苄氧羰-L-硫脯氨酰-L-硫脯氨醛，Nε- 被护氨基酸(Xaa)-吡咯酰胺或-噻唑酰胺(Xaa＝α氨基酸，优选 L-丙氨酸、-L-缬氨酸、-L-异亮氨酸)以及相应的2-氰基吡咯酰 胺或2-氰基噻唑酰胺衍生物，底物-类似Nε-被护肽磷酸二芳基酯或 肽重氮基甲基酮或肽铵甲基酮及其盐优选作为POP(PEP)的抑制剂。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的抑制剂组合的用途， 其中的抑制剂的组合用于预防和治疗自身免疫性疾病，优选风湿性关 节炎、红斑狼疮、多发性硬化症、胰岛素依赖型糖尿病、克隆病、溃 疡性结肠炎、牛皮癣、神经性皮炎、肾小球性肾炎、间质性肾炎、脉 管炎、甲状腺的自身免疫性疾病或自身免疫性溶血性贫血以及治疗其 它有炎性发病机制的慢性疾病，如变态反应和动脉硬化症中。
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的抑制剂组合的用途， 用于抑制移植排异反应以及用于肿瘤性疾病的治疗中。
7.药学制剂，包括二肽酰肽酶IV(DP IV)以及具有DP IV-类 似酶活性的酶的抑制剂与丙氨酰氨基肽酶(氨基肽酶N，APN)以及具 有相同底物特异性(APN-类似的酶活性)、X-脯氨酸-氨基肽酶(氨 基肽酶P，APP)、血管紧张素转换酶(ACE)和脯氨酰寡肽酶(POP，脯 氨酰内肽酶，PEP)的酶中的任意一种抑制剂与已知的载体、添加剂和 /或辅助的物质的组合。
8.根据权利要求7所述的药学制剂，包括优选的Xaa-脯氨酸 -二肽(Xaa＝α-氨基酸或支链-被护的衍生物)、相应的衍生物，优 选二肽膦酸二芳香基酯及其盐，Xaa-Xaa-(Trp)-Pro-(Xaa)n -肽(Xaa＝α-氨基酸，n＝0-10)、相应的衍生物及其盐或氨基酸(Xaa) -酰胺、相应的衍生物及其盐，其中所述的Xaa分别是α-氨基酸或 支链-被护的衍生物，优选Nε-4-硝基苄氧基羰基-L-赖氨酸、- L-脯氨酸、-L-色氨酸、-L-异亮氨酸、-L-缬氨酸以及环胺，例如， 吡咯烷、哌啶、噻唑烷及其作为酰胺结构的衍生物作为DP IV的抑制剂。
9.根据权利要求7所述的药学制剂，包括优选的氨基酸酰胺， 例如，Nε-4-硝基苄氧基羰基-L-赖氨酸-噻唑酰胺、-吡咯酰胺 和-嘧啶酰胺以及相应的2-羰基噻唑酰胺、2-氰基吡咯酰胺和2- 氰基嘧啶酰胺衍生物作为DP IV的抑制剂。
10.根据权利要求7所述的药学制剂，包括作为APN、APP、ACE 和POP(PEP)的抑制剂，优选： 放线酰胺素，Leuhistin，Phebestin，Amastin，Probestin，β-氨 基硫醇，α-氨基次磷酸，α-氨基次磷酸衍生物，优选D-Phe-ψ- [PO(OH)-CH2]-Phe-Phe及其盐作为APN的抑制剂； Apstatin，(2S，3R)-HAMH-L-脯氨酸、(2S，3R)-HAPB-L-脯氨酸、 相应L-脯氨酸甲基酯、(2S，3R)-HAMH/(2S，3R)-HAPB-吡咯酰胺、 -噻唑酰胺(HAMH＝3-氨基-2-羟基-5-甲基己酰，HAPB＝3-氨基- 2-羟基-4-苯基丁酰)及其盐作为APP的抑制剂； 卡托普利、依纳普利、赖诺普利、Cilazopril及其盐作为ACE的抑制 剂； Postatin，Eurystatin A或B，Nε-被护肽醛，优选苄氧基-羰基-L -脯氨酰-L-脯氨醛或苄氧羰基-L-硫脯氨酰-L-硫脯氨醛，Nε- 被护氨基酸(Xaa)-吡咯酰胺或-噻唑酰胺(Xaa＝α-氨基酸，优选 L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-异亮氨酸)以及相应的2-氰基吡咯酰胺或 2-氰基噻唑酰胺衍生物、底物-类似的Na-被护肽磷酸二芳基酯或肽 重氮基甲基酮或肽铵甲基酮及其盐作为POP(PEP)的抑制剂。
11.根据权利要求7-10中任意一项所述的药学制剂，该制剂包 括两种或多种DP IV或有DP IV-类似酶活性的酶、APN或有APN-类 似酶活性的酶、ACE、POP(PEP)和XPNPEP2的抑制剂，为了联合作用的 目的，以空间上分离的配方与已知的载体、辅助和/或添加物质结合， 同时或直接连续给药。
12.根据权利要求7-11所述的药学制剂，该制剂与已知的载体、 辅助和/或添加物质一起用于口服、经皮、静脉内、皮下、皮内、肌肉 内、直肠、阴道、舌下给药的全身用药。
13.根据权利要求7-11所述的药学制剂，该制剂以如乳剂、软膏、 糊剂、凝胶、溶液、喷雾剂、脂质体、混悬液、水胶体敷料以及其它 可皮肤用的包括滴注应用基质/赋形剂形式的局部应用。
本发明描述了氨基肽酶N(APN；E.C.3.4.11.2；CD13)，二肽酰肽 酶IV(DP IV；E.C.3.4.14.5；CD26)，脯氨酰寡肽酶(POP；脯氨酰内 肽酶；PEP；E.C.3.4.21.26)，膜粘附氨基肽酶P(X-脯氨酸-氨基肽酶； APP；XPNPEP2 E.C.3.4.11.9)以及血管紧张素转换酶 (Angiotensin-konvertie-rendes enzyme；ACE；CD156； E.C.3.4.15.1；CD156)的活性的联合抑制，通过同时应用以上参考的 基于氨基酸衍生物、肽或肽衍生物的酶的各自的特异性抑制剂，抑制免 疫细胞的活化、DNA合成从而抑制其增殖。
本发明可用于表现出自身免疫发病机制的所有疾病，这些疾病的基 础是免疫细胞的激活和增殖或由免疫细胞的激活和增殖组成，特别是自 身反应性T细胞。同样的机制造成器官移植后的急性排异期或慢性排异 期。
资料显示膜-粘附肽酶，例如，DP IV或APN在免疫细胞，特别是T 淋巴细胞的活化或克隆性扩增的过程中发挥关键性的作用 [B.Fleischer：“CD26，一种参与T细胞活化的表面蛋白酶”， Immunology Today 1994，15，180-184；U.Lendeckel等人：“丙氨酰肽 酶在人类T细胞生长和功能中的作用”，International Journal of Molecule Medicine 1999，4，17-27；D.Riemann等人：“CD13-不只是 白血病分型的标记物”，Immunology Today 1999，20，83-88]。丝裂原刺 激的单核细胞(MNZ)或者富集的T淋巴细胞的某些功能，例如，免疫 刺激因子(IL-2，IL-6，IL-12，IFN-γ)的DNA合成、产生和分泌以及对 B细胞的辅助功能(IgG和IgM的合成)在特异的抑制剂DP IV和APN 存在时可以被抑制[E.Schon等人：“二肽酰肽酶IV，一种参与T淋巴 细胞增殖的胞膜酶”，Biomed.Biochim Acta 1985，2，K9-K15；E.Schon 等人：“二肽酰肽酶IV在人T淋巴细胞活化中的作用，抗二肽酰肽酶IV 的抑制剂和抗体在体外抑制淋巴细胞增殖和免疫球蛋白合成”， Eur.J.Immunol.1987，17，1821-1826；D.Reinhold等人：“二肽酰肽酶 肽酶IV的抑制剂诱导PWM-刺激的PBMNC和T细胞中转换生长因子β1 的分泌”，Immunology Today 1997，91，354-360；U.Lendeckl等人：“经 丝裂原活化后人T细胞中膜丙氨酰肽酶的基因诱导以及细胞表面表 达”，Biochem.J.1996，319，817-823；T.Kahne等人：“二肽酰肽酶IV： 一种参与调节T细胞生长的表面蛋白酶(综述)”， Int.J.Mol.Med.1999，4，3-15；U.Lendeckel等人：“丙氨酰氨基肽酶 在人T细胞生长和功能中的作用(综述)”，Int.J.Mol.Med.1999，4，17 -27]。
已知利用合成抑制剂抑制免疫细胞上的二肽酰肽酶IV可以治疗自 身免疫性疾病和移植后排异反应。在此引用仅供参考，例如，欧洲专 利764 151A1，WO09529691，欧洲专利731 789A1，欧洲专利528 858。 关于氨基肽酶N，血管紧张素转换酶，X-脯氨酸-氨基肽酶和脯氨酰寡 肽酶，这样的作用至今尚不清楚。
本发明基于令人惊奇的发现，即同时抑制(I)二肽酰肽酶IV和 氨基肽酶N，(II)二肽酰肽酶IV和血管紧张素转换酶，(III)二肽酰肽 酶IV和脯氨酰寡肽酶以及(IV)二肽酰肽酶IV和X-脯氨酸-氨基肽酶 的酶活性可抑制单核细胞(MNZ)和T细胞的DNA合成，因此而抑制了 其增殖，其增殖的程度为通过单独使用这些酶抑制剂其中的一种，即 使用较高的剂量也不能获得同样的效果。尽管上述抑制剂最终显示出 对相同如，DNA合成和因此而产生的免疫细胞的增殖过程的效果，但如 果应用单一的抑制剂，上述作用达到的程度较弱，且持续时间短。由 于上述酶的酶活性功能上的叠加，可以观察到由于同时抑制这些酶的 两种或多种而产生的对DNA合成和增殖的超加的抑制作用，正如同我 们的资料中得出的结论。
本发明表明分别同时应用上述酶的抑制性物质或相应的制剂和给 药方式对于自身免疫性疾病和炎性疾病的治疗以及对于移植后排异反 应的治疗是非常合适的。
详细地，本发明基于以下发现，即以超加的方式通过同时给予以 下酶的酶活性抑制剂抑制了单核细胞(MNZ)和T细胞的DNA合成：
(I)二肽酰肽酶IV和氨基肽酶N，
(II)二肽酰肽酶IV和血管紧张素转换酶，
(III)二肽酰肽酶IV和脯氨酰寡肽酶，
(IV)二肽酰肽酶IV和X-脯氨酸-氨基肽酶
对于治疗上述疾病的酶抑制剂的应用是一种新方法和补充治疗形 式。
依照本发明应用的二肽酰肽酶IV、氨基肽酶N、脯氨酰寡肽酶、血 管紧张素转换酶和X-脯氨酸-氨基肽酶的抑制剂以药学可接受的配方 复合物的形式应用，如有抑制作用的抑制剂，酶底物，假-酶底物， 肽和肽衍生物以及上述酶的抗体。对DP IV优选的作用物是，例如，Xaa- 脯氨酸-二肽，其相应衍生物，优选二肽膦酸二芳香酯及其盐， Xaa-Xaa-(Trp)-脯氨酸-(Xaa)n-肽(n＝0-10)，其相应衍生物及其 盐以及氨基酸(Xaa)-酰胺，其相应衍生物及其盐，其中所述的Xaa 分别是α-氨基酸/亚氨基酸或α-氨基酸/亚氨基酸衍生物，优选Nε -4-硝基苄氧基羰基-L-赖氨酸，-L-脯氨酸，-L-色氨酸，-L- 异亮氨酸，-L-缬氨酸，以及环胺，例如吡咯烷，哌啶，噻唑烷，及 其酰胺结构衍生物。这些化合物及其制备在先前的专利(K.Neubert 等人，DD296 075A5)中已作描述。
抑制剂与已知的载体物质同时给予。一方面，可局部给药，例如， 分别为乳剂，软膏，糊剂，凝胶，溶液，喷雾剂，脂质体，混悬液， 水胶体敷料，以及其它可皮肤用的基质/赋形剂的形式，包括滴注应用 和另一方面的全身应用，分别为口服，经皮，静脉内，皮下，皮内， 肌肉内给药，按照适当的配方以及按照适当的盖仑应用形式。
实施例1
通过与DP IV的和APN的合成抑制剂共同孵育抑制人T淋巴细胞的 DNA合成
本发明研究表明同时给予DP IV(Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺 (thiazolidid)＝I49)和APN(放线酰胺素)的抑制剂，人外周T 淋巴细胞的DNA合成被以超加的方式抑制。T细胞在上述抑制剂存在下 孵育72小时，随后按照3[H]-胸腺嘧啶核苷掺入法测定DNA合成率， 如Reinhold等人描述的。[D.Reinhold等人：“二肽酰肽酶IV的抑制 剂诱导PWM-刺激的PBMNC和T细胞中转换生长因子β1的分泌”， Immunology Today 1997，91，354-360]。附图1示DNA合成的剂量-依 赖性超加抑制。
附图1示DP IV(I49)的和氨基肽酶N(放线酰胺素)的抑制剂 对人T淋巴细胞DNA合成的协同和剂量-依赖性作用。按照所示的抑 制剂浓度孵育人外周T细胞3天以上。然后，将3[H]-甲基-胸腺嘧 啶核苷加至培养基，再过6小时后测定掺入DNA中的3[H]-胸腺嘧啶 核苷的量。
实施例2
通过与DP IV的和APN的合成抑制剂共同孵育抑制人外周单核细胞 的DNA合成
本实验表明同时给予DP IV(Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺＝I49) 和APN(放线酰胺素)的抑制剂，人外周单核细胞(MNZ)的DNA合成 被以超加的方式抑制。MNZ在上述抑制剂存在下孵育72小时，随后按 照3[H]-胸腺嘧啶核苷掺入法测定DNA合成率，如Reinhold等人描述 的。[D.Reinhold等人：“二肽酰肽酶IV的抑制剂诱导PWM-刺激的 PBMNC和T细胞中转换生长因子β1的分泌”，Immunology Today 1997，91，354-360]。附图2示DNA合成的剂量-依赖性超加抑制。
附图2示DP IV(I49)的和氨基肽酶N(放线酰胺素)的抑制剂 对人单核细胞(MNZ)DNA合成的协同和剂量-依赖性作用。按照上述 的抑制剂浓度孵育人MNZ 3天。然后，将3[H]-甲基-胸腺嘧啶核苷 加至培养基，再过6小时后测定掺入DNA中的3[H]-胸腺嘧啶核苷的 量。
实施例3
通过与DP IV和POP的合成抑制剂孵育抑制人T淋巴细胞的DNA 合成
我们的实验表明同时给予DP IV(Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺 (thiazolidid)＝I49)和脯氨酰寡肽酶(Boc-Ala-噻唑酰胺)的抑 制剂，人T淋巴细胞的DNA合成被以超加的方式抑制。T细胞在上述抑 制剂存在下孵育72小时，随后按照3[H]-胸腺嘧啶核苷掺入法测定DNA 合成率，如Reinhold等人描述的。[D.Reinhold等人：“二肽酰肽酶IV 的抑制剂诱导PWM-刺激的PBMNC和T细胞中转换生长因子β1的分泌”， Immunology Today 1997，91，354-360]。附图3示DNA合成的剂量-依 赖性超加抑制。
附图3示DP IV(I49)和脯氨酰寡肽酶(Boc-Ala-Thia)的抑制 剂对人外周T淋巴细胞DNA合成的协同和剂量-依赖性作用。用上述 的抑制剂浓度孵育人T细胞3天。然后，将3[H]-甲基-胸腺嘧啶核 苷加至培养基，再过6小时后测定掺入DNA中的3[H]-胸腺嘧啶核苷 的量。
实施例4
通过与DP IV的和POP的合成抑制剂孵育抑制人外周单核细胞的 DNA合成
我们的实验表明同时给予DP IV(Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺＝I49) 和脯氨酰寡肽酶(Boc-Ala-噻唑酰胺)的抑制剂，人外周单核细胞的 DNA合成被以超加的方式抑制。MNZ在上述抑制剂存在下孵育72小时， 随后按照3[H]-胸腺嘧啶核苷掺入法测定DNA合成率，如Reinhold等 人描述的。[D.Reinhold等人：“二肽酰肽酶IV的抑制剂诱导PWM-刺激 的PBMNC和T细胞中转换生长因子β1的分泌”，Immunology Today 1997，91，354-360]。附图4示DNA合成的剂量-依赖性超加抑制。
附图4示DP IV(I49)和脯氨酰寡肽酶(Boc-Ala-Thia)的抑制 剂对人单核细胞(MNZ)DNA合成的协同和剂量-依赖性作用。用上述 抑制剂浓度孵育人MNZ3天。然后，将3[H]-甲基-胸腺嘧啶核苷加至 培养基，再过6小时后测定掺入DNA中的3[H]-胸腺嘧啶核苷的量。
实施例5
通过与DP IV和ACE的合成抑制剂孵育抑制人T淋巴细胞的DNA 合成
我们的实验表明同时给予DP IV(Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺＝I49) 的和血管紧张素转换酶(卡托普利)的抑制剂，人T淋巴细胞的DNA 合成以超加的方式被抑制。T细胞在上述抑制剂存在下孵育72小时， 随后按照3[H]-胸腺嘧啶核苷掺入法测定DNA合成率，如Reinhold等 人描述的。[D.Reinhold等人：“二肽酰肽酶IV的抑制剂诱导PWM-刺激 的PBMNC和T细胞中转换生长因子β1的分泌”，Immunology Today 1997，91，354-360]。附图5示DNA合成的剂量-依赖性超加抑制。
附图5示DP IV(I49)和血管紧张素转换酶(卡托普利)的抑制 剂对人外周T淋巴细胞DNA合成的协同和剂量-依赖性作用。用上述 的抑制剂浓度孵育人外周T淋巴细胞3天。然后，将3[H]-甲基-胸 腺嘧啶核苷加至培养基，再过6小时后测定掺入DNA中的3[H]-胸腺 嘧啶核苷的量。
实施例6
通过与DP IV和ACE合成抑制剂孵育抑制人外周单核细胞的DNA 合成
我们的实验表明同时给予DP IV(Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺＝I49) 和血管紧张素转换酶(卡托普利)的抑制剂，人外周单核细胞的DNA 合成被以超加的方式抑制。MNZ在上述抑制剂存在下孵育72小时，随 后按照3[H]-胸腺嘧啶核苷掺入法测定DNA合成率，如Reinhold等人 描述的。[D.Reinhold等人：“二肽酰肽酶IV的抑制剂诱导PWM-刺激的 PBMNC和T细胞中转换生长因子β1的分泌”，Immunology Today 1997，91，354-360]。附图6示DNA合成的剂量-依赖性超加抑制。
附图6示DP IV(I49)和血管紧张素转换酶(卡托普利)的抑制 剂对人单核细胞(MNZ)的DNA合成的协同和剂量-依赖性作用。用上 述的抑制剂浓度孵育人MNZ3天。然后，将3[H]-甲基-胸腺嘧啶核苷 加至培养基，再过6小时后测定掺入DNA中的3[H]-胸腺嘧啶核苷的 量。
实施例7
通过单独和同时给予DP IV(I49＝Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺) 和APN(放线酰胺素)的抑制性物质抑制人外周单核细胞(MNZ)的增 殖
附图7：将MNZ分别在不加(对照组)、加入丝裂原凝集素植物凝 集素(PHA)、以及加入PHA下和上述抑制剂孵育72小时。然后，根据 制造商的条件，使用可商购的WST-1细胞增殖测定仪(Takara公司) 测定代谢活性细胞的数量。
实施例8
通过单独和同时给予DP IV(I49＝Lys[Z(NO2)]噻唑酰胺) 和APN(放线酰胺素和Probestin)的抑制性物质抑制人T细胞系 KARPAS-299的增殖
附图8：将KARPAS-299细胞分别在不存在(对照组)和存在上述 抑制剂以及它们联合存在下孵育。然后，根据制造商的条件，使用可 买到的WST-1细胞增殖测定仪(Takara公司)测定代谢活性细胞的数 量。
实施例9
通过单独或同时给予DP IV(I49＝Lys[Z(NO2)]-噻唑酰胺) 和APN(放线酰胺素和Probestin)的抑制性物质抑制活化的人外周T 细胞的增殖
附图9：除未经处理的对照组外培养基中加入加植物凝集素和佛波 醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯的T细胞被活化，在上述抑制剂单 独或联合存在时，孵育72小时。然后，根据制造商的条件，使用可买 到的WST-1细胞增殖测定仪(Takara公司)测定代谢活性细胞的数量。
实施例10
通过单独或同时给予DP IV(I49＝Lys[Z(NO2)]噻唑酰胺) 和X-Pro-氨基肽酶(APP)(Apstaitin)的抑制性物质抑制PHA-活化的 人单核细胞(MNZ)的增殖
附图10：在上述抑制剂单独或联合存在时，孵育单核细胞(MNZ) 72小时。然后，根据制造商的条件，使用可买到的WST-1细胞增殖测 定仪(Takara公司)测定代谢活性细胞的数量。
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