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采用MDM2：p53相互作用的小分子抑制剂的联合治疗

阅读：486发布：2021-11-29

专利汇可以提供采用MDM2：p53相互作用的小分子抑制剂的联合治疗专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 治疗 癌症或其它 细胞增殖 性 疾病 的 联合治疗 。这样的治疗将 放射治疗 或化疗的使用与MDM2：P53相互作用的小分子 抑制剂 的使用联合起来。，下面是采用MDM2：p53相互作用的小分子抑制剂的联合治疗专利的具体信息内容。

1.抗肿瘤剂和抑制蛋白MDM2与p53之间结合的小分子化合 物的组合在制备用于治疗癌症或其它细胞增殖性疾病的药物中的应 用。
2.权利要求1的应用，其中所述抗肿瘤剂是选自多柔比星、5- 氟尿嘧啶和伊立替康的化合物。
3.权利要求1的应用，其中所述抗肿瘤剂是多柔比星。
4.权利要求1的应用，其中所述小分子化合物是式(I)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
X和Y独立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；
R1、R2、R3和R4独立地是氢、卤素、烷基、链烯基、炔基、环 烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任 选取代的杂芳烷基、烷氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧 基、氰基、氨基、烷酰基氨基、硝基、羟基、羧基或烷氧基羰基；
或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中 u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；
R5是氢、烷基、环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、 任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、 烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨 基羰基烷基；
R6是环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳基烷基 或饱和或部分不饱和杂环，所述每一基团是任选取代的；
R7和R8独立地是氢或烷基；
R9是环烷基、芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、环烷基(烷 基)、芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基团是任选取代的；且
R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或 -(CH2)j-CONRcRd，其中
Rb是氢、烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱 和杂环；
M是阳离子；
Rc和Rd独立地是氢、烷基、羟基烷基、羧基烷基、氨基烷基、 任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代 的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基和任选取代的饱和或部分不饱和杂 环；且
n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
5.权利要求1的应用，其中所述小分子化合物是式(II)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；
n是0；或n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
X是下列化合物的二价基团：C1-6烷烃，任选取代的C6-10芳烃， 任选取代的5-7元杂芳烃，其中1或2个环原子是杂原子，任选取 代的(C6-10芳基)C1-6烷烃，或任选取代的杂芳基(C1-6)烷烃，其中杂芳 基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原子；
R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氢、C1-6烷基或任选取代的C3-8 环烷基，并且M是阳离子；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原于是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；且
R8是氢或C1-6烷基。
6.权利要求1的应用，其中所述小分子化合物是式(III)化合物：

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；
n是0；或者n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；
R8是氢或C1-6烷基；
R9是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、羟基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、 羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基 甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基) 羰基(C1-6)烷基；且
R10是氢或C1-6烷基。
7.权利要求1的应用，其中所述小分子化合物是选自下列的化 合物：合成查耳酮类化合物、降冰片烷衍生物、顺式咪唑啉衍生物 (Nutlins)、吡唑烷二酮磺酰胺、1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮和色氨酸衍 生物。
8.抑制蛋白MDM2与p53之间结合的小分子化合物在制备用 于与放射治疗联合使用来治疗癌症或其它细胞增殖性疾病的药物中的 应用。
9.权利要求8的应用，其中所述小分子化合物是式(I)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
X和Y独立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；
R1、R2、R3和R4独立地是氢、卤素、烷基、链烯基、炔基、环 烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任 选取代的杂芳烷基、烷氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧 基、氰基、氨基、烷酰基氨基、硝基、羟基、羧基或烷氧基羰基；
或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中 u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；
R5是氢、烷基、环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、 任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、 烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨 基羰基烷基；
R6是环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳基烷基 或饱和或部分不饱和杂环，所述每一基团是任选取代的；
R7和R8独立地是氢或烷基；
R9是环烷基、芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、环烷基(烷 基)、芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基团是任选取代的；且
R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或 -(CH2)j-CONRcRd，其中
Rb是氢、烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱 和杂环；
M是阳离子；
Rc和Rd独立地是氢、烷基、羟基烷基、羧基烷基、氨基烷基、 任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代 的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基和任选取代的饱和或部分不饱和杂 环；且
n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
10.权利要求8的应用，其中所述小分子化合物是式(II)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；
n是0；或n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
X是下列化合物的二价基团：C1-6烷烃，任选取代的C6-10芳烃， 任选取代的5-7元杂芳烃，其中1或2个环原子是杂原子，任选取 代的(C6-10芳基)C1-6烷烃，或任选取代的杂芳基(C1-6)烷烃，其中杂芳 基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原子；
R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氢、C1-6烷基或任选取代的C3-8 环烷基，并且M是阳离子；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；且
R8是氢或C1-6烷基。
11.权利要求8的应用，其中所述小分子化合物是式(III)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；
n是0；或者n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；
R8是氢或C1-6烷基；
R9是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、羟基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、 羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基 甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基) 羰基(C1-6)烷基；且
R10是氢或C1-6烷基。
12.权利要求8的应用，其中所述小分子化合物是选自下列的化 合物：合成查耳酮类化合物、降冰片烷衍生物、顺式咪唑啉衍生物 (Nutlins)、吡唑烷二酮磺酰胺、1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮和色氨酸衍 生物。
13.监测抑制蛋白MDM2与p53之间结合的小分子化合物的效果 的方法，所述方法包括以下步骤：
a.从已经被给药抑制蛋白MDM2与p53之间结合的小分子化 合物的个体获取生物样本；和
b.测定其转录由p53调节的基因的基因表达水平。
14.权利要求13的方法，其中所述抑制蛋白MDM2与p53之间 结合的小分子化合物是式(I)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
X和Y独立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；
R1、R2、R3和R4独立地是氢、卤素、烷基、链烯基、炔基、环 烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任 选取代的杂芳烷基、烷氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧 基、氰基、氨基、烷酰基氨基、硝基、羟基、羧基或烷氧基羰基；
或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中 u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；
R5是氢、烷基、环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、 任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、 烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨 基羰基烷基；
R6是环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳基烷基 或饱和或部分不饱和杂环，所述每一基团是任选取代的；
R7和R8独立地是氢或烷基；
R9是环烷基、芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、环烷基(烷 基)、芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基团是任选取代的；且
R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或 -(CH2)j-CONRcRd，其中
Rb是氢、烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱 和杂环；
M是阳离子；
Rc和Rd独立地是氢、烷基、羟基烷基、羧基烷基、氨基烷基、 任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代 的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基和任选取代的饱和或部分不饱和杂 环；且
n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
15.权利要求13的方法，其中所述抑制蛋白MDM2与p53之间 结合的小分子化合物是式(II)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；
n是0；或n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
X是下列化合物的二价基团：C1-6烷烃，任选取代的C6-10芳烃， 任选取代的5-7元杂芳烃，其中1或2个环原子是杂原子，任选取 代的(C6-10芳基)C1-6烷烃，或任选取代的杂芳基(C1-6)烷烃，其中杂芳 基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原子；
R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氢、C1-6烷基或任选取代的C3-8 环烷基，并且M是阳离子；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；且
R8是氢或C1-6烷基。
16.权利要求13的方法，其中所述抑制蛋白MDM2与p53之间 结合的小分子化合物是式(III)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；
n是0；或者n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；
R8是氢或C1-6烷基；
R9是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、羟基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、 羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基 甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基) 羰基(C1-6)烷基；且
R10是氢或C1-6烷基。
17.权利要求13的方法，其中步骤(b)包括测定基因p21waf1/cip1的 基因表达水平。
18.一种药盒，其中所述药盒包括抗肿瘤剂和抑制蛋白MDM2 与p53之间结合的小分子化合物。
19.权利要求18的药盒，其中所述抗肿瘤剂是选自多柔比星、5- 氟尿嘧啶和伊立替康的化合物。
20.权利要求18的药盒，其中所述抗肿瘤剂是多柔比星。
21.权利要求18的药盒，其中所述小分子化合物是式(I)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
X和Y独立地是-C(O)-、-CH2-或-C(S)-；
R1、R2、R3和R4独立地是氢、卤素、烷基、链烯基、炔基、环 烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任 选取代的杂芳烷基、烷氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧 基、氰基、氨基、烷酰基氨基、硝基、羟基、羧基或烷氧基羰基；
或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4一起形成-(CH2)u-，其中 u是3-6，-CH＝CH-CH＝CH-或-CH2CH＝CHCH2-；
R5是氢、烷基、环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、 任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、 烷氧基羰基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨 基羰基烷基；
R6是环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳基烷基 或饱和或部分不饱和杂环，所述每一基团是任选取代的；
R7和R8独立地是氢或烷基；
R9是环烷基、芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、环烷基(烷 基)、芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基团是任选取代的；且
R10是-(CH2)n-CO2Rb、-(CH2)m-CO2M、-(CH2)i-OH或 -(CH2)j-CONRcRd，其中
Rb是氢、烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱 和杂环；
M是阳离子；
Rc和Rd独立地是氢、烷基、羟基烷基、羧基烷基、氨基烷基、 任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代 的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基和任选取代的饱和或部分不饱和杂 环；且
n是0-8，m是0-8，i是1-8，且j是0-8。
22.权利要求18的药盒，其中所述小分子化合物是式(II)化合物

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、烷硫基、氨基或硝基；
n是0；或n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
X是下列化合物的二价基团：C1-6烷烃，任选取代的C6-10芳烃， 任选取代的5-7元杂芳烃，其中1或2个环原子是杂原子，任选取 代的(C6-10芳基)C1-6烷烃，或任选取代的杂芳基(C1-6)烷烃，其中杂芳 基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原子；
R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氢、C1-6烷基或任选取代的C3-8 环烷基，并且M是阳离子；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；且
R8是氢或C1-6烷基。
23.权利要求18的药盒，其中所述小分子化合物是式(III)化合 物：

或其溶剂化物、水合物或可药用盐；其中：
每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基或硝基；
n是0；或者n是1并且Ra出现在7或8位；或者n是2并且Ra 出现在7和8位；
R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的，
R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其中1或2个环原 子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基，其 中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子，或 者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的；
R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；
R8是氢或C1-6烷基；
R9是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、羟基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、 羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基 甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基) 羰基(C1-6)烷基；且
R10是氢或C1-6烷基。
24.权利要求18的药盒，其中所述小分子化合物是选自下列的 化合物：合成查耳酮类化合物、降冰片烷衍生物、顺式咪唑啉衍生物 (Nutlins)、吡唑烷二酮磺酰胺、1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮和色氨酸衍 生物。

说明书全文

                      发明领域

本发明涉及治疗癌症或其它增殖性疾病的领域。特别是，本发明 涉及采用MDM2：p53相互作用的小分子抑制剂的联合治疗。

HDM2是hdm2的表达产物，hdm2是在各种癌症特别是软组织 肉瘤中过度表达的癌基因(Momand，J.等人，Nucl.Acids Res.26： 3453-3459(1998))。

p53是转录因子，其在细胞增殖与细胞生长停滞/编程性细胞生长 死亡之间平衡的调节中起着关键性作用。在正常条件下，p53的半寿 期非常短，因而相应地细胞中p53的水平就低。然而，为响应细胞DNA 损伤、细胞应力或其它因素，p53的水平就会升高。p53水平的升高 反过来又提高诱导细胞生长停滞或进行编程性细胞生长死亡(即受控 制的细胞死亡)的多个基因的转录。p53的功能是阻止细胞的不受控 制的增殖，因此保护机体免于癌症的发展(回顾，参见Levine，A.J.， 细胞88：323-331(1997))。

p53是潜伏而短寿的转录因子，其被多个细胞应力，包括DNA 损伤、UV损伤、纺锤体损伤、低氧、炎性细胞因子、病毒感染、激 活的癌基因和核糖核苷酸耗尽诱导并且是关于它们的整合点。p53的 激活调节基因表达的平衡中的变化，这样，涉及增殖的许多基因的表 达受到抑制，同时涉及生长停滞(例如p21WAF1和GADD45)、修 复(例如p53RE)和编程性细胞生长死亡(例如Bax，Killer/DR5和 PIGs)的基因被激活。p53激活的生物结果(无论是持久还是短暂的 生长停滞或编程性细胞生长死亡)取决于若干因素，包括诱导应力的 类型和强度以及细胞或组织的类型。

p53和MDM2存在于负调节反馈环中，其中p53刺激mdm2基 因的转录，而MDM2结合p53并以其为目标由26S蛋白酶体进行降 解。p53诱导过程中的关键因素是p53-MDM2复合物的破裂，所述复 合物使p53在胞核中蓄集。这种机制似乎是p53由此被激活的所有通 路而共有的，虽然近来的证据显示在这种激活实际实现的分子事件中 有相当的变化。

p53肿瘤抑制基因的失活在人肿瘤形成中是时常发生的事件。这 种失活可以通过p53基因的突变或者通过结合病毒或细胞癌基因蛋白 例如SV40大T抗原和MDM2而发生。尽管野生型p53抑制肿瘤细 胞生长的机制还没有定论，但生长抑制的一个关键特征是p53作为转 录因子起作用的特性是清楚的(Farmer，G.等人，Nature 358：83- 86(1992)；Funk，W.D.等人，Mol.Cell.Biol.12：2866-2871(1992)；Kern， S.E.，等人，Science 256：827-830(1992))。目前，人们正在努力去发现 通过p53结合到接近或在这些基因内的序列元件来调节生长控制的基 因。若干这样的基因已经被发现。在例如肌肉肌酸激酶基因 (Weintraub，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，88：4570-4571 (1991)；Zambetti，G.P.等人，Genes Dev.6：1143-1152(1992))和GLN 反转录病毒元件(Zauberman，A.等人，EMBO J.12：2799-2808(1993)) 的情况下，这些基因在生长控制的抑制中可能起的作用是不清楚的。 然而有其它的实例，即mdm2(Barak，Y.等人，EMBO J.12：461- 468(1993)；Wu，X.等人，Genes Dev.7：1126- 1132(1993))GADD45(Kastan，M.B.等人，Cell 71：587-597(1992))和 WAF1或CIP1(E1-Beiry，W.S.等人，Ceu 75：817-825(1993)；Harper， J.W.等人，Ceu 75-805-816(1993))，其中它们在细胞生长调节中的参 与得到较好的了解。

mdm2-一种已知的癌基因，最初是在小鼠双微染色体中发现的 (Cahilly-Snyde r.，L.等人，Somatic Cell Mol.Genet.13：235-244(1987))。 它的蛋白产物其后被发现与p53形成复合物，所述复合物是首先在预 先用温度敏感小鼠p53基因转染的大鼠成纤维细胞系(Clone 6)中发现 的(Michalovitz，D.等人，Cell 62：671-680(1990))。大鼠细胞系在37℃ 生长良好，但是当减至32℃时显示G1停滞，这与在p53构像和活性 中观察到的温度依赖开关是完全一致的。然而，p53-MDM2复合物只 是在32℃被大量地观察到，在该温度p53主要是功能或“野生型”形 式(Barak，Y.等人，EMBO J.11：2115-2121(1992)和Momand，J.等人， Cell 69：1237-1245(1992))。通过将大鼠细胞系温度减至32℃并阻断 novo蛋白的合成，结果显示只是“野生型”p53诱导mdm2基因的表 达，由此可以从p53转录活性的意义上解释复合物的不同数量(Barak， Y.等人，EMBO J.12：461-468(1993)。这种解释通过野生型p53在mdm2 基因的第一内含子内的DNA结合位点的发现而得到进一步的发展 (Wu，X.等人，Genes Dev.7：1126-1132(1993))。利用这种p53DNA结 合位点的报道基因构建物揭示，当野生型p53与MDM2共同表达时 它们是失活的。

这种p53转录活性的抑制，可以通过MDM2阻断p53的激活域 和/或DNA结合位点引起。因此，提出mdm2的表达是经由MDM2 蛋白对野生型p53的转录活性的抑制作用而自动调节的。这种p53- mdm2自动调节反馈环提供了关于细胞生长如何被p53调节的新见 解。最高达三分之一的人肉瘤被认为是通过扩增hdm2基因(mdm2的 人同源物)来克服p53调节的生长控制(Oliner，J.D.等人，Nature 358：80- 83(1992))。因此，p53与HDM2之间的相互作用代表关键的潜在治疗 目标。MDM2能够促进肿瘤发生的一个机制是通过它对p53的抑制作 用。p53的肿瘤抑制功能在细胞周期的控制中控制决定性关卡(综述于 Levine，A.J.，Cell 88：323-331(1997))。p53是通过编程性细胞死亡引起 细胞周期停滞或细胞死亡的多种蛋白的转录因子。细胞DNA损害提 高p53的水平和转录活性。MDM2蛋白通过结合到p53两亲性N-末 端螺旋，取消p53与其它蛋白的相互作用和它的转录活性来抑制p53 功能。与MDM2的相互作用也在遍在蛋白依赖的蛋白退化方面使p53 成为目标。通过与一些下游区效应子例如pRB和EF2的直接相互作 用，MDM2也显示p53对细胞周期的独立作用(综述于Zhang，R.和 Wang，H.，Cur.Pharm.Des.6：393-416(2000))。

在恢复对过度表达HDM2的细胞的细胞周期控制中，作为一线 癌症治疗，阻断HDM2结合p53是治疗有用的。更一般地说，抑制 HDM2可以通过增强编程性细胞死亡和生长停滞信号通路，而在p53 正常癌症中提高化疗和放射的疗效。

开发使用抑制HDM2与p53之间相互作用的小分子的新治疗策 略，是继续存在的需要。

                      发明背景

                      相关技术

化疗或放射与p53激活剂的联合使用可以产生增强的抗肿瘤活 性。例如，临床试验表明，患有晚期癌症的患者对使用化疗和放射与 抗瘤酮A10和AS2-1的联合治疗反应良好(Tsuda等人，2002，Oncology Reports，9(1)：65-68)。抗瘤酮通过启动子序列的脱甲基化和组蛋白的 乙酰化来调节基因p53和p21的表达(Burzynski，2004，Integr Cancer Ther.，3(1)：47-58)。有人提出p53基因治疗与化疗的组合可以在患有 软组织肉瘤(STS)的患者中提高疗效(Zhan等人，2001，Cancer，92(6)： 1556-1566)。另外，当将反义抗HDM2寡核苷酸与癌症化疗和放射治 疗联合使用时探测到化学敏感化和放射敏感化(Wang等人，2003， Annals of the New York Academy of Sciences，1002(Therapeutic Oligonucleotides)：217-235)。

虽然联合治疗效果已经被提高p53的基因表达和降低mdm2的基 因表达的各种基因疗法所证明，但HDM2：p53相互作用的小分子抑制 剂在这样的联合治疗中是否同样有效仍然是不确定的。

                      发明概述

本发明涉及使用第一种形式的化疗剂与抑制HDM2和p53之间 相互作用的小分子的联合治疗，这样第一种形式的化疗剂的抗肿瘤活 性得以提高。

本发明的一般方面是抑制细胞生长的方法，包括步骤：a)向细胞 给药抗肿瘤剂；和b)向细胞给药抑制蛋白MDM2和p53之间结合的 小分子。

本发明的另一个一般方面是抑制细胞生长的方法，包括步骤a)将 细胞暴露于放射治疗中；和b)向细胞给药抑制蛋白MDM2和p53之 间结合的小分子。

在一个优选的实施方案中，所述抗肿瘤剂是多柔比星。

在另一实施方案中，抑制蛋白MDM2与p53之间结合的化合物 是苯并二氮杂二酮类化合物，所述化合物描述于WO2003041715或 WO2004096134中。WO2003041715和WO2004096134中的描述本文 将其引用作为参考。

本发明还提供了监测抑制蛋白MDM2与p53之间结合的小分子 的效果的方法，包括以下步骤a)从被给药抑制蛋白MDM2与p53 之间结合的小分子的个体获得样本；和b)测定其转录被p53调节的基 因的基因表达水平。

在一个实施方案中，其转录被p53调节的基因是p21waf1/cip1基因。

                    附图的简要描述

图1.TDP665759以野生型p53依赖方式抑制细胞增殖。将乳腺 癌细胞，MCF7(wtp53)和MDA-MB-231(突变型p53)，在用TDP665759 处理72小时之前粘连过夜。测定BrdU掺入的量。将结果表示为相对 于用DMSO载体对照处理的细胞的抑制百分比。图中显示的是4个 独立研究的代表性试验，其中误差条代表一式三份样本的标准偏差。 MCF7：方块，IC50＝0.5μM；MDA-MB-231：三角形，IC50＞5μM。

图2.TDP521252诱导HepG2细胞中半胱天冬酶-3和-7的活性。 按照指示，将HepG2细胞用TDP521252、TDP536356或载体对照处 理8-48小时。在该时间点的终点，将细胞裂解，加入半胱天冬酶底 物，并且在2小时的时间内，每20分钟测定一次活性。将比活性记 录为，加入底物后，20分钟-40分钟之间的时间框架内，每分钟每μg 全部蛋白的活性速度。TDP521252：圆；TDP536356：方块；和DMSO： 菱形。

图3.TDP521252调节p53通路。使HepG2肝细胞癌细胞经受 TDP521252或TDP536356处理1、2、4或8小时，然后收获全部细 胞RNA。进行定量RT-PCR以测定图中所示p53目标基因的上调。 将结果标准化为GAPDH，并表示为相对于时间0的增加倍数。所示 结果是两个单独试验的代表。TDP521252：p21(实心圆)；PIG3(实心 方块)；Hdm2(实心三角形)；p53(星形)；PUMA(实心菱形)。 TDP536356：p21(空心圆)。DMSO：p21(空心三角形)。

图4.TDP665759在体内诱导p21waf1/cip1。将裸小鼠用25或50mg/kg  TDP665759腹膜内注射b.i.d.4天或者在第3天用10mg/kg多柔比星 腹膜内注射一次。在第4天第一次剂量给予后6小时，将小鼠杀死并 获取肝进行总RNA提取。进行定量PCR以测定肝组织中p21waf1/cip1 的相对比率。将数据表示为每组3个单独动物的平均值±S.D.。*表示 通过ANOVA确定的与载体对照的统计学差异(P＜0.05)和通过后hoc Newman-Keul’s检验确定的治疗之间的差异。

图5.TDP665759与多柔比星协同抑制A375肿瘤生长。将A375 黑素瘤异种移植物在雌性裸小鼠中建立并使其达到80-120mg尺寸。 此时，将小鼠随机分配到治疗组中，并用载体(20.25％羟丙基-β-环糊 精(cyclodextran)(bid×10)、100mg/kg TDP665759(bid×10)、1.5或3 mg/kg多柔比星(Qd×5)或100mg/kg TDP665759(bid×10)+1.5mg/kg 多柔比星(Qd×5)的组合开始治疗。对小鼠每天进行一般健康监测，并 且每3或4天测量肿瘤大小。当肿瘤大小超过2克时将小鼠安乐死。 此中所表示的数据是肿瘤块的平均值±S.D.。载体：方块；向上的三角 形：3mg/kg多柔比星；向下的三角形：1.5mg/kg多柔比星；菱形： 100mg/kg TDP665759；圆：100mg/kg TDP665759+1.5mg/kg多柔比 星。

                优选实施方案的详细描述

本发明涉及与HDM2和/或MDM2结合的一类新的小分子化合物 在联合治疗中的应用。通过干扰HDM2-p53或MDM2-p53相互作用， 这些化合物提高了p53的细胞内浓度。因此，这些小分子化合物在增 强肿瘤细胞对化疗的敏感性方面具有治疗用途。在对于功能性p53的 提高特别敏感的肿瘤类型中，这种类型的化合物足以诱导编程性细胞 死亡。本发明化合物也适用于治疗其中HDM2或MDM2过度表达的 肿瘤类型。

本发明化合物包括式I化合物：

或其溶剂化物、水合物或可药用盐，

其中

R1和R2独立地是氢、烷基、链烯基、炔基、任选取代的环烷基、 任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选 取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、烷氧基、任选取代的芳氧基、 任选取代的杂芳氧基、氰基、氨基、烷酰基氨基、硝基、羟基、羧基 或烷氧基羰基；或者R1和R2与它们所连接于其上的两个碳原子一起 形成5-10元非芳族或6-10元芳族碳环或者其中1或2个环原子是 杂原子的5-10元芳族或非芳族环，其中每一个环任选被Ra取代1- 4次，其中每次出现的Ra独立地是氢、卤素、任选取代的烷基、任选 取代的链烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的芳 基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、 烷氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧基、氰基、任选取代 的氨基、氨基甲酰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷酰基氨基、 硝基、羟基、羧基、烷氧基羰基或酰基、任选取代的烷硫基、任选取 代的三氟烷硫基、任选取代的羟基亚胺烷基；

X是下列化合物的二价基团：任选取代的烷烃、任选取代的环烷 烃、任选取代的芳烃、任选取代的杂芳烃、任选取代的芳烷烃或任选 取代的杂芳烷烃、任选取代的胺；且

R3是-CO2Rd、-CO2M、-OH、-ORd、-NHRd、-NRdRd、-SO2Rd、 -NHCONHRd、-NHCONRdRd、-CH2Rd，任选取代的脒基或任选取代 的胍基，其中Rd是氢、烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的环烷 基或任选取代的饱和或部分不饱和杂环，并且M是阳离子或H；

或者R3-X-是氢或电子对；

R4是氧、两个氢或-NR9R10，其中R9和R10独立地是氢、任选取 代的烷基、环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代 的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰 基烷基、氨基羰基、氨基羰基烷基、烷基氨基羰基或烷基氨基羰基烷 基、烷氧基；

或者R3和R4与它们所连接于其上的两个碳原子一起形成5-10 元非芳族或6-10元芳族碳环，或者其中1或2个环原子是杂原子的 5-10元芳族或非芳族环，其中每一个环任选被Ra取代1-4次，其 中Ra如上面所定义；

R5是环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基或 者饱和或部分不饱和杂环，所述每一基团是任选取代的；

R6、R7和R8独立地是氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、饱和 或部分不饱和杂环、环烷基烷基、芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基 团是任选取代的；或者R6和R7与它们所连接于其上的碳原子一起形 成任选被Ra取代1-3次的3-7元碳环，其中Ra如上面所定义；

R11是烷基、环烷基、芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、 芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基团是任选取代的。

有用的R1和R2包括氢，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，任选 取代的C3-8环烷基，任选取代的C3-8环烷基(C1-4)烷基，任选取代的苯 基，任选取代的萘基，任选取代的苯基(C1-6)烷基，任选取代的萘基(C1-6) 烷基，任选取代的杂芳基，所述杂芳基具有5-7个环原子，其中1 或2个环原子是杂原子，任选取代的杂芳基(C1-6)烷基，其中杂芳基部 分具有5-7个环原子，而1或2个环原子是杂原子，C1-6烷氧基，任 选取代的苯氧基，任选取代的苄氧基，任选取代的萘氧基，任选取代 的杂芳基氧基，其中杂芳基部分具有5-7个环原子，而1或2个环 原子是杂原子，氰基，氨基，(C1-6烷酰基)氨基，硝基，羟基，羧基或 (C1-6烷氧基)羰基。特别有用的R1和R2包括氢，任选取代的苯基，任 选取代的苄基，任选取代的环戊基，任选取代的环己基，任选取代的 C3-8环烷基(C1-4)烷基和C1-6烷基。

还有用的是，R1和R2与它们所连接于其上的两个碳原子一起形 成任选取代的芳族或非芳族的5-7元环，其中0、1或2个环原子是 杂原子。以这种方式形成的特别有用的环包括任选取代的苯和任选取 代的吡啶。

当R1和R2与它们所连接于其上的两个碳原子一起形成环时，所 述环任选被Ra取代一次或多次，优选1或2次。

有用的Ra包括氢，卤素，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，C3-8 环烷基，任选取代的C6-10芳基，任选取代的(C6-10芳基)C1-6烷基，任 选取代的烷硫基，任选取代的5-7元杂芳基，任选取代的杂芳基(C1-6) 烷基，其中杂芳基部分具有5-7个环原子，而1或2个环原子是杂 原子，C1-6烷氧基，任选取代的(C6-10芳基)氧基，任选取代的杂芳基氧 基，其中杂芳基部分具有5-7个环原子，而1或2个环原子是杂原 子，氰基，氨基，氨基甲酰基，(C1-6烷基)氨基羰基，二-(C1-6烷基)氨 基羰基，(C1-6烷酰基)氨基，硝基，羟基，羧基，(C1-6烷氧基)羰基和 C1-6酰基。

特别有用的X包括下列化合物的二价基团：C1-6烷烃，任选取代 的C6-10芳烃，任选取代的5-7元杂芳烃，其中1或2个环原子是杂 原子，任选取代的(C6-10芳基)C1-6烷烃，和任选取代的杂芳基(C1-6)烷 烃，其中杂芳基部分具有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是 杂原子。优选的X包括下列化合物的二价基团：C1-6烷烃、任选取代 的苯、任选取代的呋喃、任选取代的噻吩、任选取代的吡咯和任选取 代的吡啶。更优选的X包括下列化合物的二价基团：甲烷、乙烷、正 丙烷、正丁烷、正戊烷、正己烷、苯和呋喃。当X是烷烃的二价基团 时：优选烷烃具有至少3个碳原子；优选烷烃是非支链；并且优选X 是α，ω-二价基团。

特别有用的R3包括-CO2Rd和-CO2M，其中Rd是氢、C1-6烷基或 任选取代的C3-8环烷基，并且M是阳离子。优选的R3包括-CO2Rd和 -CO2M，其中Rd是氢或C1-6烷基，且M是阳离子。更优选的R3包括 -CO2Rd，其中Rd是氢或C1-4烷基。最优选的是COOH。

特别有用的R5包括C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其 中1或2个环原子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂 芳基)烷基，其中杂芳基部分具有5-7个环原子并且其中1或2个环 原子是杂原子，和5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环 原子是杂原子，其中每一前述基团是任选取代的。优选的R5是任选 取代的苯基。当R5是苯基时，优选在4位上被取代1次或者在3和4 位上被取代2次，而优选被卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基和/或 氨基取代。更优选的R5包括4-氯苯基、4-三氟甲基苯基、4-三氟甲氧 基苯基、4-氯-3-硝基苯基、3-氨基-4-氯苯基和3-溴苯基。

特别有用的R6包括C3-8环烷基，C6-10芳基，5-7元杂芳基，其 中1或2个环原子是杂原子，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂 芳基)烷基，其中杂芳基部分具有5-7个环原子并且其中1或2个环 原子是杂原子，和5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环 原子是杂原子，其中每一前述基团是任选取代的。优选的R6包括任 选取代的苯基、任选取代的苄基、任选取代的吡啶基和任选取代的萘 基。更优选的是任选取代的苯基。当R6是取代的苯基或取代的苄基 时，优选在对位上被取代1次或者在间位和对位上被取代2次，或者 在邻位和对位上被取代2次，而优选被卤素、硝基和/或氨基取代。更 优选的R6包括苯基、4-氯苯基、3，4-二氯苯基、2-氨基-4-氯苯基、2- 氨基-4-氯-5-氟苯基、3-氨基-4-氯苯基和4-氯-3-硝基苯基。优选的R6 还包括对氯苄基和4-甲基-1-萘基。

特别有用的R7包括氢、C1-6烷基、C3-8环烷基和(C3-8环烷基)烷基。 优选的R7包括氢、C1-6烷基和C3-6环烷基。更优选的R7包括氢、甲 基和环丙基。

特别有用的R8包括氢和C1-6烷基。优选的R8包括氢、甲基和乙 基。更优选的是氢。

特别有用的R9包括氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、羟基(C1-6)烷基、 氨基(C1-6)烷基、羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基 (C1-6)烷基、氨基甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基 和(C1-6烷基氨基)羰基(C1-6)烷基。优选的R9包括氢、C1-6烷基、羟基(C1-6) 烷基、氨基(C1-6)烷基和氨基甲酰基(C1-6)烷基。更优选的R9包括氢、 甲基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、2-氨基乙基、氨基甲酰基甲基和氨 基甲酰基乙基。

特别有用的R10包括氢和C1-6烷基。优选的R10包括氢、甲基和乙 基。更优选的是氢。

在-个优选的实施方案中，本发明化合物是式II化合物：

或其溶剂化物、水合物或可药用盐，其中Ra、R3、X、R5、R6、R7和 R8如式I所定义，并且n是0、1、2、3或4。

在该实施方案中，特别有用和优选的R3、X、R5、R6、R7和R8 如式I化合物所描述。

在该实施方案中，特别有用的Ra包括卤素、C1-6烷基、C2-6链烯 基、C2-6炔基、氰基、C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷 氧基)羰基、C1-6酰基、氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基和硝基。 优选的Ra包括卤素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基和 氨基甲酰基。更优选的Ra包括碘、溴、氯、乙炔基、乙酰基、甲氧 基羰基、羧基和氨基甲酰基。

在该实施方案中，特别有用的n包括0、1和2。优选的n包括1 和2。更优选是1。当n是1时，Ra出现在7或8位，更优选在7位。 当n是2时，Ra优选出现在7和8位。

一组优选的化合物是式II化合物，其中：

每一Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、氰基、 C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6酰基、 氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基或硝基、烷硫基；

n是0、1或2；当n是1时，Ra出现在7或8位；当n是2时， Ra出现在7和8位；

X是下列化合物的二价基团：C1-6烷烃，任选取代的C6-10芳烃， 任选取代的5-7元杂芳烃，其中1或2个环原子是杂原子，任选取 代的(C6-10芳基)C1-6烷烃，或任选取代的杂芳基(C1-6)烷烃，其中杂芳 基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原子；

R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氢、C1-6烷基或任选取代的C3-8 环烷基，并且M是阳离子；

R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，其中1或2个环原子是杂原子的5 -7元杂芳基，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基， 其中杂芳基部分含有5-7个环原子并且1或2个环原子是杂原子， 或者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原子， 其中每一前述基团是任选取代的。

R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，其中1或2个环原子是杂原子的5 -7元杂芳基，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基， 其中杂芳基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原 子，或5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原 子，其中每一前述基团是任选取代的；

R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；和

R8是氢或C1-6烷基。

一组优选的化合物是式II化合物，其中

每一Ra独立地是卤素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6 酰基或氨基甲酰基；

n是1或2；当n是1时，Ra出现在7位；当n是2时，Ra出现 在7和8位；

X是下列化合物的二价基团：C1-6烷烃、任选取代的苯、任选取 代的呋喃、任选取代的噻吩、任选取代的吡咯或任选取代的吡啶；

R3是-CO2Rd或-CO2M，其中Rd是氢或C1-6烷基，并且M是阳离 子；

R5是任选取代的苯基；

R6是任选取代的苯基、任选取代的苄基、任选取代的吡啶基或任 选取代的萘基；

R7是氢、C1-6烷基或C3-6环烷基；且

R8是氢。

在一个优选的实施方案中，本发明化合物是式III化合物：

或其溶剂化物、水合物或可药用盐，其中Ra、R5、R6、R7、R8、R9 和R10如式I化合物所定义，并且n是0、1、2、3或4。

本领域的技术人员将会认识到，当R4是-NR9R10时，式I化合物 是脒，当R9和R10中至少一个是氢时，所述脒存在于互变异构形式之 间的平衡。尽管式III只是例证说明了一种形式，但本发明意图包括 两种互变异构体。

在该实施方案中，特别有用和优选的R5、R6、R7、R8、R9和R10 如式I化合物所描述。

在该实施方案中，特别有用的Ra包括卤素、C1-6烷基、C2-6链烯 基、C2-6炔基、氰基、C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷 氧基)羰基、C1-6酰基、氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫 基和硝基。优选的Ra包括卤素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、 C1-6酰基和氨基甲酰基。更优选的Ra包括碘、溴、氯、乙炔基、乙酰 基、甲氧基羰基、羧基和氨基甲酰基。

在该实施方案中，特别有用的n包括0、1和2。优选的n包括1 和2。更优选是1。当n是1时，Ra优选出现在7或8位，更优选在 7位。当n是2时，Ra优选出现在7和8位。

一组优选的化合物是式III化合物，其中

每一情况下，Ra独立地是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 氰基、C3-8环烷基、羟基、C1-6烷氧基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6 酰基、氨基甲酰基、(C1-6烷基)氨基羰基、氨基、烷硫基和硝基；

n是0、1或2；当n是1时，Ra出现在7或8位；当n是2时， Ra出现在7和8位。

R5是C3-8环烷基，C6-10芳基，其中1或2个环原子是杂原子的5 -7元杂芳基，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基， 其中杂芳基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原 子，或者5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂 原子，其中每一前述基团是任选取代的。

R6是C3-8环烷基，C6-10芳基，其中1或2个环原子是杂原子的5 -7元杂芳基，(C3-8环烷基)烷基，(C6-10芳基)烷基，(杂芳基)烷基， 其中杂芳基部分含有5-7个环原子并且其中1或2个环原子是杂原 子，或5-7元饱和或部分不饱和杂环，其中1或2个环原子是杂原 子，其中每一前述基团是任选取代的；

R7是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或(C3-8环烷基)烷基；

R8是氢或C1-6烷基；

R9是氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、羟基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基、 羧基(C1-6)烷基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷氧基)羰基(C1-6)烷基、氨基 甲酰基、氨基甲酰基(C1-6)烷基、(C1-6烷基氨基)羰基或(C1-6烷基氨基) 羰基(C1-6)烷基；且

R10是氢或C1-6烷基。

一组更优选的化合物是式III化合物，其中：

每一Ra独立地是卤素、C2-6炔基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、C1-6 酰基或氨基甲酰基；

n是1或2；当n是1时，Ra出现在7位；当n是2时，Ra出现 在7和8位；

R5是任选取代的苯基；

R6是任选取代的苯基、任选取代的吡啶基、任选取代的苄基或任 选取代的萘基；

R7是氢、C1-6烷基或C3-6环烷基；

R8是氢；

R9是氢、C1-6烷基、羟基(C1-6)烷基、氨基(C1-6)烷基或氨基甲酰基 (C1-6)烷基；和

R10是氢。

本发明的第二个方面涉及药物组合物，所述药物组合物包括

a)至少一种式1的化合物或其可药用盐；和

b)一种或多种可药用赋形剂。

优选地，所述药物组合物是无菌的。

本发明的第三个方面涉及抑制mdm2编码的蛋白与p53蛋白结合 的方法，所述方法包括将p53或一种或多种mdm2编码的蛋白与一种 或多种式I化合物接触，其中R1-R8和X如上面所定义。

本发明的第四个方面涉及诱导编程性细胞死亡的方法，所述方法 包括使动物与包含药物有效量的至少一种式I化合物或其可药用盐， 其中R1-R8和X如上面所定义，和任选一种或多种可药用赋形剂的 组合物接触。

本发明的第五个方面涉及治疗癌症的方法，所述方法包括使动物 与(a)药物有效量的抗肿瘤剂，和(b)药物有效量的至少一种式I化合物 或其可药用盐，其中R1-R11和X如上面所定义，和任选一种或多种 与(a)、(b)或(a)和(b)组合的可药用赋形剂接触。

本发明的第六个方面涉及治疗癌症的方法，所述方法包括使动物 与包含(a)药物有效量的至少一种式I化合物或其可药用盐，其中R1- R11和X如上面所定义，(b)至少一种或多种诱导或引起DNA损害的 活性剂，和任选(c)一种或多种可药用赋形剂的组合物接触。

本发明的第七个方面涉及制备式I化合物的方法。

本发明范围内的化合物描述于实施例中。优选的化合物的实例包 括：5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，3，4，5-四氢 苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯 苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1- 基}-戊酸；5-[4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三 氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；5-[4-[(R)- 1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三氟甲氧基-苯基)- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；6-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4- [(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮 杂-1-基}-己酸；7-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基1-7-碘- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-庚酸；4-{(3S)-3-(4- 氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并 [e][1，4]二氮杂-1-基甲基}-苯甲酸；4-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4- 氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1- 基}-丁酸；3-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二 氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-丙酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯 基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4] 二氮杂-1-基甲基}-呋喃-2-甲酸；5-{(3S)-8-氯-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1- (4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1- 基}-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-4-[(4-氯苯基)-环丙基-甲基]-7-碘-2，5-二氧 代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-4-[1- (3，4-二氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂 -1-基}-戊酸；5-[4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5- 二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸；5-[4-[1-(4-氯-3- 硝基苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4] 二氮杂-1-基]-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-7-碘-4-[1-(4-甲基-萘-1-基)-乙 基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；5-[4-(4- 氯苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂 -1-基]-戊酸；5-{3-(4-氯苯基)-4-[2-(4-氯苯基)-1-甲基-乙基]-7-碘-2，5- 二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(3-溴- 苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并 [e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；[4-苄基-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-乙酸；5-{(3S)-3-(4-氯-3-硝基- 苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并 [e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；5-{(3S)-7-乙酰基-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1- (4-氯苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}- 戊酸；5-{(3S)-3-(3-氨基-4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；(3S)-2-氨基- 3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氢-苯并[e][1，4]二氮 杂-5-酮；2-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代 -4，5-二氢-3H-苯并[e][1，4]二氮杂-2-基氨基}-乙酰胺；(3S)-3-(4-氯-苯 基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2-(2-羟基-乙基氨基)-7-碘-3，4-二氢苯并 [e][1，4]二氮杂-5-酮；(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]- 2-(3-羟基-丙基氨基)-7-碘-3，4-二氢-苯并[e][1，4]二氮杂-5-酮；N-(2- {(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代-4，5-二氢- 3H-苯并[e][1，4]二氮杂-2-基氨基}-乙基)-乙酰胺；(3S)-3-(4-氯-苯基)- 4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2-甲基氨基-3，4-二氢-苯并[e][1，4]二氮 杂-5-酮；2-(2-氨基-乙基氨基)-(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯 基)-乙基]-7-碘-3，4-二氢-苯并[e][1，4]二氮杂-5-酮；2-[N-(3-氨基-3-氧 代丙基)氨基]-(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-3，4-二 氢-1，4-苯并二氮杂-5-酮；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙 基]-7-甲氧基羰基-2，5-二氧代-3，4-二氢-1H-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸 叔丁酯；(3S)-1-(4-叔丁氧基羰基-丁基)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯- 苯基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-7-甲 酸；7-氨基羰基-5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二 氧代-3，4-二氢-1H-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸；5-[4-(4-氯-2-甲基-苄 基)-3-(R，S)-(4-氯-苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮 杂-1-基]-戊酸；5-{(3R)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7- 碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基)-戊酸钠；5- [(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-[(R，S)-1-羟基乙基]-2，5- 二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸；5-[(R，S)-3-(4-氯 苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羟基乙基)-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸；5-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯 基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4] 二氮杂-1-基]-戊酸；5-{(S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]- 7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠； 5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R，S)-1-(4-氯苯基)-2-羟基乙基]-7-碘-2，5-二 氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯 基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4] 二氮杂-1-基}-戊酸钠；5-[(3R，S)-4-(4-氯-2-甲基-苄基)-3-(4-氯-苯基)- 7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸；5- {(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)- 1-(4-氯苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羟基乙基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并 [e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸；5-[(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯 基)乙基]-7-[(R，S)-1-羟基-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二 氮杂-1-基]-戊酸；5-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 3-(4-三氟甲基-苯基)-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸；5- {(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠；5-{3-(4-氯苯基)-4-[1- (4-氯苯基)-2-羟基-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮 杂-1-基}-戊酸；5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠；5-[(3S)-3- (4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二 氮杂-1-基]戊酸；5-[(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲 硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4- [(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂- 1-基]戊酸；5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]- 7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸；5-[(3S)-3-(4-氯-2-羟基 苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基] 戊酸；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-苯 基-1，4-二氮杂-1-基]戊酸钠盐；5-[(3S)-7-(2-溴苯基)-3-(4-氯苯基)-4- [(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-1，4-二氮杂-1-基]戊酸钠盐；5- [(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2，5-二基苯基)-2，5-二氧 代-1，4-二氮杂-1-基]戊酸钠盐；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯 基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸钠 盐；5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4- 苯并二氮杂-1-基]戊酸钠盐；5-[4-[(2-氨基-4-氯苄基]-7-溴-3-(4-氯苯 基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸钠盐；4-(4-氯-苄基)-3-(4- 氯-苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-(R)-[1-(2- 氨基-4-氯-5-氟-苯基)-乙基]-3(S)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙 基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4(R，S)-[1-(2-氨基-4- 氯-5-羟基-苯基)-乙基]-3(S，R)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙基)- 3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；3(S)-(4-氯-2-羟基-苯基)- 4(R)-[1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5- 二酮；4-[1-(2-氨基-4-氯-苯基)-乙基]-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基- 哌嗪-1-基)-丙基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-(2-氨 基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-1-(4-二甲基氨基-丁基)-7-碘-3，4-二氢-1H- 苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7- 碘-1-(4-吗啉-4-基-丁基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮； 4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丁 基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-苄基)- 3-(4-氯-苯基)-1-(3-二甲基氨基-丙基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二 氮杂-2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(3-吗啉-4- 基-丙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-(4-氯-2-羟基 苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)乙基]-3，4-二氢-1H-苯 并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3R)-3- (4-氯苯基)-7-碘-1-(2-吗啉-4-基乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂 -2，5-二酮；4-(2-氨基-4-氯苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪 -1-基)丙基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；5-(2-烯丙氧 基-4-氯苄氧基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，3-二 氢苯并[e][1，4]二氮杂-2-酮；4-(2-氨基-4-氯苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘- 3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)乙 基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4- 苄基-7-溴-3-(4-氯苯基)-1-甲基-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮；7-溴-3-(4- 氯苯基)-1-甲基-4-(1-苯乙基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮；1，3-二氢-4- [1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮杂-2，5-二 酮；3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-1-[2-(4-吗啉代)乙 基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮；5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯 基)乙基]-2，5-二氧代-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸钠盐； 4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基) 乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮；4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]- (3S)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮杂- 2，5-二酮；(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1- [2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮；4-[1-(2-氨基-4- 氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-吗啉代)乙基]-1，4-苯并二氮杂 -2，5-二酮；(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘- 1-[2-(4-吗啉)乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮；(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基- 4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-吗啉代)乙基]-1，4-苯并二氮 杂-2，5-二酮；3-(4-氯苯基)-4-[1-(2，6-二氯-3-吡啶基)乙基]-7-碘-1，4- 苯并二氮杂-2，5-二酮；1，3-二氢-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯 苯基)-7-碘-1-甲基-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮；1，3-二氢-4-[1-(2-乙酰 基氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮杂-2，5-二 酮；1，3-二氢-4-[1-(2-叠氮基-3-吡啶基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯 并二氮杂-2，5-二酮；4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2- (2-甲氧基乙氧基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸 盐；(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(2-甲氧基 乙氧基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐；4-[1-(2- 氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-吗啉代)乙基]-7-(丙炔-1-基)- 1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐；(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙 基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-吗啉代)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂 -2，5-二酮盐酸盐；4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3- 二氢-1H-1，4-苯并二氮杂-5-酮；4-[1-(2-氨基-6-氯-3-吡啶基)甲基]-3- (4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二 酮盐酸盐；4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)环丙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-吗啉代) 乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮甲磺酸盐；(3S)-4-[1-(2-氨基-4- 氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[(R)-2-(1-哌嗪基)-2-氧代乙基]-1，4- 苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐；4-(4-氯-2-甲基-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7- 碘-1-(2-吗啉-4-基-乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮； 3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-2-氧 代-乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；3-(S)-(4-氯-苯 基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙基)-3，4二氢-1H- 苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；3-(R)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)- 乙基]-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂- 2，5-二酮；3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-[2-(2-甲 氧基-乙氧基)-乙基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；3- (S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基-7-(1-羟基亚氨基-乙基)-3，4- 二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；7-碘-4-萘-1-基甲基-3-(4-三氟 甲氧基-苯基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；4-苯并[1，3] 二氧杂环戊烯-5-基甲基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二 氮杂-2，5-二酮；4-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基-7-碘-3-(四氟甲 氧基-苯基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；7-碘-4-(2-吡 啶-2-基-乙基)-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂 -2，5-二酮；4-苄基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮 杂-2，5-二酮；3-(4-氯-苯基)-7-碘-4-苯乙基-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4] 二氮杂-2，5-二酮；4-苄基-7-碘-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氢-1H- 苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮；7-碘-4-苯乙基-3-(4-三氟甲氧基-苯基)- 3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮。

本文公开的本发明还意图包括所公开化合物的体内代谢产物。这 样的产物可以例如由给药化合物的氧化、还原、酰胺化、酯化等产生， 而主要是由酶促过程产生。因此，本发明包括由这样的方法产生的化 合物，所述方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢 产物的时间。这样的产物一般通过以下方法予以鉴定：制备放射性标 记的本发明化合物，将其以可探测的剂量胃肠外给药于动物例如大 鼠、小鼠、豚鼠、猴子或者人，给予足够时间以使代谢发生，然后从 尿、血液或其它生物样本分离出其转化产物。

本文公开的某些化合物可以具有一个或多个不对称中心，因此产 生对映体、非对映体和其它立体异构形式。本发明也意图包括全部这 样可能的形式以及它们的外消旋和拆分形式及其混合物。当本文所描 述的化合物具有烯属双键或其它几何不对称中心时，除非另有规定， 意图包括E和Z几何异构体。本发明也意图包括全部互变异构体。

如本文所使用，术语“立体异构体”是用于单独分子的所有异构 体的一般术语，所述异构体只是在它们的空间原子取向上有所不同。 其包括对映体以及具有一个以上手性中心的彼此不是镜像的化合物的 异构体(非对映体)。

术语“手性中心”是指连接着4个不同基团的碳原子，或连接着 3个不同基团的硫原子，其中硫原子及其连接的基团形成亚砜、亚磺 酸酯、锍盐或亚硫酸酯。

术语“对映体”或“对映体的”是指这样的分子，该分子不能重 叠在其镜像上并因此是旋光性的，其中对映体在一个方向上旋转偏振 光的平面，而其镜像在相反方向上旋转偏振光的平面。

术语“外消旋”是指等量的对映体的混合物，并且是没有旋光性 的。

术语“拆分”是指分离或浓缩或耗减两种对映体形式的分子当中 的一种形式。术语“对映体过量”是指这样的混合物，其中一种对映 体以大于其镜像分子的浓度存在。

式I化合物还可以溶剂化，尤其是水合。水合可在化合物或包含 化合物的组合物的生产期间发生，或者水合可由于化合物的吸湿性而 随着时间的延长发生。

式I范围内的某些化合物是被称作“前药”的衍生物。措词“前 药”表示已知直接作用药物的衍生物，其衍生物较之该药物具有提高 的递送特性和治疗价值，并且通过酶促或化学过程被转化为活性药 物。前药是具有代谢可裂解基团的本发明发明化合物的衍生物，并且 通过水解或者在生理条件下在体内变为具有药物活性的本发明化合 物。例如，本发明化合物的酯衍生物通常是在体内而不是体外具有活 性。本发明化合物的其它衍生物以其酸或酸式衍生物的形式具有活 性，但是酸式衍生物在哺乳动物机体中通常具有溶解性、组织相容性 或延迟释放的有利性(参见Bundgard，H.，Design of Prodrug，PP.7- 9，21-24，Elsevier，Amsterdam 1985)。前药包括为本领域的技术人 员众所周知的酸式衍生物，例如，通过使母酸与适宜的醇反应制备的 酯，或者通过母酸式化合物与胺反应制备的酰胺。衍生自在本发明化 合物上的酸性基团的简单的脂族或芳族酯是优选的前药。在某些情况 下，制备双酯类型前药例如(酰氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基 酯是合乎需要的。有用的前药是其中Rb是烷基、链烯基、炔基或芳 烷基的那些前药。

当在任何构分或式I中任何变量多次出现时，其每次出现时的定 义不受其每次其它出现时的定义的制约。同样，取代基和/或变量的组 合是容许的，条件是这样的组合产生适宜的化合物。

                         定义

本文所用术语“烷基”，本身或作为另一基团的的部分，除非链 长另有限制，是指最高达10个碳原子的直链和支链基团，例如甲基、 乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、 庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基或癸基。

本文所用术语“链烯基”，除非链长另有限制，意指2-10个碳 原子的直链或支链基团，其中在链上的两个碳原子之间至少有一个双 键，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1- 丁烯基、2-丁烯基等。优选地，链烯基链是2-8个碳原子链长，最优 选2-4个碳原子链长。

本文所用术语“炔基”，除非链长另有限制，意指2-10个碳原 子的直链或支链基团，其中在链上的两个碳原子之间至少有一个三 键，包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基等。优选地，炔基链 是2-8个碳原子链长，最优选2-4个碳原子链长。

在本文所有情况下，如果有链烯基或炔基部分作为取代基，不饱 和键即乙烯基键优选不直接连接到氮、氧或硫部分上。

术语“烷氧基”或“烷基氧基”是指连接到氧原子上的任何上述 烷基。典型实例是甲氧基、乙氧基、异丙氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。

本文所用术语“芳基”，本身或作为另一基团的部分，是指在环 部分具有6-12个碳原子、优选6-10个碳原子的单环或双环芳族基 团。典型的实例包括苯基、联苯基、萘基或四氢萘基。

本文所用术语“芳烷基”或“芳基烷基”，本身或作为另一基团 的部分，是指上面所述具有芳基取代基的C1-6烷基，所述芳基是例如 苄基、苯乙基或2-萘基甲基。

本文所用术语“杂芳基”是指这样的基团，所述基团具有5-14 个环原子；在环排列中共享的6、10或14个π电子，并且含有碳原 子和1，2，3或4个氧、氮或硫杂原子(其中杂芳基的实例是：噻吩基、 苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、异苯 并呋喃基、苯并唑基、色烯基、呫吨基、phenoxathiinyl、2H-吡咯 基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、 中氮茚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹 嗪基、异喹啉基、喹啉基、2，3-二氮杂萘基、1，5-二氮杂萘基、喹唑啉 基、噌啉基、蝶啶基、4αH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖 啶基、啶基、菲咯啉基、吩嗪基、异噻唑基、吩噻嗪基、异唑基、 呋咱基、吩嗪基和四唑基)。

本文所用短语“饱和或部分不饱和杂环”，本身或作为另一基团 的部分，是指具有5-14个环原子的饱和或不饱和环系，所述环原子 选自碳原子和1、2、3或4个氧、氮或硫杂原子。典型的饱和实例包 括吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶 基、哌嗪基、奎宁环基、吗啉基和二氧杂环己基。典型的部分不饱和 实例包括吡咯啉基、咪唑啉基、吡唑啉基、二氢吡啶基、四氢吡啶基 和二氢吡喃基。这些系统中的任何一个都可以任选与苯环稠合。

本文所用术语“杂芳基烷基”和“杂芳烷基”是指连接到烷基上 的杂芳基。典型的实例包括2-(3-吡啶基)、3-(2-呋喃基)-正丙基、3-(3- 噻吩基)-正丙基和4-(1-异喹啉基)-正丁基。

本文所用术语“环烷基”，本身或作为另一基团的部分，是指含 有3-9个碳原子的环烷基。典型的实例是环丙基、环丁基、环戊基、 环己基、环庚基、环辛基和环壬基。

本文所用术语“环烷基烷基”或“环烷基(烷基)”，本身或作为另 一基团的部分，是指连接到烷基上的环烷基。典型的实例是2-环戊基 乙基、环己基甲基、环戊基甲基、3-环己基正丙基和S-环丁基正戊基。

本文所用术语“环烯基”，本身或作为另一基团的部分，是指含 有3-9个碳原子和1-3个碳-碳双键的环烯基。典型的实例包括环丙 烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基、环 庚二烯基、环辛烯基、环辛二烯基、环辛三烯基、环壬烯基和环壬二 烯基。

本文所用“卤素”或“卤代”，本身或作为另一基团的部分，是 指氯、溴、氟或碘。

本文所用术语“单烷基胺”或“单烷基氨基”，本身或作为另一 基团的部分，是指其中一个氢已经被上面所定义的烷基取代的基团 NH2。

本文所用术语“二烷基胺”或“二烷基氨基”，本身或作为另一 基团的部分，是指其中两个氢已经被上面所定义的烷基取代的基团 NH2。

本文所用术语“羟基烷基乃是指任何上述烷基，其中它们的一个 或多个氢被一个或多个羟基部分取代。

本文所用术语“卤代烷基”是指任何上述烷基，其中它们的一个 或多个氢被一个或多个卤原子取代。典型的实例包括氟甲基、二氟甲 基、三氟甲基、三氯乙基、三氟乙基、氟丙基和溴丁基。

本文所用术语“羧基烷基”是指上述任何烷基，其中它们的一个 或多个氢被一个或多个羧酸部分取代。

本文所用术语“杂原子乃意指氧原子(“O”)、硫原子(“S”)或氮原 子(“N”)。将会认识到，当杂原子是氮时，可以形成NRaRb部分，其 中Ra和Rb彼此独立地是氢或C1-C8烷基，或者与它们连接于其上的 氮一起形成饱和或不饱和的5、6或7元环。

短语“任选取代的”，当没有明确定义时，是指任选被一个或多 个独立地选自下列的基团取代：羟基、硝基、三氟甲基、卤素、C1-6 烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6亚烷二氧基、C1-6氨基烷基、 C1-6羟基烷基、C2-4链烯基、C2-4炔基、C6-10芳基、苯氧基、苄氧基、 5-10元杂芳基、C1-6氨基烷氧基、氨基、单(C1-4)烷基氨基、二(C1-4) 烷基氨基、C2-6烷基羰基氨基、C2-6烷氧基羰基氨基、C2-6烷氧基羰基、 C2-6烷氧基羰基烷基、羧基、C2-6羟基烷氧基、(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧 基、单(C1-4)烷基氨基C2-6烷氧基、二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基C2-10 单(羧基烷基)氨基、双(C2-10羧基烷基)氨基、C2-6羧基烷氧基、C2-6羧 基烷基、羧基烷基氨基、胍基烷基、羟基胍基烷基、氰基、三氟甲氧 基或全氟乙氧基。

优选的任选取代基包括独立地选自下列的一个或多个取代基：硝 基、羟基、羧基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、卤素、C1-4卤代烷基、C1-4 烷硫基、硫基、氨基、单(C1-4)烷基氨基和二(C1-4)烷基氨基。

本文所用“生物样本”是指含有或包括细胞或组织物质例如从个 体分离的细胞或生物液体的样本。

“个体”可以是哺乳动物，例如大鼠、小鼠、猴子或人，这些动 物已经是治疗、观察或试验的对象。生物样本的实例包括，例如，痰、 血液、血细胞(例如白血细胞)、羊膜液、血浆、精液、骨髓、组织或 细针抽吸活检样本、尿、腹膜液体、胸膜液体和细胞培养物。生物样 本也可以包括组织切片，例如用于组织学目的的冷冻切片。试验生物 样本是作为分析、监测和观察对象的生物样本。对照生物样本可以是 用于试验生物样本的阳性对照或阴性对照。通常，对照试验样本含有 与试验生物样本同样类型的有意义的组织、细胞和/或生物液体。

“细胞”是指适合检测方法的灵敏度的至少一个细胞或两个以上 细胞。适合于本发明的细胞可以是细菌的，但优选是真核的，而最优 选是哺乳动物的。

本文所用“mdm2”或“hdm2”基因意指鼠源双微体2基因，和 在其它动物中发现的同源基因。这种基因是转录因子肿瘤蛋白p53的 靶基因。其编码蛋白MDM2或HDM2。这种基因的过度表达能够导 致肿瘤蛋白p53的过度失活，减弱了它的肿瘤抑制因子功能。已经从 肿瘤和正常组织中分离出了40多个可变剪接转录子变体。

本文所用“MDM2乃或“HDM2”意指作为mdm2癌基因表达结 果获得的蛋白。在该术语的含义内，能够理解MDM2包括由mdm2 编码的所有蛋白、它们的突变型、它们的可变剪接蛋白和它们的磷酸 化蛋白。另外，如本文所用，可以理解术语“MDM2”包括其它动物 的MDM2同源体(例如HDM2)。

“MDM2”或“HDM2乃蛋白是核内磷蛋白，其结合并抑制肿瘤 蛋白p53的转录，作为自身调节的负反馈环。这种蛋白具有E3遍在 蛋白连接酶活性，其将肿瘤蛋白p53导向蛋白酶体的降解。这种蛋白 通过与其它蛋白相互作用，还影响细胞周期、编程性细胞死亡和肿瘤 发生，所述其它蛋白包括成视网膜细胞瘤1和核糖体蛋白L5。示例 性“MDM2”包括人MDM2同种型，例如由GenBank蛋白ID所列 的那些：NP_002383、NP_006869、NP_006870、NP_006871、 NP_006872、NP_003873，以及它们的结构和功能多态现象。“多态现 象”是指在种群个体中特别遗传座上的一组遗传变体。MDM2还包括 其它动物中的MDM2的orthologs，所述其它动物包括鼠、小鼠、 猪、狗和猴子。

p21waf1/cip1基因是指细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A的基因。 这种基因编码有效的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂。编码的蛋白结 合并抑制细胞周期蛋白-CDK2或-CDK4复合物并抑制其活性，因此 在G1起着细胞周期进展调节因子的作用。这种基因的表达受到肿瘤 抑制因子蛋白p53的紧密控制，通过这种控制，所述蛋白介导p53细 胞依赖性周期G1期停滞，以响应各种应力刺激。由p21waf1/cip1编码的 蛋白能够与增殖性细胞核抗原(PCNA)，DNA聚合酶辅助因子相互作 用，并在S期DNA复制和DNA损害修复中起调节作用。这样的基因 的实例包括两种可变剪接变体，GenBank cDNA编号NM_000389和 NM_078467，其编码人的同一蛋白。“p21waf1/cip1基因”还包括其它动 物中的人p21waf1/cip1基因的orthologs，所述其它动物包括大鼠、小鼠、 猪、狗和猴子。

“p53”或“TP53”或“肿瘤蛋白p53”都是指在细胞周期特别 是从G0到G1的转换中的调节中起着关键的作用。然而，发现在正 常细胞中非常低的水平上，在各种转化的细胞系中，它是以高量表达 的，并且据信促进转化和癌变(malignancy)。p53是含有DNA结合、 寡聚和转录活化结构域的DNA结合蛋白。其作为四聚体结合到p53 结合位点并激活抑制生长和/或侵入的下游基因的表达，由此起着肿瘤 抑制因子的作用。通常发生于若干不同的人类癌症中的P53的突变体， 未能结合一致性DNA结合位点，由此造成肿瘤抑制因子活性的丧失。 TP53基因的改变不但作为体细胞突变发生于人类恶性肿瘤中，而且 作为种系突变发生于某些具有Li-Fraumeni综合症的家族中。示例性 “p53”包括人p53，例如GenBank蛋白ID所列：NP_000537及其 它的结构和功能多态现象。P53还包括其它动物中的p53的 orthologs，所述其它动物包括大鼠、小鼠、猪、狗和猴子。

本文所用短语“抗肿瘤剂”意指被用于治疗或预防癌症或包括细 胞的失控增殖和生长的其它病症的任何剂。抗肿瘤剂包括抗癌症剂。

本文所用短语“接触一种或多种蛋白”意指将溶液中的本发明化 合物与一种或多种目标蛋白接触。式I化合物和一种或多种目标蛋白 可以一同在水溶液、非水溶液或水溶液与非水溶液的组合的溶液中。 其它蛋白可以与式I化合物和目标蛋白一起存在于溶液中。其它无机 或有机分子可以存在于该溶液中。这样的无机和有机分子包括但不限 于NaCl、HEPES和辛基葡糖苷。所述溶液可以在动物细胞内或在动 物细胞外。

本文所用短语“抑制结合”意指阻止或减少一种或多种分子、肽、 蛋白、酶或受体的直接或间接的结合；或者阻止或减轻一种或多种分 子、蛋白、酶或受体的正常活性。

本文所用短语“诱导编程性细胞死亡”意指直接或间接引起动物 起源的细胞进行编程性细胞死亡-有控制的或按程序的细胞死亡。

本文所用术语“HDM2抑制剂”是用于描述，在实施例35描述 的测定中抑制HDM2功能的活性剂。

本文所用短语“抑制蛋白MDM2与p53之间结合的小分子乃是 指抑制两种蛋白p53与MDM2之间结合的小有机化合物，即具有50 以上而小于约3000的分子量的小有机化合物。“抑制蛋白MDM2与 p53之间结合的小分子”的实例包括但不限于描述于WO2003041715 或WO2004096134中的苯并二氮杂二酮类化合物、合成查耳酮类化 合物、降冰片烷衍生物、顺式咪唑啉衍生物(Nutlins)、吡唑烷二酮磺 酰胺和1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮，以及色氨酸衍生物(Buolamwini 等人，2005，Curr Cancer Drug Targets.5(1)：57-68)。如本文所用，“放 射疗法”或“放射治疗”是指包括将个体或细胞暴露于放射中的治疗。 这样的疗法或治疗对于本领域的技术人员是已知的。放射治疗的适宜 方案与临床治疗中已经使用的方案相类似，其中放射治疗可以单独或 者与其它化疗联合使用。

式I化合物的可药用盐(以水或油可溶或可分散产物的形式)包括 例如由无机或有机酸或碱形成的常规无毒盐或季氨盐。这样的酸加成 盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、 硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸 盐、葡糖酸氢盐(digluconate)、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡 索酸盐、葡糖庚酸盐、甘油基磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、 盐酸盐、溴酸盐、碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲 磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸 盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀 酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸酯。碱式 盐包括铵盐、碱金属盐例如钠和钾盐、碱土金属盐例如钙和镁盐、与 有机碱例如二环己胺、N-甲基-D-葡糖胺形成的盐和与氨基酸例如精 氨酸、赖氨酸形成的盐，等等。同样，可以将含氮的碱基用低烷基卤 这样的剂季铵化，所述低烷基卤例如甲基、乙基、丙基、丁基氯、溴 碘；二烃基硫酸盐例如二甲基、二乙基、二丁基、和二戊基硫酸盐； 长链卤化物例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰氯、溴和碘；芳烷 基卤例如苄基和苯乙基溴等。优选的形成酸式加成盐的酸包括HCl、 乙酸、三氟乙酸和富马酸。

                 组合物和方法的使用

本发明组合物包括药物组合物，其中包含式I化合物(其中R1-R11 和X如上面所定义)和一种或多种可药用赋形剂。优选的本发明组合 物是包含选自上面定义的优选的式I化合物和一种或多种可药用赋形 剂的组合物。

可以将本发明药物组合物给药于能够感受本发明化合物的有益效 果的任何动物。在这些动物中最主要的是人，虽然本发明并非意图受 如此限制。

本发明药物组合物可以用达到其预期目的的任何方法给药。例 如，给药可以通过皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、颊或眼途径，直 肠、肠外、全身内、阴道内、局部(如通过粉剂、软膏剂、滴剂或经皮 斑贴剂)，或者作为口或鼻喷雾。另外，或者同时，给药可以通过口服 途径。给药剂量取决于年龄、健康状况和接受者的体重、同时治疗的 种类(如果有的话)、治疗频率和要求的效果的性质。

除了药物活性化合物以外，新药物制剂可以含有使用的可药用载 体例如赋形剂和辅助剂，所述可药用载体有助于将活性化合物制备成 可以药用的制剂。

本发明药物制剂可以用已知的方法制备，例如通过常规的混合、 成粒、制成糖衣丸、溶解或冻干方法。因此，口服使用的药物制剂这 样获得：将活性化合物与固体赋形剂混合，任选将混合物粉碎并加工 颗粒混合物，加入适宜的(如果需要或必要)后，获得片剂或糖衣丸内 核。

适宜的赋形剂是，特别是，填充剂例如糖类，例如乳糖或蔗糖， 甘露糖醇或山梨糖醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，例如磷酸三钙或磷酸 氢钙，以及粘合剂例如淀粉糊，用例如玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀 粉，土豆淀粉，明胶，黄蓍，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲 基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入崩解剂，例如 上面所述淀粉以及还有羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或者 藻酸或它的盐，例如藻酸钠。辅助剂是，尤其是，流动调节剂和滑润 剂，例如硅石粉，滑石粉，硬脂酸或它的盐，例如硬脂酸钠或硬脂酸 钙，和/或聚乙二醇。可以将糖衣丸内核包以适宜的包衣，所述包衣， 如果需要，是抗胃液的。出于这种目的，可以使用浓缩的糖溶液，所 述糖溶液含有阿拉伯胶，滑石粉，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二 氧化钛，天然漆溶液和适宜的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备抗胃 液的包衣，适宜的纤维素制剂例如乙酰纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙基 甲基纤维素邻苯二甲酸酯可以予以使用。例如，为了辨认或表现活性 化合物剂量的组合的特征，可以将颜料或色素加到片剂或糖衣丸包衣 中。

可以口服使用的其它药物制剂包括由明胶制成的嵌合型(push-fit) 胶囊，以及用明胶和增塑剂例如甘油和山梨糖醇制成的软的密封胶 囊。嵌合型(push-fit)胶囊可以含有颗粒形式的活性化合物，其可以与 填充剂例如乳糖，粘合剂例如淀粉，和/或滑润剂例如滑石粉或硬脂酸 镁以及任选稳定剂混合。在软胶囊中，将活性化合物优选溶解或悬浮 于适宜的液体例如脂肪油或液体石蜡中。此外，可加入稳定剂。

用于胃肠外给药的适宜的制剂包括水溶形式的活性化合物，例如 水溶性盐，碱性溶液和环糊精包涵复合物的水溶液。特别优选的碱式 盐是制备的铵盐，例如用tris、胆碱氢氧化物、Bis-Tris丙烷、N-甲 基葡糖胺或精氨酸制成的铵盐。一种或多种修饰的或未修饰的环糊精 可以被用来稳定和增加本发明化合物的溶解性。适用于本发明目的的 环糊精公开于U.S.专利4,727,064、4,764,604和5,024,998中。

另外，可以给药作为适宜的油状注射悬浮液的活性化合物的悬浮 液。适宜的亲油溶剂或载体包括脂肪油，例如，芝麻油，或合成脂肪 油，例如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(化合物在PGE-400中 是可溶的)。水注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，例如，羧 甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。任选地，悬浮液也可以含有稳 定剂。

用于口服给药的液体剂型包括可药用乳剂、溶液、悬浮液、糖浆 和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型可以含有本领域通常使用的 惰性稀释剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸 苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生 油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、 聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯以及它们的混合物。

除了活性化合物以外，悬浮液可以含有悬浮剂，例如，乙氧基化 异十八烷醇，聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯，微晶纤维素，偏 氢氧化铝，膨润土，琼脂和黄蓍，以及它们的混合物。

局部给药包括给药于皮肤或粘膜，包括肺和眼的表面。包括吸入 在内的用于局部给药的组合物，可以制备为加压或未加压的干粉。在 未加压的粉末组合物中，可以将粉末形式的活性组分与较大尺寸的可 药用惰性载体混合使用，所述可药用惰性载体具有例如直径最高达100 微米的尺寸。适宜的惰性载体包括糖例如乳糖。合乎需要地，至少95 ％重量的活性组分的颗粒具有0.01-10微米的有效粒径。

或者，组合物可以被加压并含有压缩气体，例如氮气或液化的气 体推进剂。液化的推进剂介质以及当然全部组合物优选是这样的，即 活性组分溶解于其中决不能达到实质程度。加压的组合物也可以含有 表面活性剂。表明活性剂可以是液体或固体非粒子表面活性剂，或者 可以是固体阴离子表面活性剂。优选使用钠盐形式的固体阴离子表面 活性剂。

局部给药的另外形式是给药于眼睛。将本发明化合物和组合物以 可药用眼用载体递送，这样将化合物与眼表面保持接触足够的时间期 间，以便使化合物穿透眼的角膜和内部区域，例如眼的前房，后房、 玻璃体、眼房水、玻璃体水、角膜、虹膜/睫毛、晶状体、脉络膜/视 网膜和巩膜。可药用眼用载体可以，例如，是软膏、菜子油和包囊材 料。

用于直肠或阴道给药的组合物优选是将本发明化合物与适宜的非 刺激性赋形剂或载体混合制备的栓剂，所述赋形剂或载体例如可可 油、聚乙二醇或栓剂蜡，它们在室温是固体而在体温下是液体，并由 此在直肠或阴道腔体内融化而释放药物。

本发明组合物也可以脂质体形式给药。如本领域已知，脂质体一 般得自磷脂或其它脂质物质。脂质体是由分散于水介质中的单或多层 状水合液晶形成的。任何能够形成脂质体的无毒可生理接受的可代谢 的脂质都能够予以使用。除了本发明化合物外，脂质体形式的本发明 组合物可以含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂质是天然和合 成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)。形成脂质体的方法在本领域是已知 的(参见例如Prescott，等人，Meth.Cell Biol.14：33(1976))。

本发明化合物可以与一种或多种另外的抗肿瘤剂联合使用。可以 将本发明化合物与其它抗肿瘤剂一起配制，以便将含有式I化合物和 一种或多种另外的抗肿瘤剂的药物组合物给药于动物。或者，可以将 式I化合物作为与含有一种或多种另外的抗肿瘤剂的组合物分开的药 物组合物给药。可以与本发明化合物联合给药的抗肿瘤剂包括选自下 列化合物和抗肿瘤剂类别的化合物：

1.氟嘧啶类，例如5-FU(5-氟尿嘧啶)、氟脱氧尿苷、替加氟、5’- 脱氧氟尿苷(5’-脱氧氟尿苷)、UFT和S-1卡培他滨；

2.嘧啶核苷类，例如脱氧胞苷、阿糖胞苷、阿糖胞苷(Cytarabine)、 阿扎胞苷、5-氮杂胞嘧啶、吉西他滨和5-氮杂胞嘧啶-阿拉伯糖苷；

3.嘌呤类，例如6-巯嘌呤、巯鸟嘌呤、巯唑嘌呤、别嘌呤、克拉 屈滨、氟达拉滨、喷司他丁和2-氯腺苷；

4.铂类似物，例如顺铂、卡铂、奥沙利铂、四铂、铂-DACH、 奥马铂和CI-973、JM-216；

5.蒽环类/蒽二酮类，例如多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊 达比星和米托蒽醌；

6.表鬼臼毒素类，例如依托泊苷和替尼泊苷；

7.喜树碱类，例如伊立替康、托泊替康、9-氨基喜树碱、10，11- 亚甲二氧基喜树碱、9-硝基喜树碱和TAS 103；

8.激素类和激素类似物，例如己烯雌酚、他莫昔芬、托瑞米芬 (Toremefine)、Tolmudex、Thymitaq、氟他胺、氟甲睾酮、比卡鲁胺、 非那雄胺、雌二醇、曲沃昔芬、地塞米松、醋酸亮丙瑞林、雌莫司汀、 曲洛昔芬、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、氨鲁米特、睾内酯、睾酮、二 丙酸己烯雌酚和羟孕酮；

9.酶类、蛋白类和抗体类，例如天冬酰胺酶、白介素、干扰素、 亮丙立德和培门冬酶；

10.长春花碱属生物碱类，例如长春新碱、长春碱、长春瑞滨和 长春地辛；

11.紫杉烷类，例如紫杉醇、泰索帝和多西他赛。

可以与本发明化合物联合使用的抗肿瘤剂也包括选自下列基于作 用机制的类别的化合物：

1.抗激素类-参见上面激素和激素类似物分类，阿那曲唑、戈舍 瑞林和氨鲁米特。

2.叶酸抗代谢物类，例如甲氨蝶呤、亚叶酸、氨蝶呤、三甲曲沙、 甲氧苄啶、pyritrexim、乙胺嘧啶、依达曲沙和MDAM；

3.抗微管剂，例如Taxanes、长春花碱属生物碱和Vinorelbine；

4.烷化剂(经典的或非经典的)，例如氮芥类(氮芥、苯丁酸氮芥、 美法仑、乌拉莫司汀)、Oxazaphosphorines(异环磷酰胺、环磷酰胺、 培磷酰胺、Trophosphamide)、烷基磺酸盐类(白消安)、亚硝基尿类(卡 莫司汀、洛莫司汀、链佐星)、塞替派和达卡巴嗪；

5.抗代谢药类，例如上面所列的嘌呤类、吡啶类和核苷类似物；

6.抗生素类，例如蒽环类/蒽二酮类、博来霉素、放线霉素D、 丝裂霉素、普卡霉素、喷司他丁和链佐星；

7.拓扑异构酶抑制剂类，例如喜树碱类(Topo I)、表鬼臼毒素类、 AMSA、VP-16和椭圆玫瑰树碱类(Topo I)；

8.抗病毒类，例如AZT、阿西洛韦、喷昔洛韦、泛昔洛韦(Fam 环vir)、二脱氢二脱氧胸苷、二脱氧胸苷、-SddC、更昔洛韦、二脱 氧肌苷和病毒特异性蛋白酶抑制剂类；

9.杂类细胞毒害剂，例如羟基脲、米托坦、融合毒素类、PZA、 苔藓抑素、类视色素、丁酸和衍生物、戊聚糖、夫马洁林、米托蒽醌、 骨髓生长因子和丙卡巴肼。

本发明化合物适用于治疗失控的增殖和/或癌症。本发明化合物可 以产生有益的抑制和/或细胞毒效应。细胞抑制效应包括抑制细胞进一 步生长和/或细胞分裂。细胞毒效应包括通过包括编程性细胞死亡和细 胞坏死。尤其是，本发明化合物适用于治疗下列癌症：乳房癌、卵巢 癌、颈癌、子宫内膜癌、绒膜癌、软组织肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、 平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、头和颈癌、肺和支气管源性癌、脑癌、成神 经细胞癌、食道癌、结肠直肠腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、白血病、 淋巴癌、恶性黑素瘤、口鳞状癌、成肝细胞瘤、成胶质细胞瘤、星形 细胞瘤、成髓细胞瘤、尤因肉瘤、脂瘤、肌肉瘤、恶性成纤维细胞组 织瘤、恶性施万鞘瘤、睾丸癌、甲状腺癌、维尔姆斯瘤、胰腺癌、结 肠直肠腺癌、舌癌、胃癌和鼻咽癌。优选地，本发明用于治疗选自下 列的癌症：乳房癌、绒膜癌、软组织肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、脂 瘤和肌肉瘤。上面所列癌症只是意指例证说明性的，而非意指限制性 或排他性的清单。

另外，本文所述化合物和组合物可用于治疗任何不希望的或有害 的疾病，所述疾病产生于抑制p53或诱导编程性细胞死亡、引起细胞 死亡或调节细胞周期的其它细胞蛋白的功能的HDM2蛋白或MDM2 蛋白。

本发明也用于抑制p53与HDMX和/或MDMX之间的相互作用。 MDMX，也被称作MDM4，是与细胞周期的调节有关的细胞蛋白。 例如，参见Riemenschneider等人，Cancer Res.59(24)：6091-6(1999)。

当与引起或诱导DNA损害的活性剂一起给药时，HDM2和/或 MDM2与p53的相互作用的抑制剂也可以用于治疗癌症，抑制细胞生 长/复制，并诱导细胞的编程性细胞死亡和坏死(参见Chen等人，Proc. Natl.Acad.Sci.USA 95：195-200(1998))。通过与引起或诱导DNA损 害的活性剂一起给药，本发明化合物可以用于治疗癌症，抑制细胞生 长/复制，并诱导细胞的编程性细胞死亡和坏死。诱导细胞DNA损害 的活性剂包括放射和化学剂。放射可以内部或外部给予。化学剂包括 引起或诱导DNA损害的任何化合物或成分(element)。

本发明化合物可以以约0.01mg/kg-约300mg/kg、优选1.0mg/kg -100mg/kg体重的剂量范围内的有效量给药。本发明化合物可以以 单次日剂量给药，或者将总日剂量分成2、3或4次均分剂量每天给 药。

                    化合物的制备

本发明化合物可以利用乌吉特缩合反应的改型，按照反应方案I 以及Keating和Armstrong，J.Am.Chem.Soc.，118：2574-2583(1996) 中详细描述的合成途径来制备。适当取代或未取代的氨基羧酸1、胺 3和醛2可用于制备本发明化合物，其中R1、R2、R5、R6、R7、R8、 R9和R10如上面所定义。当R3X的选择是除氢或电子对以外的基团 时，可以在碱例如NaH和溶剂例如THF和/或催化剂例如碘化四丁基 铵存在下，用R3X-卤素引入R3X。当R3X是氢时，通过使用三氯氧 化磷和适当取代的胺，将化合物7转变为脒8。

            反应方案1：常规二氮杂合成

或者，可以用靛红酸酐化学制备本发明化合物。将任选取代的呋 喃-2，5-二酮(9)用三甲基甲硅烷基叠氮化物处理，得到靛红酸酐10。然 后在溶剂例如吡啶中将化合物10用任选取代的氨基酯处理，并且在 密封的管中于125℃加热1.5小时，继之用碱例如tBuOK处理，得到 化合物11。然后将化合物11用碱例如氢化钠继之用适当取代的烷基 卤处理。然后于0℃在溶剂例如无水DMF中，将形成的产物用双(三 甲基甲硅烷基)氨基化锂处理。10分钟后，加入适当取代的烷基卤， 得到最终二氮杂结构12。或者，在溶剂例如DMF中，将化合物10 用碱例如NaH处理，继之加入适当取代的烷基卤。然后在溶剂例如 吡啶中将形成的化合物13用任选取代的氨基酯处理，并且在密封的 管中于125℃加热1.5小时，继之用碱例如tBuOK处理，得到化合物 12和14。

            反应方案2：另一种二氮杂合成#1

或者，可以从任选取代的α-卤代酯开始制备本发明化合物。在碱 例如K2CO3存在下，在溶剂例如乙腈中，将化合物15用任选取代的 胺处理，得到化合物16。在碱例如二异丙基乙胺存在下，在溶剂例如 二氯甲烷中，将化合物16用任选取代的α，β-不饱和酰氯处理，得到化 合物17。在溶剂例如DMF和碱例如二异丙基乙胺中，将化合物17 用甲醇中的氢氧化钠处理，继之在偶联剂例如PyBrOP和HOBt存在 下用任选取代的胺偶联，得到化合物18。随后将化合物18用三氟甲 磺酸银处理，继之加入苯硒基溴和DMF。然后，在溶剂例如THF存 在下加入过氧化氢，得到化合物19。如果R3X是氢，可以在碱例如 NaH和溶剂例如DMF存在下，用R3X-卤素引入增溶基团。

            反应方案3：另一种二氮杂合成#2

下面的实施例例证说明而不是限制本发明化合物、方法和组合 物。其它适宜的改良，和临床治疗中通常遇到的各种条件和参数的修 改，其为本领域技术人员所显而易见，都在本发明的实质和范围之内。

                       实施例

通过下面的一般方法合成实施例中的化合物。

            常规合成二氮杂化合物的一般方法

将乙醛(0.20mmol)和胺(0.20mmol)在甲醇(2.0mL)中的溶液在室 温搅拌30分钟。向该溶液中加入环己烯-1-异腈(0.21mmol)在己烷中 的溶液，继之加入芳基或杂芳基氨基酸(0.20mmol)。将溶液在室温搅 拌3天。缓慢加入乙酰氯(0.2mL)。然后将溶液晃动另外3小时并在 真空下浓缩。将残余物用预填充的硅胶筒纯化(二氯甲烷至10％乙酸 乙酯在二氯甲烷中的混合物)。将残余物用预填充的硅胶筒纯化(8％乙 酸乙酯在二氯甲烷中的混合物至10％甲醇在二氯甲烷中的混合物)， 得到本标题化合物。

            在1位上将二氮杂烷基化的一般方法

在氮气氛下把烷基化剂(1.5当量)加到烘箱干燥的配备以搅拌棒的 两英钱瓶中。加入将要进行烷基化的二氮杂(1.0当量)，并将所得混 合物溶解于溶剂例如DMF中。加入碳酸钾(2.0当量)，继之加入碘化 四丁基铵(催化剂)。把反应混合物盖紧并在80℃加热过夜。将反应过 滤、浓缩，并装载到1000μm TLC板上。用10％EtOAc/己烷洗脱两 次后，分离下面的带，得到1-烷基化的化合物。

合成脒的一般方法

将1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮(0.181mmol)、4-(N，N-二甲基氨基) 吡啶(122mg，1.0mmol)和三氯氧化磷(350μL，1.4mmol)在二氯乙烷 (4mL)中的溶液在密封的管中于135℃搅拌2小时。将该溶液冷却至 室温后，真空除去过量三氯氧化磷。然后将残余物溶解在无水CH2Cl2(6 mL)中，在0℃于氩气氛下，在搅拌下滴加胺(2-10当量)。10分钟后， 让该反应混合物温热至室温。然后将溶剂蒸发，通过硅胶色谱纯化残 余物(EtOAc/己烷，1∶1)，获得了本标题化合物，为无色固体。

另一合成二氮杂的一般方法#1

将靛红酸酐(1mmol)与氨基酸酯(1.3mmol)在吡啶(3mL)中的溶 液在密封的管中于125℃搅拌1.5小时。冷却至室温后，真空除去溶 剂。通过硅胶色谱法纯化(EtOAc/己烷，1∶1)，获得了适当取代的N-(2- 氨基苯甲酰基)-2-(芳基)甘氨酸甲酯，将其溶解在THF(10mL)中。然 后在-78℃于氩气氛下缓慢地加入叔丁醇钾(1M在THF中的溶液，1.1 mL)。让该反应混合物温热至室温。14小时后，用乙酸(150μL)中止 该反应，然后将溶剂蒸发至干，将残余物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤， 干燥(Na2SO4)，并减压浓缩至干。通过硅胶色谱法纯化(AcOEt/己烷， 1∶1)，获得了二氮杂化合物，为无色棱柱状物。或者，将靛红酸酐(10) 用碱例如NaH在溶剂例如DMF中于0℃-室温处理，然后加入取代 的卤代衍生物以生成(13)。将其用氨基酯(1.5当量)于80-120℃处理， 然后在-20℃至室温加入t-BuOK，生成本标题化合物。

另一合成二氮杂的一般方法#2

将α-卤代酯(10mmol)、任选取代的胺(10mmol)、K2CO3(20mmol) 和TBAI(1.35mmol)在乙腈中的溶液于45℃搅拌12小时。将该粗的 混合物用乙酸乙酯从水中萃取，然后通过硅胶色谱纯化(EtOAc∶己烷 5∶95)。将产物(3.0mmol)用DIEA(11.5mmol)在DCM(30mL)中处理， 然后在0℃加入任选取代的α，β-不饱和胺(3.25mmol)。将该粗的反应 混合物用EtOAc从水中萃取，然后通过硅胶色谱纯化(己烷∶EtOAc8∶1)，获得了相应的产物。将该产物(1.0mmol)用NaOH(15.0mmol) 在THF和甲醇中于室温皂化，然后用EtOAc从1N HCl中萃取。之 后将该酸(0.88mmol)用氯化铵(1.76mmol)、PyBrOP(1.32mmol)、 HOBt(1.32mmol)和DIEA(3.52mmol)在DMF(3mL)中于室温处理， 搅拌2小时。将该粗的混合物用EtOAc从水中萃取，然后通过硅胶 色谱纯化(AcOEt∶己烷1∶3)。将所得酰胺(3.3mmol)与三氟甲磺酸银(6.6 mmol)在乙腈(120mL)中于室温搅拌。加入在DMF(5.2mL)中的苯硒 基溴(6.53mmol)，并搅拌2小时。将粗的残余物用EtOAc从水中萃 取，通过色谱法纯化(AcOEt∶己烷1∶3)。将相应的产物(0.49mmol)用 过氧化氢(500μL，30％的水溶液)在THF中于室温处理，搅拌20分 钟。将该粗的混合物用EtOAc从1N碳酸氢钠中萃取，然后通过硅胶 色谱纯化(AcOEt∶己烷∶DCM 1∶2∶2)，获得了本标题化合物。

二氮杂的二烷基化的一般方法

在20℃，将碱例如碳酸钾(0.88mmol)加到二氮杂(11)(0.82 mmol)在无水DMF(4mL)内的搅拌着的溶液中。10分钟后，加入任 选取代的烷基卤(0.96mmol)，继续在25-70℃搅拌1-12小时。然 后将该反应用冰冷的水(30mL)稀释，将残余物过滤，用水洗涤，然 后真空干燥。接下来，在0℃将碱例如K2CO3(1.1当量)加到在无水 溶剂例如DMF(2mL)内的该产物中。10分钟后，加入任选取代的烷 基卤(0.32mmol)，继续在25-80℃搅拌5-24小时。然后用乙酸(50μL) 中止反应。将粗产物通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷，1.1)。从乙醇/ 乙醚中重结晶，获得了化合物12，为无色晶体。

                             实施例1

5-{(3S-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

a)5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸叔丁酯

本标题化合物是按照用于常规合成二氮杂化合物的一般方法， 然后按照用于在1位将二氮杂化合物烷基化的一般方法合成的：质 谱(LCMS，ESI pos.)：C32H33Cl2IN2O4的计算值：706.09；实测值707.1 (M+H)。

b)5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

将5-{(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧 代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸叔丁酯(1.0g，1.4mmol) 于室温溶解于20％TFA[10mL]在二氯甲烷中的溶液2小时。把反应 浓缩并将产物用色谱法纯化(己烷∶EtOAc 1∶1)，得到本标题化合物(0.88 g，96％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75(d，J＝2.3Hz.1H)， 7.62-7.56(m，3H)，7.39(d，J＝8.6Hz，2H)，7.00(d，J＝8.6Hz，2H)， 6.92(d，J＝8.6Hz，1H)，6.58-6.56(m，2H)，6.21-6.14(m，1H)，5.27 (s，1H)，4.24-4.15(m，1H)，3.69-3.61(m，1H)，1.80(t，J＝7.2Hz， 2H)，1.63(d，J＝7.2Hz，3H)，1.56-1.21(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H25Cl2IN2O4的计算值：650.02；实测值650.8(M+H)。

                             实施例2

5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.60(d，J＝8.6Hz，2H)，7.53(d， J＝2.1Hz，1H)，7.42-7.33(m，3H)，7.12(d，J＝8.6Hz，1H)，6.99 (d，J＝8.4Hz，2H)，6.57(d，J＝7.7Hz，2H)，6.23-6.15(m，1H)， 5.29(s，1H)，4.31-4.22(m，2H)，3.78-3.68(m，1H)，2.20-2.12(m， 2H)，1.63(d，J＝7.0Hz，3H)，1.41-1.38(m，2H)，1.27-1.22(m，2H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H26Cl2N2O4的计算值：548.13；实测值548.9 (M+H)。

                             实施例3

5-[4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三氟甲基-苯 基)-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.94(d，J＝2.1Hz，1H)，7.50(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.44(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.33(d，J＝8.6Hz， 2H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.68(d，J＝8.4Hz，2H)，6.57(d， J＝8.6Hz，2H)，6.46-6.39(m，1H)，5.39(s，1H)，4.39-4.31(m，1H)， 3.70-3.62(m，1H)，2.37(t，J＝7.0Hz，2H)，1.75(d，J＝7.2Hz，3H)， 1.67-1.58(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H25ClF3IN2O4的计算 值：684.05；实测值684.8(M+H)。

                             实施例4

5-[4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-(3S)-3-(4-三氟甲氧基-苯 基)-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.89(d，J＝2.1Hz，1H)，7.48(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.43(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.32(d，J＝8.6Hz， 2H)，6.75(d，J＝8.4Hz，2H)，6.59-6.53(m，3H)，6.42-6.35(m，1H)， 5.36(s，1H)，4.41-4.31(m，1H)，3.67-3.57(m，1H)，2.37(t，J＝7.0 Hz，2H)，1.73(d，J＝7.2Hz，3H)，1.67-1.52(m，4H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C29H25ClF3IN2O5的计算值：700.04；实测值700.86(M+H)。

                             实施例5

6-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-己酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.78-7.74(m，1H)，7.62-7.55(m，2H)， 7.42-7.39(m，3H)，7.02-6.99(m，2H)，6.93(d，J＝8.62H)，6.58(d， 7.7Hz，2H)，6.28-6.14(m，1H)，5.28(s，1H)，4.29-4.19(m，1H)， 3.71-3.62(m，1H)，2.15-2.07(m，2H)，1.65-1.58(m，3H)，1.50-0.96 (m，6H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H27Cl2IN2O4的计算值：664.04； 实测值664.8(M+H)。

                             实施例6

7-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-庚酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.77-7.75(m，1H)，7.63-7.55(m，2 H)，7.45-7.37(m，3H)，7.03-6.98(m，2H)，6.93-6.83(m，1H)，6.58 (d，J＝8.6Hz，2H)，6.28-6.13(m，1H)，5.28(s，1H)，4.30-4.23(m， 1H)，3.69-3.62(m，1H)，2.14(t，J＝7.44Hz，2H)，1.64-1.59(m，3H)， 1.54-0.97(m，8H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：的计算值C30H29Cl2IN2O4： 678.05；实测值678.9(M+H)。

                             实施例7

4-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基甲基}-苯甲酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.12-7.91(m，3H)，7.47-7.37(m，3H)， 7.33-7.24(m，3H)，7.18-7.02(m，1H)，6.97-6.85(m，2H)，6.61-6.50 (m，3H)，6.45-6.33(m，1H)，5.37(s，1H)，5.35(d，J＝15.6Hz，1H)， 4.99(d，J＝15.8Hz，1H)，1.64(d，J＝7.2Hz，3H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C31H23Cl2IN2O4的计算值：684.01；实测值684.7(M+H)。

                             实施例8

4-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-丁酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76，(d，J＝2.1Hz，1H)，7.61-7.58 (m，2H)，7.41-7.39(m，2H)，7.00(d，J＝8.8Hz，2H)，6.94-6.86(m， 1H)，6.60-6.50(m，2H)，6.29-6.14(m，1H)，5.29(s，1H)，4.30-4.20 (m，1H)，3.75-3.66(m，1H)，2.13(t，J＝7.2Hz，2H)，1.85-1.70(m， 1H)，1.65(d，J＝7.21，3H)，1.64-1.54(m，2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C27H23Cl2IN2O4的计算值：636.01；实测值636.8(M+H)。

                             实施例9

3-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-丙酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.73(d，J＝2.1Hz，1H)，7.64-7.35 (m，5H)，7.21-6.96(m，2H)，6.97-6.49(m，3H)，6.28-6.14(m，1H)， 5.25(s，1H)，4.51-4.31(m，1H)，3.94-3.80(m，1H)，2.44-2.29(m， 1H)，1.91(s，1H)，1.68-1.57(m，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C26H21Cl2IN2O4的计算值：621.99；实测值622.8(M+H)。

                             实施例10

5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基甲基}-呋喃-2-甲酸

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04-7.85(m，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz， 1H)，7.70-7.44(m，2H)，7.39-7.30(m，3H)，7.10(d，J＝7.7Hz，1H)， 6.91(d，J＝8.1Hz，2H)，6.74(d，J＝8.6Hz，1H)，6.54(d，J＝3.2 Hz，1H)，6.47(d，J＝8.1Hz，2H)，5.55(s，1H)，5.27-4.90(m，2H)， 1.82-1.66(m，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H21Cl2IN2O5的计算 值：673.99；实测值674.8(M+H)。

                             实施例11

5-{(3S)-8-氯-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(s，1H)，7.46(d，J＝8.4Hz，2H)， 7.30(d，J＝8.4Hz，2H)，6.95-6.88(m，3H)，6.45(d，J＝7.7Hz， 2H)，6.40-6.34(m，1H)，5.33(s，1H)，4.39-4.27(m，1H)，3.69-3.59 (m，1H)，2.45-2.34(m，2H)，1.70(d，J＝7.2Hz，3H)，1.67-1.52(m， 4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H24Cl3IN2O4的计算值：683.98；实 测值684.8(M+H)。

                             实施例12

5-{3-(4-氯苯基)-4-[(4-氯苯基)-环丙基-甲基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四 氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.74(d，J＝2.1Hz，1H)，7.66(d， J＝8.4Hz，2H)，7.59(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.40(d，J＝8.6 Hz，2H)，7.01(d，J＝8.8Hz，2H)，6.92(d，J＝8.8Hz，1H)，6.59(dd， J＝8.6Hz，0.93Hz，2H)，5.51(s，1H)，5.16(d，J＝10.7Hz，1H)， 4.38-4.29(m，1H)，3.71-3.62(m，1H)，2.19-2.11(m，2H)，1.91-1.81 (m，1H)，1.54-1.21(m，4H)，0.81-0.71(m，1H)，0.62-0.52(m，1H)， 0.48-0.34(m，2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H27Cl2IN2O4的计算 值：676.04；实测值677.0(M+H)。

                             实施例13

5-{3-(4-氯苯基)-4-[1-(3，4-二氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四 氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85-7.76(m，2H)，7.63-7.55(m， 3.0H)，7.02(d，J＝8.6Hz，2H)，6.90(d，J＝8.6Hz，1H)，6.63(d， J＝8.6Hz，2H)，6.13-6.06(m，1H)，5.38(s，1H)，4.31(m，1H)， 3.72-3.64(m，1H)，2.18-2.11(m，2H)，1.65(d，J＝6.9Hz，3H)，1.55-1.43 (m，1H)，1.48-1.28(m，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H24Cl3IN2O4的计算值：683.98；实测值684.8(M+H)。

                             实施例14

5-[4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.74(d，J＝2.1Hz，1H)，7.59(dd， J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.12(d，J＝8.1Hz，1H)，7.03-6.98(m，3H)， 6.92(d，J＝8.6Hz，2H)，6.70(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，2H)，6.63(d， J＝8.6Hz，2H)，6.13-6.04(m，1H)，5.41(s，2H)，5.19(s，1H)，4.33-4.22 (m，1H)，3.73-3.63(m，1H)，2.19-2.12(m，2H)，1.57-1.45(m，3H)， 1.44-1.31(m，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H26Cl2IN3O4的计算 值：665.03；实测值665.8(M+H)。

                             实施例15

5-[4-[1-(4-氯-3-硝基-苯基)-乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.24(d，J＝2.1Hz，1H)，7.90(dd， J＝8.6Hz，2.3Hz，1H)，7.78(d，J＝2.1Hz，1H)，7.73(d，J＝8.4Hz， 1H)，7.58(dd，J＝8.6Hz，2.1Hz，1H)，7.01(d，J＝8.6Hz，2H)， 6.90(d，J＝8.8Hz，1H)，6.66-6.63(m，2H)，6.20-6.13(m，1H)，5.43 (s，1H)，4.29-4.20(m，1H)，3.72-3.63(m，1H)，2.19-2.11(m，2H)， 1.69(d，J＝7.2Hz，3H)，1.53-1.44(m，1H)，1.41-1.32(m，3H)。质 谱(LCMS，ESI pos.)：C28H24Cl2IN3O6的计算值：695.01；实测值695.8 (M+H)。

                             实施例16

5-{3-(4-氯苯基)-7-碘-4-[1-(4-甲基-萘-1-基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四 氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.39(d，J＝8.8Hz，1H)，8.06(d， J＝8.4Hz，1H)，7.87-7.76(m，2H)，7.70-7.55(m，3H)，7.35(d，J＝ 8.1Hz，1H)，6.90(d，J＝8.6Hz，2H)，6.64(d，J＝8.6Hz，2H)， 6.18-6.13(m，2H)，5.18(s，1H)，4.37-4.27(m，1H)，3.73-3.64(m， 1H)，2.58(s，3H)，2.23-2.15(m，2H)，1.75(d，J＝7.0Hz，3H)，1.54-1.30 (m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C33H30ClIN2O4的计算值：680.09； 实测值680.8(M+H)。

                             实施例17

5-[4-(4-氯苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4] 二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.05(bs，1H)，7.71(d，J＝2.1Hz， 1H)，7.62(dd，J＝8.8Hz，2.3Hz，1H)，7.43(m，4H)，7.17(d，J＝ 8.6Hz，2H)，6.95(d，J＝8.8Hz，1H)，6.83(d，J＝7.7Hz，2H)， 5.70(s，1H)，5.27(d，J＝14.6Hz，1H)，4.69(d，J＝14.4Hz，1H)， 4.21-4.13(m，1H)，3.67-3.58(m，1H)，2.11(t，J＝7.0Hz，2H)，1.32-1.22 (m，2H)，0.88-0.83(m，2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C27H23Cl2IN2O4的计算值：636.01；实测值637.0(M+H)。

                             实施例18

5-{3-(4-氯苯基)-4-[2-(4-氯苯基)-1-甲基-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71-7.65(m，1H)，7.60-7.53(m，1H)， 7.39-7.24(m，4H)，7.17-7.04(m，2H)，6.92-6.71(m，3H)，5.74(s， 1H)，5.34-5.14(m，1H)，4.25-3.99(m，1H)，3.70-3.59(m，1H)，3.12 (m，1H)，2.98-2.86(m，1H)，2.18-2.09(m，2H)，1.52-1.13(m，7H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H27Cl2IN2O4的计算值：664.04；实测值 664.9(M+H)。

                             实施例19

5-{(3S)-3-(3-溴-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.95(d，J＝2.1Hz，1H)，7.51-7.44 (m，3H)，7.37-7.29(m，2H)，7.08-7.03(m，1H)，6.81-6.71(m，1H)， 6.65-6.61(m，1H)，6.59(d，J＝8.8Hz，1H)，6.48-6.42(m，1H)，6.43-6.35 (m，1H)，5.33(s，1H)，4.41-4.32(m，1H)，3.67-3.57(m，1H)，2.40-2.34 (m，2H)，1.72(d，J＝7.2Hz，3H)，1.67-1.54(m，4H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C28H25BrClIN2O4的计算值：695.78；实测值696.8(M+H)。

                             实施例20

[4-苄基-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂 -1-基]-乙酸

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.80(d，J＝2.1Hz，1H)，7.58-7.47(m， 3H)，7.42-7.28(m，3H)，6.99(s，4H)，6.89(d，J＝8.8Hz，1H)，5.51 (s，1H)，5.49(s，1H)，5.18(d，J＝14.4Hz，1H)，4.57(d，J＝17.0Hz， 1H)，4.13(d，J＝17.2Hz，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C24H18ClIN2O4的计算值：560.00；实测值561.1(M+H)。

                             实施例21

5-{(3S)-3-(4-氯-3-硝基-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧 代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.06-7.96(m，1H)，7.55-7.44(m，3H)， 7.39-7.28(m，3H)，7.13-7.04(m，2H)，6.70-6.54(m，1H)，6.46-6.36 (m，1H)，5.30(s，1H)，4.40-4.07(m，1H)，3.70-3.38(m，1H)，2.45-2.24 (m，2H)，1.98-1.77(m，1H)，1.72(d，J＝7.0Hz，3H)，1.64-1.54(m， 3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H24Cl2IN3O6的计算值：695.01；实 测值695.7(M+H)。

                             实施例22

5-{(3S)-7-乙酰基-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.05(d，J＝2.3Hz，1H)，7.79(dd， J＝8.6Hz，2.3Hz，1H)，7.62(d，J＝8.6Hz，2H)，7.41(m，2H)， 7.25(d，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝8.6Hz，2H)，6.59(d，J＝8.6 Hz，2H)，6.21(m，1H)，5.35(s，1H)，4.36-4.26(m，1H)，3.84-3.74 (m，1H)，2.21-2.13(m，2H)，1.66(d，J＝7.2Hz，3H)，1.46-1.33(m， 3H)，1.30-1.20(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H28Cl2N2O5的 计算值：566.14；实测值566.9(M+H)。

                             实施例23

5-{(3S)-3-(3-氨基-4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧 代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.13-7.84(m，1H)，7.61-7.27(m，4H)， 7.01-6.81(m，1H)，6.76-6.64(m，1H)，6.66-5.63(m，5H)，5.38-5.10 (m，2H)，4.41-3.89(m，2H)，3.62-3.27(m，3H)，1.79-1.32(m，6H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H26Cl2IN3O4的计算值：665.03；实测值 665.8(M+H)。

                             实施例24

(3S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基[-7-碘-3，4-二氢-苯并 [e][1，4]二氮杂-5-酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝5.5Hz，3H，CH3)，5.10(br s，1H，CH)，6.46(q，J＝5.5Hz，1H，CH)，6.53(d，J＝6.3Hz， 1H，ArH)，6.58(d，J＝6.0Hz，2H，ArH)，6.91(d，J＝6.6Hz，2H， ArH)，7.33(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，7.41(dd，J＝6.3Hz，J＝1.5 Hz，1H，ArH)，7.53(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，8.03(d，J＝1.5Hz， 1H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C23H18Cl2IN3O的计算值：548.99； 实测值551.0(M+H)。

                             实施例25

2-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代-4，5-二氢- 3H-苯并[e][1，4]二氮杂-2-基氨基}-乙酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝5.4Hz，3H，CH3)，4.26- 4.40(m，2H，CH2)，5.09(br s，1H，CH)，5.68(br s，1H，NH)，6.30 (br s，1H，NH)，6.44(q，J＝5.4Hz，1H，CH)，6.53-6.58(m，3H， ArH)，6.87(d，J＝6.3Hz，2H，CH2)，7.31-7.40(m，3H，ArH)，7.53 (d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，8.00(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C25H21Cl2IN4O2的计算值：606.01；实测值607.0(M+H)。

                             实施例26

(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2-(2-羟基-乙基氨基)-7- 碘-3，4-二氢-苯并[e][1，4]二氮杂-5-酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.71(d，J＝5.4Hz，3H，CH3)，3.76- 3.79(m，2H，CH2)，3.95-3.98(m，2H，CH2)，4.96(s，1H，CH)， 6.43(q，J＝5.4Hz，1H，CH)，6.54-6.56(m，3H，ArH)，6.89(d， J＝6.6Hz，2H，ArH)，7.31(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.38(dd， J＝6.3Hz，J＝1.5Hz，1H，CH)，7.50(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)， 7.98(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C25H22Cl2IN3O2的计算值：593.01；实测值594.0(M+H)。

                             实施例27

(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-2-(3-羟基-丙基氨基)-7- 碘-3，4-二氢-苯并[e][1，4]二氮杂-5-酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.72(d，J＝5.1Hz，3H，CH3)，1.91- 1.95(m，2H，CH2)，3.78-3.86(m，4H，2CH2)，4.89(s，1H，CH)， 6.45(q，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.54(d，J＝6.0Hz，2H，ArH)，6.58 (d，J＝6.6Hz，1H，ArH)，6.91(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.32(d， J＝6.0Hz，2H，ArH)，7.37-7.39(m，1H，ArH)，7.49(d，J＝6.3Hz， 2H，ArH)，7.98(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C26H24Cl2IN3O2的计算值：607.03；实测值608.0(M+H)。

                             实施例28

N-(2-{(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-5-氧代-4，5-二 氢-3H-苯并[e][1，4]二氮杂-2-基氨基}-乙基)-乙酰胺

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.72(d，J＝5.1Hz，3H，CH3)，2.24(s， 3H，CH3)，3.47-3.90(m，4H，2CH2)，6.08(s，1H，CH)，6.54(q， J＝5.1Hz，1H，CH)，6.91(d，J＝6.0Hz，2H，CH3)，7.15-7.18(m， 3H，ArH)，7.37(d，J＝6.0Hz，2H，CH2)，7.53-7.55(m，3H，ArH)， 8.13(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C27H25Cl2N4O2的计算值：634.04；实测值635.1(M+H)。

                             实施例29

(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2-甲基氨基-3，4-二 氢-苯并[e][1，4]二氮杂-5-酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.67(d，J＝5.1Hz，3H，CH3)，3.17(s， 3H，CH3)，4.85(br s，1H，CH)，6.42(q，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.53 (d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，6.60(d，J＝6.3Hz，1H，ArH)，6.89(d， J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.31(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.38(dd， J＝6.3Hz，J＝1.5Hz，1H，ArH)，7.47(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)， 7.97(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：的计算值 C24H20Cl2IN3O：563.00；实测值563.9(M+H)。

                             实施例30

2-(2-氨基-乙基氨基)-(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7- 碘-3，4-二氢-苯并[e][1，4]二氮杂-5-酮

质谱(LCMS，ESI pos.)：C25H23Cl2IN4O的计算值：592.03；实测值 593.0(M+H)。

                             实施例31

2-[N-(3-氨基-3-氧代丙基)氨基]-(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基) 乙基]-7-碘-3，4-二氢-1，4-苯并二氮杂-5-酮

质谱(LCMS，ESI pos.)：C26H23Cl2IN4O2的计算值：620.02；实测值 621.0(M+H)。

                             实施例32

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-甲氧基羰基-2，5-二氧 代-3，4-二氢-1H-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯

将5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 3，4-二氢-1H-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯(300mg，0.42mmol)、 二氯双-(三苯基膦)Pd(II)(21mg，0.030mmol)和三乙胺(200μL，1.43 mmol)在DMF(4mL)和甲醇(1.5mL)中的溶液，在一氧化碳气氛下于 80℃搅拌24小时。在溶液冷却至室温后，把溶剂减压蒸发。将粗反 应产物用硅胶柱色谱法纯化(EtOAc/己烷，1∶2)，得到本标题化合物。 (226mg，83％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H，3CH3)， 1.58-1.62(m，2H，CH2)，1.75(d，J＝5.4Hz，3H，CH3)，2.24(t， J＝10.5Hz，2H，CH2)，3.62-3.90(m，3H，3CH)，3.91(s，3H，CH3)， 4.23-4.31(m，1H，CH)，5.34(s，1H，CH)，6.45(q，J＝5.4Hz，1H， CH)，6.50(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，6.84(d，J＝6.3Hz，2H，ArH)， 6.94(d，J＝6.6Hz，1H，ArH)，7.32(d，J＝6.6Hz，2H，ArH)，7.50 (d，J＝6.3Hz，2H，ArH)，7.84(dd，J＝6.3Hz，J＝1.5Hz，1H， ArH)，8.33(d，J＝1.5Hz，1H，ArH)。

                             实施例33

(3S)-1-(4-叔丁氧基羰基-丁基)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙 基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-7-甲酸

将5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-甲氧基羰基- 2，5-二氧代-3，4-二氢-1H-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯(实施例32) (200mg，0.31mmol)和NaOH(1N水溶液，380μL)在THF/MeOH/H2O(2mL/400μL/100μL)中的溶液于室温搅拌12小时。把混合物蒸发至 干。然后，把残余物溶解于水(10mL)中，并用1NHCl将pH调整到 4。将溶液用乙醚(3×20mL)萃取，然后将有机层干燥(Na2SO4)并减压 浓缩至干。在硅胶上过滤，得到本标题化合物(150mg，77％)：质谱 (LCMS，ESI pos.)：C33H34Cl2IN2O6的计算值：624.18；实测值568.9 (M+H-t-bu)。

                             实施例34

7-氨基羰基-5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代- 3，4-二氢-1H-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

将(3S)-1-(4-叔丁氧基羰基-丁基)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯 基)-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-7-甲酸(实 施例33)(63mg，0.10mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四 甲基脲六氟磷酸盐(57mg，0.15mmol)、HOBT(20mg，0.15mmol)N，N- 二异丙基乙基胺(70μL，0.4mmol)、氯化铵(11mg，0.2mmol)在DMF (400μL)中的溶液于室温搅拌1小时。溶剂蒸发后，把残余物用EtOAc(15mL)稀释，用水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)然后减压浓缩至干。 通过硅胶色谱法纯化(EtOAc/己烷，1∶1)，得到anoil(58mg)，将其溶 解于二氯甲烷(1.5mL)和TFA(0.5mL)中。将该溶液于室温搅拌10小 时，然后蒸发至干燥。把残余物溶解于冰冷的水(10mL)中并加入 AcONa(100mg)/AcOH(100μL)。用乙醚(3×20mL)提取该溶液，然 后将有机层干燥(Na2SO4)并减压浓缩至干。用柱色谱法纯化 (EtOAc/CH2Cl2/EtOH，5∶4∶1)，得到无色油状物，将其用EtOH中的 NaOH 1N转化为它的钠盐。从EtOH/乙醚中重结晶，得到本标题化 合物(37mg，62％)，为白色粉末：质谱(LCMS，ESI pos.)： C29H27Cl2IN3O5的计算值：567.13；实测值568.0(M+H)。

                             实施例35

5-[4-(4-氯-2-甲基-苄基)-3-(R，S)-(4-氯-苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四 氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71(d，J＝2.2Hz，1H)，7.64-7.68(m， 1H)，7.32(m，1H)，7.16-7.24(m，4H)，7.00(d，J＝7.0Hz，1H)，6.88 (d，J＝7.6Hz，2H)，5.25(s，1H)，5.31(d，J＝15.6Hz，1H)，4.68(d， J＝15.4Hz，1H)，4.20(m，2H)，3.70(m，2H)，2.32(s，4H)，2.16- 2.20(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H25Cl2IN2O4的计算值： 650.02；实测值650.8(M+H)。

                             实施例36

5-{(3R)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.88(d，J＝2.0Hz，1H)，7.56-7.60(m， 1H)，7.40-7.44(m，4H)，7.10-7.14(m，2H)，6.90-6.95(m，2H)，6.80-6.84 (d，J＝8.8Hz，1H)，6.36-6.40(m，1H)，5.32(s，1H)，4.04-4.10(m， 1H)，3.52-3.60(m，1H)，2.03-2.12(m，1H)，1.64-1.68(d，J＝7.2Hz， 4H)，1.40-1.52(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H24Cl2IN2NaO4的计算值：672.1；实测值673.2(M+H)。

                             实施例37

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-[R，S)-1-羟基乙基]- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

a)5-[(3R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-[(R，S)-1-羟基- 乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]-二氮杂-1-基]-戊酸叔丁酯

将5-{(3R，S)-7-乙酰基-3-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸叔丁酯(60 mg，0.096mmol)在MeOH(2mL)中的溶液用NaBH4(5.0mg，0.13 mmol)处理。将该溶液在室温搅拌18小时。将全部溶液施加到制备TLC 板(Analtech Silica Gel GF，20×20cm，2000微米s)上。刮下所需的 带，用MeOH萃取10分钟，过滤并浓缩，得到本标题化合物(55mg， 92％)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C34H38Cl2N2O5的计算值：624.22； 实测值625.4(M+H)。

b)5-[(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羟基-乙 基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

按照实施例1步骤b的方法，由5-[(3R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1- (4-氯-苯基)-乙基]-7-[(R，S)-1-羟基-乙基]-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并 [e][1，4]-二氮杂-1-基]-戊酸叔丁酯合成本标题化合物。1HNMR(400 MHz，DMSO-d6)δ7.56-7.61(m，3H)，7.40-7.50(m，1H)，7.18-7.38(m， 3H)，7.00-7.08(t，J＝8.3Hz，1H)，6.83-6.87(m，2H)，6.50-6.56(m， 2H)，6.35-6.40(m，1H)，5.35(s，1H)，4.68-4.72(m，1H)，4.30-4.40 (m，1H)，3.70-3.79(m，1H)，2.10-2.18(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.3 Hz，4H)，1.50-1.70(m，4H)，1.21-1.26(d，J＝6.6Hz，3H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C30H30Cl2N2O5的计算值：568.1；实测值569.3(M+H)。

                             实施例38

5-[R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羟基乙 基)-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

依次按照实施例37描述的操作制备本标题化合物：1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ7.00-7.61(m，9H)，6.84-6.92(m，2H)，6.36-6.56(m， 3H)，5.30-5.36(m，1H)，4.08-4.76(m，2H)，3.50-3.80(m，1H)，2.05-2.20 (m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.3Hz，3H)，1.20-1.70(m，7H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C30H30Cl2N2O5的计算值：568.1；实测值569.2(M+H)。

                             实施例39

5-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3-(4-三氟甲基-苯基)- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.86-7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.52- 7.58(m，1H)，7.45-7.51(m，4H)，7.12-7.22(m，2H)，6.92-7.05(m， 2H)，6.82-6.94(d，J＝8.8Hz，1H)，6.32-6.38(m，1H)，5.32(s，1H)， 4.08-4.11(m，1H)，3.52-3.64(m，1H)，2.06-2.11(m，2H)，1.62-1.70 (d，J＝7.2Hz，4H)，1.40-1.46(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C29H25ClF3IN2O4的计算值：684.05；实测值685.1(M+H)。

                             实施例40

5-{(S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠

a)5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧 代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸叔丁酯

将5-{(3R，S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二 氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸叔丁酯(3.2g，4.5 mmol)、三甲基甲硅烷基炔化物(1.9mL，13.5mmol)、CuI(189mg， 0.99mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(318mg，0.45mmol)在三乙胺 (200mL)中的混合物在氮气氛下加热至55℃。1小时后，将该溶液趁 热过滤，将滤液浓缩。将5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙 基]-2，5-二氧代-7-三甲基甲硅烷基乙炔基-2，3，4，5-四氢苯并[e ][1，4]二氮 杂-1-基}-戊酸叔丁酯(6.7g，9.9mmol)在THF(100mL)用氟化叔丁 基铵(10mL 1M在THF中的溶液，10mmol)处理。1小时后将反应 溶液浓缩。通过快速色谱法纯化(硅胶，EtOAc/己烷3∶7)，得到本标 题化合物(5.3g，两步的产率为89％)。

5-{(3S)-3-(4-氯-苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠

按照实施例1步骤b，由5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯-苯 基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1- 基}-戊酸叔丁酯合成本标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ 7.59-7.64(m，3H)，7.30-7.40(m，3H)，7.08-7.10(d，J＝8.5Hz，1H)， 6.90-6.93(d，J＝8.5，2H)，6.53-6.58(d，J＝8.8，2H)，6.32-6.39(m， 1H)，5.36(s，1H)，4.24-4.32(m，1H)，3.76-3.84(m，1H)，3.52(s， 1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.1Hz，3H)，1.52-1.64(m， 4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H25Cl2N2NaO4的计算值：570.11； 实测值571.2(M+H)。

                             实施例41

5-{(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R，S)-1-(4-氯苯基)-2-羟基乙基]-7-碘-2，5-二 氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84-7.87(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55- 7.60(m，3H)，7.36-7.40(m，2H)，6.88-6.96(m，3H)，6.56-6.60(d， J＝7.7，2H)，6.20-6.28(m，1H)，5.40(s，1H)，4.12-4.33(m，3H)， 3.70-3.80(s，1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.50-1.76(m，6H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C28H25Cl2IN2O5的计算值：666.02；实测值667.2(M+H)。

                             实施例42

5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75-7.77(d，J＝2.1Hz，1H)， 7.56-7.64(m，3H)，7.39-7.44(m，2H)，6.98-7.03(m，2H)，6.90-6.95 (m，1H)，6.56-6.60(d，J＝7.7Hz，1H)，6.16-6.22(m，1H)，5.26(s， 1H)，4.15-4.24(m，1H)，3.60-3.70(m，1H)，1.76-1.84(m，2H)，1.60-1.68 (d，J＝7.1Hz，3H)，1.44-1.56(m，1H)，1.28-1.37(m，4H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C28H24Cl2IN2NaO4的计算值：672.01；实测值651.2(M- Na)+。

                             实施例43

5-[(3R，S)-4-(4-氯-2-甲基-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.71(d，J＝2.2Hz，1H)，7.64-7.68(m， 1H)，7.32(m，1H)，7.16-7.24(m，4H)，7.00(d，J＝7.0Hz，1H)，6.88 (d，J＝7.6Hz，2H)，5.25(s，1H)，5.31(d，J＝15.6Hz，1H)，4.68(d， J＝15.4Hz，1H)，4.20(m，2H)，3.70(m，2H)，2.32(s，4H)，2.16- 2.20(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H25Cl2IN2O4的计算值： 650.02；实测值650.8(M+H)。

                             实施例44

5-{(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.88(d，J＝2.0Hz，1H)，7.56-7.60(m， 1H)，7.40-7.44(m，4H)，7.10-7.14(m，2H)，6.90-6.95(m，2H)，6.80-6.84 (d，J＝8.8Hz，1H)，6.36-6.40(m，1H)，5.32(s，1H)，4.04-4.10(m， 1H)，3.52-3.60(m，1H)，2.03-2.12(m，1H)，1.64-1.68(d，J＝7.2Hz， 4H)，1.40-1.52(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H24Cl2IN2NaO4的计算值：672.1；实测值673.2(M+H)。

                             实施例45

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-(1-(R，S)-羟基乙基)- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.56-7.61(m，3H)，7.40-7.50(m，1H)， 7.18-7.38(m，3H)，7.00-7.08(t，J＝8.3Hz，1H)，6.83-6.87(m，2H)， 6.50-6.56(m，2H)，6.35-6.40(m，1H)，5.35(s，1H)，4.68-4.72(m， 1H)，4.30-4.40(m，1H)，3.70-3.79(m，1H)，2.10-2.18(m，2H)，1.72-1.76 (d，J＝7.3Hz，4H)，1.50-1.70(m，4H)，1.21-1.26(d，J＝6.6Hz，3H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H30Cl2N2O5的计算值：568.1；实测值569.3 (M+H)。

                             实施例46

5-[(3R，S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-[(R，S)-1-羟基-乙基]- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.00-7.61(m，9H)，6.84-6.92(m，2H)， 6.36-6.56(m，3H)，5.30-5.36(m，1H)，4.08-4.76(m，2H)，3.50-3.80 (m，1H)，2.05-2.20(m，2H)，1.72-1.76(d，J＝7.3Hz，3H)，1.20-1.70 (m，7H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H30Cl2N2O5的计算值：568.1； 实测值569.2(M+H)。

                             实施例47

5-[(3S)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-3-(4-三氟甲基-苯 基)-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基]-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.86-7.91(d，J＝2.0Hz，1H)，7.52- 7.58(m，1H)，7.45-7.51(m，4H)，7.12-7.22(m，2H)，6.92-7.05(m， 2H)，6.82-6.94(d，J＝8.8Hz，1H)，6.32-6.38(m，1H)，5.32(s，1H)， 4.08-4.11(m，1H)，3.52-3.64(m，1H)，2.06-2.11(m，2H)，1.62-1.70 (d，J＝7.2Hz，4H)，1.40-1.46(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C29H25ClF3IN2O4的计算值：684.05；实测值685.1(M+H)。

                             实施例48

5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.59-7.64(m，3H)，7.30-7.40(m， 3H)，7.09(d，J＝8.5Hz，1H)，6.92(d，J＝8.5，2H)，6.54(d，J＝8.8， 2H)，6.32-6.39(m，1H)，5.36(s，1H)，4.24-4.32(m，1H)，3.76-3.84 (m，1H)，3.52(s，1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.73(d，J＝7.1Hz，3H)， 1.52-1.64(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H25Cl2N2NaO4的计 算值：570.1；实测值571.2(M+H)。

                             实施例49

5-{3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯苯基)-2-羟基-乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5- 四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85(d，J＝2.1Hz，1H)，7.55-7.60(m， 3H)，7.36-7.40(m，2H)，6.88-6.96(m，3H)，6.58(d，J＝7.7，2H)， 6.20-6.28(m，1H)，5.40(s，1H)，4.12-4.33(m，3H)，3.70-3.80(s， 1H)，2.12-2.20(m，2H)，1.50-1.76(m，6H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C28H25Cl2IN2O5的计算值：666.02；实测值667.2(M+H)。

                             实施例50

5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸钠

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76(d，J＝2.1Hz，1H)，7.56-7.64(m， 3H)，7.39-7.44(m，2H)，6.98-7.03(m，2H)，6.90-6.95(m，1H)，6.57 (d，J＝7.7Hz，1H)，6.16-6.22(m，1H)，5.26(s，1H)，4.15-4.24(m， 1H)，3.60-3.70(m，1H)，1.76-1.84(m，2H)，1.64(d，J＝7.1Hz，3H)， 1.44-1.56(m，1H)，1.28-1.37(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C28H24Cl2IN2NaO4的计算值：672.01；实测值651.2(M-Na)+。

                             实施例51

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代- 1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-1，3-二氢-1，4- 苯并二氮杂-2，5-二酮。

将(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基}-7-碘-1，3-二氢-1，4-苯 并二氮杂-2，5-二酮(221mg，0.400mmol)、硫代甲醇钠(38mg，0.521 mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(46mg，0.04mmol)在氮气氛下悬浮于正 丁醇(5mL)中。把反应在110℃加热16小时。然后，使反应冷却至室 温，将其在乙酸乙酯与氢氧化钠(1N)之间分配，并用盐酸洗涤(1N)。 收集有机层，将其用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物用 柱色谱法纯化(AcOEt/己烷，1∶1)，得到本标题化合物(91mg，48％)， 确认为“下方的非对映体”(在用AcOEt/己烷进行的TLC中，1∶1)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.16(s，1H)，7.50(d，J＝2.3Hz，1H)， 7.45(d，J＝8.5Hz，2H)，7.24(d，J＝8.5Hz，2H)，7.00(dd，J＝2.3， J＝8.5Hz，1H)，6.83(d，J＝8.5Hz，2H)，6.61(d，J＝8.5Hz，1H)， 6.56(d，J＝8.5Hz，2H)，6.39(m，1H)，5.16(s，1H)，2.33(s，3H)， 1.64(d，J＝7.19Hz，3H)；以及(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基) 乙基]-7-(甲硫基)-1，3-二氢-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮(45mg，24％)， 确认为“上方的非对映体”(在用AcOEt/己烷进行的TLC中，1∶1)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，7.60(d，J＝2.3Hz，1H)， 7.24(d，J＝8.5Hz，2H)，7.15(d，J＝8.5Hz，2H)，7.04(m，3H)， 6.93(d，J＝8.5Hz，2H)，6.45(d，J＝8.5Hz，1H)，6.38(m，1H)， 5.01(s，1H)，2.36(s，3H)，1.59(d，J＝7.2Hz，3H)。

b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧 代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

按照实施例1步骤b描述的方法，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4- 氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-1，3-二氢-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮制备本标 题化合物：1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ10.89(s，1H，酸-OH)，7.38 (d，J＝8.5Hz，2H)，7.33(d，J＝2.3Hz，1H)，7.20(d，J＝8.5Hz， 2H)，6.97(dd，J＝2.3，J＝8.5Hz，1H)，6.75(d，J＝8.5Hz，2H)， 6.67(d，J＝8.5Hz，1H)，6.36(d，J＝8.5Hz，2H)，6.29(m，1H)， 5.26(s，1H)，4.28(m，1H)，3.54(m，1H)，2.35(s，3H)，2.34(m， 2H)，1.63(d，J＝7.19Hz，3H)，1.46(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C29H28Cl2N2O4S的计算值：570.1；实测值571.0(M+H)。

                             实施例52

5-[(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(甲硫基)-2，5-二氧代- 1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.42(d，J＝2.3Hz，1H)，7.27(m，4H)， 6.98(m，3H)，6.75(d，J＝8.5Hz，2H)，6.62(d，J＝8.5Hz，1H)， 6.37(m，1H)，5.22(s，1H)，4.05(m，1H)，3.37(m，1H)，2.35(s， 3H)，2.19(m，2H)，1.58(d，J＝7.2Hz，3H)，1.38(m，4H)。质谱 (LCMS，ESI pos.)：C29H28Cl2N2O4S的计算值：570.1；实测值571.0 (M+H)。

                             实施例53

5-[(3S)3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-2，5-二氧 代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-1，3-二氢 -1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

将(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，3-二氢-1，4-苯 并二氮杂-2，5-二酮(248mg，0.449mmol)、三氟甲硫醇铜(79.5mg， 0.483mmol)、碘化铜(4mg，0.021mmol)、乙二醇(54.5mg，0.878mmol) 和碳酸钾(121mg，0.878mmol)在氮气氛下悬浮于异丙醇(5mL)中。 把反应在110℃加热24小时。然后，使反应冷却至室温，将其在乙 酸乙酯与氢氧化钠(1N)之间分配，用盐酸(1N)洗涤。收集有机层，将 其干燥(Na2SO4)，过滤并在真空下浓缩。用硅胶色谱法纯化(AcOEt/己 烷，3∶7)，得到本标题化合物(203mg，86％)，确认为“下方的非对 映体”(在用AcOEt/己烷进行的TLC中，1∶1)：1H NMR(400MHz， CDCl3)δ9.31(s，1H)，7.98(d，J＝1.0Hz，1H)，7.44(d，J＝8.5Hz， 2H)，7.40(dd，J＝1.0，J＝8.5Hz，1H)，7.25(d，J＝8.5Hz，2H)， 6.87(d，J＝8.5Hz，2H)，6.55(d，J＝8.5Hz，2H)，6.47(d，J＝8.5 Hz，1H)，6.38(m，1H)，5.22(s，1H)，1.64(d，J＝7.2Hz，3H)； 以及(3R)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-1，3-二 氢-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮(24mg，10％)，确认为“上方的非对映 体”(在用AcOEt/己烷进行的TLC中，1∶1)：1H NMR(400MHz，CDCl3) δ8.28(s，1H)，8.07(d，J＝2.0Hz，1H)，7.44(dd，J＝2.0，J＝8.5Hz， 1H)，7.24(d，J＝8.5Hz，2H)，7.19(d，J＝8.5Hz，2H)，7.07(d， J＝8.5Hz，2H)，6.92(d，J＝8.5Hz，2H)，6.36(m，1H)，6.27(d， J＝8.5Hz，1H)，5.01(s，1H)，1.58(d，J＝7.2Hz，3H)。

b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲硫基)-2，5- 二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸.

按照在1位进行烷基化的一般方法，继之按照实施例1步骤b的 方法脱保护，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(三氟甲 硫基)-1，3-二氢-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮制备本标题化合物：1H NMR (400MHz，Cl3CD)δ10.93(s，1H，酸-OH)，7.83(s，1H)，7.38(m， 3H)，7.20(d，J＝7.9Hz，2H)，6.77(d，J＝8.0Hz，2H)，6.51(d， J＝8.5Hz，1H)，6.35(d，J＝7.9Hz，2H)，6.28(m，1H)，5.28(s， 1H)，4.25(m，1H)，3.55(m，1H)，2.27(br s，2H)，1.62(d，J＝6.8  Hz，3H)，1.49(m，4H)。

                             实施例54

5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二 氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

a)5-氯-2-羟基甲基苯酚

将4-氯水杨酸(25g，145mmol)溶解于四氢呋喃(100mL)中并在 氩气氛下用冰-水浴冷却至0℃。在30分钟期间谨慎地滴加硼烷二甲 硫醚复合物(101mL，2M在THF中的溶液)，然后把所得溶液回流16 小时。使反应达到室温并倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，并用盐酸(1N) 洗涤。收集有机层，将其用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残 余物用硅胶色谱法纯化，得到本标题化合物(83％)：1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ7.66(br s，1H)，6.96(d，J＝8.0Hz，1H)，6.91(d， J＝0.95Hz，1H)，6.85(dd，J＝0.95，8.0Hz，1H)，8.86(s，2H)。

b)4-氯-2-羟基苯甲醛

把2，3-二氯-5，6-二氰基-1-4-苯醌(DDQ，9.92g，43.7mmol)加到5- 氯-2-羟基甲基苯酚在二氯甲烷(65mL)和四氢呋喃(15mL)内的溶液 中。将反应混合物在室温搅拌4小时。然后，使溶剂在真空下蒸发， 并将粗产物用硅胶色谱法纯化，得到本标题化合物(72％)：1H NMR (400MHz，CDCl3)δ11.17(s，1H)，9.86(s，1H)，7.49(d，J＝7.3Hz， 1H)，7.00(m，2H)。

c)2-烯丙氧基-4-氯苯甲醛

把4-氯-2-羟基苯甲醛(254mg，1.62mmol)和碳酸铯(793mg，2.43 mmol)在THF(3mL)中的混合物加热回流3小时。反应混合物冷却至 室温后，使溶剂蒸发并将残余物在乙酸乙酯与盐酸(1N)之间分配。收 集有机层，将其用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物用柱 色谱法纯化(AcOEt/己烷，1∶9)，得到本标题产物(97％)：1H NMR(400 MHz，Cl3CD)δ10.46(s，1H)，7.80(d，J＝8.3Hz，1H)，7.05(dd， J＝0.78，8.3Hz，1H)，6.99(d，J＝0.78Hz，1H)，6.09(m，1H)，5.45 (m，2H)，4.67(m，2H)。

d)(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，3-二 氢-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

按照合成二氮杂的一般方法制备本标题化合物，并确认为“下 方的非对映体”(在用AcOEt/己烷进行的TLC中，1∶1)：1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ1H NMR 9.49(s，1H)，7.99(d，J＝1.9Hz，1H)，7.38 (m，3H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，6.40(m，3H)，6.32(m，1H)， 6.24(d，J＝7.8Hz，1H)，5.87(m，1H)，5.29(m，3H)，4.31(m，1H)， 1.62(d，J＝7.2Hz，3H)。在该反应中获得(3R)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯 基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，3-二氢-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮 并确认为“上方的非对映体”(在用AcOEt/己烷进行的TLC中，1∶1)：

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.22(s，1H)，8.06(d，J＝1.6Hz，1H)， 7.45(dd，J＝1.6，8.3Hz，1H)，7.22(d，J＝8.3Hz，2H)，7.08(d， J＝8.4Hz，2H)，6.76(d，J＝8.4Hz，1H)，6.65(dd，J＝1.3，J＝8.4 Hz，1H)，6.59(d，J＝1.3Hz，1H)，6.28(m，2H)，5.83(m，1H)， 5.24(m，1H)，5.05(s，1H)，4.35(m，2H)，1.50(d，J＝7.1Hz，3H)。

e)5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5- 二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

按照在1位进行烷基化的一般方法，继之按照实施例1步骤b的 方法脱保护，由(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙 基]-7-碘-1，3-二氢-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮制备本标题化合物：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.63(br s，1H)，7.94(d，J＝2.1Hz，1H)， 7.45(m，3H)，7.26(d，J＝8.5Hz，2H)，6.56(d，J＝8.6Hz，1H)， 6.48(d，J＝1.9Hz，1H)，6.43(m，1H)，6.35(m，1H)，6.16(m，1H)， 5.96(m，1H)，5.35(m，2H)，5.23(s，1H)，4.42(m，2H)，4.20(m， 1H)，3.54(m，1H)，2.34(m，2H)，1.75(d，J＝7.1Hz，3H)，1.56(m， 4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C31H29Cl2IN2O5的计算值：706.05；实 测值706.7(M+H)。

                             实施例55

5-[(3S)-3-(4-氯-2-羟基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代- 1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

a)5-[(3S)-3-(4-氯-2-羟基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧 代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯

在室温把5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙 基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯(224mg，0.29 mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(10mg，0.015mmol)溶解于THF(5 mL)中。加入硼氢化钠(11mg，0.29mmol)，并将反应在氩气氛下搅 拌30分钟。加入甲醇(10mL)，并将反应再搅拌15分钟。在真空下 使溶剂蒸发，然后将残余物用柱色谱法纯化(AcOEt/己烷，1∶2)，得到 200mg混杂以5-[(3S)-3-(2-烯丙氧基-4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙 基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯的本标题化合物。 将该化合物不用进一步纯化直接用于下一步骤。

b)5-[(3S)-3-(4-氯-2-羟基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧 代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸

按照实施例1步骤b的方法，由5-[(3S)-3-(4-氯-2-羟基苯基)-4- [(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔 丁酯制备本标题化合物：1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.99(d，J＝2.1 Hz，1H)，7.42(m，3H)，7.22(d，J＝8.5Hz，2H)，6.62(d，J＝8.6Hz， 1H)，6.50(d，J＝1.9Hz，1H)，6.34(m，2H)，6.09(m，1H)，5.26(s， 1H)，3.87(m，1H)，3.74(m，1H)，2.39(m，2H)，1.75(m，7H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H25Cl2IN2O5的计算值：666.02；实测值 666.6(M+H)；以及21mg 5-[(3S)-3-(4-氯-2-羟基苯基)-4-[(R)-1-(4-氯 苯基)乙基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸：1H NMR(400 MHz，Cl3CD)δ7.67(m，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，2H)，7.21(d，J＝ 8.4Hz，2H)，7.15(m，1H)，7.06(m，1H)，6.88(d，J＝8.1Hz，1H)， 6.54(d，J＝1.9Hz，1H)，6.35(m，1H)，6.27(dd，J＝1.9，J＝8.4Hz， 1H)，6.10(d，J＝8.4Hz，1H)，5.26(s，1H)，3.85(m，2H)，2.39(m， 2H)，1.72(m，7H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H26Cl2N2O5的计算 值：540.1；实测值540.8(M+H)。

                             实施例56

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-苯基-1，4- 二氮杂-1-基]戊酸钠盐

a)α-溴-α-(4-氯苯基)乙酸甲酯

将4-氯苯基乙酸甲酯(14.6g，79.1mmol)、N-溴琥珀酰亚胺(14.4 g，80.7mmol)和过氧化苯甲酰(1.91g，7.89mmol)在四氯化碳(100mL) 中的溶液回流加热3小时。在混合物冷却至室温后，加入己烷(500 mL)。过滤反应混合物并在真空下使溶剂蒸发。将粗产物用硅胶柱色 谱法纯化(EtOAc/己烷，15∶85)，得到作为无色油状物的本标题化合物 (16.9g，63％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.81(s，3H，CH3)，5.34 (s，1H，CH)，7.44(dd，J＝60.4Hz，J＝8.4Hz，4H，ArH)。

b)α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]氨基]乙酸甲酯盐酸盐

将α-溴-α-(4-氯苯基)乙酸甲酯(2.63g，10mmol)、(R)-1-(4-氯苯基) 乙胺(1.55g，10mmol)、碳酸钾(2.76g，20mmol)和碘化四丁基铵(500 mg，1.35mmol)在无水乙腈(10mL)中的混合物在45℃加热12小时。 在混合物冷却至室温后，将溶剂在真空下蒸发。然后，将残余物在冰 冷的水(50mL)与乙酸乙酯(70mL)之间分配。将水层用另外的乙酸乙 酯(2×50mL)萃取两次并干燥(Na2SO4)。在溶剂蒸发后，将残余物通 过硅胶色谱法纯化(EtOAc/己烷，5∶95至15∶85)，然后转化为盐酸盐， 得到作为无色粉末的本标题化合物(2.5g，74％，两种非对映体的混合 物)：1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.74(t，J＝6.8Hz，3H，CH3)， 3.69(s，1.5H，0.5CH3)，3.82(s，1.5H，0.5CH3)，4.41(q，J＝6.8Hz， 0.5H，0.5CH)，4.49(q，J＝6.8Hz，0.5H，0.5CH)，4.99(s，0.5H， 0.5CH)，5.12(s，0.5H，0.5CH)，7.42-7.56(m，8H，ArH)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C17H17Cl2NO2的计算值：337.0；实测值：338.0(M+H)+。

c)(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂酰基)氨基] 乙酸甲酯

在0℃向(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]氨基]乙 酸甲酯(1.0g，2.96mmol)和4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(100mg，0.82 mmol)在二氯甲烷(30mL)内的搅拌着的溶液中加入肉桂酰氯(542 mg，3.25mmol)。然后，缓慢加入N，N-二异丙基乙基胺(2.0mL，11.5 mmol)。于0℃搅拌20分钟后，将反应混合物在25℃加热1小时， 然后用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，并减压浓缩至干。 通过硅胶色谱法纯化(AcOEt/己烷，1∶8)，得到作为淡黄色固体的本标 题化合物(1.0g，74％)：质谱(LCMS，ESI pos.)：C26H23Cl2NO3的计 算值：467.0；实测值：468.0(M+H)+。

d)α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂酰基)氨基]乙酸

把(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂酰基) 氨基]乙酸甲酯(453mg，1.0mmol)和氢氧化钠(600mg，15.0mmol)在 四氢呋喃(5mL)、甲醇(8mL)和水(2mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。 将反应混合物减压浓缩，并用1N HCl将pH调节至4。将所得溶液用 AcOEt(20mL)萃取2次，干燥(Na2SO4)并蒸发，得到作为无色粉末 的本标题化合物(420mg，92％，两种非对映体的混合物)：1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ1.62(d，J＝7.0Hz，1.5H，0.5CH3)，1.84(d，J＝7.0 Hz，1.5H，0.5CH3)，4.84(s，1H，CH)，4.88(s，1H，CH)，5.45- 5.53(m，1H，CH)，6.93-7.91(m，15H，13ArH+2CH)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C25H21Cl2NO3的计算值：453.0；实测值：454.0(M+H)+。

e)(S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂酰基)氨基] 乙酰胺

向(R，S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)-N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂酰基) 氨基]乙酸(400mg，0.88mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N，N’- 四甲基脲六氟磷酸盐(502mg，1.32mmol)、氯化铝(94mg，1.76mmol) 和1-羟基苯并三唑(178mg，1.32mmol)在二甲基甲酰胺(3mL)内的搅 拌着的溶液中缓慢加入N，N-二异丙基乙胺(613μL，3.52mmol)。2小 时后，将反应混合物在乙酸乙酯(100mL)与水(60mL)之间分配，干燥 (Na2SO4)并蒸发。用柱色谱法纯化(AcOEt/己烷，2∶8)，得到作为无色 固体的本标题化合物(150mg，38％，“在用AcOEt/己烷1∶3进行的TLC 中，下方的非对映体”)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.86(d，J＝6.8 Hz，3H，CH3)，4.76(s，1H，CH)，5.40-5.49(m，1H，CH)，5.62(br s，1H，NH)，6.32(br s，1H，NH)，6.90-7.86(m，15H，13ArH+2CH)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C25H22Cl2N2O2的计算值：452.0；实测值： 453.0(M+H)+。

f)(3S)-1，3，6，7-四氢-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-苯基-6- (苯基硒基)-1，4-二氮杂-2，5-二酮

将三氟甲磺酸银(1.69g，6.6mmol)加到(S)-α-(4-氯苯基)-α-[(R)- N-[1-(4-氯苯基)乙基]-N-(肉桂酰基)氨基]乙酰胺(1.5g，3.3mmol)在乙 腈(120mL)内的搅拌着的溶液中。向所得溶液中依次加入苯硒基溴 (1.54g，6.53mmol)和二甲基甲酰胺(5.2mL)。6小时后，使溶剂在真 空下蒸发。将残余物在乙酸乙酯(100mL)与1N碳酸氢钠(70mL)之间 分配，干燥(Na2SO4)并蒸发。用柱色谱法纯化(AcOEt/己烷，1∶3)得到 本标题化合物，将其从Et2O中重结晶，得到无色棱晶(855mg，43％)： 1H NMR(400MHz，CDCl2)δ1.68(d，J＝7.0Hz，3H，CH3)，4.29(d， J＝12.2Hz，1H，CH)，4.79(d，J＝12.2Hz，1H，CH)，5.28(s，1H， CH)，6.21-6.25(m，3H，ArH)，6.31(q，J＝7.0Hz，1H，CH)，6.71-6.76 (m，4H，ArH)，6.93-7.11(m，6H，NH+5ArH)，7.34-7.40(m，4H， ArH)，7.50(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C31H26Cl2N2O2Se的计算值：608.0；实测值：609.0(M+H)+。

g)(3S)-1，3-二氢-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-苯基-1，4-二 氮杂-2，5-二酮

将过氧化氢(500μL，30％在水中)缓慢加到(3S)-1，3，6，7-四氢-3-(4- 氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-苯基-6-(苯基硒基)-1，4-二氮杂- 2，5-二酮(300mg，0.49mmol)在氢呋喃(6mL)内的溶液中。20分钟后， 把溶剂减压蒸发，并将残余物在1N碳酸氢钠(20mL)与乙酸乙酯(50 mL)之间分配，干燥(Na2SO4)并蒸发。用柱色谱法纯化(AcOEt/己烷 /CH2Cl2，1∶2∶2)得到作为无色粉末的本标题化合物(200mg，85％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.70(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，5.28(s， 1H，CH)，5.70(d，J＝1.6Hz，1H，CH)，6.35(q，J＝7.2Hz，1H， CH)，6.83(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，7.09(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)， 7.18-7.42(m，7H，ArH)，7.53(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C25H20Cl2N2O2的计算值：450.0；实测值：451.0(M+H)+。

h)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-苯基- 1，4-二氮杂-1-基]戊酸钠盐

按照在1位上进行烷基化的一般方法，然后按照实施例1步骤b 中描述的方法脱保护，由(3S)-1，3-二氢-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯 基)乙基]-7-苯基-1，4-二氮杂-2，5-二酮合成本标题化合物：1H NMR (400MHz，CDCl3)δ1.45-1.53(m，4H，2CH2)，1.68(d，J＝7.2Hz， 3H，CH3)，2.29(t，J＝6.8Hz，2H，CH2)，2.87-2.93(m，1H，CH)， 4.15-4.23(m，1H，CH)，5.40(s，1H，CH)，5.72(s，1H，CH)，6.32 (q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.81(d，J＝7.6Hz，2H，ArH)，7.02-7.08 (m，4H，ArH)，7.26-7.34(m，5H，ArH)，7.48(d，J＝8.4Hz，2H， ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H28Cl2N2O4的计算值：550.0；实 测值：551.0(M+H)+。

                             实施例57

5-[(3S)-7-(2-溴苯基)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代 -1，4-二氮杂-1-基]戊酸钠盐

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.46-1.53(m，4H，2CH2)，1.69(d，J＝ 7.2Hz，3H，CH3)，2.29(t，J＝6.8Hz，2H，CH2)，2.87-2.93(m，1H， CH)，4.15-4.23(m，1H，CH)，5.41(s，1H，CH)，5.66(s，1H，CH)， 6.31(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.88(d，J＝7.6Hz，2H，ArH)，7.10-7.60 (m，10H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H27BrCl2N2O4的计算 值：628.0；实测值：629.0(M+H)+。

                             实施例58

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2，5-二甲基苯基)-2，5- 二氧代-1，4-二氮杂-1-基]戊酸钠盐

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.43-1.63(m，4H，2CH2)，1.70(d，J＝ 7.2Hz，3H，CH3)，2.04(s，3H，CH3)，2.12(s，3H，CH3)，2.27-2.34 (m，2H，CH2)，2.87-2.93(m，1H，CH)，4.15-4.23(m，1H，CH)， 5.51(s，1H，CH)，5.75(s，1H，CH)，6.26(q，J＝7.2Hz，1H，CH)， 6.77(d，J＝7.6Hz，2H，ArH)，6.80-7.65(m，9H，ArH)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C32H32Cl2N2O4的计算值：578.0；实测值：579.0(M+H)+。

                             实施例59

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-2，5-二氧 代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸钠盐

a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-1，4-苯并 二氮杂-2，5-二酮

将(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮 杂-2，5-二酮(120mg，0.22mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(25mg，0.022 mmol)、2-甲基苯硼酸(35mg，0.26mmol)和碳酸钠(220μL，2M水溶 液)在乙醇(300μL)和甲苯(5mL)中的溶液在氩气氛下于90℃加热10 小时。混合物于室温冷却后，使溶剂在真空下蒸发。将残余物在AcOEt(20mL)与水(15mL)之间分配，干燥(Na2SO4)并蒸发。通过硅胶色谱 法纯化(AcOEt/己烷/CH2Cl2，1∶6∶3)获得本标题化合物(92mg，68％)， 为无色粉末：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.78(d，J＝7.2Hz，3H， CH3)，1.99(s，3H，CH3)，5.29(s，1H，CH)，6.51(q，J＝7.2Hz， 1H，CH)，6.64-6.67(m，2H，ArH)，6.71(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)， 6.93(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.05-7.11(m，1H，ArH)，7.15(dd， J＝8.0Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.20-7.26(m，3H，ArH)，7.35(d， J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.56(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.61(d，J＝ 2.0Hz，1H，ArH)，7.91(br s，1H，NH)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C30H24Cl2N2O2的计算值：514.0；实测值：515.0(M+H)+。

b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(2-甲基苯基)-2，5-二 氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸钠盐

按照在1位上进行烷基化的一般方法，然后按照实施例1步骤b 中描述的方法脱保护，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]- 7-(2-甲基苯基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮制备本标题化合物：1H NMR (400MHz，CDCl3)δ1.65(m，7H，CH3+2CH2)，1.98(s，3H，CH3)， 2.41(t，J＝7.6Hz，2H，CH2)，3.70-3.77(m，1H，CH)，4.39-4.46(m， 1H，CH)，5.37(s，1H，CH)，6.44(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.50- 6.53(m，2H，ArH)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，6.91(d，J＝8.4 Hz，1H，ArH)，7.06-7.15(m，2H，ArH)，7.20-7.26(m，3H，ArH)， 7.32(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.50-7.52(m，3H，ArH)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C35H32Cl2N2O4的计算值：614.0；实测值：615.0(M+H)+。

                             实施例60

5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并 二氮杂-1-基]戊酸钠盐

a)1-(4-氯-2-硝基苯基)乙醇

在氩气氛下于-78℃将甲基锂(46mL，1.4M在Et2O中)溶液缓 慢加到4-氯-2-硝基苯甲醛(10g，53.9mmol)在无水四氢呋喃(150mL) 内的搅拌着的溶液中。20分钟后，于-78C将反应混合物用水(400mL) 处理，用乙酸乙酯(500mL)萃取两次，干燥(Na2S4)并减压浓缩至干。 通过硅胶色谱法纯化(EtOAc/CH2Cl2/EtOH，1∶6∶1)。得到本标题化合 物(7.2g，66％)为黄色油状物：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.56(d， J＝6.4Hz，3H，ArH)，2.40(br s，1H，OH)，5.42(q，J＝6.4Hz， 1H，CH)，7.63(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.82(d，J＝ 8.4Hz，1H，ArH)，7.92(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)。

b)[(S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基](1S)-樟脑酸盐和[(R)-1-(4-氯-2-硝基 苯基)乙基](1S)-樟脑酸盐

于0℃氩气氛下把二异丙基乙胺(9.3mL，53.3mmol)缓慢加到 (R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙醇(10.2g，50.8mmol)、4-二甲基氨基吡 啶(244mg，2.0mmol)和(1S)-莰基氯(11.0g，50.8mmol)在四氢呋喃(70 mL)中的溶液中。然后将反应混合物加热至室温。8小时后，使溶剂 在真空下蒸发，并将残余物在CH2Cl2与1N NaHCO3之间分配，干燥 (Na2SO4)并通过硅胶过滤。将溶剂减压浓缩。把残余物溶解于氯仿(100 mL)中，然后缓慢地加入己烷(300mL)。10分钟后，本标题化合物开 始结晶。20分钟后，把棱晶过滤并用小部分二氯甲烷/己烷(1∶5)洗涤。 该化合物称为本标题化合物(4.8g，25％)：1H NMR(400MHz，CDCl3) δ1.03(s，3H，CH3)，1.07(s，3H，CH3)，1.15(s，3H，CH3)，1.70(d， J＝6.4Hz，4H，2CH2)，1.88-2.01(m，2H，CH2)，235-2.42(m，1H， CH)，6.52(q，J＝6.4Hz，1H，CH)，7.64(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz， 1H，ArH)，7.71(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，7.99(d，J＝2.0Hz，1H， ArH)。将滤液在乙醚中重结晶，得到其它非对映体[(R)-1-(4-氯-2-硝 基苯基)乙基](1S)-樟脑酸盐。

c)(R，S)-N-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]邻苯二甲酰亚胺

于-78℃和氩气氛下把偶氮二甲酸二异丙酯(1.46mL，7.44mmol) 加到(R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙醇(1.0g，4.96mmol)、三苯基膦(730 mg，4.96mmol)和邻苯二甲酰亚胺(730mg，4.96mmol)在四氢呋喃(20  mL)内的溶液中。然后，将反应混合物加热至25℃。2小时后，将溶 剂减压浓缩，通过硅胶色谱法纯化(AcOEt/己烷，1∶1)获得本标题化合 物(1.4g，85％)，为无色固体：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.97(d， J＝7.2Hz，3H，CH3)，6.04(q，J＝7.2Hz，1H，ArH)，7.58-7.61(m， 1H，ArH)，7.72-7.75(m，2H，ArH)，7.81-7.84(m，3H，ArH)，7.81 (d，J＝8.8，1H，ArH)。

d)(R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙胺

将(R，S)-N-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]邻苯二甲酰亚胺(1.2g，3.63 mmol)和肼(1.2mL，38.2mmol)在乙醇(10mL)中的混合物回流加热1 小时。在混合物冷却至室温后，过滤去沉淀物并将溶剂在真空下蒸发。 将粗产物用硅胶柱色谱法纯化(EtOAc/EtOH/CH2Cl2，4∶1∶5)，得到本 标题化合物(600mg，82％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz，CDCl3) δ1.44(d，J＝6.5Hz，3H，CH3)，1.58(br s，2H，NH2)，4.60(q，J＝ 6.5Hz，1H，CH)，7.58(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.79-7.81 (m，2H，ArH)。

e)5-[3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯 并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯

按照合成二氮杂的一般方法，由(R，S)-1-(4-氯-2-硝基苯基)乙胺 制备本标题化合物：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H，3CH3)， 1.60-1.69(m，4H，2CH2)，1.79(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，2.22(t， J＝7.0Hz，2H，CH2)，3.58-3.67(m，1H，CH)，4.17-4.25(m，1H， CH)，5.38(s，1H，CH)，6.52(d，J＝8.8Hz，1H，ArH)，6.62-6.70(m， 3H，2ArH+CH)，6.94(d，J＝8.8Hz，2H，ArH)，7.45(dd，J＝8.4 Hz，J＝2.0Hz，1H，ArH)，7.56(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H， ArH)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.86(d，J＝2.4Hz，1H，ArH)， 7.97(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)

f)5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯 并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯

将氯化铵(220mg，4.3mmol)在水(2.5mL)中的溶液加到5-[3-(4- 氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂 -1-基]戊酸叔丁酯(230mg，0.306mmol)在乙醇(5mL)内的溶液中。 把所得溶液加热至80℃并加入铁(200mg，3.58mmol)。于80℃2小 时后，将反应混合物在室温冷却，通过硅藻土过滤并蒸发。将残余物 在乙酸乙酯与水之间分配，干燥(Na2SO4)并蒸发。通过硅胶色谱法纯 化(EtOAc/己烷，1∶1)获得本标题化合物(210mg，95％)，为无色固体： 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.44(s，9H，3CH3)，1.57-1.63(m，4H， 2CH2)，1.74(d，J＝7.2Hz，3H，CH3)，2.24(t，J＝7.2Hz，2H， CH2)，3.63-3.70(m，1H，CH)，4.28-4.35(m，1H，CH)，4.75(br s， 2H，NH2)，5.28(s，1H，CH)，6.27(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，6.60-6.69 (m，5H，ArH)，6.90(d，J＝9.2Hz，2H，ArH)，7.20(d，J＝8.4Hz， 1H，ArH)，7.49(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.93(d， J＝2.0Hz，1H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C32H34Cl2IN3O4的 计算值：721.0；实测值：722.0(M+H)+。

g)5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯 并二氮杂-1-基]戊酸钠盐

按照实施例1步骤b描述的方法，由5-[4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙 基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯 制备本标题化合物(76％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.63-1.68(m， 4H，2CH2)，1.75(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，237-2.41(m，2H，CH2)， 3.64-3.71(m，1H，CH)，4.33-4.40(m，1H，CH)，5.29(s，1H，CH)， 6.26(q，J＝6.8Hz，1H，CH)，6.61-6.68(m，5H，ArH)，6.90(d， J＝8.8Hz，2H，ArH)，7.21(d，J＝8.4Hz，1H，ArH)，7.50(dd， J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H，ArH)。 质谱(LCMS，ESI poS.)：C28H26Cl2IN3O4的计算值：665.0；实测值： 666.0(M+H)+。

                             实施例61

5-[4-[(2-氨基-4-氯苄基]-7-溴-3-(4-氯苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂 -1-基]戊酸钠盐

a)5-[7-溴-3-(4-氯苯基)-4-[(4-氯-2-硝基苄基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮 杂-1-基]戊酸叔丁酯

按照苯并二氮杂的烷基化的一般方法，由5-[7-溴-3-(4-氯苯基)- 3，4-二氢-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸叔丁酯和4-氯-2-硝基 苄基氯制备本标题化合物(63％)：质谱(LCMS，ESI pos.)： C31H30BrCl2N3O6的计算值：689.0；实测值：690.0(M+H)+。 b)5-[4-(2-氨基-4-氯苄基)-7-溴-3-(4-氯苯基)-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮 杂-1-基]戊酸钠盐

依次按照实施例1步骤e、f描述的方法，由5-[7-溴-3-(4-氯苯 基)-4-[(4-氯-2-硝基苯基)甲基]-2，5-二氧代-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸 叔丁酯制备本标题化合物(46％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.62- 1.78(m，4H，2CH2)，2.36-2.40(m，2H，CH2)，3.66-3.73(m，1H， CH)，4.24-4.31(m，1H，CH)，4.37(d，J＝14.8Hz，1H，CH)，5.39 (s，1H，CH)，5.42(d，J＝14.8Hz，1H，CH)，6.60(dd，J＝8.4Hz， J＝2.4Hz，1H，ArH)，6.68-6.71(m，3H，ArH)，6.80(d，J＝8.8Hz， 1H，ArH)，6.97(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.07(d，J＝8.4Hz，1H， ArH)，7.34(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H，ArH)，7.74(d，J＝2.4 Hz，1H，ArH)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C27H24BrCl2N3O4的计算值： 603.0；实测值：604.0(M+H)+。

                             实施例62

4-(4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂- 2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.09(s，1H)，7.87(s，1H)，7.52(d， J＝8.3Hz，1H)，7.44-7.37(br m，2H)，7.36-7.30(m，2H)，7.10-7.04(m， 2H)，6.87-6.77(br m，2H)，6.43(d，J＝8.3Hz，1H)，5.33(s，1H)， 5.03-4.91(m，2H)。质谱(LCMS，ESI，pos.)：C22H15Cl2IN2O2计算值： 535.9；实测值：537.03(M+H)。

                             实施例63

4-(R)-[1-(2-氨基-4-氯-5-氟-苯基)-乙基]-3(S)-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-吗 啉-4-基-乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

a)1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙醇

将4-氯-3-氟-苯甲醛(5.14g，32.4mmol)溶解于THF(100mL)并 于-78℃和氮气氛下放置。保持同样温度在3分钟期间将甲基锂(1.6M 在乙醚中的溶液，22.3mL)加到反应中。加入后，将反应在室温搅拌 1小时。然后，把反应倒入冰水上，并用乙酸乙酯和盐酸1N萃取。 收集有机层，将其用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩得到粗产物， 用50％己烷-乙酸乙酯作为溶剂将其进行硅胶色谱纯化，得到5.1g 1-(4- 氯-3-氟-苯基)-乙醇。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.37(t，J＝8.14Hz， 1H)，7.20(dd，J＝1.86，10.00Hz，1H)，7.09(dd，J＝1.86，8.14Hz， 1H)，4.89(m，1H)，1.93(br s，1H)，1.49(d，J＝6.51，3H)。

b)2-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-异吲哚-1，3-二酮

把1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙醇(5.1g，29.2mmol)、邻苯二甲酰亚胺(4.3 g，29.2mmol)和三苯基膦(11.49g，43.8mmol)溶解于THF(100ml) 中并于-78℃氮气氛下置放。然后，一次性加入偶氮二甲酸二异丙酯 (8.86g，43.8mmol)。把反应于室温放置并搅拌30分钟。将溶剂蒸发， 并用70％己烷-乙酸乙酯作为溶剂将其进行硅胶色谱纯化，得到4.08g 2-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-异吲哚-1，3-二酮。1H NMR(400MHz， Cl3CD)δ7.83(m，2H)，7.73(m，2H)，7.34(m，2H)，7.21(dd，J＝ 1.93，8.14Hz，1H)，5.53(m，1H)，1.91(d，J＝7.29，3H)。

c)1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙胺

把2-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-异吲哚-1，3-二酮(4.08g，13.4mmol) 溶解于THF(100mL)中。加入肼(4mL)。将反应于80℃搅拌1小时。 然后，将溶剂蒸发，并用乙酸乙酯作为溶剂将其硅胶色谱纯化，得到 2.0g 1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙胺。1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ7.34(t， J＝7.97Hz，1H)，7.18(dd，J＝1.90，10.25Hz，1H)，7.08(dd，J＝1.90， 7.97Hz，1H)，4.12(m，1H)，1.36(d，J＝6.64，3H)。

d)N-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺

把1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙胺(2.0g，11.5mmol)溶解于吡啶(20mi) 中并于0℃和氮气氛下放置。然后，一次性加入三氟乙酸酐(3.63g，17.2 mmol)。使反应达到室温并搅拌16小时。真空下除去溶剂，并用乙酸 乙酯-氢氧化钠1N萃取粗产物。收集有机层并用盐酸(1N)和盐水再次 萃取。收集有机层，用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩得到粗产物， 用50％己烷-乙酸乙酯作为溶剂将其进行硅胶色谱纯化，得到1.374g N-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺。1H NMR(400MHz， Cl3CD)δ7.49(d，J＝7.29Hz，1H)，7.35(t，J＝7.92Hz，1H)，7.11 (dd，J＝1.93，9.86Hz，1H)，7.04(dd，J＝1.93，7.29Hz，1H)，5.06 (m，1H)，1.53(d，J＝7.07，3H)。

e)N-[1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺

把N-[1-(4-氯-3-氟-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺(1.374g，5.09 mmol)于室温溶解于浓硫酸(25mL)中。使用冰水浴，将溶液于0℃放 置，并加入硝酸钾(0.567g，5.60mmol)。将反应在同样温度搅拌15 分钟，然后使其达到室温并搅拌16小时。然后把反应倒入冰水上并 用乙酸乙酯-水萃取。收集有机层并用氢氧化钠(1N)和盐水再次萃取。 收集有机层，用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩得到粗产物，用80 ％己烷-乙酸乙酯作为溶剂将其进行硅胶色谱纯化，得到1.13g N-[1-(4- 氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺。1H NMR(400MHz， Cl3CD)δ8.16(d，J＝6.43Hz，1H)，7.30(d，J＝9.00Hz，1H)，7.08 (br s，1H)，5.52(m，1H)，1.65(d，J＝7.07，3H)。

f)1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙胺

把N-[1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙基]-2，2，2-三氟-乙酰胺(286 mg，0.909mmol)于室温溶解于THF(10mL)中。然后，加入氢氧化 锂一水合物(46mg，1.09mmol)在水(2mL)中的溶液。继之用乙酸乙 酯作为溶剂，将反应进行TLC。2小时后，再次加入氢氧化锂一水合 物(46mg，1.09mmol)在水(2mL)中的溶液。将反应于室温搅拌3天。 然后，将反应用乙酸乙酯-氢氧化钠(1N)和盐水萃取。收集有机层，用 硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩得到粗产物，将其进行硅胶色谱纯 化，得到148mg 1-(4-氯-3-氟-2-硝基-苯基)-乙胺。1H NMR(400MHz， Cl3CD)δ7.90(d，J＝6.43Hz，1H)，7.64(d，J＝10.07Hz，1H)，4.62 (m，1H)，1.58(br s，2H)，1.33(d，J＝6.43，3H)。

g)4(R，S)-[1-(2-氨基-4-氯-5-氟-苯基)-乙基]-3(S，R)-(4-氯-苯基)-7-碘-1- (2-吗啉-4-基-乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

按照合成二氮杂的一般方法合成本标题化合物。1H NMR(400 MHz，Cl3CD)δ7.79(d，J＝1.93Hz，1H)，7-57(dd，J＝1-93，6.64Hz， 1H)，7.32(d，J＝10.23Hz，1H)，7.03(d，J＝6.64Hz，1H)，6.85(m， 3H)，6-57(d，J＝8.36Hz，2H)，6.10(m，1H)，5.54(s，1H)，4.42(m， 1H)，4.23(m，1H)，3.97(br s，2H)，3.74(br s，2H)，3.46(m，6H)， 1-67(d，J＝7.07Hz，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H28Cl2FIN4O3的计算值：696.06；实测值：696.9(M+H)。

                             实施例64

4(R，S)-[1-(2-氨基-4-氯-5-羟基-苯基)-乙基]-3(S，R)-(4-氯-苯基)-7-碘-1- (2-吗啉-4-基-乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

该化合物是作为深灰色拉63的副产物获得的(步骤g)。1H NMR (400MHz，Cl3CD)δ7.82(d，J＝1.93Hz，1H)，7.59(dd，J＝1.93， 8.79Hz，1H)，7.31(s，1H)，7.02(s，1H)，6.88(m，3H)，7.37(d， J＝8.57Hz，2H)，6.05(m，1H)，5.76(s，1H)，4.41(m，1H)，4.24(m， 1H)，3.97(br s，2H)，3.75(br s，2H)，3.47(m，6H)，1.75(d，J＝6.86 Hz，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H29Cl2IN4O4的计算值：694.06； 实测值694.9(M+H)。

                             实施例65

3(S)-(4-氯-2-羟基-苯基)-4(R)-[1-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-3，4-二氢-1H- 苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，Cl3CD)δ8.97(s，1H)，8.03(d，J＝1.93Hz，1H)， 7.66(br s，1H)，7.34(d，J＝8.57Hz，2H)，7.21(dd，J＝1.93，8.36 Hz，1H)，7.16(d，J＝8.36Hz，2H)，6.42(m，2H)，6.31(m，2H)， 6.22(d，J＝8.57Hz，1H)，5.13(s，1H)，1.88(br s，1H)，1.62(d， J＝7.07Hz，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C23H17Cl2IN2O3计算值： 565.9；实测值：566.4(M+H)。

                             实施例66

4-[1-(2-氨基-4-氯-苯基)-乙基]-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1- 基)-丙基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.91(s，1H)，7.72(m，1H)，7.67(d， 1H，J＝6.4Hz)，7.51(m，1H)，7.34(m，1H)，6.98(m，3H)，6.45(m， 2H)，6.23(q，1H，J＝6.4Hz)，5.98(m，1H)，4.28(m，1H)，4.05- 3.56(bm，10H)，3.40(bs，1H)，3.05(s，3H)，2.36-2.18(bm，2H)， 1.89(d，3H，J＝6.8Hz)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C31H34Cl2IN5O2的计算值：705.1；实测值：705.9(M+H)。

                             实施例67

4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-1-(4-二甲基氨基-丁基)-7-碘-3，4-二 氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.85(d，1H，J＝2.0Hz)，7.48(dd， 1H，J＝2.0，8.8Hz)，7.21(d，1H，J＝8.4Hz)，7.04(d，2H，J＝8.4 Hz)，6.94(d，1H，J＝8.8Hz)，6.81(m，3H)，6.62(dd，1H，J＝2.0， 8.8Hz)，5.53(s，1H)，5.23(d，1H，J＝14.4Hz)，4.63(d，1H，J＝14.4 Hz)，4.40(m，1H)，3.77(m，1H)，3.07(m，2H)，2.85(d，6H，J＝ 5.2Hz)，1.71-1.52(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H29Cl2IN4O2的计算值：650.07；实测值：651.0(M+H)。

                             实施例68

4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(4-吗啉-4-基-丁基)-3，4-二氢 -1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.86(d，1H，J＝2.0Hz)，7.65(dd， 1H，J＝2.0，8.8Hz)，7.21(d，1H，J＝8.4Hz)，7.04(d，2H，J＝8.8 Hz)，6.94(d，H，J＝8.8Hz)，6.80(m，3H)，6.60(dd，1H，J＝2.0， 8.8Hz)，5.54(s，1H)，5.25(d，1H，J＝14.4Hz)，4.62(d，1H，J＝14.4 Hz)，4.40(m，1H)，4.09(m，2H)，3.75(m，3H)，3.41(m，2H)，3.09 (m，4H)，1.60(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H31Cl2IN4O3的 计算值：692.08；实测值：693.0(M+H)。

                             实施例69

4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丁 基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.84(d，1H，J＝2.4Hz)，7.64(dd， 1H，J＝2.0，8.4Hz)，7.21(d，1H，J＝8.0Hz)，7.04(d，2H，J＝8.4 Hz)，6.94(d，H，J＝8.8Hz)，6.80(m，3H)，6.63(dd，1H，J＝2.4， 8.4Hz)，5.53(s，1H)，5.27(d，1H，J＝14.4Hz)，4.61(d，1H，J＝14.4 Hz)，4.39(m，1H)，3.78(m，1H)，3.40(m，4H)，3.20(m，4H)，2.91 (s，3H)，2.88(m，2H)，1.70-1.52(m，4H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C31H34Cl2IN5O2的计算值：705.1；实测值：706.2(M+H)。

                             实施例70

4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-1-(3-二甲基氨基-丙基)-7-碘-3，4-二 氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.88(d，1H，J＝2.4Hz)，7.67(dd， 1H，J＝2.0，8.4Hz)，7.23(d，1H，J＝8.0Hz)，7.07(d，2H，J＝8.4 Hz)，6.93(d，1H，J＝8.8Hz)，6.85(d，2H，J＝8.8Hz)，6.78(d， 1H，J＝2.0Hz)，6.62(dd，1H，J＝2.4，8.0Hz)，5.57(s，1H)，5.06 (d，1H，J＝14.4Hz)，4.85(d，1H，J＝14.4Hz)，4.36(m，1H)，3.83 (m，1H)，3.04(m，2H)，2.85(d，6H，J＝3.2Hz)，2.04-1.90(m，2H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C27H27Cl2IN4O2的计算值：636.06；实测值： 636.9(M+H)。

                             实施例71

4-(2-氨基-4-氯-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(3-吗啉-4-基-丙基)-3，4-二氢 -1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.88(d，1H，J＝2.4Hz)，7.66(dd， 1H，J＝2.0，8.4Hz)，7.24(d，1H，J＝8.0Hz)，7.08(d，2H，J＝8.4 Hz)，6.95(d，1H，J＝8.8Hz)，6.86(d，2H，J＝8.4Hz)，6.79(d， 1H，J＝2.4Hz)，6.63(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，5.58(s，1H)，5.04 (d，1H，J＝14.8Hz)，4.84(d，1H，J＝14.8Hz)，4.39(m，1H)，4.09 (m，2H)，3.82(m，1H)，3.74(m，2H)，3.42(m，2H)，3.08(m，4H)， 2.04-1.95(m，2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H29Cl2IN4O3的计算 值：678.07；实测值：679.0(M+H)。

                             实施例72

4-(4-氯-2-羟基苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)乙基]- 3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝2.1Hz，1H)，7.56(dd，J＝ 2.2Hz，8.6Hz，1H)，7.13(t，J＝8.0Hz，2H)，7.07(d，J＝2.1Hz， 1H)，6.98(d，J＝8.6Hz，2H)，6.82(dd，J＝2.1Hz，7.9Hz，1H)， 6.59(dd，J＝1.0Hz，8.8Hz，2H)，5.51(s，1H)，5.41(d，J＝15.0Hz， 1H)，5.33(s，1H)，4.41(d，15.0Hz，1H)，4.05-4.11(m，2H)，3.92-3.99 (m，1H)，3.76-3.69(m，1H)，3.64-3.56(m，2H)，3.54-3.48(m，2H)， 3.37(s，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C27H25C12IN2O5的计算值：654.02； 实测值：654.8(M+H)。

                             实施例73

4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3R)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-(2-吗啉-4-基 乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.86(d，J＝2.1Hz，1H)，7.58(dd，J＝ 2.1Hz，8.5Hz，1H)，7.28(d，J＝8.1Hz，1H)，6.92(m，3H)，6.76 (m，3H)，6.57(dd，J＝2.1Hz，8.4Hz，1H)，6.27(q，J＝7.3Hz， 1H)，5.31(s，1H)，4.63-4.55(m，1H)，3.82-3.73(m，1H)，3.60-3.54 (m，2H)，3.53-3.45(m，2H)，2.69-2.61(m，1H)，2.46-2.34(m，3H)， 2.27-2.19(m，2H)，1.75(s，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H29Cl2IN4O3的计算值：678.07；实测值：678.9(M+H)。

                             实施例74

4-(2-氨基-4-氯苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)丙基]- 3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.83(d，J＝2.1Hz，1H)，7.63(dd， J＝2.1Hz，8.6Hz，1H)，7.20(d，J＝7.9Hz，1H)，7.07-7.02(m，2H)， 6.95(d，J＝8.8Hz，1H)，6.85-6.80(m，2H)，6.77(d，J＝2.1Hz， 1H)，6.57(dd，J＝2.1Hz，7.9Hz 1H)，5.50(s，1H)，5.13(d，J＝14.4 Hz，1H)，4.73(d，J＝14.6Hz 1H)，4.44-4.32(m，1H)，3.81-3.70(m， 1H)，3.37(s，2H)，2.10-2.72(m，11H)，1.63-1.85(m，2H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C30H32Cl2IN5O2的计算值：691.1；实测值：692.0(M+H)。

                             实施例75

5-(2-烯丙氧基-4-氯苄氧基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙 基]-1，3-二氢苯并[e][1，4]二氮杂-2-酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(d，J＝2.1Hz，1H)，7.86(dd，J＝ 2.1Hz，8.5Hz，1H)，7.58-7.47(m，3H)，7.42-7.330(m，3H)，6.96(dd， J＝1.9Hz，8.1Hz，1H)，6.92(d，J＝1.9Hz，1H)，6.13-6.02(m，1H)， 5.51-5.31(m，4H)，4.67(s，1H)，4.63(m，2H)，4.12-4.02(m，1H)， 3.97-3.89(m，1H)，3.87-3.79(m，1H)，3.66-3.59(m，1H)，3.58-3.54 (m，2H)，3.51-3.45(m，2H)，3.36(s，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C30H29Cl2IN2O5的计算值：694.05；实测值：694.9(M+H)。

                             实施例76

4-(2-氨基-4-氯苄基)-3-(4-氯苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂 -2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.04(s，1H)，7.56(dd， J＝1.9Hz，8.3Hz，1H)，7.12-7.69(m，3H)，6.91-6.81(m，2H)，6.71 (d，J＝1.9Hz，1H)，(dd，J＝1.9Hz，7.9Hz，1H)，6.52(d，J＝8.3 Hz，1H)，5.5(d，J＝14.5Hz，1H)，4.93(s，2H)，4.34(d，J＝15.0Hz， 1H)。

                             实施例77

4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并 [e ][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.06(d，J＝2.1Hz，1H)，7.85(s，1H)， 7.49(dd，J＝2.1Hz，8.3Hz，1H)，7.22(d，J＝8.1Hz，1H)，7.02(s， 1H)，6.97(d，J＝8.5Hz，2H)，6.91(dd，J＝1.9Hz，8.3Hz，1H)， 6.66(m，2H)，6.43(d，J＝8.3Hz，1H)，6.40-6.36(m，1H)，5.31(s， 1H)，1.7(d，J＝7.3Hz，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C23H18Cl2IN3O2的计算值：564.98；实测值：565.5(M+H)。

                             实施例78

4-苄基-7-溴-3-(4-氯苯基)-1-甲基-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.43(s，3H)，4.65(d，J＝14.4Hz，1H)， 5.38(d，J＝14.4Hz，1H)，5.47(s，1H)，6.60(dd，J＝8.4Hz，1.2Hz， 2H)，6.75(d，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝8.8Hz，2H)，7.28-7.41(m， 4H)，7.48-7.51(m，2H)，7.80(d，J＝2.4Hz，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C23H18BrClN2O2的计算值：468；实测值：469(M+H)+。

                             实施例79

7-溴-3-(4-氯苯基)-1-甲基-4-(1-苯乙基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

质谱(LCMS，ESI pos.)：C24H20BrClN2O2的计算值：482；实测值：483 (M+H)+。

                             实施例80

1，3-二氢-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮 杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.61(d，J＝6.8Hz，3H)，5.00(s， 1H)，5.78(s，2H)，6.09(q，J＝6.8Hz，1H)，6.51-6.54(m，1H)，6.67 (d，J＝8.4Hz，1H)，6.77-6.81(m，3H)，7.08(d，J＝8.8Hz，2H)， 7.26(d，J＝8.0Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.8Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.79 (d，J＝1.6Hz，1H)，10.98(br s，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C23H18Cl2IN3O2的计算值：565；实测值：566(M+H)+。

                             实施例81

3-(4-氯苯基)-4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-7-碘-1-[2-(4-吗啉代)乙基]- 1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.81(d，J＝6.8Hz，3H)，2.23-2.28(m， 2H)，2.37-2.46(m，3H)，2.59-2.66(m，1H)，3.54-3.63(m，5H)，4.44-4.51 (m，1H)，5.42(s，1H)，6.57-6.70(m，4H)，6.94(d，J＝8.4Hz，2H)， 7.44(dd，J＝8.8Hz，2.0Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)， 7.63(d，J＝8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝2.0Hz，1H)，7.96(d，J＝2.0 Hz，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H27Cl2IN4O5的计算值：708； 实测值：709(M+H)+。

                             实施例82

5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-(丙炔-1- 基)-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸钠盐

a)(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并 二氮杂-2，5-二酮

将丙炔(2mL)于-78℃在密封的试管中凝结。然后，加入(3S)-3-(4- 氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮(200 mg，0.362mmol)、碘化铜(15mg，0.0788mmol)、二氯双(三苯基膦) 钯(II)(39mg，0.0556mmol)、三乙胺(2mL)和乙腈(4mL)。把密封的 试管封闭并将反应混合物加热至室温。12小时后，使反应混合物冷却 至-78℃，然后打开密封的试管并在强烈搅拌下将其加热至室温。然 后，将溶剂在真空下蒸发，进行硅胶柱色谱纯化(EtOAc/己烷，1∶1)得 到为无色固体的本标题化合物(150mg，89％)：1H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.73(d，J＝7.1Hz，3H)，2.06(s，3H)，5.24(s，1H)，6.49 (q，J＝7.1Hz，1H)，6.62-6.65(m，3H)，6.93(d，J＝8.4Hz，2H)， 7.20(dd，J＝8.0Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，7.53 (d，J＝8.8Hz，2H)，7.79(d，J＝2.0Hz，1H)，8.57(br s，1H)。质 谱(LCMS，ESI pos.)：C26H20Cl2N2O2的计算值：463；实测值：464(M +H)+。

b)5-[(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙基]-2，5-二氧代-7-(丙炔-1- 基)-1，4-苯并二氮杂-1-基]戊酸钠盐

按照在1位上进行二氮杂的烷基化的一般方法，然后按照实施 例1步骤b所描述的方法，由(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)乙 基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮制备本标题化合物 (58％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.60-1.74(m，7H)，2.02(s，3H)， 2.37(t，J＝6.8Hz，2H)，3.64-3.71(m，1H)，4.27-4.34(m，1H)，5.31 (s，1H)，6.42(q，J＝6.8Hz，1H)，6.46-6.49(m，2H)，6.76(d，J＝8.4 Hz，1H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz， 1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，7.48(d，J＝8.8Hz，2H)，7.67(d， J＝2.0Hz，1H)，7.90(br s，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C31H28Cl2N2O4的计算值：562；实测值：563(M+H)+。

                             实施例83

4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基) 乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.75(d，J＝6.8Hz，3H)，3.36(s，3H)， 3.54-3.64(m，4H)，3.71-3.76(m，1H)，3.85-3.90(m，1H)，3.97-4.03 (m，1H)，4.17-4.24(m，1H)，4.77(br s，2H)，5.27(s，1H)，6.27(q， J＝6.8Hz，1H)，6.62(dd，J＝8.4Hz，2.4Hz，1H)，6.66-6.70(m， 3H)，6.90(d，J＝8.4Hz，2H)，6.97(d，J＝8.8Hz，1H)，7.21(d， J＝8.4Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，7.90(d，J＝2.0 Hz，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H28Cl2IN3O4的计算值：667； 实测值：668(M+H)+。

                             实施例84

4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3S)-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基 乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H28Cl2IN3O4的计算值：667；实测值：668 (M+H)+。

                             实施例85

(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基 乙氧基)乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H28Cl2IN3O4的计算值：667；实测值：668 (M+H)+。

                             实施例86

4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-吗啉代)乙基]- 1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝7.1Hz，3H)，2.26-2.31(m， 2H)，2.42-2.50(m，3H)，2.60-2.66(m，1H)，3.53-3.70(m，5H)，4.48-4.55 (m，1H)，4.74(br s，2H)，5.28(s，1H)，6.28(q，J＝7.1Hz，1H)， 6.60(dd，J＝8.8Hz，2.4Hz，1H)，6.66-6.69(m，3H)，6.89(d，J＝8.4  Hz，2H)，7.21-7.19(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz)， 7.93(d，J＝2.0Hz，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H29Cl2IN4O3的 计算值：678；实测值：679(M+H)+。

                             实施例87

(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-吗啉代) 乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H29Cl2IN4O3的计算值：678；实测值：679 (M+H)+。

                             实施例88

(3R)-4-[(S)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(4-吗啉代) 乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮

质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H29Cl2IN4O3的计算值：678；实测值：679 (M+H)+。

                             实施例89

3-(4-氯苯基)-4-[1-(2，6-二氯-3-吡啶基)乙基]-7-碘-1，4-苯并二氮杂- 2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.69(d，J＝6.8Hz，3H)，5.28(s， 1H)，6.09(q，J＝6.8Hz，1H)，6.59(d，J＝8.4Hz，1H)，6.87(d， J＝8.4Hz，2H)，7.20(d，J＝8.8Hz，2H)，7.55-7.59(m，2H)，7.78 (d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(d，J＝8.0Hz，1H)，10.9(s，1H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C22H15Cl3IN3O2的计算值：585；实测值：586(M+H)+。

                             实施例90

1，3-二氢-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-甲基-1，4-苯 并二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.75(d，J＝6.8Hz，3H)，3.46(s，3H)， 5.34(s，1H)，5.95(q，J＝6.8Hz，1H)，6.55(d，J＝8.4Hz，2H)， 6.61(d，J＝8.8Hz，1H)，6.88-6.91(m，3H)，7.30-7.32(m，2H)，7.53 (dd，J＝8.8Hz，2.0Hz，1H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C24H20Cl2IN3O2的计算值：579；实测值：580(M+H)+。

                             实施例91

1，3-二氢-4-[1-(2-乙酰氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并 二氮杂-2，5-二酮

将乙酰氯(15μL，0.212mmol)于0℃和氩气氛下加到1，3-二氢-4- [1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二氮杂-2，5-二 酮(100mg，0.177mmol)在四氢呋喃(5mL)和氯仿(5mL)内的溶液中。 然后，滴加三乙胺(30μL，0.21mmol)并将反应混合物加热至室温。30 分钟后，把溶液减压浓缩，并将残余物在乙酸乙酯与1N碳酸氢钠之 间分配。将有机层干燥(Na2SO4)，蒸发，并将残余物用柱色谱法进行 纯化，获得了本标题化合物(49mg，45％)，为无色粉末：1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ1.81(d，J＝6.8Hz，3H)，2.44(s，3H)，5.33(s，1H)， 6.37(q，J＝6.8Hz，1H)，6.47(d，J＝8.4Hz，2H)，6.55(d，J＝8.4 Hz，1H)，6.98(d，J＝8.4Hz，2H)，7.03(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz， 1H)，7.36(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)， 7.98(d，J＝2.0Hz，1H)，8.28(br s，1H)，8.54(d，J＝2.0Hz，1H)， 9.94(s，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C25H20Cl2IN3O3的计算值：607； 实测值：608(M+H)+。

                             实施例92

1，3-二氢-4-[1-(2-叠氮基-3-吡啶基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，4-苯并二 氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.94(d，J＝6.8Hz，3H)，5.06(s，1H)， 6.50(d，J＝8.4Hz，1H)，6.85(q，J＝6.8Hz，1H)，7.01-7.04(m， 2H)，7.19(d，J＝8.8Hz，2H)，7.45(t，J＝7.0Hz，1H)，7.56(dd， J＝8.8Hz，2.0Hz，1H)，7.94(d，J＝7.2Hz，1H)，8.06(d，J＝2.4Hz， 1H)，9.12(d，J＝6.8Hz，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C22H16ClIN6O2的计算值：559；实测值：560(M+H)+。

                             实施例93

4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]- 7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.61(d，J＝6.8Hz，3H)，2.00(s， 3H)，3.17(s，3H)，3.30-3.65(m，6H)，3.85-3.92(m，1H)，4.33-4.39 (m，1H)，5.13(s，1H)，6.08(q，J＝6.8Hz，1H)，6.52(dd，J＝8.4Hz， 2.0Hz，1H)，6.69(d，J＝7.6Hz，2H)，6.78(d，J＝2.0Hz，1H)， 6.98(d，J＝8.4Hz，2H)，7.20-7.28(m，3H)，7.40(d，J＝2.0Hz， 1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C31H31Cl2N3O4的计算值：579；实测 值：580(M+H)+。

                             实施例94

(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(2-甲氧基乙氧 基)乙基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐

质谱(LCMS，ESI pos.)：C31H31Cl2N3O4的计算值：579；实测值：580(M +H)+。

                             实施例95

4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-吗啉代)乙基]-7-(丙 炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(d，J＝6.8Hz，3H)，2.02(s，3H)， 2.22-2.49(m，5H)，2.61-2.67(m，1H)，3.53-3.71(m，5H)，4.49-4.56 (m，1H)，4.76(s，2H)，5.27(s，1H)，6.30(q，J＝6.8Hz，1H)，6.60 (dd，J＝8.4Hz，2.0Hz，1H)，6.66-6.68(m，3H)，6.83(d，J＝8.8Hz， 1H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.16-7.21(m，2H)，7.66(d，J＝2.0Hz， 1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C32H32Cl2N4O3的计算值：590；实测 值：591(M+H)+。

                             实施例96

(3S)-4-[(R)-1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-吗啉代)乙 基]-7-(丙炔-1-基)-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐

质谱(LCMS，ESI pos.)：C32H32Cl2N4O3的计算值：590.19；实测值： 591.0(M+H)+。

                             实施例97

4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3-二氢-1H-1，4-苯并 二氮杂-5-酮

a)4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3-二氢-1H-1，4-苯 并二氮杂-5-酮

把硼烷二甲硫醚复合物溶液(1.68mL，2M在THF中的溶液)缓慢 加到4-[1-(4-氯-2-硝基苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1，3-二氢-1，4-苯并 二氮杂-2，5-酮(500mg，0.839mmol)在无水四氢呋喃(25mL)内的溶 液中。将所得溶液在65℃加热2小时。然后，使反应混合物在0℃ 冷却，并缓慢加入NaOH(10mL，3N)。使溶剂蒸发并将残余物在冰 冷的水与乙酸乙酯之间分配，干燥(Na2SO4)，并蒸发。用硅胶色谱法 进行纯化(AcOEt/己烷/CH2Cl2，1∶2∶1)得到粉末，将其进行研制，得 到本标题化合物(370mg，76％)，为黄色固体：1H NMR(400MHz， CDCl3)δ1.70(d，J＝6.8Hz，3H，CH3)，3.50(d，J＝14.0Hz，1H)， 3.73(dd，J＝14.0，6.4Hz，1H)，4.42(br s，1H，NH)，4.67(d，J＝ 6.4Hz，1H)，6.17(q，J＝6.8Hz，1H)，6.72(d，J＝8.4Hz，2H)， 7.07(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.50(dd， J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.61-7.64(m，2H)，8.58(d，J＝2.0Hz，1H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C23H18Cl2IN3O3的计算值：580.9；实测值： 582.0(M+H)+。

b)4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-2，3-二氢-1H-1，4-苯 并二氮杂-5-酮

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.63(d，J＝6.8Hz，3H)，3.60(d，J＝14.0 Hz，1H)，4.05(dd，J＝14.0，6.0Hz，1H)，4.72(d，J＝5.2Hz，1H)， 6.12(d，J＝8.8Hz，1H)，6.33(q，J＝6.8Hz，1H)，6.49(br s，1H)， 6.54(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，2H)，6.95-7.01(m， 3H)，7.28(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，8.46(d，J＝2.0Hz，1H)。质 谱(LCMS，ESI pos.)：C23H20Cl2IN3O的计算值：551.0；实测值：552.0 (M+H)+。

                             实施例98

4-[1-(2-氨基-6-氯-3-吡啶基)甲基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙 氧基)乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.31(s，3H)，3.42-3.53(m，4H)，3.64-3.67 (m，2H)，3.91-3.97(m，1H)，4.31-4.38(m，1H)，5.00(dd，J＝33.6， 15.2Hz，2H)，5.56(s，1H)，6.85(d，J＝7.6Hz，1H)，6.86-6.89(m， 2H)，7.10-7.13(m，3H)，7.64(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.86-7.88(m， 2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C26H25Cl2IN4O4的计算值：654.0；实 测值：655.0(M+H)+。

                             实施例99

4-[1-(3-氨基-4-氯苯基)环丙基]-3-(4-氯苯基)-1-[2-(4-吗啉代)乙基]-7-碘 -1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮甲磺酸盐

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.29-1.38(m，2H)，1.53-1.60(m，1H)， 1.81-1.86(m，1H)，3.17-3.29(m，4H)，3.65-4.11(m，7H)，4.47-4.54 (m，1H)，5.98(s，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，2H)，6.86(d，J＝8.8Hz， 1H)，7.11(d，J＝8.0Hz，2H)，7.21(d，J＝8.0Hz，1H)，7.33(d， J＝8.0Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.64-7.67(m，1H)，7.83(d，J＝1.6Hz， 1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C30H29Cl2IN4O3的计算值：690.0；实 测值：691.0(M+H)+。

                             实施例100

(3S)-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[(R)-2-(1-哌嗪 基)-2-氧代乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐

1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.72(d，J＝7.0Hz，3H)，3.31-3.40(m， 2H)，3.88-3.95(m，6H)，4.64(d，J＝16.8Hz，1H)，5.05(d，J＝16.8 Hz，1H)，5.31(s，1H)，6.26(q，J＝7.0Hz，1H)，6.59(dd，J＝8.4， 2.4Hz，1H)，6.79-6.83(m，2H)，6.93-7.00(m，4H)，7.28-7.30(d， J＝8.0Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.80(d，J＝2.0Hz， 1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H28Cl2IN5O3的计算值：691.0；实 测值：692.0(M+H)+。

                             实施例101

4-(4-氯-2-甲基-苄基)-3-(4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙基)-3，4-二氢 -1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.95-7.96(d，＝2.1Hz，1H)，7.46- 7.52(m，1H)，7.33-7.36(m，1H)，7.28-7.29(m，4H)，7.16-7.24(m， 2H)，6.99-7.02(m，2H)，6.68-6.73(m，3H)，5.34-5.40(d，J＝14.6Hz， 1H)，5.30(s，1H)，4.68-4.72(d，J＝14.6Hz，1H)，4.46-4.56(m，1H)， 3.58-3.63(m，5H)，2.40-2.54(m，5H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C29H28Cl2IN3O3的计算值：663.0；实测值：664.1(M+H)。

                             实施例102

3-(S)-(4-氯-苯基)4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-2-氧 代-乙基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.91-7.92(d，J＝2.1Hz，1H)，7.51- 7.35(m，2H)，7.43-7.46(m，1H)，7.35-7.40(m，2H)，6.90-6.96(m， 2H)，6.72-6.76(m，2H)，6.60-6.63(d，J＝8.6Hz，1H)，6.40-6.48(m， 1H)，5.35-5.36(s，1H)，5.00-5.042(d，J＝16.0Hz，1H)，4.02-4.07(d， J＝16.1Hz，1H)，3.44-3.88(m，9H)，1.71-1.74(d，J＝7.1Hz，2H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H26Cl2IN3O4的计算值：677.0；实测值： 677.8(M+H)。

                             实施例103

3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙 基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.94-7.95(d，J＝2.1Hz，1H)，7.40- 7.48(m，3H)，7.26-7.30(m，2H)，6.84-6.88(m，2H)，6.60-6.68(d， J＝8.8Hz，2H)，6.46-6.50(d，J＝7.5Hz，2H)，6.36.44(m，1H)，5.30(s， 1H)，4.44-4.54(m，1H)，4.04-4.10(m，1H)，3.50-3.68(m，5H)，2.58-2.60 (m，1H)，2.36-2.46(m，3H)，2.24-2.28(m，1H)，1.73-1.75(d，J＝7.1 Hz，2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C29H28Cl2IN3O3的计算值：663.0； 实测：664.1(M+H)。

                             实施例104

3-(R)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙 基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.99-8.01(d，J＝2.1Hz，1H)，7.28- 7.48(m，5H)，7.08-7.10(d，J＝8.6Hz，2H)，6.83-6.85(d，J＝8.6Hz， 2H)，6.59-6.62(d，J＝8.6Hz，2H)，6.34-6.40(m，1H)，5.32-5.34(s， 1H)，4.04-4.22(m，2H)，3.42-3.58(m，5H)，2.40-2.46(m，1H)，2.20-2.32 (m，3H)，1.58-1.63(d，J＝7.1Hz，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C29H28Cl2IN3O3的计算值：663.0；实测值：664.2(M+H)。

                             实施例105

3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-碘-1-[2-(2-甲氧基-乙氧 基)-乙基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.91-7.92(d，J＝2.1Hz，1H)，7.40- 7.50(m，3H)，7.28-7.30(m，2H)，6.82-6.86(m，3H)，6.46-6.49(m， 2H)，6.36-6.42(m，2H)，5.28(s，1H)，4.10-4.20(m，2H)，3.92-4.00 (m，2H)，3.80-3.88(m，1H)，3.68-3.72(m，2H)，3.44-3.60(m，4H)， 1.70-1.73(d，J＝7.3Hz，3H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C28H27Cl2IN2O4的计算值：652.0；实测值：653.3(M+H)。

                             实施例106

3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-7-(1-羟基亚氨基-乙基)- 3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

将7-乙酰基-3-(S)-(4-氯-苯基)-4-[1-(R)-(4-氯-苯基)-乙基]-3，4-二氢 -1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮(50mg，0.11mmol)、羟基胺盐酸 盐(22mg，0.33mmol)、三乙胺(0.074mL，0.55mmol)在EtOH(0.5mL) 中的溶液加热至80℃。2小时后，将该反应溶液施加到制备TLC板 (Analtech Silica Gel GF，20×20cm，2000微米)上，用二氯甲烷/MeOH10∶1展开。刮下所需的带，用MeOH提取，过滤并浓缩得到本标题 化合物(2.4mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.82-7.83(m，1H)， 7.47-7.51(m，3H)，7.32(s，3H)，7.26-7.30(m，2H)，6.80-6.84(m， 2H)，6.66-6.70(d，J＝8.4Hz，2H)，6.52-6.55(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36-6.42 (m，2H)，5.17(s，1H)，1.67-1.71(d，J＝7.3Hz，3H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C25H21Cl2N3O3的计算值：481.1；实测值：482.1(M+H)。

                             实施例107

7-碘-4-萘-1-基甲基-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二 氮杂-2，5-二酮

1H NMR(40+0MHz，DMSO-d6)δ10.76-10.80(s，1H)，8.16-8.20(d， J＝8.0Hz，1H)，7.85-8.00(m，2H)，7.80-7.82(m，1H)，7.54-7.61(m， 5H)，7.00-7.20(m，4H)，6.60-6.64(d，J＝8.6Hz，1H)，5.86-6.00(d， J＝14.9Hz，1H)，5.50(s，1H)，5.10-5.16(d，J＝15.1Hz，1H)。质谱 (LCMS，ESI pos.)：C27H18F3IN2O3的计算值：602.0；实测值：603.3(M +H)。

                             实施例108

4-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯 并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.91-7.92(m，1H)，7.55-7.60(m，1H)， 7.38-7.41(m，1H)，7.25-7.30(m，3H)，7.10-7.13(d，J＝8.6Hz，2H)， 6.87-7.00(m，2H)，6.77-6.81(d，J＝7.7Hz，1H)，6.57-6.63(m，1H)， 6.33-6.37(m，1H)，5.93-5.96(m，1H)，5.85-5.88(m，1H)，5.43-5.45 (s，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C23H16ClIN2O4的计算值：545.9； 实测值：547.8(M+H)。

                             实施例109

4-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基-7-碘-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二 氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.88-7.90(m，1H)，7.54-7.70(m，1H)， 7.30-7.40(m，1H)，7.15-7.17(m，1H)，6.95-7.04(m，3H)，6.78-6.81 (d，J＝7.9Hz，2H)，6.59-6.6.63(d，J＝8.6Hz，2H)，6.32-6.36(m，1H)， 5.93-5.96(m，1H)，5.83-5.87(m，2H)，5.48-5.49(s，1H)。质谱(LCMS， ESI pos.)：C24H16F3IN2O5的计算值：596.01；实测值597.2(M+H)。

                             实施例110

7-碘-4-(2-吡啶-2-基-乙基)-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氢-1H-苯并 [e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.45-8.47(m，1H)，7.82-7.84(m，2H)， 7.71-7.76(m，1H)，7.51-7.53(m，1H)，7.38-7.41(m，1H)，7.23-7.27 (m，1H)，7.08-7.14(m，4H)，6.58-6.61(d，J＝8.4Hz，1H)，5.60(s， 1H)，4.54-4.62(m，1H)，3.92-4.01(m，1H)，3.18-3.28(m，2H)。质 谱(LCMS，ESI pos.)：C23H17F3IN3O3的计算值：567.0；实测值：568.1 (M+H)。

                             实施例111

4-苄基-3-(4-氯-苯基)-7-碘-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.80-7.82(m，1H)，7.59-7.62(m，2H)， 7.20-7.50(m，7H)，6.90-7.00(m，2H)，6.65-6.70(d，J＝8.6Hz，1H)， 5.55-5.58(m，1H)，5.20-5.30(d，J＝14Hz，1H)，4.77-4.84(d，J＝14.6 Hz，1H)。质谱(LCMS，ESI pos.)：C22H16ClIN2O2的计算值：501.9； 实测值：503.1(M+H)。

                             实施例112

3-(4-氯-苯基)-7-碘-4-苯乙基-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二 酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.8-10.9(s，1H)，7.78-7.80(m，1H)， 7.56-7.60(m，2H)，7.24-7.36(m，5H)，7.16-7.20(m，2H)，6.95-7.04 (m，1H)，6.64-6.68(d，J＝8.4Hz，1H)，5.70-5.76(s，1H)，4.18-4.28 (m，1H)，3.76-3.84(m，1H)，2.84-3.10(m，2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C23H18ClIN2O2的计算值：516.0；实测值：517.1(M+H)。

                             实施例113

4-苄基-7-碘-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂- 2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.72-7.80(s，1H)，7.56-7.60(m，2H)， 7.28-7.50(m，7H)，7.10-7.18(m，2H)，6.60-6.70(m，1H)，5.60(s， 1H)，5.28-5.34(d，J＝14.6Hz，1H)，4.76-4.82(d，J＝14.8Hz，1H)。 质谱(LCMS，ESI pos.)：C23H16F3IN2O3的计算值：552.0；实测值：553.1 (M+H)。

                             实施例114

7-碘-4-苯乙基-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂 -2，5-二酮

1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.8-11.0(s，1H)，7.50-7.64(m，3H)， 7.02-7.40(m，8H)，6.57-7.0(m，1H)，5.60(s，1H)，4.40-4.40(m， 1H)，3.80-3.90(m，1H)，2.90-3.10(m，2H)。质谱(LCMS，ESI pos.)： C24H18F3IN2O3的计算值：566.0；实测值：567.0(M+H)。

                             实施例115

                             荧光肽分析

用与MDM2残基17-125结合的p53来测定MDM2的抑制。这 种复合物的已公开的晶体结构(Kussie等人，Science 274：948-953(1996)) 证实含有p53结合位点的片断，并且我们已经解析了p53肽类似物 MPRFMDYWEGLN的X-射线结构(Bottger等人，J.Mol.Biol.269： 744-756(1997))。本分析使用N末端荧光素RFMDYWEGL肽(Fl 9mer)。

如下所述，The mdm217-125作为谷胱甘肽S转移酶融合体生成： 如下所述，将cDNA编码残基17-125克隆到pGEX4t-3(Pharmacia) 内。用含有部分人mdm2序列的ATCC条目编号384988作为模板和 引物进行PCR：正向：5’-CTC TCT CGG ATC CCA GAT TCC AGC TTC GGA ACA AGA G；反向：5’-TAT ATA TCT CGA GTC AGT TCT CAC TCA CAG ATG TAC CTG AG。然后将PCR产物用BamHI 和XhoI消化(引物中加下划线的序列识别位点)，凝胶纯化，连接到已 经用BamHI和XhoI消化的pGEX4t-3上。将质粒转染到大肠杆菌(E. coli)X90株内，在TB 0.2％葡萄糖100μg/mL氨苄青霉素中生长至OD 1.0，并用1mM IPTG诱导。诱导后5小时，将细胞收获，离心分离， 重悬浮于PBS 10mL/g细胞糊中。将细胞在Avestin微流化剂 (microfluidizer)中溶解，离心，并将上清液粘结到谷胱甘肽琼脂糖4B 树脂(Pharmacia)上。将树脂用PBS洗涤，并通过加入2μg/mL凝血 酶将MDM217-125从GST上切割下来(Enzyme Research Labs)。将 切割的MDM2进一步在Sepharose SP Fast Flow树脂(Pharmacia)上 纯化，用20mM HEPES pH 7.5150mM NaCl洗脱。加谷胱甘肽至5 mM，然后将蛋白在-70℃贮存。

将试验化合物用在50mM HEPES pH 7.5、150mM NaCl、3mM 辛基葡糖苷中的30nM荧光肽Fl 9mer和120nM MDM217-125温育 15分钟。其后，通过在485nm激发并在530nm发射，测定荧光标 记物的偏振。将偏振表示为用具有Fl 9mer但没有MDM2作为本底 的无化合物对照的百分比。本发明化合物抑制p53与MDM2的结合。 把化合物的效力作为IC50测量，所述IC50是抑制50％的MDM2与p53 之间结合所需试验化合物浓度的量度。本发明化合物的IC50值范围在 0.05μM至＞100μM之间。参见下面的实施例。

  化合物   范围(μM)   4-[(R)-1(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-(3S)-3-(4-   氯苯基)-7-碘-1-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基1-1，   4-苯并二氮杂-2，5-二酮   0.1-1.0   4-[(R)-1(2-氨基-4-氯苯基)-乙基]-(3S)-3-(4-氯-   苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙，   基]-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮   0.1-1.0   5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)   -乙基]-7-碘-2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢-   苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸   0.1-1.0   (3S)-4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)乙基]-3-(4-   氯苯基)-7-碘-1-[(R)-2-(1-哌嗪基)-2-氧代   乙基]-1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮盐酸盐   1.0-2.0   4-(R)-[1-(2-氨基-4-氯-5-氟-苯基)-乙基]-3(S)-(   4-氯-苯基)-7-碘-1-(2-吗啉-4-基-乙基)-3，4-二   氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮   1.0-3.0

                             实施例116

                             制备片剂

如下面所举例说明，制备分别含有25.0、50.0和100.0mg实施例 1化合物(“活性化合物”)的片剂：

             含有25-100mg活性化合物的片剂

                        量-mg   活性化合物   25.0   50.0   100.00   微晶纤维素   37.25   100.0   200.0   改性玉米淀粉   37.25   4.25   8.5   硬脂酸镁   0.50   0.75   1.5

把全部活性化合物、纤维素和一部分玉米淀粉混合并制粒成10％ 的玉米淀粉糊。将所得颗粒过筛、干燥并与剩余的玉米淀粉和硬脂酸 镁混合。然后把所得颗粒压制成每片分别含有25.0、50.0和100.0mg 活性组分的片剂。

                             实施例117

                             静脉内溶液制备

如下制备实施例1化合物(“活性化合物”)的静脉内剂型：

                活性化合物        0.5-10.0mg

                柠檬酸钠          5-50mg

                柠檬酸            1-15mg

                氯化钠            1-8mg

                注射用水(USP)     适量至1ml

用上述量，将活性化合物于室温溶解于预先制备的氯化钠、柠檬 酸和柠檬酸钠在注射用水内的溶液中(USP，参见1995年United States Pharmacopeia/National Formulary 1636页，United States Pharmacopeial Convention Inc.出版，Rockville，Maryland(1994))。

                             实施例118

                苯并二氮杂二酮化合物抑制肿瘤细胞增殖

通过一组肿瘤细胞系测定苯并二氮杂二酮化合物的抗增殖活 性。表1列出试验的示例化合物：TDP222669(4-氯苯基)-[3-(4-氯苯 基)-7-碘-2，5-二氧代-1，2，3，4-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-4-基]-乙酸， WO03/041715中的实施例62)，TDP665759(4-[1-(2-氨基-4-氯苯基)- 乙基]-3-(4-氯苯基)-7-碘-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)-丙基]-3，4-二氢-1H-苯 并[e][1，4]二氮杂-2，5-二酮，WO2004096134中的实施例66)和 TDP521252(5-{(3S)-3-(4-氯苯基)-4-[(R)-1-(4-氯苯基)-乙基]-7-乙炔基- 2，5-二氧代-2，3，4，5-四氢苯并[e][1，4]二氮杂-1-基}-戊酸， WO2004096134中的实施例2)。如本文所描述，可以使用同样的方法 试验其它化合物。

细胞系：如所推荐，将JAR绒膜癌细胞(HTB-144)、HepG2肝癌 细胞(HTB-8065)和PC3前列腺癌细胞(CRL-1435)(全部来自ATCC (Manassas，VA))分别保存在补充以FBS的RPMI、EMEM和F12K 中。同样从ATCC购买图1A所描述的其它细胞并如所推荐的那样使 其生长。mdm2/p53双无标志和mdmX/p53双无标志细胞系为Dr. Guillermina Lozano所捐赠(Univ.of Texas M.D.Anderson Cancer Center，Houston，Texas)并将其按照所描述保持(Parant等人，2001， Nat Genet 29，92-95.)。

增殖分析：将细胞以每孔1×103个细胞接种于96孔板中。使其 粘附过夜后，将细胞用各种浓度的化合物处理3天。将细胞用BrdU 标记6小时，固定并按照供应商的使用说明书用ELISA进行分析(BrdU Cell Proliferation Assay，Exalpha，Watertown，MA)。除非另有说 明，表2所显示的值是三个试验的平均值。

TDP222669是在体外相对有效的Hdm2抑制剂，荧光偏振(FP)分 析具有0.57的IC50值(表1)。TDP222669的细胞效力很低，然而，很 有可能是低的细胞渗透性所致。用甲基代替TDP222669的酸性部分 并且在1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮的1位上导入戊酰基(TDP521252)或 者3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基(TDP665759)增溶部分，使化合物具有与 TDP222669近似同等的体外效力，但具有提高了大约3-66倍的细胞 活性(表2和图1)。

与它们作为HMD2-p53相互作用抑制剂的角色相一致，这些化合 物对于控制表达肿瘤细胞表达突变或无标志p53的生长是不太有效 的。与突变/无标志p53细胞系比较，表达wtp53的细胞对TDP222669 或TDP521252的细胞生长抑制活性具有约4倍的更高敏感性，或者 对TDP665759的细胞生长抑制活性具有约10倍的更高敏感性(表2和 图1)。同样，具有减少的Hdm2mRNA的量的肿瘤对化合物的细胞 生长抑制活性也不太敏感(未显示数据)。

                             实施例119

     苯并二氮杂二酮化合物引起细胞Hdm2从p53解离

在JAR绒膜癌细胞中研究苯并二氮杂二酮化合物对细胞中的 Hdm2：p53复合物的直接作用，JAR绒膜癌细胞具有较高且因此更 容易探测的Hdm2和p53的基础水平。

将JAR绒膜癌细胞首先分别用增加剂量的化合物TDP521252或 TDP258625(表1)以及它们的无活性对映体TDP536356和TDP258626 处理。随后，将细胞在TritonX-100缓冲液(裂解缓冲液)[1％Triton X-100、10mM Tris pH 7.2、5mM EDTA、50mM NaCl、Complete Mini Protease Inhibitor Cocktail Tablets(Roche#1-836-153，1片/10ml裂 解缓冲液)、磷酸酶抑制剂Cocktail 1(Sigma#P2850，1∶100稀释)、 磷酸酶抑制剂Cocktail 2(Sigma#P5726，1∶100稀释)]中溶解。将细 胞溶解产物正常化为蛋白，并用抗-p53抗体(FL-393，Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA)进行免疫沉淀。将免疫沉淀物用缓 冲液洗涤两次，重悬浮于电泳样本缓冲液(如为本领域技术人员已知的 Lammeli缓冲液)中，并在4-12％双-三聚丙烯酰胺凝胶上用1X MOPS 电泳缓冲液(Invitrogen，Carlsbad，CA)进行蛋白分析。把蛋白转移 到硝基纤维素薄膜上。将薄膜用5％乳缓冲液(TBS/0.1％Tween-20中 的5％非脂肪干乳)阻断，并在同样的缓冲液中用抗-p53或抗-Hdm2 抗体探查(DO-1，Oncogene Research Products，Boston，MA and SMP-14，Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA，respectively)。 用Typhoon Scanner(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)形成扫 描图像后，通过ImageQuant分析测定Hdm2：p53的比例，并将其 正常化为载体对照。

观察到本发明化合物以与剂量有关的方式引起细胞Hdm2从p53 的解离。在浓度40μM的情况下，高于细胞增殖抑制的IC50两倍以上， TDP521252引起90％以上的Hdm2从p53的解离。早在将细胞用化 合物处理后15分钟就已经观察到了类似的结构(未显示数据)。相反， 无活性非对映体不能引起Hdm2从p53的解离。在用TDP222669、 TDP258625和TDP258626的纯化的对映体处理时，观察到类似的结 果。

                             实施例120

苯并二氮杂二酮化合物诱导HepG2细胞中的编程性细胞死亡

肿瘤细胞系中，根据细胞环境，p53的激活导致细胞生长抑制和 细胞编程性死亡事件(Slee等人，2004，Oncogene 23，2809-2818)。 进行试验以确定苯并二氮杂二酮化合物是否起细胞生长抑制剂的作 用并阻止进一步的肿瘤生长，或者诱导编程性细胞死亡或潜在导致肿 瘤衰退。特别是，在HepG2细胞中，测定编程性细胞死亡的两个参 数-半胱天冬酶活性和染色质凝聚。

半胱天冬酶分析：将HepG2肝细胞的癌细胞用40μM TDP521252、TDP536356或DMSO处理0、8、16、24或48小时。 将细胞溶解并暴露于半胱天冬酶3和7的底物(ApoOne，Promega， Madison WI)，并且按照供应商的描述测量特异性加工。然后，在加 入底物后的20分钟和40分钟，用示差结果计算半胱天冬酶活性的比 例。

Hoechst染色：为了测定凋亡胞核，把HepG2细胞涂覆在四室 SonicSeal载玻片(Nunc，Naperville，IL)上。暴露于化合物后，将细 胞用3.7％甲醛固定15分钟，在PBS中漂洗15分钟并随后用2.5μg/ml Hoeschst染料染色15分钟。染色后，将细胞再次漂洗并用Prolong Antifade(Molecular Probes，Eugene，OR)固定于载片，然后分析并 用IX81显微镜(Melville，NY)拍照。

与用DMSO或无活性对映体TDP536356处理的细胞中观察到的 结果比较，在用活性对映体TDP521252处理的细胞中，半胱天冬酶-3 和半胱天冬酶-7的激活比率显著提高(图2)。早在加入TDP521252后 的16小时就观察到半胱天冬酶的诱导，并且在后面的32小时提高了 大约4.5倍。在另外的研究中，将不同步HepG2细胞暴露于TDP521252 的活性和无活性对映体3天，然后将细胞收获，固定并用Hoechst染 料染色以测定染色质。如通过胞核的点状着色所看到的，暴露于活性 对映体引起凝聚染色质的积聚(未显示数据)。这些数据表示本发明化 合物在HepG2细胞中激活了凋亡反应。

                             实施例121

苯并二氮杂二酮化合物提高p53-调控基因的基因表达

p53的稳定导致牵涉包括细胞周期和细胞凋亡在内的多个活性的 多个基因的上调(参见Levine，1997，细胞88，323-331；和Slee，supra)。 进行实验来测定苯并二氮杂二酮化合物对于p53-调控基因例如PIG- 3、PUMA、Hdm2和p21waf1/cip1的基因的基因表达。

将HepG2肝癌细胞以6×105个细胞/孔接种到6-孔板中并保持过 夜。在第二天早晨，在8小时期间内，将细胞用20μM TDP521252 或其无活性对映体DP536356处理不同时间。根据制造商的说明方案， 使用RNeasy试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)分离总RNA。使用所分 离的总RNA作为初始模板，以及Taqman One-Step RT-PCR Master  Mix Reagent(Applied Biosystems，Foster City，CA)来进行RT-PCR。 用于人甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、Hdm2、PUMA(细胞凋亡的 p53上调调节剂)、p53、p21waf1/cip1和PIG-3(p53诱导基因-3)荧光标记 的引物/探针混合物购自Applied Biosystems(Foster City，CA)，并且 是设计用来跨越内含子/外显子边界来折扣基因组DNA污染。将所有 样本都规格化为GAPDH，并使用标准曲线方法进行定量。在ABI Prism 7000(Applied Biosystems，Foster City，CA)中进行反应。

对于p21waf1/cip1和Hdm2峰，暴露于TDP521252后4小时，在之 后的时间点给予PUMA和PIG-3，观测到早期mRNA诱导(图3)。这 些基因的早期和后期诱导的时间曲线与之前报道的启动子占据的结果 一致(Kaeser，2002，Proc Natl Acad Sci U S A 99，95-100)。相反，用 DMSO或其无活性对映体TDP53635处理后，没有观测到p21waf1/cip1 的诱导。在JAR绒毛膜癌细胞中观测到类似作用(数据未显示)。

在相应蛋白的量中也观测到剂量依赖性增加(数据未显示)。在所 测试的最高剂量的TDP521252(40μM)，相对于未处理的对照，用 PUMA观测到最大蛋白诱导，之后是p21waf1/cip1(67×)和Hdm2(45×)。 此外，在40μM TDP521252存在下，p53蛋白水平高约3倍。

这些数据表明，TDP521252对p53的稳定作用导致p53-调控基 因的表达提高。

                             实施例122

苯并二氮杂二酮化合物在体内诱导p21waf1/cip1的基因表达

为了确定苯并二氮杂二酮化合物是否能够在体内诱导p53活 化，进行药动学分析来测定用苯并二氮杂二酮类治疗后从不同组织 中对p21waf1/cip1mRNA的诱导。之前已经证明了多柔比星能够活化 p53，因此用作阳性对照(Yeh等人，2004，Oncogene 23，3580-3588)。

在处死和组织收集之前24小时，给雌性Balb/c nu/nu小鼠腹膜 内施用TDP665759(25或50mg/kg)，每天给药两次，总共给药7次(间 隔12小时)，或腹膜内施用多柔比星(10mg/kg)一次。在这些实验中， 化合物在25mg/kg剂量良好地耐受，然而，在4天实验结束时，50mg/kg 实验组有某些程度的体重下降(16％)。初次给药化合物之后6小时， 将小鼠杀死，收获肝脏，在含有Rneasy的管中在干冰上迅速冷冻。 如上所述分离总RNA。通过如上所述的RT-PCR测定在分离的总RNA 中p21waf1/cip1mRNA的量。

苯并二氮杂二酮化合物和多柔比星在最大程度上提高肝脏中的 p21waf1/cip1mRNA，在胸腺和脾脏中分别产生较小但可测定程度的诱导 作用(数据未显示)。肝脏对这些活性剂的最高敏感性与在p53转基因 小鼠中通过λ放射诱导的p21waf1/cip1一致(Fei等人，2002，Cancer Res 62，7316-7327)。与载体对照相比，施用25mg/kg TDP665759产生30 倍的p21waf1/cip1诱导作用；这与多柔比星治疗相似(图4)。在50mg/kg 剂量，诱导作用相对于载体对照大150倍。The exponential-like effect of p21waf1/cip1mRNA诱导的指数样效应意味着调控途径或正反馈回路 的可能性，并且用该化学系列中的其它化合物已经观测到(数据未显 示)。

                             实施例123

苯并二氮杂二酮化合物与其它化疗剂的组合带来提高的抗肿瘤活性

该实施例测试了联合治疗的有效性，该联合治疗采用化疗剂与 Hdm2：p53相互作用的小分子抑制剂。

将A375黑素瘤细胞(ATCC CRL-1619，Manassas，VA)以2000 个细胞/孔接种到96-孔白壁板中，让其粘附过夜。将TDP665759和化 疗剂以固定比例格式同时加入(Chou等人，1984，Adv Enzyme Regul 22，27-55)。将细胞暴露于化合物48小时，使用Cell-Titer-Glo (Promega，Madison，WI)测定细胞的存活力。根据Chou and Talalay 的方法(Trends in Pharm.Sciences，4：450-454，1983)，使用CaluSyn 软件(Biosoft，Cambridge，Great Britain)来进行联合作用的计算。小 于0.9的联合指数是协同的，0.9-1.1的联合指数是叠加的，大于1.1 的联合指数是拮抗的。

结果发现TDP665759与多柔比星、5-氟尿嘧啶和伊立替康具有协 同作用(表3)。相反，TDP665759与顺铂的组合带来拮抗作用。

在A357异种移植物模型中，进一步测定多柔比星与TDP665759 的组合。A375异种移植物研究是在Piedmont Research Center，Inc. (Morrisveille，NC)用雌性裸小鼠(Harlan，Indianapolis，IN)进行的。 肿瘤大小达到80-120后，将小鼠随机分配到治疗组，并开始用载体 (20.25％羟基丙基-β-环糊精，bid×10)、100mg/kg TDP665759(po， bid×10)、1.5或3mg/kg多柔比星(Qd×5)或100mg/kg TDP665759 (bid×10)+1.5mg/kg多柔比星(Qd×5)的组合进行治疗。每日监测小 鼠的一般健康，每3或4天测定肿瘤大小。当肿瘤达到2克时，对小 鼠实施安乐死。

如附图5所示，与载体相比，将100mg/kg TDP665759或低剂量 的多柔比星(1.5mg/kg＝0.5MTD)对于A375肿瘤生长控制仅引起适 度作用。然而，这两种活性剂的组合导致的肿瘤生长控制类似于用较 高剂量的多柔比星(3mg/kg＝MTD)进行治疗所带来的效果。这些数 据证实了多柔比星与p53:hdm2相互作用的小分子抑制剂之间在体内 的协同作用。

已经充分描述了本发明，本领域技术人员应当理解，在不影响本 发明范围或其任何实施方案的情况下，这些方案可以在宽的同等条 件、制剂和其它参数内进行。本文中引用的所有专利和出版物都全文 引入本文以供参考。

表1.Hdm2:p53相互作用的苯并二氮杂二酮抑制剂

表2.苯并二氮杂二酮抑制肿瘤细胞增殖  在细胞内的P53   细胞名称   TDP222669   TDP521252  野生型p53   MCF7   33.3+17.5   10.0+2.0   JAR   33.8+3.6   19.0+3.7   HepG2   45.5+10.8   11.0+3.   A498   47.7+10.8   13.0+1.9   A375   46.5+12.0   12.0+3.5   Hct116   58.0+3.0   14.8+1.5   LNCaP   ND   4.7+1.5   JEG3   ND   46.5+6.1   SJSA   ND   13.8+2.6   ZR75-1   ND   19.0+6.0  突变型p53   MDA MB 231   132.4+16.7   69.7+16.2   Panc1   ＞200   ＞200   SK-BR-3   ND   30.5+3.8   DU145   ND   66.5+22.4   MiaPaCa   ＞200   141.7+7.6   A431   ＞200   123.8+37.9  无标志p53   PC3   ND   41.5+9.3   SK-OV-3   ND   69.8+6.2   H1299   183.3+28.9   101.3+62.4

表3.TDP665759与不同化疗剂在A375黑素瘤细胞中的联合作用   化疗剂   联合指数   5-氟尿嘧啶   0.59   伊立替康   0.63   多柔比星   0.62   顺铂   1.43

                相关申请的交叉参考

本申请是于2004年4月21日提交的U.S.申请10/829,040和2002 年11月13日提交的U.S.申请的部分继续。

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