本发明涉及癌症治疗领域并提供抗肿瘤组合物，其含有取代的丙 烯酰基偏端霉素衍生物，更具体为α-溴代-或α-氯代-丙烯酰基偏端 霉素衍生物，抗微管剂和/或抗代谢物，具有协同抗肿瘤效果。

偏端霉素A及其类似物，以下称为偏端霉素和偏端霉素类衍生物， 本领域认为是用于抗肿瘤疗法的细胞毒性剂。

偏端霉素A是抗生素类物质，具有抗病毒和抗原生动物的活性，有 多吡咯的结构[自然203：1064(1964)；J Med.Chem.32：774-778 (1989)]。国际专利申请WO90/11277、WO98/04524、WO98/21202、 WO99/50265、WO99/50266和WO01/40181(要求英国专利申请No. 9928703.9的优先权)，全部以其申请人的名义结合于此作为参考，公 开了丙烯酰基偏端霉素衍生物，其中偏端霉素的脒基部分可选择地被 含氮的封端基团，例如氰脒基、N-甲基脒基、胍基、氨基甲酰基、偕 胺肟、氰基等取代，和/或其中偏端霉素的多吡咯结构或其部分结构， 被变化的碳环或杂环部分取代。

本发明首先提供用于包括人的哺乳动物的抗肿瘤疗法的药物组合 物，其含有药学可接受的载体或赋形剂；式(I)的丙烯酰基偏端霉素 衍生物；或其药学可接受的盐；和抗微管剂和/或抗代谢物。

其中：R1是溴或氯原子；

R2是偏端霉素或偏端霉素类结构。

本发明在其范围内包括药物组合物，其含有式(I)化合物涵盖的任 何可能的异构体(分离的或混合的)，及式(I)化合的代谢物和药学可 接受的生物前体(或称为前药)。

在本说明书中，除非另外声明，我们用术语偏端霉素或偏端霉素 类结构R2指任何结构上与偏端霉素本身密切相关的部分，例如通过可 选地取代偏端霉素的末端脒基部分和/或其多吡咯结构或其部分。

抗微管剂和抗代谢物在本领域普遍知晓作为抗肿瘤剂，-般参考 见，Cancer，Principles and Practice of Oncology， Lippincott-Raven Ed.(1997)，432-452及467-483。

根据本发明优选的实施方案，因此提供上述药物组合物，其中抗 微管剂是，例如，紫杉烷类(taxanes)，如紫杉醇或多西他奇 (docetaxel)；长春花属生物碱，例如长春新碱、长春碱、长春地 辛、维诺利宾(vinorelbine)；和雌莫司汀，可选地包裹在脂质体中。

优选的抗代谢物是，例如抗叶酸类物质(antifolates)，如甲氨 蝶呤(metotrexate)，三甲曲沙，tomudex；5-氟嘧啶类，如5-氟尿 嘧啶、5-氟脱氧尿苷、替加氟和卡培他滨(capecitabine)；胞嘧啶 类似物，如阿糖胞苷、氮胞苷和吉西他滨。

特别优选的抗微管剂是紫杉醇和雌莫司汀，而优选的抗代谢物是 5-氟尿嘧啶或吉西他滨。

根据本发明另一个优选的实施方案，因此提供上述药物组合物， 其中在式(I)的丙烯酰基偏端霉素衍生物中，R1有上述报道的意义， 且R2是有下式(II)的基团： 其中

m是0-2的整数；

n是2-5的整数；

r是0或1； X和Y相同或不同，对于每个杂环，独立为氮原子或CH基团； G是亚苯基，有1-3个选自N、O或S的杂原子的5或6元饱和或不饱 和的杂环，或者它是下式(III)基团： 其中Q是氮原子或CH基团，且W是氧或硫原子或者它是基团NR3，其 中R3是氢或C1-C4烷基； B选自以下基团： -CN；-NR5R6；-CONR5R6；-NHCONR5R6其中R4是氰基、氨基、羟基或C1-C4烷氧基；R5、R6和R7相同或不同， 是氢或C1-C4烷基。

在本说明书中，除非另外声明，我们用术语C1-C4烷基或烷氧基指 以下直链或分支的基团：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异 丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正 丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基。

本发明的药物组合物更优选含有上述式(I)的丙烯酰基偏端霉素 衍生物，其中R1是溴或氯；R2是上述式(II)基团，其中r是0，m是0 或1，n是4，B有上述报道的意义。

在此情况，更优选含有式(I)化合物的药物组合物，其中R1是溴 或氯；R2是上述式(II)基团，其中r是0，m是0或1，n是4，X和 Y均为CH基团，B选自： -CN；-CONR5R6；-NHCONR5R6其中R4是氰基或羟基，且R5、R6和R7相同或不同，是氢或C1-C4烷基。

式(I)化合物的药学可接受的盐是与药学可接受的无机或有机酸， 例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、醋酸、丙酸、琥珀酸、丙二酸、柠 檬酸、酒石酸、甲磺酸、对-甲苯磺酸等形成的盐。

在本发明的组合物目的中，优选的式(I)丙烯酰基偏端霉素衍生 物的例子，可选以其药学可接受的盐的形式，优选与盐酸形成盐，是：

1.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}乙基)氨基] 羰基}-1甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨 基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1甲基 -1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐；

2.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)氨基] 羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨 基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基 -1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐；

3.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亚氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲 基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰 基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H- 吡咯-2-甲酰胺盐酸盐；

4.N-(5-{[(5-{[(5-{{(3-氨基-3-亚氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲 基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰 基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H- 咪唑-2-甲酰胺盐酸盐；

5.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亚氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲 基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰 基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-3-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H- 吡唑-5-甲酰胺盐酸盐；

6.N-(5-{[(5-{[(5-{[(3-氨基-3-氧代丙基)氨基]羰基}-1-甲基 -1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1- 甲基-1H-吡咯-3-基)-3-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡唑-5- 甲酰胺；

7.N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}乙基)氨基] 羰基}-1甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨 基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-氯丙烯酰基)氨基]-1甲基 -1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐；

8.N-(5-{[(5-{[(3-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)氨基]羰 基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3- 基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐；

9.N-(5-{[(5-{[(3-氨基-3-亚氨基丙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H- 吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴丙烯酰基) 氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐；和

10.N-{5-[({5-[({5-[({3-[(氨基羰基)氨基]丙基}氨基)羰 基]-1-甲基1H-吡咯-3-基}氨基)羰基]-1-甲基-1H-吡咯-3-基}氨基) 羰基]-1甲基-1H-吡咯-3-基}-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H- 吡咯-2甲酰胺。

上述如此或以通式具体鉴定的式(I)化合物，是已知的或易于按例 如在上面提及的国际专利申请WO90/11277、WO98/04524、WO 98/21202、WO99/50265和WO99/50266和WO01/40181报道的已知 方法制备。

本发明还提供含有如上定义的式(I)的丙烯酰基偏端霉素衍生物、 抗微管剂和/或抗代谢物的产品，作为在抗肿瘤治疗中同时使用、分别 使用或顺序使用的联合用制剂。

在这方面，特别优选含有N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-[氨基(亚氨基) 甲基]氨基)乙基]氨基}羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基]氨基}羰基)-1- 甲基-1H-吡咯-3-基]氨基}羰基)-1-甲基-1H-吡咯-3-基)-4-[(2-溴 丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(内部代码为PNU 166196)和吉西他滨的产品，在抗肿瘤治疗中作为同时使用、分别使用 或顺序使用的联合用制剂。

发明的另一个方面提供治疗患有肿瘤的哺乳动物，包括人类，的 方法，此方法包括以有效产生协同抗肿瘤作用的量给所述哺乳动物施 用上述式(I)的丙烯酰基偏端霉素衍生物、抗微管剂和/或抗代谢物。

本发明还提供，降低有需要的哺乳动物，包括人，使用抗肿瘤剂 进行抗肿瘤治疗所产生的副作用的方法，此方法包括以有效产生协同 抗肿瘤效果的量给所述哺乳动物施用含有式(I)丙烯酰基偏端霉素衍 生物、抗微管剂和/或抗代谢物的联合用制剂。

本文使用术语“协同抗肿瘤效果”，意味着通过给哺乳动物，括 人，施用有效量的含有式(I)丙烯酰基偏端霉素衍生物、抗微管剂和/ 或抗代谢物的联合用制剂，导致生长肿瘤的抑制，优选肿瘤的完全消 退。

本文使用术语“给药”或“施用”，意味着胃肠外和/或口服给药； 术语“胃肠外”意味着静脉内、皮下和肌内给药。

在本发明的方法中，丙烯酰基偏端霉素衍生物可以与抗微管剂或 与抗代谢物同时给药。或两种药物可以按任意顺序循序给药。

根据本发明的实施方案，当丙烯酰基偏端霉素衍生物与抗微管剂 和抗代谢物给药时，优选以任何顺序循序给药。

在这方面，将领会到的是：实际优选的给药方法和顺序将根据所 使用的式(I)丙烯酰基偏端霉素的特定的制剂、所使用的抗微管剂和 /或抗代谢物的特定制剂、所治疗的特定的肿瘤模型和所治疗的特定的 宿主以及其他事物而改变。

根据本发明的方法，施用式(I)丙烯酰基偏端霉素衍生物时，通 常采用的治疗过程包括从约0.05至约100mg/m2体表面积，且优选从 约0.1至约50mg/m2体表面积的范围内变化的剂量。

根据本发明的方法，施用紫杉烷类(taxanes)时，通常采用的治 疗过程包括约1至约1000mg/m2体表面积，且更优选约10至约500 mg/m2体表面积的范围内变化的剂量。

根据本发明的方法，施用长春花属生物碱时，通常采用的治疗过 程包括约0.1至约1000mg/m2体表面积，且更优选约0.5至约100mg/m2 体表面积的范围内变化的剂量。

根据本发明的方法，施用抗代谢物时，通常采用的治疗过程包括 约0.1至约10mg/m2体表面积，且更优选约1至约5mg/m2体表面积 的范围内变化的剂量。

本发明的抗肿瘤疗法特别适于治疗哺乳动物-包括人的乳腺、卵 巢、肺、结肠、肾、胃、胰腺、肝等部位的肿瘤和黑素瘤、白血病及 脑肿瘤。

在另一个方面，本发明涉及含有效量的如上定义的式(I)的丙烯 酰基偏端霉素衍生物、抗微管剂和/或抗代谢物的组合物，在制备通过 抑制血管生成而用于预防或治疗转移瘤或治疗肿瘤的药物中的用途。

如上阐明的，式(I)的丙烯酰基偏端霉素衍生物与抗微管剂和/ 或抗代谢物的效果显著增加而毒性没有平行增加。换句话，即本发明 的联合疗法促进丙烯酰基偏端霉素衍生物和其他药物的抗肿瘤效果， 后者可以是抗微管药物、抗代谢物或其组合，因而提供最大效果和最 小毒性的肿瘤治疗。

例如，用以下体内抗肿瘤活性数据显示本发明的联合用制剂的超 加作用，这些数据用以说明本发明而没有任何对它的限制作用。 表1显示通过式(I)的代表性化合物N-(5-{[(5-{[(5-{[(2-{[氨基(亚 氨基)甲基]氨基}乙基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰 基}-1-甲基-1H-吡咯-3-基)氨基]羰基}-1-甲基-1H-吡咯-3- 基)-4-[(2-溴丙烯酰基)氨基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(内 部代码PNU 166196)与吉西他滨联用，而在弥散性L1210鼠白血病中 得到的抗白血病活性。

联系单用剂量为15mg/kg的吉西他滨(肿瘤注射后1天，PNU 166196给药2小时后)和单用剂量为0.7mg/kg的PNU 166196(+1， 6天)，没有毒性，观察到ILS％值分别为50和58。在同样的治疗时程 中以同样剂量联用的吉西他滨和PNU 166196，观察到ILS％值为127 的活性的增加，因而显示出协同效果。

表1：式(I)的丙烯酰基偏端霉素衍生物与吉西他滨联合对弥散 性L12101鼠白血病的抗白血病活性     化合物   治疗时程    剂量2 (mg/kg/day)   ILS％3     Tox4     PNU 166196   iv+1，6     0.78     58     0/10     吉西他滨   iv+1(*)     15     50     0/10     PNU 166196     +吉西他滨   iv+1，6   iv+1(*)     0.78+     15     127     0/10

1)在第0天静脉注射L1210白血病细胞(105/鼠)。

2)在肿瘤移植(day 0)后第1天开始给以治疗。

3)存活期的增加：[(接受治疗的小鼠的平均存活期/对照组的平 均存活期)×100]-100

4)中毒死亡数/小鼠的数量。 (*)在PNU 166196给药2小时后治疗