在本说明书中，当引用或讨论文件、行为或物品时，该引用或讨论不 是承认：所述文件、行为或物品的知识或其任何组合在优选权日是公众可 获知的、公知的、公知常识的部分；或者已知与解决本说明书所述任何问 题的努力相关联。
药物递送中的主要目的是在希望的作用部位获得适当的生物效应。制 剂的选择对于药物效力可以是关键的，因为如果药物不具有适当的生理化 学性质以使其在作用靶位从制剂释放，则其生物活性是欠佳的。
肠内递送包括通过胃肠(GI)道施用药物，药物在其中被吸收，并通 过血流分布至作用靶位。例如，口服递送的药物经由肠吸收。
GI道的化学环境对于外部药物递送也是重要的。药物形式必须在GI 道的各个部分的不同pH下是稳定的。如果药物形成非吸收性的复合体或 者化学降解或酶降解，将减少吸收。药物还必须是于GI液体中的溶液， 以被吸收。药物的沉淀包括药物形成固体颗粒并因此脱离溶液。吸附至官 腔的固体颗粒包括吸收药物的固体；即，从溶液中除去所述药物。药物沉 淀和吸附都降低了药物的吸收。在许多情况下，降解和络合可通过化学或 制剂方法防止或至少减少，以便其不存在对药物吸收的限制。
而且，如果药物通过肠壁或胃壁吸收，则其必须经过肝脏。肝脏的作 用是从机体除去外源化合物。因此，显著比例的药物(例如，40-50％)在到 达血流之前可能被代谢并排泄。通过使药物经由口内层(口腔(bucchal) /舌下)或直肠内层(栓剂)吸收，可能减少肝脏对肠内给药的影响，但这些 途径并非总是适当的。
提高肠内给药的药物的生物利用度的努力包括形成前药(例如，硫酸 吗啡)或使用增强吸收的赋形剂。
局部给药包括将药物给药至体膜，药物在体膜中被吸收并分布。例 如，经皮给药的药物经由皮肤吸收。
皮肤是机体最大的器官，其作用以保护内部器官免受外部化学、物理 和病理危害。正常皮肤分为三层：表皮、真皮和皮下组织。表皮的角质化 的外层(角质层)具有强韧、弹性、高电阻和干燥的性质，其阻止微生物 的穿透和增殖。角质层也是经皮药物吸收的主要障碍。存在保护皮肤的皮 脂层，其被认为是所有基于水的药物制剂的障碍。
当穿过皮肤时，扩散的药物分子具有三条进入深层皮肤层的潜在途 径：细胞间途径、跨细胞途径和经附件途径(transappendageal route)。 虽然电介质和大分子经由附件的旁路扩散是显著的，但相对小的可用于转 运的面积(皮肤表面的0.1％)意味着该途径对稳定状态的药物流具有可忽 略的贡献。普遍认为，用于透过多数分子的主要途径是细胞间途径，因此， 许多增强技术致力于破坏角质层的强“砖块和灰浆”构造。目前关于转运 途径的理论指向两种可能的机制：(i)被动跨细胞的，和(ii)细胞内表皮 转运。
药物以多种方式局部应用于皮肤，所述方式包括：软膏剂、贴剂、溶 液剂、皮下贮存剂、泥罨剂、膏药和经皮给药装置。
对经皮药物递送的关注可能在不断增加，但一些根本的限制制约了该 技术的更广泛应用。应用透皮给药的主要限制是药物经由皮肤的转运速 率。
不是每种药物都能以足够高的速率经皮给药，以获得对全身药物治疗 有治疗益处的血药浓度。例如，具有相似分子重量和尺寸的药物可以不同 速率跨皮肤吸收。例如，芬太尼以2mg/cm2/hr透过皮肤，而麻黄素以200 mg/cm2/hr。因此，尽管具有给药途径的优点，但芬太尼所需要的大尺寸经 皮给药系统既不实用也不经济。
已经开发了皮肤增强剂和各种制剂技术来提高药物的经皮吸收。皮肤 增强剂可包括如癸酸、油酸、氮酮、癸基甲基亚砜和羟基肉桂酸盐等化合 物，其通常通过溶解脂类基质而作用以改变特别是角质层的结构，以提高 药物透过性。例如，当角质层被去脂化时，黄体酮的表皮吸收增加143％。 当角质层被完全去除时，增强作用提高至843％。由于这种攻击性改变，普 遍报道的伴随这种系统重复使用的问题是显然的，包括接触性皮炎、皮肤 红化、需要移动贴剂的搔痒和碳化，或者周体应用药物以防止局部刺激。 据称，红化在除去贴片数小时内小时。但已经产生了对使用该类型经皮给 药系统的长期风险和安全的关注，主要因为提高的药物透过性是以损害皮 肤最重要的保护层为代价的。
存在对进一步提高生物活性化合物生物利用度的制剂的需求。

发明概述
已经发现，如果生物活性化合物以载体给药，则其效力、转运和递送 可提高，所述载体包含：一种或多种C1-C4醇、多元醇及其聚合物；水；和 一种或多种二-和/或单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物或其络合物。
根据本发明的第一个方面，提供了用于施用生物活性化合物的载体， 该载体包含：一种或多种C1-C4醇、多元醇及其聚合物；水；和一种或多种 二-和/或单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物或其络合物。
本发明还提供了一种或多种C1-C4醇、多元醇及其聚合物、水以及一种 或多种二-和/或单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物或其络合物在生产用于 施用生物活性化合物的载体中的用途。
还提供了制备上述载体的方法，其包括下述步骤：
(a)将一种或多种二-和/或单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物或其络 合物与一种或多种C1-4醇、多元醇或其聚合物结合；并
(b)将水添加至步骤(a)的组合中。
应理解，所述载体可从醇、水和电子转移剂磷酸酯衍生物或其络合物 制备，或者是醇、水和电子转移剂磷酸酯衍生物或其络合物的反应产物。 在这些情况下，醇、水和电子转移剂磷酸酯衍生物或其络合物可相互作用 并以改性形式存在。
优选地，C1-4醇是乙醇。
所述载体优选含有一种或多种二-(电子转移剂)磷酸酯衍生物或者 一种或多种二-(电子转移剂)磷酸酯衍生物与一种或多种单-(电子转移 剂)磷酸酯衍生物的组合。
应理解，术语“二-和/或单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物”指电子 转移剂的磷酸酯，其中磷酸酯可以是被电子转移剂二-或单-取代的正磷酸 酯或焦磷酸酯。
在一个实施方案中，二-(电子转移剂)磷酸酯衍生物选自二-生育酚 磷酸酯衍生物、二-生育酚二-磷酸酯衍生物、二-生育三烯酸磷酸酯衍生 物及其混合物。优选地，二-(电子转移剂)磷酸酯衍生物是二-生育酚磷 酸酯。
单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物优选选自单-生育酚磷酸酯衍生物、 单-生育酚二-磷酸酯衍生物、单-生育三烯酸磷酸酯(tocotrienyl phosphate)及其混合物。
在一个优选实施方案中，使用二-生育酚磷酸酯、二-生育酚二-磷酸 酯和二-生育三烯酸磷酸酯的至少一种制备制剂。
在另一优选实施方案中，使用如下组合制备制剂：单-生育酚磷酸酯、 单-生育酚二-磷酸酯和单-生育三烯酸磷酸酯的至少一种与二-生育酚磷 酸酯、二-生育酚二磷酸酯和二-生育三烯酸磷酸酯的至少一种。
当制剂含有单-生育酚磷酸酯和二-生育酚磷酸酯的组合时，这些化合 物可以其一种或多种α、β、γ和δ形式存在，优选α和γ形式。
单-生育酚磷酸酯与二-生育酚磷酸酯的比例优选为4∶1至1∶4，更优 选2∶1。
本发明进一步提供了包含生物活性化合物和载体的制剂，所述载体包 含：一种或多种C1-C4醇、多元醇及其聚合物；水；和一种或多种二-和或 单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物或其络合物。
根据本发明，进一步提供了用于施用生物活性化合物的方法，其包括 将生物活性化合物与载体结合的步骤，所述载体包含：一种或多种C1-C4 醇、多元醇及其聚合物；水；和一种或多种二-和或单-(电子转移剂)磷 酸酯衍生物或其络合物。
所述载体可以是泡囊形式。生物活性化合物可被泡囊至少部分包裹。 虽然不想受理论束缚，但认为具有受控展性的泡囊的形成，能够使制剂通 过细胞间途径并将生物活性化合物细胞内递送至靶细胞或进入全身循 环。二-和或单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物有助于对抗由制剂给药引起 的炎症。
详细描述
本发明的载体含有：一种或多种C1-C4醇、多元醇及其聚合物；水；和 一种或多种二-和/或单-(电子转移剂)磷酸酯衍生物或其络合物。优选 地，水含量范围为50％至99％，更优选60％至95％，最优选70％至90％。
醇
术语“C1-C4醇”指具有1至4个碳原子的醇，如C1-4烷醇(例如甲醇、 乙醇、丙醇、异丙醇或丁醇)。多元醇和C1-4醇聚合物包括二元醇，如丙二 醇或聚乙二醇(例如PEG400)。还可以使用醇的组合。乙醇是优选的。
C1-C4醇的含量范围优选为0.5％至50％，更优选5％至40％，最优选10％ 至30％。
电子转移剂磷酸酯衍生物
术语“电子转移剂”指可被磷酸化的物质和(以非磷酸化形式)可接受电 子以生成相对稳定的分子自由基或者接受两个电子以使该物质在可逆氧 化还原系统中沉淀的物质。可被磷酸化的电子转移剂的实例包括：羟基苯 并二氢吡喃，如对映体和外消旋形式的α、β、γ和δ母育酚；为电子转移 剂K1和泛醌还原形式的对苯二酚；羟基类胡萝卜素，如视黄醇；钙化固 醇和抗坏血酸。优选地，电子转移剂选自母育酚、视黄醇、为电子转移剂 K1还原形式的对苯二酚及其混合物。
更优选地，电子转移剂是母育酚，如生育酚或生育三烯酸。母育酚包 括具有下式(I)的6:羟基2:甲基苯并二氢吡喃衍生物的所有异构体，包括 α-5:7:8三甲基、β-5:8二甲基、γ-7:8二甲基和δ8甲基衍生物。

其中
R1、R2和R3独立选自氢和C1-4烷基，优选甲基。
在生育酚中，R4是4:8:12三甲基十三烷，且2、4和8位(参见*)可以 是具有R或S活性或外消旋的立体异构体。在生育三烯酸中，R4是4:8:12 三甲基十三烷基-3:7:11三烯，且2位可以是具有R或S活性或外消旋的 立体异构体。最优选地，电子转移剂是α-生育酚或生育三烯酸。
术语“磷酸衍生物”指磷酸化电子转移剂的酸形式、磷酸盐(包括金 属盐，如碱金属盐或碱土金属盐，例如钠盐、镁盐、钾盐和钙盐)以及其 中磷酸质子被其他取代基(如C1-C4烷基或磷脂酰基)取代的任何其他衍生 物。
一些情况下，可能必须使用磷酸酯衍生物，如磷脂。磷脂酰衍生物是 磷酸酯的氨基烷基衍生物。这些衍生物可从结构为R5R6N(CH2)nOH的胺制 备，其中n是1至6的整数，且R5和R6独立选自H和C1-4烷基。磷脂酰衍 生物制备如下：用磷酸实体取代电子转移剂的羟基质子，然后磷酸实体与 胺(如乙醇胺或N，N’二甲基乙醇胺)反应。一种制备磷脂酰衍生物的方法 包括：碱性溶剂(如吡啶或三乙胺)与氧氯化磷来制备中间体，然后该中 间体与胺的羟基反应以生成相应的磷脂酰衍生物，如P-胆酰-P(P cholyl P)磷酸二氢生育酚。
术语“C1-4烷基”指具有1至4个碳原子的直链、直链或环状烃基。实 例包括：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、 环丙基和环丁基。
特别优选的电子转移剂磷酸酯衍生物是二-生育酚磷酸酯衍生物、二- 生育酚二-磷酸酯衍生物、二-生育三烯酸磷酸酯衍生物、单-生育酚磷酸 酯衍生物、单-生育酚二-磷酸酯衍生物和单-生育三烯酸磷酸酯衍生物， 最优选单-生育酚磷酸酯衍生物和二-生育酚磷酸酯衍生物的组合。
已经发现，载体的稳定性随单-电子转移剂(单-α-生育酚磷酸酯)浓 度的增加而增加。当存在单-α-生育酚磷酸酯和二-生育酚磷酸酯的组合 时，其优选比例为4∶1至1∶4，更优选2∶1。
存在的电子转移剂磷酸酯衍生物的量优选范围最多11％，更优选1％至 11％，最优选1％至3％。
电子转移剂磷酸酯衍生物的络合物
当需要其他性质(如，提高的稳定性或递送能力)时，还可以使用电 子转移剂磷酸酯衍生物络合物。该络合物是一种或多种电子转移剂磷酸酯 衍生物与一种或多种络合剂的反应产物，所述络合剂选自两性表面活性 剂、阳离子表面活性剂、具有氮官能团的氨基酸和富含这些氨基酸的蛋白 质，如在国际专利公布No.WO 02/40034中公开的，其通过引用结合入本 文。
优选的络合剂选自氨基酸(如精氨酸和赖氨酸)和如式(II) 的那些叔取代胺：
NR7R8R9
(II)
其中
R7选自任选被羰基间断的C6-22烷基；且
R8和R9独立选自H、CH2COOX、CH2CHOHCH2SO3X、CH2CHOHCH2OPO3X、 CH2CH2COOX、CH2COOX、CH2CH2CHOHCH2SO3X或CH2CH2CHOHCH2OPO3X，其中X是 H，Na、K或烷醇胺，
前提是R8和R9不同时为H，且当R7是RCO时，R8是NCH3且R9是 (CH2CH2)N(C2H4OH)-H2CHOPO3或者R8和R9一起形成N(CH2)2N(C2H4OH)CH2COO。
优选的络合剂包括精氨酸、赖氨酸或月桂基亚胺基二丙酸，其中在碱 性氮中心和磷酸酯之间发生络合以形成稳定的络合物。
术语“C6-22烷基”指具有6至22个碳原子的直链、支链或环状烃基。实 例包括己基、环己基、癸基、月桂基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、 十六烷基、十七烷基和十八烷基。
生物活性化合物
术语“生物活性化合物”指在人或动物中具有生物效应而用于医疗、畜 牧或美容应用的化合物。生物活性化合物包括药物或其衍生物，特别是其 磷酸衍生物。药物包括维生素、植物化学物质、美容剂、营养制品、肽、 多肽、蛋白质或核酸。应理解，一些生物活性化合物可被分类入这些种类 中的超过一种。
药物的实例包括但不限于：麻醉性镇痛药，如吗啡、羟考酮和左啡诺； 适度阿片激动剂，如可待因和右丙氧芬；混合阿片激动剂，如丁丙诺啡和 喷他佐辛；阿片拮抗剂，如纳洛酮和纳曲酮；非阿片镇痛药，如对乙酰氨 基酚和非那西丁；皮质激素，如可的松；吸入式麻醉药，如氟烷、恩氟烷； 静脉注射麻醉药，如巴比妥类、地西泮、类罂粟碱、神经镇静药(例如， 氟哌利多与芬太尼)、氯胺酮和丙泊酚；局部麻醉药，如普鲁卡因和利多 卡因；止吐药，如东莨菪碱；拟交感神经药物，如肾上腺素和多巴胺；肾 上腺素激动剂，如直接作用的激动剂(例如，多巴酚丁胺和肾上腺素)、间 接作用的激动剂(例如，苯丙胺和酪胺)和直接和间接(混合作用)激动剂 (例如，麻黄素和间羟胺)、肾上腺素拮抗剂，如α阻滞剂(例如，哌唑嗪 和酚妥拉明)、β阻滞剂(例如，阿替洛尔、噻吗洛尔和吲哚洛尔)和影响神 经递质吸收或释放的药物(例如，可卡因、利舍平和胍乙啶)；抗胆碱药物， 如抗毒蕈碱剂(例如，阿托品和磷酸阿托品)、神经节阻滞剂(例如，尼古 丁和美卡拉明)、神经肌肉阻滞剂(例如，阿曲库铵和筒箭毒碱)；直接胆 碱能药物激动剂，如毛果芸香碱；间接胆碱能药物激动剂(可逆和不可逆 的)，如新施得明和二乙氧膦酰硫胆碱；抗震颤麻痹药，如金刚烷胺、左 旋多巴、托卡朋、罗匹尼罗、司来吉兰和溴隐亭；激素及其片断，如性激 素、人甲状旁腺素(PTH)、生长激素和胰岛素；抗糖尿病药，如胰岛素、 高血糖素样肽和低血糖剂，如磺脲类、双胍、α-葡萄糖苷酶抑制剂和噻唑 啉二酮(thaiazolidinediones)；抗心绞痛药，如硝酸酯(例如，异山梨 醇和硝化甘油)、雷诺嗪、b-阻滞剂和钙通道阻滞剂(例如，地尔硫卓、硝 苯地平和维拉帕米)；抗焦虑剂和催眠剂，如地西泮(例如，阿普唑仑和地 西泮)、丁螺环酮、羟嗪、唑吡坦、巴比妥类(例如，苯巴比妥)和非巴比 妥酸盐镇静药(例如，抗组织胺类和水合氯醛)；精神性运动兴奋剂，如安 非他命、咖啡因、可卡因、茶碱和尼古丁；抗抑郁药，如三环/多环抗抑 郁药(例如，阿米替林)、选择性5-羟色胺重吸收抑制剂(例如，氟西汀)、 单胺氧化酶抑制剂(例如，苯乙肼)；精神抑制剂，如典型抗精神病药(例 如，酚噻嗪和丁酰苯，如氯丙嗪和氟哌啶醇)和典型抗精神病药(例如，苯 异恶唑、二地西泮和噻吩并地西泮，如利培酮、氯氮平和奥氮平)；抗癫 痫剂，如卡马西平、地西泮、加巴喷丁、噻加宾、托吡酯、氨己烯酸、拉 莫三嗪、乙琥胺、丙戊酸、巴比妥类和苯妥英；充血性心力衰竭药物，如 血管扩张剂、利尿剂和正性肌力药(例如，强心苷、β-肾上腺素激动剂和 磷酸二酯酶抑制剂)；血管扩张剂，如ACE抑制剂(例如，依那普利)、肼 屈嗪、异山梨醇和米诺地尔；利尿剂，如噻嗪利尿剂(例如，氢氯噻嗪)、 环利尿剂(例如，呋塞米)、保钾利尿剂(例如，阿米洛利)和碳酸酐酶抑制 剂(例如，乙酰唑胺)；强心苷，如地高辛；β-肾上腺素激动剂，如多巴酚 丁胺；磷酸二酯酶抑制剂，如氨力农和米力农；抗心律失常试剂，如钠离 子通道阻滞剂(例如，丙吡胺、氟卡尼、利多卡因)、β-肾上腺素受体阻滞 剂(例如，美托洛尔、艾司洛尔和普萘洛尔)、钾通道阻滞剂(例如，胺碘 酮和索他洛尔)、钙通道阻滞剂(例如，地尔硫卓和维拉帕米)、阿糖腺苷 和地高辛；抗高血压剂，如利尿剂(例如，噻嗪类、环利尿剂和保钾利尿 药)、β-阻滞剂(例如，阿替洛尔)、ACE抑制剂(例如，依那普利和雷米普 利)、血管紧缩素II拮抗剂(例如，氯沙坦)、钙通道阻滞剂(例如，氨氯 地平、硝苯地平和维拉帕米)、α-阻滞剂(例如，多沙唑嗪、哌唑嗪和特拉 唑嗪)和其他，如可乐定、二氮嗪和肼屈嗪；血小板抑制剂，如阿昔单抗、 阿斯匹林、氯吡格雷和替罗非班；抗凝剂，如肝素钠、肝素和华法林；血 栓溶解剂，如阿替普酶、链激酶和尿激酶；出血治疗剂，如氨基己酸、氨 甲环酸和维生素K；贫血治疗剂，如促红细胞生成素、铁离子、叶酸和维 生素B12；凝血酶抑制剂，如来匹卢定；抗微生物剂，如具有抗一种或多 种厌氧有机体、革兰氏阳性有机体和革兰氏阴性有机体活性的物质；具有 广谱活性(例如，四环素和氯霉素)、窄谱活性(例如，异烟肼)和扩展谱活 性(例如，氨苄西林)的抗菌剂；抑制代谢的抗微生物剂(例如，磺胺类药 物和甲氧苄啶)、抑制细胞壁合成的抗微生物剂(例如，β-内酰胺和万古霉 素)、抑制蛋白质合成的抗微生物剂(例如，四环素、氨基糖甙类、大环内 酯类、克林霉素和氯霉素)和抑制核酸功能或合成的抗微生物剂(例如，氟 喹诺酮类和异福酰胺片)；抗分支杆菌剂，如用于治疗肺结核和麻风病的 物质；抗真菌剂，如两性霉素B、氟康唑、、氟胞嘧啶、itraconozole、 酮康唑、克霉唑、益康唑、灰黄霉素、咪康唑和制霉菌素；抗原虫剂，如 氯喹、甲硝哒唑、甲氟喹、乙胺嘧啶、奎纳克林、和奎尼丁；驱肠虫药， 如吡喹酮、和甲苯达唑；用于呼吸道感染的抗病毒剂(例如，金刚烷胺、 病毒唑和金刚乙胺)、用于疱疹和巨细胞病毒感染的抗病毒剂(例如，阿昔 洛维、西多福韦、喷昔洛韦、泛昔洛韦、更昔洛韦和阿糖腺苷)、用于人 类免疫缺陷病毒感染的抗病毒剂(例如，阿巴卡韦、阿德福韦、 apmrenavir、地拉韦啶、去羟肌苷、司他夫定、扎西他滨和齐多夫定)和 用于肝炎、非白血性白血病和kaposi’s肉瘤的抗病毒剂(例如，干扰素)； 抗癌剂，如抗代谢物(例如，阿糖胞苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶、6-巯嘌 呤、甲氨蝶呤和6-硫鸟嘌呤)和抗生素(例如，博来霉素、多柔比星、柔红 霉素和普卡霉素)、烷化剂(例如，卡莫司汀、洛莫司汀、环磷酰胺、异环 磷酰胺、链唑霉素和双氯乙基甲胺)、微管抑制剂(例如，诺维本、紫杉醇、 长春碱和长春新碱)、类固醇激素及其拮抗剂(例如，氨鲁米特、雌激素、 氟他胺、戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、泼尼松和他莫昔芬)和其他，如门冬 酰胺酶、顺铂、卡铂、依托泊苷、干扰素和丙卡巴肼；抗炎剂，如非甾体 抗炎剂(例如，阿斯匹林、双氯芬酸、布洛芬、萘普生、舒林酸、吡罗昔 康、pheylbutazone、托美丁、吲哚美辛和酮洛芬)、环氧合酶2抑制剂(例 如，塞来考昔和罗非考昔)、抗关节炎剂(例如，氯喹、氯金化钠、氨甲喋 呤和D-青霉胺)和痛风治疗剂(例如，别嘌醇、秋水仙碱、丙磺舒和磺吡 酮)；组织激素和组织激素拮抗剂，如前列腺素(例如，卡前列素、米索前 列醇和地诺前列素)、H1抗组织胺类(例如，clyclizine、美克洛嗪、茶苯 海明、苯海拉明、非索非那定、西替利嗪和氯雷他定)、H2抗组织胺类(例 如，西咪替丁、法莫替丁、尼扎替丁和雷尼替丁)和用于治疗偏头痛的物 质(例如，β-阻滞剂、双氢麦角胺、麦角胺、美西麦角和舒马普坦)；哮喘 药物，如β-肾上腺素激动剂、皮质激素、预防性抗炎剂(例如，色甘酸钠 和奈多罗米)和胆碱拮抗剂(例如，异丙托铵)；影响呼吸系统的物质，如 靶向白细胞三烯生成或功能的物质(例如，孟鲁司特、齐留通和扎鲁司 特)；过敏性鼻炎药物，如抗组安剂、α-肾上腺素激动剂、皮质激素和预 防性抗炎剂，如色甘酸钠；肺慢性阻塞性疾病药物，如支气管扩张剂(例 如，β-肾上腺素激动剂和胆碱能拮抗剂、黄嘌呤氧化酶抑制剂，如胆茶碱) 和糖皮质激素；类固醇激素及其拮抗剂，如雌激素(例如，雌二醇、美雌 醇和炔雌醚)、选择性雌激素调节剂(例如，雷洛昔芬)、黄体酮(例如，羟 孕酮、炔诺孕酮、炔诺酮和甲羟孕酮)、抗孕素(例如，米非司酮)、雄激 素(例如，达那唑、诺龙、司坦唑醇、睾酮、环戊丙酸睾酮和氟甲睾酮)、 抗雄激素(例如，环丙孕酮、非那雄胺和氟他胺)、皮质激素(例如，倍氯 米松、可的松、地塞米松、氟氢可的松、泼尼松龙和曲安西龙)和肾上腺 类皮质激素生物合成抑制剂(例如，氨鲁米特、酮康唑、美替拉酮、米非 司酮和螺内酯)；骨质疏松症治疗剂，如双膦酸盐(例如，阿伦膦酸盐、氨 羟二磷酸盐和利塞膦酸盐)、降钙素、钙和雌激素；抗肥胖剂，如脂酶抑 制剂(例如，奥利斯特)、抗肥胖肽(例如，生长激素及其片断)和拟交感神 经药；用于胃溃疡和炎症的治疗剂，如质子泵抑制剂(例如，奥美拉唑和 兰索拉唑)、抗菌剂、前列腺素(例如，米索前列醇)和H2抗组织胺类(例 如，雷尼替丁)；抗体药物；抗甲状腺药物，如甲状腺素；肽、蛋白质和 多肽药物，如核酸、寡核苷酸、反义药物、酶、细胞因子(例如，肿瘤坏 死因子)、细胞因子类似物、细胞因子激动剂、细胞因子拮抗剂、激素(例 如，降钙素、和甲状旁腺素)、激素片断(例如，特立帕肽)、激素类似物(例 如，生长激素激动剂、生长激素拮抗剂，如奥曲肽和促性腺素释放激素类 似物，如醋酸亮丙瑞林)、胰岛素、胰岛素片断、胰岛素类似物(例如，重 组人胰岛素类似物、赖脯人胰岛素、glargine、aspart和detemir)、胰 升糖素样肽、胰升糖素样肽片断、胰升糖素样肽类似物(例如， exenatide)、免疫球蛋白、抗体、疫苗、基因疗法、脂蛋白、促红细胞生 成素、enfuvirtide和依替巴肽；激素、蛋白质、肽、多肽、核酸和寡核 苷酸疗法，其是天然激素、蛋白质、肽、多肽、核酸和寡核苷酸的直接或 间接的激动剂、拮抗剂、调节剂、刺激剂或抑制剂；通过合成、重组方法 或天然产物的化学修饰制备的小分子和大分子治疗蛋白、肽、多肽、核酸 和寡核苷酸；合成或天然衍生的小分子和大分子治疗蛋白、肽、多肽、核 酸和寡核苷酸；小分子治疗肽，如生长因子、激素、细胞因子和化学增活 素；天然蛋白质、肽、多肽、寡核苷酸和核酸的类似物、片断和变体以及 类似化合物(例如，促红细胞生成素的变体hematide和生长抑素类似物奥 曲肽)；用于治疗活预防人和动物疾病的激素、蛋白质、肽、多肽、寡核 苷酸和核酸，所述疾病如变态反应/哮喘、关节炎、癌、糖尿病、生长损 害、心血管疾病、炎症、免疫疾病、、脱发、疼痛、眼科疾病、癫痫、妇 科疾病、CNS疾病、病毒感染、细菌感染、GI疾病、肥胖症和haemological 疾病；；植物化学物质，如α-没药醇、丁香酚、水飞蓟素、大豆异黄酮、 植物固醇和环烯醚萜，例如桃叶珊瑚甙和梓醇；倍半萜内酯，如来自山金 车花chamissonis的伪愈创内酯类；萜烯，如迷迭香酸和rosmanol；酚苷， 如水杨酸类，例如水杨素、水杨醇和水杨酸；三萜类，如taxasterol、α- 毒莴苣醇、异毒莴苣醇和taraxacoside；氢醌衍生物，如熊果苷； phenylalkanones，如姜辣素和shagaols；hypercin；抗血脂障碍剂，如 HMGCoA还原酶抑制剂(例如，辛伐他汀、阿托伐他汀和普伐他汀)、氯贝特 (例如，氯贝丁酯和吉非贝齐)、烟酸、普罗布考、胆固醇吸收抑制剂(例 如，依泽替米贝)、胆甾醇酯转移酶拮抗剂(例如，torcetrapib)、HDL胆 固醇提高剂(例如，torcetrapib)；三酸甘油酯还原剂(例如，氯贝特)、 V-保护剂(例如，AGI-1067)、人脱辅基脂蛋白的变体(例如，ETC-216)； 酰基间苯三酚，如黄腐醇、蛇麻草素、律草酮和2-甲基丁-3-烯-2-醇；营 养制品，如健康营养物或其他添加剂、维生素(例如辅酶Q和视黄醇(维 生素A))、营养素、生成激素的前体分子、蛋白质(例如弹力蛋白、胶原 和胰岛素)、氨基酸、植物提取物(如葡萄籽提取物、麻黄素、DHEA、异 黄酮和植物固醇)；和美容剂，如抗衰老剂或抗皱纹剂(例如，弹力蛋白 和胶原)和抗氧化剂(如视黄醇和辅酶Q)、维甲酸、ω-3-脂肪酸、葡糖胺、 γ-生育酚和γ-生育酚磷酸酯衍生物。
应理解，上述药物的药学可接受盐和衍生物包括在本发明范围内。
优选地，生物活性化合物的量的范围最多5％，更优选0.5至3％，最 优选0.5至2％。
泡囊
当存在时，泡囊直径范围为50nm至10,000nm，更优选100nm至 500nm，最优选300nm至500nm。
生物活性化合物可被泡囊至少部分包裹。
给药类型
制剂包括那些适合胃肠外、肠内、口服、局部、经皮、经眼、直肠、 阴道、鼻内和肺内给药的制剂。制剂可以为液体剂、溶液剂、悬浮剂、乳 油、软膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、气溶胶、贴片、肠溶衣片剂、胶囊、 栓剂、阴道栓剂或棉塞等形式，并且可通过药学领域公知的任何方法制 备，如Remington JP，The Science and Practice of Pharmacy，AR Gennaro 编辑，第20版，Lippincott，Williams and Wilkins Baltimore，Md(2000) 中描述的。这些方法包括将生物活性化合物与载体形成关联的步骤，并且 如果需要，则将制剂制成想要的产品。
制剂可以剂型、制剂或者经由适当的给药装置或埋植剂通过注射、输 注或植入(静脉内、皮下等)胃肠外给药，所述埋植剂含有常规的无毒药学 可接受载体和佐剂。
用于胃肠外使用的制剂可以单位剂量形式(例如，以单剂量安剖)存 在，或者存在于含有几个剂量的管形瓶中，其中可以添加适当的防腐剂。 制剂可以为溶液剂、悬浮剂、乳剂、输注装置或用于植入的给药装置形式， 或者其可以作为干燥粉末存在，在使用前用水或其他适当载体重新溶解。 除了生物活性化合物，制剂可以包括适当的胃肠外可接受载体和/或赋形 剂。生物活性化合物可加入微球体、微胶囊、纳米微粒、脂质体等用于控 制释放。而且，制剂可以包括悬浮剂、增溶剂、稳定剂pH调节剂和/或分 散剂。
如上所述，制剂可以为适合无菌注射的形式。为制备这样的制剂，生 物活性化合物溶解或悬浮于胃肠外可接受的液体载体。可以使用的可接受 载体和溶剂包括：水；通过添加适当量的盐酸、氢氧化钠或适当缓冲剂而 调节至适当pH的水；1，3-丁二醇、林格式溶液；和等渗氯化钠溶液。含 水制剂还可以含有一种或多种防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基 苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)。当一种所述化合物仅略溶或微溶于 水时，可以添加溶解增强剂或增溶剂，或者所述溶剂可以包括10％-60％w/w 的丙稀或二醇等。
控释胃肠外组合物的形式可以是：水悬浮剂、微球剂、微胶囊、磁性 微球剂、油剂、油悬浮剂或乳剂。或者，生物活性化合物可被加入生物相 容性载体、脂质体、纳米微粒、埋植剂或输注装置。
例如，用于制备微球剂和/或微胶囊的材料是生物可降解/生物可蚀解 的聚合物，如聚乙酸乳酸聚酯、聚(氰基丙烯酸异丁基酯)、聚(2-羟基乙 基-L-谷氨酰胺(glutamnine))和聚(乳酸)。
在配制控释胃肠外制剂时可以使用的生物相容性载体是糖类(例如， 葡聚糖)、蛋白质(例如，白蛋白)、脂蛋白或抗体。
用于埋植剂的材料可以是非生物可降解的(例如，聚二甲基硅氧烷)或 生物可降解的(例如，聚(己内酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)或聚(原酸酯))。
适合口服给药的制剂常规上可作为以下形式存在：分开单位，如胶 囊、扁胶囊或片剂，其可各自含有预定量的生物活性化合物；粉末或颗粒； 溶液剂、悬浮剂或乳剂。生物活性物质还可作为丸剂、药糖剂或糊剂存在。 用于口服给药的片剂和胶囊可含有常规赋形剂，如结合剂、填充剂、湿润 剂、崩解剂或润湿剂。片剂可根据本领域公知的方法包衣。例如，口服液 体制剂可以为水或油悬浮液、溶液、乳液、糖浆或酏剂，或者可以作为干 燥粉末存在，其在使用前用水或其他适当载体重新溶解。这样的液体制剂 可含有常规添加，如悬浮剂、乳化剂、非水载体(其可包括食用油)或防 腐剂。
为经皮局部给药，生物活性化合物可制成软膏剂、乳油或洗剂，或者 作为透皮贴剂。例如，软膏剂和乳油可用水或油基底制备，并添加适当的 增稠剂和/或胶凝剂。洗剂可用水或油基底制备，而且一般还含有一种或 多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。
适合于口中局部给药的制剂包括：锭剂，其包含于调味基底的活性化 合物，所述调味基底通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍树胶；软锭剂，其包含 于惰性基底中的活性成分，所述惰性基底如明胶或蔗糖和阿拉伯胶；和漱 口剂，其包含于适当液体载体的活性成分。
适合于直肠给药的制剂可作为栓剂存在。适当赋形剂包括可可脂和现 有技术中普遍使用的其他材料，且栓剂可通过将生物活性化合物与软化或 熔体载体相混合并随后通过放冷并成型模具来制备。
适合于阴道给药的制剂可作为阴道栓剂、棉塞、乳油、凝胶、糊剂、 泡沫剂或喷雾剂存在，除了生物活性化合物外，其含有现有技术已知的适 当赋形剂。
为鼻内或肺内给药，制剂可以溶液剂或悬浮剂或作为干燥粉末的形式 给药。
溶液剂和悬浮剂一般是含水(例如，无菌或无热原的水)和生理学可接 受的共溶剂(例如，乙醇、丙二醇或聚乙二醇如PEG 400)。
这样的溶剂或悬浮剂可任选含有其他赋形剂，例如：防腐剂(如苯扎 氯铵)、增溶剂或表面活性剂如多山醇酯(例如，吐温80、Span 80、苯扎 氯铵)、缓冲剂、等渗调节剂(例如，氯化钠)、吸收增强剂和增粘剂。悬 浮剂还可含有悬浮剂(例如，微晶纤维素、羧甲基纤维素钠)。
溶液剂或悬浮剂可通过常规方式直接应用至鼻腔，例如使用滴管、移 液管或喷雾。制剂可以单剂量或多剂量形式提供。后一情况意味着需要提 供剂量计量。在滴管或移液管的情况中，可以通过施用适当的预定体积的 溶液或悬浮液来实现剂量计量。在喷雾情况中，例如，可以通过计量性雾 化喷雾泵来实现。
还可以通过气溶胶制剂来实现至呼吸道的给药，其中生物活性化合物 在加压包中与适当推进剂一起提供，所述推进剂如氯氟碳(CFC)，例如， 二氯氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适当气体。气 溶胶常规还可含有表面活性剂(如卵磷脂)。可通过提供计量阀来控制药物 剂量。
或者，可以干粉形式提供所述化合物，例如化合物在适当粉末基底中 的粉末混合物，所述粉末基底如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(如羟丙基甲基 纤维素)和聚乙烯吡咯烷(PVP)。粉末载体将方便在鼻腔中形成凝胶。粉 末组合物可以单位剂量形式存在，例如在例如明胶的胶囊或药筒或者药包 中，粉末可以从其通过吸入器(如Diskhaler，GlaxoSmithKline的商标) 或计量剂量气溶胶吸入器给药。
其他赋形剂
本领域技术人员将知道哪些其他赋形剂可包括在制剂中。其他赋形剂 的选择将取决于生物活性化合物的性质和使用的给药形式。其他赋形剂的 实例包括溶剂、增稠剂或胶凝剂、表面活性剂、缓冲剂、润滑剂、甜味剂、 崩解剂、调味剂、着色剂、防腐剂、芳香剂、电解质、成膜聚合物等。适 当的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿司帕坦或糖精。适当的崩解剂包 括玉米淀粉、淀粉、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、黄单胞菌胶、膨润土、 海藻酸或琼脂。适当的风味剂包括薄荷油、冬青油、樱桃、橙子或红莓调 味剂。适当的防腐剂包括钠、苯甲酸盐、维生素E、α-生育酚、抗坏血酸、 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。
本发明制剂的典型赋形剂包括胶凝剂如卡波姆(Carbopol)，其是羧基 乙烯聚合物、防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基 苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和苯甲酸钠)和缓冲剂(如氢氧化钠)。 赋形剂可以最多约5％的量存在。
制备载体或制剂的方法
制备载体的方法包括将电子转移剂磷酸酯衍生物或其络合剂与醇结 合，然后添加水。然后，通过在制备载体的过程的任何步骤添加生物活性 化合物至该载体来制备制剂。
通常，将醇加热至55℃或更高的温度，并将电子转移剂磷酸酯衍生物 溶解于该醇。如果生物活性化合物溶解于醇，则当电子转移剂磷酸酯衍生 物与醇合并时添加该生物活性化合物，并用水平衡该制剂。
可以在所述方法的任何步骤中(通常在添加水之后)添加其他赋形 剂，如胶凝剂、防腐剂和缓冲剂。
可以使用任何已知的混合技术(如，例如震动或涡旋)将载体和制剂 的组分混合。
附图说明
将参考附图描述实施例，所述附图中：
图1是显示鼠血浆中平均PTH浓度的图。
图2是显示在局部施用透皮TPM-I125-胰岛素后鼠器官中的放射性分布 的图。
图3是鼠血浆中胰岛素水平的图。
图4是经过透皮胰岛素(Lispro)治疗后血糖浓度的平均变化。

实施例
现在，将参考下述非限制性实施例来描述本发明的各种实施方案/方 面。
实施例1
本实施例考察了使用本发明制剂的人甲状旁腺素(片断1-34)(PTH) 的透皮吸收。
材料与方法
如下制备测试制剂。所有百分比为重量/重量。
成分 TPM-01/PTH  TPM-02/PTH  PTH-(1-34)(美国肽，USA) 0.1％ 0.1％ 含有2∶1比例的TP∶T2P的磷酸化生育酚的酸形 式混合物。TP指α-生育酚的单磷酸酯，且T2P 指二-生育酚磷酸酯。 1％ 1％ 乙醇 - 20％ 卡波姆 0.4％ 0.75％ 对羟基苯甲酸甲酯 0.1％ 0.1％ 水 至100％ 至100％
TPM-02/PTH制剂是看似乳状物的胶体悬浮液。这表明已 经生成了泡囊。
治疗
斯普拉-道来大鼠(10-12周大，雄性)随机分成治疗组(组1和组2，n ＝6)，并圈养于单独盒子中以防止其同居鼠从其背部舔食制剂。
治疗组：
·组1-100mg TPM-01/PTH/200g体重，每天两次，持续24小时。
·组2-100mg TPM-02/PTH/200g体重，每天两次，持续24小时。
将鼠麻醉，称重并紧邻颈下刮出5×4cm的区域。大鼠在麻醉时尾部 取血，收集血浆以测定治疗开始前的PTH浓度。第二天开始，为每只大鼠 称取适当剂量的制剂，并使用带手套的手指将制剂揉入大鼠的皮肤。在24 小时内，每天两次(早上和晚上)将制剂应用于组1和组2。治疗期结束 时，通过CO2窒息杀死大鼠并通过心脏穿刺取血。
血浆中PTH分析：通过离心从收集的血液中分离血浆，并保存于-20℃ 直至分析。使用人生物活性PTH1-34 ELISA试剂盒(Immunotopics Inc.， USA)按照生产商的说明书来分析大鼠血浆PTH浓度。
结果
血浆中检测的平均PTH浓度总结于图1。
每天两次的TPM-01/PTH应用导致血浆PTH含量在24小时后的显著 (p＜0.05*)增加。相对于未治疗大鼠的基础水平，平均血浆PTH浓度增加 了685pg/ml。
每天两次的TPM-02/PTH应用导致血浆PTH含量在24小时后的显著 (p＜0.05*)增加。该增加(1185pg/ml)占总剂量的7.7％，比TPM-01/PTH制 剂提高了70％。
*student’s t-检验的结果
使用TPM-02/PTH的透皮治疗提高了大鼠血浆中的PTH浓度，表明TPM 能够实现PTH-(1-34)在24小时内的透皮吸收，比未治疗对照显著提高了 血浆PTH浓度。治疗72小时后，PTH血浆浓度恢复至基础水平。
已报道的研究显示，在皮下注射治疗量(25μg/kg体重)后，大鼠血浆 中的PTH浓度在注射~40-60分钟时达到峰值，并在4小时内完全代谢。尽 管是局部应用，但该研究中的大鼠接收了大得多的剂量(500μg/kg体 重)。由于快的PTH代谢速率，合理推断：初始应用后保持24小时的高浓 度PTH仅占接收总剂量的小百分比。因此，局部应用TPM制剂产生的有效 剂量将比24小时后测定的PTH浓度大得多。
结论
尽管TPM-01和TPM-02制剂在递送PTH上都是有效的，但TPM-02/PTH 递送至循环系统的PTH比TPM-01/PTH多70％。本发明制剂更有效递送活性 成分透过皮肤并进入全身循环。
实施例2
本方法描述了制备100ml的辅酶Q(CoQ)/生育酚磷酸酯混合物制剂， 用于随后在本发明制剂中的应用。最终制剂含有0.5％CoQ10、1％TPM、10％ 乙醇、1％卡波姆、0.1％对羟基苯甲酸甲酯、QS MilliQ。
设备与材料
乙醇(AR级)
MilliQ水
辅酶Q(Kaneka)
生育酚磷酸酯混合物(TPM)，含有比例为2∶1 w/w的生育酚磷酸酯(TP) 和二-生育酚磷酸酯(T2P)(Phosphagenics Ltd)。
卡波姆934P USP粉末(Croda Surfactants Ltd)
对羟基苯甲酸甲酯BP粉末powder(Bronson&Jacobs)
1M氢氧化钠(NaOH)
天平(Mettler AE 240)
Falcon管
100ml塑料样品容器
水浴70℃
多功能涡旋器
方法
1.准确称取0.5g CoQ入50ml Falcon管。
2.准确称取1g TPM入50ml Falcon管。
3.称取10g(非ml)乙醇入管。紧密封盖并混合。
4.在70℃水中加热，以帮助溶解/熔化组分。每几分钟手动振荡一次， 直至CoQ和TPM溶解。加热至需要的温度。处于该浓度的CoQ，一经冷却 即从乙醇沉淀出来。
5.量取80ml MilliQ入100ml样品容器。紧密封盖并置于水浴5分 钟以加热水。
6.将加热的CoQ/TPM/乙醇溶液直接倾倒入MilliQ。
7.立即加盖并手动剧烈振荡以混合组分。该制剂具有不透明的黄色 外观。涡旋5分钟。
8.准确称取1g卡波姆和100mg对羟基苯甲酸甲酯入称量盘。缓慢 添加至CoQ/TPM溶液，每次添加之间剧烈涡旋。在70℃水浴短期加热样品 以帮助样品溶解。
9.当添加完所有卡波姆/对羟基苯甲酸甲酯后，涡旋，直至组分达到 均匀稠度，但该阶段还未形成凝胶。
10.添加3ml 1M NaOH，加盖并剧烈振荡。
11.如果制剂已形成凝胶，则检测pH。卡波姆将形成pH7-8的最佳 凝胶。
12.重复步骤10和11，直至形成想要的稠度。
13.如果需要，用MilliQ补充至100g。
14.再次涡旋5分钟。
15.将容器包于铝箔中以防止CoQ的光解。
16.到第二天，任何未溶解的卡波姆吸收了制剂中的水分并形成澄清 的凝胶袋(pockets of gel)。剧烈振荡，直至制剂形成均匀稠度。
制剂为看似乳状物的胶体悬浮液。这表明泡囊已经形成。
实施例3
本实施例考察
本实施例考察了使用本发明制剂的辅酶Q10(CoQ10)的透皮吸收。
材料与方法
乙醇(AR级)
MilliQ水(内部供应)
生育酚磷酸酯混合物(TPM)，含有比例为2∶1w/w的生育酚磷酸酯(TP) 和二-生育酚磷酸酯(T2P)(Phosphagenics Ltd)。
辅酶Q(CoQ)(Kaneka，Japan)
Nivea Visage抗皱纹Q10日间护理(Beiersdorf)
卡波姆934P USP粉末(Croda Surfactants Ltd)
对羟基苯甲酸甲酯BP粉末(Bronson&Jacobs)
1M氢氧化钠(NaOH)
天平(Mettler AE 240)
Falcon管
100ml塑料样品容器
水浴55℃
多功能涡旋器
测试制剂
CoQ对照：可使用CoQ对照制剂来评估在不含TPM时能够穿过皮肤的 CoQ10量。组成：0.5％CoQ10(Kaneka，Japan)、10％乙醇、1％卡波姆、 0.1％对羟基苯甲酸甲酯，用水补充至100％。
称取0.5g CoQ10入50ml Falcon管。使用台式天平添加10g乙醇。 紧密封帽并混合。在55℃水浴中加热，以帮助溶解/熔化CoQ。加热至需 要的温度。处于该浓度的CoQ，一经冷却即从乙醇沉淀出来。量取80ml水 入100ml样品容器。将加热的CoQ/乙醇溶液直接倾倒入水中。立即加盖并 手动剧烈振荡以混合组分。涡旋5分钟。一些CoQ10从溶液沉淀出来，油 状橙色环绕容器。由于CoQ10的不溶性质，这是不可避免的。准确称取1g 卡波姆和100mg对羟基苯甲酸甲酯入称量盘。倒入制剂并涡旋，直至达到 均匀稠度，但该阶段还未形成凝胶。添加3ml 1M NaOH，加盖并剧烈振荡。 如果制剂已形成凝胶，则检测pH。卡波姆将形成pH 7-8的最佳凝胶。重 复添加3ml 1M NaOH、振荡并检测pH，直至凝胶形成。如果需要，用MilliQ 补充至100g。再次涡旋5分钟。将容器包于铝箔中以防止CoQ的光解。到 第二天，任何未溶解的卡波姆吸收了制剂中的水分并形成澄清的凝胶袋。 剧烈涡旋，直至制剂形成均匀稠度。
TPM对照：使用TPM对照制剂来测定TPM对内源性CoQ10浓度的影响。 组成：1％TPM、10％乙醇、1％卡波姆、0.1％对羟基苯甲酸甲酯，用水补 充至100％。该制剂中不含有CoQ10。
称取1g TPM入50ml Falcon管。使用台式天平添加10g乙醇。紧密 封帽并混合。在55℃水浴中加热，以帮助溶解/熔化TPM。加热至需要的 温度。量取80ml水入100ml样品容器。将加热的TPM/乙醇溶液直接倾倒 入水中。制剂立即获得乳状性质。立即加盖并手动剧烈振荡以混合组分。 涡旋5分钟。准确称取1g卡波姆和100mg对羟基苯甲酸甲酯入称量盘。 倒入制剂并涡旋，直至达到均匀稠度，但该阶段还未形成凝胶。添加3ml 1M NaOH，加盖并剧烈振荡。如果制剂已形成凝胶，则检测pH。卡波姆将 形成pH7-8的最佳凝胶。重复添加3ml 1M NaOH、振荡并检测pH，直至 凝胶形成。如果需要，用水补充至100g。再次涡旋5分钟。将容器包于铝 箔中以防止CoQ的光解。到第二天，任何未溶解的卡波姆吸收了制剂中的 水分并形成澄清的凝胶袋。剧烈涡旋，直至制剂形成均匀稠度。
TPM-02/CoQ：如上实施例2所述，制备本发明的TPM-02/CoQ。组成： 0.5％CoQ10、1％TPM、10％乙醇、1％卡波姆、0.1％对羟基苯甲酸甲酯， 用水补充至100％。
Nivea Visage抗皱纹Q10日间护理(Beiersdoff，Germany)：Nivea Visage是可商业途径获得的面霜，宣传为有效的CoQ10源，用于皮肤。 由于已知精确的CoQ10含量，Nivea Visage在重量上与TPM-02/CoQ相 当。组成：未知。
治疗组
斯普拉-道来(氏)大鼠(10-12周大，雄性)购自Animal Services， Monash University，并在治疗开始前适应部门动物房(Departmental Animal House)至少5天。动物随机分成治疗(n＝6)，并圈养在单个盒 子中以防止同居鼠从其背部舔食制剂。自由提供食物(标准的大鼠实验室 片食品；Barastoc，Australia)和水。
组1-未治疗
组2-100mg CoQ对照/200g体重，每天两次，持续24小时
组3-100mg TPM对照/200g体重，每天两次，持续24小时
组4-100mg TPM-02/CoQ/200g体重，每天两次，持续24小时
组5-100mg Nivea Visage霜/200g体重，每天两次，持续24小 时
组6-100mg CoQ对照/200g体重，每天两次，持续48小时
组7-100mg TPM对照/200g体重，每天两次，持续48小时
组8-100mg TPM-02/CoQ/200g体重，每天两次，持续48小时
组9-100mg Nivea Visage cream/200g体重，每天两次，持续 48小时
将鼠麻醉，称重并紧邻颈下刮出5×4cm的区域。第二天开始，为每 只大鼠称取适当量的制剂，并使用带手套的手指将制剂揉入大鼠的皮肤， 每天两次(早上和晚上)，持续24或48小时。制剂限制于大鼠在理毛时 不能触及的背部皮肤区域。
皮肤和血浆中CoQ10的分析：在治疗期结束时，通过使用CO2气体窒 息杀死大鼠。通过心脏穿刺取血，装入加了肝素的收集管中，并离心分离 血浆。用蒸馏水充分清洗刮毛的皮肤区域，以除去残留在表面上和离体区 域的任何未吸收CoQ10。基本上根据Aber等人((1992)Distribution and redox state of ubiquinones in rat and human tissues.Arch Biochem Biophys 295：230-234)的方法，进行CoQ从组织的提取以及HPLC定量。
统计分析：结果表示为平均值±SD。进行Student’s t-检验以确定治 疗组间从血浆和皮肤提取的CoQ浓度是否存在显著差异。
结果
表I-治疗后血浆和皮肤中的平均CoQ10浓度
    治疗     血浆中平均CoQ10(ng/ml)   皮肤中平均CoQ10(μg/g)     24小时     48小时     24小时     48小时   未治疗   CoQ对照   TPM对照   TPM-02/CoQ   Nivea   Visage   27.67±4.97   35.00±6.45   33.67±7.06   59.33±16.47   41.33±4.59   -   36.33±4.84   28.33±5.79   42 33±8.80   29.83±6.18   0.24±0.04   0.74±0.20   0.32±0.02   6.13±0.98   0.38±0.05   -   1.73±0.27   0.61±0.12   10.59±4.08   0.62±0.11
血浆
每天两次应用TPM-02/CoQ至大鼠背部区域，导致血浆中CoQ10含量 显著(p＜0.05)增加(表I)。相对于未治疗对照中观察到的内源性CoQ10浓 度使用TPM-02/CoQ治疗后的平均血浆CoQ10浓度增加了114％(p＜0.05)。 相反，CoQ对照和TPM对照分别仅能提高平均血浆CoQ10浓度26％和22％。 后两个增加没有一个达到了统计学上的显著性。重要的是相对于缺乏TPM 的CoQ对照制剂相比，TPM-02/CoQ显著(p＜0.05)提高了血浆CoQ10浓度 70％，证明TPM与乙醇直接提高CoQ10的透皮吸收。
相对未治疗对照，单日治疗后，Nivea Visage使血浆CoQ10浓度提 高了49％。然而，通过Nivea Visage产生的血浆CoQ10量显著少于(44％； p＜0.05)通过TPM-02/CoQ治疗产生的血浆CoQ10量。
皮肤
使用TPM-02/CoQ治疗在开始24小时内使皮肤中内源性CoQ10浓度显 著(p＜0.05)提高了2454％(表I)。到48小时，该提高已经升至内源性浓 度的4312％。相反，CoQ对照和TPM对照使平均皮肤CoQ10浓度在开始24 小时内分别提高了208％和33％，在48小时内提高了621％和154％。虽然是 显著的(p＜0.05)，但使用TPM对照治疗后增加的量值显得几乎没有益处。 相对于CoQ对照，TPM-02/CoQ使平均皮肤CoQ10分别提高了728％和512％。
TPM-02/CoQ在24小时后显著(p＜0.05)提高了(1513％)平均皮肤CoQ10 浓度，而Nivea Visage未能产生高于其他对照制剂的显著提高的皮肤 CoQ10浓度。
结论
TPM/乙醇制剂增强了CoQ10的溶解性和随后的透皮吸收，与对照制剂 (包括可商业途径获得的美容性CoQ10源)相比，显著提高了血浆和皮肤 的CoQ10浓度。对于已知具有差的口服生物利用度、皮肤特异性或不利副 作用(在消化过程中显现)的分子的局部应用和吸收，使用本发明的TPM/ 乙醇制剂配制化合物具有巨大潜力。
实施例4
如上所述制备含有胰岛素的制剂。制剂组成如下：
成分 TPM-02/胰岛素 胰岛素 60单位/g凝胶 含有2∶1比例的TP∶T2P的磷酸化生 育酚(TPM)混合物。TP指α-生育酚 的单磷酸酯且T2P指二-生育酚磷 酸酯。 2％ 乙醇 30％ 卡波姆934  1％ 水 至100％
实施例5
本实施例考察了使用TPM配制的胰岛素的透皮给药
制剂组分 LISPRO，人胰岛素类似物(Eli Lilly) 牛胰岛素(Sigma) 3-[125I]碘代酪氨酰A14)胰岛素，人重组体(Amersham Biosciences，代码IM166，批号B0602)(125I-胰岛 素) TPM-混合的α-生育酚磷酸酯(TP)和二-生育酚磷 酸酯(T2P；2∶1) 剂量制剂组分 32.5U LISPRO/kg体重 10U牛胰岛素/kg体重 125I-胰岛素(人重组体；400nCi)/鼠 2％TPM制剂 实验1至3 动物模型规格 实验4 动物模型 斯普拉-道来大鼠 性别：雄性 体重范围：220-450g 年龄：10-12周 猪
进行了四个独立的实验，来独立证明使用TPM制剂局部给药后的胰岛 素透皮递送。使用牛胰岛素、速效胰岛素类似物(LISPRO)或放射标记的人 重组胰岛素配制TPM。通过血浆胰岛素浓度的提高、皮下放射性检测或葡 萄糖负荷后的血糖浓度降低来评价成功的透皮给药。
实验1：提高血浆胰岛素浓度
在实验前一天，轻度麻醉(醚)下对雄性斯普拉-道来大鼠(220-300g) 的背部皮肤区域刮毛。当熟睡时，称重大鼠，以计算各大鼠需要的戊巴比 妥和治疗制剂的剂量。大鼠禁食过夜(~16h)，并自由供水。
大鼠在清晨后麻醉，并在实验过程中保持麻醉。测试制剂含有2％TPM、 牛胰岛素(3U/100μl；Sigma)、乙醇(30％)和卡波姆(1％)，用水补足。大鼠 接收了10U/kg体重的最终胰岛素剂量。对照组接收了含有TPM但不含胰 岛素的相同制剂。通常使用带手套的手指将对照(n＝2)和TPM-胰岛素制剂 (n＝2)应用或揉入皮肤。给药后1、2、3、4和6小时收集血浆。
使用特异性针对牛胰岛素的竞争放射免疫测定(Linco Research Inc.) 来测量血浆样品中存在的胰岛素的量。
实验2：使用放射性探针检测胰岛素的透皮吸收
按照实验1准备用于制剂局部给药的斯普拉-道来大鼠(300-450g)。大 鼠禁食过夜(~16h)，并自由供水。
将含有放射标记的人重组胰岛素(125I-胰岛素，Amersham Biosciences) 与2％TPM、30％乙醇、1％卡波姆和水配制形成凝胶(TpM-125I-胰岛素)。以~400 nCi/鼠(n＝4)的剂量局部施用TPM-125I-胰岛素(如上)。对照鼠(n＝5)接收不 含TPM的制剂，以阐明TPM在透皮吸收中的作用。大鼠给药后单独圈养，且 自由供食物和水。5小时后，处死大鼠并移出器官，称重并置于闪烁瓶中 以测定各器官中放射性总量。清洗皮肤以除去残留在皮肤表面的任何未吸 收的I125-胰岛素。
实验3：使用透皮胰岛素降低血糖
按照实验1准备用于制剂局部给药的斯普拉-道来大鼠(220-300g)。大 鼠禁食过夜(~16h)，并自由供水。
速效人胰岛素类似物LISPRO(Eli Lilly)与2％TPM、30％乙醇、1％卡 波姆和水一起配制形成凝胶(TPM-LISPRO)。治疗组(n＝15)在葡萄糖负荷 之前接收TPM-LISPRO(剂量为32.5U LISPRO/kg体重)的局部治疗30分 钟，以使LISPRO有时间进入全身循环。对照组(n＝15)接收无LISPRO的制 剂。葡萄糖(30％w/v)以2g/kg体重(2ml/300g鼠)的剂量IP注射。
大鼠在整个实验过程中保持麻醉(戊巴比妥)，使用Medisense Optium 血糖监测仪(Abbott)从尾部测定血糖。在葡萄糖负荷后5分钟以及再5分钟 后测量血糖浓度。然后，每10分钟测量血糖，持续~2-2.5小时。将葡萄 糖负荷之前即时测定的血糖浓度从所有随后值中减去，以确定实验中每只 大鼠的血糖变化。计算每个时间点的血糖变化平均值并制成曲线(图3)。 如本研究中使用的非糖尿病大鼠，判断TPM-LISPRO的效力为比对照动物降 低了血糖浓度峰值。
计算各鼠的曲线下面积，并使用Student’s t-检验比较群组。
实验4：使用透皮胰岛素降低血糖
在研究前至少5天准备八只猪，具有两个外科准备的导管。猪被训练 为在大约3:00pm进食，以便其适应过夜禁食。实验设计是具有两个治疗 的单反转，所述两个治疗为含有胰岛素的TPM-02凝胶或不含胰岛素的 TPM-02凝胶。静脉(IV)输注间隔至少1天。在输注当天，每15分钟对猪 取血，持续1小时，以获得应用凝胶之前的基础血糖浓度。30分钟后，开 始输注葡萄糖(0.33g/kg/h)和甲苯噻嗪(0.033mg/kg/h)，血液取样持续另外 3小时。使用血糖测计仪立即分析血液葡萄糖。在研究期间，一只猪中的 导管堵塞，因此只有7只猪进行研究。而且，在取血当天(胰岛素治疗)， 一只猪中的取样导管堵塞。因此，对照猪和胰岛素治疗猪的取血天数分别 未7和6。
使用REML来分析血糖数据，固定效应包括治疗(对照或胰岛素)和取 血时间，而随机模型包括猪和取血日。另外，对预治疗期和最后2个和4 个样品的血糖进行平均。也使用REML分析这些数据，固定效应为取血时 间(在应用凝胶和输注之前或之后)，而随机模型包括猪和取血日。对于后 面的分析，数据经过对数转化。
结果与讨论
预实验1：提高血浆胰岛素浓度
在试验性实验中，TPM-胰岛素的局部应用能够提高血清胰岛素浓度 (图3)。在受治动物中，血清胰岛素浓度的增加在治疗后4小时达到峰值。 对照动物中的胰岛素浓度在该时期下降或未能达到类似治疗动物的浓 度。用于该预实验动物数目少，不可能进行统计学评价；然而，成功透皮 吸收的阳性趋势是显而易见的，保证了在更大量实验中的进一步考察。
实验2：使用放射性探针检测胰岛素透皮吸收
已经在试验性实验中得到了血清胰岛素浓度增加的阳性证据，我们寻 求结论性地证明使用TPM胰岛素的透皮吸收。为此，我们用放射标记的胰 岛素形式配制TPM，使用放射性衰变的目的是监测“热”胰岛素的透皮吸 收和随后在鼠内的分布(如果有)。结果显示，TPM能够成功驱动125I-胰 岛素的透皮吸收(图2)。在应用部位的皮肤内检测的放射性水平与对照动 物相比是显著提高的(p＜0.001)。由于每只猪的皮肤表面经过清洗，所以 该放射性存在于深层皮肤层。重要的是，刚好在应用区域之下的皮下脂肪 与对照相比具有显著(P＜0.05)提高的放射性水平，结论性地证明了TPM驱 动胰岛素透皮吸收至下层组织的能力。
实验3：使用透皮胰岛素降低血糖
已经证明了在与TPM配制时成功的胰岛素透皮吸收，我们寻求检验被 递送的分子是否能够有效进入全身循环以降低血糖。禁食大鼠在局部应用 TPM-LISPRO后30分钟进行葡萄糖耐量测试，在随后间隔期测量血糖(图 4)。使用TPM-LISPRO治疗的动物中的血糖浓度与对照相比显著(p＜0.02) 下降，证明了透皮给药和随后被运送的LISPRO的活性。因此，TPM能够运 送大的活性分子(如胰岛素)穿过皮肤。
实验4：使用透皮胰岛素降低血糖
本研究在如下鼠研究基础上展开：其中葡萄糖耐量测试表明透皮胰岛 素制剂穿过皮肤并且是可生物利用的。其通过使用TPM-02/胰岛素的IV葡 萄糖耐量测试在猪中得到评价。
通过使用IV剂量给药葡萄糖代替最初的口服葡萄糖测试(其没有起 到预期作用)而改进了方法。另外，甲苯噻嗪(防止胰岛素在胰腺释放的 化学物质)与葡萄糖共输注。
TPM-02/胰岛素的总体统计效果是非常显著的(p＜0.005)。最明显的效 果出现在输注后期，此时血糖达到高原值。在高原值，接收透皮胰岛素制 剂的猪中血糖增加是明显较低的，这表示血糖对照中的显著提高。数据表 明，胰岛素透皮吸收了。
葡萄糖和胰岛素分泌抑制剂(如甲苯噻嗪)的同时输注表现为测量胰 岛素透皮吸收的良好模型系统。进一步的工作应该扩展目前模型的用途以 关注透皮给药在更突然的血糖增加过程中的作用，并且应该延长研究时间 以测定所述递送可以持续多久。进一步的研究还可以在适合于靶(即，糖 尿病人)的模型系统上进行，如链唑霉素糖尿病猪。即，化学品链唑霉素 治疗了猪，链唑霉素破坏胰腺的胰岛素分泌细胞，而该细胞使猪患有糖尿 病。
结论：
所提出的结果证明，混合的生育酚磷酸酯(TPM)能够成功驱动大分子 (如胰岛素)的透皮吸收。在应用部位的真皮内、下面的皮下脂肪和血液 中证实了增加的胰岛素浓度。重要的是，葡萄糖耐量测试表明，被递送的 分子是有活性的并能够有效降低血糖。这对糖尿病而言是积极的发现，提 供了如下希望：可获得非侵入性胰岛素给药方法以缓解日注射的不适。
提出使用垂直扩散(Franz)细胞与来自猪和人的皮肤进行实验，来测 试多种制剂变形的通量率和透过性。该技术将加快TPM-胰岛素制剂的优 化。
实施例6
如上所述制备了含有阿托品的制剂。该制剂组成如下：
成分 TPM-02/阿托品 磷酸阿托品 1％ 含有2∶1比例的TP∶T2P的磷酸化生育酚 (TPM)混合物。TP指α-生育酚的单磷酸 酯，且T2P指二-生育酚磷酸酯。 2％ 乙醇 30％ 卡波姆934 1％ 水 至100％
实施例7
将含有2：比例的α-生育酚的单磷酸酯(TP)和二-生育酚磷酸酯(T2P)混 合物的TPM泡囊暴露于模拟的胃液和肠液，以确定本发明的肠制剂是否 能够承受消化道环境。
使用包含荧光染料若丹明6G的2％TPM制备泡囊，并使用荧光激活 细胞分选术(FACS)分析泡囊群体的分布。
根据美国药典制备模拟的胃液和肠液。胃液是胃蛋白酶的酸性溶液， pH1.2。使用胰酶粉末在pH6.8的磷酸缓冲液中制备肠液。
将泡囊分别暴露于两种液体。对模拟胃液的暴露产生较大的泡囊和/ 或泡囊聚集物。对模拟肠液的暴露几乎对泡囊外观没有影响，并且其保持 最初的尺寸分布。
实施例8
如上所述，从TPM络合物制备包含其的制剂，以检验TPM络合物是否 会形成泡囊。该制剂组成如下：
成分 ％w/w 含有2∶1比例的TP∶T2P的月桂基亚胺基 二丙酸生育酚磷酸酯混合物(TPM)。TP 指α-生育酚的单磷酸酯，且T2P指二-生 育酚磷酸酯。 3.2％ 乙醇 30％ 水 至100％
根据该制剂形成泡囊。
本说明书中使用的词语‘包含’及‘包括’不限制要求保护的发明，包括任 何变形或增加。
对本发明的调整和改进对本领域技术人员将是显而易见的。这样的调 整和改进预期包括在本发明范围内。