一般而言，在肿瘤(特别是恶性肿瘤)化疗中，只给予一种抗肿瘤 药物就能达到所需的抗肿瘤效果的情形十分少见，因此，临床上， 为达到增强药物效果的目的，常常使用具有不同作用机理的两种以 上药物的多药物治疗。这种联合治疗的目的在于通过使具有不同作 用机理的抗肿瘤药物联用以减轻副作用，增强抗肿瘤作用，从而，1) 减少不敏感细胞群体，2)防止或延迟产生抗药性，3)通过与不同毒性 的药物联用分散毒性等等。然而，对于联合治疗，不同作用机理药 物的随机联用并不一定提供抗肿瘤效果增强作用或协同作用。
据报道，组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂诱导组蛋白的高乙酰 化，结果是诱导对各种基因的转录调节活性、细胞周期抑制活性和 程序性细胞死亡。组蛋白脱乙酰酶抑制剂还被认为是有效的抗癌药 物(参见JP-B-7-64872，Experimental Cell Research(实验细胞研究)， US(1998)，第241卷，第126-133页)。
例如，下式(I)表示的化合物：

或其药学上可接受的盐(下文亦称A化合物)、特别是由下式(II)表示 的立体异构体：

(下文亦称FK228)或其药学上可接受的盐都是组蛋白脱乙酰酶抑制 剂，据报道均显示出有效的抗肿瘤活性(参见JP-B-7-64872(对应于美 国专利号4977138)，Experimental Cell Research，US(1998)，第241 卷，第126-133页)。
然而，联合使用组蛋白脱乙酰酶抑制剂和与DNA形成交联并显 示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物(例如顺铂等)、抗代谢物抗肿瘤药物(例 如5-氟尿嘧啶等)或紫杉烷类抗肿瘤药物(所有这些都常规、广泛地用 作抗肿瘤药物)，以及由联合使用所达到的效果，都尚未有报道。

因此，本发明的目的是提供降低副作用，显示良好抗肿瘤活性 的抗肿瘤药物，该抗肿瘤药物含有选自以下的抗肿瘤药物和显著增 强抗肿瘤效果的药物：与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤 药物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿瘤药物。
经过深入研究，本发明的发明人发现了组蛋白脱乙酰酶抑制剂， 特别是已知具有有效的组蛋白脱乙酰酶抑制活性的A化合物，也显 著增强以下已知的抗肿瘤药物的抗肿瘤效果：与DNA形成交联并显 示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿 瘤药物，该发现导致了本发明的完成。因此，本发明提供以下内容：
[1]抗肿瘤药物和包含至少一种选自以下的抗肿瘤药物与组蛋白 脱乙酰酶抑制剂联用的药物组合物以及包括给予此类组合物和药物 治疗患者的方法：与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、 抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿瘤药物。
[2]上述[1]的抗肿瘤药物，其中所述组蛋白脱乙酰酶抑制剂是 由下式(I)表示的化合物：

其还原产物、类似物、前药或其药学上可接受的盐。
[3]上述[2]的抗肿瘤药物，其中所述的与DNA形成交联并显示 抗肿瘤效果的抗肿瘤药物是铂化合物抗肿瘤药物或烷基化抗肿瘤药 物。
[4]上述[3]的抗肿瘤药物，其中所述铂化合物抗肿瘤药物是顺 铂。
[5]上述[2]的抗肿瘤药物，其中所述抗代谢物抗肿瘤药物是5- 氟尿嘧啶。
[6]上述[2]的抗肿瘤药物，其中所述紫杉烷类抗肿瘤药物是至 少一种紫杉醇和多西他赛。
[7]上述[1]至[6]中任一项的抗肿瘤药物，该抗肿瘤药物是用于 肺癌、恶性淋巴瘤、消化器官癌、乳腺癌、卵巢癌、肌与骨骼肉瘤 (musculoskeletal sarcoma)、膀胱癌、白血病、肾癌或前列腺癌的抗肿 瘤药物。
[8]用于至少一种抗肿瘤药物的抗肿瘤效果增强剂及包括给予此 类组合物和药物治疗患者的方法，所述抗肿瘤药物选自与DNA形成 交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉 烷类抗肿瘤药物，所述抗肿瘤效果增强剂含作为活性成分的组蛋白 脱乙酰酶抑制剂。
[9]上述[8]的增强剂，其中所述组蛋白脱乙酰酶抑制剂是下式(I) 表示的化合物：

其还原产物、类似物、前药或其药学上可接受的盐。
[10]上述[9]的增强剂，其中所述与DNA形成交联并显示抗肿 瘤效果的抗肿瘤药物是铂化合物抗肿瘤药物或烷基化抗肿瘤药物。
[11]上述[10]的增强剂，其中所述铂化合物抗肿瘤药物是顺铂。
[12]上述[9]的增强剂，其中所述抗代谢物抗肿瘤药物是5-氟尿 嘧啶。
[13]上述[9]的增强剂，其中所述紫杉烷类抗肿瘤药物是至少一 种紫杉醇和多西他赛。
[14]上述[8]至[13]中任一项的增强剂，该增强剂是用于肺癌、 恶性淋巴瘤、消化器官癌、乳腺癌、卵巢癌、肌与骨骼肉瘤、膀胱 癌、白血病、肾癌或前列腺癌的抗肿瘤效果增强剂。
[15]包括伴随药物(concomitant agent)和与之有关的书面材料的 商品包装，所述伴随药物含有至少一种选自以下的抗肿瘤药物：与 DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤药 物和紫杉烷类抗肿瘤药物，书面材料上注明所述伴随药物可以或者 应当与组蛋白脱乙酰酶抑制剂一起用作抗肿瘤药物。
[16]上述[15]的商品包装，其中所述组蛋白脱乙酰酶抑制剂是 由下式(I)表示的化合物：

其还原产物、类似物、前药或其药学上可接受的盐。
[17]上述[16]的商品包装，其中所述与DNA形成交联并显示抗 肿瘤效果的抗肿瘤药物是铂化合物抗肿瘤药物或烷基化抗肿瘤药 物。
[18]上述[17]的商品包装，其中所述铂化合物抗肿瘤药物是顺 铂。
[19]上述[16]的商品包装，其中所述抗代谢物抗肿瘤药物是5- 氟尿嘧啶。
[20]上述[16]的商品包装，其中所述紫杉烷类抗肿瘤药物是至 少一种紫杉醇和多西他赛。
[21]包括含组蛋白脱乙酰酶抑制剂的制剂和与之有关的书面材 料的商品包装，书面材料上注明所述制剂可以或者应当用于增强至 少一种选自以下抗肿瘤药物的抗肿瘤效果：与DNA形成交联并显示 抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿瘤 药物。
[22]上述[21]的商品包装，其中所述组蛋白脱乙酰酶抑制剂是 由下式(I)表示的化合物：

其还原产物、类似物、前药或其药学上可接受的盐。
[23]上述[22]的商品包装，其中所述与DNA形成交联并显示抗 肿瘤效果的抗肿瘤药物是铂化合物抗肿瘤药物或烷基化抗肿瘤药 物。
[24]上述[23]的商品包装，其中所述铂化合物抗肿瘤药物是顺 铂。
[25]上述[22]的商品包装，其中所述抗代谢物抗肿瘤药物是5- 氟尿嘧啶。
[26]上述[22]的商品包装，其中所述紫杉烷类抗肿瘤药物是至 少一种紫杉醇和多西他赛。
附图简述
图1是表示分析构思的曲线图。
图2是表示DU-145细胞中，FK228和顺铂联用(同时加入)的等 效剂量(isobologram)分析曲线图(实施例1)。
图3是表示DU-145细胞中，FK228和顺铂联用(以FK228顺 铂的顺序相继加入)的等效剂量分析曲线图(实施例2)。
图4是表示DU-145细胞中，FK228和顺铂联用(以顺铂FK228 的顺序相继加入)的等效剂量分析曲线图(实施例2)。
图5是表示DU-145细胞中，FK228和5-氟尿嘧啶联用(同时加 入)的等效剂量分析曲线图(实施例3)。
图6是表示DU-145细胞中，FK228和5-氟尿嘧啶联用(以 FK2285-氟尿嘧啶的顺序相继加入)的等效剂量分析曲线图(实施例 4)。
图7是表示DU-145细胞中，FK228和5-氟尿嘧啶联用(以5-氟 尿嘧啶FK228的顺序相继加入)的等效剂量分析曲线图(实施例4)。
图8是表示DU-145细胞中，FK228和紫杉醇联用(以紫杉醇 FK228的顺序相继加入)的等效剂量分析曲线图(实施例5)。
发明详述
组蛋白脱乙酰酶抑制剂(特别是A化合物和FK228)显著增强以 下抗肿瘤药物的抗肿瘤效果：与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的 抗肿瘤药物(特别是铂化合物抗肿瘤药物或烷基化抗肿瘤药物)、抗代 谢物抗肿瘤药物或紫杉烷类抗肿瘤药物。
因此，与只给予一种抗肿瘤药物(选自与DNA形成交联并显示 抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤药物、紫杉烷类抗肿瘤 药物)或组蛋白脱乙酰酶抑制剂相比，包括至少一种抗肿瘤药物(选自 与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤 药物和紫杉烷类抗肿瘤药物)和组蛋白脱乙酰酶抑制剂联用的本发明 的抗肿瘤药物，以较少的剂量提供较好的治疗癌症的效果，并能将 副作用抑制在较低水平。
实施本发明的最佳方式
本发明所使用的组蛋白脱乙酰酶抑制剂是，与底物竞争性结合 组蛋白脱乙酰酶活性位点的化合物，和/或是显示降低组蛋白脱乙酰 酶的酶活性效果的化合物，或是以其它方式抑制酶活性的化合物， 包括称为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的化合物。具体而言，可提及上述 A化合物、其盐及其衍生物(例如WO 02/06307中所描述的乙酰化A 化合物、具还原S-S键的硫醇形式等)。美国专利号6403555描述了 FK228的类似物。另外，曲古抑菌素A、丁酸钠、异羟肟酸辛二酰 苯胺(SAHA)、MS-275、含环状异羟肟酸的肽、Apicidin、Trapoxin 等是已报道具有组蛋白脱乙酰酶抑制活性的化合物。该组蛋白脱乙 酰酶抑制剂可为一种化合物或两种以上化合物的混合物。
优选使用A化合物作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂。而A化合物基 于不对称碳原子或双键，可具有立体异构体(例如FK228)，例如旋光 形式、几何异构体等，所有这些异构体及其混合物也落入A化合物 的范围内。
此外，本文所述化合物的溶剂合物(例如包合物(例如水合物 等))、无水形式和其它多晶型物或药学上可接受的盐也落入本发明的 范围内。
在本说明书以下描述中，除非特别说明，否则仅仅提及A化合 物时是指包括FK228和药学上可接受的盐的一类化合物，而不考虑 立体异构现象。
上述组蛋白脱乙酰酶抑制剂包括已知和可得到的物质。例如在 有氧条件下，通过培养属于色杆菌属(Chromobacterium)中可以产生 FK228的菌株，从其培养肉汤中收获物质，得到FK228(为A化合物 的一种立体异构体)。作为属于色杆菌属中能够产生FK228的菌株， 可提及例如紫色色杆菌WB968(Chromobacterium violaceum WB968) (FERM BP-1968)。更具体地讲，可从JP-B-7-64872(对应于美国专利 号4977138)中所描述的产生FK228的菌株得到FK228。FK228优选 从属于色杆菌属中能够产生FK228的菌株中收获，因其更易于获取。 合成或半合成的FK228同样也是有利的，因为不需要进一步的纯化 步骤或可以减少步骤数目。同样地，还可通过已知的常规半合成或 全合成方法，得到除FK228外的A化合物。更具体地讲，可根据Khan W.Li等(J.Am.Chem.Soc.，第118卷，7237-7238(1996))中报道的方 法得到A化合物。
曲古抑菌素A、丁酸钠、SAHA、MS-275、含异羟肟酸的环肽、 Apicidin、Trapoxin等其它组蛋白脱乙酰酶抑制剂在市场上有售，或 可通过已知方法制备。
A化合物的药学上可接受的盐包括碱加成盐或酸加成盐，例如 无机碱盐(例如钠盐、钾盐等碱金属盐，钙盐、镁盐等碱土金属盐， 铵盐)、有机碱盐(例如三乙胺盐、二异丙基乙胺盐、吡啶盐、甲基吡 啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己基胺盐、N，N′-二苄基亚乙基 二胺盐等有机胺盐)、无机酸加成盐(例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、 磷酸盐等)、有机羧酸加成盐或磺酸加成盐(例如甲酸盐、乙酸盐、三 氟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、 甲苯磺酸盐等)、碱性氨基酸盐或酸性氨基酸盐(例如精氨酸盐、天冬 氨酸盐、谷氨酸盐等)等。
本发明所用的与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物 可为任何抗肿瘤药物，只要它直接作用于DNA上并与之形成交联以 显示抗肿瘤效果。有关实例包括已知的铂化合物抗肿瘤药物、已知 的烷基化抗肿瘤药物等。有关具体实例包括属于铂化合物抗肿瘤药 物的顺铂、卡铂等，属于烷基化抗肿瘤药物的环磷酰胺、美尔法兰 (merphalan)等。与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物可 为一种化合物或两种以上化合物的混合物。
本发明所用的抗代谢物抗肿瘤药物可为称作抗肿瘤药物的任何 抗代谢物。具体实例包括5-氟尿嘧啶、替加氟等。抗代谢物抗肿瘤 药物可为一种化合物或两种以上化合物的混合物。
本发明所用的紫杉烷类抗肿瘤药物包括各种结构上具有从短叶 红豆杉(Taxusbrevifolia)中所分离的紫杉烷骨架的成分或其半合成产 物，或具有紫杉烷骨架的纯合成产物。具体而言，可提及紫杉醇、 多西他赛等。紫杉烷类抗肿瘤药物可为一种化合物或两种以上化合 物的混合物。
本发明中，组蛋白脱乙酰酶抑制剂(特别是A化合物)明显增强 至少一种抗肿瘤药物的活性，所述抗肿瘤药物选自与DNA形成交联 并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类 抗肿瘤药物。因此，本发明的抗肿瘤药物和抗肿瘤效果增强剂用作 癌症的治疗药物，所述癌症包括血癌、实体瘤等，更具体地讲，包 括肺癌、恶性淋巴瘤(例如网状细胞肉瘤、淋巴肉瘤、霍奇金病 (Hodgkin′s disease)等)、消化器官癌(例如胃癌、胆囊癌、胆管癌、胰 腺癌、肝癌、结肠癌、直肠癌等)、乳腺癌、卵巢癌、肌与骨骼肉瘤 (musculoskeletal sarcoma)(例如骨肉瘤(osteosarcoma)等)、膀胱癌、白 血病(例如急性白血病，包括慢性髓细胞性白血病急性发作)、肾癌、 前列腺癌等。
选自与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物、抗代谢 物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿瘤药物的至少一种抗肿瘤药物可为一 种化合物或单独给予或混合给予的两种以上的化合物。
本发明的说明书中，所称“抗肿瘤药物A”是指“至少一种选 自以下的抗肿瘤药物：与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤 药物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿瘤药物”，除非特别说 明。
本发明的抗肿瘤药物或药物组合物包含组蛋白脱乙酰酶抑制剂 和抗肿瘤药物A联用(即伴随药物)，可为任何联用形式，只要当用于 给药时，可含组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤药物A。本发明的抗 肿瘤药物可为单一制剂，该制剂通过同时制备组蛋白脱乙酰酶抑制 剂和抗肿瘤药物A而得到，或者为至少两种制剂的联用，该制剂通 过单独制备组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤药物A而得到。
给药方式不受特殊限制，可提及例如，(1)给予含组蛋白脱乙酰 酶抑制剂和抗肿瘤药物A的组合物，即给予单一制剂，(2)经相同给 药途径同时给予两种制剂，通过单独制备组蛋白脱乙酰酶抑制剂和 抗肿瘤药物A得到所述制剂，(3)经相同给药途径交错给予两种制剂 (例如以组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤药物A的顺序给药，或以与 之相反的顺序给药)，通过单独制备组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤 药物A得到所述制剂，(4)经不同给药途径同时给予两种制剂，通过 单独制备组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤药物A得到所述制剂，(5) 经不同给药途径交错给予两种制剂(例如以组蛋白脱乙酰酶抑制剂和 抗肿瘤药物A的顺序给药，或以与之相反的顺序给药)，通过单独制 备组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤药物A得到所述制剂，等等。
本发明的增强剂包括组蛋白脱乙酰酶抑制剂，可为任何组蛋白 脱乙酰酶抑制剂，只要当用于给药时，包括组蛋白脱乙酰酶抑制剂 和抗肿瘤药物A联用。因此，单一制剂中只要含有组蛋白脱乙酰酶 抑制剂，本发明的增强剂就可含抗肿瘤药物A，即使不含抗肿瘤药 物A，也可单独给予抗肿瘤药物A作为伴随药物。
给药方式不受特殊限制，可提及例如，(1)以单一制剂给予本发 明的增强剂，该制剂中含有组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤药物A， (2)经相同给药途径，同时给予本发明的增强剂和抗肿瘤药物A，(3) 经相同给药途径，交错给予本发明的增强剂和抗肿瘤药物A(例如以 抗肿瘤药物A和本发明的增强剂的顺序给药，或以与之相反的顺序 给药)，(4)经不同给药途径，同时给予本发明的增强剂和抗肿瘤药物 A，(5)经不同给药途径，交错给予本发明的增强剂和抗肿瘤药物A(例 如以抗肿瘤药物A和本发明的增强剂的顺序给药，或以与之相反的 顺序给药)等。
本发明中，组蛋白脱乙酰酶抑制剂和抗肿瘤药物A混合比率(重 量比)的一般范围可为1∶100-100∶1，优选1∶10-10∶1，不论是制成单一 制剂或是制成独立制剂。
当抗肿瘤药物A制备成其两种以上的混合物时，混合比率不受 特殊限制。当制备与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物 与抗代谢物抗肿瘤药物的混合物时，混合比率(重量比)优选范围为 1∶100-100∶1；当制备与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药 物与紫杉烷类抗肿瘤药物的混合物时，混合比率(重量比)优选范围为 1∶100-100∶1：当制备抗代谢物抗肿瘤药物与紫杉烷类抗肿瘤药物的混 合物时，混合比率(重量比)优选范围为1∶100-100∶1。
优选伴随ATRA(全反式视黄酸)给予药物(例如以混合药物给 药、以各个制剂同时给药或单独给药)，目的在于增强本发明的抗肿 瘤效果。
可以含有作为活性成分的组蛋白脱乙酰酶抑制剂和/或抗肿瘤药 物A的固体、半固体或液体药物制剂的形式(片剂、弹丸剂、糖锭剂、 胶囊剂、栓剂、乳膏剂、软膏剂、气雾剂、散剂、液体制剂、乳剂、 混悬剂、糖浆剂、注射剂等)，使用本发明药物组合物、抗肿瘤药物 A和/或组蛋白脱乙酰酶抑制剂，该制剂适于经直肠、鼻内、肺部、 阴道内、外部(局部)、口服或肠胃外(包括皮下、植入、静脉内和肌 内)给药。
可以含作为活性成分的组蛋白脱乙酰酶抑制剂的固体、半固体 或液体等药物制剂的形式(片剂、弹丸剂、糖锭剂、胶囊剂、栓剂、 乳膏剂、软膏剂、气雾剂、散剂、液体制剂、乳剂、混悬剂、糖浆 剂、注射剂等)，使用本发明的抗肿瘤增强剂，该制剂适于经直肠、 鼻内、肺部、阴道内、外部(局部)、口服或肠胃外(包括皮下、植入、 静脉内和肌内)给药。
也可使用常用于制备药物制剂的各种有机载体或无机载体的常 规方法，制备本发明的抗肿瘤药物和抗肿瘤效果增强剂，所述载体 例如赋形剂(例如蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纤 维素、滑石粉、磷酸钙、碳酸钙等)、缩合剂(例如纤维素、甲基纤维 素、羟丙基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、 蔗糖、淀粉等)、崩解剂(例如淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙 盐、羟丙基淀粉、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠、磷酸钙、柠檬酸钙等)、 润滑剂(例如硬脂酸镁、earosil、滑石粉、十二烷基硫酸钠等)、矫味 剂(例如柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸、橙粉等)、防腐剂(例如苯甲酸钠、 亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、稳定剂(柠 檬酸、柠檬酸钠、乙酸等)、悬浮剂(例如甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷 酮、硬脂酸铝等)、分散剂(例如羟丙基甲基纤维素等)、稀释剂(例如 水等)、蜡基物质(例如可可脂、聚乙二醇、白矿脂)等。
向包括人在内的哺乳动物，给予上述常规药物剂型的本发明的 抗肿瘤药物和抗肿瘤效果增强剂，无需受特殊限制。尤其优选的是 静脉内、肌内或口服给药。
本发明的剂量水平可低于各单独给予组蛋白脱乙酰酶抑制剂和 抗肿瘤药物A时的剂量水平。
例如，根据患者的体重和/或年龄和/或病情严重程度及给药途径 等诸多不同的因素，适当地确定剂量。
例如，当A化合物用作组蛋白脱乙酰酶抑制剂而顺铂用作抗肿 瘤药物A时，A化合物和顺铂联用的日剂量在静脉内给药的情况下， 一般每1m2人体表面积为1-1000mg，优选5-100mg，更优选10-60mg， 该剂量用于连续输注治疗。在此情况下，以A化合物/1m2人体表面 积计，A化合物的日剂量为0.1-100mg，优选1-50mg，更优选5-30mg， 顺铂的给药量为上述A化合物和顺铂联用的剂量-A化合物的剂量。
本发明包括含伴随药物和组蛋白脱乙酰酶抑制剂以及与之有关 的书面材料的商品包装，所述伴随药物含有至少一种抗肿瘤药物， 所述抗肿瘤药物选自与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药 物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿瘤药物，书面材料上注明 所述伴随药物可以或者应当用作抗肿瘤药物；本发明包括含组蛋白 脱乙酰酶抑制剂的制剂和与之有关的书面材料的商品包装，书面材 料上注明所述制剂可以或者应当用于增强至少一种抗肿瘤药物的抗 肿瘤效果，所述抗肿瘤药物选自与DNA形成交联并显示抗肿瘤效果 的抗肿瘤药物、抗代谢物抗肿瘤药物和紫杉烷类抗肿瘤药物。
实施例
说明本发明有效性的药理学试验结果见下文。
将FK228用作组蛋白脱乙酰酶抑制剂，将顺铂(CDDP)用作与 DNA形成交联并显示抗肿瘤效果的抗肿瘤药物，将5-氟尿嘧啶(5-FU) 用作抗代谢物抗肿瘤药物，将紫杉醇用作紫杉烷类抗肿瘤药物，对 联合使用组蛋白脱乙酰酶抑制剂和各肿瘤药物的效果进行评价。为 了进行评价试验，将人前列腺癌细胞DU-145(得自ATCC(美国典型 培养物保藏中心(AMERICAN TYPE CULTURE COLLECTION)))在含 10％胎牛血清的Dulbecco改良的Eagle培养基(Dulbecco′s Modified Eagle Medium)中进行培养，用于试验。
实验实施例1：FK228和顺铂联用(同时加入)的效果
将前列腺癌细胞(6x103细胞/孔)在96孔板中培养24小时，加入 FK228(0.1nM、0.2nM、0.5nM、1nM、2nM、5nM、10nM、20nM 和50nM)、顺铂(50nM、100nM、200nM、500nM、1000nM、2000nM 和5000nM)或两种药物(各药物按上述浓度同时加入)，以得到不同的 浓度。细胞培养24小时后，用含1％FBS(胎牛血清)的PBS(-)(磷酸 缓冲盐溶液(不含钙镁))洗涤两次。将培养基换成无药物培养基，将 细胞再次培养96小时。使用前，将FK228溶于乙醇，用培养基稀释， 顺铂在使用前也用培养基稀释。
每次处理后，通过MTT实验方法评价抗肿瘤活性。具体地说， 将3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑(MTT)溶解于PBS 中，浓度为2.5mg/mL，向各孔中加入20μl，培养4小时。通过加入 酸性异丙醇(100μl)使活细胞所形成的甲溶解，在580nm波长下测 量各孔的吸光度。
以未处理细胞的吸光度(OD)为100％，绘制单一药物浓度-抗肿 瘤活性和联用药物浓度-抗肿瘤活性的浓度-反应曲线图。
按照Steel等(Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.，5：85-91，1979)的方 法，通过等效剂量分析法评价FK228和顺铂联用的效果。也就是说， 根据各单一药物的浓度反应曲线，理论上确定联合使用时的80％生 长抑制浓度(IC80)，并用图中曲线表示。在图中标出实际联合使用时 达到IC80的药物浓度(参见图1)。如果该标示落入曲线包围的面积(b) 中时，认定存在相加效应，如果标示落入靠近原点的面积(a)中时， 认定存在协同效应，如果落入远离原点的面积(c)中时，则认定存在 拮抗效应。使用相对值，其中单一药物的IC80为1。
实验实施例1的等效剂量分析图见图2。FK228和顺铂联用(同 时加入)的结果是抗肿瘤活性显著提高。
实验实施例2：FK228和顺铂联用(相继加入)的效果
将前列腺癌细胞(6×103细胞/孔)于96孔板中培养24小时，加入 FK228(0.1nM、0.2nM、0.5nM、1nM、2nM、5nM、10nM、20nM 和50nM)及顺铂(50nM、100nM、200nM、500nM、1000nM、2000nM 和5000nM)以得到不同的浓度。培养24小时后，细胞用含1％FBS 的PBS(-)洗涤两次。
洗涤后，通过两种药物联用的相继加入方式，加入FK228和顺 铂(以FK228顺铂或顺铂FK228的顺序加入，以得到各种联用浓 度)。再将混合物培养24小时，用含1％FBS的PBS(-)洗涤两次。 将培养基换成无药物培养基，再使细胞培养72小时。用实验实施例 1中相似的方法评价联用效果。
实验实施例2的等效剂量分析图见图3(加入顺序FK228顺铂) 和图4(加入顺序顺铂FK228)。以任何加入顺序(加入顺序FK228 顺铂或加入顺序顺铂FK228)，FK228和顺铂联用(相继加入)时，抗 肿瘤活性得到显著增强。
实验实施例3：FK228和5-氟尿嘧啶联用(同时加入)的效果
按实验实施例1的相同方法评价各药物联用的效果，只是加入 不同浓度的5-氟尿嘧啶(5μM、10μM、20μM、50μM、100μM、200μM 和500μM)而不是加入顺铂。加入前，5-氟尿嘧啶用培养基稀释。
实验实施例3的等效剂量分析图见图5。FK228和5-氟尿嘧啶 联用(同时加入)增加抗肿瘤活性。
实验实施例4：FK228和5-氟尿嘧啶联用(相继加入)的效果
按实验实施例2的相同方法，评价各药物联用的效果，只是加 入不同浓度的5-氟尿嘧啶(加入顺序5-氟尿嘧啶FK228时为5μM、 10μM、20μM、50μM、100μM、200μM和500μM；加入顺序FK2285- 氟尿嘧啶时为100μM、200μM、500μM、1000μM、2000μM、5000μM 和10000μM)而不是加入顺铂。加入前，5-氟尿嘧啶用培养基稀释。
实验实施例4的等效剂量分析图见图6(加入顺序FK2285-氟 尿嘧啶)和图7(加入顺序5-氟尿嘧啶FK228)。以任何加入顺序(加 入顺序FK2285-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶FK228)，FK228和5-氟 尿嘧啶联用(相继加入)增加抗肿瘤活性。
实验实施例5：FK228和紫杉醇联用(按紫杉醇FK228的顺序相继 加入)的效果
按实验实施例2的相同方法评价各药物联用的效果，只是按紫 杉醇FK228的顺序加入不同浓度的紫杉醇(0.2nM、0.5nM、1nM、 2nM、5nM、10nM和20nM)而不是加入顺铂。加入前，将紫杉醇溶 于乙醇并用培养基稀释。
实验实施例5的等效剂量分析图见图8。FK228和紫杉醇联用(以 紫杉醇FK228的顺序相继加入)增加抗肿瘤活性。
制剂实施例1
FK228         20mg
乙醇          20ml
用乙醇(20ml)使FK228(20mg)溶解稀释，得到注射制剂。
制剂实施例2
FK228         20mg
顺铂          100mg
生理盐水      100ml
用生理盐水(100ml)使FK228(20mg)和顺铂(100mg)溶解稀释， 得到注射制剂。
制剂实施例3
FK228         20mg
5-氟尿嘧啶    500mg
乙醇          100ml
用乙醇(100ml)使FK228(20mg)和5-氟尿嘧啶(500mg)溶解稀释， 得到注射制剂。
制剂实施例4
FK228          20mg
紫杉醇         20mg
乙醇           40ml
用乙醇(40ml)使FK228(20mg)和紫杉醇(20mg)溶解稀释，得到 注射制剂。
虽然本发明说明和描述了其相关优选的实施方案，但本领域技 术人员应当清楚，在不偏离所附权利要求书所包括的本发明范围的 情况下，可以对其中的形式和细节作各种各样的改变。
所有专利、专利出版物和其它已确定或引用的出版物都通过引 用全部结合到本文中。