技术领域

本发明涉及降-断喜巴辛(nor-seco himbacine)衍生物，其可适用作 治疗与血栓症、动脉粥样硬化、再狭窄、高血压、心绞痛、心律不齐、 心脏衰竭、大脑缺血、中风、神经退化性疾病及癌症相关的疾病的凝血 酶受体拮抗剂。凝血酶受体拮抗剂也已知为蛋白酶活化受体-1(PAR-1) 拮抗剂。本发明的化合物也可适于用作治疗类风湿性关节炎、全身性红 斑狼疮症、多发性硬化症、糖尿病、骨质疏松症、肾缺血、脑中风、大 脑缺血、肾炎、肺及胃肠道的发炎性病症及诸如可逆气管障碍、慢性哮 喘及支气管炎的呼吸道病症的大麻碱(CB2)受体抑制剂。本发明也涉 及包含这些化合物的医药组合物。

已知凝血酶在不同细胞类型中具有多种活性。已知凝血酶受体存在 于诸如人类血小板、血管平滑肌细胞、内皮细胞及纤维母细胞的细胞类 型中。因此预期凝血酶受体拮抗剂将适用于治疗血栓性、发炎性、动脉 粥样硬化性及纤维增生性病症，以及凝血酶及其受体在其中起病理作用 的其它病症。

凝血酶受体拮抗肽已基于涉及凝血酶受体上的氨基酸取代的结构- 活性研究被鉴别。在Bernatowicz等人，J.Med.Chem.，39(1996)，第 4879-4887页中，公开了四肽及五肽为有效凝血酶受体拮抗剂，例如N- 反-苯丙烯酰基-对氟Phe-对胍基Phe-Leu-Arg-NH2及N-反-苯丙烯酰基-对 氟Phe-对胍基Phe-Leu-Arg-Arg-NH2。肽凝血酶受体拮抗剂也公开了于于 1994年2月17日公开的WO 94/03479中。

大麻碱(cannabinoid)受体属于G蛋白偶合受体的总科。将其分成 主要神经元CB1受体及主要周边CB2受体。这些受体通过调节腺苷酸环化 酶及Ca+2及K+电流来发挥其生物作用。CB1受体的作用主要与中枢神经 统相关，而相信CB2受体具有与支气管收缩、免疫调节及发炎相关的周 边作用。因此，预期选择性CB2受体结合剂在控制与类风湿性关节炎、 全身性红斑狼疮症、多发性硬化症、糖尿病、骨质疏松症、肾缺血、脑 中风、大脑缺血、肾炎、肺及胃肠道的发炎性病症及诸如可逆气管障碍、 慢性哮喘及支气管炎的呼吸道病症相关的疾病方面具有效用(R.G. Pertwee，Curr.Med.Chem.6(8)，(1999)，635；M.Bensaid，Molecular Pharmacology，63(4)，(2003)，908)。

喜巴辛(Himbacine)，也即下式的哌啶生物碱

已被鉴别为蕈毒碱受体拮抗剂。(+)-喜巴辛的总合成公开于 Chackalamannil等人，J.Am.Chem.Soc.，118(1996)，第9812-9813页中。

经取代的三环凝血酶受体拮抗剂公开于US 6,063,847、US 6,326,380 及美国专利申请09/880222号(WO 01/96330)及第10/271715号中。

【发明内容】

本发明涉及由式I所表示的化合物：

式I

或该化合物的医药学上可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，其中：

表示如价数需求所允许的双键或单键，其限制条件为当与R3 连接的碳为双键的一部分时R3不存在；

B为-(CH2)n3-、-(CH2)-O-、-(CH2)S-、-(CH2)-NR6-、-C (O)NR6-、-NR6C(O)-、-(CH2)n4CR12＝CR12a(CH2)n5-或 -(CH2)n4C≡C(CH2)n5-，其中n3为0-5，n4及n5独立地为0-2，且R12 及R12a独立地选自由氢、烷基及卤素组成的组；

A、E、G、M及J独立地选自由-N(R54)-、-(CR1R2)-、-O-、 -S-、-S(O)-、-S(O)2-及组成的组；

X为-CH-或-N-，其限制条件为A、G、M及X的选择不产 生相邻的氧或硫原子；

各n为0、1或2，其限制条件为所有n变量不可同时为0；

Het为包含1至13个碳原子及1至4个独立地选自由N、O及S组成的组 的杂原子的5至14个原子的单环、双环或三环杂芳族基团，其限制条件 为并无相邻的氧或硫原子存在于该杂芳族基团中，其中环氮可形成N-氧 化物或与烷基形成四级基团，其中Het经Het的碳原子环成员与B连接， 且其中该Het基团经1至4个部分W取代，其中各W独立地选自由以下各基 团组成的组：氢；烷基；氟烷基；二氟烷基；三氟烷基；环烷基；杂环 烷基；经烷基或烯基取代的杂环烷基；烯基；R21-芳基；R21-杂芳基； R21-芳基烷基；R21-芳基-烯基；杂芳基；杂芳基烷基；杂芳基烯基；羟 基烷基；二羟基烷基；氨基烷基；烷基氨基烷基；二(烷基)-氨基烷基； 硫烷基；烷氧基；烯氧基；卤素；-NR4R5；-CN；-OH；-C(O)OR17； -COR16；-OS(O2)CF3；-CH2OCH2CF3；烷硫基；-C(O)NR4R5；-OCHR6- 苯基；苯氧基烷基；-NHCOR16；-NHSO2R16；联苯基；-OC(R6)2COOR7； -OC(R6)2C(O)NR4R5；经烷基、氨基或-NHC(O)OR17取代的烷氧 基；芳基；或任选经-NR1R2、-NR1COR2、-NR1CONR1R2、-NR1C(O) OR2、-NR1S(O)2R2、-NR1S(O)2NR1R2、-C(O)OH、-C(O)OR1、 -CONR1R2、羟基烷基、烷基或-S(O)2-烷基取代的烷基；-C(O)NR4R5 及杂芳基；其中该Het环上的相邻的碳可任选与亚甲二氧基形成环；

R1及R2独立地选自由氢、烷基、氟烷基、二氟烷基、三氟烷基、环 烷基、烯基、烷氧基、芳基烷基、芳基烯基、杂芳基烷基、杂芳基烯基、 羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、芳基及硫烷基组成的组；或

R1及R2当与氮连接时一起形成具有1-3个选自-O-、-N-、-S-、-S(O) -、S(O)2-及的杂原子的4至10个原子的单环或双环杂环，其 限制条件为S及O环原子彼此不相邻，其中该杂环未经取代或经一个或多 个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、芳氧基及芳基烷氧基的基团取代；

R3为芳烷氧基、芳氧基、杂芳基、杂芳烷氧基、-CN、-NO2、-O- 芳基、-O-杂芳基、N3、-C(O)NR18R19、-C(＝NR1)NR1R2、-N(R1) C＝(NR1′)NR1R2、-N＝C(R1)NR1R2、-NR18C(O)R19、-NR18C(O) NR18R19、-NR18C(O)OR19、-NR18S(O)2R19，、-NR18S(O)2NR18R19、 -NHNR18R19、-NR18NR18R19或-烷基-NR18R19；

R6为氢、烷基或苯基；

R7为氢或烷基；

各R13独立地选自氢、烷基、环烷基、卤烷基、卤素、-(CH2)n6NHC (O)OR16b、-(CH2)n6NHC(O)R16b、-(CH2)n6NHC(O)NR4R5、 -(CH2)n6NHSO2R16、-(CH2)n6NHSO2NR4R5及-(CH2)n6C(O)NR28R29， 其中n6为0-4；

各R14独立地选自由氢、烷基、-OH、烷氧基、芳基烷基、杂芳基、 杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、卤素、卤烷基、-(CH2)n6NHC(O) OR16b、-(CH2)n6NHC(O)R16b、-(CH2)n6NHC(O)NR4R5、-(CH2) n6NHSO2R16、-(CH2)n6NHSO2NR4R5及-(CH2)n6C(O)NR28R29组成 的组，其中n6为0-4；其中R4及R5独立地选自由氢、烷基、苯基、苄基及 环烷基组成的组，或R4及R5可与其所连接的氮一起形成环，其中由R4及 R5所形成的该环任选经＝O、OH、OR1或-C(O)OH取代；或

R13及R14一起形成3-6个环原子的螺环或杂螺环，其中该杂螺环含有 2至5个碳环原子及1或2个选自由O、S及N组成的组的杂环原子；

R16独立地选自由氢、烷基、苯基及苄基组成的组；

R16a独立地选自由氢、烷基、苯基及苄基组成的组；

R16b为氢、烷氧基、烷基、烷氧基烷基-、R22-O-C(O)-烷基-、环 烷基、R21-芳基、R21-芳基烷基、卤烷基、烯基、经卤基取代的烯基、炔 基、经卤基取代的炔基、R21-杂芳基、(R21-杂芳基)-烷基-、(R21-杂环 烷基)-烷基-、R28R29N-烷基-、R28R29N-C(O)-烷基-、R28R29N-C(O) O-烷基-、R28OC(O)N(R29)-烷基-、R28S(O)2N(R29)-烷基-、R28R29N-C (O)-N(R29)-烷基-、R28R29N-S(O)2N(R29)-烷基-、R28-C(O) N(R29)-烷基-、R28R29N-S(O)2-烷基-、HOS(O)2-烷基-、(OH)2P (O)2-烷基-、R28-S-烷基-、R28-S(O)2-烷基-或羟基烷基；

R17独立地选自由氢、烷基、苯基及苄基组成的组；

R18及R19为氢、烷基、芳基、R21-芳基、杂芳基、环烷基、杂环基、 烷氧基烷基、卤烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、杂芳氧基 烷基、杂芳基烷氧基烷基、环烷氧基烷基、(杂环基)烷氧基烷基、烷 氧基烷氧基烷基、-S(O)2-烷基、-C(NH)NR1R2，或经一或两个选自 环烷基、卤素、羟基、-NR1R2、-NR1C(O)R2、-NR1C(O)NR1R2、-NR1C (O)OR2、-NR1S(O)2R2、-NR1S(O)2NR1R2、-C(O)OH、-C(O) OR1及-C(O)NR1R2的部分取代的烷基；或

R18及R19连同其所连接的氮形成具有1-3个选自-O-、-N-、-S-、-S(O) -、-S(O)2-及的杂环原子的4至10个原子的单环或双环杂环， 其限制条件为S及O原子彼此不相邻，该环未经取代或经一个或多个选自 以下各基团的基团取代：烷基、卤素、羟基、烷氧基、芳氧基、芳基烷 氧基、-NR1R2、-NR1COR2、-NR1C(O)NR1R2、-NR1C(O)OR2、-NR1S (O)2R2、-NR1S(O2)NR1R2、-C(O)OR1、-CONR1R2，及经-NR1R2、 -NR1COR2、-NR1CONR1R2、-NR1C(O)OR2、-NR1S(O)2R2、-NR1S (O)2NR1R2、-C(O)OR1或-CONR1R2取代的烷基；

R21为1至3个部分，且各R21独立地选自由以下各基团组成的组：氢、 -CN、-CF3、-OCF3、卤素、-NO2、烷基、-OH、烷氧基、烷基氨基-、二 (烷基)氨基-、-NR25R26烷基-、羟基烷基-、-C(O)OR17、-COR17、 -NHCOR16、-NHS(O)2R16、-C(NH)-NH2、-NHS(O)2CH2CF3、-C (O)NR25R26、-NR25-C(O)-NR25R26、-S(O)R13、-S(O)2R13、-SR13、 -SO2NR4R5及-CONR4R5；或两个相邻R21部分可形成亚甲二氧基；

R22为氢、烷基、苯基、苄基、-COR16、-CONR18R19、-COR23、-S (O)R31、-S(O)2R31、-S(O2)NR24R25或-C(O)OR27；

R23为其中R35及R36独立地选自由氢、烷基及R37-取代烷基 组成的组，其中R37选自由HO-、HS-、CH2S-、-NH2、苯基、对羟基苯基 及吲哚基组成的组；或R23为烷基；卤烷基；烯基；卤烯基；炔基；环烷 基；环烷基烷基；经1至3个选自由烷氧基烷基、烷基、卤素、羟基、烷 氧基、芳氧基、芳基烷氧基、-NR1R2、-NR1C(O)R2、-NR1C(O)NR1R2、 -NR1C(O)OR2、-NR1S(O)2R2、-NR1S(O)2NR1R2、-C(O)OH、 -C(O)OR1及-CONR1R2组成的组的取代基取代的环烷基；芳基；芳烷 基；杂芳基；杂环烷基；经-NR1R2、-NR1COR2、-NR1CONR1R2、-NR1C (O)OR2、-NR1S(O2)R2、-NR1S(O2)NR1R2、-C(O)OH、-C(O) OR1、-CONR1R2及-SO3H取代的烷基；

R24、R25及R26独立地选自由氢、烷基、卤烷基、烯基、炔基、芳基、 芳烷基、环烷基、卤环烷基、烷氧基烷基、羟基及烷氧基组成的组；

R27为1至3个部分且各R27选自由氢、烷基及环烷基组成的组，其中 R27任选经-OH、-C(O)OH、卤素及烷氧基取代；

R28及R29独立地选自由氢、烷基、烷氧基、芳基烷基、杂芳基、杂 芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、杂环基、杂环基烷基及卤烷基组成 的组；或

R28及R29一起形成具有3-6个环原子的螺环或杂螺环；

R32及R33独立地选自由以下各基团组成的组：氢、R34-烷基、R34-烯 基、R34-炔基、R40-杂环烷基、R38-芳基、R38-芳烷基、R42-环烷基、R42- 环烯基、-OH、-OC(O)R43、-C(O)OR43、-C(O)R43、-C(O)NR43R44、 -NR43R44、-NR43C(O)R44、-NR43C(O)NR44R45、-NHS(O)2R43、 -OC(O)NR43R44、R37-烷氧基、R37-烯氧基、R37-炔氧基、R40-杂环烷 氧基、R42-环烷氧基、R42-环烯氧基、R42-环烷基-NH-、-NHSO2NHR16 及-CH(＝NOR17)；

或R32及R33可组合以形成以下环结构Q：

其中：

R9为氢、OH、烷氧基、卤素或卤烷基；

Q为稠合的R-取代芳基，R-取代杂芳基，含有1-3个选自O、S、S(O)、 S(O)2及NR22的杂原子的4-8个原子的R-取代杂环，其限制条件为S及O 不可彼此相邻；或

Q为：

其中R10及R11独立地选自由R1及-OR1组成的组，其限制条件为当环Q为 芳族且带有R10及R11的碳原子经一双键连接时，R10及R11不存在；

R为1至5个部分且各R独立地选自由以下各基团组成的组：氢、烷基、 卤素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、-COR16、-C(O) OR17、-C(O)NR4R5、-SOR16、-S(O2)R16、-NR16COR16a、-NR16C(O) OR16a、-NR16CONR4R5、-NR16S(O2)NR4R5、氟烷基、二氟烷基、三 氟烷基、环烷基、烯基、芳基烷基、芳基烯基、杂芳基烷基、杂芳基烯 基、羟基烷基、氨基烷基、芳基及硫烷基；

R34为1至3个部分且各R34独立地选自由以下各基团组成的组：氢、 卤素、-OH、烷氧基、R47-芳基、烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、炔基-C (O)-、杂环烷基、R39-环烷基、R39-环烯基、-OC(O)R43、-C(O) OR43、-C(O)R43、-C(O)NR43R44、-NR43R44、-NR43C(O)R44、-NR43C (O)NR44R45、-NHSO2R43、-OC(O)NR43R44、R34-烯氧基、R34-炔氧 基、R40-杂环烷氧基、R42-环烷氧基、R42-环烯氧基、R42-环烷基-NH-、 -NHSO2NHR16及-CH(＝NOR17)；

R38为1至3个部分且各R38独立地选自由氢、杂环烷基、卤素、-C(O) OR48、-CN、-C(O)NR49R50、-NR51C(O)R52、-OR48、环烷基、环烷 基烷基、烷基环烷基烷基、卤烷基环烷基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基 及R52-杂芳基组成的组；或相邻环碳上的两个R38基团形成稠合亚甲二氧 基；

R39为1至3个部分且各R39独立地选自由氢、卤素及烷氧基组成的组；

R40为1至3个部分且各R40独立地选自由氢、R41-烷基、R41-烯基及R41- 炔基组成的组；

R41为氢、-OH或烷氧基；

R42为1至3个部分且各R42独立地选自由氢、烷基、-OH、烷氧基及 卤素组成的组；

R43、R44及R45独立地选自由氢、烷基、烷氧基烷基、R38-芳基烷基、 R46-环烷基、R53-环烷基烷基、R38-芳基、杂环烷基、杂芳基、杂环烷基 烷基及杂芳基烷基组成的组；

R46为氢、烷基、羟基烷基或烷氧基；

R47为1至3个部分且各R47独立地选自由氢、烷基、-OH、卤素、-CN、 烷氧基、三卤代烷氧基、烷基氨基、二(烷基)氨基、-OCF3、羟基烷 基、-CHO、-C(O)烷基氨基、-C(O)二(烷基)氨基、-NH2、-NHC (O)烷基及-N(烷基)C(O)烷基组成的组；

R48为氢、烷基、卤烷基、二卤烷基或三氟烷基；

R49及R50独立地选自由氢、烷基、芳烷基、苯基及环烷基组成的组， 或R49及R50共同为-(CH2)4-、-(CH2)5-或-(CH2)2-NR39-(CH2)2- 且与其所连接的氮形成环；

R51及R52独立地选自由氢、烷基、芳烷基、苯基及环烷基组成的组， 或在基团-NR39C(O)R40中的R51及R52连同其所连接的氮原子一起形成 具有5-8个环成员的环状内酰胺；

R53为氢、烷氧基、-SOR16、-SO2R17、-C(O)OR17、-C(O)NR18R19、 烷基、卤素、氟烷基、二氟烷基、三氟烷基、环烷基、烯基、芳烷基、 芳基烯基、杂芳基烷基、杂芳基烯基、羟基烷基、氨基烷基、芳基、硫 烷基、烷氧基烷基或烷基氨基烷基；

且

R54选自由以下各基团组成的组：氢；烷基；氟烷基；二氟烷基；三 氟烷基；环烷基；经1至3个选自由烷氧基烷基、烷基、卤素、羟基、烷 氧基、芳氧基、芳基烷氧基、-NR1R2、-NR1C(O)R2、-NR1C(O)NR1R2、 -NR1C(O)OR2、-NR1S(O)2R2、-NR1S(O)2NR1R2、-C(O)OH、 -C(O)OR1及-CONR1R2组成的组的取代基取代的环烷基；烯基；烷氧 基；芳基烷基；芳基烯基；杂芳基烷基；杂芳基烯基；羟基；烷氧基； 羟基烷基；烷氧基烷基；氨基烷基；芳基；杂芳基；硫烷基及烷基，其 经1至3个选自由脲、磺酰胺、羧酰胺、羧酸、羧酸酯及磺酰基脲组成的 组的取代基取代。还提供了包含至少一种式I化合物及医药学上可接受的 载体的医药组合物。

本发明的化合物可适用作凝血酶受体拮抗剂，也称作PAR-1拮抗剂 或大麻碱(CB2)受体拮抗剂。本发明的凝血酶受体拮抗剂化合物可具 有抗血栓形成、抗血小板凝集、抗动脉粥样硬化、抗再狭窄、抗凝血及 /或抗发炎活性。本发明的CB2受体抑制剂化合物可适用于治疗类风湿性 关节炎、全身性红斑狼疮症、多发性硬化症、糖尿病、骨质疏松症、肾 缺血、脑中风、大脑缺血、肾炎、肺及胃肠道的发炎性病症及诸如可逆 气管障碍、慢性哮喘及支气管炎的呼吸道病症。

本发明的化合物可适用于治疗血栓症，动脉粥样硬化，再狭窄，高 血压，心绞痛，血管生成相关病症，心律不齐，心血管或循环疾病或病 状，心脏衰竭，急性冠状动脉症候组(ACS)，心肌梗塞，丝球体肾炎， 血栓性中风，血栓栓塞性中风，周边血管疾病，深静脉血栓症，静脉血 栓栓塞症，与激素替代疗法相关的心血管疾病，弥漫性血管内凝血症候 组，脑梗塞，偏头痛，勃起功能障碍，类风湿性关节炎，风湿病，星形 胶质细胞增生，肝、肾、肺或肠道的纤维化病症，全身性红斑性狼疮症， 多发性硬化症，骨质疏松症，肾病，急性肾衰竭，慢性肾衰竭，肾血管 内稳定，肾缺血，膀胱发炎，糖尿病，糖尿病性神经病变，脑中风，大 脑缺血，肾炎，癌症，黑素瘤，肾细胞癌，神经病变，恶性肿瘤，神经 退化性及/或神经中毒性疾病、病状或损伤，阿兹海默氏病(Alzheimer′s disease)，发炎疾病或病状，哮喘，青光眼，黄斑变性，牛皮癣，肝、 肾或肺的内皮细胞功能不良病症，肺及胃肠道的发炎性病症，呼吸道疾 病或病状，放射性纤维化，内皮细胞功能不良，牙周疾病或创伤，或脊 髓损伤，或其症状或结果，以及凝血酶及其受体起病理作用的其它病症。

具体地说，本发明的化合物可用于治疗急性冠状动脉症候组、心肌 梗塞或血栓性中风。

本发明的化合物也可用于治疗或预防与心肺绕道手术(CPB)相关 的病状的方法中，其包含将有效量的至少一种凝血酶受体拮抗剂给予该 手术的主体。CPB手术包括冠状动脉绕道手术(CABG)、心脏瓣膜修复 及替代手术、心包及主动脉修复手术。具体地说，本发明涉及治疗或预 防与CABG手术相关的病状的方法，其包含将有效量的至少一种凝血酶 受体拮抗剂给予该手术的主体。与CABG相关的病状选自由以下各病状 组成的组：出血；血栓性血管事件，诸如血栓症、再狭窄；静脉移植物 功能衰竭；动脉移植物功能衰竭；动脉粥样硬化；心绞痛；心肌局部缺 血；急性冠状动脉症候组；心肌梗塞；心脏衰竭；心律不齐；高血压； 暂时性缺血发作；脑功能损伤；血栓栓塞性中风；大脑缺血；脑梗塞； 血栓性静脉炎；深静脉血栓症及周边血管疾病。

在另一实施方案中，本发明的化合物可适用于治疗及/或预防患者的 非恶性组织中的辐射及/或化学诱发的毒性的方法，其包含给予治疗有效 量的至少一种式I化合物。具体地说，辐射及/或化学诱发的毒性为肠纤 维化、肺炎及粘膜炎中的一种或多种。在一优选实施方案中，辐射及/ 或化学诱发的毒性为肠纤维化。在另一优选实施方案中，辐射及/或化学 诱发的毒性为口腔粘膜炎。在又一实施方案中，辐射及/或化学诱发的毒 性为肠粘膜炎、肠纤维化、肠辐射症候组，或肠辐射曝露的病理生理学 表现。

本发明也提供用于减少将要曝露于、正在曝露于或曾经曝露于辐射 及/或化学毒性的患者的结构性辐射损伤的方法，其包含给予治疗有效量 的至少一种式I化合物。本发明也提供用于减少将要曝露于、正在曝露于 或曾经曝露于辐射及/或化学毒性的患者的炎症的方法，其包含给予治疗 有效量的至少一种式I化合物。本发明也提供用于在将要曝露于、正在曝 露于或曾经曝露于辐射及/或化学毒性的患者中不良组织重塑的方法，其 包含给予治疗有效量的至少一种式I化合物。本发明也提供用于减少将要 曝露于、正在曝露于或曾经曝露于辐射及/或化学毒性的患者的纤维增生 性组织的效果的方法，其包含给予治疗有效量的至少一种式I化合物。

本发明进一步提供适用于治疗患有细胞增生性病症的患者的细胞 增生性病症的方法，其包含给予治疗有效量的至少一种式I化合物。在一 实施方案中，细胞增生性病症为胰腺癌、神经胶质瘤、卵巢癌、结肠直 肠癌及/或结肠癌、乳癌、前列腺癌、甲状腺癌、肺癌、黑素瘤或胃癌。 在一实施方案中，神经胶质瘤为退行性星形细胞瘤。在另一实施方案中， 神经胶质瘤为多形性胶质母细胞瘤。

如上文所用的术语发炎疾病或病状包括大肠急躁症候组、克隆氏病 (Crohn′s disease)、肾炎，或胃肠道、肺、膀胱、胃肠道或其它器官的 辐射或化学疗法诱发的增生性或发炎性病症。术语呼吸道疾病或病状包 括可逆气管障碍、哮喘、慢性哮喘、支气管炎或慢性气管疾病。″癌症″ 包括肾细胞癌或血管新生相关病症。″神经退化性疾病″包括帕金森氏病 (Parkinson′s disease)、肌萎缩性侧索硬化、阿兹海默氏病、亨尔顿氏病 (Huntington′s disease)或威尔逊氏病(Wilson′s disease)。

本发明的某些实施方案也涉及使用有效量的与一或多种其它药剂 组合的至少一种式I化合物治疗以下疾病的方法：血栓症，动脉粥样硬化， 再狭窄，高血压，心绞痛，血管生成相关病症，心律不齐，心血管或循 环疾病或病状，心脏衰竭，急性冠状动脉症候组(ACS)，心肌梗塞， 丝球体肾炎，血栓性中风，血栓栓塞性中风，周边血管疾病，深静脉血 栓症，静脉血栓栓塞症，与激素替代疗法相关的心血管疾病，弥漫性血 管内凝血症候组，脑梗塞，偏头痛，勃起功能障碍，类风湿性关节炎， 风湿病，星形胶质细胞增生，肝、肾、肺或肠道的纤维化病症，全身性 红斑性狼疮症，多发性硬化症，骨质疏松症，肾病，急性肾衰竭，慢性 肾衰竭，肾血管内稳定，肾缺血，膀胱发炎，糖尿病，糖尿病性神经病 变，脑中风，大脑缺血，肾炎，癌症，黑素瘤，肾细胞癌，神经病变， 恶性肿瘤，神经退化性及/或神经中毒性疾病、病状或损伤，阿兹海默氏 病，发炎疾病或病状，哮喘，青光眼，黄斑变性，牛皮癣，肝、肾或肺 的内皮细胞功能不良病症，肺及胃肠道的发炎性病症，呼吸道疾病或病 状，放射性纤维化，内皮细胞功能不良，牙周疾病或创伤，或脊髓损伤， 或其症状或结果。预期本发明的组合可适用于治疗一种以上所列疾病。

对于治疗及/或预防非恶性组织中的辐射及/或化学诱发的毒性而 言，本发明包括将有效量的一种或多种式I化合物与一种或多种辐射反应 改质剂的组合给予需要该治疗的患者，该或这些辐射反应改质剂选自由 KepivanceTM(帕利非明(palifermin))、L-麸胺酰胺、替度鲁肽 (teduglutide)、硫糖铝漱口剂(sucralfate mouth rinse)、伊色格兰 (iseganan)、乳铁传递蛋白、美司那(mesna)及车轴草因子组成的组。

对于治疗细胞增生性病症而言，本发明包括将有效量的一种或多种 式I化合物与另一抗肿瘤剂的组合给予需要该治疗的患者。在一实施方案 中，另一抗肿瘤剂为替莫唑胺(temozolomide)且细胞增生性病症为神 经胶质瘤。在另一实施方案中，另一抗肿瘤剂为干扰素且细胞增生性病 症为黑素瘤。在一实施方案中，另一抗肿瘤剂为PEG-Intron(聚乙二醇 干扰素α-2b(peginterferon alpha-2b))且细胞增生性病症为黑素瘤。

也提供于医药学上可接受的载体中包含治疗有效量的至少一种式I 化合物与至少一种其它心血管药剂的组合的医药组合物。

也提供于医药学上可接受的载体中包含治疗有效量的至少一种式I 化合物与辐射反应改质剂的组合的医药组合物。

也提供于医药学上可接受的载体中包含治疗有效量的至少一种式I 化合物与抗肿瘤剂的组合的医药组合物。

进一步预期本发明的组合可以套组形式提供，该套组在单一封装中 包含至少一种于医药组合物中的式I化合物，及至少一种包含心血管药 剂、辐射反应改质剂或抗肿瘤剂的另一医药组合物。

发明详述

在一实施方案中，本发明提供由结构式I所表示的化合物或其医药学 上可接受的盐，其中各个部分如上所述。

对于式I化合物而言，式I化合物的优选实施方案如下：

式I化合物的其它优选实施方案如下：

更优选的实施方案为那些式I化合物，其中：

E为-O-；

A为-O-、或-(CR1R2)-；

G为或-(CR1R2)-；

M为-(CR1R2)-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或烷基；

R11为H或烷基；

R32为H或烷基；

R33为H或烷基；

B为-CR12＝CR12a-；

R12及R12a为H；

Het为芳基、经W取代的芳基、杂芳基或经W取代的杂芳基；

且

W为芳基或经1至3个包含卤素、烷基、-CF3、-CN、-OH或-O-烷基 的部分取代的芳基。

更优选的实施方案为那些式I化合物，其中：

E为-O-；

A为

G为-CH2-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或-CH3；

R11为H或-CH3；

R32为H或-CH3；

R33为H或-CH3；

B为-CH＝CH-；

Het为

且

W为

在式I化合物的一实施方案中，其中：

E为-O-；

A为-O-、或-(CR1R2)-；

G为或-(CR1R2)-；

M为-(CR1R2)-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或烷基；

R11为H或烷基；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为：

Het为芳基、经W取代的芳基、杂芳基或经W取代的杂芳基；

且

W为芳基或经1至3个包含卤素、烷基、-CF3、-CN、-OH或-O-烷基 的部分取代的芳基。

在式I化合物的一实施方案中：

E为-O-；

A为

G为-CH2-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或-CH3；

R11为H或-CH3；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为

B为-CH＝CH-；

Het为

且

W为

在式I化合物的另一实施方案中：

E为-N(H)-或-N(烷基)-；

A为-N(H)-、-N(烷基)-、或-(CR1R2)-；

G为或-(CR1R2)-；

M为-(CR1R2)-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或烷基；

R11为H或烷基；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为：

Het为芳基、经W取代的芳基、杂芳基或经W取代的杂芳基；

且

W为芳基或经1至3个包含卤素、烷基、-CF3、-CN、-OH或-O-烷基 的部分取代的芳基。

在式I化合物的另一实施方案中：

E为-N(H)-或-N(烷基)-；

A为

G为-CH2-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或-CH3；

R11为H或-CH3；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为

B为-CH＝CH-；

Het为

且

W为

在式I化合物的另一实施方案中：

E为

A为-N(H)-或-N(烷基)-；

G为-N＝；

M为-(CR1R2)-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或烷基；

R11为H或烷基；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为：

Het为芳基、经W取代的芳基、杂芳基或经W取代的杂芳基；

且

W为芳基或经1至3个包含卤素、烷基、-CF3、-CN、-OH或-O-烷基 的部分取代的芳基。

在式I化合物的另一实施方案中：

A为-N(H)-或-N(CH3)-；

R10为H或-CH3；

R11为H或-CH3；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为

B为-CH＝CH-；

Het为

且

W为

在式I化合物的另一实施方案中：

E为-O-；

A为-O-、或-(CR1R2)-；

G为或-(CR1R2)-；

M为-(CR1R2)-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或烷基；

R11为H或烷基；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为：

Het为芳基、经W取代的芳基、杂芳基或经W取代的杂芳基；

且

W为芳基或经1至3个包含卤素、烷基、-CF3、-CN、-OH或-O-烷基 的部分取代的芳基。

在式I化合物的一实施方案中：

E为-O-；

A为

G为-CH(CH3)-；

X为-C(H)-；

R3为H；

R9为H；

R10为H或-CH3；

R11为H或-CH3；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为

B为-CH＝CH-；

Het为

且

W为

对于式I化合物而言，进一步优选的实施方案如下：

在式I化合物的一实施方案中，其中：

为：

在式I化合物的一实施方案中：

R3不存在或R3为H；

R9为H；

R10为H或烷基；

R11为H或烷基；

R32为H或烷基；

R33为H或烷基；或R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为：

B为-CH＝CH-；

Het为芳基、经W取代的芳基、杂芳基或经W取代的杂芳基；

且

W为芳基或经1至3个包含卤素、烷基、-CF3、-CN、-OH或-O-烷基 的部分取代的芳基。

在式I化合物的另一实施方案中：

R3为H；

R9为H；

R10为H或-CH3；

R11为H或-CH3；

R32为H或-CH3；

R33为H或-CH3；

Het为

且

W为

在式I化合物的一实施方案中：

R3不存在或R3为H；

R9为H；

R10为H；

R11为H；

R32及R33组合以形成以下环结构Q：

其中Q为：

R13为(-CH2)n6NHC(O)OR16b；

R16b为烷基；

B为-CH＝CH-；

Het为芳基、经W取代的芳基、杂芳基或经W取代的杂芳基；

且

W为芳基或经1至3个包含卤素、烷基、-CF3、-CN、-OH或-O-烷基 的部分取代的芳基。

在式I化合物的一实施方案中：

R13为-NHC(O)OCH2CH3；

Het为

且

W为

如上文所用且贯穿本公开，除非另有指示，否则以下术语应理解为 具有以下含义：

″患者″包括人类与动物。

″主体″包括哺乳动物与非哺乳动物。

″哺乳动物″意谓人类及其它哺乳动物。

除非另有指示，否则不论术语单独使用或与其它术语组合使用，以 下定义都适用。因此，″烷基″的定义适用于″烷基″以及″羟基烷基″、″卤 烷基″、″烷氧基″等的″烷基″部分。

″烷基″意谓可为直链或分支链且在链中包含约1至约20个碳原子的 脂族烃基。优选的烷基在链中含有约1至约12个碳原子。更优选的烷基 在链中含有约1至约6个碳原子。分支链意谓一或多个诸如甲基、乙基或 丙基的低碳烷基与直链烷基链连接。″低碳烷基″意谓可为直链或分支链 的在链中具有约1至约6个碳原子的基团。术语″经取代的烷基″意谓该烷 基可经一或多个可相同或不同的取代基取代，各取代基独立选自由以下 各基团组成的组：卤基、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、 烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)2、羧基及-C (O)O-烷基。合适的烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、 异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、庚基、壬基、癸基、氟甲基、三氟 甲基及环丙基甲基。

″芳烷基″或″芳基烷基″意谓其中的芳基及烷基如先前所述的芳基- 烷基-基团。优选的芳烷基包含低碳烷基。合适的芳烷基的非限制性实例 包括苄基、2-苯乙基及萘基甲基。与母体部分的键结经由烷基。

″烷基芳基″意谓其中的烷基及芳基如先前所述的烷基-芳基-基团。 优选的烷基芳基包含低碳烷基。合适的烷基芳基的非限制性实例为甲苯 基。与母体部分的键结经由芳基。

″烯基″意谓在链中包含一或多个双键且可为共轭或非共轭的脂族烃 基(直链或分支链碳链)。适用的烯基可在链中包含2至约15个碳原子， 优选在链中包含2至约12个碳原子，且更优选在链中包含2至约6个碳原 子。烯基可经一或多个独立地选自由卤基、烷基、芳基、环烷基、氰基 及烷氧基组成的组的取代基取代。合适的烯基的非限制性实例包含乙烯 基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-烯基及正戊烯基。

当烷基或烯基链连接两个其它变量且因此为二价时，分别使用术语 亚烷基及亚烯基。

″炔基″意谓含有至少一个碳-碳叁键且可为直链或分支链，且链中包 含约2至约15个碳原子的脂族烃基。优选的炔基在链中具有约2至约12个 碳原子；且更优选在链中具有约2至约4个碳原子。分支链意谓一或多个 诸如甲基、乙基或丙基的低碳烷基与直链炔基链连接。″低碳炔基″意谓 链中具有约2至约6个碳原子，其可为直链或分支链。合适的炔基的非限 制性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、正戊炔基及 癸炔基。术语″经取代的炔基″意谓该炔基可经一或多个可相同或不同的 取代基取代，各取代基独立选自由烷基、芳基及环烷基组成的组。

″芳基″意谓包含约6至约14个碳原子、优选约6至约10个碳原子的芳 族单环或多环。芳基可任选经一或多个可相同或不同且如本文所定义的 ″环取代基″取代。合适的芳基的非限制性实例包括苯基、萘基、茚基、 四氢萘基及二氢茚基。″亚芳基″意谓包括邻位、间位及对位取代的二价 苯基。

″环取代基″意谓与芳族或非芳族环连接的取代基，其(例如)置换 该环上的可取代的氢。环取代基可相同或不同，其各自独立选自由以下 各基团组成的组：烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基芳 基、杂芳烷基、杂芳基烯基、杂芳基炔基、烷基杂芳基、羟基、羟基烷 基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳酰基、卤基、硝基、氰基、 羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺 酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、芳烷硫基、杂芳烷 硫基、环烷基、杂环基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH) -NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-及 -SO2NY1Y2，其中Y1及Y2可相同或不同且独立选自由氢、烷基、芳基、 环烷基及芳烷基组成的组。″环取代基″也可意谓同时置换环上两个相邻 碳原子上的两个可取代的氢(每个碳上一个氢)的单一部分。该部分的 实例为亚甲二氧基、亚乙二氧基、-C(CH3)2-及形成诸如以下部分的类 似部分：

术语″Boc″指N-叔丁氧基羰基。

″环烷基″意谓包含约3至约10个碳原子、优选约5至约10个碳原子的 非芳族单环或多环。优选的环烷基环含有约5至约7个环原子。环烷基可 任选经一或多个可相同或不同且如上文所定义的″环取代基″取代。合适 的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、 环庚基及类似基团。合适的多环环烷基的非限制性实例包括1-十氢萘基、 降冰片烷基、金刚烷基及类似基团，以及部分饱和种类，诸如二氢茚基、 四氢萘基及类似基团。

″环烯基″意谓含有至少一个碳碳双键的包含约3至约10个碳原子、优 选约5至约10个碳原子的非芳族单环或多环。优选的环烯基环含有约5至 约7个环原子。环烯基可任选经一或多个可相同或不同且如上文所定义 的″环取代基″取代。合适的单环环烯基的非限制性实例包括环戊烯基、 环己烯基、环庚烯基及类似基团。合适的多环环烯基的非限制性实例为 降冰片烯基。

″亚环烷基″指相应二价环，其中与其它基团的连接点包括所有位置 异构体。

″二羟基烷基″指在两个不同碳原子上经两个羟基取代的烷基链。

″氟烷基″、″二氟烷基″及″三氟烷基″意谓末端碳分别经1个、2个或3 个氟原子取代的烷基链，例如-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2或-CH2CH2F。

″卤基″指氟基、氯基、溴基或碘基。优选为氟基、氯基或溴基，且 更优选为氟基及氯基。

″卤素″意谓氟、氯、溴或碘。优选为氟、氯及溴。

″杂芳基″意谓包含约5至约14个环原子、优选约5至约10个环原子的 芳族单环或多环，其中这些环原子中的一或多个为不同于碳的元素，例 如单独或组合的氮、氧或硫，其限制条件为这些环不包括相邻氧及/或硫 原子。也包括环氮的N-氧化物，以及环氮经烷基取代以形成四级胺的化 合物。优选的杂芳基含有约5至约6个环原子。″杂芳基″可任选经一或多 个可相同或不同且如本文所定义的″环取代基″取代。杂芳基根名称前的 前缀氮杂、氧杂或硫杂意谓至少一个氮、氧或硫原子分别以环原子形式 存在。可任选将杂芳基的氮原子氧化成相应N-氧化物。合适的杂芳基的 非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮 (包括N-取代吡啶酮)、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑 基、噁二唑基、四唑基、嘧啶基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、 1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喏啉基、呔嗪基、羟基吲哚基、萘 啶基(例如1，5或1，7)、吡啶并[2，3]咪唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑 并[2，1-b]噻唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、吲哚基、吖吲哚基、苯并 咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻 吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并吖吲哚基、 1，2，4-三嗪基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、吡啶并嘧啶基、7-吖吲哚基及 类似基团。术语″杂芳基″也指部分饱和的杂芳基部分，诸如四氢异喹啉 基、四氢喹啉基及类似基团。涵盖所有位置异构体，例如2-吡啶基、3- 吡啶基及4-吡啶基。

术语″Het″由如上文刚定义的单环、双环及苯并稠合杂芳基所例示。 Het基团经由碳环成员与基团B连接，例如，Het为2-吡啶基、3-吡啶基或 2-喹啉基。Het环可在任何有效环碳上经基团W取代；1至4个W取代基可 存在于Het环上。

″杂环基″或″杂环烷基″意谓包含约3至约10个环原子、优选约5至约 10个环原子的非芳族饱和单环或多环，其中该环中的原子中的一或多者 为不同于碳的元素，例如单独或组合的氮、氧或硫。并无相邻氧及/或硫 原子存在于环中。优选的杂环基含有约5至约6个环原子。杂环基根名称 前的前缀吖、噁或噻意谓至少一个氮、氧或硫原子分别以环原子形式存 在。在杂环基环中任何-NH可经保护(诸如)以-N(Boc)、-N(CBz)、 -N(Tos)基团及类似基团的形式存在；这些保护也被视为本发明的一 部分。杂环基可任选经一或多个可相同或不同且如本文所定义的″环取 代基″取代。可任选将杂环基的氮或硫原子氧化成相应N-氧化物、S-氧化 物或S，S-二氧化物。合适的单环杂环基环的非限制性实例包括哌啶基、 吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、1，3-二噁烷基、 1，4-二噁烷基、四氢呋喃基、四氢噻喃基、四氢噻吩基、内酰胺、内酯 及类似基团。

应注意，在本发明的含杂原子环中，无羟基存在于与N、O或S相邻 的碳原子上，且无N或S基团存在于与另一杂原子相邻的碳上。因此，举 例而言，在以下环中：

并无与标记为2及5的碳直接连接的-OH。

也应注意，诸如以下部分的互变异构形式：

在本发明的某些实施例中被视为等价的。

术语″杂螺环″指含有3至5个碳原子及1或2个选自由N、S及O组成的 组的杂原子的螺环结构，其限制条件为这些杂原子不相邻。

″烷基氨基″意谓其中的烷基如先前所述的烷基-氨基。与母体部分的 键结经由氨基。

″烷基氨基烷基″意谓其中的烷基如先前所述的烷基-氨基-烷基。与 母体部分的键结经由烷基。

″烷基环烷基烷基″意谓其中的烷基及环烷基如先前所述的烷基-环 烷基-烷基。与母体部分的键结经由烷基。

″烷基杂芳基″意谓其中的烷基及杂芳基如先前所述的烷基-杂芳基。 与母体部分的键结经由杂芳基。

″烷基杂环烷基″意谓其中的烷基及杂环烷基如先前所述的烷基-杂 环烷基。与母体部分的键结经由杂环烷基。

″烷氧基烷氧基烷基″意谓其中的烷氧基及烷基如先前所述的烷氧基 -烷基-O-烷基。与母体部分的键结经由烷基。

″炔基烷基″意谓其中的炔基及烷基如先前所述的炔基-烷基。优选的 炔基烷基含有低碳炔基及低碳烷基。与母体部分的键结经由烷基。合适 的炔基烷基的非限制性实例包括炔丙基甲基。

″卤烷基″意谓其中的烷基如先前所述的卤基-烷基。与母体部分的键 结经由烷基。合适的卤烷基的非限制性实例包括氟甲基及二氟甲基。

″杂芳烷基″或″杂芳基烷基″意谓其中的杂芳基及烷基如先前所述的 杂芳基-烷基。优选的杂芳烷基含有低碳烷基。合适的芳烷基的非限制性 实例包括吡啶基甲基及喹啉-3-基甲基。与母体部分的键结经由烷基。

″杂芳基烯基″意谓其中的杂芳基及烯基如先前所述的杂芳基-烯基。 优选的杂芳基烯基含有低碳烯基。与母体部分的键结经由烯基。

″杂环基烷基″或″杂环烷基烷基″意谓其中的杂环基及烷基如先前所 述的杂环基-烷基。与母体部分的键结经由烷基。

″杂环烷氧基″意谓其中的杂环烷基如先前所述的杂环烷基-O-基团。 与母体部分的键结经由醚原子。

″杂芳基烷氧基烷基″意谓其中的杂芳基及烷氧基烷基如上文所述的 杂芳基-烷氧基烷基。与母体部分的键结经由烷基。

″羟基烷基″意谓其中的烷基如先前所定义的HO-烷基。优选的羟基 烷基含有低碳烷基。合适的羟基烷基的非限制性实例包括羟甲基及2-羟 乙基。

″酰基″意谓其中的各个基团如先前所述的H-C(O)-、烷基-C(O) -或环烷基-C(O)-基团。与母体部分的键结经由羰基。优选的酰基含有 低碳烷基。合适的酰基的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基及丙酰基。

″氨基烷基″意谓其中的烷基如先前所述的氨基-烷基。与母体部分的 键结经由烷基。

″芳酰基″意谓其中的芳基如先前所述的芳基-C(O)-基团。与母体 部分的键结经由羰基。合适的基团的非限制性实例包括苄酰基及1-萘酰 基。

″烯氧基″意谓其中的烯基如先前所述的烯基-O-基团。与母体部分的 键结经由醚氧。

″炔氧基″意谓其中的炔基如先前所述的炔基-O-基团。与母体部分的 键结经由醚氧。

″烷氧基″意谓其中的烷基如先前所述的烷基-O-基团。合适的烷氧基 的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基及正丁氧基。 与母体部分的键结经由醚氧。

″芳烷氧基″或″芳基烷氧基″意谓其中的芳烷基如先前所述的芳烷基 -O-基团。与母体部分的键结经由氧原子。

″烷氧基烷基″意谓其中的烷基及烷基如先前所述的烷基-O-烷基。合 适的烷氧基烷基的非限制性实例包括甲氧基甲基及乙氧基甲基。与母体 部分的键结经由烷基。

″芳氧基″意谓其中的芳基如先前所述的芳基-O-基团。合适的芳氧基 的非限制性实例包括苯氧基及萘氧基。与母体部分的键结经由醚氧。

″芳氧基烷基″意谓其中的芳基及烷基如先前所述的芳基-O-烷基。合 适的芳氧基烷基的非限制性实例包括苯氧基甲基及萘氧基甲基。与母体 部分的键结经由烷基。

″芳基烷氧基烷基″意谓其中的芳基及烷氧基烷基如先前所述的芳基 -烷氧基烷基。与母体部分的键结经由烷基。

″芳烷氧基″意谓其中的芳烷基如先前所述的芳烷基-O-基团。合适的 芳烷氧基的非限制性实例包括苄氧基及1-萘甲氧基或2-萘甲氧基。与母 体部分的键结经由醚氧。

″芳基烯基″意谓其中的芳基及烯基如先前所述的芳基-烯基。与母体 部分的键结经由烯基。

″烷硫基″意谓其中的烷基如先前所述的烷基-S-基团。合适的烷硫基 的非限制性实例包括甲硫基及乙硫基。与母体部分的键结经由硫。

″芳硫基″意谓其中的芳基如先前所述的芳基-S-基团。合适的芳硫基 的非限制性实例包括苯硫基及萘硫基。与母体部分的键结经由硫。

″芳烷硫基″意谓其中的芳烷基如先前所述的芳烷基-S-基团。合适的 芳烷硫基的非限制性实例为苄硫基。与母体部分的键结经由硫。

″烷氧基羰基″意谓其中的烷基-O-CO-基团。合适的烷氧基羰基的非 限制性实例包括甲氧基羰基及乙氧基羰基。与母体部分的键结经由羰 基。

″芳氧基羰基″意谓其中的芳基-O-C(O)-基团。合适的芳氧基羰基 的非限制性实例包括苯氧基羰基及萘氧基羰基。与母体部分的键结经由 羰基。

″芳烷氧基羰基″意谓其中的芳烷基-O-C(O)-基团。合适的芳烷氧 基羰基的非限制性实例为苄氧基羰基。与母体部分的键结经由羰基。

″烷基磺酰基″意谓其中的烷基-S(O2)-基团。优选的基团为其中烷 基为低碳烷基的烷基磺酰基。与母体部分的键结经由磺酰基。

″芳基磺酰基″意谓其中的芳基-S(O2)-基团。与母体部分的键结经 由磺酰基。

″环烯氧基″意谓其中的环烯基如先前所述的环烯基-O-基团。与母体 部分的键结经由醚原子。

″环烷基烷基″意谓其中的环烷基及烷基如先前所述的环烷基-烷基。 与母体部分的键结经由烷基。

″环烷氧基″意谓其中的环烷基如先前所述的环烷基-O-基团。与母体 部分的键结经由醚原子。

″环烷氧基烷基″意谓其中的环烷基及烷基如先前所述的环烷基-O- 烷基。与母体部分的键结经由烷基。

″卤烷氧基烷基″意谓其中的烷氧基烷基如先前所述的卤烷氧基烷 基。与母体部分的键结经由烷基。

″杂环基烷氧基烷基″意谓其中的烷氧基烷基如先前所述的杂环基- 烷氧基烷基。与母体部分的键结经由烷基。

由所表示的任选选用的双键意谓其中须存在至少一单键，但 可存在一双键；当双键存在时，R10不存在。

当R4及R5与其所连接的氮一起形成环时，所形成的环为1-吡咯啶基、 1-哌啶基及1-哌嗪基，其中哌嗪基环也可在4位氮上经基团R7取代。

其中(例如)R4及R5被称为独立地选自一组取代基的上述陈述意谓 当R4及R5连接同一氮时独立地经选择，而且当R4或R5变量在分子中出现 一次以上时，那些出现独立地经选择。类似地，R13或R14在每次出现时 与同一Q环中的任何其它R13或R14无关。本领域技术人员应了解，取代 基的大小及性质将影响可存在的取代基的数目。

术语″经取代″意谓指定原子上的一或多个氢经自指定组所作出的选 择而置换，其限制条件为不超过现有状态下指定原子的正常价数且取代 得到稳定化合物。仅当取代基及/或变量的组合得到稳定化合物时，这些 组合为可允许的。″稳定化合物″或″稳定结构″意谓足够稳固以自反应混 合物分离至适用纯度且调配成有效治疗剂后仍然能够存在的化合物。

术语″任选经取代″意谓以指定基团或部分任选进行取代。

对于化合物，术语″经分离″或″呈分离形式″指自合成过程或天然来 源或其组合分离后该化合物的物理状态。对于化合物，术语″经纯化″或″ 呈纯化形式″指自本文所述或本领域技术人员所熟知的纯化过程获得后 该化合物的物理状态，其足够纯以便可由本文所述或本领域技术人员所 熟知的标准分析技术来表征。

式I化合物中的结构表示一任选选用的双键，虚线为一键或非 键，从而产生如价数需求所允许的一双键或一单键；其限制条件为当与 R3连接的碳为一双键的一部分时R3不存在。

也应注意，假定本文中正文、流程、实例及表格中的具有不饱和价 数的任何碳以及杂原子都具有足够数目的氢原子以满足价数。

当化合物中的官能基被称为″经保护″时，其意谓该基团呈修饰形式 以在化合物进行反应时预防经保护位点处的不当副反应。合适的保护基 将为一般本领域技术人员以及通过参考标准教科书(诸如T.W.Greene 等人，Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，New York) 了解到。

当任何变量(例如芳基、杂环、R2等)在任何组份或式I中出现一次 以上时，其在每次出现时的定义独立于其在所有其它出现时的定义。

如本文所用的术语″组合物″意欲涵盖包含指定量的指定成份的产物 以及直接或间接由指定量的指定成份的组合所产生的任何产物。

本发明的化合物的前药、溶剂合物及共晶体也涵盖于本文中。如本 文所用的术语″前药″表示为药物前驱体的化合物，其在给予主体后经历 代谢过程或化学过程的化学转化以得到式I化合物或其盐及/或溶剂合 物。前药的论述提供于A.C.S.论文集列(A.C.S.Symposium Series)的T. Higuchi及V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)，14，及 Bioreversible Carriers in Drug Design，(1987)Edward B.Roche编， American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中，这些文献均 以引用的方式并入本文中。

″溶剂合物″意谓本发明的化合物与一或多个溶剂分子的物理性缔 合。此物理性缔合涉及不同程度的离子及共价键结，包括氢键结。在某 些情形下，例如当将一或多个溶剂分子并入结晶固体的晶格中时，溶剂 合物将能够分离。″溶剂合物″涵盖溶液相与可分离的溶剂合物。合适的 溶剂合物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物及类似物。″水合物″ 为其中溶剂分子为H2O的溶剂合物。

共晶体为通过将活性医药中间体与惰性分子组合所形成的结晶超 结构，该惰性分子使该组合形式产生结晶。共晶体通常在诸如反丁烯二 酸、丁二酸等的二羧酸与诸如本发明的化合物I所表示的一种的碱性胺之 间以不同比例制成，这些比例视共晶体性质而定。(Rmenar，J.F.等人J Am.Chem.Soc.2003，125，8456)。

″有效量″或″治疗有效量″意欲描述有效地作为凝血酶受体拮抗剂且 由此产生所希望的治疗、改善、抑制或预防作用的本发明的化合物或组 合物的量。

式I化合物可形成也在本发明范畴内的盐。除非另有指示，否则在本 文中提及式I化合物应理解为包括提及其盐。如本文所用的术语″盐″表示 以无机及/或有机酸所形成的酸式盐以及与无机及/或有机碱所形成的碱 式盐。另外，当式I化合物含有诸如(但不限于)吡啶或咪唑的碱性部分 与诸如(但不限于)羧酸的酸性部分时，两性离子(″内盐″)可以形成 且包括于如本文所用的术语″盐″内。尽管其它盐也适用，但医药学上可 接受(也即无毒、生理学上可接受)的盐为优选。举例而言，通过使I 化合物与一定量(诸如等量)的酸或碱在诸如盐可沉淀于其中的介质中 或在水性介质中反应、接着冻干可形成式I化合物的盐。

例示性酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、 硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、反丁 烯二酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲 烷磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、 琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐及类似酸加成盐。 另外，一般被视为适合于由碱性医药化合物形成医药学上适用的盐的酸 由以下文献所论述，例如P.Stahl等人，Camille G.(编)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)Zurich： Wiley-VCH；S.Berge等人，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977) 66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217； Anderson等人，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；及The Orange Book(在Food&Drug Administration， Washington，D.C.的网站上)。这些公开的内容以引用的方式并入本文中。

例示性碱式盐包括：铵盐；碱金属盐，诸如钠盐、锂盐及钾盐；碱 土金属盐，诸如钙盐及镁盐；诸如与二环己基胺、叔丁基胺的有机碱(例 如有机胺)形成的盐；及与诸如精胺酸、赖胺酸的氨基酸形成的盐；及 类似碱式盐。含碱性氮的基团可用以下试剂季化：诸如低碳烷基卤化物 (例如甲基、乙基及丁基氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷酯(例 如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯及硫酸二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、 月桂基及硬脂酰基氯化物、溴化物及碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄 基溴及苯乙基溴)及其它试剂。

所有这些酸式盐及碱式盐都意欲为本发明范畴内的医药学上可接 受的盐且所有酸式盐及碱式盐被视为与达到本发明目的的相应化合物 的游离形式等效。

式I化合物及其盐、溶剂合物、共晶体及前药可以其互变异构形式(例 如酰胺或亚氨基醚)存在。所有这些互变异构形式作为本发明的一部分 而涵盖于本文中。

包括对映异构形式(其甚至可在无不对称碳的情况下存在)、旋转 异构形式、滞转异构体及非对映异构形式的本发明化合物(包括这些化 合物的那些盐、溶剂合物、共晶体及前药以及这些前药的盐及溶剂合物、 共晶体)的所有立体异构体(例如几何异构体、光学异构体及类似异构 体)，诸如可因各个取代基上的不对称碳而存在的那些立体异构体，与 位置异构体(诸如4-吡啶基及3-吡啶基)一样都涵盖于本发明的范畴内。 本发明的化合物的个别立体异构体可(例如)大体上不含其它异构体， 或可混合成(例如)外消旋体或与所有其它立体异构体或其它所选立体 异构体混合。本发明的对称中心可具有如由IUPAC 1974 Recommendations所定义的S或R构型。术语″盐″、″溶剂合物″、″前药″及 类似术语的使用意欲同等适用于本发明化合物的对映异构体、立体异构 体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋体或前药的盐、溶 剂合物及前药。

式I化合物及式I化合物的盐、溶剂合物、共晶体及前药的多晶型形 式意欲包括于本发明中。

本发明的化合物具有药理学特性；具体地说，式I化合物可为适用作 凝血酶受体拮抗剂的降-断喜巴辛衍生物。

本发明的化合物具有至少一个不对称碳原子且由此包括式(I)化合 物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体及外消旋体(若 存在)的所有异构体都作为本发明的一部分而涵盖在内。本发明包括纯 形式与混合物形式的d及l异构体，包括外消旋混合物。异构体可使用常 规技术通过使光学纯或光学富集起始物质反应或通过分离式I化合物的 异构体来制备。异构体也可包括几何异构体，例如当双键存在时。式(I) 化合物的多晶型形式(结晶或无定形)也作为本发明的一部分而涵盖在 内。

本领域技术人员应了解，对于一些式I化合物而言，一种异构体将显 示比其它异构体更大的药理学活性。

典型优选的本发明化合物具有以下立体化学：

其中具有绝对立体化学的化合物为更优选。

本领域技术人员应了解，对于一些式I化合物而言，一种异构体将显 示比其它异构体更大的药理学活性。

本发明的化合物一般根据下文的方法来制备。

一些以下化合物、中间物及制备方法可由如US 6,063,847、US 6,326,380、US 6,645,987、美国专利申请10/271715中的任一个所公开的 方法来实施，这些文献都以引用的方式并入本文中。

以下为制备起始物质及式I化合物的实施例。在制备过程中，使用以 下缩写：

rt                室温

THF               四氢呋喃

Et2O              乙醚

Me                甲基

Et                乙基

EtOAc             乙酸乙酯

BnOCH2Cl          苄基氯甲基醚

BuLi              丁基锂

DBAD              偶氮二甲酸二-叔丁酯

DCE               1，2-二氯乙烷

DCM               二氯甲烷

DMF               N，N-二甲基甲酰胺

DMSO              甲基亚砜

HATU              六氟磷酸盐

HOBT或HOBt        羟基苯并三唑

KHMDS             双(三甲基硅烷基)氨基钾

LiHMDS或LHMDS：   双(三甲基硅烷基)氨基锂

NaB(O2CCH3)3H     三乙酰氧基硼氢化钠

PhSeBr            苯基溴化硒

PS                聚合物负载的

PS-EDC            聚合物负载的二甲基氨基丙基乙基碳化

                  二亚胺盐酸盐

PS-NCO            聚合物负载的异氰酸酯

PS-Tris-NH2            聚合物负载的缓血酸胺

TFA                    三氟乙酸

Ti(OiPr)4              异丙醇钛

TLC                    薄层层析法

TMSI                   三甲基硅烷基碘化物或碘代三甲基硅烷

TEMPO                  2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基，自由基

DIBAL、DIBALH          氢化二异丁基铝

TIPSOTf                三氟甲烷磺酸三异丙基硅烷酯

DBU                    1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯

合成

内酯(诸如4及5)可如流程1中所述的由酮2来制备。将酮用溴乙酸 叔丁酯烷基化以得到中间物3，将中间物3用硼氢化钠还原，接着使其环 化以得到顺式及反式内酰胺4及5。

流程1

2的制备

在0℃下将存于THF中的1M溶液(35ml，35mmol，1.5当量)形式 的LHMDS添加至1(9.0g，23.3mmol)(参见美国专利2004/0152736A1， 对于1的制备)于150ml THF中的溶液中。将混合物搅拌30min，接着抽 空，且使用气球以氧气填充。在氧气气氛下将混合物在0℃下搅拌30分 钟且在室温下搅拌1小时。反应通过添加亚硫酸钠水溶液而中止，搅拌1 小时且用乙酸乙酯萃取。由硅胶层析法纯化所获得的粗产物以获得300 mg呈微量产物形式的2。

MS：331.1(MH+)

3的制备

在0℃下将LHMDS于THF中的1M溶液(0.58ml，0.58mmol，1.2当 量)添加至2(160mg，0.48mmol)于5ml THF中的溶液中，且搅拌10min 后，添加溴乙酸叔丁酯。将混合物搅拌过夜，同时温至室温。将其通过 添加氯化铵水溶液而中止，用乙酸乙酯萃取，且由制备型TLC使用存于 己烷中的30％乙酸乙酯纯化粗产物以得到105mg 3。

4及5的制备

在0℃下将NaBH4(9mg，0.24mmol，1.0当量)添加至3(105mg， 0.24mmol)于2ml甲醇中的溶液中且搅拌15min。反应通过添加氯化铵 水溶液而中止且用乙酸乙酯萃取以得到80mg粗产物。将0.5ml三氟乙酸 添加至含有存于0.5ml二氯甲烷中的55mg此粗产物的烧瓶中，且在室温 下搅拌2小时。将溶液浓缩至干燥，且将残余物溶解于二氯甲烷中且用 水、接着用盐水洗涤，经MgSO4干燥，浓缩且由制备型TLC使用存于己 烷中的30％乙酸乙酯纯化以得到14mg 4及24mg 5。

4的MS：373.1(MH+)

5的MS：373.1(MH+)

制备这些类型化合物的一替代性方法描述于流程2中。经醇7将羧酸 6转化成醛8。与膦酸盐9的Horner-Wordsworth反应得到乙烯基吡啶10， 使其α-羟基化成11。使内酯还原成乳醇，接着与Dess-Martin高碘烷试剂 反应得到甲酸盐13，其在碱性条件下得到酮14。用溴乙酸叔丁酯烷基化 得到中间物15，将其用锂硼化物(L-selectride)还原成轴向醇且在酸性 条件下环化成内酯16。16的Suzuki偶合得到目标化合物17-20。

流程2

7的制备

将乙二酰氯(21ml，0.241mol，2当量)、接着DMF(275μl，3.55 mmol，5mol％)添加至6(30g，0.119mol)(参见美国专利6063847， 对于6的制备)于400ml二氯甲烷中的溶液中。将混合物搅拌2小时，浓 缩且与甲苯一起蒸发以得到酸氯化物。将其溶解于500ml THF中，冷却 至0℃，添加三-叔丁氧基氢化铝锂(76g，0.299mol，2.5当量)且将混 合物搅拌2小时。将其用水稀释，用HCl酸化，用乙酸乙酯萃取以得到21.6 g 7。

8的制备

在0℃下将2，2，6，6-四甲基哌啶氧化物(160mg，1.02mmol，2mol％) 及将溴化钾(600mg，5.04mmol，0.1当量)于10ml水中的溶液添加至 7(12.0g，50.4mmol)于200ml二氯甲烷中的溶液中。将以固体NaHCO3 饱和的Clorox溶液(92g，约6.15％ NaOCl含量)逐滴添加至此混合物中。 添加完成后，将混合物搅拌20min，使有机层分离且用二氯甲烷萃取水 层。将经组合的有机层用Na2S2O3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥， 过滤且浓缩以得到12g呈树脂状的8。

10的制备

在0℃下将LHMDS于THF中的1M溶液(65ml，65mmol)添加至9 (20g，65mmol)(参见美国专利2004/0152736A1，对于9的制备)于 200ml THF中的溶液中且将混合物在0℃下搅拌30min。将Ti(OiPr)4 (22.3ml，75.5mmol)、接着醛8(12g)于50ml THF中的溶液添加至 其中。将混合物在0℃下搅拌15min且在室温下搅拌30min，接着用NH4Cl 水溶液中止反应。用乙酸乙酯萃取，接着使用0％至15％乙酸乙酯-己烷 进行层析纯化得到3.3g 10。

11的制备

在0℃下将LHMDS于THF中的1M溶液(12.7ml，12.7mmol，1.5当 量)添加至10(3.3g，8.46mmol)于50ml THF中的溶液中且搅拌30min。 在室温下将烧瓶抽空且用氧气填充且在氧气气氛下搅拌1小时。将其通 过添加Na2SO3水溶液而中止，搅拌30min，用乙酸乙酯萃取且由层析法 使用0％至20％乙酸乙酯-己烷纯化以得到3g 11。

MS：406.1(MH+)

12的制备

在-78℃下将DIBALH于甲苯中的20重量％溶液(34.2mmol，41.4 mmol，4当量)添加至11(4.2g，10.3mmol)于75ml二氯甲烷中的溶 液中且在-78℃下搅拌1小时。将其通过添加酒石酸钾钠水溶液而中止且 用二氯甲烷萃取以得到2.89g 12。

MS：408.22(MH+)

13的制备

在室温下将NaHCO3(1.2g，14.28mmol，2当量)、接着Dess-Martin 高碘烷(3.90g，9.19mmol，1.3当量)添加至12(2.89g，7.08mmol) 于50ml二氯甲烷中的溶液中且将悬浮液搅拌2小时。将反应混合物用乙 醚稀释且与Na2S2O3及NaHCO3水溶液一起搅拌直至两层变澄清为止。使 有机层分离，且用乙醚萃取水层。将合并的有机层用Na2S2O3、NaHCO3 水溶液混合物及盐水洗涤。将溶液经MgSO4干燥，过滤，浓缩且蒸发以 得到约3.0g 13。

MS：406.2(MH+)

14的制备

在室温下将14(约7.08mmol)于50ml甲醇中的溶液与K2CO3(3.9g， 28.2mmol，4当量)一起搅拌3小时且用水稀释。将其用乙醚萃取且使用 0％至10％乙酸乙酯-己烷对粗产物进行层析以得到1.74g 14。

MS：334.1(MH+)

制备15

在0℃下将LHMDS于THF中的1M溶液(5.0ml，5.0mmol，1.2当量) 添加至14(1.39g，4.15mmol)于30ml THF中的溶液中且搅拌30min， 接着添加溴乙酸叔丁酯(0.92ml，6.23mmol，1.5当量)且将混合物搅 拌过夜，使温至室温。将溶液用NH4Cl水溶液稀释，用乙酸乙酯萃取且 由层析法纯化粗产物以得到920mg 15。

MS：448.1(MH+)

16的制备

在-78℃下将锂硼化物(L-selectride)于THF中的1M溶液(0.63ml， 0.63mmol，2当量)添加至15(140mg，0.31mmol)于2.5ml THF中的 溶液中且将混合物在-78℃下搅拌1小时。添加4ml三氟乙酸而中止反应， 且在室温下搅拌1小时，浓缩且悬浮于NaHCO3水溶液中。将其用乙酸乙 酯萃取且由层析法使用0％至20％乙酸乙酯-己烷纯化以得到70mg 16。

MS：376.1(MH+)

17的制备

将16(20mg，0.053mmol)、间氟苯基硼酸(boronic acid)(11.2mg， 0.08mmol，1.5当量)、K2CO3(30mg，0.217mmol，4当量)及Pd(PPh3) 4(3.1mg，2.7μmol，5mol)于1ml甲苯、0.5ml乙醇及0.3ml水的混合 物中的溶液经氩气鼓泡通过且于密封管中在100℃下加热1小时。水性处 理后，由制备型TLC使用20％乙酸乙酯-己烷纯化粗产物以得到14mg 17。

MS：392.1(MH+)

化合物18、19及20使用类似程序来制备。

18的MS：442.1(MH+)

19的MS：399.2(MH+)

20的MS：399.2(MH+)

内酰胺类似物如流程3所述来制备。酮15的还原胺化得到轴向 (axial)及赤道(equatorial)胺21及22的混合物。用三氟乙酸使21叔丁 酯的裂解且用HATU处理所得氨基酸以得到顺式内酰胺23。Suzuki偶合得 到24，其于N-甲基化后得到25。类似地，将赤道胺22转化成反式内酰胺 27。

流程3

21及22的制备

将乙酸铵(515mg，6.68mmol，10当量)、3分子筛(约600mg) 及氰基硼氢化钠(42mg，0.668mmol，1当量)添加至15(300mg，0.67 mmol)于5ml甲醇及1ml二氯甲烷中的溶液中且将混合物在室温下搅拌 2天。将其倾入碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取且由层析法使用于 二氯甲烷中的3％7N氨-甲醇溶液纯化以得到150mg 21及58mg 22。

21的MS：449.1(MH+)

22的MS：449.1(MH+)

23的制备

将21(150mg)于1ml二氯甲烷及3ml三氟乙酸中的溶液在室温下 搅拌2小时，浓缩且与正庚烷一起蒸发以得到酸。在室温下将三乙胺(0.19 ml，1.36mmol，4当量)、接着HATU(255mg，0.67mmol，2当量)添 加至此产物于4ml DMF中的溶液中且将混合物在室温下搅拌过夜。将其 用乙酸乙酯稀释且用碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤 且浓缩。将粗产物用0％至80％乙酸乙酯-己烷进行层析以得到55mg 23。

MS：375.1(MH+)

24的制备

将密封管中的23(55mg，0.147mmol)、3-氟苯基硼酸(31mg，0.22 mmol，1.5当量)、Pd(PPh3)4(8.5mg，7.4μmol，5mol％)及K2CO3 (81mg，0.586mmol，4当量)于甲苯(1ml)、乙醇(0.5ml)及水(0.3 ml)的混合物中的溶液经氩气鼓泡通过且在100℃下加热5小时。将其倾 入水中，用乙酸乙酯萃取且由制备型TLC使用3％甲醇-二氯甲烷混合物 纯化以得到44mg的24。

MS：391.2(MH+)

制备25

在室温下将氢化钠(12mg的于矿物油中的60％分散液，0.30mmol， 5当量)、接着碘代甲烷(0.026ml，0.28mmol，5当量)添加至24(22mg， 0.056mmol)于1ml DMF中的溶液中且将混合物在室温下搅拌2.5小时。 将其倾入氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯萃取且由制备型TLC使用80％乙 酸乙酯-己烷纯化以得到9mg 25。

MS：405.1(MH+)

26的制备

将22(55mg)于1ml二氯甲烷及3ml三氟乙酸中的溶液在室温下搅 拌1小时，浓缩且与正庚烷一起蒸发以得到酸。将三乙胺(0.070ml，0.50 mmol，4当量)、接着HATU(93mg，0.25mmol，2当量)添加至此酸于 2ml DMF中的溶液中且在室温下搅拌隔夜。将其用乙酸乙酯稀释，用碳 酸氢钠水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥且由层析法使用3％甲醇-二氯 甲烷纯化以得到35mg 26。

MS：375.1(MH+)

27的制备

将密封管中的22(35mg，0.093mmol)、3-氟苯基硼酸(20mg，0.14 mmol，1.5当量)、Pd(PPh3)4(6mg，5.2μmol，6mol％)及K2CO3(52 mg，0.38mmol，4当量)于甲苯(1ml)、乙醇(0.5ml)及水(0.3ml) 的混合物中的溶液经氩气鼓泡通过且在100℃下加热5小时。将其倾入水 中，用乙酸乙酯萃取且由制备型TLC使用3％甲醇-二氯甲烷混合物纯化 以得到26mg 27。

MS：391.2(MH+)

酞嗪酮类型类似物的制备展示于流程4中。将内酯28还原成二醇且 使一级醇经保护以得到29。Dess-Martin氧化、接着用1N HCl处理得到醇 31，将其氧化成羧酸32。使此酸与肼偶合得到33，其于N-甲基化后得到 34。

流程4

30的制备

在室温下将于THF中的1M LiAlH4溶液(4.4ml，4.4mmol，1当量) 添加至28(2.0g，4.39mmol)(参见美国专利6063847，对于28的制备) 于20ml THF中的溶液中且在室温下搅拌1小时。将其通过添加少量乙酸 乙酯而中止反应，在真空下浓缩且倾入水中。将浆料用稀硫酸酸化且用 二氯甲烷萃取3次。将合并的有机层用水、碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤， 经MgSO4干燥，过滤且浓缩以得到二醇。

在-40℃下将三氟甲烷磺酸三异丙基硅烷酯(1.3ml，4.84mmol，1.1 当量)添加至此二醇及三乙胺(0.92ml，6.60mmol，1.5当量)于30ml 二氯甲烷中的溶液中且搅拌1小时，同时使溶液温至0℃。将混合物用乙 醚稀释，用碳酸氢钠水溶液及盐水洗涤。将其经MgSO4干燥，过滤且浓 缩以得到粗品29。

将NaHCO3(1.85g，22.02mmol)及Dess-Martin高碘烷(2.1g，5.29 mmol)添加至上述粗品29于30ml二氯甲烷中的溶液中且搅拌1小时。将 其用乙醚稀释，添加Na2S2O3及NaHCO3的水溶液，剧烈搅拌且使有机层 分离。用乙醚萃取水相，且将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥， 过滤，浓缩且用0％至10％乙酸乙酯-己烷进行层析以得到1.83g 30。

31的制备

在室温下将0.85ml浓HCl添加至30(1.05g，1.71mmol)于10ml THF 中的溶液中且将混合物搅拌2小时。将其倾入NaHCO3水溶液中且用乙酸 乙酯萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓 缩且用0％至50％乙酸乙酯-己烷进行层析以得到0.70g的31。

MS：458.1(MH+)

32的制备

在室温下将NaHCO3(195mg，2.32mmol，2当量)及Dess-Martin 高碘烷(550mg，1.39mmol，1.2当量)添加至31(530mg，1.16mmol) 于10ml二氯甲烷中的溶液中且将混合物在室温下搅拌2小时。将其用乙 醚稀释且与Na2S2O3及NaHCO3的水溶液一起剧烈搅拌30min。使有机层 分离且将水层用乙醚萃取2次。将合并的有机层用Na2S2O3及NaHCO3的 水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且浓缩以得到粗的醛。

将过氧化氢水溶液(0.13ml的30％溶液，1.26mmol，1.1当量)及 NaH2PO4(35mg，0.29mmol，0.25当量)添加至此醛于3ml THF及7ml 乙腈中的溶液中。将NaClO2(185mg的80％固体，1.64mmol，1.4当量) 于3ml水中的溶液添加至此混合物中。在室温下搅拌1小时后，将溶液用 水稀释且用二氯甲烷萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4 干燥，过滤且浓缩以得到490mg 32。

MS：472.1(MH+)

33的制备

将HOBt(0.17g，1.26mmol，1.2当量)、接着EDCI(0.24g，1.25mmol， 1.2当量)及5ml二氯甲烷添加至32(0.49g，1.04mmol)于10ml乙腈及 5ml DMF中的悬浮液中。将溶液在室温下搅拌1小时，接着冷却至0℃且 转移至含有保持于0℃下的肼(65μl，2.07mmol，2当量)及环己烯(100 μl)存于5ml乙腈中的溶液的另一烧瓶中。将混合物搅拌30min，用乙 酸乙酯稀释，用NaHCO3水溶液、盐水洗涤3次，经MgSO4干燥，过滤， 浓缩且用50％乙酸乙酯-己烷进行层析以得到280mg 33。

MS：468.1(MH+)

34的制备

在室温下将NaH(23mg存于矿物油中的60％分散液，0.87mmol， 1.5当量)及碘代甲烷(36μl，0.58mmol，1.5当量)添加至33(180mg， 0.39mmol)于3ml DMF中的溶液中。将混合物搅拌3小时，添加氯化铵 水溶液且用乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机层用水、盐水洗涤2次，经 MgSO4干燥，过滤，浓缩且用0％至25％乙酸乙酯-己烷进行层析以得到 170mg 34。

MS：482.1(MH+)

异内酯类似物的另一替代性制法呈现如下。使醇7经保护成苄基醚 且α-氧化以得到42。Dibal还原、接着Dess-Martin反应得到甲酸酯44， 将其转化成烯酮45。氰化物的共轭加成、接着还原及水解得到内酯47， 将其转化成目标51、52及54。

41的制备

在0℃于N2下将氢化钠(840mg，21mmol)添加至7(2.0g，8.4mmol) 及Bu4NI(930mg，2.6mmol)于DMF中的搅拌溶液中。将混合物搅拌 30分钟且使达室温。将苄基溴(2.5mL，21mmol)逐滴添加至上述混 合物中且在室温下再搅拌2.5小时。将混合物倾入饱和NH4Cl溶液中且用 乙醚萃取。将合并的有机萃取物用H2O、盐水洗涤且经MgSO4干燥。经 由硅胶管柱层析法(乙酸乙酯/己烷，10∶90)纯化粗残余物以得到化合 物41(2.6g，7.9mmol，96％)。

42的制备

在0℃于氩气下将LiHMDS(0.92mL，于THF中的1M溶液)添加至 41(100mg，0.31mmol)于THF(2ml)中的溶液中。使混合物达室温 且搅拌30分钟，接着在氧气气氛下搅拌超过2小时。将Na2SO3(6mL) 添加至混合物中且搅拌30分钟。用乙酸乙酯及CH2Cl2萃取有机层。将合 并的萃取物经MgSO4干燥。将粗产物通过快速层析法(乙酸乙酯/己烷， 5∶95)纯化且蒸发以得到42(58mg，0.17mmol，55％)。

43的制备

在-78℃于N2下将DIBAL逐滴添加至42(647mg，1.9mmol)于CH2Cl2 (6mL)中的溶液中且使混合物缓慢达室温。搅拌3小时后，将混合物 用乙酸乙酯稀释且倾入饱和酒石酸钠钾中。用乙酸乙酯、接着CH2Cl2萃 取有机层。将合并的萃取物经MgSO4干燥以得到粗物质43(651mg)。

44的制备

在0℃于N2下将Dess-Martin高碘烷(4.5g，10.5mmol)添加至43(2.42 g，7.0mmol)于CH2Cl2(70mL)中的溶液中。将混合物搅拌1小时且 使之缓慢达室温。搅拌2小时后，添加饱和Na2S2O3(100mL)且搅拌10 分钟，接着添加饱和NaHCO3(100mL)。搅拌约45分钟，用乙酸乙酯、 接着CH2Cl2萃取有机层。将合并的萃取物经MgSO4干燥且蒸发以得到化 合物44(2.21g，6.4mmol，92％)。

45的制备

将DBU(1.2ml，2.61mmol)逐滴添加至44于甲苯(30mL)中的 溶液中且在110℃下加热2小时。将混合物用CH2Cl2稀释且用NaHCO3、 接着H2O洗涤。将有机层经MgSO4干燥且蒸发。通过快速层析法(乙酸 乙酯/己烷，5∶95)纯化粗残余物以得到45(1.5g，5.0mmol，78％)。

46的制备

在室温下将氰化二乙基铝(0.31mL，0.31mmol)添加至45(20mg， 0.7mmol)于甲苯(2.0mL)中的搅拌溶液中且搅拌3小时。将混合物用 乙酸乙酯稀释且倾入饱和酒石酸钠钾的溶液中。用乙酸乙酯、接着 CH2Cl2萃取有机层。将合并的萃取物经MgSO4干燥且浓缩。通过快速层 析法(乙酸乙酯/己烷，5∶95)纯化所得残余物以得到化合物46(17mg， 0.05mmol，79％)。

47的制备

将硼氢化钠(755mg，19.97mmol)添加至46(775mg，2.3mmol) 于MeOH(60mL)中的溶液中且在40℃下加热1.5小时。使溶液达室温 后，添加5N HCl(75mL)且将混合物在90℃下再加热4小时。将溶液 浓缩以移除甲醇，接着用CH2Cl2萃取。将合并的萃取物用饱和酒石酸钠 钾的溶液洗涤且经MgSO4干燥。通过快速管柱(乙酸乙酯/己烷，5∶95) 纯化残余物以得到47(775mg，2.4mmol，79％)。

48的制备

将Pd/C(16mg)添加至47(30mg，0.09mmol)于乙酸乙酯/MeOH (2.0mL/1.0mL，2∶1)中的溶液中且在氢气气氛下搅拌6小时。将混合 物经硅藻土衬垫过滤且浓缩以得到粗品48(29mg)。

49的制备

在0℃下将Dess-Martin高碘烷(78mg，0.18mmol)添加至48(29mg， 0.12mmol)于CH2Cl2(2.0mL)中的溶液中且搅拌3小时。将饱和Na2S2O3 的溶液添加至混合物中且搅拌10分钟，接着添加NaHCO3。搅拌40分钟 后，将有机层用乙酸乙酯、接着CH2Cl2萃取，且经MgSO4干燥以得到化 合物14(20mg，0.09mmol，75％)。

50的制备

在0℃下将n-BuLi(0.08mL，0.20mmol)添加至9(63mg，0.20mmol) 于THF(3.0mL)中的溶液中且搅拌15分钟。将49(16mg，0.07mmol) 于THF(3.0mL)中的溶液、接着Ti(OiPr)4(0.06mL，0.20mmol) 添加至其中。搅拌4小时后，将混合物用乙酸乙酯稀释且倾入H2O中。将 其用乙酸乙酯、接着用CH2Cl2萃取，经MgSO4干燥，且由制备型TLC使 用4∶6乙酸乙酯-己烷纯化粗产物以得到50(29mg，0.07mmol，约100％)。

54的制备

在0℃下将n-BuLi(0.20mL，0.48mmol)添加至53(162mg，0.50 mmol)于THF(3.0mL)中的溶液中且搅拌15分钟。将49(20mg，0.08 mmol)于THF(3.0mL)中的溶液、接着Ti(OiPr)4(0.15mL，0.50mmol) 添加至其中且搅拌4小时。将反应混合物用H2O洗涤，经MgSO4干燥且蒸 发。经由制备型TLC(乙酸乙酯，100％)纯化残余物以得到化合物54 (23mg，0.06mmol，71％)。

MS：m/z 406[MH+]

51的制备

将存于甲苯∶H2O∶EtOH(2.0mL∶1.0mL∶0.5mL)中的50的混合物(17 mg，0.04mmol)、2，5-二氟苯基硼酸(30mg，0.21mmol)及四(三苯 膦)钯(10mg)在回流下于N2气氛下加热且搅拌24小时。水性处理后， 经由制备型TLC纯化粗物质以得到13mg 51。

MS：m/z 406[MH+]。

使用类似程序制备化合物52。

MS：m/z 455[MH+]

化合物            结构

遵循上述程序，制成以下化合物：

此外，遵循上述程序，可制成以下组的化合物：

本发明的其它实施方案涵盖给予式I化合物连同至少一种其它药剂。 所涵盖的其它药剂为在原子组成或排列方面不同于式I化合物的一种。可 与本发明的新颖化合物组合使用的其它药剂包括具有抗血栓形成、抗血 小板凝集、抗动脉粥样硬化、抗再狭窄及/或抗凝血活性的药物。这些药 物适用于治疗血栓症相关疾病，包括血栓症，动脉粥样硬化，再狭窄， 高血压，心绞痛，血管生成相关病症，心律不齐，心血管或循环疾病或 病状，心脏衰竭，心肌梗塞，丝球体肾炎，血栓性中风，血栓栓塞性中 风，周边血管疾病，大脑缺血，类风湿性关节炎，风湿病，星形胶质细 胞增生，肝、肾、肺或肠道的纤维化病症，全身性红斑性狼疮症，多发 性硬化症，骨质疏松症，丝球体肾炎，肾病，急性肾衰竭，慢性肾衰竭， 肾血管内稳定，肾缺血，膀胱发炎，糖尿病，糖尿病性神经病变，脑中 风，大脑缺血，肾炎，癌症，黑素瘤，肾细胞癌，神经病变及/或恶性肿 瘤，神经退化性及/或神经中毒性疾病、病状或损伤，炎症，哮喘，青光 眼，黄斑变性，牛皮癣，肝、肾或肺的内皮细胞功能不良病症，肺及胃 肠道的发炎性病症，呼吸道疾病或病状，放射性纤维化，内皮细胞功能 不良，牙周疾病或创伤，或脊髓损伤，或其症状或结果，以及凝血酶及 其受体起病理作用的其它病症。

合适的心血管药剂选自由以下各药剂组成的组：前列凝素A2生物合 成抑制剂；前列凝素拮抗剂；二磷酸腺苷抑制剂；环加氧酶抑制剂；血 管收缩素拮抗剂；内皮素拮抗剂；磷酸二酯酶抑制剂；血管收缩素转化 酶抑制剂；中性肽链内切酶抑制剂；抗凝血剂；利尿剂；血小板凝集抑 制剂；及GP IIb/IIIa拮抗剂。

用于与本发明的新颖化合物组合使用的优选药物类型为前列凝素 A2生物合成抑制剂、GP IIb/IIIa拮抗剂、前列凝素拮抗剂、二磷酸腺苷 抑制剂、环加氧酶抑制剂、血管收缩素拮抗剂、内皮素拮抗剂、血管收 缩素转化酶抑制剂、中性肽链内切酶抑制剂、抗凝血剂、利尿剂及血小 板凝集抑制剂。

具体地说，合适的心血管药剂选自由以下各药剂组成的组：阿司匹 灵(aspirin)、塞曲司特(seratrodast)、吡考他胺(picotamide)及雷马 曲班(ramatroban)、氯吡格雷(clopidogrel)、美侬西康(meloxicam)、 罗非昔布(rofecoxib)、塞内昔布(celecoxib)、缬沙坦(valsartan)、替 米沙坦(telmisartan)、坎地沙坦(candesartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、 氯沙坦(losartan)、依普罗沙坦(eprosartan)、替唑生坦(tezosentan)、 米力农(milrinone)、依诺昔酮(enoximone)、卡托普利(captopril)、 依那普利(enalapril)、依那普利拉(enalaprilat)、螺普利(spirapril)、 喹那普利(quinapril)、培哚普利(perindopril)、雷米普利(ramipril)、 福辛普利(fosinopril)、组多普利(trandolapril)、赖诺普利(lisinopril)、 莫西普利(moexipril)、贝那普利(benazapril)、坎沙曲(candoxatril)、 依卡曲尔(ecadotril)、希美加组(ximelagatran)、芳达肝素(fondaparin)、 依诺肝素(enoxaparin)、氯噻嗪(chlorothiazide)、氢氯噻嗪 (hydrochlorothiazide)、利尿酸、呋喃苯胺酸(furosemide)、胺氯吡脒 (amiloride)、阿昔单抗(abciximab)、埃替非巴肽(eptifibatide)、普拉 格雷(prasugrel)及法安明(fragmin)。

用于组合使用的尤其优选者为阿司匹灵、坎格瑞洛(cangrelor)、氯 吡格雷硫酸氢盐(clopidogrel bisulfate)、普拉格雷及法安明。

当本发明包含式I化合物与另一药剂的组合时，可同时或相继共同给 予两种活性组份，或可给予在医药学上可接受的载体中包含式I化合物及 另一药剂的单一医药组合物。可以诸如胶囊、片剂、散剂、扁胶剂、悬 浮液、溶液、栓剂、经鼻喷雾等的任何常规剂型个别或共同给予组合的 组份。心血管药剂的剂量可由公开材料来确定，且可在每次剂量1至1000 mg的范围内。

在本说明书中，术语″至少一种式I化合物″意谓一至三种不同式I化 合物可在医药组合物或治疗方法中使用。优选使用一种式I化合物。类似 地，术语″一或多种其它心血管药剂″意谓一至三种其它药物可与式I化合 物组合给予；优选地，一种其它化合物与式I化合物组合给予。其它药剂 可相对于式I化合物相继或同时给予。

为了从本发明所述的化合物制备医药组合物，惰性、医药学上可接 受的载体可为固体或液体。固体形式制剂包括散剂、片剂、可分散颗粒、 胶囊、扁胶剂及栓剂。散剂及片剂可包含约5％至约95％活性成份。合适 的固体载体在本领域中为已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或 乳糖。片剂、散剂、扁胶剂及胶囊可以适合于口服的固体剂型使用。医 药学上可接受的载体的实例及制造各种组合物的方法可见于A.Gennaro (编)，The Science and Practice of Pharmacy，第20版，(2000)，Lippincott Williams&Wilkins，Baltimore，MD。

液体形式制剂包括溶液、悬浮液及乳液。其实例可提及水或水-丙二 醇溶液，其用于非经肠注射或添加用于口服溶液、悬浮液及乳液的甜味 剂及遮光剂。液体形式制剂也可包括用于鼻内给予的溶液。

适合于吸入的气溶胶制剂可包括溶液及呈粉末形式的固体，其可与 诸如惰性压缩气体(例如氮气)的医药学上可接受的载体组合。

也包括意欲在使用前即刻转化成用于口服或非经肠给予的液体形 式制剂的固体形式制剂。这些液体形式包括溶液、悬浮液及乳液。

本发明的化合物也可经皮传递。经皮组合物可采用乳膏、洗液、气 溶胶及/或乳液的形式且可依本领域中为此目的而常规应用包含于基质 型或储药型的经皮贴片中。

优选地，该化合物经口给予。

优选地，医药制剂为单位剂型。以此形式，将制剂再分成含有适当 量(例如为达到所要目的的有效量)的活性组份的合适大小的单位剂量。

根据特定应用，单位剂量制剂中的活性化合物的量可从约1mg至约 150mg变化或调节，优选从约1mg至约75mg，更优选从约1mg至约50 mg。

所使用的实际剂量可视患者需求及正治疗病状的严重度而变。对于 特定情形确定适当给药疗程在本领域技术内。为方便起见，必要时可将 总日剂量加以分割且在每日当中分批给予。

根据主治医师考虑到诸如患者的年龄、病状及体型以及正治疗症状 的严重度等因素所作出的判断，将调节本发明的化合物及/或其医药学上 可接受的盐的给药量及给药频率。用于经口给予的典型推荐每日给药剂 量方案可在约1毫克/日至约300毫克/日、优选1毫克/日至75毫克/日的范 围内，分二至四次给药。

当独立的式I化合物及其它药剂将以独立组合物形式给予时，其可提 供于一套组中，该套组在一单一封装中包含一个在医药学上可接受的载 体中包含式I化合物的容器及在医药学上可接受的载体中包含另一心血 管药剂的另一容器，其中式I化合物及另一药剂以使该组合为治疗学上有 效的量存在。当(例如)组分须以不同时间间隔给予时或当其处于不同 剂型中时，套组对于给予组合而言为有利的。

式I化合物的活性可由以下程序来测定。

凝血酶受体拮抗剂的活体外测试程序：

制备[3H]haTRAP

使A(pF-F)R(ChA)(hR)(I2-Y)-NH2(1.03mg)及10％ Pd/C (5.07mg)悬浮于DMF(250μl)及二异丙基乙基胺(10μl)中。将容 器连接至氚管线，在液氮中冷冻且抽空。接着将氚气(342mCi)添加 至烧瓶中，将其在室温下搅拌2小时。反应完成后，移除过量氚气且将 已反应的肽溶液用DMF(0.5ml)稀释且过滤以移除催化剂。将所收集 到的粗肽DMF溶液用水稀释且冷冻干燥以移除不稳定氚气。将固体肽再 溶解于水中且重复冷冻干燥过程。将氚化肽([3H]haTRAP)溶解于0.5ml 的0.1％ TFA水溶液中并用HPLC使用以下条件纯化：管柱，VydacTM C18， 25cm×9.4mm内径；移动相，(A)于水中的0.1％ TFA，(B)于CH3CN 中的0.1％ TFA；梯度，(A/B)，经30min从100/0至40/60；流动速率，5 ml/min；检测，于215nm下UV。如用HPLC分析，[3H]haTRAP的放射化 学纯度为99％。获得一批比活性为18.4Ci/mmol的14.9mCi。

制备血小板膜

使用Natarajan等人(Natarajan等人，Int.J.Peptide Protein Res. 45：145-151(1995))的方法的变型自获自North Jersey Blood Center(East Orange，NJ)的20个单位的血小板浓缩物在48小时收集时间内制备血小 板膜。所有步骤在4℃下在经核准的生物危害安全条件下进行。在4℃下 使血小板以100×g离心20分钟以移除红血球。将上清液倾析且以3000× g离心15分钟以使血小板粒化。将血小板再悬浮液10mM Tris-HCl(pH 7.5)、150mM NaCl、5mM EDTA中达200ml的总体积且以4400×g离心 10分钟。将此步骤再重复两次。将血小板再悬浮于5mM Tris-HCl(pH 7.5)、5mM EDTA中达约30ml的最终体积且在DounceTM均化器中以20 次击打而均化。将膜以41,000×g粒化，再悬浮于40-50ml 20mM Tris-HCl (pH 7.5)、1mM EDTA、0.1mM二硫苏糖醇中，且将10ml等分试样在 液态N2中冷冻且储存于-80℃下。为完成膜制备，将等分试样解冻，汇集 且以Dounce均化器5次击打而均化。将膜粒化且在10mM三乙醇胺-HCl (pH 7.4)、5mM EDTA中洗涤3次，且再悬浮于20-25ml 50mM Tris-HCl (pH 7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA及1％ DMSO中。将膜的等分试 样在液态N2中冷冻且储存于-80℃下。膜稳定至少3个月。20个单位的血 小板浓缩物通常得到250mg膜蛋白质。由Lowry试验测定(Lowry等人， J.Biol.Chem.，193：265-275(1951))来测定蛋白质浓度。

高产量凝血酶受体放射性配位子结合试验

凝血酶受体拮抗剂使用Ahn等人(Ahn等人，Mol.Pharmacol.， 51：350-356(1997))的凝血酶受体放射性配位子结合试验的变型来筛检。 该试验在96孔Nunc培养盘(目录号269620)中以200μl的最终试验体积 来进行。将血小板膜及[3H]haTRAP在结合缓冲液(50mM Tris-HCl(pH 7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA、0.1％ BSA)中分别稀释至0.4mg/ml 及22.2nM。将测试化合物的储备溶液(于100％ DMSO中的10mM)在 100％ DMSO中进一步稀释。除非另有指示，否则将10μl经稀释的化合 物溶液及90μl放射性配位子(于5％ DMSO中最终浓度为10nM)添加至 每孔中，且通过添加100μl膜(40μg蛋白质/孔)使反应开始。结合并不 受5％ DMSO显著抑制。测试三种浓度(0.1、1及10μM)化合物。将培 养盘覆盖且在室温下在Lab-LineTM滴定盘震荡器上缓缓涡旋混合1小时。 将Packard UniFilterTM GF/C滤板在0.1％聚亚乙基亚胺中浸泡至少1小时。 将所培养的膜使用Packard FilterMateTM通用收集器来收集且用300μl冰 冷50mM Tris-HCl(pH 7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA迅速洗涤四次。 将MicroScintTM 20闪烁混合液(25μl)添加至每孔中，且在Packard TopCountTM微定量盘式闪烁计数器中对培养盘进行计数。将特异性结合 定义为总结合减去在过量(50μM)未标记的haTRAP存在下所观测到的 非特异性结合。[3H]haTRAP的化合物与凝血酶受体结合的抑制％自以下 关式来计算：

材料

A(pF-F)R(ChA)(hR)Y-NH2及A(pF-F)R(ChA)(hR)(I2-Y) -NH2，通常由AnaSpec Inc.(San Jose，CA)来合成。这些肽的纯度大于 95％。氚气(97％)购自EG&G Mound，Miamisburg，Ohio。随后将该 气体负载及储存于IN/US Systems Inc.Trisorber上。MicroScintTM 20闪烁 混合液获自Packard Instrument Co。

大麻碱CB2受体结合试验

与人类大麻碱CB2受体的结合使用Showalter等人(1996，J. Pharmacol Exp Ther.278(3)，989-99)的程序(具有少许变型)来进行。 所有试验都以100μl的最终体积来进行。将测试化合物再悬浮于DMSO 中达10mM，接着在50mM Tris(pH 7.1)、3mM MgCl2、1mM EDTA、 50％ DMSO中连续稀释。接着将每一经稀释样本的等分试样(10μl)转 移至96孔微定量培养盘的个别孔中。将来自人类CB2转染的CHO/Ki细胞 (Receptor Biology，Inc)的膜再悬浮于结合缓冲液(50mM Tris(pH 7.1)、 3mM MgCl2、1mM EDTA、0.1％无脂肪酸牛血清白蛋白)中，接着添 加至结合反应物(每次试验于50μl中约15μg)中。以添加在结合缓冲 液中稀释的[3H]CP-55，940(比活性＝180Ci/mmol；New England Nuclear， Boston，Mass.)引发反应。结合反应物中的最终配位子浓度为0.48nM。 在室温下培养2小时后，通过经预处理(0.5％聚亚乙基亚胺；Sigma P-3143)的GF-C滤板(Unifilter-96，Packard)过滤使用TomTecTM Mach 3U 96孔细胞收集器(Hamden，Ct)将膜收集。将培养盘在100μl结合 缓冲液中洗涤10次，使膜经空气干燥。在添加Packard OmniscintTM 20闪 烁液后使用TopCountTM NXT微定量盘式闪烁及发光计数器(Packard， Meriden，Ct)来定量膜的放射性。使用PrismTM 20b.(GraphPad Software， San Diego，Ca)进行非线性回归分析。

使用上述测试程序，发现代表性式I化合物具有1至1000nM、优选 1-100nM、更优选1-20nM的凝血酶受体IC50值(也即观测到抑制50％凝 血酶受体的浓度)。CB2 Ki值在1至1000nM、优选1-200nM、更优选1-100 nM的范围内。